JPH06336498A - 新規プロラクチン - Google Patents
新規プロラクチンInfo
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- JPH06336498A JPH06336498A JP14547193A JP14547193A JPH06336498A JP H06336498 A JPH06336498 A JP H06336498A JP 14547193 A JP14547193 A JP 14547193A JP 14547193 A JP14547193 A JP 14547193A JP H06336498 A JPH06336498 A JP H06336498A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 本発明は、本発明者は海産魚に新しい生理作
用、特に成長促進に関係した作用を持つプロラクチンを
提供することを目的とする。プロラクチンは、魚類養殖
における成長促進剤への応用など産業上の有用性の大き
いペプチドである。 【構成】 本発明は、新規ペプチド、詳しくはチョウザ
メの脳下垂体由来のプロラクチンから得られ、生理活性
を有するペプチドである。
用、特に成長促進に関係した作用を持つプロラクチンを
提供することを目的とする。プロラクチンは、魚類養殖
における成長促進剤への応用など産業上の有用性の大き
いペプチドである。 【構成】 本発明は、新規ペプチド、詳しくはチョウザ
メの脳下垂体由来のプロラクチンから得られ、生理活性
を有するペプチドである。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、新規ペプチドに関し、
詳細にはチョウザメの脳下垂体由来のプロラクチンから
得られ、生理活性を有するペプチドに関する。
詳細にはチョウザメの脳下垂体由来のプロラクチンから
得られ、生理活性を有するペプチドに関する。
【０００２】
【従来の技術および課題】動植物等の天然物中には、生
体に対する活性を有する物質が多く含まれている。それ
らの一つである成長ホルモンは、脊椎動物の脳下垂体か
ら分泌されるペプチドで、その主たる生理作用は成長促
進効果であることが知られている。
体に対する活性を有する物質が多く含まれている。それ
らの一つである成長ホルモンは、脊椎動物の脳下垂体か
ら分泌されるペプチドで、その主たる生理作用は成長促
進効果であることが知られている。
【０００３】近年、この成長ホルモンにアミノ酸配列が
類似するタンパク質として成長ホルモンと同じく脳下垂
体前葉から分泌されるプロラクチンの存在が知られ、注
目を浴びている。プロラクチンは哺乳類一般において乳
汁を分泌させ、さらに黄体刺激作用を持ち、鳥類におい
てはハトの素嚢乳を形成するなど一般には生殖に関連す
る広範な作用を持つホルモンであると考えられている。
また、下等脊椎動物においては両生類で変態の制御及び
成長作用が知られ、魚類においては広塩性魚類および淡
水魚の淡水適応時の浸透圧の調節に係わると考えられて
いる。
類似するタンパク質として成長ホルモンと同じく脳下垂
体前葉から分泌されるプロラクチンの存在が知られ、注
目を浴びている。プロラクチンは哺乳類一般において乳
汁を分泌させ、さらに黄体刺激作用を持ち、鳥類におい
てはハトの素嚢乳を形成するなど一般には生殖に関連す
る広範な作用を持つホルモンであると考えられている。
また、下等脊椎動物においては両生類で変態の制御及び
成長作用が知られ、魚類においては広塩性魚類および淡
水魚の淡水適応時の浸透圧の調節に係わると考えられて
いる。
【０００４】これまで四足動物から魚類に至るまで多く
の種類の動物からプロラクチンが単離されている。しか
し、海産魚においては免疫組織化学的研究からプロラク
チンの存在は知られているものの、その単離及び生理作
用についての研究はなされていない。
の種類の動物からプロラクチンが単離されている。しか
し、海産魚においては免疫組織化学的研究からプロラク
チンの存在は知られているものの、その単離及び生理作
用についての研究はなされていない。
【０００５】一方、本発明者により、チョウザメの成長
ホルモンが抽出・単離され、しかもそのアミノ酸配列を
コードする遺伝子、該遺伝子を組み込んだ組換えベクタ
ー、該組換えベクターで形質転換された形質転換体、該
形質転換体を利用して産生する製造法が明らかとなり
（特許願平成５年第９９４８号）、将来の養殖産業分野
での応用が期待されている。つまり、大量に調製するこ
とのできる成長ホルモンを用いることにより、通常では
成魚になるまでに、７年の長い年月を要するところを、
大幅に短縮させることの養殖産業分野への応用である。
ホルモンが抽出・単離され、しかもそのアミノ酸配列を
コードする遺伝子、該遺伝子を組み込んだ組換えベクタ
ー、該組換えベクターで形質転換された形質転換体、該
形質転換体を利用して産生する製造法が明らかとなり
（特許願平成５年第９９４８号）、将来の養殖産業分野
での応用が期待されている。つまり、大量に調製するこ
とのできる成長ホルモンを用いることにより、通常では
成魚になるまでに、７年の長い年月を要するところを、
大幅に短縮させることの養殖産業分野への応用である。
【０００６】しかし、上述したように、動植物等の天然
物中には、生体に対する活性を有する物質は多く存在
し、成長ホルモンのみではなく、多くの生理活性物質の
バランスの上で、生体の成長が調整されている。特に、
将来の養殖産業分野で応用される場合、プロラクチンを
含めた成長ホルモン以外の生理活性作用を有する物質を
必要とされることは、容易に想像される。そこで、海産
魚に生理作用を持つ物質、特に成長促進に関係した作用
を持つ物質を見つけ出し、将来の養殖産業分野で応用さ
れることが期待されていた。
物中には、生体に対する活性を有する物質は多く存在
し、成長ホルモンのみではなく、多くの生理活性物質の
バランスの上で、生体の成長が調整されている。特に、
将来の養殖産業分野で応用される場合、プロラクチンを
含めた成長ホルモン以外の生理活性作用を有する物質を
必要とされることは、容易に想像される。そこで、海産
魚に生理作用を持つ物質、特に成長促進に関係した作用
を持つ物質を見つけ出し、将来の養殖産業分野で応用さ
れることが期待されていた。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者は、海産魚に生
理作用を持つ物質、特に成長促進に関係した作用を持つ
物質を開発すべく、鋭意研究を行った結果、配列番号：
１で表される新規ペプチドがプロラクチンであることを
見出し、本発明を完成するに至った。
理作用を持つ物質、特に成長促進に関係した作用を持つ
物質を開発すべく、鋭意研究を行った結果、配列番号：
１で表される新規ペプチドがプロラクチンであることを
見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】すなわち、本発明は以下の通りである。
【０００９】（１）次の物理化学的性質を有する新規ペ
プチド（以下、本発明のプロラクチンという。）。 ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法によっ
て測定した分子量は、共に約２３ｋＤである。 ０．６％フェノール含有６Ｎ−塩酸を用い、加水分
解を行った後、定量したアミノ酸構成は、表１に示す通
りである。 表１
プチド（以下、本発明のプロラクチンという。）。 ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法によっ
て測定した分子量は、共に約２３ｋＤである。 ０．６％フェノール含有６Ｎ−塩酸を用い、加水分
解を行った後、定量したアミノ酸構成は、表１に示す通
りである。 表１
【００１０】（２）配列番号：１で表されるアミノ酸配
列を有するペプチドを主要構成成分として含有する
（１）記載の新規ペプチド。
列を有するペプチドを主要構成成分として含有する
（１）記載の新規ペプチド。
【００１１】本発明のプロラクチンは以下に示す各種の
方法により分離精製することができる。
方法により分離精製することができる。
【００１２】例えば本発明のプロラクチンを含有する組
織或るいは細胞、例えばチョウザメの脳下垂体を出発原
料として、各種のタンパク質の分離精製法として知られ
た方法を適用して行うことができる。
織或るいは細胞、例えばチョウザメの脳下垂体を出発原
料として、各種のタンパク質の分離精製法として知られ
た方法を適用して行うことができる。
【００１３】タンパク質の分離精製法としては、ホモジ
ュナイザー、超音波細胞破砕等による可溶化処理、各種
塩類を含んだ緩衝液による抽出処理、酸またはアルカリ
による可溶化あるいは沈殿処理、さらには有機溶媒によ
る抽出あるいは沈殿処理、さらには有機溶媒による抽出
あるいは沈殿処理、硫安等による塩析、透析、メンブレ
ンフィルターなどを用いた限外濾過、ゲル濾過クロマト
グラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、向流分配
クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー、等
電点あるいはゲル電気泳動などが挙げられ、それらは単
独あるいは適宜組み合せて用いることができる。
ュナイザー、超音波細胞破砕等による可溶化処理、各種
塩類を含んだ緩衝液による抽出処理、酸またはアルカリ
による可溶化あるいは沈殿処理、さらには有機溶媒によ
る抽出あるいは沈殿処理、さらには有機溶媒による抽出
あるいは沈殿処理、硫安等による塩析、透析、メンブレ
ンフィルターなどを用いた限外濾過、ゲル濾過クロマト
グラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、向流分配
クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー、等
電点あるいはゲル電気泳動などが挙げられ、それらは単
独あるいは適宜組み合せて用いることができる。
【００１４】より詳細には、チョウザメから通常の方法
で得られた脳下垂体を液体窒素あるいはドライアイスで
直ちに凍結して使用時まで約−８０°Ｃ程度で保存す
る。この脳下垂体を冷却下３５％塩酸−アセトン溶液
（１：２８）中で破砕後、遠心する。さらに得られた沈
殿を８０％アセトン中で抽出する。抽出物は、冷却下、
アセトンを加え、得られる沈殿物を遠心し、分取する。
この沈殿は凍結乾燥後適当な緩衝液に溶解した後、ゲル
濾過クロマトグラフィー、例えばセファデックスＧ−２
５のクロマトグラフィーにかける。溶出画分は２１０ｎ
ｍにおける吸光度をモニターすることによって測定し、
分取しえる。次にこのようにして得られた画分の内、目
的のプロラクチンを含有する画分を凍結乾燥処理する。
で得られた脳下垂体を液体窒素あるいはドライアイスで
直ちに凍結して使用時まで約−８０°Ｃ程度で保存す
る。この脳下垂体を冷却下３５％塩酸−アセトン溶液
（１：２８）中で破砕後、遠心する。さらに得られた沈
殿を８０％アセトン中で抽出する。抽出物は、冷却下、
アセトンを加え、得られる沈殿物を遠心し、分取する。
この沈殿は凍結乾燥後適当な緩衝液に溶解した後、ゲル
濾過クロマトグラフィー、例えばセファデックスＧ−２
５のクロマトグラフィーにかける。溶出画分は２１０ｎ
ｍにおける吸光度をモニターすることによって測定し、
分取しえる。次にこのようにして得られた画分の内、目
的のプロラクチンを含有する画分を凍結乾燥処理する。
【００１５】次に、この精製物を適当な緩衝液に溶解し
た後、高速液体クロマトグラフィー、例えばＯＤＳ１２
０Ｔ等の化学修飾シリカゲルを充填剤として使用したカ
ラムを用いた高速液体クロマトグラフィーにかける。溶
出液を２１０ｎｍにおける吸光度でモニターすることに
より目的とするプロラクチンを含有する画分を集めるこ
とにより、プロラクチンを得ることができる。
た後、高速液体クロマトグラフィー、例えばＯＤＳ１２
０Ｔ等の化学修飾シリカゲルを充填剤として使用したカ
ラムを用いた高速液体クロマトグラフィーにかける。溶
出液を２１０ｎｍにおける吸光度でモニターすることに
より目的とするプロラクチンを含有する画分を集めるこ
とにより、プロラクチンを得ることができる。
【００１６】また、本発明のプロラクチンのアミノ酸を
コードする遺伝子は以下に示す各種の方法により製造す
ることができる。
コードする遺伝子は以下に示す各種の方法により製造す
ることができる。
【００１７】例えば本発明のプロラクチンの産生細胞で
あるチョウザメの脳下垂体からポリ（Ａ）ＲＮＡを調整
し、これを鋳型としてｃＤＮＡを合成し、次にこれを適
当なベクターに接続して宿主細胞内で増殖させ、本発明
の単離・精製方法により得られたプロラクチンのアミノ
酸配列分析の結果の知見より、適当なＤＮＡプローブを
合成し、そのプローブを用いて遺伝子ライブラリーを検
索し、目的のプロラクチンのアミノ酸配列をコードする
ｃＤＮＡを含有するクローンを識別し、該クローンの有
するベクターにより単離する方法、本発明のプロラクチ
ンのアミノ酸配列をコードする遺伝子のＤＮＡに基づい
て、例えばリン酸トリエステル法、ホスホアミダイト法
等の常法に従って、核酸の化学合成を行う方法、これら
の方法を組み合せた方法等が挙げられる。
あるチョウザメの脳下垂体からポリ（Ａ）ＲＮＡを調整
し、これを鋳型としてｃＤＮＡを合成し、次にこれを適
当なベクターに接続して宿主細胞内で増殖させ、本発明
の単離・精製方法により得られたプロラクチンのアミノ
酸配列分析の結果の知見より、適当なＤＮＡプローブを
合成し、そのプローブを用いて遺伝子ライブラリーを検
索し、目的のプロラクチンのアミノ酸配列をコードする
ｃＤＮＡを含有するクローンを識別し、該クローンの有
するベクターにより単離する方法、本発明のプロラクチ
ンのアミノ酸配列をコードする遺伝子のＤＮＡに基づい
て、例えばリン酸トリエステル法、ホスホアミダイト法
等の常法に従って、核酸の化学合成を行う方法、これら
の方法を組み合せた方法等が挙げられる。
【００１８】次に上記のようにして得られたｃＤＮＡ
は、これを適当なベクターに挿入、次にこのようにして
得られたベクターを適当な宿主に導入してクローニング
することにより増幅し、ついでスクリーニングを行って
目的のプロラクチンのアミノ酸配列をコードするｃＤＮ
Ａを含有する組換え宿主を選択し、次にその組換え宿主
のプラークあるいはコロニーから本発明のプロラクチン
のアミノ酸配列をコードするＤＮＡを単離することがで
きる。
は、これを適当なベクターに挿入、次にこのようにして
得られたベクターを適当な宿主に導入してクローニング
することにより増幅し、ついでスクリーニングを行って
目的のプロラクチンのアミノ酸配列をコードするｃＤＮ
Ａを含有する組換え宿主を選択し、次にその組換え宿主
のプラークあるいはコロニーから本発明のプロラクチン
のアミノ酸配列をコードするＤＮＡを単離することがで
きる。
【００１９】本発明のプロラクチンのアミノ酸配列をコ
ードする遺伝子発現ベクターは、これを適当な宿主、特
に宿主細胞に通常知られた方法に従って導入して、その
宿主細胞を形質転換させ、次にそのようにして形質転換
された宿主細胞を培養等の方法により増幅させること等
により、大量に形質転換体と呼ばれる本発明のプロラク
チンのアミノ酸配列を有するペプチド産生能を有する細
胞を得ることができる。
ードする遺伝子発現ベクターは、これを適当な宿主、特
に宿主細胞に通常知られた方法に従って導入して、その
宿主細胞を形質転換させ、次にそのようにして形質転換
された宿主細胞を培養等の方法により増幅させること等
により、大量に形質転換体と呼ばれる本発明のプロラク
チンのアミノ酸配列を有するペプチド産生能を有する細
胞を得ることができる。
【００２０】上記形質転換体の増殖又は培養にあたって
は、該形質転換体の育成に適したｐＨ、温度、通気、撹
拌、培地交換の頻度等の条件は、実験等により適宜決定
することができる。上記形質転換体を増殖又は培養する
ことにより、あるいは該遺伝子の発現を誘導することに
より産生された本発明の遺伝子発現に基づくタンパク質
は、通常の操作により分離採取することができる。
は、該形質転換体の育成に適したｐＨ、温度、通気、撹
拌、培地交換の頻度等の条件は、実験等により適宜決定
することができる。上記形質転換体を増殖又は培養する
ことにより、あるいは該遺伝子の発現を誘導することに
より産生された本発明の遺伝子発現に基づくタンパク質
は、通常の操作により分離採取することができる。
【００２１】次に、実施例を挙げ、本発明を更に詳しく
説明する。
説明する。
【００２２】実施例１ 産卵前の体重１１から１６ｋｇのチョウザメから脳下垂
体を摘出し、凍結乾燥した。脱脂した脳下垂体０．５ｇ
を４°Ｃの氷冷下、３５％塩酸−アセトン（１：２８）
溶液１００ｍｌ中、ガラスホモジュナイザーで破砕後１
時間氷上で酸−アセトン抽出を行った。抽出後、遠心分
離機で２２０００Ｇ、３０分間０°Ｃで遠心分離した。
得られた沈殿を更に１００ｍｌの８０％アセトン中でホ
モジュナイズ後１時間４°Ｃの氷冷中で抽出し、上記で
得られた遠心上清と共に遠心分離機において２２０００
Ｇ、３０分間０°Ｃで遠心分離を行った。得られた抽出
物に３ｌのアセトンを４°Ｃの氷冷中で加えることによ
りアセトン沈殿を行い、上清を除いた後、沈殿物を凍結
乾燥した。得られた抽出物は約５４ｍｇであった。
体を摘出し、凍結乾燥した。脱脂した脳下垂体０．５ｇ
を４°Ｃの氷冷下、３５％塩酸−アセトン（１：２８）
溶液１００ｍｌ中、ガラスホモジュナイザーで破砕後１
時間氷上で酸−アセトン抽出を行った。抽出後、遠心分
離機で２２０００Ｇ、３０分間０°Ｃで遠心分離した。
得られた沈殿を更に１００ｍｌの８０％アセトン中でホ
モジュナイズ後１時間４°Ｃの氷冷中で抽出し、上記で
得られた遠心上清と共に遠心分離機において２２０００
Ｇ、３０分間０°Ｃで遠心分離を行った。得られた抽出
物に３ｌのアセトンを４°Ｃの氷冷中で加えることによ
りアセトン沈殿を行い、上清を除いた後、沈殿物を凍結
乾燥した。得られた抽出物は約５４ｍｇであった。
【００２３】得られた沈殿物を１Ｍ酢酸に溶解し、同溶
液で平衡化したセファデックスＧ−２５カラム（２．７
×７０ｃｍ）により分画した。溶出は、１Ｍ酢酸を用
い、２０°Ｃ、前流７０ｍｌ、流速３０ｍｌ／時で行
い、溶出液は波長２８０ｎｍの吸光度でタンパク質含量
を測定し、試験管一本当たりの分取量を３ｍｌとし、３
つのゲル濾過画分を得た。得られた第１番目の画分を凍
結乾燥し、３６．８ｍｇの白色粉末を得た。次に、これ
をＴＳＫ−ゲルを用いたカラム（ＯＤＳ １２０Ｔ、
０．４６×２５ｃｍ）により逆相高速液体クロマトグラ
フィーにかけ精製した。溶出は、アセトニトリル含有
０．１％トリフロロ酢酸溶液を用い、４０°Ｃ、１ｍｌ
／分の流速とし、２２０ｎｍの吸光度でタンパク質含量
を測定し、７つの画分を得た（第一図）。さらに、得ら
れた第５番目の画分を凍結乾燥し、本発明のプロラクチ
ンを分取した。得られた第５番目の画分は以下に示すよ
うな物理化学的性質を示した。
液で平衡化したセファデックスＧ−２５カラム（２．７
×７０ｃｍ）により分画した。溶出は、１Ｍ酢酸を用
い、２０°Ｃ、前流７０ｍｌ、流速３０ｍｌ／時で行
い、溶出液は波長２８０ｎｍの吸光度でタンパク質含量
を測定し、試験管一本当たりの分取量を３ｍｌとし、３
つのゲル濾過画分を得た。得られた第１番目の画分を凍
結乾燥し、３６．８ｍｇの白色粉末を得た。次に、これ
をＴＳＫ−ゲルを用いたカラム（ＯＤＳ １２０Ｔ、
０．４６×２５ｃｍ）により逆相高速液体クロマトグラ
フィーにかけ精製した。溶出は、アセトニトリル含有
０．１％トリフロロ酢酸溶液を用い、４０°Ｃ、１ｍｌ
／分の流速とし、２２０ｎｍの吸光度でタンパク質含量
を測定し、７つの画分を得た（第一図）。さらに、得ら
れた第５番目の画分を凍結乾燥し、本発明のプロラクチ
ンを分取した。得られた第５番目の画分は以下に示すよ
うな物理化学的性質を示した。
【００２４】 分子量 ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動で上記画分Ａを
展開し、本発明のプロラクチンは約２３ｋＤの分子量を
持つことが分かった。また、同時に得られた第５番目の
画分は単一バンドを与えた。尚、標準分子量マーカーと
しては、ファルマシア社製着色済み分子量マーカーＬＭ
ＷｋｉｔＥ，分子量９４０００；６７０００；４３００
０；３００００；２００００；１４０００を用いた。
展開し、本発明のプロラクチンは約２３ｋＤの分子量を
持つことが分かった。また、同時に得られた第５番目の
画分は単一バンドを与えた。尚、標準分子量マーカーと
しては、ファルマシア社製着色済み分子量マーカーＬＭ
ＷｋｉｔＥ，分子量９４０００；６７０００；４３００
０；３００００；２００００；１４０００を用いた。
【００２５】 アミノ酸構成 本発明の新規ペプチドを０．６％フェノール含有６Ｎ−
塩酸を用い、１１０°Ｃで２４時間加水分解を行った
後、フェニルイソチオシアナートと反応させフェニルチ
オカルバミル・アミノ酸誘導体とし、ＴＳＫゲルを用い
たカラム（ＯＤＳ−８０ＴＭ、０．４６×２５ｃｍ）逆
相高速液体クロマトグラフィーにかけ精製した。溶出
は、比例勾配（イソプロパノール：アセトニトリル）に
より、構成アミノ酸を定量した。また、Ｃｙｓについて
は過ギ酸酸化法にて確認した。この結果を表１に示す。
塩酸を用い、１１０°Ｃで２４時間加水分解を行った
後、フェニルイソチオシアナートと反応させフェニルチ
オカルバミル・アミノ酸誘導体とし、ＴＳＫゲルを用い
たカラム（ＯＤＳ−８０ＴＭ、０．４６×２５ｃｍ）逆
相高速液体クロマトグラフィーにかけ精製した。溶出
は、比例勾配（イソプロパノール：アセトニトリル）に
より、構成アミノ酸を定量した。また、Ｃｙｓについて
は過ギ酸酸化法にて確認した。この結果を表１に示す。
【００２６】表１
【００２７】 アミノ酸配列決定およびＮ末端アミノ
酸の同定 本発明のプロラクチン２００μｇを還元するために、ジ
チオスレイトールと４時間反応させ、さらに４−ビニル
・ピリジンを用いてアルキル化した。次に、アルキル化
された本発明のプロラクチンをＬｙｓエンドペプチダー
ゼ［条件：Ｅ／Ｓ＝１／６０、０．０５Ｍアンモニウム
・ビカルボネート（ｐＨ８．０）、３７°Ｃ、１８時
間］、又はＡｓｐ−Ｎエンドペプチダーゼ［条件：Ｅ／
Ｓ＝１／２００、０．０５Ｍアンモニウム・ビカルボネ
ート（ｐＨ８．０）、３７°Ｃ、１８時間］を用いて分
解した。また、Ａｓｐ−Ｎエンドペプチダーゼで得られ
た大きな断片は、さらにトリプシン［条件：０．２Ｍ酢
酸アンモニウム（ｐＨ８．０）、３７°Ｃ、６時間］に
て分解した。得られた断片をＴＳＫ−ゲルを用いたカラ
ム（ＯＤＳ １２０Ｔ）により逆相高速液体クロマトグ
ラフィーにかけ精製した。溶出は、比例勾配のイソプロ
パノール含有０．１％トリフロロ酢酸溶液を用いた。得
られたペプチドは、自動シーケンサー（島津、ＰＳＱ−
１）にて分析し、決定した。
酸の同定 本発明のプロラクチン２００μｇを還元するために、ジ
チオスレイトールと４時間反応させ、さらに４−ビニル
・ピリジンを用いてアルキル化した。次に、アルキル化
された本発明のプロラクチンをＬｙｓエンドペプチダー
ゼ［条件：Ｅ／Ｓ＝１／６０、０．０５Ｍアンモニウム
・ビカルボネート（ｐＨ８．０）、３７°Ｃ、１８時
間］、又はＡｓｐ−Ｎエンドペプチダーゼ［条件：Ｅ／
Ｓ＝１／２００、０．０５Ｍアンモニウム・ビカルボネ
ート（ｐＨ８．０）、３７°Ｃ、１８時間］を用いて分
解した。また、Ａｓｐ−Ｎエンドペプチダーゼで得られ
た大きな断片は、さらにトリプシン［条件：０．２Ｍ酢
酸アンモニウム（ｐＨ８．０）、３７°Ｃ、６時間］に
て分解した。得られた断片をＴＳＫ−ゲルを用いたカラ
ム（ＯＤＳ １２０Ｔ）により逆相高速液体クロマトグ
ラフィーにかけ精製した。溶出は、比例勾配のイソプロ
パノール含有０．１％トリフロロ酢酸溶液を用いた。得
られたペプチドは、自動シーケンサー（島津、ＰＳＱ−
１）にて分析し、決定した。
【００２８】以上の結果等から、本発明のプロラクチン
は配列番号：１に示すような配列を有するペプチドであ
ると決定した。
は配列番号：１に示すような配列を有するペプチドであ
ると決定した。
【００２９】また、このようなペプチドは、活性を示す
ために必須な部分と活性発現には直接関係しない部分が
あるので、本発明の新規ペプチドと同一なペプチド配列
を有するものは本発明に含まれる。
ために必須な部分と活性発現には直接関係しない部分が
あるので、本発明の新規ペプチドと同一なペプチド配列
を有するものは本発明に含まれる。
【００３０】次に、本発明のプロラクチンの生理活性を
確認するために、脳下垂体を摘出したチョウザメの幼魚
に、実施例で得られた本発明のプラクチン（０．０１μ
ｇ／匹）または生理食塩水を腹腔内投与し、 体重の増加 血中ナトリウム濃度 を測定・検討した。尚、血中ナトリウム濃度の測定は、
ジェネラル・アンド・コンパラティブ・エンドクリノロ
ジイ（ＧＥＮＥＲＡＬ ＡＮＤ ＣＯＭＰＡＲＡＴＩＶ
Ｅ ＥＮＤＯＣＲＩＮＯＬＯＧＹ）７０，４０７−４１
７（１９８８）に記載の方法に従った。
確認するために、脳下垂体を摘出したチョウザメの幼魚
に、実施例で得られた本発明のプラクチン（０．０１μ
ｇ／匹）または生理食塩水を腹腔内投与し、 体重の増加 血中ナトリウム濃度 を測定・検討した。尚、血中ナトリウム濃度の測定は、
ジェネラル・アンド・コンパラティブ・エンドクリノロ
ジイ（ＧＥＮＥＲＡＬ ＡＮＤ ＣＯＭＰＡＲＡＴＩＶ
Ｅ ＥＮＤＯＣＲＩＮＯＬＯＧＹ）７０，４０７−４１
７（１９８８）に記載の方法に従った。
【００３１】その結果、本発明のプロラクチンを投与し
たチョウザメの幼魚は、生理食塩水を投与したそれに比
べて、体重の増加、血中ナトリウム濃度、共に有意な上
昇が確認された。
たチョウザメの幼魚は、生理食塩水を投与したそれに比
べて、体重の増加、血中ナトリウム濃度、共に有意な上
昇が確認された。
【図１】チョウザメの脳下垂体から得られる抽出物の高
速液体クロマトグラフィー・チャートである。
速液体クロマトグラフィー・チャートである。
【００３２】配列番号：１ 配列の長さ：２０４ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：ペプチド 配列の特徴 特徴を決定した方法：Ｅ 配列 ５ １０ １５ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｐｒｏ Ｐ ｒｏ Ｐｒｏ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｌｅｕ ２０ ２５ ３０ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｓ ｅｒ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｈｉｓ ３５ ４０ ４５ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ａ ｓｐ Ｐｒｏ Ｈｉｓ Ｐｈｅ Ｓｅｒ ５０ ５５ ６０ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｃ ｙｓ Ｈｉｓ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｓｅｒ ６５ ７０ ７５ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｇｌｎ Ａｌａ Ｌ ｅｕ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｇｌｎ ８０ ８５ ９０ Ｇｌｕ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｍｅｔ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｌ ｅｕ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ｔｒｐ Ｔｈｒ ９５ １００ １０５ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｍｅｔ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｇ ｌｎ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｐｒｏ １１０ １１５ １２０ Ａｓｎ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｔｒｐ Ｇ ｌｎ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｌｅｕ １２５ １３０ １３５ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇ ｌｕ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ａｓｎ １４０ １４５ １５０ Ａｒｇ Ｐｈｅ Ａｓｐ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｌａ Ａｌａ Ｈｉｓ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｓ ｅｒ Ｐｈｅ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ａｌａ １５５ １６０ １６５ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｔｒｐ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｐ ｈｅ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ａｓｐ １７０ １７５ １８０ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ｌ ｅｕ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ｐｈｅ １８５ １９０ １９５ Ａｒｇ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｌ ｅｕ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ａｒｇ ２００ Ｃｙｓ Ａｒｇ Ａｌａ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ
Claims (2)
- 【請求項１】 次の物理化学的性質を有する新規ペプチ
ド。 ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法によって
測定した分子量は、約２３ｋＤである。 ０．６％フェノール含有６Ｎ−塩酸を用い、加水分解
を行った後、定量したアミノ酸構成は、表１に示す通り
である。 表１ - 【請求項２】 配列番号：１で表されるアミノ酸配列を
有するペプチドを主要構成成分として含有する請求項１
記載の新規ペプチド。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14547193A JPH06336498A (ja) | 1993-05-26 | 1993-05-26 | 新規プロラクチン |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14547193A JPH06336498A (ja) | 1993-05-26 | 1993-05-26 | 新規プロラクチン |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06336498A true JPH06336498A (ja) | 1994-12-06 |
Family
ID=15386018
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14547193A Pending JPH06336498A (ja) | 1993-05-26 | 1993-05-26 | 新規プロラクチン |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06336498A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114106142A (zh) * | 2021-11-03 | 2022-03-01 | 中山大学 | 一种黄鳝生长催乳素抗血清及其制备方法与应用 |
| CN115819504A (zh) * | 2022-10-31 | 2023-03-21 | 中国农业大学 | 鲟鱼功能性多肽及其应用 |
-
1993
- 1993-05-26 JP JP14547193A patent/JPH06336498A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114106142A (zh) * | 2021-11-03 | 2022-03-01 | 中山大学 | 一种黄鳝生长催乳素抗血清及其制备方法与应用 |
| CN114106142B (zh) * | 2021-11-03 | 2024-05-14 | 中山大学 | 一种黄鳝生长催乳素抗血清及其制备方法与应用 |
| CN115819504A (zh) * | 2022-10-31 | 2023-03-21 | 中国农业大学 | 鲟鱼功能性多肽及其应用 |
| CN115819504B (zh) * | 2022-10-31 | 2024-05-17 | 中国农业大学 | 鲟鱼功能性多肽及其应用 |
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