JPH06336487A - New compound thiomarinol b - Google Patents
New compound thiomarinol bInfo
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- JPH06336487A JPH06336487A JP5231332A JP23133293A JPH06336487A JP H06336487 A JPH06336487 A JP H06336487A JP 5231332 A JP5231332 A JP 5231332A JP 23133293 A JP23133293 A JP 23133293A JP H06336487 A JPH06336487 A JP H06336487A
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は、抗菌活性を有する新規
化合物チオマリノールＢおよびその製法に関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a novel compound thiomarinol B having antibacterial activity and a process for producing the same.
【０００２】[0002]
【従来の技術】海水より分離したアルテロモナス(Alter
omonas) 属に属する微生物が、例えば抗腫瘍活性を有す
るビスカベリン(bisucaberin) を生産することが知られ
ている（特開昭63-27484号）。しかし、ビスカベリンは
環状ペプチド化合物である。2. Description of the Related Art Alteromonas separated from seawater
It is known that microorganisms belonging to the genus omonas) produce, for example, biscaverin having antitumor activity (Japanese Patent Laid-Open No. 63-27484). However, biscaverine is a cyclic peptide compound.
【０００３】水酸基で置換されたテトラヒドロピラン骨
格を母核とした誘導体は数多いが、中でも後述するチオ
マリノ−ルＢの推定構造に類似した構造を有する化合物
としては、例えばシュ−ドモナス・フルオレセンス（Ps
eudomonas fluorescens)が生産するシュ−ドモン酸(Pse
udomonic acid)Ａ（Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉ
ｎ Ｔｒａｎｓ．Ｉ， ２９４頁（１９７７ 年))、シ
ュ−ドモン酸Ｂ(J.Chem.Soc.Perkin Trans.I, 318 頁(1
977 年))、シュ−ドモン酸Ｃ(J.Chem.Soc.Perkin Tran
s.I, 2、827 頁(1982 年))およびシュ−ドモン酸Ｄ(J.Ch
em.Soc.Perkin Trans.I, 2、655 頁(1983 年))が知られ
ている。しかし、これらには例えばチオマリノールＢの
推定構造に特徴であるテトラヒドロピラン骨格とα、β
−不飽和カルボニルに挟まれたメチレンに水酸基が存在
しない。なお現在、シュ−ドモン酸Ａの 2 ％軟膏（商
品名、「Bactroban」、Beecham 社）が皮膚感染症治療剤
として欧米で実用に供されている。しかし、これらシュ
−ドモン酸の抗菌活性はチオマリノ−ルＢより弱い。There are many derivatives having a tetrahydropyran skeleton substituted with a hydroxyl group as a mother nucleus. Among them, examples of compounds having a structure similar to the putative structure of thiomarinol B described later include Pseudomonas fluorescens ( Ps
Pseudomonate produced by eudomonas fluorescens (Pse
udomonic acid) A (J. Chem. Soc. Perki
n Trans. I, 294 (1977)), Pseudomonic acid B (J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, 318 (1)
977)), pseudomonic acid C (J. Chem. Soc. Perkin Tran
sI, 2, p. 827 (1982)) and pseudomonic acid D (J. Ch.
em.Soc.Perkin Trans.I, 2, p. 655 (1983)). However, these include, for example, a tetrahydropyran skeleton and α, β which are characteristic of the putative structure of thiomarinol B
There are no hydroxyl groups in the methylene sandwiched by unsaturated carbonyls. At present, a 2% ointment of sudomonic acid A (trade name, "Bactroban", Beecham Co.) is put to practical use in Europe and the United States as a therapeutic agent for skin infections. However, the antibacterial activity of these pseudomonic acids is weaker than that of thiomarinol B.
【０００４】また、シュ−ドモン酸の末端カルボン酸を
アミドに変換した誘導体も知られている（特開昭52−10
2279号、特開昭54−12375 号、特開昭54−90179 号、特
開昭54−103871号、特開昭54−125672号）。しかし、こ
れらの中にはチオマリノ−ルＢのような強い抗菌力、多
くのグラム陰性菌まで含む広い抗菌スペクトルを有する
ものはない。むしろ、その活性はシュ−ドモン酸より弱
くなる傾向がある。Further, a derivative in which a terminal carboxylic acid of pseudomonic acid is converted to an amide is also known (Japanese Patent Laid-Open No. 52-10).
2279, JP-A-54-12375, JP-A-54-90179, JP-A-54-103871, and JP-A-54-125672). However, none of them has a strong antibacterial activity like thiomarinol B and a broad antibacterial spectrum including many Gram-negative bacteria. Rather, its activity tends to be weaker than that of pseudomonic acid.
【０００５】チオマリノ−ルＢの推定構造上の特徴のひ
とつに、テトラヒドロピラン骨格とα、β−不飽和カル
ボニルに挟まれたメチレンに水酸基が存在する。このよ
うな水酸基を有する化合物としては唯一、海洋細菌由来
の化合物が報告されている（Am.Chem.Soc.の 200年会
（1990 年 8月 26-31日）の Abstracts of Papers、Pa
rt 2、ORGN.No.139 ）。しかしながら、この化合物の末
端のカルボニル基に結合する複素環基は２−ピペリドン
−３−イル基であり、その抗菌活性の詳細は不明であ
る。One of the putative structural features of thiomarinol B is the presence of a hydroxyl group in methylene sandwiched between the tetrahydropyran skeleton and α, β-unsaturated carbonyl. As the only compound having such a hydroxyl group, a compound derived from marine bacteria has been reported (Am. Chem. Soc. 200th Annual Meeting (August 26-31, 1990), Abstracts of Papers, Pa.
rt 2, ORGN.No.139). However, the heterocyclic group bonded to the terminal carbonyl group of this compound is a 2-piperidone-3-yl group, and the details of its antibacterial activity are unknown.
【０００６】一方、ホロシン(holothin, Helv.Chim.Act
a,42巻,563頁(1959 年))骨格を母核とした誘導体として
は、例えば放線菌の一種 Streptomyces 属より単離され
たピロシン属抗生物質としてホロマイシン(holomycin,
Helv.Chim.Acta, 42巻, 563頁(1959 年))、ピロシン(py
rrothine, J.Am.Chem.Soc., 77 巻, 2、861 頁(1955
年))、チオルチン(thiolutin, Angew.Chem., 66 巻, 74
5 頁(1954 年))、アウレオスリシン(aureothricin, J.A
m.Chem.Soc., 74 巻, 6、304 頁(1952 年))などを挙げる
ことができる。また、細菌由来の抗生物質としてゼノル
アブジン（xenorhabdin)Ｉ〜Ｖ( 特表昭59−501950号：
J.Natural Products, 54巻、 774 頁 (1991年))が単離さ
れている。しかし、これらの化合物にはチオマリノ−ル
Ｂほどの強い抗菌活性は報告されていない。On the other hand, holothin, Helv.Chim.Act
a, 42, 563 (1959)) As a derivative having a skeleton as a mother nucleus, for example, as a pyrocin antibiotic isolated from Streptomyces sp.
Helv.Chim.Acta, 42, 563 (1959)), Pyrosin (py
rrothine, J. Am. Chem. Soc., 77, 2, 861 (1955
)), Thiolutin, Angew.Chem., 66, 74
5 (1954)), aureothricin, JA
m.Chem.Soc., 74, 6, 304 (1952)). In addition, as a bacterial-derived antibiotic, xenorhabdin I to V (Table 59-501950:
J. Natural Products, 54, 774 (1991)) has been isolated. However, these compounds have not been reported to have a stronger antibacterial activity than thiomarinol B.
【０００７】[0007]
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、海水よ
り分離したアルテロモナス (Alteromonas)属に属するSA
NK 73390株の培養物から、抗菌作用を有する新規化合物
チオマリノ−ルＢが生産されることを見出して本発明を
完成した。DISCLOSURE OF THE INVENTION The present inventors have found that SA belonging to the genus Alteromonas isolated from seawater.
The present invention has been completed by discovering that a novel compound thiomarinol B having an antibacterial action is produced from a culture of strain NK 73390.
【０００８】[0008]
【課題を解決するための手段】本発明の新規化合物チオ
マリノールＢは下記の性状を有する。 （１）物質の性状：黄色粉末 （２）分子式：C30 H44 N2 O11 S2 （３）分子量：672(FAB-MS法により測定） （４）高分解能質量分析：C30H45N2O11S2[(M+H)+ ; FAB
-MS 法により測定］ 実測値 673.2468 計算値673.2465 （５）元素分析値：（％）（但し、C30H44N2O11S2 ＋ H
2Oとして） 実測値 C 52.34, H 6.79, N 3.92, S 9.02 計算値 C 52.16, H 6.71, N 4.06, S 9.28 （６）赤外線吸収スペクトル：νmax cm-1 臭化カリウム(KBr) 錠剤法で測定した赤外線吸収スペク
トルは、次に示す通りである。3660, 3503, 3318, 307
5, 2966, 2928, 2870, 1704, 1653, 1509,1467, 1381,
1349, 1299, 1217, 1199, 1152, 1112, 1063, 1047,101
9, 975, 949, 884, 839, 764, 730, 660, 609,
553。The novel compound thiomarinol B of the present invention has the following properties. (1) Property of substance: yellow powder (2) Molecular formula: C 30 H 44 N 2 O 11 S 2 (3) Molecular weight: 672 (measured by FAB-MS method) (4) High resolution mass spectrometry: C 30 H 45 N 2 O 11 S 2 [(M + H) + ; FAB
-Measured by MS method] Measured value 673.2468 Calculated value 673.2465 (5) Elemental analysis value: (%) (however, C 30 H 44 N 2 O 11 S 2 + H
2 O) Actual value C 52.34, H 6.79, N 3.92, S 9.02 Calculated value C 52.16, H 6.71, N 4.06, S 9.28 (6) Infrared absorption spectrum: ν max cm -1 Potassium bromide (KBr) Tablet method The infrared absorption spectrum measured by is as shown below. 3660, 3503, 3318, 307
5, 2966, 2928, 2870, 1704, 1653, 1509, 1467, 1381,
1349, 1299, 1217, 1199, 1152, 1112, 1063, 1047, 101
9, 975, 949, 884, 839, 764, 730, 660, 609,
553.
【０００９】（７）紫外線吸収スペクトル：λmax nm
(ε) １−プロパノール中で測定した紫外線吸収スペクトル
は、次に示す通りである。 377(2,900), 301(13,000), 215(21,000) １−プロパノール＋塩酸中で測定した紫外線吸収スペク
トルは、次に示す通りである。 377(2,900), 301(13,000), 223(17,000) １−プロパノール＋水酸化ナトリウム中で測定した紫外
線吸収スペクトルは、次に示す通りである。 377(2,900), 301(13,000), 221(19,000)。(7) Ultraviolet absorption spectrum: λ max nm
The ultraviolet absorption spectrum measured in (ε) 1-propanol is as shown below. The ultraviolet absorption spectra measured in 377 (2,900), 301 (13,000), 215 (21,000) 1-propanol + hydrochloric acid are as shown below. The ultraviolet absorption spectrum measured in 377 (2,900), 301 (13,000), 223 (17,000) 1-propanol + sodium hydroxide is as shown below. 377 (2,900), 301 (13,000), 221 (19,000).
【００１０】（８）比旋光度： [α]D 25＝＋ 7.7°（ｃ
＝1.0, １−プロパノール） （９）高速液体クロマトグラフィー： 分離カラム；センシュウパック ODS H-2151 （カラムサ
イズ、φ 6×150 mm, センシュウ科学（株）製） 溶媒；40 ％アセトニトリル−水 流速；1.5 ml／分 保持時間； 8.4分 （１０）1H−核磁気共鳴スペクトル：（δ：ppm) 重ジメチルスルホキシド中、内部基準にテトラメチルシ
ランを使用して測定した核磁気共鳴スペクトル(360 MH
z) は、次に示す通りである。11.28(1H,s(br)), 10.47
(1H,s), 7.23(1H,s), 5.97(1H,s),5.37(2H,m), 4.88(1
H,d,J=7.5Hz), 4.61(1H,s(br)),4.43(1H,d,J=7.2Hz),
4.28(1H,d,J=3.6Hz), 4.18(1H,d,J=7.2Hz),4.02(2H,t,J
=6.6Hz), 3.74(1H,s(br)), 3.64(1H),3.61(1H),3.54(1
H), 3.51(1H), 3.35(1H,d,J=10.9Hz), 2.43(2H,t,J=7.
3Hz),2.12(1H), 2.09(1H), 2.03(1H), 2.02(3H,s), 1.
61(1H), 1.58(2H),1.50(2H), 1.32(2H), 1.30(2H), 1.
25(2H), 0.96(3H,d,J=6.3Hz),0.92(3H,d,J=6.9Hz)。(8) Specific optical rotation: [α] D 25 = + 7.7 ° (c
= 1.0, 1-propanol) (9) High-performance liquid chromatography: Separation column; Senshupack ODS H-2151 (column size, φ 6 x 150 mm, manufactured by Senshu Kagaku Co., Ltd.) Solvent: 40% acetonitrile-water Flow rate; 1.5 ml / min Retention time; 8.4 min (10) 1 H-nuclear magnetic resonance spectrum: (δ: ppm) Nuclear magnetic resonance spectrum (360 MH) measured using tetramethylsilane as an internal standard in deuterated dimethyl sulfoxide.
z) is as shown below. 11.28 (1H, s (br)), 10.47
(1H, s), 7.23 (1H, s), 5.97 (1H, s), 5.37 (2H, m), 4.88 (1
H, d, J = 7.5Hz), 4.61 (1H, s (br)), 4.43 (1H, d, J = 7.2Hz),
4.28 (1H, d, J = 3.6Hz), 4.18 (1H, d, J = 7.2Hz), 4.02 (2H, t, J
= 6.6Hz), 3.74 (1H, s (br)), 3.64 (1H), 3.61 (1H), 3.54 (1
H), 3.51 (1H), 3.35 (1H, d, J = 10.9Hz), 2.43 (2H, t, J = 7.
3Hz), 2.12 (1H), 2.09 (1H), 2.03 (1H), 2.02 (3H, s), 1.
61 (1H), 1.58 (2H), 1.50 (2H), 1.32 (2H), 1.30 (2H), 1.
25 (2H), 0.96 (3H, d, J = 6.3Hz), 0.92 (3H, d, J = 6.9Hz).
【００１１】（１１）13C −核磁気共鳴スペクトル：
（δ：ppm) 重ジメチルスルホキシド中、内部基準にテトラメチルシ
ランを使用して測定した核磁気共鳴スペクトル（90MHz)
は、次に示す通りである。173.5(s), 166.1(s), 165.
7(s), 160.8(s), 143.2(s), 134.2(d),127.8(d), 1
23.3(s), 115.2(s), 114.4(d), 109.4(d), 76.2
(d),72.4(d), 69.6(d), 69.3(d), 64.3( t), 6
3.9(d), 63.0(t),43.2(d), 42.2(d), 34.7(t),
31.9(t), 28.3(t), 28.2(t),28.1(t), 25.3(t),
24.5(t), 20.0(q), 15.7(q), 15.6(q)。(11) 13 C-nuclear magnetic resonance spectrum:
(Δ: ppm) Nuclear magnetic resonance spectrum (90MHz) measured using tetramethylsilane as an internal standard in deuterated dimethyl sulfoxide.
Is as shown below. 173.5 (s), 166.1 (s), 165.
7 (s), 160.8 (s), 143.2 (s), 134.2 (d), 127.8 (d), 1
23.3 (s), 115.2 (s), 114.4 (d), 109.4 (d), 76.2
(d), 72.4 (d), 69.6 (d), 69.3 (d), 64.3 (t), 6
3.9 (d), 63.0 (t), 43.2 (d), 42.2 (d), 34.7 (t),
31.9 (t), 28.3 (t), 28.2 (t), 28.1 (t), 25.3 (t),
24.5 (t), 20.0 (q), 15.7 (q), 15.6 (q).
【００１２】（１２）溶解性：メタノール、エタノー
ル、プロパノール、ブタノール等のアルコール類、ジメ
チルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、クロロホル
ム、酢酸エチル、アセトン、エチルエーテルに可溶。ｎ
−ヘキサン、水に不溶。(12) Solubility: Soluble in alcohols such as methanol, ethanol, propanol and butanol, dimethyl sulfoxide, dimethylformamide, chloroform, ethyl acetate, acetone and ethyl ether. n
-Insoluble in hexane and water.
【００１３】（１３）薄層クロマトグラフィー： Rf値 ； 0.52 吸着剤 ；シリカゲル（メルク社製、Art. 5715) 展開溶剤；メチレンクロリド：メタノール＝85：15。(13) Thin layer chromatography: R f value; 0.52 adsorbent; silica gel (Merck, Art. 5715) developing solvent; methylene chloride: methanol = 85: 15.
【００１４】本発明の新規化合物チオマリノールＢは、
下記の推定構造式（Ｉ）The novel compound thiomarinol B of the present invention is
The following estimated structural formula (I)
【００１５】[0015]
【化１】 [Chemical 1]
【００１６】または（ＩＩ）Or (II)
【００１７】[0017]
【化２】 [Chemical 2]
【００１８】を有する。It has
【００１９】本発明の推定構造式(I) または（ＩＩ）を
有するチオマリノールＢはいくつかの不斉炭素原子およ
びいくつかの二重結合を有する。特にα，β−不飽和カ
ルボニル部分は異性化される可能性がある。それ故、種
々の立体および幾何異性体が存在する。本発明において
は、これらの異性体がすべて単一の式で示されている。
従って、本発明においては、ラセミ化合物を含むこれら
の異性体およびこれらの異性体の混合物をもすべて含む
ものである。Thiomalinol B having the putative structural formula (I) or (II) of the present invention has some asymmetric carbon atoms and some double bonds. In particular, the α, β-unsaturated carbonyl moiety may be isomerized. Therefore, various stereo and geometric isomers exist. In the present invention, all of these isomers are represented by a single formula.
Therefore, in the present invention, all of these isomers including a racemate and a mixture of these isomers are also included.
【００２０】本発明は、また、アルテロモナス属に属す
るチオマリノールＢ生産菌を培養し、その培養物よりチ
オマリノールＢを採取することを特徴とするチオマリノ
ールＢの製造法に関し、さらに詳しくは、上記のアルテ
ロモナス属に属するチオマリノールＢ生産菌がアルテロ
モナス・ラバ(Alteromonas rava)SANK 73390株である、
該製造法に関する。The present invention also relates to a method for producing thiomarinol B, which comprises culturing a thiomarinol B-producing bacterium belonging to the genus Alteromonas and collecting thiomarinol B from the culture. More specifically, the above-mentioned genus Alteromonas A thiomarinol B producing bacterium belonging to the category: Alteromonas rava SANK 73390 strain,
It relates to the production method.
【００２１】本発明の、チオマリノールＢを生産する上
記 SANK 73390 株は静岡県南伊豆町小稲の海岸で採取し
た海水から常法により分離した海洋細菌である。The SANK 73390 strain of the present invention which produces thiomarinol B is a marine bacterium isolated by a conventional method from seawater collected at the coast of Oda, Minamiizu Town, Shizuoka Prefecture.
【００２２】チオマリノールＢの生産菌であるSANK 733
90株の菌学的性状は次の通りである。SANK 733, a bacterium producing thiomarinol B
The bacteriological properties of 90 strains are as follows.
【００２３】１．形態学的性状 マリンアガー(Difco 社製）上で 23 ℃、24 時間培養
後の観察では、細胞は直径 0.8−1.0 μm 、長さ 2.0−
3.6 μm の桿状であり、単極毛を有し、運動する。胞子
を形成せず、グラム染色は陰性である。1. Morphological properties The cells were observed to have a diameter of 0.8-1.0 μm and a length of 2.0-
It has a rod shape of 3.6 μm, has monopolar hairs, and moves. It does not sporulate and Gram stain is negative.
【００２４】２．マリンアガー培養上での生育状態 23℃で 24 時間培養したコロニーは幾分灰色を帯びた黄
色、不透明で円形、扁平状、全縁である。水溶性の色素
を生成しない。2. Growth on marine agar culture Colonies cultured for 24 hours at 23 ° C are slightly grayish yellow, opaque, round, flat, and full-edged. Does not form water soluble dyes.
【００２５】３．生理学的性状 （１）海水の要求性：生育に海水を要求する。 （２）Ｏ−Ｆ（オキシダティブ−ファーメンタティブ）
テスト［ヒュー・レイフソン（Hugh・Leifson) 法 (J.Ba
ct.,66巻、24−26頁(1953 年))、人工海水で調製］：糖
を分解しない。 （３）オキシダーゼ：＋ （４）カタラーゼ：＋ （５）酸素に対する態度：好気的。 （６）硝酸塩の還元：− （７）デンプンの加水分解：＋ （８）寒天の分解：− （９）ゼラチンの液化：＋ （１０）ＤＮａｓｅの産生：＋ （１１）リパーゼの産生：＋ （１２）生育温度：4 ℃では微弱に生育し、17−26 ℃
では良好な生育を示す。35 ℃では生育しない。 （１３）栄養要求性：ジャーナル・オブ・バクテリオロ
ジー(Journal of Bacteriology) 、107 巻、 268−294
頁（1971年）記載の基本培地を用いた場合、ビタミンフ
リーのカザミノ酸を要求する。 （１４）炭素化合物の利用性：ジャーナル・オブ・バク
テリオロジー（Journalof Bacteriology)、107 巻、 26
8−294 頁（1971年）記載の基本培地にビタミンフリー
のカザミノ酸を 0.1 ％濃度添加し、振盪培養を行なっ
た場合。3. Physiological properties (1) Seawater requirement: Seawater is required for growth. (2) OF (oxidative-fermentative)
Test [Hugh Leifson Method (J.Ba
ct., 66, pages 24-26 (1953)), prepared with artificial seawater]: Does not decompose sugar. (3) Oxidase: + (4) Catalase: + (5) Attitude toward oxygen: aerobic. (6) Reduction of nitrate:-(7) Hydrolysis of starch: + (8) Decomposition of agar:-(9) Liquefaction of gelatin: + (10) Production of DNase: + (11) Production of lipase: + ( 12) Growth temperature: Grows slightly at 4 ℃, 17-26 ℃
Shows good growth. Does not grow at 35 ° C. (13) Nutritional requirements: Journal of Bacteriology, Volume 107, 268-294.
When the basal medium described on page (1971) is used, vitamin-free casamino acid is required. (14) Availability of carbon compounds: Journal of Bacteriology, Volume 107, 26
When shake-cultured by adding 0.1% of vitamin-free casamino acid to the basic medium described on page 8-294 (1971).
【００２６】[0026]
【表１】 [Table 1]
【００２７】４．化学分類学的性状 （１）ＤＮＡのＧ＋Ｃ（グアニン＋シトシン含量）：
43.4 ％（HPLC法）。 （２）キノン系：ユビキノンＱ−８。4. Chemical taxonomic properties (1) G + C (guanine + cytosine content) of DNA:
43.4% (HPLC method). (2) Quinone type: Ubiquinone Q-8.
【００２８】以上の菌学的性状を有する SANK 73390 株
はバージーズ・マニュアル・オブ・システマティック・
バクテリオロジー（Bergey's Manual of Systematic Ba
cteriology) 、１巻 (1984年）および最新のインターナ
ショナル・ジャーナル・オブ・システマティック・バク
テリオロジー（International Journal of Systematic
Bacteriology) に記載の種と照合すると、海洋細菌のア
ルテロモナス・サイトレア(Alteromonas citrea)に類似
した菌と推定された。但し、本菌はアルテロモナス・サ
イトレア(Alteromonas citrea)の基準株 ATCC 29719 株
との比較培養を行なったところ、本菌のコロニーの色調
がいくぶん灰色を帯びた黄色であるのに対し、ATCC 297
19 株は緑色を帯びた黄色であり、SANK 73390 株は 4
℃で生育し、トレハロースとプロピオン酸ソーダを炭
素源として利用する点でアルテロモナス・サイトレア(A
lteromonas citrea)と異なっている。それ故、本発明者
らは本菌をアルテロモナス属に属する新種であると確認
し、アルテロモナス属・ラバ種（Alteromonas rava) と
命名し、新菌株をアルテロモナス・ラバ・SANK 73390
(Alteromonaas rava SANK 73390) 株と命名した。The SANK 73390 strain having the above-mentioned mycological properties is a Vergi's Manual of Systematic
Bacteriology (Bergey's Manual of Systematic Ba
cteriology, Volume 1 (1984) and the latest International Journal of Systematic.
Bacteriology), it was presumed to be similar to the marine bacterium Alteromonas citrea. However, when this bacterium was subjected to comparative culture with the reference strain ATCC 29719 strain of Alteromonas citrea, the color tone of the colony of this bacterium was somewhat grayish yellow, whereas ATCC 297
19 strains are greenish-yellow and SANK 73390 strains are 4
It grows at ℃ and uses trehalose and sodium propionate as carbon sources.
lteromonas citrea). Therefore, the present inventors have confirmed that the bacterium is a new species belonging to the genus Alteromonas, and named it Alteromonas rava (Alteromonas rava), and designated the new strain as Alteromonas rava SANK 73390.
(Alteromonaas rava SANK 73390) strain.
【００２９】本菌株は、アルテロモナス・ラバ・SANK 7
3390 (Alteromonas rava SANK 73390) 株としてブダペ
スト条約に従って通商産業省工業技術院微生物工業技術
研究所（1993年 1月 1日より「通商産業省工業技術院生
命工学工業技術研究所」と改称）に国際寄託されている
（寄託番号、微工研条寄第 3381 号(FERM BP-3381)：原
寄託日、1991年 4月 30 日）。This strain is Alteromonas mule SANK 7
Internationally recognized as 3390 (Alteromonas rava SANK 73390) strain according to the Budapest Treaty according to the Ministry of International Trade and Industry, Institute of Microbiology and Industrial Technology (renamed from January 1, 1993 as the "Ministry of International Trade and Industry, Institute of Biotechnology and Industrial Technology") It has been deposited (deposit number, NIED 3381 (FERM BP-3381): original deposit date, April 30, 1991).
【００３０】以上、SANK 73390 株について説明した
が、周知の如くアルテロモナス属の菌類の諸性質は一定
したものではなく、自然的、または人工的な操作（例え
ば、紫外線照射、放射線照射、化学薬品処理等）によ
り、変異を起こし易く、本発明のSANK 73390 株もこの
点は同じである。本発明にいう SANK 73390 株はそのす
べての変異株を包含する。また、これらの変異株の中に
は、遺伝学的方法、例えば、組換え、形質導入、形質転
換等により得られたものも包含される。即ち、アルテロ
モナス属に属するチオマリノールＢを生産する、SANK 7
3390株、その変異株およびそれらと明確に区別されない
菌株は、すべてSANK 73390株に包含されるものである。Although the SANK 73390 strain has been described above, it is well known that the properties of fungi of the genus Alteromonas are not constant, and natural or artificial operations (for example, ultraviolet irradiation, radiation irradiation, chemical treatment) are performed. Etc.), and the SANK 73390 strain of the present invention is the same in this respect. The SANK 73390 strain referred to in the present invention includes all mutants thereof. Moreover, these mutants also include those obtained by genetic methods such as recombination, transduction, transformation and the like. That is, SANK 7 which produces thiomarinol B belonging to the genus Alteromonas
The 3390 strain, its mutant strains, and strains not clearly distinguished from them are all included in the SANK 73390 strain.
【００３１】本発明の新規化合物チオマリノールＢを得
るため、これらの微生物の培養は他の醗酵生成物を生産
するために用いられるような培地中で行なわれる。この
ような培地中には、微生物が資化できる炭素源、窒素源
および無機塩を含有する。In order to obtain the novel compound thiomarinol B of the present invention, the cultivation of these microorganisms is carried out in a medium as used for producing other fermentation products. Such a medium contains a carbon source, a nitrogen source and an inorganic salt that can be assimilated by microorganisms.
【００３２】一般に、炭素源としてグルコース、フラク
トース、マルトース、シュークロース、マンニトール、
グリセロール、デキストリン、オート麦、ライ麦、トウ
モロコシデンプン、ジャガイモ、トウモロコシ粉、大豆
粉、綿実油、糖蜜、クエン酸、酒石酸等を単一に、ある
いは併用して用いることが出来る。一般には、培地量の
1−10 重量％で変量する。Generally, glucose, fructose, maltose, sucrose, mannitol, carbon sources,
Glycerol, dextrin, oats, rye, corn starch, potato, corn flour, soy flour, cottonseed oil, molasses, citric acid, tartaric acid and the like can be used alone or in combination. Generally,
The amount varies from 1 to 10% by weight.
【００３３】窒素源としては、一般に蛋白質を含有する
物質を醗酵工程に用いる。適当な窒素源としては、大豆
粉、フスマ、落花生粉、綿実粉、カゼイン加水分解物、
ファーマミン、魚粉、コーンスチープリカー、ペプト
ン、肉エキス、イースト、イーストエキス、マルトエキ
ス等の動物系、植物系またはエキス類の窒素源、硝酸ナ
トリウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム等の無
機窒素源である。窒素源は、単一または併用して培地量
の 0.1−6 重量％の範囲で用いる。As the nitrogen source, a substance containing a protein is generally used in the fermentation process. Suitable nitrogen sources include soybean flour, bran, peanut flour, cottonseed flour, casein hydrolyzate,
It is a nitrogen source for animal systems such as pharmamin, fish meal, corn steep liquor, peptone, meat extract, yeast, yeast extract, and malt extract, plant systems or extracts, and inorganic nitrogen sources such as sodium nitrate, ammonium nitrate, and ammonium sulfate. The nitrogen sources are used alone or in combination in the range of 0.1-6% by weight of the medium amount.
【００３４】培地中に取り入れる栄養無機塩は、ナトリ
ウム、アンモニウム、カルシウム、カリウム、マグネシ
ウム、鉄、フォスフェート、サルフェート、クロライ
ド、カーボネート等のイオンを得ることのできる通常の
塩類である。また、コバルト、マンガン、ストロンチウ
ム等の微量の金属、その他ブロマイド、フルオライド、
ボレート、シリケート等の微量イオンを得る塩も含む。The nutrient inorganic salts incorporated into the medium are ordinary salts capable of obtaining ions such as sodium, ammonium, calcium, potassium, magnesium, iron, phosphate, sulfate, chloride and carbonate. In addition, trace amounts of metals such as cobalt, manganese, and strontium, other bromides, fluorides,
Also included are salts for obtaining trace ions such as borates and silicates.
【００３５】液体培養に際しては、消泡剤としてシリコ
ン油、植物油、界面活性剤等が使用される。In liquid culture, silicone oil, vegetable oil, surfactant or the like is used as an antifoaming agent.
【００３６】アルテロモナス・ラバ(Alteromonas rava)
SANK 73390 株を培養しチオマリノールＢを生産する培
地の pH は、5.0 −8.0 に変化させることが出来る。[0036] Alteromonas rava
The pH of the medium for culturing SANK 73390 strain and producing thiomarinol B can be changed to 5.0-8.0.
【００３７】菌の生育温度は 4 ℃から 32 ℃までであ
るが 17 ℃から 26 ℃の範囲が生育良好であり、更にチ
オマリノールＢの生産には、20 ℃ から 26 ℃ が好
適である。The growth temperature of the bacterium is 4 ° C. to 32 ° C., but the growth is good in the range of 17 ° C. to 26 ° C. Further, for the production of thiomarinol B, 20 ° C. to 26 ° C. is suitable.
【００３８】チオマリノールＢは、好気的に培養して得
られるが通常用いられる好気的培養法、例えば固体培養
法、振盪培養法、通気攪拌培養法等が用いられる。Thiomalinol B is obtained by aerobically culturing, but the aerobic culturing method usually used, for example, solid culturing method, shaking culturing method, aeration and stirring culturing method and the like are used.
【００３９】小規模な培養においては、20 ℃ から 2
6 ℃ で数日間振盪培養を行なうのが良好である。For small-scale culture, 20 ° C to 2 ° C
It is best to perform shaking culture at 6 ° C for several days.
【００４０】培養は三角フラスコ中で、１−２段階の種
の発育工程により開始する。種発育段階の培地は、炭素
源および窒素源を併用できる。種フラスコは定温インキ
ュベーター中で 23 ℃、1 乃至 3 日間振盪するか、ま
たは充分に成長するまで振盪する。成長した種は第二の
種培地、または生産培地に接種するのに用いる。中間の
発育工程を用いる場合には、本質的に同様の方法で成長
させ、生産培地に接触するためにそれを部分的に用い
る。接種したフラスコを一定温度で 1 乃至 3日間、ま
たは生産量が最大に達するまで振盪し、インキュベーシ
ョンが終わったらフラスコの含有物を遠心分離またはろ
過する。Culturing is started in an Erlenmeyer flask by 1-2 stages of seed development. The seed developing medium can use a carbon source and a nitrogen source in combination. The seed flask is shaken in a constant temperature incubator at 23 ° C for 1 to 3 days or until it grows sufficiently. The grown seed is used to inoculate a second seed medium, or production medium. If an intermediate development step is used, it is grown in essentially the same way and partially used to contact the production medium. Shake the inoculated flask at constant temperature for 1-3 days, or until maximum production is reached, and at the end of the incubation centrifuge or filter the contents of the flask.
【００４１】大量培養の場合には、攪拌機、通気装置を
付けた適当なタンクで培養するのが好ましい。この方法
によれば、栄養培地をタンクの中で作成できる。栄養培
地を125 ℃ まで加熱して滅菌し、冷却後、滅菌培地に
あらかじめ成長させてあった種を接種する。培養は 20
℃乃至 26 ℃で通気攪拌して行う。この方法は、多量の
化合物を得るのに適している。培養の経過に伴って生産
されるチオマリノールＢの量の経時変化は、高速液体ク
ロマトグラフィーを用いて測定することが出来る。通常
は、１９時間から２００時間の培養でチオマリノールＢ
の生産量は最高値に達する。In the case of large-scale culture, it is preferable to culture in a suitable tank equipped with a stirrer and an aeration device. According to this method, the nutrient medium can be prepared in the tank. Sterilize the nutrient medium by heating to 125 ° C, cool, and inoculate the sterile medium with pre-grown seeds. Culture is 20
Perform by aeration stirring at ℃ to 26 ℃. This method is suitable for obtaining large amounts of compounds. The time-dependent change in the amount of thiomarinol B produced with the progress of culture can be measured using high performance liquid chromatography. Usually, thiomarinol B is used for 19 to 200 hours of culture.
Production reaches the highest level.
【００４２】培養終了後、培養液中の液体部分及び菌体
内に生存するチオマリノールＢは、菌体、その他の固形
部分を珪藻土をろ過助剤とする、ろ過操作または遠心分
離によって分別し、そのろ液または上清中および菌体中
に存在するチオマリノールＢを、その物理化学的性状を
利用し抽出精製することにより得られる。例えば、ろ液
または、上清中に存在するチオマリノールＢは、中性ま
たは酸性 pH 条件下で水と混和しない有機溶剤、例えば
酢酸エチル、クロロホルム、塩化エチレン、塩化メチレ
ン等の単独または、それらの組み合わせにより抽出精製
することができる。あるいは吸着剤として、例えば活性
炭または吸着用樹脂であるアンバーライトXAD −2 、XA
D −4 （ローム・アンド・ハース社製）等や、ダイアイ
オン HP−10、HP−20、 CHP−20、HP−50（三菱化成
（株）製）等が使用される。チオマリノールＢを含む液
を上記のごとき吸着剤の層を通過させて不純物を吸着さ
せて取り除くか、またはチオマリノールＢを吸着させた
後、メタノール水、アセトン水、ｎ−ブタノール水など
を用いて溶出させることにより得られる。また、菌体内
に存在するチオマリノールＢは、50−90 ％含水アセト
ンまたは含水メタノールにより抽出し有機溶剤を除去し
た後、ろ液と同様な抽出精製操作を行なうことにより得
られる。After the completion of the culture, thiomarinol B which survives in the liquid portion of the culture medium and the cells is separated from the cells and other solid portions by a filtration operation or centrifugation using diatomaceous earth as a filter aid. It can be obtained by extracting and purifying thiomarinol B existing in the liquid or supernatant and in the bacterial cells by utilizing its physicochemical properties. For example, thiomarinol B present in the filtrate or supernatant may be an organic solvent immiscible with water under neutral or acidic pH conditions such as ethyl acetate, chloroform, ethylene chloride, methylene chloride, etc., alone or in combination. Can be used for extraction and purification. Alternatively, as the adsorbent, for example, activated carbon or adsorption resin Amberlite XAD-2, XA
D-4 (manufactured by Rohm and Haas Co.) or the like, Diaion HP-10, HP-20, CHP-20, HP-50 (manufactured by Mitsubishi Kasei Co., Ltd.) and the like are used. The liquid containing thiomarinol B is passed through the layer of the adsorbent as described above to remove impurities by adsorption, or thiomarinol B is adsorbed and then eluted with methanol water, acetone water, n-butanol water or the like. It is obtained by The thiomarinol B existing in the cells can be obtained by extracting with 50-90% hydrous acetone or hydrous methanol to remove the organic solvent, and then performing the same extraction and purification procedure as for the filtrate.
【００４３】このようにして得られたチオマリノールＢ
は、更にシリカゲル、マグネシウム−シリカゲル系のフ
ロリジルのような担体を用いた吸着カラムクロマトグラ
フィー、セファデックスLH−20（ファルマシア社製）等
を用いた分配カラムクロマトグラフィー、および順相、
逆相カラムを用いた高速液体クロマトグラフィー等で精
製することができる。以上の分離、精製の手段を単独ま
たは適宜組み合わせ反復して用いることによりチオマリ
ノールＢを分離精製することができる。Thiomalinol B thus obtained
Further, silica gel, adsorption column chromatography using a carrier such as magnesium-silica gel florisil, partition column chromatography using Sephadex LH-20 (Pharmacia), and normal phase,
It can be purified by high performance liquid chromatography or the like using a reverse phase column. Thiomalinol B can be separated and purified by using the above separating and purifying means alone or in combination as appropriate.
【００４４】[0044]
【作用】本発明のチオマリノールＢは、文献未載の新規
化合物であり、動物（例、ヒト、イヌ、ネコ、ウサギ
等）において、グラム陽性細菌およびグラム陰性細菌に
対し抗菌作用を示すことから、各種細菌感染症を対照と
する抗菌剤として有用である。The thiomarinol B of the present invention is a novel compound that has not been published in the literature and exhibits an antibacterial action against Gram-positive and Gram-negative bacteria in animals (eg, humans, dogs, cats, rabbits, etc.), It is useful as an antibacterial agent against various bacterial infections.
【００４５】本発明のチオマリノールＢを医薬として用
いる場合、常法に従って種々の形態で投与される。その
投与形態としては例えば散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル
剤、シロップ剤等の形態で経口的に、または注射剤（静
脈内、筋肉内、皮下）、点滴剤、座剤、塗布剤、軟膏剤
等の形態で非経口的に安全に投与することができる。こ
れらの各種製剤は、常法に従って主薬に賦形剤、結合
剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤、溶解補助
剤、懸濁剤、コーティング剤、希釈剤等の医薬の製剤技
術分野において通常使用しうる既知の補助剤を用いて製
剤化することができる。投与量は対象疾患、投与経路お
よび投与回数などにより異なるが、例えば成人に対して
は 1 日 20 mgから 2000 mgを、症状に応じて 1 回ま
たは数回に分けて投与するのが好ましい。When the thiomarinol B of the present invention is used as a medicine, it is administered in various forms according to a conventional method. The dosage form is, for example, orally in the form of powder, granules, tablets, capsules, syrups, etc., or injection (intravenous, intramuscular, subcutaneous), drip, suppository, coating, ointment And the like can be safely administered parenterally. These various preparations are pharmaceutical preparations such as an excipient, a binder, a disintegrating agent, a lubricant, a stabilizer, a flavoring agent, a solubilizing agent, a suspending agent, a coating agent, a diluent, etc. It is possible to formulate with auxiliary agents known in the art. The dose varies depending on the disease to be treated, the route of administration and the frequency of administration, but for example, for adults, it is preferable to administer 20 mg to 2000 mg daily in one or several divided doses depending on the symptoms.
【００４６】[0046]
【実施例】次に実施例をあげて本発明を更に具体的に説
明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。The present invention will be described in more detail with reference to the following examples, which should not be construed as limiting the invention thereto.
【００４７】実施例１．チオマリノールＢのタンク培養 Ａ）培養 アルテロモナス・ラバ SANK 73390 株を、マリンアガー
スラント（Marine Agar Slant 、Difco 社製）斜面培地
上で 22 ℃、 3 日間培養を行なった後、斜面培養物を
滅菌した人工海水 3 ml に懸濁した。滅菌した表２の組
成の培地 100mlを含む 500 ml容の三角フラスコ 2 本
に先の懸濁液を各々 0.1 ml 接種し、23 ℃、210 rpm
の条件下、24 時間回転振とう培養を行なった。別に滅
菌した同様の組成の培地 200 リットルを含む 600 リ
ットル容の通気攪拌培養槽に上記培養物全量を接種し、
次いで溶存酸素濃度を 5.0 ppm に保持するように回転
数を 82.5 〜170 rpm に調整し、23 ℃、通気量 0.5
vvm の条件下 26 時間培養した。Example 1. Thiomarinol B tank culture A) Culture Alteromonas mule SANK 73390 strain was cultivated on a marine agar slant (Marine Agar Slant, Difco) slant medium at 22 ° C for 3 days, and then the slant culture was sterilized artificially. Suspended in 3 ml of seawater. 0.1 ml of each of the above suspensions was inoculated into two 500 ml Erlenmeyer flasks containing 100 ml of the medium having the composition shown in Table 2 and sterilized at 23 ° C and 210 rpm.
Under the conditions described above, the shaking culture was performed for 24 hours. Separately, inoculate the whole amount of the above culture into a 600-liter aerated agitated culture tank containing 200 liters of a similar sterilized medium,
Next, the rotation speed was adjusted to 82.5 to 170 rpm so as to maintain the dissolved oxygen concentration at 5.0 ppm, 23 ° C, and the aeration rate was 0.5.
It was cultured for 26 hours under the condition of vvm.
【００４８】[0048]
【表２】 [Table 2]
【００４９】Ｂ）単離 得られた培養液 230 リットルは、塩酸で pH 2.5 に調
整し、アセトン 200リットルを添加、0.5 時間攪拌しな
がら抽出した。抽出液にろ過助剤としてセライト 545
（米国ジョーンズ・マンビル・プロジェクト・コーポレ
ーション製）4.0 kg を加えてろ過を行なった。そのろ
液 430 リットルは酢酸エチル 200リットルで 1 回、
さらに 100 リットルで 2 回抽出した。得られた酢酸
エチル層を 200 リットルの 5 ％重炭酸ナトリウム、
100 リットルの飽和食塩水で洗浄し、さらに無水硫酸ナ
トリウムで乾燥した後、減圧下で濃縮乾固して約 80g
の油状物が得られた。B) Isolation 230 liters of the obtained culture broth was adjusted to pH 2.5 with hydrochloric acid, added with 200 liters of acetone, and extracted with stirring for 0.5 hour. Celite 545 as a filter aid in the extract
(Manufactured by Jones Manville Project Corporation, USA) 4.0 kg was added and filtration was performed. 430 liters of the filtrate was once added with 200 liters of ethyl acetate,
It was further extracted twice with 100 liters. The resulting ethyl acetate layer was added to 200 liters of 5% sodium bicarbonate,
It was washed with 100 liters of saturated saline, dried over anhydrous sodium sulfate, and then concentrated to dryness under reduced pressure to give about 80 g.
An oily substance was obtained.
【００５０】得られた油状物をメチレンクロリドに溶解
し、シリカゲル 1.1 kg を同溶剤で充填したカラムに吸
着させ、次いでメチレンクロリド−酢酸エチル（ 1：1
）、酢酸エチル、酢酸エチル−メタノール（ 9：1 ）
と順次展開溶媒の極性を上げて溶出した。溶出液を 50
0 mlずつ分画し、酢酸エチル−メタノールで溶出したチ
オマリノールＢを含むフラクションを集め、減圧下で濃
縮乾固して油状物 60 gが得られた。The obtained oily substance was dissolved in methylene chloride, and 1.1 kg of silica gel was adsorbed on a column packed with the same solvent, and then methylene chloride-ethyl acetate (1: 1
), Ethyl acetate, ethyl acetate-methanol (9: 1)
Then, the polarity of the developing solvent was gradually increased to elute. Eluate 50
Fractions containing 0 ml each were collected, and fractions containing thiomarinol B eluted with ethyl acetate-methanol were collected and concentrated to dryness under reduced pressure to obtain 60 g of an oily substance.
【００５１】得られた油状物を 50 ％メタノール 6 リ
ットルに溶解して、ダイアイオンHP−20を水で充填した
カラム 2.3 リットルに吸着させ、次いで 30 ％メタノ
ールから 90 ％メタノールまで、順次メタノール濃度を
上げるステップワイズ・グラジエント溶出を行なった。
即ち、順に 30 ％メタノール、50 ％メタノール、60％
メタノール、70 ％メタノール、80 ％メタノールをそ
れぞれ 4 リットルづつ流し、次いで 90 ％メタノール
による溶出を行なった。HPLCによるモニターでさらなる
溶出がなくなるまで行ない、約 10 リットルを要した。
90 ％メタノール溶出画分を集めて、これを減圧下で濃
縮乾固して黄色粉末 3.8 g が得られた。この黄色粉末
はさらにセファデックス LH −20を用いてクロマトを行
なった。320 g のセファデックス LH −20をメチレンク
ロリド−酢酸エチル−メタノール(19 ：19：2)で充填し
たカラムを用い、同溶媒で展開して精製した。The obtained oily substance was dissolved in 6 liters of 50% methanol and adsorbed on 2.3 liters of a column filled with water of DIAION HP-20, and then the concentration of methanol was sequentially changed from 30% methanol to 90% methanol. An increasing stepwise gradient elution was performed.
That is, 30% methanol, 50% methanol, 60%
4 liters of methanol, 70% methanol and 80% methanol were each passed, and then elution with 90% methanol was performed. It was carried out until further elution by HPLC monitoring took about 10 liters.
Fractions eluted with 90% methanol were collected and concentrated to dryness under reduced pressure to obtain 3.8 g of a yellow powder. The yellow powder was further chromatographed on Sephadex LH-20. A column packed with 320 g of Sephadex LH-20 in methylene chloride-ethyl acetate-methanol (19: 19: 2) was developed with the same solvent for purification.
【００５２】さらに逆相カラムを用いた高速液体クロマ
トグラフィーによる精製を行なった。分離カラムとして
センシュウパックODS H −5251（カラムサイズ、φ20×
250mm, センシュウ科学（株）製）を用い、展開溶媒と
して 40 ％アセトニトリル−水を 15 ml/ 分の流速で流
し、220 nm の吸光度をモニターしながら精製した。チ
オマリノールＢは保持時間 13 〜14 分のピークとして
得られたので、これを集め、減圧下で濃縮乾固して 130
mg を単離した。Further, purification by high performance liquid chromatography using a reverse phase column was performed. Senshupack ODS H-5251 (column size, φ20 x
Using 250 mm, Senshu Kagaku Co., Ltd., 40% acetonitrile-water as a developing solvent was flowed at a flow rate of 15 ml / min to purify while monitoring the absorbance at 220 nm. Thiomalinol B was obtained as a peak with a retention time of 13 to 14 minutes, so it was collected and concentrated to dryness under reduced pressure.
mg was isolated.
【００５３】[0053]
試験例１．チオマリノールＢの抗菌作用 一般グラム陽性およびグラム陰性細菌に対するチオマリ
ノールＢの最小発育阻止濃度(MIC) は、普通寒天培地
（栄研化学（株）製）を用いた寒天培地希釈法によって
測定した。Test Example 1. Antibacterial action of thiomarinol B The minimum inhibitory concentration (MIC) of thiomarinol B against general Gram-positive and Gram-negative bacteria was measured by an agar medium dilution method using ordinary agar medium (Eiken Chemical Co., Ltd.).
【００５４】結果を表３に示す。The results are shown in Table 3.
【００５５】[0055]
【表３】 [Table 3]
【００５６】表３から明かのごとく、チオマリノールＢ
はシュードモン酸Ａに比べて一般グラム陽性および陰性
細菌に対して優れた効果を示した。As is apparent from Table 3, thiomarinol B
Showed superior effects against general Gram positive and negative bacteria compared to pseudomonic acid A.
【００５７】以上から、本発明の新規化合物チオマリノ
ールＢは抗菌作用を示し、各種細菌に対する抗菌剤とし
て有用である。From the above, the novel compound thiomarinol B of the present invention exhibits an antibacterial action and is useful as an antibacterial agent against various bacteria.
【００５８】試験例２．チオマリノ−ルＢの抗マイコプ
ラズマ菌作用 一般マイコプラズマ菌に対するチオマリノ−ルＢの最小
阻止濃度（MIC ）は、以下の測定条件下において、寒天
平板希釈法によって測定した。Test Example 2. Anti-Mycoplasma Action of Thiomalinol B The minimum inhibitory concentration (MIC) of thiomarinol B against general Mycoplasma was measured by the agar plate dilution method under the following measurement conditions.
【００５９】測定条件 接種菌量 105 CFU ／ml を 0.005 ml 接種 測定用培地：チャノック(Chanock) の培地(P.N.A.S.,48
巻、41-49頁(1962 年) 記載の培地に20 % 馬血清を添加
した培地) 培養条件 37℃、5 日間、微好気培養［BBL ガスパッ
ク(BBL GasPac(商品名、Becton Dickinson Microbiolog
y Systems 社、米国))法］ 結果を表４に示す。[0059] Measurement conditions inoculum amount 10 5 CFU / ml to 0.005 ml inoculum medium for the measurement: Medium Chanokku (Chanock) (PNAS, 48
Vol. 41-49 (1962) with 20% horse serum added) Culture conditions 37 ° C, 5 days Microaerobic culture [BBL GasPac (BBL GasPac (trade name, Becton Dickinson Microbiolog
y Systems Co., USA) method] The results are shown in Table 4.
【００６０】[0060]
【表４】 [Table 4]
【００６１】表４から明かのごとく、チオマリノ−ルＢ
は一般マイコプラズマ菌に対して優れた効果を示した。As is clear from Table 4, thiomarinol B
Showed an excellent effect on general mycoplasma.
【００６２】[0062]
【発明の効果】以上から、本発明の新規化合物チオマリ
ノ−ルＢは抗菌作用を示し、各種細菌に対する抗菌剤と
して有用である。From the above, the novel compound Thiomalinol B of the present invention exhibits an antibacterial action and is useful as an antibacterial agent against various bacteria.
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【手続補正書】[Procedure amendment]
【提出日】平成５年１２月１３日[Submission date] December 13, 1993
【手続補正１】[Procedure Amendment 1]
【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement
【補正対象項目名】全文[Correction target item name] Full text
【補正方法】変更[Correction method] Change
【補正内容】[Correction content]
【書類名】明細書[Document name] Statement
【発明の名称】新規化合物チオマリノールＢTitle: Novel compound thiomarinol B
【特許請求の範囲】[Claims]
【化１】 [Chemical 1]
【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention
【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は、抗菌活性を有する新規
化合物チオマリノールＢおよびその製法に関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a novel compound thiomarinol B having antibacterial activity and a process for producing the same.
【０００２】[0002]
【従来の技術】海水より分離したアルテロモナス(Alter
omonas) 属に属する微生物が、例えば抗腫瘍活性を有す
るビスカベリン(bisucaberin) を生産することが知られ
ている（特開昭63-27484号）。しかし、ビスカベリンは
環状ペプチド化合物である。2. Description of the Related Art Alteromonas separated from seawater
It is known that microorganisms belonging to the genus omonas) produce, for example, biscaverin having antitumor activity (Japanese Patent Laid-Open No. 63-27484). However, biscaverine is a cyclic peptide compound.
【０００３】水酸基で置換されたテトラヒドロピラン骨
格を母核とした誘導体は数多いが、中でも後述するチオ
マリノ−ルＢの推定構造に類似した構造を有する化合物
としては、例えばシュ−ドモナス・フルオレセンス（Ps
eudomonas fluorescens)が生産するシュ−ドモン酸(Pse
udomonic acid)Ａ(J.Chem.Soc.Perkin Trans.I, 294頁
(1977 年))、シュ−ドモン酸Ｂ(J.Chem.Soc.Perkin Tra
ns.I, 318 頁(1977 年))、シュ−ドモン酸Ｃ(J.Chem.So
c.Perkin Trans.I, 2、827 頁(1982 年))およびシュ−ド
モン酸Ｄ(J.Chem.Soc.Perkin Trans.I, 2、655 頁(1983
年))が知られている。しかし、これらには例えばチオマ
リノールＢの推定構造に特徴であるテトラヒドロピラン
骨格とα、β−不飽和カルボニルに挟まれたメチレンに
水酸基が存在しない。なお現在、シュ−ドモン酸Ａの 2
％軟膏（商品名、「Bactroban」、Beecham 社）が皮膚
感染症治療剤として欧米で実用に供されている。しか
し、これらシュ−ドモン酸の抗菌活性はチオマリノ−ル
Ｂより弱い。There are many derivatives having a tetrahydropyran skeleton substituted with a hydroxyl group as a mother nucleus. Among them, examples of compounds having a structure similar to the putative structure of thiomarinol B described later include Pseudomonas fluorescens ( Ps
Pseudomonate produced by eudomonas fluorescens (Pse
udomonic acid) A (J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, p. 294)
(1977)), pseudomonic acid B (J. Chem. Soc. Perkin Tra
ns.I, p. 318 (1977)), pseudomonic acid C (J. Chem. So
c.Perkin Trans.I, 2, p. 827 (1982)) and pseudomonic acid D (J. Chem. Soc. Perkin Trans.I, 2, p. 655 (1983).
Year)) is known. However, they do not have a hydroxyl group in the methylene sandwiched between the tetrahydropyran skeleton and the α, β-unsaturated carbonyl, which is characteristic of the putative structure of thiomarinol B, for example. At present, 2 of pseudomonic acid A
% Ointment (trade name, “Bactroban”, Beecham) is put to practical use in Europe and the United States as a therapeutic agent for skin infections. However, the antibacterial activity of these pseudomonic acids is weaker than that of thiomarinol B.
【０００４】また、シュ−ドモン酸の末端カルボン酸を
アミドに変換した誘導体も知られている（特開昭52−10
2279号、特開昭54−12375 号、特開昭54−90179 号、特
開昭54−103871号、特開昭54−125672号）。しかし、こ
れらの中にはチオマリノ−ルＢのような強い抗菌力、多
くのグラム陰性菌まで含む広い抗菌スペクトルを有する
ものはない。むしろ、その活性はシュ−ドモン酸より弱
くなる傾向がある。Further, a derivative in which a terminal carboxylic acid of pseudomonic acid is converted to an amide is also known (Japanese Patent Laid-Open No. 52-10).
2279, JP-A-54-12375, JP-A-54-90179, JP-A-54-103871, and JP-A-54-125672). However, none of them has a strong antibacterial activity like thiomarinol B and a broad antibacterial spectrum including many Gram-negative bacteria. Rather, its activity tends to be weaker than that of pseudomonic acid.
【０００５】チオマリノ−ルＢの推定構造上の特徴のひ
とつに、テトラヒドロピラン骨格とα、β−不飽和カル
ボニルに挟まれたメチレンに水酸基が存在する。このよ
うな水酸基を有する化合物としては唯一、海洋細菌由来
の化合物が報告されている（Am.Chem.Soc.の 200年会
（1990 年 8月 26-31日）の Abstracts of Papers、Pa
rt 2、ORGN.No.139 ）。しかしながら、この化合物の末
端のカルボニル基に結合する複素環基は２−ピペリドン
−３−イル基であり、その抗菌活性の詳細は不明であ
る。One of the putative structural features of thiomarinol B is the presence of a hydroxyl group in methylene sandwiched between the tetrahydropyran skeleton and α, β-unsaturated carbonyl. As the only compound having such a hydroxyl group, a compound derived from marine bacteria has been reported (Am. Chem. Soc. 200th Annual Meeting (August 26-31, 1990), Abstracts of Papers, Pa.
rt 2, ORGN.No.139). However, the heterocyclic group bonded to the terminal carbonyl group of this compound is a 2-piperidone-3-yl group, and the details of its antibacterial activity are unknown.
【０００６】一方、ホロシン(holothin, Helv.Chim.Act
a,42巻,563頁(1959 年))骨格を母核とした誘導体として
は、例えば放線菌の一種 Streptomyces 属より単離され
たピロシン属抗生物質としてホロマイシン(holomycin,
Helv.Chim.Acta, 42巻, 563頁(1959 年))、ピロシン(py
rrothine, J.Am.Chem.Soc., 77 巻, 2、861 頁(1955
年))、チオルチン(thiolutin, Angew.Chem., 66 巻, 74
5 頁(1954 年))、アウレオスリシン(aureothricin, J.A
m.Chem.Soc., 74 巻, 6、304 頁(1952 年))などを挙げる
ことができる。また、細菌由来の抗生物質としてゼノル
アブジン（xenorhabdin)Ｉ〜Ｖ( 特表昭59−501950号：
J.Natural Products, 54巻、 774 頁 (1991年))が単離さ
れている。しかし、これらの化合物にはチオマリノ−ル
Ｂほどの強い抗菌活性は報告されていない。On the other hand, holothin, Helv.Chim.Act
a, 42, 563 (1959)) As a derivative having a skeleton as a mother nucleus, for example, as a pyrocin antibiotic isolated from Streptomyces sp.
Helv.Chim.Acta, 42, 563 (1959)), Pyrosin (py
rrothine, J. Am. Chem. Soc., 77, 2, 861 (1955
)), Thiolutin, Angew.Chem., 66, 74
5 (1954)), aureothricin, JA
m.Chem.Soc., 74, 6, 304 (1952)). In addition, as a bacterial-derived antibiotic, xenorhabdin I to V (Table 59-501950:
J. Natural Products, 54, 774 (1991)) has been isolated. However, these compounds have not been reported to have a stronger antibacterial activity than thiomarinol B.
【０００７】[0007]
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、海水よ
り分離したアルテロモナス (Alteromonas)属に属するSA
NK 73390株の培養物から、抗菌作用を有する新規化合物
チオマリノ−ルＢが生産されることを見出して本発明を
完成した。DISCLOSURE OF THE INVENTION The present inventors have found that SA belonging to the genus Alteromonas isolated from seawater.
The present invention has been completed by discovering that a novel compound thiomarinol B having an antibacterial action is produced from a culture of strain NK 73390.
【０００８】[0008]
【課題を解決するための手段】本発明の新規化合物チオ
マリノールＢは下記の構造式を有する。The novel compound thiomarinol B of the present invention has the following structural formula.
【０００９】[0009]
【化２】 [Chemical 2]
【００１０】本発明の新規化合物チオマリノールＢは下
記の性状を有する。 （１）物質の性状：黄色粉末 （２）分子式：C30 H44 N2 O11 S2 （３）分子量：672(FAB-MS法により測定） （４）高分解能質量分析：C30H45N2O11S2[(M+H)+ ; FAB
-MS 法により測定］ 実測値 673.2468 計算値673.2465 （５）元素分析値：（％）（但し、C30H44N2O11S2 ＋ H
2Oとして） 実測値 C 52.34, H 6.79, N 3.92, S 9.02 計算値 C 52.16, H 6.71, N 4.06, S 9.28 （６）赤外線吸収スペクトル：νmax cm-1 臭化カリウム(KBr) 錠剤法で測定した赤外線吸収スペク
トルは、次に示す通りである。3660, 3503, 3318, 307
5, 2966, 2928, 2870, 1704, 1653, 1509,1467, 1381,
1349, 1299, 1217, 1199, 1152, 1112, 1063, 1047,101
9, 975, 949, 884, 839, 764, 730, 660, 609,
553。The novel compound thiomarinol B of the present invention has the following properties. (1) Property of substance: yellow powder (2) Molecular formula: C 30 H 44 N 2 O 11 S 2 (3) Molecular weight: 672 (measured by FAB-MS method) (4) High resolution mass spectrometry: C 30 H 45 N 2 O 11 S 2 [(M + H) + ; FAB
-Measured by MS method] Measured value 673.2468 Calculated value 673.2465 (5) Elemental analysis value: (%) (however, C 30 H 44 N 2 O 11 S 2 + H
2 O) Actual value C 52.34, H 6.79, N 3.92, S 9.02 Calculated value C 52.16, H 6.71, N 4.06, S 9.28 (6) Infrared absorption spectrum: ν max cm -1 Potassium bromide (KBr) Tablet method The infrared absorption spectrum measured by is as shown below. 3660, 3503, 3318, 307
5, 2966, 2928, 2870, 1704, 1653, 1509, 1467, 1381,
1349, 1299, 1217, 1199, 1152, 1112, 1063, 1047, 101
9, 975, 949, 884, 839, 764, 730, 660, 609,
553.
【００１１】（７）紫外線吸収スペクトル：λmax nm
(ε) １−プロパノール中で測定した紫外線吸収スペクトル
は、次に示す通りである。 377(2,900), 301(13,000), 215(21,000) １−プロパノール＋塩酸中で測定した紫外線吸収スペク
トルは、次に示す通りである。 377(2,900), 301(13,000), 223(17,000) １−プロパノール＋水酸化ナトリウム中で測定した紫外
線吸収スペクトルは、次に示す通りである。 377(2,900), 301(13,000), 221(19,000)。(7) Ultraviolet absorption spectrum: λ max nm
The ultraviolet absorption spectrum measured in (ε) 1-propanol is as shown below. The ultraviolet absorption spectra measured in 377 (2,900), 301 (13,000), 215 (21,000) 1-propanol + hydrochloric acid are as shown below. The ultraviolet absorption spectrum measured in 377 (2,900), 301 (13,000), 223 (17,000) 1-propanol + sodium hydroxide is as shown below. 377 (2,900), 301 (13,000), 221 (19,000).
【００１２】（８）比旋光度： [α]D 25＝＋ 7.7°（ｃ
＝1.0, １−プロパノール） （９）高速液体クロマトグラフィー： 分離カラム；センシュウパック ODS H-2151 （カラムサ
イズ、φ 6×150 mm, センシュウ科学（株）製） 溶媒；40 ％アセトニトリル−水 流速；1.5 ml／分 保持時間； 8.4分 （１０）1H−核磁気共鳴スペクトル：（δ：ppm) 重ジメチルスルホキシド中、内部基準にテトラメチルシ
ランを使用して測定した核磁気共鳴スペクトル(360 MH
z) は、次に示す通りである。11.28(1H,s(br)), 10.47
(1H,s), 7.23(1H,s), 5.97(1H,s),5.37(2H,m), 4.88(1
H,d,J=7.5Hz), 4.61(1H,s(br)),4.43(1H,d,J=7.2Hz),
4.28(1H,d,J=3.6Hz), 4.18(1H,d,J=7.2Hz),4.02(2H,t,J
=6.6Hz), 3.74(1H,s(br)), 3.64(1H),3.61(1H),3.54(1
H), 3.51(1H), 3.35(1H,d,J=10.9Hz), 2.43(2H,t,J=7.
3Hz),2.12(1H), 2.09(1H), 2.03(1H), 2.02(3H,s), 1.
61(1H), 1.58(2H),1.50(2H), 1.32(2H), 1.30(2H), 1.
25(2H), 0.96(3H,d,J=6.3Hz),0.92(3H,d,J=6.9Hz)。(8) Specific optical rotation: [α] D 25 = + 7.7 ° (c
= 1.0, 1-propanol) (9) High-performance liquid chromatography: Separation column; Senshupack ODS H-2151 (column size, φ 6 x 150 mm, manufactured by Senshu Kagaku Co., Ltd.) Solvent: 40% acetonitrile-water Flow rate; 1.5 ml / min Retention time; 8.4 min (10) 1 H-nuclear magnetic resonance spectrum: (δ: ppm) Nuclear magnetic resonance spectrum (360 MH) measured using tetramethylsilane as an internal standard in deuterated dimethyl sulfoxide.
z) is as shown below. 11.28 (1H, s (br)), 10.47
(1H, s), 7.23 (1H, s), 5.97 (1H, s), 5.37 (2H, m), 4.88 (1
H, d, J = 7.5Hz), 4.61 (1H, s (br)), 4.43 (1H, d, J = 7.2Hz),
4.28 (1H, d, J = 3.6Hz), 4.18 (1H, d, J = 7.2Hz), 4.02 (2H, t, J
= 6.6Hz), 3.74 (1H, s (br)), 3.64 (1H), 3.61 (1H), 3.54 (1
H), 3.51 (1H), 3.35 (1H, d, J = 10.9Hz), 2.43 (2H, t, J = 7.
3Hz), 2.12 (1H), 2.09 (1H), 2.03 (1H), 2.02 (3H, s), 1.
61 (1H), 1.58 (2H), 1.50 (2H), 1.32 (2H), 1.30 (2H), 1.
25 (2H), 0.96 (3H, d, J = 6.3Hz), 0.92 (3H, d, J = 6.9Hz).
【００１３】（１１）13C −核磁気共鳴スペクトル：
（δ：ppm) 重ジメチルスルホキシド中、内部基準にテトラメチルシ
ランを使用して測定した核磁気共鳴スペクトル（90MHz)
は、次に示す通りである。173.5(s), 166.1(s), 165.
7(s), 160.8(s), 143.2(s), 134.2(d),127.8(d), 1
23.3(s), 115.2(s), 114.4(d), 109.4(d), 76.2
(d),72.4(d), 69.6(d), 69.3(d), 64.3( t), 6
3.9(d), 63.0(t),43.2(d), 42.2(d), 34.7(t),
31.9(t), 28.3(t), 28.2(t),28.1(t), 25.3(t),
24.5(t), 20.0(q), 15.7(q), 15.6(q)。(11) 13 C-nuclear magnetic resonance spectrum:
(Δ: ppm) Nuclear magnetic resonance spectrum (90MHz) measured using tetramethylsilane as an internal standard in deuterated dimethyl sulfoxide.
Is as shown below. 173.5 (s), 166.1 (s), 165.
7 (s), 160.8 (s), 143.2 (s), 134.2 (d), 127.8 (d), 1
23.3 (s), 115.2 (s), 114.4 (d), 109.4 (d), 76.2
(d), 72.4 (d), 69.6 (d), 69.3 (d), 64.3 (t), 6
3.9 (d), 63.0 (t), 43.2 (d), 42.2 (d), 34.7 (t),
31.9 (t), 28.3 (t), 28.2 (t), 28.1 (t), 25.3 (t),
24.5 (t), 20.0 (q), 15.7 (q), 15.6 (q).
【００１４】（１２）溶解性：メタノール、エタノー
ル、プロパノール、ブタノール等のアルコール類、ジメ
チルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、クロロホル
ム、酢酸エチル、アセトン、エチルエーテルに可溶。ｎ
−ヘキサン、水に不溶。(12) Solubility: Soluble in alcohols such as methanol, ethanol, propanol and butanol, dimethyl sulfoxide, dimethylformamide, chloroform, ethyl acetate, acetone and ethyl ether. n
-Insoluble in hexane and water.
【００１５】（１３）薄層クロマトグラフィー： Rf値 ； 0.52 吸着剤 ；シリカゲル（メルク社製、Art. 5715) 展開溶剤；メチレンクロリド：メタノール＝85：15。(13) Thin layer chromatography: R f value; 0.52 adsorbent; silica gel (Merck, Art. 5715) developing solvent; methylene chloride: methanol = 85: 15.
【００１６】本発明のチオマリノールＢはいくつかの不
斉炭素原子およびいくつかの二重結合を有する。特に
α，β−不飽和カルボニル部分は異性化される可能性が
ある。それ故、種々の立体および幾何異性体が存在す
る。本発明においては、これらの異性体がすべて単一の
式で示されている。従って、本発明においては、ラセミ
化合物を含むこれらの異性体およびこれらの異性体の混
合物をもすべて含むものである。The thiomarinol B of the present invention has some asymmetric carbon atoms and some double bonds. In particular, the α, β-unsaturated carbonyl moiety may be isomerized. Therefore, various stereo and geometric isomers exist. In the present invention, all of these isomers are represented by a single formula. Therefore, in the present invention, all of these isomers including a racemate and a mixture of these isomers are also included.
【００１７】本発明は、また、アルテロモナス属に属す
るチオマリノールＢ生産菌を培養し、その培養物よりチ
オマリノールＢを採取することを特徴とするチオマリノ
ールＢの製造法に関し、さらに詳しくは、上記のアルテ
ロモナス属に属するチオマリノールＢ生産菌がアルテロ
モナス・ラバ(Alteromonas rava)SANK 73390株である、
該製造法に関する。The present invention also relates to a method for producing thiomarinol B, which comprises culturing a thiomarinol B-producing bacterium belonging to the genus Alteromonas, and collecting thiomarinol B from the culture. More specifically, the above-mentioned genus Alteromonas A thiomarinol B producing bacterium belonging to the category: Alteromonas rava SANK 73390 strain,
It relates to the production method.
【００１８】本発明の、チオマリノールＢを生産する上
記 SANK 73390 株は静岡県南伊豆町小稲の海岸で採取し
た海水から常法により分離した海洋細菌である。The SANK 73390 strain producing thiomarinol B of the present invention is a marine bacterium isolated from seawater collected on the coast of Odaine, Minamiizu Town, Shizuoka Prefecture by a conventional method.
【００１９】チオマリノールＢの生産菌であるSANK 733
90株の菌学的性状は次の通りである。SANK 733, a thiomarinol B producing bacterium
The bacteriological properties of 90 strains are as follows.
【００２０】１．形態学的性状 マリンアガー(Difco 社製）上で 23 ℃、24 時間培養
後の観察では、細胞は直径 0.8−1.0 μm 、長さ 2.0−
3.6 μm の桿状であり、単極毛を有し、運動する。胞子
を形成せず、グラム染色は陰性である。1. Morphological properties The cells were observed to have a diameter of 0.8-1.0 μm and a length of 2.0-
It has a rod shape of 3.6 μm, has monopolar hairs, and moves. It does not sporulate and Gram stain is negative.
【００２１】２．マリンアガー培養上での生育状態 23℃で 24 時間培養したコロニーは幾分灰色を帯びた黄
色、不透明で円形、扁平状、全縁である。水溶性の色素
を生成しない。2. Growth on marine agar culture Colonies cultured for 24 hours at 23 ° C are slightly grayish yellow, opaque, round, flat, and full-edged. Does not form water soluble dyes.
【００２２】３．生理学的性状 （１）海水の要求性：生育に海水を要求する。 （２）Ｏ−Ｆ（オキシダティブ−ファーメンタティブ）
テスト［ヒュー・レイフソン（Hugh・Leifson) 法 (J.Ba
ct.,66巻、24−26頁(1953 年))、人工海水で調製］：糖
を分解しない。 （３）オキシダーゼ：＋ （４）カタラーゼ：＋ （５）酸素に対する態度：好気的。 （６）硝酸塩の還元：− （７）デンプンの加水分解：＋ （８）寒天の分解：− （９）ゼラチンの液化：＋ （１０）ＤＮａｓｅの産生：＋ （１１）リパーゼの産生：＋ （１２）生育温度：4 ℃では微弱に生育し、17−26 ℃
では良好な生育を示す。35 ℃では生育しない。 （１３）栄養要求性：ジャーナル・オブ・バクテリオロ
ジー(Journal of Bacteriology) 、107 巻、 268−294
頁（1971年）記載の基本培地を用いた場合、ビタミンフ
リーのカザミノ酸を要求する。 （１４）炭素化合物の利用性：ジャーナル・オブ・バク
テリオロジー（Journalof Bacteriology)、107 巻、 26
8−294 頁（1971年）記載の基本培地にビタミンフリー
のカザミノ酸を 0.1 ％濃度添加し、振盪培養を行なっ
た場合。3. Physiological properties (1) Seawater requirement: Seawater is required for growth. (2) OF (oxidative-fermentative)
Test [Hugh Leifson Method (J.Ba
ct., 66, pages 24-26 (1953)), prepared with artificial seawater]: Does not decompose sugar. (3) Oxidase: + (4) Catalase: + (5) Attitude toward oxygen: aerobic. (6) Reduction of nitrate:-(7) Hydrolysis of starch: + (8) Decomposition of agar:-(9) Liquefaction of gelatin: + (10) Production of DNase: + (11) Production of lipase: + ( 12) Growth temperature: Grows slightly at 4 ℃, 17-26 ℃
Shows good growth. Does not grow at 35 ° C. (13) Nutritional requirements: Journal of Bacteriology, Volume 107, 268-294.
When the basal medium described on page (1971) is used, vitamin-free casamino acid is required. (14) Availability of carbon compounds: Journal of Bacteriology, Volume 107, 26
When shake-cultured by adding 0.1% of vitamin-free casamino acid to the basic medium described on page 8-294 (1971).
【００２３】[0023]
【表１】 [Table 1]
【００２４】４．化学分類学的性状 （１）ＤＮＡのＧ＋Ｃ（グアニン＋シトシン含量）：
43.4 ％（HPLC法）。 （２）キノン系：ユビキノンＱ−８。4. Chemical taxonomic properties (1) G + C (guanine + cytosine content) of DNA:
43.4% (HPLC method). (2) Quinone type: Ubiquinone Q-8.
【００２５】以上の菌学的性状を有する SANK 73390 株
はバージーズ・マニュアル・オブ・システマティック・
バクテリオロジー（Bergey's Manual of Systematic Ba
cteriology) 、１巻 (1984年）および最新のインターナ
ショナル・ジャーナル・オブ・システマティック・バク
テリオロジー（International Journal of Systematic
Bacteriology) に記載の種と照合すると、海洋細菌のア
ルテロモナス・サイトレア(Alteromonas citrea)に類似
した菌と推定された。但し、本菌はアルテロモナス・サ
イトレア(Alteromonas citrea)の基準株 ATCC 29719 株
との比較培養を行なったところ、本菌のコロニーの色調
がいくぶん灰色を帯びた黄色であるのに対し、ATCC 297
19 株は緑色を帯びた黄色であり、SANK 73390 株は 4
℃で生育し、トレハロースとプロピオン酸ソーダを炭
素源として利用する点でアルテロモナス・サイトレア(A
lteromonas citrea)と異なっている。それ故、本発明者
らは本菌をアルテロモナス属に属する新種であると確認
し、アルテロモナス属・ラバ種（Alteromonas rava) と
命名し、新菌株をアルテロモナス・ラバ・SANK 73390
(Alteromonaas rava SANK 73390) 株と命名した。The SANK 73390 strain having the above-mentioned mycological properties is a Vergi's Manual of Systematic
Bacteriology (Bergey's Manual of Systematic Ba
cteriology, Volume 1 (1984) and the latest International Journal of Systematic.
Bacteriology), it was presumed to be similar to the marine bacterium Alteromonas citrea. However, when this bacterium was subjected to comparative culture with the reference strain ATCC 29719 strain of Alteromonas citrea, the color tone of the colony of this bacterium was somewhat grayish yellow, whereas ATCC 297
19 strains are greenish-yellow and SANK 73390 strains are 4
It grows at ℃ and uses trehalose and sodium propionate as carbon sources.
lteromonas citrea). Therefore, the present inventors have confirmed that the bacterium is a new species belonging to the genus Alteromonas, and named it Alteromonas rava (Alteromonas rava), and designated the new strain as Alteromonas rava SANK 73390.
(Alteromonaas rava SANK 73390) strain.
【００２６】本菌株は、アルテロモナス・ラバ・SANK 7
3390 (Alteromonas rava SANK 73390) 株としてブダペ
スト条約に従って通商産業省工業技術院微生物工業技術
研究所（1993年 1月 1日より「通商産業省工業技術院生
命工学工業技術研究所」と改称）に国際寄託されている
（寄託番号、微工研条寄第 3381 号(FERM BP-3381)：原
寄託日、1991年 4月 30 日）。This strain is Alteromonas mule SANK 7
Internationally recognized as 3390 (Alteromonas rava SANK 73390) strain according to the Budapest Treaty according to the Ministry of International Trade and Industry, Institute of Microbiology and Industrial Technology (renamed from January 1, 1993 as the "Ministry of International Trade and Industry, Institute of Biotechnology and Industrial Technology") It has been deposited (deposit number, NIED 3381 (FERM BP-3381): original deposit date, April 30, 1991).
【００２７】以上、SANK 73390 株について説明した
が、周知の如くアルテロモナス属の菌類の諸性質は一定
したものではなく、自然的、または人工的な操作（例え
ば、紫外線照射、放射線照射、化学薬品処理等）によ
り、変異を起こし易く、本発明のSANK 73390 株もこの
点は同じである。本発明にいう SANK 73390 株はそのす
べての変異株を包含する。また、これらの変異株の中に
は、遺伝学的方法、例えば、組換え、形質導入、形質転
換等により得られたものも包含される。即ち、アルテロ
モナス属に属するチオマリノールＢを生産する、SANK 7
3390株、その変異株およびそれらと明確に区別されない
菌株は、すべてSANK 73390株に包含されるものである。The SANK 73390 strain has been described above. However, as is well known, the properties of fungi of the genus Alteromonas are not constant, and natural or artificial operations (for example, ultraviolet irradiation, irradiation, chemical treatment) are performed. Etc.), and the SANK 73390 strain of the present invention is the same in this respect. The SANK 73390 strain referred to in the present invention includes all mutants thereof. Moreover, these mutants also include those obtained by genetic methods such as recombination, transduction, transformation and the like. That is, SANK 7 which produces thiomarinol B belonging to the genus Alteromonas
The 3390 strain, its mutant strains, and strains not clearly distinguished from them are all included in the SANK 73390 strain.
【００２８】本発明の新規化合物チオマリノールＢを得
るため、これらの微生物の培養は他の醗酵生成物を生産
するために用いられるような培地中で行なわれる。この
ような培地中には、微生物が資化できる炭素源、窒素源
および無機塩を含有する。To obtain the novel compound thiomarinol B of the present invention, the cultivation of these microorganisms is carried out in a medium as used for producing other fermentation products. Such a medium contains a carbon source, a nitrogen source and an inorganic salt that can be assimilated by microorganisms.
【００２９】一般に、炭素源としてグルコース、フラク
トース、マルトース、シュークロース、マンニトール、
グリセロール、デキストリン、オート麦、ライ麦、トウ
モロコシデンプン、ジャガイモ、トウモロコシ粉、大豆
粉、綿実油、糖蜜、クエン酸、酒石酸等を単一に、ある
いは併用して用いることが出来る。一般には、培地量の
1−10 重量％で変量する。Generally, carbon, glucose, fructose, maltose, sucrose, mannitol,
Glycerol, dextrin, oats, rye, corn starch, potato, corn flour, soy flour, cottonseed oil, molasses, citric acid, tartaric acid and the like can be used alone or in combination. Generally,
The amount varies from 1 to 10% by weight.
【００３０】窒素源としては、一般に蛋白質を含有する
物質を醗酵工程に用いる。適当な窒素源としては、大豆
粉、フスマ、落花生粉、綿実粉、カゼイン加水分解物、
ファーマミン、魚粉、コーンスチープリカー、ペプト
ン、肉エキス、イースト、イーストエキス、マルトエキ
ス等の動物系、植物系またはエキス類の窒素源、硝酸ナ
トリウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム等の無
機窒素源である。窒素源は、単一または併用して培地量
の 0.1−6 重量％の範囲で用いる。As the nitrogen source, a substance containing a protein is generally used in the fermentation process. Suitable nitrogen sources include soybean flour, bran, peanut flour, cottonseed flour, casein hydrolyzate,
It is a nitrogen source for animal systems such as pharmamin, fish meal, corn steep liquor, peptone, meat extract, yeast, yeast extract, and malt extract, plant systems or extracts, and inorganic nitrogen sources such as sodium nitrate, ammonium nitrate, and ammonium sulfate. The nitrogen sources are used alone or in combination in the range of 0.1-6% by weight of the medium amount.
【００３１】培地中に取り入れる栄養無機塩は、ナトリ
ウム、アンモニウム、カルシウム、カリウム、マグネシ
ウム、鉄、フォスフェート、サルフェート、クロライ
ド、カーボネート等のイオンを得ることのできる通常の
塩類である。また、コバルト、マンガン、ストロンチウ
ム等の微量の金属、その他ブロマイド、フルオライド、
ボレート、シリケート等の微量イオンを得る塩も含む。The nutrient inorganic salts to be incorporated in the medium are usual salts capable of obtaining ions such as sodium, ammonium, calcium, potassium, magnesium, iron, phosphate, sulfate, chloride and carbonate. In addition, trace amounts of metals such as cobalt, manganese, and strontium, other bromides, fluorides,
Also included are salts for obtaining trace ions such as borates and silicates.
【００３２】液体培養に際しては、消泡剤としてシリコ
ン油、植物油、界面活性剤等が使用される。In liquid culture, silicone oil, vegetable oil, surfactant or the like is used as an antifoaming agent.
【００３３】アルテロモナス・ラバ(Alteromonas rava)
SANK 73390 株を培養しチオマリノールＢを生産する培
地の pH は、5.0 −8.0 に変化させることが出来る。Alteromonas rava
The pH of the medium for culturing SANK 73390 strain and producing thiomarinol B can be changed to 5.0-8.0.
【００３４】菌の生育温度は 4 ℃から 32 ℃までであ
るが 17 ℃から 26 ℃の範囲が生育良好であり、更にチ
オマリノールＢの生産には、20 ℃ から 26 ℃ が好
適である。The growth temperature of the bacterium is 4 ° C. to 32 ° C., but the growth is good in the range of 17 ° C. to 26 ° C. Further, for the production of thiomarinol B, 20 ° C. to 26 ° C. is suitable.
【００３５】チオマリノールＢは、好気的に培養して得
られるが通常用いられる好気的培養法、例えば固体培養
法、振盪培養法、通気攪拌培養法等が用いられる。Thiomalinol B is obtained by aerobically culturing, but the aerobic culturing method usually used, for example, the solid culturing method, the shaking culturing method, the aeration and stirring culturing method, etc. are used.
【００３６】小規模な培養においては、20 ℃ から 2
6 ℃ で数日間振盪培養を行なうのが良好である。For small-scale culture, 20 ° C to 2 ° C
It is best to perform shaking culture at 6 ° C for several days.
【００３７】培養は三角フラスコ中で、１−２段階の種
の発育工程により開始する。種発育段階の培地は、炭素
源および窒素源を併用できる。種フラスコは定温インキ
ュベーター中で 23 ℃、1 乃至 3 日間振盪するか、ま
たは充分に成長するまで振盪する。成長した種は第二の
種培地、または生産培地に接種するのに用いる。中間の
発育工程を用いる場合には、本質的に同様の方法で成長
させ、生産培地に接触するためにそれを部分的に用い
る。接種したフラスコを一定温度で 1 乃至 3日間、ま
たは生産量が最大に達するまで振盪し、インキュベーシ
ョンが終わったらフラスコの含有物を遠心分離またはろ
過する。The culture is started in an Erlenmeyer flask by 1-2 stages of seed development. The seed developing medium can use a carbon source and a nitrogen source in combination. The seed flask is shaken in a constant temperature incubator at 23 ° C for 1 to 3 days or until it grows sufficiently. The grown seed is used to inoculate a second seed medium, or production medium. If an intermediate development step is used, it is grown in essentially the same way and partially used to contact the production medium. Shake the inoculated flask at constant temperature for 1-3 days, or until maximum production is reached, and at the end of the incubation centrifuge or filter the contents of the flask.
【００３８】大量培養の場合には、攪拌機、通気装置を
付けた適当なタンクで培養するのが好ましい。この方法
によれば、栄養培地をタンクの中で作成できる。栄養培
地を125 ℃ まで加熱して滅菌し、冷却後、滅菌培地に
あらかじめ成長させてあった種を接種する。培養は 20
℃乃至 26 ℃で通気攪拌して行う。この方法は、多量の
化合物を得るのに適している。培養の経過に伴って生産
されるチオマリノールＢの量の経時変化は、高速液体ク
ロマトグラフィーを用いて測定することが出来る。通常
は、１９時間から２００時間の培養でチオマリノールＢ
の生産量は最高値に達する。In the case of large-scale culture, it is preferable to culture in a suitable tank equipped with a stirrer and an aeration device. According to this method, the nutrient medium can be prepared in the tank. Sterilize the nutrient medium by heating to 125 ° C, cool, and inoculate the sterile medium with pre-grown seeds. Culture is 20
Perform by aeration stirring at ℃ to 26 ℃. This method is suitable for obtaining large amounts of compounds. The time-dependent change in the amount of thiomarinol B produced with the progress of culture can be measured using high performance liquid chromatography. Usually, thiomarinol B is used for 19 to 200 hours of culture.
Production reaches the highest level.
【００３９】培養終了後、培養液中の液体部分及び菌体
内に生存するチオマリノールＢは、菌体、その他の固形
部分を珪藻土をろ過助剤とする、ろ過操作または遠心分
離によって分別し、そのろ液または上清中および菌体中
に存在するチオマリノールＢを、その物理化学的性状を
利用し抽出精製することにより得られる。例えば、ろ液
または、上清中に存在するチオマリノールＢは、中性ま
たは酸性 pH 条件下で水と混和しない有機溶剤、例えば
酢酸エチル、クロロホルム、塩化エチレン、塩化メチレ
ン等の単独または、それらの組み合わせにより抽出精製
することができる。あるいは吸着剤として、例えば活性
炭または吸着用樹脂であるアンバーライトXAD −2 、XA
D −4 （ローム・アンド・ハース社製）等や、ダイアイ
オン HP−10、HP−20、 CHP−20、HP−50（三菱化成
（株）製）等が使用される。チオマリノールＢを含む液
を上記のごとき吸着剤の層を通過させて不純物を吸着さ
せて取り除くか、またはチオマリノールＢを吸着させた
後、メタノール水、アセトン水、ｎ−ブタノール水など
を用いて溶出させることにより得られる。また、菌体内
に存在するチオマリノールＢは、50−90 ％含水アセト
ンまたは含水メタノールにより抽出し有機溶剤を除去し
た後、ろ液と同様な抽出精製操作を行なうことにより得
られる。After the completion of the culture, thiomarinol B which survives in the liquid portion of the culture medium and the cells is separated from the cells and other solid portions by a filtration operation or centrifugation using diatomaceous earth as a filter aid. It can be obtained by extracting and purifying thiomarinol B existing in the liquid or supernatant and in the bacterial cells by utilizing its physicochemical properties. For example, thiomarinol B present in the filtrate or supernatant may be an organic solvent immiscible with water under neutral or acidic pH conditions such as ethyl acetate, chloroform, ethylene chloride, methylene chloride, etc., alone or in combination. Can be used for extraction and purification. Alternatively, as the adsorbent, for example, activated carbon or adsorption resin Amberlite XAD-2, XA
D-4 (manufactured by Rohm and Haas Co.) or the like, Diaion HP-10, HP-20, CHP-20, HP-50 (manufactured by Mitsubishi Kasei Co., Ltd.) and the like are used. The liquid containing thiomarinol B is passed through the layer of the adsorbent as described above to remove impurities by adsorption, or thiomarinol B is adsorbed and then eluted with methanol water, acetone water, n-butanol water or the like. It is obtained by The thiomarinol B existing in the cells can be obtained by extracting with 50-90% hydrous acetone or hydrous methanol to remove the organic solvent, and then performing the same extraction and purification procedure as for the filtrate.
【００４０】このようにして得られたチオマリノールＢ
は、更にシリカゲル、マグネシウム−シリカゲル系のフ
ロリジルのような担体を用いた吸着カラムクロマトグラ
フィー、セファデックスLH−20（ファルマシア社製）等
を用いた分配カラムクロマトグラフィー、および順相、
逆相カラムを用いた高速液体クロマトグラフィー等で精
製することができる。以上の分離、精製の手段を単独ま
たは適宜組み合わせ反復して用いることによりチオマリ
ノールＢを分離精製することができる。Thiomalinol B thus obtained
Further, silica gel, adsorption column chromatography using a carrier such as magnesium-silica gel florisil, partition column chromatography using Sephadex LH-20 (Pharmacia), and normal phase,
It can be purified by high performance liquid chromatography or the like using a reverse phase column. Thiomalinol B can be separated and purified by using the above separating and purifying means alone or in combination as appropriate.
【００４１】[0041]
【作用】本発明のチオマリノールＢは、文献未載の新規
化合物であり、動物（例、ヒト、イヌ、ネコ、ウサギ
等）において、グラム陽性細菌およびグラム陰性細菌に
対し抗菌作用を示すことから、各種細菌感染症を対照と
する抗菌剤として有用である。The thiomarinol B of the present invention is a novel compound that has not been published in the literature and exhibits an antibacterial action against Gram-positive and Gram-negative bacteria in animals (eg, humans, dogs, cats, rabbits, etc.), It is useful as an antibacterial agent against various bacterial infections.
【００４２】本発明のチオマリノールＢを医薬として用
いる場合、常法に従って種々の形態で投与される。その
投与形態としては例えば散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル
剤、シロップ剤等の形態で経口的に、または注射剤（静
脈内、筋肉内、皮下）、点滴剤、座剤、塗布剤、軟膏剤
等の形態で非経口的に安全に投与することができる。こ
れらの各種製剤は、常法に従って主薬に賦形剤、結合
剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤、溶解補助
剤、懸濁剤、コーティング剤、希釈剤等の医薬の製剤技
術分野において通常使用しうる既知の補助剤を用いて製
剤化することができる。投与量は対象疾患、投与経路お
よび投与回数などにより異なるが、例えば成人に対して
は 1 日 20 mgから 2000 mgを、症状に応じて 1 回ま
たは数回に分けて投与するのが好ましい。When the thiomarinol B of the present invention is used as a medicine, it is administered in various forms according to a conventional method. The dosage form is, for example, orally in the form of powder, granules, tablets, capsules, syrups, etc., or injection (intravenous, intramuscular, subcutaneous), drip, suppository, coating, ointment And the like can be safely administered parenterally. These various preparations are pharmaceutical preparations such as an excipient, a binder, a disintegrating agent, a lubricant, a stabilizer, a flavoring agent, a solubilizing agent, a suspending agent, a coating agent, a diluent, etc. It is possible to formulate with auxiliary agents known in the art. The dose varies depending on the disease to be treated, the route of administration and the frequency of administration, but for example, for adults, it is preferable to administer 20 mg to 2000 mg daily in one or several divided doses depending on the symptoms.
【００４３】[0043]
【実施例】次に実施例をあげて本発明を更に具体的に説
明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。The present invention will be described in more detail with reference to the following examples, which should not be construed as limiting the invention thereto.
【００４４】実施例１．チオマリノールＢのタンク培養 Ａ）培養 アルテロモナス・ラバ SANK 73390 株を、マリンアガー
スラント（Marine Agar Slant 、Difco 社製）斜面培地
上で 22 ℃、 3 日間培養を行なった後、斜面培養物を
滅菌した人工海水 3 ml に懸濁した。滅菌した表２の組
成の培地 100mlを含む 500 ml容の三角フラスコ 2 本
に先の懸濁液を各々 0.1 ml 接種し、23 ℃、210 rpm
の条件下、24 時間回転振とう培養を行なった。別に滅
菌した同様の組成の培地 200 リットルを含む 600 リ
ットル容の通気攪拌培養槽に上記培養物全量を接種し、
次いで溶存酸素濃度を 5.0 ppm に保持するように回転
数を 82.5 〜170 rpm に調整し、23 ℃、通気量 0.5
vvm の条件下 26 時間培養した。Example 1. Thiomarinol B tank culture A) Culture Alteromonas mule SANK 73390 strain was cultivated on a marine agar slant (Marine Agar Slant, Difco) slant medium at 22 ° C for 3 days, and then the slant culture was sterilized artificially. Suspended in 3 ml of seawater. 0.1 ml of each of the above suspensions was inoculated into two 500 ml Erlenmeyer flasks containing 100 ml of the medium having the composition shown in Table 2 and sterilized at 23 ° C and 210 rpm.
Under the conditions described above, the shaking culture was performed for 24 hours. Separately, inoculate the whole amount of the above culture into a 600-liter aerated agitated culture tank containing 200 liters of a similar sterilized medium,
Next, the rotation speed was adjusted to 82.5 to 170 rpm so as to maintain the dissolved oxygen concentration at 5.0 ppm, 23 ° C, and the aeration rate was 0.5.
It was cultured for 26 hours under the condition of vvm.
【００４５】[0045]
【表２】 [Table 2]
【００４６】Ｂ）単離 得られた培養液 230 リットルは、塩酸で pH 2.5 に調
整し、アセトン 200リットルを添加、0.5 時間攪拌しな
がら抽出した。抽出液にろ過助剤としてセライト 545
（米国ジョーンズ・マンビル・プロジェクト・コーポレ
ーション製）4.0 kg を加えてろ過を行なった。そのろ
液 430 リットルは酢酸エチル 200リットルで 1 回、
さらに 100 リットルで 2 回抽出した。得られた酢酸
エチル層を 200 リットルの 5 ％重炭酸ナトリウム、
100 リットルの飽和食塩水で洗浄し、さらに無水硫酸ナ
トリウムで乾燥した後、減圧下で濃縮乾固して約 80g
の油状物が得られた。B) Isolation 230 liters of the obtained culture broth was adjusted to pH 2.5 with hydrochloric acid, added with 200 liters of acetone, and extracted with stirring for 0.5 hours. Celite 545 as a filter aid in the extract
(Manufactured by Jones Manville Project Corporation, USA) 4.0 kg was added and filtration was performed. 430 liters of the filtrate was once added with 200 liters of ethyl acetate,
It was further extracted twice with 100 liters. The resulting ethyl acetate layer was added to 200 liters of 5% sodium bicarbonate,
It was washed with 100 liters of saturated saline, dried over anhydrous sodium sulfate, and then concentrated to dryness under reduced pressure to give about 80 g.
An oily substance was obtained.
【００４７】得られた油状物をメチレンクロリドに溶解
し、シリカゲル 1.1 kg を同溶剤で充填したカラムに吸
着させ、次いでメチレンクロリド−酢酸エチル（ 1：1
）、酢酸エチル、酢酸エチル−メタノール（ 9：1 ）
と順次展開溶媒の極性を上げて溶出した。溶出液を 50
0 mlずつ分画し、酢酸エチル−メタノールで溶出したチ
オマリノールＢを含むフラクションを集め、減圧下で濃
縮乾固して油状物 60 gが得られた。The obtained oily substance was dissolved in methylene chloride, and 1.1 kg of silica gel was adsorbed on a column packed with the same solvent, and then methylene chloride-ethyl acetate (1: 1
), Ethyl acetate, ethyl acetate-methanol (9: 1)
Then, the polarity of the developing solvent was gradually increased to elute. Eluate 50
Fractions containing 0 ml each were collected, and fractions containing thiomarinol B eluted with ethyl acetate-methanol were collected and concentrated to dryness under reduced pressure to obtain 60 g of an oily substance.
【００４８】得られた油状物を 50 ％メタノール 6 リ
ットルに溶解して、ダイアイオンHP−20を水で充填した
カラム 2.3 リットルに吸着させ、次いで 30 ％メタノ
ールから 90 ％メタノールまで、順次メタノール濃度を
上げるステップワイズ・グラジエント溶出を行なった。
即ち、順に 30 ％メタノール、50 ％メタノール、60％
メタノール、70 ％メタノール、80 ％メタノールをそ
れぞれ 4 リットルづつ流し、次いで 90 ％メタノール
による溶出を行なった。HPLCによるモニターでさらなる
溶出がなくなるまで行ない、約 10 リットルを要した。
90 ％メタノール溶出画分を集めて、これを減圧下で濃
縮乾固して黄色粉末 3.8 g が得られた。この黄色粉末
はさらにセファデックス LH −20を用いてクロマトを行
なった。320 g のセファデックス LH −20をメチレンク
ロリド−酢酸エチル−メタノール(19 ：19：2)で充填し
たカラムを用い、同溶媒で展開して精製した。The obtained oily substance was dissolved in 6 liters of 50% methanol and adsorbed on 2.3 liters of a column filled with water of DIAION HP-20, and then the concentration of methanol was sequentially changed from 30% methanol to 90% methanol. An increasing stepwise gradient elution was performed.
That is, 30% methanol, 50% methanol, 60%
4 liters of methanol, 70% methanol and 80% methanol were each passed, and then elution with 90% methanol was performed. It was carried out until further elution by HPLC monitoring took about 10 liters.
Fractions eluted with 90% methanol were collected and concentrated to dryness under reduced pressure to obtain 3.8 g of a yellow powder. The yellow powder was further chromatographed on Sephadex LH-20. A column packed with 320 g of Sephadex LH-20 in methylene chloride-ethyl acetate-methanol (19: 19: 2) was developed with the same solvent for purification.
【００４９】さらに逆相カラムを用いた高速液体クロマ
トグラフィーによる精製を行なった。分離カラムとして
センシュウパックODS H −5251（カラムサイズ、φ20×
250mm, センシュウ科学（株）製）を用い、展開溶媒と
して 40 ％アセトニトリル−水を 15 ml/ 分の流速で流
し、220 nm の吸光度をモニターしながら精製した。チ
オマリノールＢは保持時間 13 〜14 分のピークとして
得られたので、これを集め、減圧下で濃縮乾固して 130
mg を単離した。Further, purification by high performance liquid chromatography using a reverse phase column was carried out. Senshupack ODS H-5251 (column size, φ20 x
Using 250 mm, Senshu Kagaku Co., Ltd., 40% acetonitrile-water as a developing solvent was flowed at a flow rate of 15 ml / min to purify while monitoring the absorbance at 220 nm. Thiomalinol B was obtained as a peak with a retention time of 13 to 14 minutes, so it was collected and concentrated to dryness under reduced pressure.
mg was isolated.
【００５０】(実施例の効果） 試験例１．チオマリノールＢの抗菌作用 一般グラム陽性およびグラム陰性細菌に対するチオマリ
ノールＢの最小発育阻止濃度(MIC) は、普通寒天培地
（栄研化学（株）製）を用いた寒天培地希釈法によって
測定した。(Effects of Examples) Test Example 1. Antibacterial action of thiomarinol B The minimum inhibitory concentration (MIC) of thiomarinol B against general Gram-positive and Gram-negative bacteria was measured by an agar medium dilution method using ordinary agar medium (Eiken Chemical Co., Ltd.).
【００５１】結果を表３に示す。The results are shown in Table 3.
【００５２】[0052]
【表３】 [Table 3]
【００５３】表３から明かのごとく、チオマリノールＢ
はシュードモン酸Ａに比べて一般グラム陽性および陰性
細菌に対して優れた効果を示した。As is apparent from Table 3, thiomarinol B
Showed superior effects against general Gram positive and negative bacteria compared to pseudomonic acid A.
【００５４】以上から、本発明の新規化合物チオマリノ
ールＢは抗菌作用を示し、各種細菌に対する抗菌剤とし
て有用である。From the above, the novel compound thiomarinol B of the present invention exhibits an antibacterial action and is useful as an antibacterial agent against various bacteria.
【００５５】試験例２．チオマリノ−ルＢの抗マイコプ
ラズマ菌作用 一般マイコプラズマ菌に対するチオマリノ−ルＢの最小
阻止濃度（MIC ）は、以下の測定条件下において、寒天
平板希釈法によって測定した。Test Example 2. Anti-Mycoplasma Action of Thiomalinol B The minimum inhibitory concentration (MIC) of thiomarinol B against general Mycoplasma was measured by the agar plate dilution method under the following measurement conditions.
【００５６】測定条件 接種菌量 105 CFU ／ml を 0.005 ml 接種 測定用培地：チャノック(Chanock) の培地(P.N.A.S.,48
巻、41-49頁(1962 年) 記載の培地に20 % 馬血清を添加
した培地) 培養条件 37℃、5 日間、微好気培養［BBL ガスパッ
ク(BBL GasPac(商品名、Becton Dickinson Microbiolog
y Systems 社、米国))法］ 結果を表４に示す。Measurement conditions 0.005 ml of an inoculum of 10 5 CFU / ml was inoculated Measurement medium: Chanock medium (PNAS, 48
Vol. 41-49 (1962) with 20% horse serum added) Culture conditions 37 ° C, 5 days Microaerobic culture [BBL GasPac (BBL GasPac (trade name, Becton Dickinson Microbiolog
y Systems Co., USA) method] The results are shown in Table 4.
【００５７】[0057]
【表４】 [Table 4]
【００５８】表４から明かのごとく、チオマリノ−ルＢ
は一般マイコプラズマ菌に対して優れた効果を示した。As is apparent from Table 4, thiomarinol B
Showed an excellent effect on general mycoplasma.
【００５９】[0059]
【発明の効果】以上から、本発明の新規化合物チオマリ
ノ−ルＢは抗菌作用を示し、各種細菌に対する抗菌剤と
して有用である。From the above, the novel compound Thiomalinol B of the present invention exhibits an antibacterial action and is useful as an antibacterial agent against various bacteria.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 1/04 Ｃ１２Ｒ 1:01） (72)発明者 小川 佳年生 福島県いわき市泉町下川字大剱389−４ 三共株式会社内 (72)発明者 小玉 健太郎 茨城県つくば市御幸が丘33 三共株式会社 内 (72)発明者 石井 晃 茨城県つくば市御幸が丘33 三共株式会社 内─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (51) Int.Cl. 5 Identification code Internal reference number FI technology display location (C12P 1/04 C12R 1:01) (72) Inventor Yoshinori Ogawa Shimokawa, Izumi-cho, Iwaki, Fukushima Prefecture Ohrai 389-4 Sankyo Co., Ltd. (72) Inventor Kentaro Kodama 33 Miyukigaoka, Tsukuba, Ibaraki Prefecture Sankyo Co., Ltd. (72) Inventor Akira Ishii 33, Miyukigaoka, Tsukuba, Ibaraki Sankyo Co., Ltd.
Claims (3)
ルＢ。 （１）物質の性状：黄色粉末 （２）分子式：C30 H44 N2 O11 S2 （３）分子量：672(FAB-MS法により測定） （４）高分解能質量分析：C30H45N2O11S2[(M+H)+; FAB-
MS法により測定］ 実測値 673.2468 計算値 673.2465 （５）元素分析値：（％）（但し、C30H44N2O11S2 ＋ H
2Oとして） 実測値 C 52.34, H 6.79, N 3.92, S 9.02 計算値 C 52.16, H 6.71, N 4.06, S 9.28 （６）赤外線吸収スペクトル：νmax cm-1 臭化カリウム(KBr) 錠剤法で測定した赤外線吸収スペク
トルは、次に示す通りである。3660, 3503, 3318, 307
5, 2966, 2928, 2870, 1704, 1653, 1509,1467, 1381,
1349, 1299, 1217, 1199, 1152, 1112, 1063, 1047,101
9, 975, 949, 884, 839, 764, 730, 660, 609,
553。 （７）紫外線吸収スペクトル：λmax nm (ε) １−プロパノール中で測定した紫外線吸収スペクトル
は、次に示す通りである。 377(2,900), 301(13,000), 215(21,000) １−プロパノール＋塩酸中で測定した紫外線吸収スペク
トルは、次に示す通りである。 377(2,900), 301(13,000), 223(17,000) １−プロパノール＋水酸化ナトリウム中で測定した紫外
線吸収スペクトルは、次に示す通りである。 377(2,900), 301(13,000), 221(19,000) （８）比旋光度： [α]D 25＝＋ 7.7°（ｃ＝1.0, １−
プロパノール） （９）高速液体クロマトグラフィー： 分離カラム；センシュウパック ODS H-2151 （カラムサ
イズ、φ 6×150 mm, センシュウ科学（株）製） 溶媒；40 ％アセトニトリル−水 流速；1.5 ml／分 保持時間； 8.4分 （１０）1H−核磁気共鳴スペクトル：（δ：ppm) 重ジメチルスルホキシド中、内部基準にテトラメチルシ
ランを使用して測定した核磁気共鳴スペクトル(360 MH
z) は、次に示す通りである。11.28(1H,s(br)), 10.47
(1H,s), 7.23(1H,s), 5.97(1H,s),5.37(2H,m), 4.88(1
H,d,J=7.5Hz), 4.61(1H,s(br)),4.43(1H,d,J=7.2Hz),
4.28(1H,d,J=3.6Hz), 4.18(1H,d,J=7.2Hz),4.02(2H,t,J
=6.6Hz), 3.74(1H,s(br)), 3.64(1H),3.61(1H),3.54(1
H), 3.51(1H), 3.35(1H,d,J=10.9Hz), 2.43(2H,t,J=7.
3Hz),2.12(1H), 2.09(1H), 2.03(1H), 2.02(3H,s), 1.
61(1H), 1.58(2H),1.50(2H), 1.32(2H), 1.30(2H), 1.
25(2H), 0.96(3H,d,J=6.3Hz),0.92(3H,d,J=6.9Hz)。 （１１）13C −核磁気共鳴スペクトル：（δ：ppm) 重ジメチルスルホキシド中、内部基準にテトラメチルシ
ランを使用して測定した核磁気共鳴スペクトル（90MHz)
は、次に示す通りである。173.5(s), 166.1(s), 165.
7(s), 160.8(s), 143.2(s), 134.2(d),127.8(d), 1
23.3(s), 115.2(s), 114.4(d), 109.4(d), 76.2
(d),72.4(d), 69.6(d), 69.3(d), 64.3( t), 6
3.9(d), 63.0(t),43.2(d), 42.2(d), 34.7(t),
31.9(t), 28.3(t), 28.2(t),28.1(t), 25.3(t),
24.5(t), 20.0(q), 15.7(q), 15.6(q)。 （１２）溶解性：メタノール、エタノール、プロパノー
ル、ブタノール等のアルコール類、ジメチルスルホキシ
ド、ジメチルホルムアミド、クロロホルム、酢酸エチ
ル、アセトン、エチルエーテルに可溶。ｎ−ヘキサン、
水に不溶。 （１３）薄層クロマトグラフィー： Rf値 ； 0.52 吸着剤 ；シリカゲル（メルク社製、Art. 5715) 展開溶剤；メチレンクロリド：メタノール＝85：151. Thiomalinol B having the following physicochemical properties. (1) Property of substance: yellow powder (2) Molecular formula: C 30 H 44 N 2 O 11 S 2 (3) Molecular weight: 672 (measured by FAB-MS method) (4) High resolution mass spectrometry: C 30 H 45 N 2 O 11 S 2 [(M + H) + ; FAB-
Measured by MS method] Measured value 673.2468 Calculated value 673.2465 (5) Elemental analysis value: (%) (however, C 30 H 44 N 2 O 11 S 2 + H
2 O) Actual value C 52.34, H 6.79, N 3.92, S 9.02 Calculated value C 52.16, H 6.71, N 4.06, S 9.28 (6) Infrared absorption spectrum: ν max cm -1 Potassium bromide (KBr) Tablet method The infrared absorption spectrum measured by is as shown below. 3660, 3503, 3318, 307
5, 2966, 2928, 2870, 1704, 1653, 1509, 1467, 1381,
1349, 1299, 1217, 1199, 1152, 1112, 1063, 1047, 101
9, 975, 949, 884, 839, 764, 730, 660, 609,
553. (7) Ultraviolet absorption spectrum: λ max nm (ε) The ultraviolet absorption spectrum measured in 1-propanol is as shown below. The ultraviolet absorption spectra measured in 377 (2,900), 301 (13,000), 215 (21,000) 1-propanol + hydrochloric acid are as shown below. The ultraviolet absorption spectrum measured in 377 (2,900), 301 (13,000), 223 (17,000) 1-propanol + sodium hydroxide is as shown below. 377 (2,900), 301 (13,000), 221 (19,000) (8) Specific rotation: [α] D 25 = + 7.7 ° (c = 1.0, 1-
(9) High-performance liquid chromatography: Separation column; Senshupack ODS H-2151 (column size, φ 6 x 150 mm, Senshu Kagaku Co., Ltd.) Solvent: 40% acetonitrile-water Flow rate: 1.5 ml / min Retention Time: 8.4 minutes (10) 1 H-nuclear magnetic resonance spectrum: (δ: ppm) Nuclear magnetic resonance spectrum (360 MH) measured using tetramethylsilane as an internal standard in deuterated dimethyl sulfoxide.
z) is as shown below. 11.28 (1H, s (br)), 10.47
(1H, s), 7.23 (1H, s), 5.97 (1H, s), 5.37 (2H, m), 4.88 (1
H, d, J = 7.5Hz), 4.61 (1H, s (br)), 4.43 (1H, d, J = 7.2Hz),
4.28 (1H, d, J = 3.6Hz), 4.18 (1H, d, J = 7.2Hz), 4.02 (2H, t, J
= 6.6Hz), 3.74 (1H, s (br)), 3.64 (1H), 3.61 (1H), 3.54 (1
H), 3.51 (1H), 3.35 (1H, d, J = 10.9Hz), 2.43 (2H, t, J = 7.
3Hz), 2.12 (1H), 2.09 (1H), 2.03 (1H), 2.02 (3H, s), 1.
61 (1H), 1.58 (2H), 1.50 (2H), 1.32 (2H), 1.30 (2H), 1.
25 (2H), 0.96 (3H, d, J = 6.3Hz), 0.92 (3H, d, J = 6.9Hz). (11) 13 C-nuclear magnetic resonance spectrum: (δ: ppm) Nuclear magnetic resonance spectrum (90 MHz) measured by using tetramethylsilane as an internal standard in deuterated dimethyl sulfoxide.
Is as shown below. 173.5 (s), 166.1 (s), 165.
7 (s), 160.8 (s), 143.2 (s), 134.2 (d), 127.8 (d), 1
23.3 (s), 115.2 (s), 114.4 (d), 109.4 (d), 76.2
(d), 72.4 (d), 69.6 (d), 69.3 (d), 64.3 (t), 6
3.9 (d), 63.0 (t), 43.2 (d), 42.2 (d), 34.7 (t),
31.9 (t), 28.3 (t), 28.2 (t), 28.1 (t), 25.3 (t),
24.5 (t), 20.0 (q), 15.7 (q), 15.6 (q). (12) Solubility: Soluble in alcohols such as methanol, ethanol, propanol and butanol, dimethyl sulfoxide, dimethylformamide, chloroform, ethyl acetate, acetone and ethyl ether. n-hexane,
Insoluble in water. (13) Thin layer chromatography: R f value; 0.52 adsorbent; silica gel (Merck, Art. 5715) developing solvent; methylene chloride: methanol = 85: 15
Ｂ生産菌を培養し、その培養物よりチオマリノールＢを
採取することを特徴とするチオマリノールＢの製法。2. A method for producing thiomarinol B, which comprises culturing a thiomarinol B-producing bacterium belonging to the genus Alteromonas and collecting thiomarinol B from the culture.
するチオマリノールＢ生産菌がアルテロモナス・ラバ・
SANK 73390株である製法。3. The thiomarinol B-producing bacterium belonging to the genus Alteromonas according to claim 2,
A manufacturing method that is SANK 73390 strain.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5231332A JP2532199B2 (en) | 1992-09-18 | 1993-09-17 | New compound thiomarinol B |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4-248970 | 1992-09-18 | ||
| JP24897092 | 1992-09-18 | ||
| JP5231332A JP2532199B2 (en) | 1992-09-18 | 1993-09-17 | New compound thiomarinol B |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06336487A true JPH06336487A (en) | 1994-12-06 |
| JP2532199B2 JP2532199B2 (en) | 1996-09-11 |
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ID=26529807
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
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| JP5231332A Expired - Fee Related JP2532199B2 (en) | 1992-09-18 | 1993-09-17 | New compound thiomarinol B |
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| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2532199B2 (en) |
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1993
- 1993-09-17 JP JP5231332A patent/JP2532199B2/en not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Publication date |
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| JP2532199B2 (en) | 1996-09-11 |
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