JPH06506352A

JPH06506352A - 新規プロテアーゼ

Info

Publication number: JPH06506352A
Application number: JP4507967A
Authority: JP
Inventors: オウトルップ，ヘレ; ダンブマン，クラウス; アースリング，ドリット　アニタ
Original assignee: ノボ　ノルディスク　アクティーゼルスカブ
Priority date: 1991-04-03
Filing date: 1992-04-03
Publication date: 1994-07-21
Also published as: US5650315A; DK0578712T3; DK58391D0; FI934331A; EP0578712B1; FI934331A0; KR100245614B1; DE69229545D1; EP0578712A1; ATE181959T1; FI110435B; WO1992017576A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】新規プロテアーゼ技術分野本発明は、好バシラスｓｐ、株由来の洗剤プロテアーゼの分野に存する。更に詳しくは、本発明は、ハシラスｓｐ、ＪＡ１６−３８Ａ株由来の新規アルカリプロテアーゼに関する。更に詳しくは、本発明はプロテアーゼの製造方法、洗剤用酵素としてのプロテアーゼの使用、および本発明のプロテアーゼを含んでなる洗１Ｐ１組成物に関する。

背景技術洗剤用酵素は、２０年以上も市場で取引されてきておりそして今や世界中で粉末および液体の洗剤中の正規な洗剤成分として十分確立されている。低温での洗たくに対する傾向と共に、洗剤用酵素の消費は近年において増加してきている。洗剤用製剤に於て用いられる酵素は、プロテアーゼ、リパーゼ、アミラーゼ、セルラーゼ並びに他の酵素、又はそれらの混合物を含んでなる。商業的に最も重要なものはプロテアーゼである。

洗剤用プロテアーゼは、天然に見出されるプロテアーゼを単離し、引き続き洗剤用製剤中で試験することにより開発されてきた。大抵の洗剤用プロテアーゼは、ハシラス属の構成員から得られる。近年、新しいタイプのプロテアーゼが市場に表われ、種々の特定条件の下でより良い原価／性能割合を与える可能性を提供している。

商業上のプロテアーゼ製品の例は、アルカラーゼ（ＡＬＣＡＬＡＳＥ）（登録商標）、エスペラーゼ（ＥＳＰＥＲＡＳＥ）　（登録商標）およびサビナーゼ（ＳＡνＩＮＡＳＥ）　（登録商標）であり、全てノボノルディスク社、デンマークより提供されている。これらの及び他の商業的起源からの類似の酵素製品は、洗剤溶液中、８〜１１のｐＨ値でかつ金属イオン封鎖剤、界面活性剤および過ホウ酸ナトリウムの如き漂白剤の存在下で活性である。アルカラーゼ（ＡＬＣＡＬＡＳＥ）　（登録商標）は、種ハシラスリケニホルミスの株によって生産される。

エスペラーゼ（ＥＳＰＥＲＡＳＥ）（登録商標）およびサビナーゼ（ＳＡＶＩＮＡＳε）（登録商標）は、好アルカリ性ハシリ（Ｂａｅｉｌｌｉ）を培養することによって得られる。

発明の要約本発明によれば、新規洗剤用プロテアーゼが提供される。

第一の面に於て、本発明は２８ｋＤの見掛分子量、６．４付近のｐｒ、ｐＨ９〜１１の範囲内に最適ｐＨ（２５°Ｃで）、４０〜５０″Ｃの範囲内に最適温度（ｐＨ９，５で）およびハシラス５ｐｊＡ１６−３８Ａ、　ＮＧＩＭＢ律４０２６３由来のプロテアーゼの免疫化学的性質と同−又は部分的同一の免疫化学的性質を有するプロテアーゼを提供する。より特異的な面において、プロテアーゼは、ハシラス５ｐｊＡ１６−３８Ａの株から得ることができる。

更に、より特異的面に於て、プロテアーゼはハシラスｓｐ、ＪＡ１６−３８Ａ。

ＮＣＩＭＢ　Ｎ１１４０２６３　、又はこれらの突然変異体もしくは変異体から得ることができる。

他の面に於て、本発明はハシラスｓｐ、ＪＡ１６−３８Ａの株の単離された生物学的に純粋な培養物を提供する。より特異的な面に於て、ハシラスｓｐ、ＪＡ１６−３８Ａ、ＮＣＩＭＢ　ｋ４０２６３又はこれらの突然変異体もしくは変異体の株が提供される。

第三の面に於て、本発明はプロテアーゼの製造方法を提供するものであり、この方法は炭素および窒素源並びに無機塩を含有する適当な栄養培地中でハシラスｓｐ、ＪＡ１６−３８Ａのプロテアーゼ生産株を培養し、引き続き目的の酵素を回収することを含んでなる。より特異的な面に於て、ハシラス５ｐＪＡ１６−３８Ａ、ＮＣＩ門Ｂ　Ｎｌ１４０２６３　、又はそれらの突然変異体もしくは変異体を培養する。

第四の面に於て、洗剤用酵素としての酵素の使用が権利要求される。より特異的な面に於て、本発明は洗剤組成物およびプロテアーゼを含んでなる洗剤用添加側が提供される。

ｌ上試　験　０５Ｍ４８５　ＤＳＭ４９７”　ＪＡ１６−３８Ａ栄養源寒天（ディフコ）ｐＨ９’　＋　＋　＋栄養ｆ１寒天（ディフコ）ｐＨ７’　Ｗ　Ｗ栄養８１！Ｊ天（ディフコ）　ｐＨ１１’　＋　−５０°Ｃでの増殖室　−＋　− 図面の簡単な説明本発明は、添付の図面を参照することにより更に説明される二図中、第１図は本発明に係る酵素の蛋白質分解活性と温度との関係を示す（実施例１に従って得られる酵素調製品、基質としてカゼインに関しそしてｐＨ９，５で）；そして第２図は、本発明に係る酵素の蛋白質分解活性とｐＨの関係を示す（実施例１に従って得られる酵素調製品、基質としてカゼインに関しそして２５°Ｃで）。

発明の詳細な開示童±隻本発明の酵素を生産し得る、本発明の新規微生物は、英国特許第１．２４３．７８４号に記載された好アルカリ性ハシリの選択方法によって本質的に単離された。一つのそのような培養株、ハシラスｓｐ、ＪＡ１６−３８Ａはブダペスト条約に従ってＮｌ１４０２６３をもってＮＣＩＭＢに寄託された。

本発明の微生物は、バシラス属に属する好気性の胞子形成細菌である。形態学的には、該微生物は直径０．６〜０．８ミクロンおよび２〜３ミクロンの長さを有する自動性棒状体として記載できる。胞子は球形ないし楕円体であり、胞子のうを膨潤せず、サブターミナル（ｓｕｂｔｅｒｍｉｎａｌ）に中心がある。増殖のための最適温度は３５〜４０’Ｃ内であり、そして増殖のための最適ｐｉ（は８．５〜９．５内にあり、ｐＨ８未満では増殖せず、そして５０’Ｃで増殖しない。微生物は栄養源寒天斜面上で白色ないし無色透明のコロニーを形成し、そして色素の寒天内への拡散は観察されない。本発明の微生物は、更に表１に掲げる試験結果によって特徴づけられる。

０５Ｍ４８５　：　Ｂ、アルカノフィラスＤＳＭ４９７　：　Ｂ、アルカノフィラス５ｕｂｓｐ、ハロデユランスＪＡ１６−３８Ａ　：　Ｂ、ｓｐ、ＪＡ１６− ３８Ａ、　’ＪＣＩＭＢ　Ｎｌ４０２６３Ｗ＝弱い盲　：２日間インキュベーション後に記録、他のインキュベーションの全ては７日間。

２　：文献からのデータ３　：１４日間インキュヘーション後陽性、７日後陰性。

盈生立夏隻１本発明の微生物は、他の必須の栄養源と共に同化性の炭素および窒素を含有する栄養源培地中、好気的条件のもとで培養することができ、培地は公知技術の原則に従って構成される。

適当な炭素源は、スクロース、グルコースおよびデンプンの如き炭水化物、大豆穀物、綿実粉、穀物、麦芽、米およびモロコシの如き物質を含有する炭水化物である。培地中に導入される炭水化物の濃度は、広く変化することができ、例えば２５％までそして１〜５％までであるが、通常８〜１０％が適当であり、パーセントはグルコースの当量として計算される。

栄養源培地中の窒素源は、無機性および／又は有機性のものであってよい。適当な無機源はニドラードおよびアンモニウム塩である。

有機窒素源の内で、全く多くのものが、細菌の培養を含む発酵プロセスに於て正規に用いられる。それらの例は、大豆ミル、綿実ミル、ビーナツツミル、カゼイン、とうもろこし、コーンスチープリカー、酵母抽出物、尿素およびアルブミンである。加えて、栄養源培地は又通常の微量物質を含有すべきである。

本発明の新規ハシラス種は、好アルカリ性でありかつｐＨ８未満では弱くしか増殖しないので、培養は好ましくはアルカリ性ｐＨ値で行なわれ、これは増殖培地の殺菌後、炭酸ナトリウム、又は炭酸ナトリウムと炭酸水素ナトリウムの混合物の如き適当な緩衝剤の添加によって得ることができる。タンク発酵器内での培養に対し、人工の通気を用いることが必要である。通気の速度は、通常のタンク発酵内で用いられる速度に類似している。

プロテアーゼの口取と精１１発酵後、微生物により生産される細胞外酵素は公知の原理に従い、例えば遠い分離もしくはドラム濾過により培養ブロスがら粗い物質ン交換クロマトグラフィーによる精製又はアセトンを用いた沈殿如き工程を用い、次いでアフィニティークロマトグラフィーを行う。

最後に防腐剤を精製プロテアーゼに添加する。

白　７・　の蛋白質分解活性は、基質としてカゼインについて測定される。１力ゼインプロテアーゼ単位（ＣＰＵ）は、標準条件下、すなわち２５°Ｃでかつｐ）１９．５で３０分間インキユヘーションして毎分１ｍＭの第一級アミノ基（セリン標準と比較することによって測定）を放出する酵素の量として比較される。分析法を記載する、折りたたんだ印刷物ＡＦ２２８／１は、要求によりノボノルディスク社、デンマーク国から入手可能であり、この印刷物は参考のため本明細書に導入される。

型車本発明の酵素は、新規洗剤用プロテアーゼである。この酵素は、アルカリ性プロテアーゼであり、本発明の微生物、好ましくはハシラスｓｐ、ＪＡ１６−３８Ａ、ＮＣＩＭＢ　ｌ’ｈ４０２６３　、又はその突然変異体もしくは変異体を、炭素および窒素源および無機塩を含有する適当な栄養源培地中で培養することによって得ることができる。酵素は又組換え体ＤＮＡ手法によっても得ることができる。

本発明のプロテアーゼは次の特徴を有する。

立理止ヱ煎立ｌ５Ｏ５−ＰＡＧＥにより測定して分子ｔ２ＢｋＤ、ＬＫＢアムホリン（Ａｍｐｈｏｌｉｎｅ）（登録商標）ＰＡＧプレートに関する等電点電気泳動により測定してｐ１６．４゜プロテアーゼ活性は、ＰＭＳＦ、α−１−アンチトリプシンおよびターキー−卯白プロテアーゼ阻害荊によって阻害される。　ＥＤＴＡおよび大豆−蛋白質阻害剤は、プロテアーゼ活性に影響しない。

温度活性の関係が基質としてカゼインを用いて測定された。前に記載した蛋白質分解活性に対する分析が用いられたが、次の変更がなされた。すなわち、インキュヘーション温度は１５°Ｃから７０℃の間隔内で変化した。結果を第１図に示す。酵素は、１５°Ｃ未満の温度から７０’Ｃ超まで蛋白質分解活性および４０〜５０’Ｃの範囲内、約４５℃に最適温度を有する。

活性のｐＨに間する依存性を、ｐＨ６〜１１内の予しめ定められたｐＨ値に調節された緩衝剤を用い、同し手順によって測定された。結果を第２図に示す。酵素は６未満から１１超のｐＨ４１ｉで蛋白質分解活性を存し、最適ｐＨをｐＨ９〜１１の範囲内、１０付近に有する。

本発明のプロテアーゼは活性部位の通宝（例えば、ショーンバウム、Ｇ、Ｒ，、ゼルナー、Ｂ、アンドブレンダ−１Ｍ、Ｌ、（１９６１）；　Ｊ、Ｂｉｏｌ。

Ｃｈｅｍ、；２３６２９３０参照）によって測定される如く酵素蛋白質１ｇ当たり３００ＣＰＵ超に相当する、カゼインに対向した極めて高い比活性を有する。

本発明のプロテアーゼは、ヨーロッパおよびアメリカのタイプの洗剤中、バーボレートおよびＮ０ＢＳの如き漂白剤と共にあるいはそれなしで、洗たく条件下、４０°Ｃで６０分間安定である。

免兼」ｊり旧１！免疫化学的性質を交差反応同一性試験によって免疫学的に測定できる。同一性試験は、周知のアクテルロ二−二重免疫拡散法又はアレクセン、Ｎ、Ｈ，（Ｈａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ−４ｎ４ｔｅｌ　Ｔｅｃｈ−ｎｉｑｕｅｓ；ブラックウェル　サイエンティフィツク　パブリケーシゴン（１９８３）　、５章および１４章）に従った双頭交差免疫電気泳動によって行うことができる。語句「抗原の同一性」および「部分的抗原の同一性」は同書中、５章、１９章および２０章に記載されている。

単一特異性抗血清を、本発明の精製プロテアーゼで兎を免疫することにより前記方法に従って発生させた。免疫源をフロインドアジュバントと混合し、次いで２週間毎に兎に皮下注入した。８週の全免疫期間後に抗血清を得、そして免疫グロブリンを前記のＮ、Ｈ，アレクセンによって記載される如くそれから調製した。

オフテルロニー二重免疫拡散試験は、本発明のプロテアーゼと公知のアルカリセリンプロテアーゼ、アルカラーゼ（ＡＬＣＡＬＡＳＥ）　（登録商標）、サビナーゼ（ＳＡＶＩＮＡＳＥ）　（登録商標）、エスペラーゼ（ＥＳＰ［！−ＲＡＳＥ）　（登録商標）、ズブチリシンＢＰＮ　’およびカズサーゼ（ＫＡＺＵＳＡＳＥ）（登録商標）の間には交差反応を示さなかった。

丘五１底立本発明の洗剤組成物は、１種又はそれ以上の界面活性剤を含むことができ、この界面活性剤は、アニオン、非イオン、カチオン、両性又は双性イオンタイプ又はこれらの混合物である。アニオン界面活性剤の典型的例は、直鎖アルキルベンゼンスルホナート（ＬＡＳ）、アルキルスルフニー）　（ＡＳ）　、αオレフインスルホナート（ＡＯ５）、アルコールエトキシスルフェート（ＡＥＳ）および天然脂肪酸のアルカリ金属塩である。非イオン界面活性剤の例は、アルキルポリエチレンクリコールエーテル、ノニルフェノールポリエチレングリコールエーテル、スクロースおよびグルコースの脂肪酸エステルおよびポリエトキンル化アルキルグルコシドである。

本発明の洗剤組成物は、又業界公知の他の洗剤用成分、例えばビルグー、漂白剤、漂白活性化剤、耐蝕剤、金属イオン封鎖剤、抗土壌−再付着剤、香料、酵素用安定剤および漂白剤、配合助剤、螢光増白剤、起泡増進剤、キレート化剤、充てん剤、布帛柔軟剤等を含有することができる。本発明の洗剤組成物は、Ｊ、フオルベによって記載される如く実質的↓こ製剤化できる〔フオルベ、　Ｊ、　；５ｕｒｆａｃｔａｎｔｓｉｎ　Ｃｏｎ５ｕ＋＊ｅｒ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｔｈｅｏｒｙ、Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ；　スブリンゲル　フェルラーク１９８７　、特に「液体／粉末重質洗剤用フレーム製剤化」の表題が付けられた節を参照のこと〕。

現在、以下のように考察されている。すなわち、本発明の洗剤組成物は、洗液ＩＥ当たり蛋白質分解酵素の０．０００５〜０．５　ＣＰｔ１に相当する量の酵素調製品を含有できる。

本発明の洗剤組成物は、任意の好都合の形態、例えば粉末、液体等に製剤化できる。

本発明の洗剤組成物は、好都合には１種又はそれ以上の他の酵素、例えばリパーゼ、アミラーゼ、セルラーゼ、オキシダーゼ、および／又はペルオキシダーゼを洗剤組成物中に好都合に含まれて含有できる。

本発明のプロテアーゼは、洗剤用プロテアーゼを含む別個の添加剤を添加することにより、又は異なる洗剤用酵素を含んでなる混合添加剤を添加することにより洗剤組成物中に含有せしめることができる。

本発明の添加剤は、例えば粒質物、液体、スラリー等として配合できる。好ましい洗剤用添加剤製剤は、無粉塵性粒質物、液体、特に安定化液体、スラリー、又は保護された酵素である。無塵の粒質物は、例えば英国特許１，３６２．３６５又は米国特許４，１０６，９９１に従って製造でき、そして所望により業界公知方法により被覆できる。洗剤用酵素は造粒前又は造粒後混合できる。

液体酵素調製品は、例えば、確立された寸法に従い例えばプロピレングリコールの如きポリオール、塘もしくは塘アルコール、乳酸又はホウ酸を添加することにより安定化できる。他の酵素安定化剤は当業者に十分周知である。保護された酵素はヨーロッパ特許公開公報第２３８，２１６号に開示された方法に従って調製できる。

有用な態様に於て、本発明のプロテアーゼは例えばヨーロッパ特許公開公報第３４２，１７７号、同３６８．５７５、同３７８，２６１および同３７８，２６２に従って洗剤配合物中に導入できる。

本発明を更に次の実施例において説明するが、これはいかなる場合もクレームされた如き本発明の範囲を制限するものではない。

実施例１豊！± バシラスｓｐ、ＪＡ１６−３８Ａを、以下の組成（１当たり）の培地１００１１１を含有する５００ｄのバフル化エルレンマイヤー　フラスコ中、回転振動テーブル（３００ｒ、ｐ、ｔ）上で２５゛Ｃで培養した：ポテトデンプン　ｔｏｏ　ｇ粉砕大麦　５０ｇ大豆粉末　５０ｇＮａｚＨＰＯａ　ｘＬ２Ｈｚ０　１０ｇプルロニンク（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）　（登録商標）　Ｏ，１ｇナトリウムカゼイナート　１０ｇ培地中のデンプンは、α−アミラーゼにより液化されそして培地は１２０°Ｃで４５分間加熱することにより殺菌される。

殺菌後、培地のｐＨを１モル溶液のセスキ炭酸ナトリウム１０ｉｄを添加することにより９．７に調節する。

インキュベーションの５日後、培養物の蛋白質分解活性を前記方法を用いて測定した。

培養後、ブロスの酵素活性は１００ＣＰＵ／　Ｑであった。

固形物質を分離後、プロテアーゼを通常のクロマトグラフィー法により精製した。

ＩＰの培養ブロスからの収率は１５００ＣＰｔｌ／　ｆｆｉを有する５、　０　ｍであった。純度はＳＤＳ　−ＰＡＧＥにより判断される如＜９０％以上であった。

この実施例に従って調製される製剤の特徴は、本明細書中の初め部分で言及されており、ここで参照される。

実施例２久友ふ−ｍ洗たく性能試験を、２０“Ｃのモデル洗たくシステム中、等温的に１０分間、綿布上の草の汚れについて実行した。

商業上の米国タイプの液体洗剤２．０ｇ／Ｉ！を試験において用いた。

洗剤は、本発明の添加前、如何なる酵素も含まなかった。洗剤は、約６°ｄＨ（ドイツ硬度）水に溶解された。繊維／洗液比は、洗剤溶液１１！当たり約６ｇの繊維であった。ｐＨは９．５であった。２種の独立した試験を行った。実施例１に係る酵素調製品を表に掲げる用量で用いた。

洗たくに続いて、布帛を流れる水道水で２５分間すすぎ次いで風乾した。プロテアーゼの性能を、データーカラーＩＣフナメーター２０００を用い、４６０ｎｓで測定した規約反射率（％Ｒ）の変化（ΔＲ）によって測定した。ΔＲはプロテアーゼを添加して洗たくした規約反射率からプロテアーゼを添加しないで洗たくした規約反射率を差し引いたものである。

試験結果を表１に示す。

表土０．００２５　ｃｐＵ＃ｌ！　１．４６ｏ、ｏｏｓ　ｃｐｕ／ｚ　ｔ、ｓｓｏ、０１　ＣＰｔ１／　１　２．６２０．０２　ＣＰ［Ｉ／　ｆｆｉ　６．１５０．０４　ＣＰＵ＃！　９．８３０．０８　ＣＰＵ／１　１１．２２０．２　ＣＰＵ／　ｆ　１２．２０示差規約反射率値は、本発明のプロテアーゼが良好な洗たく適性を有することを示す。

実施例３迭剋主二支定立洗剤の存在中での（実施例Ｉに従って得られた）本発明の酵素の安定性を試験した。この試験に用いた洗剤は、実施例２に於ても用いたアメリカンタイプの粉末洗剤組成物であった。

残留活性を、１．１ｇの洗剤／１およびＪＡ１６−３８Ａプロテアーゼ（０，３ＣＰＵ／Ｆ！　）（７）　６　’　ｄＨ氷水中４０’Ｃ７’６０分後に測定シタ、測定さシタ残留活性は９０％であった。

この実験はプロテアーゼが洗たく条件下洗剤中で安定であることを示している。

１０’Ｃ３０’Ｃ５０’Ｃ７０’Ｃ国際調査報告国際調査報告ＰＣＴ／ＤＫ　９２１００１０３フロントページの続き（７２）発明者　アースリング、トリット　アニタデンマーク国、デーコー−４０００口スキルデ、スポゲルスレウ、フィレン　８

Claims

【特許請求の範囲】

１．次の特性を有することを特徴とするプロテアーゼ：（ａ）２８ｋＤの見掛分子量；（ｂ）約６．４のｐＩ；（ｃ）ｐＨ９〜１１の範囲内に最適ｐＨ（２５℃で）；（ｄ）４０〜５０℃の範囲内に最適温度（ｐＨ９．５で）（ｅ）バシラスｓｐ．ＪＡ１６−３８Ａ，ＮＣＩＭＢＮｏ．４０２６３由来のプロテアーゼの免疫化学的性質と同一又は部分的同一の免疫化学的性質。
２．プロテアーゼがバシラスｓｐ．ＪＡ１６−３８Ａの株から得ることのできるものである、請求の範囲第１項記載のプロテアーゼ。
３．バシラスｓｐ．ＪＡ１６−３８Ａ、ＮＣＩＭＢＮｏ．４０２６３、又はその突然変異体もしくは変異体から得ることのできるものである、請求の範囲第２項記載のプロテアーゼ。
４．バシラスｓｐ．ＪＡ１６−３８Ａの株の単離された生物学的に純粋な培養物。
５．株がバシラスｓｐ．ＪＡ１６−３８Ａ、ＮＣＩＭＢＮｏ．４０２６３、又はその突然変異体もしくは変異体である、請求の範囲第４項記載の培養物。
６．請求の範囲第１〜３項のいずれかに記載のプロテアーゼの製造方法であって、バシラスｓｐ．ＪＡ１６−３８Ａのプロテアーゼ生産株を、炭素および窒素源並びに無機塩を含有する適当な栄養源培地中で培養し、引き続き所望の酵素を回収することを含んでなる、前記製造方法。
７．バシラスｓｐ．ＪＡ１６−３８Ａ，ＮＣＩＭＢＮｏ．４０２６３、又はその突然変異体もしくは変異体を培養する、請求の範囲第６項記載の方法。
８．洗剤用酵素としての請求の範囲第１〜３項のいずれかに記載のプロテアーゼの使用。
９．請求の範囲第１〜３項のいずれかに記載のプロテアーゼを含んでなる洗剤組成物。
１０．更に１種又はそれ以上の他の酸素、特にアミラーゼ、リパーゼ、セルラーゼ、オキシダーゼ、および／又はペルオキシダーゼを含んでなる、請求の範囲第９項記載の洗剤組成物。
１１．無粉塵性の粒質物、液体、特に安定化された液体、スラリー、又は保護された酵素の形態で提供される、請求の範囲第１〜３項のいずれかに記載のプロテアーゼを含んでなる洗剤用添加剤。