JPH0616568A - アンジオテンシン変換酵素阻害剤 - Google Patents
アンジオテンシン変換酵素阻害剤Info
- Publication number
- JPH0616568A JPH0616568A JP4260550A JP26055092A JPH0616568A JP H0616568 A JPH0616568 A JP H0616568A JP 4260550 A JP4260550 A JP 4260550A JP 26055092 A JP26055092 A JP 26055092A JP H0616568 A JPH0616568 A JP H0616568A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amino acid
- ile
- tripeptide
- converting enzyme
- tyr
- Prior art date
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- Pending
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-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 アミノ酸配列に規則性を有するトリペプチド
よりなる優れた新規アンジオテンシン変換酵素阻害剤を
提供する。 【構成】 合成法により得られるＣ末端位が芳香族アミ
ノ酸、とくに、ＴｒｐあるいはＴｙｒであるときは、ア
ンジオテンシン変換酵素阻害活性が高く、さらに、中央
位アミノ酸がＩｌｅあるいはＶａｌであるとき、また、
Ｎ末端位アミノ酸がＩｌｅあるいはＣｙｓであるとき該
活性が高い。さらに、Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒは小麦蛋
白質を酵素分解しても得ることができる。
よりなる優れた新規アンジオテンシン変換酵素阻害剤を
提供する。 【構成】 合成法により得られるＣ末端位が芳香族アミ
ノ酸、とくに、ＴｒｐあるいはＴｙｒであるときは、ア
ンジオテンシン変換酵素阻害活性が高く、さらに、中央
位アミノ酸がＩｌｅあるいはＶａｌであるとき、また、
Ｎ末端位アミノ酸がＩｌｅあるいはＣｙｓであるとき該
活性が高い。さらに、Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒは小麦蛋
白質を酵素分解しても得ることができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、アミノ酸配列に規則性
をもつトリペプチドからなるアンジオテンシン変換酵素
（以下、ＡＣＥという。）阻害剤に関するものである。
本発明のＡＣＥ阻害剤は、これを高血圧症治療薬あるい
は高血圧症治療薬の基剤とすることができる。
をもつトリペプチドからなるアンジオテンシン変換酵素
（以下、ＡＣＥという。）阻害剤に関するものである。
本発明のＡＣＥ阻害剤は、これを高血圧症治療薬あるい
は高血圧症治療薬の基剤とすることができる。
【０００２】
【従来の技術】高血圧症治療薬の一種としてＡＣＥ阻害
剤の有用性が広く認められ、第一選択薬として使用され
ている。さらに、高血圧症の治療あるいは予防にＡＣＥ
阻害作用を有するペプチドを用いることが提案されてい
る。
剤の有用性が広く認められ、第一選択薬として使用され
ている。さらに、高血圧症の治療あるいは予防にＡＣＥ
阻害作用を有するペプチドを用いることが提案されてい
る。
【０００３】すでに、ＡＣＥ阻害作用を有するペプチド
の例として、トウモロコシのαーゼインまたはグルテン
ミールの蛋白質加水分解物（特開平２ー２４００２８号
公報）や動物の赤血球の蛋白質加水分解物（特開平３ー
６６６２６号公報）があり、また、オキアミ蛋白質の加
水分解物から得られたペプチド（特開平３ー８１２９１
号公報）やイワシ由来のペプチド（特開平３ー６３２９
５号公報）などが挙げられ、いずれもＡＣＥ阻害剤とな
し得ることが開示さている。また、合成法により得た鎖
長の短いペプチドについての提案も行なわれているが数
少なく、しかも、そのペプチドのアミノ酸配列の規則性
も不明である。
の例として、トウモロコシのαーゼインまたはグルテン
ミールの蛋白質加水分解物（特開平２ー２４００２８号
公報）や動物の赤血球の蛋白質加水分解物（特開平３ー
６６６２６号公報）があり、また、オキアミ蛋白質の加
水分解物から得られたペプチド（特開平３ー８１２９１
号公報）やイワシ由来のペプチド（特開平３ー６３２９
５号公報）などが挙げられ、いずれもＡＣＥ阻害剤とな
し得ることが開示さている。また、合成法により得た鎖
長の短いペプチドについての提案も行なわれているが数
少なく、しかも、そのペプチドのアミノ酸配列の規則性
も不明である。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】高血圧症に関し、新規
有用な血圧降下剤は常に求められており、かつ、日常の
食餌を通じて高血圧症を予防、抑制する目的で利用する
ペプチドのＡＣＥ阻害剤が多数提案されているものの、
なお、不十分である。従って、本発明は、優れたＡＣＥ
阻害作用を有するとともに、通常的に入手可能で食用に
供せられる蛋白質、とくに、小麦由来のグルテンを起原
とし化学合成も容易になし得る構造の簡単なアミノ酸配
列に規則的に相関する各種ペプチドからなるＡＣＥ阻害
剤の開発を技術的課題とする。
有用な血圧降下剤は常に求められており、かつ、日常の
食餌を通じて高血圧症を予防、抑制する目的で利用する
ペプチドのＡＣＥ阻害剤が多数提案されているものの、
なお、不十分である。従って、本発明は、優れたＡＣＥ
阻害作用を有するとともに、通常的に入手可能で食用に
供せられる蛋白質、とくに、小麦由来のグルテンを起原
とし化学合成も容易になし得る構造の簡単なアミノ酸配
列に規則的に相関する各種ペプチドからなるＡＣＥ阻害
剤の開発を技術的課題とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明は、Ｃ末端位アミ
ノ酸が芳香族アミノ酸とくにＴｒｐあるいはＴｙｒであ
るトリペプチドからなるＡＣＥ阻害剤に係るものであ
り、本発明に係るＡＣＥ阻害剤は、その構成トリペプチ
ドのアミノ酸配列がそれぞれの配列位において特定のア
ミノ酸群から選択されるものであるため、容易にペプチ
ド合成法によって得ることができ、かつ、そのうちＩｌ
ｅーＩｌｅーＴｙｒで表されるアミノ酸配列を有するト
リペプチドは、小麦蛋白質のグルテンを酵素分解して抽
出することもできる。
ノ酸が芳香族アミノ酸とくにＴｒｐあるいはＴｙｒであ
るトリペプチドからなるＡＣＥ阻害剤に係るものであ
り、本発明に係るＡＣＥ阻害剤は、その構成トリペプチ
ドのアミノ酸配列がそれぞれの配列位において特定のア
ミノ酸群から選択されるものであるため、容易にペプチ
ド合成法によって得ることができ、かつ、そのうちＩｌ
ｅーＩｌｅーＴｙｒで表されるアミノ酸配列を有するト
リペプチドは、小麦蛋白質のグルテンを酵素分解して抽
出することもできる。
【０００６】以下に本発明を詳細に説明する。本発明に
おけるトリペプチドは、通常のペプチド合成法により合
成することができる。また、小麦蛋白質を蛋白質分解酵
素により分解したのち精製工程を経ることにより得られ
るトリペプチドの一種もこのなかに含まれる。ここで用
いる小麦蛋白質は、如何なるものでもよく、市販のグル
テンであってもよい。
おけるトリペプチドは、通常のペプチド合成法により合
成することができる。また、小麦蛋白質を蛋白質分解酵
素により分解したのち精製工程を経ることにより得られ
るトリペプチドの一種もこのなかに含まれる。ここで用
いる小麦蛋白質は、如何なるものでもよく、市販のグル
テンであってもよい。
【０００７】酵素分解に用いる蛋白分解酵素としては、
酸性プロテアーゼとしてペプシン、ＰＤ酵素（商品名：
盛進製薬製）があり、アルカリプロテアーゼとしてはキ
モトリプシンが好ましく、これらのプロテアーゼを単
独、または併用し、あるいは、複数のプロテアーゼを順
次作用せしめて処理をすることができる。さらに、その
他の酸性プロテアーゼ、アルカリプロテアーゼ、チオー
ルプロテアーゼ、金属プロテアーゼであっても、これら
を前記と同様の処理を行うことにより、加水分解を促進
することができる。
酸性プロテアーゼとしてペプシン、ＰＤ酵素（商品名：
盛進製薬製）があり、アルカリプロテアーゼとしてはキ
モトリプシンが好ましく、これらのプロテアーゼを単
独、または併用し、あるいは、複数のプロテアーゼを順
次作用せしめて処理をすることができる。さらに、その
他の酸性プロテアーゼ、アルカリプロテアーゼ、チオー
ルプロテアーゼ、金属プロテアーゼであっても、これら
を前記と同様の処理を行うことにより、加水分解を促進
することができる。
【０００８】次いで、本発明における小麦蛋白質起原の
トリペプチドの精製は、ゲルろ過クロマトグラフィー、
限外ろ過等の分子量による分画、または、エタノール等
の水溶性有機溶媒による抽出により高分子量のペプチド
を除去する操作を行ったのち、イオン交換クロマトグラ
フィー、逆相クロマトグラフィー、あるいは、疎水クロ
マトグラフィーのうち何れか一つ以上の処理を行うこと
により達成できる。
トリペプチドの精製は、ゲルろ過クロマトグラフィー、
限外ろ過等の分子量による分画、または、エタノール等
の水溶性有機溶媒による抽出により高分子量のペプチド
を除去する操作を行ったのち、イオン交換クロマトグラ
フィー、逆相クロマトグラフィー、あるいは、疎水クロ
マトグラフィーのうち何れか一つ以上の処理を行うこと
により達成できる。
【０００９】また、本発明におけるトリペプチドは、そ
の構成アミノ酸を原料として、ペプチド合成法によって
も得ることができる。ペプチド合成法としては、液相
法、固相法のいずれの合成法を用いてもよく、市販のペ
プチド合成機を用いることもできる。いずれの方法によ
りペプチド合成を行った場合でも、逆相高速液体クロマ
トグラフィー（以下、逆相ＨＰＬＣという。）によりト
リペプチドを精製、単離することができる。
の構成アミノ酸を原料として、ペプチド合成法によって
も得ることができる。ペプチド合成法としては、液相
法、固相法のいずれの合成法を用いてもよく、市販のペ
プチド合成機を用いることもできる。いずれの方法によ
りペプチド合成を行った場合でも、逆相高速液体クロマ
トグラフィー（以下、逆相ＨＰＬＣという。）によりト
リペプチドを精製、単離することができる。
【００１０】本発明におけるトリペプチドは、そのアミ
ノ酸配列の解析に、気相プロテインシークエンサー（モ
デル４７７Ａ（アプライドバイオシステムズ社製））を
使用することによって、そのアミノ酸配列を確認するこ
とができる。
ノ酸配列の解析に、気相プロテインシークエンサー（モ
デル４７７Ａ（アプライドバイオシステムズ社製））を
使用することによって、そのアミノ酸配列を確認するこ
とができる。
【００１１】本発明におけるトリペプチドのＡＣＥ阻害
活性の測定法は、Ｃｈｅｕｎｇらの方法（Ｂｉｏｃｈ
ｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０，１６３７（１９７
１））に準じ、一部を変更して次の手順に従う。まず、
１ＭＮａＣｌ含有、１２５ｍＭホウ酸緩衝液（ｐＨ８．
３）をもってラビットラングアセトンパウダー（シグマ
社製）より抽出し、ＡＣＥ活性が５〜１０ｍＵに調製し
たＡＣＥ溶液５０μｌを試験管にとり、これに、蒸留水
に溶解したＡＣＥ阻害活性を検定する試料５０μｌと、
前記と同様組成のホウ酸緩衝液中に８．３ｍＭのヒプリ
ルヒスチジルロイシン（ペプチド研究所製）を溶解した
基質溶液１５０μｌとを順次添加し、３７℃、３０分間
の酵素反応を行う。次いで、１ＮＨＣｌを２５０μｌ添
加することにより前記酵素反応を停止せしめる。
活性の測定法は、Ｃｈｅｕｎｇらの方法（Ｂｉｏｃｈ
ｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０，１６３７（１９７
１））に準じ、一部を変更して次の手順に従う。まず、
１ＭＮａＣｌ含有、１２５ｍＭホウ酸緩衝液（ｐＨ８．
３）をもってラビットラングアセトンパウダー（シグマ
社製）より抽出し、ＡＣＥ活性が５〜１０ｍＵに調製し
たＡＣＥ溶液５０μｌを試験管にとり、これに、蒸留水
に溶解したＡＣＥ阻害活性を検定する試料５０μｌと、
前記と同様組成のホウ酸緩衝液中に８．３ｍＭのヒプリ
ルヒスチジルロイシン（ペプチド研究所製）を溶解した
基質溶液１５０μｌとを順次添加し、３７℃、３０分間
の酵素反応を行う。次いで、１ＮＨＣｌを２５０μｌ添
加することにより前記酵素反応を停止せしめる。
【００１２】前記酵素反応の停止後、反応の結果、反応
系中に生成した馬尿酸を抽出するために、反応液に酢酸
エチル３００μｌを加えて攪拌した後、遠心分離を行
う。分離した２層のうち上層（酢酸エチル層）の２００
μｌを試験管に移し取り蒸発乾固し、さらに、乾固物を
蒸留水に再溶解した後、抽出した馬尿酸を２２８ｎｍに
おける吸光度を測定して定量した結果からＡＣＥ阻害率
を計算する。
系中に生成した馬尿酸を抽出するために、反応液に酢酸
エチル３００μｌを加えて攪拌した後、遠心分離を行
う。分離した２層のうち上層（酢酸エチル層）の２００
μｌを試験管に移し取り蒸発乾固し、さらに、乾固物を
蒸留水に再溶解した後、抽出した馬尿酸を２２８ｎｍに
おける吸光度を測定して定量した結果からＡＣＥ阻害率
を計算する。
【００１３】なお、コントロール試験は、前記ＡＣＥ阻
害活性を検定する試料溶液の代わりに蒸留水５０μｌを
加えて測定を行う。さらに、ブランク試験は、前記手順
を一部改変し、まず１ＮＨＣｌを添加することによりＡ
ＣＥを失活せしめた後、基質溶液を加え同様にして測定
を行う。また、ＡＣＥ阻害率の算出は次式に従う。 阻害率（％）＝｛１−（Ｔ−Ｂ）／（Ｃ−Ｂ）｝×１０
０ ここで、Ｔは試料を加えた時の２２８ｎｍにおける吸光
度を表す値、Ｂはブランク試験の２２８ｎｍにおける吸
光度を表す値、また、Ｃはコントロール試験の２２８ｎ
ｍにおける吸光度を表す値である。次いで、阻害活性を
表示する際には、前記阻害率を該ＡＣＥ活性阻害試料の
濃度傾斜に従って測定した後、その５０％阻害濃度を算
出して、ＩＣ50値として表す。
害活性を検定する試料溶液の代わりに蒸留水５０μｌを
加えて測定を行う。さらに、ブランク試験は、前記手順
を一部改変し、まず１ＮＨＣｌを添加することによりＡ
ＣＥを失活せしめた後、基質溶液を加え同様にして測定
を行う。また、ＡＣＥ阻害率の算出は次式に従う。 阻害率（％）＝｛１−（Ｔ−Ｂ）／（Ｃ−Ｂ）｝×１０
０ ここで、Ｔは試料を加えた時の２２８ｎｍにおける吸光
度を表す値、Ｂはブランク試験の２２８ｎｍにおける吸
光度を表す値、また、Ｃはコントロール試験の２２８ｎ
ｍにおける吸光度を表す値である。次いで、阻害活性を
表示する際には、前記阻害率を該ＡＣＥ活性阻害試料の
濃度傾斜に従って測定した後、その５０％阻害濃度を算
出して、ＩＣ50値として表す。
【００１４】
【作用】本発明に係るＡＣＥ阻害剤は、後記する実施例
１、実施例２および実施例３〜実施例２３から明らかな
ように、小麦蛋白質であるグルテン（以下、小麦グルテ
ンという。）から酸性プロテアーゼあるいはアルカリプ
ロテアーゼのいずれによる加水分解であっても製造する
ことができ、また、構成アミノ酸を用いた通常のペプチ
ド合成法によっても製造することができる。そして、得
られた本発明におけるトリペプチドのＡＣＥ阻害活性の
ＩＣ50値（μＭ）は、後記する表１に示す如く、１．１
〜２３であり、通常ＡＣＥ阻害剤として効果ありと言わ
れているＩＣ50値（μＭ）３０〜５０に比較し、遙に活
性の高いものである。
１、実施例２および実施例３〜実施例２３から明らかな
ように、小麦蛋白質であるグルテン（以下、小麦グルテ
ンという。）から酸性プロテアーゼあるいはアルカリプ
ロテアーゼのいずれによる加水分解であっても製造する
ことができ、また、構成アミノ酸を用いた通常のペプチ
ド合成法によっても製造することができる。そして、得
られた本発明におけるトリペプチドのＡＣＥ阻害活性の
ＩＣ50値（μＭ）は、後記する表１に示す如く、１．１
〜２３であり、通常ＡＣＥ阻害剤として効果ありと言わ
れているＩＣ50値（μＭ）３０〜５０に比較し、遙に活
性の高いものである。
【００１５】そして、後記する表１に挙げるトリペプチ
ドのアミノ酸配列において、Ｃ末端位アミノ酸は、すべ
てＴｒｐあるいはＴｙｒで表される芳香族アミノ酸であ
り、この場合、中央位アミノ酸がＩｌｅあるいはＶａｌ
であるときは、ＡＣＥ阻害活性が高まる。さらに、Ｎ末
端位アミノ酸をＩｌｅあるいはＣｙｓとするときは、極
めて高いＡＣＥ阻害活性値を示す。また、ＩｌｅーＬｙ
ｓーＴｒｐも高活性値を示した。従って、本発明に係る
ＡＣＥ阻害剤は、現在社会的課題である高血圧を予防、
抑制する医薬品あるいは特定保険用食品等に十分使用し
得るといえる。
ドのアミノ酸配列において、Ｃ末端位アミノ酸は、すべ
てＴｒｐあるいはＴｙｒで表される芳香族アミノ酸であ
り、この場合、中央位アミノ酸がＩｌｅあるいはＶａｌ
であるときは、ＡＣＥ阻害活性が高まる。さらに、Ｎ末
端位アミノ酸をＩｌｅあるいはＣｙｓとするときは、極
めて高いＡＣＥ阻害活性値を示す。また、ＩｌｅーＬｙ
ｓーＴｒｐも高活性値を示した。従って、本発明に係る
ＡＣＥ阻害剤は、現在社会的課題である高血圧を予防、
抑制する医薬品あるいは特定保険用食品等に十分使用し
得るといえる。
【００１６】以下に実施例をもってさらに詳細に説明す
る。 実施例１．水分７０％の小麦グルテン６．７ｇを０．０
２Ｎ酢酸２００ｍｌに溶解し、塩酸によりｐＨを３．５
に調製した後、蛋白質重量比１／２５０のペプシンを加
え、３７℃、２４時間の加水分解処理を行った。その
後、分解液を１００℃、１０分間の加熱によりペプシン
を失活させ、続いて凍結乾燥することによりペプシン分
解物粉末２．０ｇを得た。
る。 実施例１．水分７０％の小麦グルテン６．７ｇを０．０
２Ｎ酢酸２００ｍｌに溶解し、塩酸によりｐＨを３．５
に調製した後、蛋白質重量比１／２５０のペプシンを加
え、３７℃、２４時間の加水分解処理を行った。その
後、分解液を１００℃、１０分間の加熱によりペプシン
を失活させ、続いて凍結乾燥することによりペプシン分
解物粉末２．０ｇを得た。
【００１７】該ペプシン分解物粉末を０．０２Ｎ酢酸２
０ｍｌに再溶解し、セファデックスＧー２５カラム（φ
２．６×９５ｃｍ）によるゲルろ過クロマトグラフィー
を行った。ＡＣＥ阻害活性を有する４つのピークのう
ち、より低分子の画分を取得するために、最も溶出の遅
いピークを集めて凍結乾燥をした。ここに得られた粉末
２５０ｍｇを０．０２Ｎ酢酸１２ｍｌに再溶解し、続い
てセファデックスＧー１０カラム（φ１．９×９５ｃ
ｍ）によるゲルろ過クロマトグラフィーを行った。この
セファデックスＧー１０カラムを使用することによりＡ
ＣＥ阻害活性を有する３つのピークが得られたが、再
び、そのうちの最も溶出の遅い低分子で構成されるピー
ク７５ｍｌを集め０．５ｍｌになるまで減圧濃縮をし
た。
０ｍｌに再溶解し、セファデックスＧー２５カラム（φ
２．６×９５ｃｍ）によるゲルろ過クロマトグラフィー
を行った。ＡＣＥ阻害活性を有する４つのピークのう
ち、より低分子の画分を取得するために、最も溶出の遅
いピークを集めて凍結乾燥をした。ここに得られた粉末
２５０ｍｇを０．０２Ｎ酢酸１２ｍｌに再溶解し、続い
てセファデックスＧー１０カラム（φ１．９×９５ｃ
ｍ）によるゲルろ過クロマトグラフィーを行った。この
セファデックスＧー１０カラムを使用することによりＡ
ＣＥ阻害活性を有する３つのピークが得られたが、再
び、そのうちの最も溶出の遅い低分子で構成されるピー
ク７５ｍｌを集め０．５ｍｌになるまで減圧濃縮をし
た。
【００１８】前記減圧濃縮物をオクタデシルシリルカラ
ム（商品名、コスモシール５Ｃ１８ＡＲ：ナカライテス
ク製）（φ０．４６×１５ｃｍ）を用いた逆相ＨＰＬＣ
により分画した。該分画における溶出は、０．０５％ト
リフルオロ酢酸を基本溶媒とし、アセトニトリルの濃度
を上昇させる濃度勾配法により行った。その際保持時間
２９〜３０分に溶出したピークに最も顕著なＡＣＥ阻害
活性が認められたので、該ピーク部分を集めて減圧濃縮
した後、再び、アセトニトリルの濃度勾配を緩やかにし
た逆相ＨＰＬＣにかけて一次精製を行った。
ム（商品名、コスモシール５Ｃ１８ＡＲ：ナカライテス
ク製）（φ０．４６×１５ｃｍ）を用いた逆相ＨＰＬＣ
により分画した。該分画における溶出は、０．０５％ト
リフルオロ酢酸を基本溶媒とし、アセトニトリルの濃度
を上昇させる濃度勾配法により行った。その際保持時間
２９〜３０分に溶出したピークに最も顕著なＡＣＥ阻害
活性が認められたので、該ピーク部分を集めて減圧濃縮
した後、再び、アセトニトリルの濃度勾配を緩やかにし
た逆相ＨＰＬＣにかけて一次精製を行った。
【００１９】一次精製の結果、前記ピーク部分はさらに
２つの主要なピークと若干の副次的なピークに分離でき
た。この２主要ピークのうち先に溶出するピークのみが
強いＡＣＥ阻害活性を示したので、先に溶出するピーク
部分を、再度アセトニトリルの濃度勾配を緩やかにした
逆相ＨＰＬＣにかけて二次精製を行い単一の成分とし
た。前記溶出パターンに於けるペプチドの検出には２１
０ｎｍの紫外線吸収量を読み取った。次いで、二次精製
の単一ピーク部分を減圧乾燥して、トリペプチド標品
０．２ｍｇを得た。この標品につきアミノ酸配列の解析
を行った結果、Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒであることを確
認した。ここに得た本発明のＡＣＥ阻害剤に係るトリペ
プチド標品のＡＣＥに対するＩＣ50値は３．７（μＭ）
であった。
２つの主要なピークと若干の副次的なピークに分離でき
た。この２主要ピークのうち先に溶出するピークのみが
強いＡＣＥ阻害活性を示したので、先に溶出するピーク
部分を、再度アセトニトリルの濃度勾配を緩やかにした
逆相ＨＰＬＣにかけて二次精製を行い単一の成分とし
た。前記溶出パターンに於けるペプチドの検出には２１
０ｎｍの紫外線吸収量を読み取った。次いで、二次精製
の単一ピーク部分を減圧乾燥して、トリペプチド標品
０．２ｍｇを得た。この標品につきアミノ酸配列の解析
を行った結果、Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒであることを確
認した。ここに得た本発明のＡＣＥ阻害剤に係るトリペ
プチド標品のＡＣＥに対するＩＣ50値は３．７（μＭ）
であった。
【００２０】実施例２．Ｂｏｃ−Ｌ−Ｉｌｅ１ミリモル
（２３１ｍｇ相当量）、Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｙｒ（Ｂｒ−
Ｚ）ＰＡＭ樹脂２ミリモル（Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｙｒ（Ｂｒ
−Ｚ）として９８９ｍｇ相当量）を原料として、全自動
ペプチドシンセサイザー、モデル４３１Ａ（アプライド
バイオシステムズ社製）を用い、ＤＣＣ−ＨＯＢｔ法に
よりＢｏｃ−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｔｙｒ（Ｂ
ｒ−Ｚ）ＰＡＭ樹脂、即ち樹脂結合保護ペプチドを合成
した。（ここで、Ｂｏｃはｔ−ブチルオキシカルボニル
保護基、Ｂｒ−Ｚは２−ブロモベンジルオキシカルボニ
ル保護基、ＰＡＭ樹脂はフェニルアセタミド樹脂、ＤＣ
Ｃはジシクロヘキシルカルボジイミド、ＨＯＢｔは１−
ヒドロキシベンゾトリアゾールを表す。）続いて、前記
樹脂結合保護ペプチドをチオアニソール及びエタンジオ
ールの混合物とともに攪拌し、さらに、トリフルオロ酢
酸（以下、ＴＦＡという。）を添加したうえ、室温で３
０分間のトリフルオロメタンスルホン酸処理により脱保
護基と樹脂からの切断を行ってＩｌｅ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ
の粗ペプチド標品を得た。
（２３１ｍｇ相当量）、Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｙｒ（Ｂｒ−
Ｚ）ＰＡＭ樹脂２ミリモル（Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｙｒ（Ｂｒ
−Ｚ）として９８９ｍｇ相当量）を原料として、全自動
ペプチドシンセサイザー、モデル４３１Ａ（アプライド
バイオシステムズ社製）を用い、ＤＣＣ−ＨＯＢｔ法に
よりＢｏｃ−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｉｌｅ−Ｌ−Ｔｙｒ（Ｂ
ｒ−Ｚ）ＰＡＭ樹脂、即ち樹脂結合保護ペプチドを合成
した。（ここで、Ｂｏｃはｔ−ブチルオキシカルボニル
保護基、Ｂｒ−Ｚは２−ブロモベンジルオキシカルボニ
ル保護基、ＰＡＭ樹脂はフェニルアセタミド樹脂、ＤＣ
Ｃはジシクロヘキシルカルボジイミド、ＨＯＢｔは１−
ヒドロキシベンゾトリアゾールを表す。）続いて、前記
樹脂結合保護ペプチドをチオアニソール及びエタンジオ
ールの混合物とともに攪拌し、さらに、トリフルオロ酢
酸（以下、ＴＦＡという。）を添加したうえ、室温で３
０分間のトリフルオロメタンスルホン酸処理により脱保
護基と樹脂からの切断を行ってＩｌｅ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ
の粗ペプチド標品を得た。
【００２１】前記粗ペプチド標品をジエチルエーテルで
洗浄、乾燥した後、蒸留水に再溶解し、逆相ＨＰＬＣに
よる精製を行った。その際、カラムはナカライテスク５
Ｃ１８ＡＲカラムを用い、０．０５％ＴＦＡ存在下、５
〜８０％のアセトニトリルのグラジエント溶出を行っ
た。トリペプチドの検出は２１０ｎｍにおける紫外線吸
収を測定することにより行った。そのメインピークに相
当する画分を減圧乾燥した後、２Ｎ酢酸に再溶解し、さ
らに凍結乾燥して精製Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ粉末８３
ｍｇを得た。ここに得た精製Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒに
ついてプロテインシークエンサーを用いて解析した結
果、アミノ酸配列が正しいことを確認した。また、本実
施例のペプチド合成法により得たトリペプチドのＡＣＥ
に対するＩＣ50値は４．０（μＭ）であって、実施例１
に示した小麦蛋白質由来のトリペプチドであるＩｌｅ−
Ｉｌｅ−ＴｙｒのＡＣＥ阻害活性と極めて近似した値で
あった。
洗浄、乾燥した後、蒸留水に再溶解し、逆相ＨＰＬＣに
よる精製を行った。その際、カラムはナカライテスク５
Ｃ１８ＡＲカラムを用い、０．０５％ＴＦＡ存在下、５
〜８０％のアセトニトリルのグラジエント溶出を行っ
た。トリペプチドの検出は２１０ｎｍにおける紫外線吸
収を測定することにより行った。そのメインピークに相
当する画分を減圧乾燥した後、２Ｎ酢酸に再溶解し、さ
らに凍結乾燥して精製Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ粉末８３
ｍｇを得た。ここに得た精製Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒに
ついてプロテインシークエンサーを用いて解析した結
果、アミノ酸配列が正しいことを確認した。また、本実
施例のペプチド合成法により得たトリペプチドのＡＣＥ
に対するＩＣ50値は４．０（μＭ）であって、実施例１
に示した小麦蛋白質由来のトリペプチドであるＩｌｅ−
Ｉｌｅ−ＴｙｒのＡＣＥ阻害活性と極めて近似した値で
あった。
【００２２】実施例３〜実施例２３．実施例２と同様に
して、全自動ペプチドシンセサイザー、モデル４３１Ａ
（アプライドバイオシステムズ社製）を用い、本発明の
ＡＣＥ阻害剤に係る各種トリペプチドを合成した。即
ち、実施例３はＩｌｅ−Ｉｌｅ−Ｔｒｐ。実施例４はＣ
ｙｓ−Ｉｌｅ−Ｔｒｐ。実施例５はＩｌｅ−Ｖａｌ−Ｔ
ｒｐ。実施例６はＣｙｓ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ。実施例７は
Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ。実施例８はＰｒｏ−Ｖａｌ−
Ｔｒｐ。実施例９はＩｌｅ−Ｌｙｒ−Ｔｒｐ。実施例１
０はＣｙｓ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ。実施例１１はＬｙｓ−Ｉ
ｌｅ−Ｔｙｒ。実施例１２はＧｌｕ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ。
実施例１３はＴｙｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ。実施例１４はＴ
ｒｐ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ。実施例１５はＡｌａ−Ｉｌｅ−
Ｔｙｒ。実施例１６はＰｒｏ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ。実施例
１７はＭｅｔ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ。実施例１８はＩｌｅ−
Ｖａｌ−Ｔｙｒ。実施例１９はＣｙｓ−Ｖａｌ−Ｔｙ
ｒ。実施例２０はＩｌｅ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ。実施例２１
はＩｌｅ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ。実施例２２はＩｌｅ−Ｔｒ
ｐ−Ｔｙｒ。実施例２３はＩｌｅ−Ａｌａ−Ｔｙｒであ
る。次いで、それぞれのトリペプチドのＡＣＥ阻害活性
を示すＩＣ50値を、前記するＣｈｅｕｎｇらの方法の一
部を変更した方法に従って求め、実施例１ならびに実施
例２の結果とともに表１とした。
して、全自動ペプチドシンセサイザー、モデル４３１Ａ
（アプライドバイオシステムズ社製）を用い、本発明の
ＡＣＥ阻害剤に係る各種トリペプチドを合成した。即
ち、実施例３はＩｌｅ−Ｉｌｅ−Ｔｒｐ。実施例４はＣ
ｙｓ−Ｉｌｅ−Ｔｒｐ。実施例５はＩｌｅ−Ｖａｌ−Ｔ
ｒｐ。実施例６はＣｙｓ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ。実施例７は
Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ。実施例８はＰｒｏ−Ｖａｌ−
Ｔｒｐ。実施例９はＩｌｅ−Ｌｙｒ−Ｔｒｐ。実施例１
０はＣｙｓ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ。実施例１１はＬｙｓ−Ｉ
ｌｅ−Ｔｙｒ。実施例１２はＧｌｕ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ。
実施例１３はＴｙｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ。実施例１４はＴ
ｒｐ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ。実施例１５はＡｌａ−Ｉｌｅ−
Ｔｙｒ。実施例１６はＰｒｏ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ。実施例
１７はＭｅｔ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ。実施例１８はＩｌｅ−
Ｖａｌ−Ｔｙｒ。実施例１９はＣｙｓ−Ｖａｌ−Ｔｙ
ｒ。実施例２０はＩｌｅ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ。実施例２１
はＩｌｅ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ。実施例２２はＩｌｅ−Ｔｒ
ｐ−Ｔｙｒ。実施例２３はＩｌｅ−Ａｌａ−Ｔｙｒであ
る。次いで、それぞれのトリペプチドのＡＣＥ阻害活性
を示すＩＣ50値を、前記するＣｈｅｕｎｇらの方法の一
部を変更した方法に従って求め、実施例１ならびに実施
例２の結果とともに表１とした。
【００２３】即ち、表１に挙げた実施例のトリペプチド
のＡＣＥ阻害活性は、何れも通常該活性に効果ありとさ
れているＩＣ50値３０〜５０（μＭ）を遙に超えおり、
ＡＣＥ阻害剤として優れたものであった。続いて、該ト
リペプチドのアミノ酸配列において、Ｃ末端位アミノ酸
は、ＴｒｐあるいはＴｙｒで表される芳香族アミノ酸で
あり、この場合、中央位アミノ酸がＩｌｅあるいはＶａ
ｌであるときは、ＡＣＥ阻害活性が高まり、加えて、Ｎ
末端位アミノ酸がＩｌｅあるいはＣｙｓであるときはＩ
Ｃ50値が１．１〜４．０（μＭ）と、安定して極めて高
いＡＣＥ阻害活性値を示した。また、ＩｌｅーＬｙｓー
Ｔｒｐも高活性値を示した。
のＡＣＥ阻害活性は、何れも通常該活性に効果ありとさ
れているＩＣ50値３０〜５０（μＭ）を遙に超えおり、
ＡＣＥ阻害剤として優れたものであった。続いて、該ト
リペプチドのアミノ酸配列において、Ｃ末端位アミノ酸
は、ＴｒｐあるいはＴｙｒで表される芳香族アミノ酸で
あり、この場合、中央位アミノ酸がＩｌｅあるいはＶａ
ｌであるときは、ＡＣＥ阻害活性が高まり、加えて、Ｎ
末端位アミノ酸がＩｌｅあるいはＣｙｓであるときはＩ
Ｃ50値が１．１〜４．０（μＭ）と、安定して極めて高
いＡＣＥ阻害活性値を示した。また、ＩｌｅーＬｙｓー
Ｔｒｐも高活性値を示した。
【００２４】
【表１】
【００２５】
【発明の効果】本発明のＡＣＥ阻害剤は、優れたＡＣＥ
阻害活性を有するため、医薬品あるいは特定保健用食品
として、高血圧症の予防、抑制に有用である。しかも、
本発明のＡＣＥ阻害剤に係るトリペプチドは、アミノ酸
配列が規則的な低分子のペプチドであるため、比較的容
易にその活性を予測して化学合成をなし得るのみなら
ず、その一部は、食用蛋白質である小麦グルテンを原料
として酵素分解の手段により製造することもできる。
阻害活性を有するため、医薬品あるいは特定保健用食品
として、高血圧症の予防、抑制に有用である。しかも、
本発明のＡＣＥ阻害剤に係るトリペプチドは、アミノ酸
配列が規則的な低分子のペプチドであるため、比較的容
易にその活性を予測して化学合成をなし得るのみなら
ず、その一部は、食用蛋白質である小麦グルテンを原料
として酵素分解の手段により製造することもできる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｐ 21/06 8214−4Ｂ
Claims (10)
- 【請求項１】 Ｃ末端位アミノ酸が芳香族アミノ酸であ
るトリペプチドからなるアンジオテンシン変換酵素阻害
剤。 - 【請求項２】 芳香族アミノ酸がＴｒｐであるトリペプ
チドからなる請求項１記載のアンジオテンシン変換酵素
阻害剤。 - 【請求項３】 中央位アミノ酸がＩｌｅであるトリペプ
チドからなる請求項２記載のアンジオテンシン変換酵素
阻害剤。 - 【請求項４】 Ｃ末端位アミノ酸が芳香族アミノ酸のＴ
ｙｒであるトリペプチドからなる請求項３記載のアンジ
オテンシン変換酵素阻害剤。 - 【請求項５】 中央位アミノ酸がＶａｌであるトリペプ
チドからなる請求項２記載のアンジオテンシン変換酵素
阻害剤。 - 【請求項６】 Ｃ末端位アミノ酸が芳香族アミノ酸のＴ
ｙｒであるトリペプチドからなる請求項５記載のアンジ
オテンシン変換酵素阻害剤。 - 【請求項７】 Ｎ末端位アミノ酸がＩｌｅであるトリペ
プチドからなる請求項３、請求項４、請求項５または請
求項６記載のアンジオテンシン変換酵素阻害剤。 - 【請求項８】 Ｎ末端位アミノ酸がＩｌｅであり中央位
アミノ酸がＬｙｓであるトリペプチドからなる請求項２
記載のアンジオテンシン変換酵素阻害剤。 - 【請求項９】 Ｎ末端位アミノ酸がＣｙｓであるトリペ
プチドからなる請求項３、請求項４、請求項５または請
求項６記載のアンジオテンシン変換酵素阻害剤。 - 【請求項１０】 小麦蛋白質を酵素分解して得られるＮ
末端位アミノ酸がＩｌｅ、中央位アミノ酸がＩｌｅおよ
びＣ末端位アミノ酸がＴｙｒであるトリペプチドからな
るアンジオテンシン変換酵素阻害剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4260550A JPH0616568A (ja) | 1991-09-17 | 1992-09-04 | アンジオテンシン変換酵素阻害剤 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26253791 | 1991-09-17 | ||
| JP3-262537 | 1991-09-17 | ||
| JP4260550A JPH0616568A (ja) | 1991-09-17 | 1992-09-04 | アンジオテンシン変換酵素阻害剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0616568A true JPH0616568A (ja) | 1994-01-25 |
Family
ID=26544655
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4260550A Pending JPH0616568A (ja) | 1991-09-17 | 1992-09-04 | アンジオテンシン変換酵素阻害剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0616568A (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004057976A1 (en) * | 2002-12-24 | 2004-07-15 | Her Majesty The Queen In Right Of Canada As Represented By The Minister Of Agriculture And Agri-Food Canada | Ace inhibitory peptides from plant materials |
| WO2005063245A1 (ja) * | 2003-12-26 | 2005-07-14 | Shimaya Co., Ltd. | 血圧降下用組成物 |
| JP2005247765A (ja) * | 2004-03-04 | 2005-09-15 | Senmi Ekisu Co Ltd | 血管平滑筋細胞増殖抑制剤 |
| WO2007004876A2 (en) | 2005-06-30 | 2007-01-11 | Campina Nederland Holding B.V. | Peptides inhibiting angiotensin-converting enzyme |
| WO2007119590A1 (ja) * | 2006-03-31 | 2007-10-25 | Nisshin Pharma Inc. | 小麦由来の血圧低下用組成物 |
| JP2007326790A (ja) * | 2006-06-06 | 2007-12-20 | Aomori Prefecture | アピオスの酢酸・酵素処理物製造方法、アピオス由来ペプチドおよびその製造方法 |
| JP2008278812A (ja) * | 2007-05-11 | 2008-11-20 | Nippon Barrier Free:Kk | 鮭類卵巣膜抽出成分組成物の製造方法 |
-
1992
- 1992-09-04 JP JP4260550A patent/JPH0616568A/ja active Pending
Cited By (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004057976A1 (en) * | 2002-12-24 | 2004-07-15 | Her Majesty The Queen In Right Of Canada As Represented By The Minister Of Agriculture And Agri-Food Canada | Ace inhibitory peptides from plant materials |
| JP2006512371A (ja) * | 2002-12-24 | 2006-04-13 | ハー マジェスティ ザ クイーン イン ライト オブ カナダ アズ リプレゼンティッド バイ ザ ミニスター オブ アグリカルチャー アンド アグリ−フード カナダ | 植物材料由来のａｃｅ阻害ペプチド |
| US7566690B2 (en) | 2002-12-24 | 2009-07-28 | Her Majesty The Queen In Right Of Canada As Represented By The Minister Of Agriculture And Agri-Food Canada | Ace inhibitory peptides from plant materials |
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| EP1907412A2 (en) * | 2005-06-30 | 2008-04-09 | Campina Nederland Holding B.V. | Peptides inhibiting angiotensin-converting enzyme |
| WO2007004876A2 (en) | 2005-06-30 | 2007-01-11 | Campina Nederland Holding B.V. | Peptides inhibiting angiotensin-converting enzyme |
| EP1907412B1 (en) * | 2005-06-30 | 2012-04-11 | Campina Nederland Holding B.V. | Peptides inhibiting angiotensin-converting enzyme |
| WO2007119590A1 (ja) * | 2006-03-31 | 2007-10-25 | Nisshin Pharma Inc. | 小麦由来の血圧低下用組成物 |
| JPWO2007119590A1 (ja) * | 2006-03-31 | 2009-08-27 | 日清ファルマ株式会社 | 小麦由来の血圧低下用組成物 |
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| JP2008278812A (ja) * | 2007-05-11 | 2008-11-20 | Nippon Barrier Free:Kk | 鮭類卵巣膜抽出成分組成物の製造方法 |
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