JPH0617912B2 - ラテックス凝集法による免疫定量法 - Google Patents
ラテックス凝集法による免疫定量法Info
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- JPH0617912B2 JPH0617912B2 JP61050624A JP5062486A JPH0617912B2 JP H0617912 B2 JPH0617912 B2 JP H0617912B2 JP 61050624 A JP61050624 A JP 61050624A JP 5062486 A JP5062486 A JP 5062486A JP H0617912 B2 JPH0617912 B2 JP H0617912B2
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Description
【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ この発明は、検体中の抗原又は抗体を定量する、ラテッ
クス凝集法による免疫定量法に関する。
クス凝集法による免疫定量法に関する。
［従来の技術］ 検体中の抗原又は抗体を測定する免疫定量法として、放
射免疫定量法、酸素免疫定量法等種々のものが実用化さ
れている。最近、検出感度が高く、操作も簡便なラテッ
クス凝集法がさかんに行なわれるようになった。ラテッ
クス凝集法では、測定すべき抗原又は抗体に対応する抗
体又は抗原がその表面に吸着されたラテックス粒子が用
いられる。このようなラテックス粒子は緩衝液のような
媒体中に浮遊され、検体と混合される。検体中の抗原又
は抗体と、ラテックス表面上の抗体又は抗原とが抗原抗
体反応を起こし、結合する。検体中の抗原又は抗体は、
抗原決定基を通常複数有するので検体中の抗原又は抗体
を介してラテックス粒子が架橋され、凝集する。この凝
集の程度は、検体中の測定すべき抗原又は抗体の量に比
例するので、この凝集の程度を測定することによって検
体中の抗原又は抗体を定量することができる。凝集の程
度は試料混合物の吸光度又は光の透過率を分光光度計に
よって測定することにより簡単に行なうことができる。
この方法は、感度が高く、測定方法が簡単で、大がかり
な装置を必要としないので広く用いられつつある。
射免疫定量法、酸素免疫定量法等種々のものが実用化さ
れている。最近、検出感度が高く、操作も簡便なラテッ
クス凝集法がさかんに行なわれるようになった。ラテッ
クス凝集法では、測定すべき抗原又は抗体に対応する抗
体又は抗原がその表面に吸着されたラテックス粒子が用
いられる。このようなラテックス粒子は緩衝液のような
媒体中に浮遊され、検体と混合される。検体中の抗原又
は抗体と、ラテックス表面上の抗体又は抗原とが抗原抗
体反応を起こし、結合する。検体中の抗原又は抗体は、
抗原決定基を通常複数有するので検体中の抗原又は抗体
を介してラテックス粒子が架橋され、凝集する。この凝
集の程度は、検体中の測定すべき抗原又は抗体の量に比
例するので、この凝集の程度を測定することによって検
体中の抗原又は抗体を定量することができる。凝集の程
度は試料混合物の吸光度又は光の透過率を分光光度計に
よって測定することにより簡単に行なうことができる。
この方法は、感度が高く、測定方法が簡単で、大がかり
な装置を必要としないので広く用いられつつある。
［従来技術の欠点］ 検体中に高濃度に含まれる抗原又は抗体を従来のラテッ
クス凝集法により定量する場合には、検体を希釈し、こ
の検体希釈液中の抗原又は抗体をラテックス凝集法で定
量しなければならない。検体原液を希釈することなくそ
のままラテックス凝集法に用いると、いわゆる地帯現象
を起こし、ラテックス粒子の凝集が起きないために抗原
又は抗体を定量することができない。地帯現象は、ラテ
ックス粒子の表面に結合された抗体又は抗原の数に対
し、過剰の抗原又は抗体が混合物中に存在すると、ラテ
ックス表面上の抗体又は抗原がそれぞれ対応する抗原又
は抗体を独占し、混合物中の抗原又は抗体を介してラテ
ックス粒子同志が架橋されることがなくなるので、ラテ
ックス粒子の凝集が起きなくなるために起こると考えら
れている。
クス凝集法により定量する場合には、検体を希釈し、こ
の検体希釈液中の抗原又は抗体をラテックス凝集法で定
量しなければならない。検体原液を希釈することなくそ
のままラテックス凝集法に用いると、いわゆる地帯現象
を起こし、ラテックス粒子の凝集が起きないために抗原
又は抗体を定量することができない。地帯現象は、ラテ
ックス粒子の表面に結合された抗体又は抗原の数に対
し、過剰の抗原又は抗体が混合物中に存在すると、ラテ
ックス表面上の抗体又は抗原がそれぞれ対応する抗原又
は抗体を独占し、混合物中の抗原又は抗体を介してラテ
ックス粒子同志が架橋されることがなくなるので、ラテ
ックス粒子の凝集が起きなくなるために起こると考えら
れている。
このように、従来のラテックス凝集法では、測定すべき
抗原又は抗体が検体中に高濃度に含まれる場合には、検
体原液のままでは定量できないので、例えば血清中に比
較的高濃度に含まれるＣ反応性タンパク質等を定量する
場合には、検体を希釈して用いなければならない。大き
な病院等では、検体の数が数千、数万にものぼる場合が
あり、これらをいちいち正確に希釈することは非常に時
間と労力を要する仕事である。
抗原又は抗体が検体中に高濃度に含まれる場合には、検
体原液のままでは定量できないので、例えば血清中に比
較的高濃度に含まれるＣ反応性タンパク質等を定量する
場合には、検体を希釈して用いなければならない。大き
な病院等では、検体の数が数千、数万にものぼる場合が
あり、これらをいちいち正確に希釈することは非常に時
間と労力を要する仕事である。
［発明が解決しようとする問題点］ この発明の目的は、測定すべき抗原又は抗体が検体中に
高濃度に含まれる場合であっても、検体を希釈すること
なく原液のままで用いることができるラテックス凝集法
による免疫定量法を提供することである。
高濃度に含まれる場合であっても、検体を希釈すること
なく原液のままで用いることができるラテックス凝集法
による免疫定量法を提供することである。
［問題を解決するための手段］ 本願発明者らは上記問題を解決するため鋭意研究した結
果、ラテックス粒子浮遊液と検体との混合物中にアミノ
酸を存在せしめることによって、測定すべき抗原又は抗
体が検体中に高濃度に含まれる場合であっても、検体を
希釈することなく原液のままで用いることができるとい
う、驚くべき事実を発見し、本願発明を完成するに至っ
た。すなわち、この発明は、検体中の測定すべき抗原又
は抗体に対応する抗体又は抗原がその表面に結合された
ラテックス粒子の浮遊液と前記検体とを混合し、ラテッ
クス粒子の凝集の程度を測定して検体中の抗原又は抗体
を定量する、ラテックス凝集法による免疫定量法におい
て、前記検体と前記浮遊液との混合物中に、該嵌合物の
全量に対し９ないし３０w/v％のアミノ酸を存在せしめ
ることを特徴とする免疫定量法を提供する。
果、ラテックス粒子浮遊液と検体との混合物中にアミノ
酸を存在せしめることによって、測定すべき抗原又は抗
体が検体中に高濃度に含まれる場合であっても、検体を
希釈することなく原液のままで用いることができるとい
う、驚くべき事実を発見し、本願発明を完成するに至っ
た。すなわち、この発明は、検体中の測定すべき抗原又
は抗体に対応する抗体又は抗原がその表面に結合された
ラテックス粒子の浮遊液と前記検体とを混合し、ラテッ
クス粒子の凝集の程度を測定して検体中の抗原又は抗体
を定量する、ラテックス凝集法による免疫定量法におい
て、前記検体と前記浮遊液との混合物中に、該嵌合物の
全量に対し９ないし３０w/v％のアミノ酸を存在せしめ
ることを特徴とする免疫定量法を提供する。
［発明の効果］ この発明によると、測定すべき抗原又は抗体が検体中に
高濃度に含まれる場合であっても、検体を希釈すること
なく原液のままでラテックス凝集法による免疫定量を行
なうことができる。従って、検体を正確に希釈するとい
う時間と労力を要する作業を省略することができ、非常
に有利である。
高濃度に含まれる場合であっても、検体を希釈すること
なく原液のままでラテックス凝集法による免疫定量を行
なうことができる。従って、検体を正確に希釈するとい
う時間と労力を要する作業を省略することができ、非常
に有利である。
［発明の具体的説明］ 上述のように、この発明の方法は、測定すべき抗原又は
抗体を含む検体と、該抗原又は抗体に対応する抗体又は
抗原が表面に結合されたラテックス粒子の浮遊液とを混
合した混合物中に、該混合物の全量に対し９ないし３０
w/v％のアミノ酸を存在させることを特徴とする。この
発明の方法に用いられる好ましいアミノ酸は１分子中に
アミノ基を２個以上含むものである。ここでいう「アミ
ノ基」という語は最も広義の意味に用いており、第一
級、第二級、第三級、第四級のいずれのアミンを構成す
るアミノ基をも包含する。これらのアミノ酸のうち、特
に好ましいものはアルギニン、ヒスチジン、グルタミ
ン、アスパラギン及シトルリンである。アミノ酸は単独
で用いることも複数組み合わせて用いることもできる。
抗体を含む検体と、該抗原又は抗体に対応する抗体又は
抗原が表面に結合されたラテックス粒子の浮遊液とを混
合した混合物中に、該混合物の全量に対し９ないし３０
w/v％のアミノ酸を存在させることを特徴とする。この
発明の方法に用いられる好ましいアミノ酸は１分子中に
アミノ基を２個以上含むものである。ここでいう「アミ
ノ基」という語は最も広義の意味に用いており、第一
級、第二級、第三級、第四級のいずれのアミンを構成す
るアミノ基をも包含する。これらのアミノ酸のうち、特
に好ましいものはアルギニン、ヒスチジン、グルタミ
ン、アスパラギン及シトルリンである。アミノ酸は単独
で用いることも複数組み合わせて用いることもできる。
ラテックス浮遊液と検体との混合物中のアミノ酸の終濃
度は、９ないし３０w/v％（重量／体積％）である。Ｃ
反応性タンパク質のように、検体中に数mg/dlから数十m
g/dl含まれるものでは１０ないし２０w/v％が好まし
い。
度は、９ないし３０w/v％（重量／体積％）である。Ｃ
反応性タンパク質のように、検体中に数mg/dlから数十m
g/dl含まれるものでは１０ないし２０w/v％が好まし
い。
アミノ酸の濃度が９w/v％未満では検体中の抗原又は抗
体濃度が大きくなると吸光度変化率が逆に低下してしま
い、測定ができなくなる（第３図）。また、３０w/v％
を超えると検体中の抗原又は抗体濃度の変化に対する吸
光度の変化が小さくなり、正確な測定が困難になる。
体濃度が大きくなると吸光度変化率が逆に低下してしま
い、測定ができなくなる（第３図）。また、３０w/v％
を超えると検体中の抗原又は抗体濃度の変化に対する吸
光度の変化が小さくなり、正確な測定が困難になる。
アミノ酸は、検体とラテックス浮遊液とを混合する際に
添加してもよいし、予めラテックス浮遊液又は検体に添
加しておいてもよい。
添加してもよいし、予めラテックス浮遊液又は検体に添
加しておいてもよい。
この発明の方法にとって特徴的なことは、検体とラテッ
クス浮遊液との混合物中に所定濃度のアミノ酸を存在さ
せることであり、その他の事項、例えば用いられるラテ
ックス粒子の粒径やその他の性質、ラテックス粒子の濃
度、ラテックス粒子の凝集の程度の測定方法等はこの発
明にとって何等特徴的なものではなく、従来のラテック
ス凝集法に採用されているいずれのものをも採用するこ
とができる。
クス浮遊液との混合物中に所定濃度のアミノ酸を存在さ
せることであり、その他の事項、例えば用いられるラテ
ックス粒子の粒径やその他の性質、ラテックス粒子の濃
度、ラテックス粒子の凝集の程度の測定方法等はこの発
明にとって何等特徴的なものではなく、従来のラテック
ス凝集法に採用されているいずれのものをも採用するこ
とができる。
実施例１ 濃度0mg/dlないし20mg/dlのＣ反応性タンパク質(CRP)の
生理食塩水溶液５μｌに、２０w/v％のアルギニン・塩
酸塩を含む0.17Mのグリシン緩衝液（pH8.3)300μｌを加
えた。対照として、上記ＣＲＰ溶液にアルギニン・塩酸
塩を含まない同緩衝液300μｌを加えた。抗ＣＲＰ抗体
（ウサギ）を結合した粒径0.12μｍのラテックス粒子の
浮遊液(0.12v/v％）300μｌをそれぞれの混合物に加
え、３７℃で反応させ、分光光度計（東芝TBA-480)を用
いて１分間当りの吸光度変化率を波長572nmで測定し
た。
生理食塩水溶液５μｌに、２０w/v％のアルギニン・塩
酸塩を含む0.17Mのグリシン緩衝液（pH8.3)300μｌを加
えた。対照として、上記ＣＲＰ溶液にアルギニン・塩酸
塩を含まない同緩衝液300μｌを加えた。抗ＣＲＰ抗体
（ウサギ）を結合した粒径0.12μｍのラテックス粒子の
浮遊液(0.12v/v％）300μｌをそれぞれの混合物に加
え、３７℃で反応させ、分光光度計（東芝TBA-480)を用
いて１分間当りの吸光度変化率を波長572nmで測定し
た。
結果を第１図に示す。第１図から明らかなように、アル
ギニンを添加しない場合には、抗原過剰による地帯現象
が生じ、ＣＲＰ濃度に応じた吸光度変化率が得られなか
ったが、アルギニンを添加した場合には、ＣＲＰ濃度に
応じた吸光度変化率が得られた。このように、この発明
の方法によると、従来のラテックス凝集法では測定不可
能な高濃度の抗原又は抗体でも測定可能になる。
ギニンを添加しない場合には、抗原過剰による地帯現象
が生じ、ＣＲＰ濃度に応じた吸光度変化率が得られなか
ったが、アルギニンを添加した場合には、ＣＲＰ濃度に
応じた吸光度変化率が得られた。このように、この発明
の方法によると、従来のラテックス凝集法では測定不可
能な高濃度の抗原又は抗体でも測定可能になる。
実施例２ この実施例はアミノ酸の存在により測定精度が落ちない
ことを示すためのものである。
ことを示すためのものである。
種々の既知濃度のＣＲＰ標準試料を用いて実施例１と同
様な操作を行ない、検量線を作成した。次に、種々の未
知濃度のＣＲＰを含む検体を原液のまま用いて実施例１
と同様な操作を行ない、その測定結果と上記検量線とか
ら検体中のＣＲＰ濃度を求めた。
様な操作を行ない、検量線を作成した。次に、種々の未
知濃度のＣＲＰを含む検体を原液のまま用いて実施例１
と同様な操作を行ない、その測定結果と上記検量線とか
ら検体中のＣＲＰ濃度を求めた。
一方、従来から広く知られている一元放射免疫拡散法の
常法に基づき、同検体についてそのＣＲＰ濃度を測定
し、上記この発明の方法により得られた結果と比較し
た。
常法に基づき、同検体についてそのＣＲＰ濃度を測定
し、上記この発明の方法により得られた結果と比較し
た。
上記２法による測定値の相関図を第２図に示す。この相
関図の相関係数は0.9940であり、上記２法による測定値
がほぼ完全に一致していることがわかる。すなわち、こ
の発明の方法において、アミノ酸の存在により測定精度
に悪影響が及ぼされないことが明らかになった。
関図の相関係数は0.9940であり、上記２法による測定値
がほぼ完全に一致していることがわかる。すなわち、こ
の発明の方法において、アミノ酸の存在により測定精度
に悪影響が及ぼされないことが明らかになった。
実施例３ 実施例１と同様にしてＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）と
吸光度変化率の関係を検討した。ただし、アルギニン塩
酸塩の濃度を０％、２％、５％、８％、１０％、２０％
と変化させた０．１７Ｍグリシン緩衝液を用いた。その
結果を第３図に示す。
吸光度変化率の関係を検討した。ただし、アルギニン塩
酸塩の濃度を０％、２％、５％、８％、１０％、２０％
と変化させた０．１７Ｍグリシン緩衝液を用いた。その
結果を第３図に示す。
第３図に示されるように、アルギニン塩酸塩を１０％又
は２０％含むグリシン緩衝液を用いた場合には、ＣＲＰ
濃度と吸光変化率とに比例関係が得られたが、８％以下
のアルギニン塩酸塩濃度では比例関係が得られなかっ
た。
は２０％含むグリシン緩衝液を用いた場合には、ＣＲＰ
濃度と吸光変化率とに比例関係が得られたが、８％以下
のアルギニン塩酸塩濃度では比例関係が得られなかっ
た。
第１図は実施例１で得られたＣＲＰ濃度と吸光度変化率
の関係を示すグラフ、 第２図はこの発明の方法による測定値と一元放射免疫拡
散法による測定値との相関図である。 第３図は、種々のアルギニン濃度における抗原量と１分
間当りの吸光度変化率との関係を示す図である。
の関係を示すグラフ、 第２図はこの発明の方法による測定値と一元放射免疫拡
散法による測定値との相関図である。 第３図は、種々のアルギニン濃度における抗原量と１分
間当りの吸光度変化率との関係を示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 鳥越 良子 新潟県五泉市南本町１丁目２番２号 デン カ生研株式会社新潟工場内 (72)発明者 渡部 律子 新潟県五泉市南本町１丁目２番２号 デン カ生研株式会社新潟工場内 (72)発明者 元田 昭策 新潟県五泉市南本町１丁目２番２号 デン カ生研株式会社新潟工場内 (56)参考文献 特開 昭61−296270（ＪＰ，Ａ)
Claims (4)
- 【請求項１】検体中の測定すべき抗原又は抗体に対応す
る抗体又は抗原がその表面に結合されたラテックス粒子
の浮遊液と前記検体とを混合し、ラテックス粒子の凝集
の程度を測定して検体中の抗原又は抗体を定量する、ラ
テックス凝集法による免疫定量法において、前記検体と
前記浮遊液との混合物中に、該混合物の全量に対し９な
いし３０w/v％のアミノ酸を存在せしめることを特徴と
する免疫定量法。 - 【請求項２】前記アミノ酸は１分子内にアミノ基を２個
以上有するものである特許請求の範囲第１項記載の免疫
定量法。 - 【請求項３】前記アミノ酸はアルギニン、ヒスチジン、
グルタミン、アスパラギン又はシトルリンである特許請
求の範囲第２項記載の免疫定量法。 - 【請求項４】前記アミノ酸はアルギニン又はヒスチジン
である特許請求の範囲第３項記載の免疫定量法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61050624A JPH0617912B2 (ja) | 1986-03-10 | 1986-03-10 | ラテックス凝集法による免疫定量法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61050624A JPH0617912B2 (ja) | 1986-03-10 | 1986-03-10 | ラテックス凝集法による免疫定量法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62272157A JPS62272157A (ja) | 1987-11-26 |
| JPH0617912B2 true JPH0617912B2 (ja) | 1994-03-09 |
Family
ID=12864133
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61050624A Expired - Fee Related JPH0617912B2 (ja) | 1986-03-10 | 1986-03-10 | ラテックス凝集法による免疫定量法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0617912B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4877578B2 (ja) * | 2006-02-10 | 2012-02-15 | 日東紡績株式会社 | 抗原の測定法およびそれに用いるキット |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61296270A (ja) * | 1985-06-25 | 1986-12-27 | Terumo Corp | 免疫学的反応用試薬 |
-
1986
- 1986-03-10 JP JP61050624A patent/JPH0617912B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS62272157A (ja) | 1987-11-26 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
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Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
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| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |