JPH0691823B2 - 新規ｄｎａおよびその製造法 - Google Patents
新規ｄｎａおよびその製造法Info
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- JPH0691823B2 JPH0691823B2 JP59174037A JP17403784A JPH0691823B2 JP H0691823 B2 JPH0691823 B2 JP H0691823B2 JP 59174037 A JP59174037 A JP 59174037A JP 17403784 A JP17403784 A JP 17403784A JP H0691823 B2 JPH0691823 B2 JP H0691823B2
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- JP
- Japan
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- receptor
- dna
- plasmid
- polypeptide
- cells
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
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- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
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Description
【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は新規DNAおよびその製造法に関する。
従来の技術 インターロイキン−２（以下Il−２と略称することがあ
る）は、Ｔ細胞をインビトロでその機能を保持したまま
増殖させ長期間の継代維持を可能にするほかに、胸腺細
胞のマイトージェン反応を促進させたり、ヌードマウス
脾細胞のＴ細胞依存性抗原に対する抗体産生能を回復さ
せたり、キラー細胞の分化増殖を促進する作用を有する
ことが知られている（ザ・ジャーナル・オブ・イムノロ
ジー，第123巻,2928−2929頁,1979年；イムノロジカル
・レビュー，第51巻,257−278頁、1980年）が、これら
全ての作用には、IL−２と細胞表面に存在するIL−２受
容体との相互作用が不可欠である（ジャーナル・オブ・
エクスペリメンタル・メディスン，第154巻,1455−1474
頁,1981年；同誌，第158巻,1895−1911頁,1983年；プロ
シーディング・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・
サイエンス，第80巻,6957−6961頁,1983年）。
る）は、Ｔ細胞をインビトロでその機能を保持したまま
増殖させ長期間の継代維持を可能にするほかに、胸腺細
胞のマイトージェン反応を促進させたり、ヌードマウス
脾細胞のＴ細胞依存性抗原に対する抗体産生能を回復さ
せたり、キラー細胞の分化増殖を促進する作用を有する
ことが知られている（ザ・ジャーナル・オブ・イムノロ
ジー，第123巻,2928−2929頁,1979年；イムノロジカル
・レビュー，第51巻,257−278頁、1980年）が、これら
全ての作用には、IL−２と細胞表面に存在するIL−２受
容体との相互作用が不可欠である（ジャーナル・オブ・
エクスペリメンタル・メディスン，第154巻,1455−1474
頁,1981年；同誌，第158巻,1895−1911頁,1983年；プロ
シーディング・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・
サイエンス，第80巻,6957−6961頁,1983年）。
最近、ヒトＴ細胞白血病患者血液から樹立したIL−２依
存性細胞株をマウスに免疫して得られた抗Tacモノクロ
ーナル抗体〔ザ・ジャーナル・オブ・イムノロジー，第
126巻,1393頁（1981年）〕がIL−２受容体を認識してい
ることが示唆されたことから、抗Tac抗体を用いてのIL
−２受容体の生化学的解析が急速に進んだ〔ジャーナル
・オブ・エクスペリメンタル・メディスン，第158巻,13
32頁（1983年）；ネイチャー，第300巻,267頁（1982
年）；プロシージングス・オブ・ザ・ナショナル・アカ
デミー・オブ・サイエンス，第80巻,6957頁（1983
年）〕。抗Tac抗体とTac抗原との結合部位がIL−２とIL
−２受容体との結合部位と同一であるか否かに関しては
疑問が残されているものの、Tac抗原とIL−２受容体が
その性状において大部分が共通することは明らかとなっ
た。
存性細胞株をマウスに免疫して得られた抗Tacモノクロ
ーナル抗体〔ザ・ジャーナル・オブ・イムノロジー，第
126巻,1393頁（1981年）〕がIL−２受容体を認識してい
ることが示唆されたことから、抗Tac抗体を用いてのIL
−２受容体の生化学的解析が急速に進んだ〔ジャーナル
・オブ・エクスペリメンタル・メディスン，第158巻,13
32頁（1983年）；ネイチャー，第300巻,267頁（1982
年）；プロシージングス・オブ・ザ・ナショナル・アカ
デミー・オブ・サイエンス，第80巻,6957頁（1983
年）〕。抗Tac抗体とTac抗原との結合部位がIL−２とIL
−２受容体との結合部位と同一であるか否かに関しては
疑問が残されているものの、Tac抗原とIL−２受容体が
その性状において大部分が共通することは明らかとなっ
た。
このようなIL−２とIL−２受容体との相互作用を利用し
てこれまでにＴ細胞やナチュラルキラー細胞のクローン
化に成功している（たとえばネイチャー，第268巻,154
−156頁,1977年；ザ・ジャーナル・オブ・イムノロジ
ー，第130巻,981−987頁,1983年）。
てこれまでにＴ細胞やナチュラルキラー細胞のクローン
化に成功している（たとえばネイチャー，第268巻,154
−156頁,1977年；ザ・ジャーナル・オブ・イムノロジ
ー，第130巻,981−987頁,1983年）。
また、Ｔ細胞の白血病化とTac抗原の異常発現との間に
関係のあることが示唆されており（ブラッド，第62巻,5
09−510頁,1983年）、一方、正常細胞においては抗Tac
抗体によるIL−２受容体数の減少がみられるのに対し、
白血病細胞では抗Tac抗体によるIL−２受容体数の減数
がみられない（ダウン・レギュレーションの欠除）こと
がわかっている（ザ・ジャーナル・オブ・ブラッド，第
61巻,1014−1016頁,1983年）。
関係のあることが示唆されており（ブラッド，第62巻,5
09−510頁,1983年）、一方、正常細胞においては抗Tac
抗体によるIL−２受容体数の減少がみられるのに対し、
白血病細胞では抗Tac抗体によるIL−２受容体数の減数
がみられない（ダウン・レギュレーションの欠除）こと
がわかっている（ザ・ジャーナル・オブ・ブラッド，第
61巻,1014−1016頁,1983年）。
発明が解決しようとする問題点 上記したとおり、細胞において重要な役割をなすIL−２
受容体であるが、IL−２受容体の蛋白質としての性状や
その構造遺伝子については実体が不明で、またIL−２受
容体を遺伝子組み換え技術によって製造したとの報告は
ない。
受容体であるが、IL−２受容体の蛋白質としての性状や
その構造遺伝子については実体が不明で、またIL−２受
容体を遺伝子組み換え技術によって製造したとの報告は
ない。
問題点を解決するための手段 本発明者らは、ヒトIL−２受容体のポリペプチドおよび
それをコードする遺伝子について研究を行い、はじめて
その遺伝子をクローニングすると共にIL−２受容体のポ
リペプチドの遺伝子組み換え技術による製造法を確立
し、本発明を完成した。
それをコードする遺伝子について研究を行い、はじめて
その遺伝子をクローニングすると共にIL−２受容体のポ
リペプチドの遺伝子組み換え技術による製造法を確立
し、本発明を完成した。
すなわち、本発明はインターロイキン−２受容体のポリ
ペプチドをコードする遺伝子を含有する組み換えDNA、
遺伝子組み換え技術で得られたインターロイキン−２受
容体およびこれらの製造法を提供するものである。
ペプチドをコードする遺伝子を含有する組み換えDNA、
遺伝子組み換え技術で得られたインターロイキン−２受
容体およびこれらの製造法を提供するものである。
上記IL−２受容体のポリペプチドをコードする遺伝子に
関し、例えば第２図における１番目から252番目のアミ
ノ酸配列からなるポリペプチドをコードする遺伝子が挙
げられ、とりわけ第２図における１番目から252番目の
コドンで示される塩基配列からなる遺伝子が好ましい。
関し、例えば第２図における１番目から252番目のアミ
ノ酸配列からなるポリペプチドをコードする遺伝子が挙
げられ、とりわけ第２図における１番目から252番目の
コドンで示される塩基配列からなる遺伝子が好ましい。
上記遺伝子はその5'末端にATGまたは第２図における−2
1番目から−１番目のコドンからなるシグナルペプチド
をコードする塩基配列を有していてもよい。
1番目から−１番目のコドンからなるシグナルペプチド
をコードする塩基配列を有していてもよい。
また該遺伝子の3'末端には翻訳終止コドンとしてのTA
A、TGAまたはTAGを有していてもよく、とりわけTAGが好
ましい。
A、TGAまたはTAGを有していてもよく、とりわけTAGが好
ましい。
上記遺伝子はその上流にプロモーターを有しているのが
好ましく、該プロモーターは、遺伝子の発現に用いる宿
主に対応して適切なプロモーターであればいかなるもの
でもよい。
好ましく、該プロモーターは、遺伝子の発現に用いる宿
主に対応して適切なプロモーターであればいかなるもの
でもよい。
たとえば動物細胞（例、サル細胞COS−7,チャイニーズ
ハムスター細胞CHOなど）における発現に適したSV40由
来のプロモーター，レトロウィルスのプロモーターなど
が挙げられ、とりわけSV40由来のプロモーターが好まし
い。
ハムスター細胞CHOなど）における発現に適したSV40由
来のプロモーター，レトロウィルスのプロモーターなど
が挙げられ、とりわけSV40由来のプロモーターが好まし
い。
本発明のIL−２受容体のポリペプチドをコードする遺伝
子を含有する組み換えDNAは例えば、 （イ）インターロイキン−２受容体を産生する細胞を培
養し、 （ロ）培養物からインターロイキン−２受容体のポリペ
プチドをコードする伝令RNAを分離し、 （ハ）該伝令RNAから単鎖の相補DNA（cDNA）を合成し、 （ニ）該相補DNAをプラスミドに組み込み、 （ホ）該プラスミドを完全二重鎖プラスミドに変換し、 （ヘ）得られた組み換えプラスミドで宿主を形質転換
し、 （ト）得られた形質転換体を培養後、形質転換体から目
的とするDNAを含有するプラスミドを単離し、 （チ）所望により、そのプラスミドから目的とするクロ
ーン化DNAを切り出し、 （リ）所望により、該クローン化DNAをビークル中のプ
ロモーターの下流に連結する ことにより製造することができる。
子を含有する組み換えDNAは例えば、 （イ）インターロイキン−２受容体を産生する細胞を培
養し、 （ロ）培養物からインターロイキン−２受容体のポリペ
プチドをコードする伝令RNAを分離し、 （ハ）該伝令RNAから単鎖の相補DNA（cDNA）を合成し、 （ニ）該相補DNAをプラスミドに組み込み、 （ホ）該プラスミドを完全二重鎖プラスミドに変換し、 （ヘ）得られた組み換えプラスミドで宿主を形質転換
し、 （ト）得られた形質転換体を培養後、形質転換体から目
的とするDNAを含有するプラスミドを単離し、 （チ）所望により、そのプラスミドから目的とするクロ
ーン化DNAを切り出し、 （リ）所望により、該クローン化DNAをビークル中のプ
ロモーターの下流に連結する ことにより製造することができる。
IL−２受容体をコードするmRNAとしては通常ヒトＴ細
胞、例えばMT−１細胞（ガン，第71巻,155−156頁,1980
年）よりポリARNAを調製し、これを鋳型として、逆転写
酵素を用い自体公知の方法でcDNA鎖を合成し、プラスミ
ドに組込んだ後、cDNAを二重鎖DNAへ変換する（モレキ
ュラー・アンド・セルラー・バイオロジー，第２巻,161
−170頁,1982年）。
胞、例えばMT−１細胞（ガン，第71巻,155−156頁,1980
年）よりポリARNAを調製し、これを鋳型として、逆転写
酵素を用い自体公知の方法でcDNA鎖を合成し、プラスミ
ドに組込んだ後、cDNAを二重鎖DNAへ変換する（モレキ
ュラー・アンド・セルラー・バイオロジー，第２巻,161
−170頁,1982年）。
一方、例えば５×109個のMT−１細胞をNP−40を含む緩
衝液中で可溶化し、抗Tac抗体またはIL−２を担体に結
合し、そのカラムを使ってIL−２受容体を精製する。こ
れを自体公知の方法に従い自動アミノ酸シークエンサー
で解析し（ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケ
ミストリー，第256巻,7990−7997頁,1981年）、Ｎ末端
のアミノ酸配列を20個程度決定する。
衝液中で可溶化し、抗Tac抗体またはIL−２を担体に結
合し、そのカラムを使ってIL−２受容体を精製する。こ
れを自体公知の方法に従い自動アミノ酸シークエンサー
で解析し（ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケ
ミストリー，第256巻,7990−7997頁,1981年）、Ｎ末端
のアミノ酸配列を20個程度決定する。
この一部のアミノ酸配列に対応する塩基配列をもつオリ
ゴヌクレオタイドを化学合成した後、32Pでラベルして
プローブとなし、自体公知の方法でコロニー・ハイブリ
ダイゼーション法（ジーン，第10巻,63−67頁,1980年）
により、アンピシリン耐性のトランスフォーマントの中
から求めるクローンを選出する。
ゴヌクレオタイドを化学合成した後、32Pでラベルして
プローブとなし、自体公知の方法でコロニー・ハイブリ
ダイゼーション法（ジーン，第10巻,63−67頁,1980年）
により、アンピシリン耐性のトランスフォーマントの中
から求めるクローンを選出する。
上記クローン化されたIL−２受容体のポリペプチドをコ
ードする遺伝子（DNA）を有するプラスミドはそのま
ま、または所望により制限酵素で切り出すことができ
る。
ードする遺伝子（DNA）を有するプラスミドはそのま
ま、または所望により制限酵素で切り出すことができ
る。
さらに上記遺伝子は、化学合成により製造することもで
きる。
きる。
またクローン化された遺伝子は前記した発現に適したビ
ークル中のプロモータの下流に連結することもできる。
なお本発明のDNAは、たとえば大腸菌（294、DH1、HB101
など）を形質転換してその増殖、保存をなすこともでき
る。
ークル中のプロモータの下流に連結することもできる。
なお本発明のDNAは、たとえば大腸菌（294、DH1、HB101
など）を形質転換してその増殖、保存をなすこともでき
る。
本発明の遺伝子組み換え技術によって得られたIL−２受
容体として、例えば第２図における１番目から252番目
のアミノ酸配列で示されるポリペプチドを含有する蛋白
質を挙げることができる。該ポリペプチドはそのＮ末端
にMetを有していてもよい。該ポリペプチドは糖鎖を有
する糖蛋白質であることが好ましい。
容体として、例えば第２図における１番目から252番目
のアミノ酸配列で示されるポリペプチドを含有する蛋白
質を挙げることができる。該ポリペプチドはそのＮ末端
にMetを有していてもよい。該ポリペプチドは糖鎖を有
する糖蛋白質であることが好ましい。
本発明のIL−２受容体は、例えばIL−２受容体のポリペ
プチドをコードする遺伝子を含有する組み換えDNAを有
する動物細胞を培養し、培養物中にIL−２受容体を生
成、蓄積せしめることにより製造することができる。
プチドをコードする遺伝子を含有する組み換えDNAを有
する動物細胞を培養し、培養物中にIL−２受容体を生
成、蓄積せしめることにより製造することができる。
上記した組み換えDNAを有する動物細胞は、例えば該DNA
で、適当な動物細胞、好ましくはCOS−７、マウスＬ細
胞、ヒトＢ細胞、ヒトFL細胞などの哺乳動物の細胞株を
遺伝子感染（transfection）することにより製造するこ
とができる。本発明のDNAを有する動物細胞は、形質転
換体として製造することもできる。
で、適当な動物細胞、好ましくはCOS−７、マウスＬ細
胞、ヒトＢ細胞、ヒトFL細胞などの哺乳動物の細胞株を
遺伝子感染（transfection）することにより製造するこ
とができる。本発明のDNAを有する動物細胞は、形質転
換体として製造することもできる。
動物細胞の培養は、自体公知の動物細胞用培地、例えば
５〜20％の胎児牛血清をDMEM培地中、30〜40℃で15〜60
時間行う。
５〜20％の胎児牛血清をDMEM培地中、30〜40℃で15〜60
時間行う。
かくして生成するIL−２受容体のIL−２との結合能は、
IL−２を用いた蛍光抗体法（ザ・ジャーナル・オブ・イ
ムノロジー，第126巻,1393−1397頁,1981年）あるいは
アイソトープで標識したIL−２との結合能などにより測
定することができる。
IL−２を用いた蛍光抗体法（ザ・ジャーナル・オブ・イ
ムノロジー，第126巻,1393−1397頁,1981年）あるいは
アイソトープで標識したIL−２との結合能などにより測
定することができる。
上記培養物からIL−２受容体を分離精製するには、例え
ば下記の方法により行うことができる。すなわち培養細
胞を遠心分離法で集めたあと界面活性剤（たとえばNP−
40,トライトンＸ−100,ツゥイーン−20またはSDS）を含
有する緩衝液や低張または高張の緩衝液を用いたり、超
音波処理や酵素処理などによってIL−２受容体を含む細
胞表面タンパクを可溶化する。可溶化する前に放射性化
合物（たとえばNa125I,14C−標識アミノ酸,14C−標識炭
水化物,3H−標識アミノ酸,3H−標識炭水化物,35S−標識
アミノ酸など）を用いて予めIL−２受容体をアイソトー
プ標識しておいてもよい。
ば下記の方法により行うことができる。すなわち培養細
胞を遠心分離法で集めたあと界面活性剤（たとえばNP−
40,トライトンＸ−100,ツゥイーン−20またはSDS）を含
有する緩衝液や低張または高張の緩衝液を用いたり、超
音波処理や酵素処理などによってIL−２受容体を含む細
胞表面タンパクを可溶化する。可溶化する前に放射性化
合物（たとえばNa125I,14C−標識アミノ酸,14C−標識炭
水化物,3H−標識アミノ酸,3H−標識炭水化物,35S−標識
アミノ酸など）を用いて予めIL−２受容体をアイソトー
プ標識しておいてもよい。
このようにして得られるIL−２受容体を含む粗可溶化液
をあらかじめ種々のタンパクを固定化した水不溶性担体
で処理して、最終標品に僅かに混入してくる不純物質を
できるだけ除去しておく。この目的で用いられるタンパ
クとしてはウシ血清アルブミン、ヒト免疫グロブリン、
マウス免疫グロブリンなどが挙げられ、通常はこれらの
タンパクを固定化した架橋アガロースなどをつめたカラ
ムに上記粗可溶化液を通過させてその通過液を採取する
ことで不純物質の除去が可能である。このようにして得
られたIL−２受容体を含む溶液を、次いで非グリコシル
化IL−２と水不溶性担体を共有結合せしめた固定化IL−
２〔本発明者らの一部が発明し同日付で発明の名称「固
定化インターロイキン−２」として特許出願〕を充填し
たアフィニティーカラムを通してIL−２受容体を吸着さ
せる。カラムを界面活性剤（たとえばNP−40、トライト
ンＸ−100、ツゥイーン−20またはSDS）および高濃度
（0.1〜1.0M）塩類（NaClなど）を含む緩衝液（たとえ
ばトリス−塩酸緩衝液）で充分に洗浄したあと、酢酸緩
衝液（pH4.0）を用いて洗浄し、次いでIL−２レセプタ
ーとIL−２との結合を破壊する条件〔たとえばクエン酸
緩衝液（pH2.0）,3MNaSCNなど〕下にIL−２レセプター
を溶出させ、必要により溶媒を留去することによりIL−
２受容体を製造することができる。
をあらかじめ種々のタンパクを固定化した水不溶性担体
で処理して、最終標品に僅かに混入してくる不純物質を
できるだけ除去しておく。この目的で用いられるタンパ
クとしてはウシ血清アルブミン、ヒト免疫グロブリン、
マウス免疫グロブリンなどが挙げられ、通常はこれらの
タンパクを固定化した架橋アガロースなどをつめたカラ
ムに上記粗可溶化液を通過させてその通過液を採取する
ことで不純物質の除去が可能である。このようにして得
られたIL−２受容体を含む溶液を、次いで非グリコシル
化IL−２と水不溶性担体を共有結合せしめた固定化IL−
２〔本発明者らの一部が発明し同日付で発明の名称「固
定化インターロイキン−２」として特許出願〕を充填し
たアフィニティーカラムを通してIL−２受容体を吸着さ
せる。カラムを界面活性剤（たとえばNP−40、トライト
ンＸ−100、ツゥイーン−20またはSDS）および高濃度
（0.1〜1.0M）塩類（NaClなど）を含む緩衝液（たとえ
ばトリス−塩酸緩衝液）で充分に洗浄したあと、酢酸緩
衝液（pH4.0）を用いて洗浄し、次いでIL−２レセプタ
ーとIL−２との結合を破壊する条件〔たとえばクエン酸
緩衝液（pH2.0）,3MNaSCNなど〕下にIL−２レセプター
を溶出させ、必要により溶媒を留去することによりIL−
２受容体を製造することができる。
本発明により得られるIL−２受容体は、公知の天然型ヒ
トIL−２受容体やTac抗原と実質的に同様の活性を有す
る。ここでヒトIL−２受容体やTac抗原と実質的に同様
の活性とは、例えば以下の生物学的および免疫学的活性
をいう。すなわち、IL−２を結合することにより正常な
Ｔ細胞やナチュラルキラー細胞をその機能を保持させた
まま増殖させる活性を有する。
トIL−２受容体やTac抗原と実質的に同様の活性を有す
る。ここでヒトIL−２受容体やTac抗原と実質的に同様
の活性とは、例えば以下の生物学的および免疫学的活性
をいう。すなわち、IL−２を結合することにより正常な
Ｔ細胞やナチュラルキラー細胞をその機能を保持させた
まま増殖させる活性を有する。
したがって、本来IL−２受容体を有さない各種動物細胞
（Ｂ細胞など）を、本発明のDNAで遺伝子感染または形
質転換してIL−２受容体を産生せしめることができるの
で、Ｔ細胞と同様に、これら細胞をIL−２含有培地中で
培養することにより、インビトロで長期にわたり増殖、
継代したり、株化したり、クローン化することができ
る。
（Ｂ細胞など）を、本発明のDNAで遺伝子感染または形
質転換してIL−２受容体を産生せしめることができるの
で、Ｔ細胞と同様に、これら細胞をIL−２含有培地中で
培養することにより、インビトロで長期にわたり増殖、
継代したり、株化したり、クローン化することができ
る。
本発明のDNAを用いて増殖等が可能となった上記動物細
胞を大量に培養することにより、これら細胞が本来産生
する各種有用物質を大量に取得することができる。
胞を大量に培養することにより、これら細胞が本来産生
する各種有用物質を大量に取得することができる。
また前記したとおりＴ細胞の白血病化とTac抗原の異常
発現との間に関係のあることが知られているが、本発明
のIL−２受容体はTac抗原とほぼ同様の性質を有するた
め、例えば該受容体を基質として用い。また該受容体に
より製造される抗IL−２受容体抗体を用いて、細胞に発
現するIL−２受容体数を検出することにより白血病や免
疫不全症の診断を行うことができる。
発現との間に関係のあることが知られているが、本発明
のIL−２受容体はTac抗原とほぼ同様の性質を有するた
め、例えば該受容体を基質として用い。また該受容体に
より製造される抗IL−２受容体抗体を用いて、細胞に発
現するIL−２受容体数を検出することにより白血病や免
疫不全症の診断を行うことができる。
本願明細書および図面において、塩基やアミノ酸などを
略号で表示する場合、IUPAC−IUB Commission on Bioch
emical Nomenelatureによる略号あるいは当該分野にお
ける慣用略号に基づくものであり、その例を下記する。
また、アミノ酸に関し光学異性体がありうる場合は、特
に明示しなければＬ−体を示すものとする。
略号で表示する場合、IUPAC−IUB Commission on Bioch
emical Nomenelatureによる略号あるいは当該分野にお
ける慣用略号に基づくものであり、その例を下記する。
また、アミノ酸に関し光学異性体がありうる場合は、特
に明示しなければＬ−体を示すものとする。
DNA ：デオキシリボ核酸 cDNA:相補的デオキシリボ核酸 Ａ ：アデニン Ｔ ：チミン Ｇ ：グアニン Ｃ ：シトシン RNA ：リボ核酸 mRNA:伝令リボ核酸 dATP:デオキシアデノシン三リン酸 dTTP:デオキシチミジン三リン酸 dGTP:デオキシグアノシン三リン酸 dCTP:デオキシシチジン三リン酸 ATP ：アデノシン三リン酸 EDTA:エチレンジアミン四酢酸 SDS ：ドデシル硫酸ナトリウム Gly ：グリシン Ala ：アラニン Val ：バリン Leu ：ロイシン Ile ：イソロイシン Ser ：セリン Thr ：スレオニン Cys ：システイン Met ：メチオニン Glu ：グルタミン酸 Asp ：アスパラギン酸 Lys ：リジン Arg ：アルギニン His ：ヒスチジン Phe ：フェニールアラニン Tyr ：チロシン Trp ：トリプトファン Pro ：プロリン Asn ：アスパラギン Gln ：グラタミン 作用 本発明のIL−２受容体のポリペプチドをコードする遺伝
子を含有する組み換えDNAは、これを本来IL−２受容体
を有さない各種動物細胞に導入することにより該細胞に
IL−２受容体を産生させることができるため、Ｔ細胞な
どと同様にこれら細胞の増殖、株化等が可能となり、そ
れ故これらの細胞が産生する各種有用物質を大量に取得
することができる。
子を含有する組み換えDNAは、これを本来IL−２受容体
を有さない各種動物細胞に導入することにより該細胞に
IL−２受容体を産生させることができるため、Ｔ細胞な
どと同様にこれら細胞の増殖、株化等が可能となり、そ
れ故これらの細胞が産生する各種有用物質を大量に取得
することができる。
また、本発明のIL−２受容体またはこれにより製造され
る抗IL−２受容体抗体は、細胞の白血病化において異常
発現するIL−２受容体を検出することができ、白血病や
免疫不全症の診断薬として用いることができる。
る抗IL−２受容体抗体は、細胞の白血病化において異常
発現するIL−２受容体を検出することができ、白血病や
免疫不全症の診断薬として用いることができる。
実施例および発明の効果 以下の実施例により本発明をより具体的に説明するが、
本発明はこれらに限定されるものではない。
本発明はこれらに限定されるものではない。
なお実施例１（vii）に開示した形質転換体エシェリヒ
ア コリ（Escherichia Coli）HB101/Tac−２（IFO−14
364）は、昭和59年８月21日から通商産業省工業技術院
微生物工業技術研究所（FRI）に受託番号FERM Ｐ−779
6として寄託されている。
ア コリ（Escherichia Coli）HB101/Tac−２（IFO−14
364）は、昭和59年８月21日から通商産業省工業技術院
微生物工業技術研究所（FRI）に受託番号FERM Ｐ−779
6として寄託されている。
実施例１ IL−２受容体遺伝子含有DNAの製造 （ｉ）IL−２受容体のポリペプチドをコードするmRNAの
製造 ヒトＴ細胞白血病細胞であるMT−１をRPMI1640培地（10
％の牛胎児血清を含む）中、37℃で培養した。この培養
した細胞１×109個を5Mグアニジンチオシアネート、５
％メルカプトエタノール、50mM Tris−HCl pH7.6、10
mM EDTA溶液中でテフロンホモゲナイザーによって破壊
変性した後Ｎ−ラウロイリルザルコシン酸ナトリウムを
４％になるように加え、均質化した混合物を5.7塩化セ
シウム溶液（5.7M塩化セシウム,0.1MEDTA）6ml上に重層
し、ベックマンSW28のローターを用いて15℃で24000rpm
48時間遠心処理を行い、RNA沈澱を得た。このRNA沈澱を
0.25％Ｎ−ラウロイルザルコシン酸ナトリウム溶液にと
かした後でエタノールで沈澱させ、10mgのRNAを得た。
このRNAを高塩溶液〔0.5M Nacl,10mM Tris−HCl pH
7.6,1mM EDTA,0.3％SDS〕中でオリゴ（dT）セルロース
カラムに吸着させ、ポリ（Ａ）を含むmRNAを低塩溶液
（10mM Tris−HCl pH7.6,1mM MDTA、0.3％SDS）で溶出
させることにより、ポリ（Ａ）を含むmRNA30μｇを分取
した。
製造 ヒトＴ細胞白血病細胞であるMT−１をRPMI1640培地（10
％の牛胎児血清を含む）中、37℃で培養した。この培養
した細胞１×109個を5Mグアニジンチオシアネート、５
％メルカプトエタノール、50mM Tris−HCl pH7.6、10
mM EDTA溶液中でテフロンホモゲナイザーによって破壊
変性した後Ｎ−ラウロイリルザルコシン酸ナトリウムを
４％になるように加え、均質化した混合物を5.7塩化セ
シウム溶液（5.7M塩化セシウム,0.1MEDTA）6ml上に重層
し、ベックマンSW28のローターを用いて15℃で24000rpm
48時間遠心処理を行い、RNA沈澱を得た。このRNA沈澱を
0.25％Ｎ−ラウロイルザルコシン酸ナトリウム溶液にと
かした後でエタノールで沈澱させ、10mgのRNAを得た。
このRNAを高塩溶液〔0.5M Nacl,10mM Tris−HCl pH
7.6,1mM EDTA,0.3％SDS〕中でオリゴ（dT）セルロース
カラムに吸着させ、ポリ（Ａ）を含むmRNAを低塩溶液
（10mM Tris−HCl pH7.6,1mM MDTA、0.3％SDS）で溶出
させることにより、ポリ（Ａ）を含むmRNA30μｇを分取
した。
（ii）単鎖DNAの合成 上記で得たmRNAおよび逆転写酵素を用い自体公知の方法
で単鎖DNAを合成した。すなわち、20μ１の反応液（５
μｇのmRNA,1.4μｇベクター・プライマーDNA,5ユニッ
トの逆転写酵素,2mMずつのdATP,dCTP,dGTPおよびdTTP,8
mM MgCl2,30mM KCl,0.3mMジチオスレイトール,50mM T
ris−HCl pH8.3）中で37℃で20分間インキュベートし
た後、２μ１の0.25M EDTAと１μ１の10％SDSを加えて
反応を止めた後、フェノールで除蛋白し、エタノールで
沈澱させた（モレキュラー・アンド・セルラー・バイオ
ロジー，第２巻,161−170頁,1982年）。
で単鎖DNAを合成した。すなわち、20μ１の反応液（５
μｇのmRNA,1.4μｇベクター・プライマーDNA,5ユニッ
トの逆転写酵素,2mMずつのdATP,dCTP,dGTPおよびdTTP,8
mM MgCl2,30mM KCl,0.3mMジチオスレイトール,50mM T
ris−HCl pH8.3）中で37℃で20分間インキュベートし
た後、２μ１の0.25M EDTAと１μ１の10％SDSを加えて
反応を止めた後、フェノールで除蛋白し、エタノールで
沈澱させた（モレキュラー・アンド・セルラー・バイオ
ロジー，第２巻,161−170頁,1982年）。
（iii）dC鎖の付加 上記沈澱を15μ１の反応液（1mM CoCl2、30mM Tris−
HCl pH6.8,140mMカコジレートナトリウム,0.1mMジチオ
スレイトール,0.2μｇポリ（Ａ）,66μＭ dCTP）に溶
かし、18ユニットのターミナルトランスフェラーゼを加
え、37℃で５分間インキュベートした。次に、１μ１の
0.25MEDTAおよび0.5μ１の10％SDSを加えて反応を止
め、フェノールで除蛋白し、エタノールで沈澱させた
（モレキュラー・アンド・セルラー・バイオロジー，第
２巻,161−170頁,1982年）。
HCl pH6.8,140mMカコジレートナトリウム,0.1mMジチオ
スレイトール,0.2μｇポリ（Ａ）,66μＭ dCTP）に溶
かし、18ユニットのターミナルトランスフェラーゼを加
え、37℃で５分間インキュベートした。次に、１μ１の
0.25MEDTAおよび0.5μ１の10％SDSを加えて反応を止
め、フェノールで除蛋白し、エタノールで沈澱させた
（モレキュラー・アンド・セルラー・バイオロジー，第
２巻,161−170頁,1982年）。
（iv）HindIIIによる切断 沈澱を10μ１のHindIIIバッファーに溶かし、2.5ユニッ
トのHindIIIを加え、37℃で１時間消化した。次にフェ
ノール処理した後エタノールで沈澱させ、10μ１の10mM
Tris−HCl pH7.3,1mMEDTAに溶かし、３μ１のエタノ
ールを加えた。
トのHindIIIを加え、37℃で１時間消化した。次にフェ
ノール処理した後エタノールで沈澱させ、10μ１の10mM
Tris−HCl pH7.3,1mMEDTAに溶かし、３μ１のエタノ
ールを加えた。
（ｖ）dG鎖付リンカーDNAによる環状化 上記DNA1μ１を7ngのオリゴdG付リンカーDNAと共に10μ
１の10mM Tris−HCl,pH7.5、1mM EDTA,0.1M NaCl中
で65℃、５分、次いで42℃で30分インキュベートした後
０℃に冷やした。これに20mM Tris−HCl（pH7.5）,4mM
MgCl2,10mM（NH4）2So4,0.1M KCl,0.1mM β−NAD,5
0μg/ml BSAになるように加え、0.6μｇ大腸菌DNAリガ
ーゼと共に12℃で１晩インキュベートした。
１の10mM Tris−HCl,pH7.5、1mM EDTA,0.1M NaCl中
で65℃、５分、次いで42℃で30分インキュベートした後
０℃に冷やした。これに20mM Tris−HCl（pH7.5）,4mM
MgCl2,10mM（NH4）2So4,0.1M KCl,0.1mM β−NAD,5
0μg/ml BSAになるように加え、0.6μｇ大腸菌DNAリガ
ーゼと共に12℃で１晩インキュベートした。
（vi）二重鎖DNAの合成 上記反応液に40μＭ dTTP、40μＭ dGTP、40μＭ dC
TP、40μＭ dATP、0.15mM、β−NADになるように加え
（最終液量104μｌ）、0.4μｇの大腸菌DNAリガーゼ、
0.3μｇ大腸菌DNAポリメラーゼＩ、１ユニットの大腸菌
RNaseHと共に12℃１時間、次いで25℃で１時間インキュ
ベートした後、大腸菌の形質転換に用いた。
TP、40μＭ dATP、0.15mM、β−NADになるように加え
（最終液量104μｌ）、0.4μｇの大腸菌DNAリガーゼ、
0.3μｇ大腸菌DNAポリメラーゼＩ、１ユニットの大腸菌
RNaseHと共に12℃１時間、次いで25℃で１時間インキュ
ベートした後、大腸菌の形質転換に用いた。
（vii）cDNA含有プラスミドの単離 このようにして４×105個のアンピシリン耐性株が単離
され、これら各々のDNAをニトロセルロースフィルター
の上に固定した。次いでMT−１細胞より精製されたIL−
２受容体蛋白質のアミノ酸配列をもとにして、アミノ酸
No.4〜８（Asp−Asp−Asp−Pro−Pro）に対応する塩基
配列 をトリエステル法（プロシーディングス・オブ・ザ・ナ
ショナル・アカデミー・オブ・サイエンス USA,第75
巻,5765−5769頁,1978年）により化学合成した。
され、これら各々のDNAをニトロセルロースフィルター
の上に固定した。次いでMT−１細胞より精製されたIL−
２受容体蛋白質のアミノ酸配列をもとにして、アミノ酸
No.4〜８（Asp−Asp−Asp−Pro−Pro）に対応する塩基
配列 をトリエステル法（プロシーディングス・オブ・ザ・ナ
ショナル・アカデミー・オブ・サイエンス USA,第75
巻,5765−5769頁,1978年）により化学合成した。
このオリゴヌクレオチドに対してT4ポリヌクレオチドカ
イネースを用いて50μｌの反応液（オリゴヌクレオチド
0.20μg,50mM Tris・HCl pH8.0,10mM MgCl2,10mMメ
ルカプトエタノール,50μCir−32PATP、３ユニットT4ポ
リヌクレオチドカイネース）中で１時間37℃で反応さ
せ、5'末端を32Pで標識した。この標識されたオリゴヌ
クレオチドをブローブとしてHanahanらの方法（ジー
ン，第10巻,63−67頁,1981年）に従って上記のニトロセ
ルロースフィルター上に固定したDNAに会合させ、オー
トラジオグラフィーによって上記のオリゴヌクレオチド
プローブに反応する菌株を２個（E.Coli HB101/Tac−
１およびE.Coli HB101/Tac−２）単離した。これらの
菌株の各々の菌体からプラスミドDNAをアルカリ法（Bir
nboim H.C.ら，ヌクレイック・アシッズ・リサーチ，
第７巻,1513−1524頁,1979年）によって単離した。これ
らのプラスミドをTac−１およびTac−２と名づけた。Ta
c−１とTca−２はTac−２の方がその5'末端の塩基配列
が16塩基長いことを除いて同一であった。Tca−２の制
限酵素地図を第１図に示す。
イネースを用いて50μｌの反応液（オリゴヌクレオチド
0.20μg,50mM Tris・HCl pH8.0,10mM MgCl2,10mMメ
ルカプトエタノール,50μCir−32PATP、３ユニットT4ポ
リヌクレオチドカイネース）中で１時間37℃で反応さ
せ、5'末端を32Pで標識した。この標識されたオリゴヌ
クレオチドをブローブとしてHanahanらの方法（ジー
ン，第10巻,63−67頁,1981年）に従って上記のニトロセ
ルロースフィルター上に固定したDNAに会合させ、オー
トラジオグラフィーによって上記のオリゴヌクレオチド
プローブに反応する菌株を２個（E.Coli HB101/Tac−
１およびE.Coli HB101/Tac−２）単離した。これらの
菌株の各々の菌体からプラスミドDNAをアルカリ法（Bir
nboim H.C.ら，ヌクレイック・アシッズ・リサーチ，
第７巻,1513−1524頁,1979年）によって単離した。これ
らのプラスミドをTac−１およびTac−２と名づけた。Ta
c−１とTca−２はTac−２の方がその5'末端の塩基配列
が16塩基長いことを除いて同一であった。Tca−２の制
限酵素地図を第１図に示す。
次にこのTac−２プラスミドに挿入されたcDNAの配列の
一次構造（塩基配列）をジデオキシヌクレオチド法とMa
xam−Gilbert法によって決定した。その一次構造は第２
図に示した。この塩基配列により規定されるペプチドは
その合成開始信号〔No.175〜177のATG（コドン−21）〕
から始まって272個のアミノ酸から成る。この中Ｎ末端
から21個のアミノ酸（アミノ酸−21〜−１）はシグナル
ペプチドと考えられる。上記の一次構造から、このプラ
スミドはヒトIL−２受容体のポリペプチドをコードする
塩基配列を全部持っていることが判明した。また上記塩
基配列から推定されるIL−２受容体のアミノ酸配列を第
２図に示した。
一次構造（塩基配列）をジデオキシヌクレオチド法とMa
xam−Gilbert法によって決定した。その一次構造は第２
図に示した。この塩基配列により規定されるペプチドは
その合成開始信号〔No.175〜177のATG（コドン−21）〕
から始まって272個のアミノ酸から成る。この中Ｎ末端
から21個のアミノ酸（アミノ酸−21〜−１）はシグナル
ペプチドと考えられる。上記の一次構造から、このプラ
スミドはヒトIL−２受容体のポリペプチドをコードする
塩基配列を全部持っていることが判明した。また上記塩
基配列から推定されるIL−２受容体のアミノ酸配列を第
２図に示した。
（viii）発現型プラスミドの製造 実施例１（vii）で得たプラスミドTac−２（20μｇ）か
らヒトIL−２受容体遺伝子部分を制限酵素PstI（部分分
解）およびPvuII（完全分解）で切断した後、DNA断片を
１％アガロースゲル電気泳動で分離し、２μｇのDNAを
得た。このDNAの単鎖部分をT4DNAポリメラーゼ反応でう
めた後、フェノール処理し、エタノール沈澱を行った。
このDNAを20μｌのライゲーション緩衝液（66mM Tris
−HCl pH7.6,6.6mM MgCl2,10mM DTT,66μＭ ATP）
に溶解し、5'末端をりん酸化した0.5μｇの合成オリゴ
ヌクレオチドリンカー（HindIIIリンカー）５′pCAAGCT
TGと５ユニットのT4DNAリガーゼとを混合し、14℃、17
時間反応させてIL−２受容体のポリペプチドをコードす
る遺伝子とオリゴヌクレオチドリンカーを結合させた。
リガーゼを65℃、10分間の熱処理によって失活させた
後、３倍量の蒸留水を加え、さらに制限酵素HindIIIの
緩衝液（50mM NaCl,10mM Tris−HCl,pH7.9,6mM MgCl
2,100μg/ml牛血清アルブミン中20ユニットのHindIII）
で１時間処理した。セファロース4Bカラム（0.5cm直
径、20cm長さ）で切断されたリンカー部分とリンカーを
結合したIL−２受容体DNAを分離し、エタノール沈澱に
よりリンカーを結合したIL−２受容体のポリペプチドを
コードする遺伝子含有DNAを回収した。
らヒトIL−２受容体遺伝子部分を制限酵素PstI（部分分
解）およびPvuII（完全分解）で切断した後、DNA断片を
１％アガロースゲル電気泳動で分離し、２μｇのDNAを
得た。このDNAの単鎖部分をT4DNAポリメラーゼ反応でう
めた後、フェノール処理し、エタノール沈澱を行った。
このDNAを20μｌのライゲーション緩衝液（66mM Tris
−HCl pH7.6,6.6mM MgCl2,10mM DTT,66μＭ ATP）
に溶解し、5'末端をりん酸化した0.5μｇの合成オリゴ
ヌクレオチドリンカー（HindIIIリンカー）５′pCAAGCT
TGと５ユニットのT4DNAリガーゼとを混合し、14℃、17
時間反応させてIL−２受容体のポリペプチドをコードす
る遺伝子とオリゴヌクレオチドリンカーを結合させた。
リガーゼを65℃、10分間の熱処理によって失活させた
後、３倍量の蒸留水を加え、さらに制限酵素HindIIIの
緩衝液（50mM NaCl,10mM Tris−HCl,pH7.9,6mM MgCl
2,100μg/ml牛血清アルブミン中20ユニットのHindIII）
で１時間処理した。セファロース4Bカラム（0.5cm直
径、20cm長さ）で切断されたリンカー部分とリンカーを
結合したIL−２受容体DNAを分離し、エタノール沈澱に
よりリンカーを結合したIL−２受容体のポリペプチドを
コードする遺伝子含有DNAを回収した。
一方、プラスミドpKCRH2（ネイチャー第307巻,604−608
頁,1984年）を制限酵素HindIIIで切断し、上記リンカー
を結合させた二重鎖DNAをSV40プロモーターの下流にT4D
NAリガーゼで連結させ発現型プラスミドpKCR・Tac−２
・Ａを構築した。この場合IL−２受容体ポリペプチドを
コードする遺伝子がプロモーターと逆向きに連結したも
のも単離され、これをpKCR・Tac−２・Aiと名付けた。
同様に、プラスミドTac−２より得られたHindIII−PvuI
IDNA断片（IL−２受容体のポリペプチドをコードする遺
伝子を含む）にHindIIIリンカーを結合し、pKCRH2のHin
dIIIサイトに挿入した発現型プラスミドも構築しpKCR・
Tac−２と名付けた。
頁,1984年）を制限酵素HindIIIで切断し、上記リンカー
を結合させた二重鎖DNAをSV40プロモーターの下流にT4D
NAリガーゼで連結させ発現型プラスミドpKCR・Tac−２
・Ａを構築した。この場合IL−２受容体ポリペプチドを
コードする遺伝子がプロモーターと逆向きに連結したも
のも単離され、これをpKCR・Tac−２・Aiと名付けた。
同様に、プラスミドTac−２より得られたHindIII−PvuI
IDNA断片（IL−２受容体のポリペプチドをコードする遺
伝子を含む）にHindIIIリンカーを結合し、pKCRH2のHin
dIIIサイトに挿入した発現型プラスミドも構築しpKCR・
Tac−２と名付けた。
実施例２ COS−７細胞におけるIL−２受容体のポリペ
プチドをコードする遺伝子の発現 ５×105個のCOS−７細胞（セル第23巻175−182頁,1981
年）を５％の牛胎児血清を含むダルベッコ・ミニマル・
エセンシャル（DMEM）培地を用いて直径10cmの細胞培養
用ディッシュにまき、20時間後、培地を交換した。さら
に４時間後、40μg/mlのプラスミドDNAを含む1/10量の
トランスフェクション溶液（プロシーディング・オブ・
ナショナルアカデミー・オブ・サイエンス USA第76巻,
1373−1376頁,1979年）を加え、12時間インキュベート
した後、2.5％グリセロールで１分間処理した。細胞を
洗った後、８％の胎児牛血清を含むDMEMで37℃、48時間
培養した。次に、細胞をマウス抗Tacモノクロール抗体
とFITC（蛍光色素）標識ヤギ抗マウス抗体で染めた（ジ
ャーナル・オブ・イムノロジー第126巻,1393−1397頁,1
981年）。対照実験では抗Tac抗体のかわりに抗体の一種
であるネズミ・ミエローマ蛋白X5563を用いた。IL−２
受容体のポリペプチドをコードする遺伝子の発現はスペ
クトラムIIIを用いたフロー・サイトメトリーで測定し
た。結果を第１表に示す。
プチドをコードする遺伝子の発現 ５×105個のCOS−７細胞（セル第23巻175−182頁,1981
年）を５％の牛胎児血清を含むダルベッコ・ミニマル・
エセンシャル（DMEM）培地を用いて直径10cmの細胞培養
用ディッシュにまき、20時間後、培地を交換した。さら
に４時間後、40μg/mlのプラスミドDNAを含む1/10量の
トランスフェクション溶液（プロシーディング・オブ・
ナショナルアカデミー・オブ・サイエンス USA第76巻,
1373−1376頁,1979年）を加え、12時間インキュベート
した後、2.5％グリセロールで１分間処理した。細胞を
洗った後、８％の胎児牛血清を含むDMEMで37℃、48時間
培養した。次に、細胞をマウス抗Tacモノクロール抗体
とFITC（蛍光色素）標識ヤギ抗マウス抗体で染めた（ジ
ャーナル・オブ・イムノロジー第126巻,1393−1397頁,1
981年）。対照実験では抗Tac抗体のかわりに抗体の一種
であるネズミ・ミエローマ蛋白X5563を用いた。IL−２
受容体のポリペプチドをコードする遺伝子の発現はスペ
クトラムIIIを用いたフロー・サイトメトリーで測定し
た。結果を第１表に示す。
第１図は実施例１（vii）で得たプラスミドTac−２のIL
−２受容体のポリペプチドをコードする遺伝子部位の制
限酵素地図 はシグナルペプチドをコードする部分を、 はIL−２受容体のポリペプチドをコードする部分を表わ
す）を示し、第２図（１），（２），（３），（４）は
その一次構造（塩基配列）ならびにIL−２受容体のアミ
ノ酸配列を示し、第３図は実施例１（viii）に記載した
発現型プラスミドpKCR・Tac−２・Ａの構造を示す。
−２受容体のポリペプチドをコードする遺伝子部位の制
限酵素地図 はシグナルペプチドをコードする部分を、 はIL−２受容体のポリペプチドをコードする部分を表わ
す）を示し、第２図（１），（２），（３），（４）は
その一次構造（塩基配列）ならびにIL−２受容体のアミ
ノ酸配列を示し、第３図は実施例１（viii）に記載した
発現型プラスミドpKCR・Tac−２・Ａの構造を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 8214−4Ｂ (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91）
Claims (2)
- 【請求項１】式 GluLeuCysAspAspAspProProGluIleProHisAlaThr PheLysAlaMetAlaTyrLysGluGlyThrMetLeuAsnCys GluCysLysArgGlyPheArgArgIleLysSerGlySerLeu TyrMetLeuCysThrGlyAsnSerSerHisSerSerTrpAsp AsnGlnCysGlnCysThrSerSerAlaThrArgAsnThrThr LysGlnValThrProGlnProGluGluGlnLysGluArgLys ThrThrGluMetGlnSerProMetGlnProValAspGlnAla SerLeuProGlyHisCysArgGluProProProTrpGluAsn GluAlaThrGluArgIleTyrHisPheValValGlyGlnMet ValTyrTyrGlnCysValGlnGlyTyrArgAlaLeuHisArg GlyProAlaGluSerValCysLysMetThrHisGlyLysThr ArgTrpThrGlnProGlnLeuIleCysThrGlyGluMetGlu ThrSerGlnPheProGlyGluGluLysProGlnAlaSerPro GluGlyArgProGluSerGluThrSerCysLeuValThrThr ThrAspPheGlnIleGlnThrGluMetAlaAlaThrMetGlu ThrSerIlePheThrThrGluTyrGlnValAlaValAlaGly CysValPheLeuLeuIleSerValLeuLeuLeuSerGlyLeu ThrTrpGlnArgArgGlnArgLysSerArgArgThrIle で表されるアミノ酸配列を含有するインターロイキン−
２受容体活性を有するポリペプチドをコードする組み換
えDNA。 - 【請求項２】（イ）インターロイキン−２受容体を産生
する細胞を培養し、 （ロ）培養物からインターロイキン−２受容体のポリペ
プチドをコードする伝令RNAを分離し、 （ハ）該伝令RNAから単鎖の相補DNAを合成し、 （ニ）該相補DNAをプラスミドに組み込み、 （ホ）該プラスミドを完全二重鎖プラスミドに変換し、 （ヘ）得られた組み換えプラスミドで宿主を形質転換
し、 （ト）得られた形質転換体を培養後、形質転換体から目
的とするDNAを含有するプラスミドを単離し、 （チ）所望により、そのプラスミドから目的とするクロ
ーン化DNAを切り出し、 （リ）所望により、該クローン化DNAをビークル中のプ
ロモーターの下流に連結することを特徴とする式 GluLeuCysAspAspAspProProGluIleProHisAlaThr PheLysAlaMetAlaTyrLysGluGlyThrMetLeuAsnCys GluCysLysArgGlyPheArgArgIleLysSerGlySerLeu TyrMetLeuCysThrGlyAsnSerSerHisSerSerTrpAsp AsnGlnCysGlnCysThrSerSerAlaThrArgAsnThrThr LysGlnValThrProGlnProGluGluGlnLysGluArgLys ThrThrGluMetGlnSerProMetGlnProValAspGlnAla SerLeuProGlyHisCysArgGluProProProTrpGluAsn GluAlaThrGluArgIleTyrHisPheValValGlyGlnMel ValTyrTyrGlnCysValGlnGlyTyrArgAlaLeuHisArg GlyProAlaGluSerValCysLysMetThrHisGlyLysThr ArgTrpThrGlnProGlnLeuIleCysThrGlyGluMetGlu ThrSerGlnPheProGlyGluGluLysProGlnAlaSerPro GluGlyArgProGluSerGluThrSerCysLeuValThrThr ThrAspPheGlnIleGlnThrGluMetAlaAlaThrMetGlu ThrSerIlePheThrThrGluTyrGlnValAlaValAlaGly CysValPheLeuLeuIleSerValLeuLeuLeuSerGlyLeu ThrTrpGlnArgArgGlnArgLysSerArgArgThrIle で表されるアミノ酸配列を含有するインターロイキン−
２受容体活性を有するポリペプチドをコードする組み換
えDNAの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59174037A JPH0691823B2 (ja) | 1984-08-23 | 1984-08-23 | 新規ｄｎａおよびその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59174037A JPH0691823B2 (ja) | 1984-08-23 | 1984-08-23 | 新規ｄｎａおよびその製造法 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6105124A Division JPH089640B2 (ja) | 1994-05-19 | 1994-05-19 | ヒト・インターロイキン−２受容体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6152293A JPS6152293A (ja) | 1986-03-14 |
| JPH0691823B2 true JPH0691823B2 (ja) | 1994-11-16 |
Family
ID=15971521
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59174037A Expired - Lifetime JPH0691823B2 (ja) | 1984-08-23 | 1984-08-23 | 新規ｄｎａおよびその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0691823B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1339269C (en) * | 1984-05-21 | 1997-08-12 | Douglas P. Cerretti | Purification of and cloning of the gene for interleukin-2 receptor |
| US4578335A (en) * | 1984-05-21 | 1986-03-25 | Immunex Corporation | Interleukin 2 receptor |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4578335A (en) * | 1984-05-21 | 1986-03-25 | Immunex Corporation | Interleukin 2 receptor |
-
1984
- 1984-08-23 JP JP59174037A patent/JPH0691823B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6152293A (ja) | 1986-03-14 |
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