JPH05268963A - Dnaの固相抽出精製 - Google Patents
Dnaの固相抽出精製Info
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- JPH05268963A JPH05268963A JP4113578A JP11357892A JPH05268963A JP H05268963 A JPH05268963 A JP H05268963A JP 4113578 A JP4113578 A JP 4113578A JP 11357892 A JP11357892 A JP 11357892A JP H05268963 A JPH05268963 A JP H05268963A
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
- C07H1/06—Separation; Purification
- C07H1/08—Separation; Purification from natural products
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
- C12N15/1006—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 本発明は、あらゆる形態のあらゆる源からD
NAを精製する方法を提供する。 【構成】 本発明の方法は、DNAの精製において水溶
性有機溶媒を使用することからなる。水溶性有機溶媒、
例えばエタノール、プロパノール、およびイソプロパノ
ールを使用することにより、DNAは高い回収率をもっ
て精製される。さらに水溶性有機溶媒の使用により、カ
オトロプのような腐食性かつ有毒な組成物の使用が避け
られる。
NAを精製する方法を提供する。 【構成】 本発明の方法は、DNAの精製において水溶
性有機溶媒を使用することからなる。水溶性有機溶媒、
例えばエタノール、プロパノール、およびイソプロパノ
ールを使用することにより、DNAは高い回収率をもっ
て精製される。さらに水溶性有機溶媒の使用により、カ
オトロプのような腐食性かつ有毒な組成物の使用が避け
られる。
Description
【0001】
【産業上の利用分野】本発明は分子生物学の分野に関す
る。特に、本発明はデオキシリボ核酸の精製の分野に関
する。
る。特に、本発明はデオキシリボ核酸の精製の分野に関
する。
【0002】
【従来の技術】分子生物学および関連する学問分野の絶
え間ない進歩は、前進した技術を十分に理解しおよび発
展させるために、改良された手段を継続的に必要とす
る。
え間ない進歩は、前進した技術を十分に理解しおよび発
展させるために、改良された手段を継続的に必要とす
る。
【0003】様々な技術に、デオキシリボ核酸(DN
A)を種々の形態で使用することが含まれる。例えば、
組換えDNA技術の領域の進歩は、常にDNAをプロー
ブ、ゲノムDNA、およびプラスミドDNAの形状で用
いることを要求する。
A)を種々の形態で使用することが含まれる。例えば、
組換えDNA技術の領域の進歩は、常にDNAをプロー
ブ、ゲノムDNA、およびプラスミドDNAの形状で用
いることを要求する。
【0004】診断分野の進歩もまた、DNAを種々の方
法で用い続けている。例えば、DNAプローブは、ヒト
の病原因子の検出および診断に日常的に用いられてい
る。同様にDNAは遺伝疾患の検出に用いられている。
DNAはまた食品汚染の検出にも用いられている。さら
に、DNAは遺伝地図の作製からクローニングおよび組
換え発現におよぶ種々の理由により、興味あるDNAの
位置確認、同定および単離において日常的に用いられて
いる。
法で用い続けている。例えば、DNAプローブは、ヒト
の病原因子の検出および診断に日常的に用いられてい
る。同様にDNAは遺伝疾患の検出に用いられている。
DNAはまた食品汚染の検出にも用いられている。さら
に、DNAは遺伝地図の作製からクローニングおよび組
換え発現におよぶ種々の理由により、興味あるDNAの
位置確認、同定および単離において日常的に用いられて
いる。
【0005】多くの場合、DNAは極めて少量でしか入
手できず、そして単離および精製操作が煩雑で時間を要
する。このしばしば時間を浪費する煩雑な操作はDNA
の損失に結びつきやすい。血清、尿およびバクテリアの
カルチャーから得られた試料のDNAの精製において
は、コンタミネーションおよび疑陽性の結果が生じると
いう危険性も加わる。
手できず、そして単離および精製操作が煩雑で時間を要
する。このしばしば時間を浪費する煩雑な操作はDNA
の損失に結びつきやすい。血清、尿およびバクテリアの
カルチャーから得られた試料のDNAの精製において
は、コンタミネーションおよび疑陽性の結果が生じると
いう危険性も加わる。
【0006】典型的なDNA精製手法には、腐食性で有
毒な組成物の使用が含まれる。典型的なDNA精製手法
は、高濃度のカオトロピック塩(例えばヨウ化ナトリウ
ムおよび過塩素酸ナトリウム)を使用する。
毒な組成物の使用が含まれる。典型的なDNA精製手法
は、高濃度のカオトロピック塩(例えばヨウ化ナトリウ
ムおよび過塩素酸ナトリウム)を使用する。
【0007】DNAの精製には多くの手法が存在する。
DNA精製分野での最近の活動が示しているように、最
適なDNA精製手法を求めて絶え間無い探究が行われて
いる。米国特許第4,923,978号に開示されてい
るDNAの精製法では、蛋白質とDNAの溶液を水酸基
を持たせた支持体に通過させて蛋白質を結合させ、そし
てDNAを溶出している。米国特許第4,935,34
2号で開示されているDNAの精製法では、DNAを選
択的に陰イオン交換体に結合させ、つづいて溶出してい
る。米国特許第4,946,952号は、水溶性のケト
ンで沈澱させることよりなるDNAの単離法を開示して
いる。カオトロピック剤を用いたDNAの精製手法およ
び透析されたDNAが、米国特許第4,900,677
号に開示されている。
DNA精製分野での最近の活動が示しているように、最
適なDNA精製手法を求めて絶え間無い探究が行われて
いる。米国特許第4,923,978号に開示されてい
るDNAの精製法では、蛋白質とDNAの溶液を水酸基
を持たせた支持体に通過させて蛋白質を結合させ、そし
てDNAを溶出している。米国特許第4,935,34
2号で開示されているDNAの精製法では、DNAを選
択的に陰イオン交換体に結合させ、つづいて溶出してい
る。米国特許第4,946,952号は、水溶性のケト
ンで沈澱させることよりなるDNAの単離法を開示して
いる。カオトロピック剤を用いたDNAの精製手法およ
び透析されたDNAが、米国特許第4,900,677
号に開示されている。
【0008】現在知られているDNA精製手法はその目
的を達成することが可能であるとは言え、そのような腐
食性で有毒な化合物(例えば最もしばしば用いられるカ
オトロピック剤)の使用なしにDNAを精製し、かつ増
大量のDNAを取得できることが望ましい。
的を達成することが可能であるとは言え、そのような腐
食性で有毒な化合物(例えば最もしばしば用いられるカ
オトロピック剤)の使用なしにDNAを精製し、かつ増
大量のDNAを取得できることが望ましい。
【0009】
【発明が解決しようとする課題】本発明は非腐食性で非
毒性の溶媒を用いることよりなるDNAの精製法を提供
する。
毒性の溶媒を用いることよりなるDNAの精製法を提供
する。
【0010】本発明の一態様においては、水溶性有機溶
媒を添加してDNAを親水性表面に結合させることより
なる、溶液からDNAを精製する方法が提供される。
媒を添加してDNAを親水性表面に結合させることより
なる、溶液からDNAを精製する方法が提供される。
【0011】好ましい態様においては、次の工程からな
る溶液からのDNAの精製方法が提供される: (a) 親水性表面を溶液に添加する; (b) 水溶性有機溶媒を添加する; (c) 工程(a) および(b) からのDNA溶液を液体画分と
非液体画分に分離する; (d) 工程(c) の非液体画分を洗浄する; (e) 工程(d) の非液体画分から液体画分を除去する; (f) (e) の非液体画分からDNAを遊離させる。
る溶液からのDNAの精製方法が提供される: (a) 親水性表面を溶液に添加する; (b) 水溶性有機溶媒を添加する; (c) 工程(a) および(b) からのDNA溶液を液体画分と
非液体画分に分離する; (d) 工程(c) の非液体画分を洗浄する; (e) 工程(d) の非液体画分から液体画分を除去する; (f) (e) の非液体画分からDNAを遊離させる。
【0012】本発明は、より大量の精製DNAを得るた
めに特に有用である。加えて、DNAは任意の親水性表
面に結合させて精製することができる。また、精製は室
温で好適に行うことができる。
めに特に有用である。加えて、DNAは任意の親水性表
面に結合させて精製することができる。また、精製は室
温で好適に行うことができる。
【0013】本発明は任意のDNA精製手法で提唱され
ている結合バッファーの代わりに水溶性有機溶媒を用い
て行うことができる。本明細書中で用いられる「精製」
とは実質的に細胞屑その他を含まないDNAを取得する
ことを意味する。
ている結合バッファーの代わりに水溶性有機溶媒を用い
て行うことができる。本明細書中で用いられる「精製」
とは実質的に細胞屑その他を含まないDNAを取得する
ことを意味する。
【0014】
【課題を解決するための手段】DNAの精製または単離
工程の出発時には、どの場合も所望のDNAを供給源か
ら取得することが必要である。血清、尿およびバクテリ
アのカルチャー等の試料からDNAを得る典型的手法は
よく知られており、日常的方法で行うことができる。同
様にゲノムライブラリー等からDNAを得る技術も日常
的方法が知られている。
工程の出発時には、どの場合も所望のDNAを供給源か
ら取得することが必要である。血清、尿およびバクテリ
アのカルチャー等の試料からDNAを得る典型的手法は
よく知られており、日常的方法で行うことができる。同
様にゲノムライブラリー等からDNAを得る技術も日常
的方法が知られている。
【0015】本発明は個々の供給源から得られたDNA
の精製に関する。本発明の実施に際してDNAの起源は
キーポイントではない。発明のキーポイントは供給源か
ら取得した後にDNAを精製する能力である。DNAを
得るための典型的方法は、DNAを溶液中に懸濁させた
段階で終わっている。生物学的サンプルからDNAを単
離するための文献には次のものが含まれる:Hardi
ng,J.D.,Gebeyehu,G.,Bebe
e,R.,Simms,D.,Ktevan,L.,N
ucleic Acids Research,17:
6947(1989)およびMarko,M.A.,C
hipperfield,R.,およびBirnboi
m,H.C.,Analytical Biochem
istry,121:382(1982)。プラスミド
DNAの単離方法は、Lutze,L.H.,Wine
gar,R.A.,Nucleic Acids Re
search 20:6150(1990)に記載され
ている。生物学的サンプルからの二本鎖DNAの抽出
は、Yamada,O.,Matsumoto,T.,
Nakashima,M.,Hagri,S.,Kam
ahora,T.,Ueyama,H.,Kishi,
Y.,Uemura H.,Kurimura,T.,
Journal of Virological Me
thods 27:203(1990)に記載されてい
る。大部分のDNA溶液は、DNAを適当なバッファー
(例えばTE(トリス−EDTA)、TEAバッファー
(40mMトリス−酢酸,1mM EDTA))中またはラ
イゼート中に含んでいる。
の精製に関する。本発明の実施に際してDNAの起源は
キーポイントではない。発明のキーポイントは供給源か
ら取得した後にDNAを精製する能力である。DNAを
得るための典型的方法は、DNAを溶液中に懸濁させた
段階で終わっている。生物学的サンプルからDNAを単
離するための文献には次のものが含まれる:Hardi
ng,J.D.,Gebeyehu,G.,Bebe
e,R.,Simms,D.,Ktevan,L.,N
ucleic Acids Research,17:
6947(1989)およびMarko,M.A.,C
hipperfield,R.,およびBirnboi
m,H.C.,Analytical Biochem
istry,121:382(1982)。プラスミド
DNAの単離方法は、Lutze,L.H.,Wine
gar,R.A.,Nucleic Acids Re
search 20:6150(1990)に記載され
ている。生物学的サンプルからの二本鎖DNAの抽出
は、Yamada,O.,Matsumoto,T.,
Nakashima,M.,Hagri,S.,Kam
ahora,T.,Ueyama,H.,Kishi,
Y.,Uemura H.,Kurimura,T.,
Journal of Virological Me
thods 27:203(1990)に記載されてい
る。大部分のDNA溶液は、DNAを適当なバッファー
(例えばTE(トリス−EDTA)、TEAバッファー
(40mMトリス−酢酸,1mM EDTA))中またはラ
イゼート中に含んでいる。
【0016】DNAを適当な溶液中に取得した後、典型
的には結合マトリックスをこの溶液に添加する。一般に
用いられる結合マトリックスは、ガラスまたは珪そう土
の形態のシリカである。
的には結合マトリックスをこの溶液に添加する。一般に
用いられる結合マトリックスは、ガラスまたは珪そう土
の形態のシリカである。
【0017】結合マトリックスをDNAの溶液に添加し
た後、結合バッファーを添加する。本発明は、結合バッ
ファーとして水溶性有機溶媒を使用する。「水溶性有機
溶媒」とは、DNAを溶液の状態に保持することを可能
にする有機特性を有することを意味する。
た後、結合バッファーを添加する。本発明は、結合バッ
ファーとして水溶性有機溶媒を使用する。「水溶性有機
溶媒」とは、DNAを溶液の状態に保持することを可能
にする有機特性を有することを意味する。
【0018】粒子、ビーズ、その他の親水性表面を用い
て本発明を実施する好ましい工程は、結合工程、洗浄工
程、乾燥工程および溶出工程を含んでいる。結合工程は
一般に、DNAを含有する溶液への親水性表面の添加、
水溶性有機溶媒からなる溶液の添加(親水性表面および
水溶性有機溶媒の添加順序は重要ではない)、撹拌、遠
心分離、および液体画分の除去を含んでいる。結合工程
は、通常、少なくとも一回反復される。洗浄工程は、一
般に、溶媒を除去するための洗浄バッファーの添加(例
えば50%エタノールおよび50%(40mM トリス,
4mM EDTA,0.8N NaCl,pH7.
4))、撹拌、遠心分離、および液体の除去を含んでい
る。乾燥工程は、一般に、約40−70℃で約2ないし
20分間乾燥することよりなる。溶出工程は、一般に、
溶出バッファーの添加(表面からDNAを遊離させるた
め:例えば(10mM トリス,1mM EDTA,pH
8.0))、約30秒間の渦巻撹拌、約40−70℃に
おける約10分間の加熱、約2分間の遠心分離および液
体の回収を含んでいる。この時点で液体中にDNAが含
まれる。この溶出工程は通常少なくとも1回反復され
る。
て本発明を実施する好ましい工程は、結合工程、洗浄工
程、乾燥工程および溶出工程を含んでいる。結合工程は
一般に、DNAを含有する溶液への親水性表面の添加、
水溶性有機溶媒からなる溶液の添加(親水性表面および
水溶性有機溶媒の添加順序は重要ではない)、撹拌、遠
心分離、および液体画分の除去を含んでいる。結合工程
は、通常、少なくとも一回反復される。洗浄工程は、一
般に、溶媒を除去するための洗浄バッファーの添加(例
えば50%エタノールおよび50%(40mM トリス,
4mM EDTA,0.8N NaCl,pH7.
4))、撹拌、遠心分離、および液体の除去を含んでい
る。乾燥工程は、一般に、約40−70℃で約2ないし
20分間乾燥することよりなる。溶出工程は、一般に、
溶出バッファーの添加(表面からDNAを遊離させるた
め:例えば(10mM トリス,1mM EDTA,pH
8.0))、約30秒間の渦巻撹拌、約40−70℃に
おける約10分間の加熱、約2分間の遠心分離および液
体の回収を含んでいる。この時点で液体中にDNAが含
まれる。この溶出工程は通常少なくとも1回反復され
る。
【0019】本発明をフィルターのような親水性表面で
実施するには、好ましい工程は結合工程、洗浄工程およ
び溶出工程を含む。結合工程は一般に、DNAを含有す
る溶液への水溶性有機溶媒の添加、生じた溶液のフィル
ターへの通過(典型的には、ブロッターのウェル、また
は他の任意の濾過システム(例えば、シリンジ濾過器)
を用いる)、および所望によりこのフィルターに水溶性
有機溶媒を通過させることを含んでいる。濾過の後フィ
ルターを軽く風乾する(約1分間)。洗浄工程は、一般
に、フィルターへバッファーを通過させること(溶媒を
除去するため)からなる。一般に、このフィルターを軽
く風乾する(約1分間)。溶出工程は一般にフィルター
からDNAを除去することからなる。溶液に接触したフ
ィルターの部分を切り取って遠心管に入れる。次に、溶
出バッファー(フィルターからDNAを遊離させるた
め)を添加して、約40−60℃で約10分間加熱す
る。そして、DNAを含んだ液体を取り出す。
実施するには、好ましい工程は結合工程、洗浄工程およ
び溶出工程を含む。結合工程は一般に、DNAを含有す
る溶液への水溶性有機溶媒の添加、生じた溶液のフィル
ターへの通過(典型的には、ブロッターのウェル、また
は他の任意の濾過システム(例えば、シリンジ濾過器)
を用いる)、および所望によりこのフィルターに水溶性
有機溶媒を通過させることを含んでいる。濾過の後フィ
ルターを軽く風乾する(約1分間)。洗浄工程は、一般
に、フィルターへバッファーを通過させること(溶媒を
除去するため)からなる。一般に、このフィルターを軽
く風乾する(約1分間)。溶出工程は一般にフィルター
からDNAを除去することからなる。溶液に接触したフ
ィルターの部分を切り取って遠心管に入れる。次に、溶
出バッファー(フィルターからDNAを遊離させるた
め)を添加して、約40−60℃で約10分間加熱す
る。そして、DNAを含んだ液体を取り出す。
【0020】適する水溶性有機溶液には、エタノール、
プロパノール、イソプロパノールおよびアセトニトリル
が含まれる。本発明の実施のためには水溶性有機溶媒を
種々の濃度で用いることもできる。好ましくは、溶媒は
100%イソプロパノール、エタノールまたはプロパノ
ールである。最も好ましくは、溶媒はイソプロパノール
である。水溶性有機溶媒の適する濃度は、エタノール、
プロパノール、イソプロパノール、およびアセトニトリ
ルの1%ないし100%溶液を包含する。好ましくは、
その濃度は20%ないし80%である。最も好ましく
は、この濃度は40ないし60%である。典型的には、
溶媒の濃度を種々に低下させることは水によるが、しか
しながら、複数溶媒の組み合わせを用いることもでき
る。溶媒の好ましい組み合わせには、イソプロパノール
とエタノール、イソプロパノールとプロパノール、およ
びプロパノールとエタノールが含まれる。
プロパノール、イソプロパノールおよびアセトニトリル
が含まれる。本発明の実施のためには水溶性有機溶媒を
種々の濃度で用いることもできる。好ましくは、溶媒は
100%イソプロパノール、エタノールまたはプロパノ
ールである。最も好ましくは、溶媒はイソプロパノール
である。水溶性有機溶媒の適する濃度は、エタノール、
プロパノール、イソプロパノール、およびアセトニトリ
ルの1%ないし100%溶液を包含する。好ましくは、
その濃度は20%ないし80%である。最も好ましく
は、この濃度は40ないし60%である。典型的には、
溶媒の濃度を種々に低下させることは水によるが、しか
しながら、複数溶媒の組み合わせを用いることもでき
る。溶媒の好ましい組み合わせには、イソプロパノール
とエタノール、イソプロパノールとプロパノール、およ
びプロパノールとエタノールが含まれる。
【0021】本発明の実施に用いるために適する結合マ
トリックスには、任意の親水性表面が含まれる。本発明
の実施の使用に適する親水性表面の例には、ニトロセル
ロース、セライト珪そう土、シリカポリマー、グラスフ
ァイバー、珪酸マグネシウム、シリコーン窒素化合物
(例えばSiN4 )、珪酸アルミニウム、および二酸化
珪素が含まれる。親水性表面が有することのできる多く
の形状も本発明における使用に適する。親水性表面の適
する形状には、ビーズ、ポリマー、粒子、およびフィル
ター(例えば膜)が含まれる。
トリックスには、任意の親水性表面が含まれる。本発明
の実施の使用に適する親水性表面の例には、ニトロセル
ロース、セライト珪そう土、シリカポリマー、グラスフ
ァイバー、珪酸マグネシウム、シリコーン窒素化合物
(例えばSiN4 )、珪酸アルミニウム、および二酸化
珪素が含まれる。親水性表面が有することのできる多く
の形状も本発明における使用に適する。親水性表面の適
する形状には、ビーズ、ポリマー、粒子、およびフィル
ター(例えば膜)が含まれる。
【0022】結合バッファー、例えばよく知られている
カオトロピック剤は、その水和性のため溶液中のDNA
を親水性表面に結合させると信じられる。カオトロピッ
ク剤の水和性は、水の分子とDNAとの相互作用を低下
させると信じられる。そのため、DNAと親水性表面を
取り囲む水の分子との相互作用が強いられ、このことが
水素結合による親水性表面へのDNAの結合を生じさせ
ると信じられる。
カオトロピック剤は、その水和性のため溶液中のDNA
を親水性表面に結合させると信じられる。カオトロピッ
ク剤の水和性は、水の分子とDNAとの相互作用を低下
させると信じられる。そのため、DNAと親水性表面を
取り囲む水の分子との相互作用が強いられ、このことが
水素結合による親水性表面へのDNAの結合を生じさせ
ると信じられる。
【0023】理論により拘束や制限を受けることは望ま
ないが、本発明は水溶性有機溶媒を「結合バッファー」
として用いることにより、DNA溶液の水溶液としての
特性を低下させると信じられる。DNA溶液の水溶液と
しての特性を減じることにより、DNAと親水性表面と
の相互作用が強いられ、これにより固相抽出が奏される
と信じられる。これに加え、後記実施例で証明するよう
に、本発明は親水性表面への結合を介して精製が行わ
れ、精製は沈澱によるものではない。
ないが、本発明は水溶性有機溶媒を「結合バッファー」
として用いることにより、DNA溶液の水溶液としての
特性を低下させると信じられる。DNA溶液の水溶液と
しての特性を減じることにより、DNAと親水性表面と
の相互作用が強いられ、これにより固相抽出が奏される
と信じられる。これに加え、後記実施例で証明するよう
に、本発明は親水性表面への結合を介して精製が行わ
れ、精製は沈澱によるものではない。
【0024】本発明は、多様な供給源からおよび多様な
形態のDNAの精製に用いることができる。精製のため
のDNAの供給源には、バクテリア、バクテリオファー
ジ、標本、植物、動物、およびその他が含まれる。DN
Aは多様な形態で見出され、そのような形態には一本
鎖、二本鎖、環状、および直鎖状が含まれる。本発明は
任意の供給源からの任意の形態のDNAについて実施す
ることができる。
形態のDNAの精製に用いることができる。精製のため
のDNAの供給源には、バクテリア、バクテリオファー
ジ、標本、植物、動物、およびその他が含まれる。DN
Aは多様な形態で見出され、そのような形態には一本
鎖、二本鎖、環状、および直鎖状が含まれる。本発明は
任意の供給源からの任意の形態のDNAについて実施す
ることができる。
【0025】以下の実施例において、本明細書中に説明
されている発明の特定の態様を説明する。当業者に明ら
かなとおり、種々の変更および修飾が可能であり、それ
らは本発明の範囲内である。
されている発明の特定の態様を説明する。当業者に明ら
かなとおり、種々の変更および修飾が可能であり、それ
らは本発明の範囲内である。
【0026】
【0027】
【実施例1】この実験は、6M NaClO4(プレッ
プ ア ジーン(prep−a−gene))に対する
各結合バッファーの結合特性を比較する。すべての実験
は、プレップ ア ジーン マトリックス(Prep−
a−geneキット、バイオラッド社(Bio−Ra
d)、リッチモンド、CA)中で行い、結合バッファー
を変える以外は同じ条件で行う。
プ ア ジーン(prep−a−gene))に対する
各結合バッファーの結合特性を比較する。すべての実験
は、プレップ ア ジーン マトリックス(Prep−
a−geneキット、バイオラッド社(Bio−Ra
d)、リッチモンド、CA)中で行い、結合バッファー
を変える以外は同じ条件で行う。
【0028】物質 : LOT # ポリエチレングリコール フルカ(フルカケミカル 24718584 MW (PEG) コーポレーション、ロンコン、 NY) 尿素 フィッシャー(フィッシャー 895704 サイエンティフィック、 ノークロス、GA) KSCN シグマ(シグマケミカル 488-0409 (チオシアン酸 カンパニー、セントルイス、 カリウム) Mo.) エタノール(EtOH) フィッシャー 902233 ブタノール(BuOH) フィッシャー 890783 グリセロール シグマ 104F-0026 塩酸グアニジン BRL 9DB209 水酸化ナトリウム(NaOH) フィッシャー 862699 水酸化アンモニウム フィッシャー 860118 (NH4OH) 硫酸(H2SO4) フィッシャー 860102 アセトニトリル(CH3CN) フィッシャー 890789 酢酸ナトリウム(NaOAc) シグマ S-2889 ロット19F-0010 プレップ ア ジーン バイオラッド コントロール キット 41180 λDNA BRL(ベセスダリサーチ 56125A (503μg/803μl) ラブズ、グランドアイランド、 NY)方法 :13すべての結合バッファーを同じ条件で使用し
た。
た。
【0029】各13サンプルに20μlのプレップ ア
ジーン 珪そう土溶液を加えて、次に750μlの結
合バッファーを軽く渦巻撹拌し、そして5分間45℃に
おいてインキュベートし、2分間遠心分離し、上清を捨
て、そして結合工程を繰り返した。500μlの洗浄バ
ッファーで洗浄し、遠心分離し、バッファーを捨て、そ
して繰り返した。25μlの溶出バッファーを加えて、
渦巻撹拌し、5分間50℃においてインキュベートし、
遠心分離し、上清を保管し、そして繰り返した。各13
サンプルおよび一つのスタンダードをゲル電気泳動し
た。
ジーン 珪そう土溶液を加えて、次に750μlの結
合バッファーを軽く渦巻撹拌し、そして5分間45℃に
おいてインキュベートし、2分間遠心分離し、上清を捨
て、そして結合工程を繰り返した。500μlの洗浄バ
ッファーで洗浄し、遠心分離し、バッファーを捨て、そ
して繰り返した。25μlの溶出バッファーを加えて、
渦巻撹拌し、5分間50℃においてインキュベートし、
遠心分離し、上清を保管し、そして繰り返した。各13
サンプルおよび一つのスタンダードをゲル電気泳動し
た。
【0030】以下の結合バッファーを使用のために示
す: 1)プレップ ア ジーン キットのスタンダード6M
NaClO4(過塩素酸ナトリウム) 2)10% PEG 3)20% PEG 4)6M グリセロール 5)95% エタノール 6)100% ブタノール 7)6M KSCN 8)6M 尿素 9)8M 塩酸グアニジン 10)30% NH4OH 11)10% H2SO4 12)100% CH3CN 13)6M NaOAc 14)スタンダードλDNA 13の溶出DNAサンプルとオリジナルDNAサンプル
(λDNA)とを比較したゲル電気泳動の結果によれ
ば、エタノールは固相上(プレップ ア ジーンマトリ
ックス)におけるDNAの保持に関して、試験された6
M過塩素酸ナトリウムおよび他のどの結合バッファーよ
りも優れている。アセトニトリルも良好であった。
す: 1)プレップ ア ジーン キットのスタンダード6M
NaClO4(過塩素酸ナトリウム) 2)10% PEG 3)20% PEG 4)6M グリセロール 5)95% エタノール 6)100% ブタノール 7)6M KSCN 8)6M 尿素 9)8M 塩酸グアニジン 10)30% NH4OH 11)10% H2SO4 12)100% CH3CN 13)6M NaOAc 14)スタンダードλDNA 13の溶出DNAサンプルとオリジナルDNAサンプル
(λDNA)とを比較したゲル電気泳動の結果によれ
ば、エタノールは固相上(プレップ ア ジーンマトリ
ックス)におけるDNAの保持に関して、試験された6
M過塩素酸ナトリウムおよび他のどの結合バッファーよ
りも優れている。アセトニトリルも良好であった。
【0031】
【実施例2】この実験は、実施例1において得られた結
果を拡張するものである。この実験において、エタノー
ルとCH3CNが良好なDNA結合バッファーであるこ
とが示された。この実験において、どの程度の%のエタ
ノール、CH3CNおよびメタノールが結合バッファー
中に存在することができ、そしてDNAの良好な分離お
よび回収が得られるかが測定される。すべての実験はプ
レップ ア ジーンマトリックスを使用して実施され
る。
果を拡張するものである。この実験において、エタノー
ルとCH3CNが良好なDNA結合バッファーであるこ
とが示された。この実験において、どの程度の%のエタ
ノール、CH3CNおよびメタノールが結合バッファー
中に存在することができ、そしてDNAの良好な分離お
よび回収が得られるかが測定される。すべての実験はプ
レップ ア ジーンマトリックスを使用して実施され
る。
【0032】物質: プレップ ア ジーン キット バイオラッド エタノール フィッシャー メタノール フィッシャー CH3CN フィッシャー 1%アガロースゲル λDNA BRL 56125A,9モル 104 503μg(803
μl中)実験 15画分/実験が使用される結合バッファー中のみを変
更して行われた。洗浄バッファー、溶出バッファーおよ
び固相はすべてプレップ ア ジーン キットのもので
あった。その方法は、実質的に実施例1に教示されたと
おり実施される。1.3μlのλDNAを各画分におい
て使用する。
μl中)実験 15画分/実験が使用される結合バッファー中のみを変
更して行われた。洗浄バッファー、溶出バッファーおよ
び固相はすべてプレップ ア ジーン キットのもので
あった。その方法は、実質的に実施例1に教示されたと
おり実施される。1.3μlのλDNAを各画分におい
て使用する。
【0033】画分(100%以外は水で希釈する) 1)100% エタノール(水溶液) 2)80% エタノール(水溶液) 3)60% エタノール(水溶液) 4)40% エタノール(水溶液) 5)20% エタノール(水溶液) 6)100% メタノール(水溶液) 7)80% メタノール(水溶液) 8)60% メタノール(水溶液) 9)40% メタノール(水溶液) 10)20% メタノール(水溶液) 11)100% CH3CN(水溶液) 12)80% CH3CN(水溶液) 13)60% CH3CN(水溶液) 14)40% CH3CN(水溶液) 15)20% CH3CN(水溶液) 15の試験画分から溶出されたDNAはゲル電気泳動に
より分析され、そしてスタンダードDNAサンプル(4
8μlのTEバッファー(10mM トリス塩酸、1m
M EDTA、pH8.0)中の1.3μlのλDN
A)と比較された。その結果、100%エタノールが最
良の結合バッファーであり、2番目が100%アセトニ
トリルであった。結合バッファーに付与されたより有機
的な特性がより良好なDNAの保持をもたらす。
より分析され、そしてスタンダードDNAサンプル(4
8μlのTEバッファー(10mM トリス塩酸、1m
M EDTA、pH8.0)中の1.3μlのλDN
A)と比較された。その結果、100%エタノールが最
良の結合バッファーであり、2番目が100%アセトニ
トリルであった。結合バッファーに付与されたより有機
的な特性がより良好なDNAの保持をもたらす。
【0034】
【実施例3】この実験は、結合能力に関して、プロパノ
ール(PrOH)、イソプロパノール(iPrOH)お
よびエタノール(EtOH)と、それらの互いの希釈物
並びにNaClO4とを比較している。プレップ ア
ジーン マトリックスに対するDNAの結合への有機的
効果を最大にすることを目的とする。
ール(PrOH)、イソプロパノール(iPrOH)お
よびエタノール(EtOH)と、それらの互いの希釈物
並びにNaClO4とを比較している。プレップ ア
ジーン マトリックスに対するDNAの結合への有機的
効果を最大にすることを目的とする。
【0035】物質: プレップ ア ジーン キット バイオラッド コント
ロール(キット)41492、 マトリックス 40523 λDNA(503μg/803μl) BRL 56125A、 9モル 104 1%アガロースゲル EtOH フィッシャー 902233 PrOH フィッシャー 744241 iPrOH アルドリッヒ 06208T
W DMSO アルドリッヒ 9624HC (ジメチルスルフォキシド)方法 :13画分について行われた。各13画分に使用さ
れた結合バッファーを以下に示す。すべて、結合バッフ
ァー以外はプレップ ア ジーン キット材料を用いて
行われ、そして実質的には実施例1の教示によるプレッ
プ ア ジーン方法を用いて行われた。
ロール(キット)41492、 マトリックス 40523 λDNA(503μg/803μl) BRL 56125A、 9モル 104 1%アガロースゲル EtOH フィッシャー 902233 PrOH フィッシャー 744241 iPrOH アルドリッヒ 06208T
W DMSO アルドリッヒ 9624HC (ジメチルスルフォキシド)方法 :13画分について行われた。各13画分に使用さ
れた結合バッファーを以下に示す。すべて、結合バッフ
ァー以外はプレップ ア ジーン キット材料を用いて
行われ、そして実質的には実施例1の教示によるプレッ
プ ア ジーン方法を用いて行われた。
【0036】使用された結合バッファー: 1) 100% プロパノール 2) 80% プロパノール 20% H2O 3) 100% イソプロパノール 4) 80% イソプロパノール 20% H2O 5) 100% DMSO 6) 80% DMSO 20% H2O 7) 20% プロパノール 80% エタノール 8) 40% プロパノール 60% エタノール 9) 60% プロパノール 40% エタノール 10) 20% イソプロパノール 80% エタノー
ル 11) 40% イソプロパノール 60% エタノー
ル 12) 60% イソプロパノール 40% エタノー
ル 13) プレップ ア ジーン結合バッファー 6M
NaClO4 14) スタンダードDNA(λDNA) 溶出されたDNAをゲル電気泳動により分析し、そして
スタンダードDNAサンプルと比較した。その結果、1
00%イソプロパノールが最良の結合バッファーである
ことが示唆される。100%プロパノールも良好なDN
Aの保持をもたらした。イソプロパノールおよびプロパ
ノールは水に80%に希釈することができ、DNAの保
持をもたらすことができた。この試験により、エタノー
ル中のイソプロパノールおよびプロパノールの%が増加
すると共に保持するDNAの量も増加した。
ル 11) 40% イソプロパノール 60% エタノー
ル 12) 60% イソプロパノール 40% エタノー
ル 13) プレップ ア ジーン結合バッファー 6M
NaClO4 14) スタンダードDNA(λDNA) 溶出されたDNAをゲル電気泳動により分析し、そして
スタンダードDNAサンプルと比較した。その結果、1
00%イソプロパノールが最良の結合バッファーである
ことが示唆される。100%プロパノールも良好なDN
Aの保持をもたらした。イソプロパノールおよびプロパ
ノールは水に80%に希釈することができ、DNAの保
持をもたらすことができた。この試験により、エタノー
ル中のイソプロパノールおよびプロパノールの%が増加
すると共に保持するDNAの量も増加した。
【0037】多量の高分子量のDNA(電気泳動の始点
にほぼ近い位置のDNA)はiPrOH(100%)を
用いると保持し、これは使用された結合バッファー中で
最も高かった。DMSOはDNAを保持しなかった。
にほぼ近い位置のDNA)はiPrOH(100%)を
用いると保持し、これは使用された結合バッファー中で
最も高かった。DMSOはDNAを保持しなかった。
【0038】以下に、結合バッファーがDNAを保持す
る能力に関して、スタンダードと比較して好ましいもの
から順にゲル電気泳動の分析に基づく結果を集約する。
る能力に関して、スタンダードと比較して好ましいもの
から順にゲル電気泳動の分析に基づく結果を集約する。
【0039】DNAを保持するもの 保持しないもの 1)iPrOH 10% PEG 2)EtOH 20% PEG 3)6M NaClO4 6M グリセロール 4)60% iPrOH 40% EtOH 6M 尿素 5)60% PrOH 40% EtOH 30% NH4OH 6)PrOH 10% H2SO4 7)A)40% iPrOH 60% EtOH 6M NaOAC B)40% PrOH 60% EtOH 8)A)80% iPrOH 20% H2O MeOH 100% B)80% PrOH 20% H2O または水による希釈液 9)A)20% PrOH 80% EtOH 100%未満のEtOH B)20% PrOH 80% EtOH 10)8M塩酸グアニジン 100%未満のCH3CN 11)6M KSCN 100%未満のDMSO 12)CH3CN 13)NaI 14)BuOH 15)6M グアニジンHSCN 16)6M (NH4)2SO4 17)6M NaCl
【0040】
【実施例4】この実験は、さまざまなフィルター(膜)
に対するDNAの固着能力に関して、結合バッファーN
aO3ClとiPrOHを比較している。
に対するDNAの固着能力に関して、結合バッファーN
aO3ClとiPrOHを比較している。
【0041】物質:ゲルマンサイエンス(Gelman
Sciences,Inc.)フィルター(ゲルマン
サイエンス社、アンアーバー、MI)タイプAEグラス
フィルター(ロット603202)。
Sciences,Inc.)フィルター(ゲルマン
サイエンス社、アンアーバー、MI)タイプAEグラス
フィルター(ロット603202)。
【0042】MSIグラスファイバーフィルター(ミク
ロンセパレーション(MicronSeparatio
n,Inc.)、ウエストボール、MA)(ロット19
571)。
ロンセパレーション(MicronSeparatio
n,Inc.)、ウエストボール、MA)(ロット19
571)。
【0043】ワットマンGF/B(ワットマン社(Wh
atman Ltd.)、イングランド、英国)コント
ロール 7823 ワットマンGF/D(コントロール 4706) ワットマンGF/C(コントロール 1505) λDNA(BRL)ロット9 mo 1104(503
μg/803μl) ニトロセルロース(シュライヒャー アンド シュエル
(Schleicher & Schuell)、キー
ン、NH)44031621 プレップ ア ジーン(バイオラッド)コントロール
4004。
atman Ltd.)、イングランド、英国)コント
ロール 7823 ワットマンGF/D(コントロール 4706) ワットマンGF/C(コントロール 1505) λDNA(BRL)ロット9 mo 1104(503
μg/803μl) ニトロセルロース(シュライヒャー アンド シュエル
(Schleicher & Schuell)、キー
ン、NH)44031621 プレップ ア ジーン(バイオラッド)コントロール
4004。
【0044】 iPrOH フィッシャー 744241装置 :ブロッター(バイオラッド社のバイオ/ドット装
置)方法 :DNAを捕まえるのに使用される膜を各々の場合
に変える以外は、同じ方法により6画分を調製した。約
1.3μlのλDNAを約248μlのTEバッファー
に溶解する。これを約750μlのiPrOHで希釈
し、そしてフィルターを通過させることによりブロッタ
ーに添加する。すべての液体が通過した後、約1分間風
乾する。再び約750μlのiPrOHを添加し、約1
分間風乾する。すべてのiPrOHが通過した後、約7
50μlのプレップ ア ジーン洗浄バッファーを添加
し、通過後約1分間風乾する。
置)方法 :DNAを捕まえるのに使用される膜を各々の場合
に変える以外は、同じ方法により6画分を調製した。約
1.3μlのλDNAを約248μlのTEバッファー
に溶解する。これを約750μlのiPrOHで希釈
し、そしてフィルターを通過させることによりブロッタ
ーに添加する。すべての液体が通過した後、約1分間風
乾する。再び約750μlのiPrOHを添加し、約1
分間風乾する。すべてのiPrOHが通過した後、約7
50μlのプレップ ア ジーン洗浄バッファーを添加
し、通過後約1分間風乾する。
【0045】ウエルのところでフィルターを切る。切っ
た部分を遠心チューブに入れる。50μlのプレップ
ア ジーン溶出バッファーを添加する。約60℃におい
て約20分間加熱する。ゲル電気泳動による結果から、
イソプロパノールがワットマンGF/B、ワットマンG
F/C、MSIグラス、ゲルマンAEおよびニトロセル
ロースに適していることが示唆される。イソプロパノー
ルとゲルマンAEフィルターはほぼ100%のDNAを
保持した。
た部分を遠心チューブに入れる。50μlのプレップ
ア ジーン溶出バッファーを添加する。約60℃におい
て約20分間加熱する。ゲル電気泳動による結果から、
イソプロパノールがワットマンGF/B、ワットマンG
F/C、MSIグラス、ゲルマンAEおよびニトロセル
ロースに適していることが示唆される。イソプロパノー
ルとゲルマンAEフィルターはほぼ100%のDNAを
保持した。
【0046】
【実施例5】この実験は、1)DNAの結合に対するp
Hの効果、2)結合表面としてのCELITE(珪そう
土)の効果、および3)シラン化表面(即ち、疎水性)
へのDNA固着に対するiPrOHの効果を測定する。
Hの効果、2)結合表面としてのCELITE(珪そう
土)の効果、および3)シラン化表面(即ち、疎水性)
へのDNA固着に対するiPrOHの効果を測定する。
【0047】物質: シラン化表面 プレップ ア ジーン iPrOH 1N NaOH 1N HCl 1×TEバッファー中の1% アガロースゲル TEバッファー 泳動マーカー染色液 λ DNA方法 :248μlのTEおよび1.3μlのλ DNA
を含む7つのサンプルを調製した。サンプル1−3には
3つのシラン化表面(ジーンクリーンマトリックス(バ
イオ101、ラ ジョラ、CA)、サークルプレップマ
トリックス(バイオ101)、およびプレップ ア ジ
ーン マトリックス(バイオラッド)の内の1つを添加
し、次に750μlのiPrOHを添加する。60℃に
おいて10分間加熱する。
を含む7つのサンプルを調製した。サンプル1−3には
3つのシラン化表面(ジーンクリーンマトリックス(バ
イオ101、ラ ジョラ、CA)、サークルプレップマ
トリックス(バイオ101)、およびプレップ ア ジ
ーン マトリックス(バイオラッド)の内の1つを添加
し、次に750μlのiPrOHを添加する。60℃に
おいて10分間加熱する。
【0048】この間、他の3つのサンプルには20μl
のプレップ ア ジーン マトリックスを添加し、4番
目には50%セライト545(フィッシャー)および5
0%TEバッファーの溶液20μlを添加する。セライ
トサンプルおよび他の3つのサンプルのうちの1つには
750μlのプレップ ア ジーンバッファーを添加
し、1サンプルには1N水酸化ナトリウムで調整したp
H11.0のプレップア ジーンバッファー750μl
を添加する。1サンプルには1N塩酸で調整したpH
0.1のプレップ ア ジーンバッファー750μlを
添加する。4つすべてを10分間60℃において加熱す
る。
のプレップ ア ジーン マトリックスを添加し、4番
目には50%セライト545(フィッシャー)および5
0%TEバッファーの溶液20μlを添加する。セライ
トサンプルおよび他の3つのサンプルのうちの1つには
750μlのプレップ ア ジーンバッファーを添加
し、1サンプルには1N水酸化ナトリウムで調整したp
H11.0のプレップア ジーンバッファー750μl
を添加する。1サンプルには1N塩酸で調整したpH
0.1のプレップ ア ジーンバッファー750μlを
添加する。4つすべてを10分間60℃において加熱す
る。
【0049】7サンプルを遠心分離し、そして結合バッ
ファーをデカントにより除く。各サンプルに対して、最
初に使用したのと同じ結合バッファー750μlを添加
する。60℃において5分間加熱する。遠心分離し、そ
して結合バッファーをデカントにより除く。各サンプル
に対して500μlのプレップ ア ジーン洗浄バッフ
ァーを添加し、5分間撹拌/振盪し、遠心分離し、デカ
ントし、60℃において10分間乾燥する。25μlの
プレップ ア ジーン溶出バッファーを添加し、60℃
において10分間加熱し、遠心分離し、バッファーを集
め、溶出段階を繰り返す。
ファーをデカントにより除く。各サンプルに対して、最
初に使用したのと同じ結合バッファー750μlを添加
する。60℃において5分間加熱する。遠心分離し、そ
して結合バッファーをデカントにより除く。各サンプル
に対して500μlのプレップ ア ジーン洗浄バッフ
ァーを添加し、5分間撹拌/振盪し、遠心分離し、デカ
ントし、60℃において10分間乾燥する。25μlの
プレップ ア ジーン溶出バッファーを添加し、60℃
において10分間加熱し、遠心分離し、バッファーを集
め、溶出段階を繰り返す。
【0050】溶出された画分をゲル電気泳動により分析
し、そしてスタンダードDNAサンプルと比較した。そ
の結果、シラン化表面からはDNAが回収されず、即
ち、前の実験においてDNAは表面に結合せず、沈殿し
なかったことが証明された(沈殿物は表面に結合せず、
そして洗浄段階で洗浄された)。
し、そしてスタンダードDNAサンプルと比較した。そ
の結果、シラン化表面からはDNAが回収されず、即
ち、前の実験においてDNAは表面に結合せず、沈殿し
なかったことが証明された(沈殿物は表面に結合せず、
そして洗浄段階で洗浄された)。
【0051】
【実施例6】この実験は、ニトロセルロース膜に対する
DNAの結合能力に関して、結合バッファーを比較す
る。
DNAの結合能力に関して、結合バッファーを比較す
る。
【0052】出発物質: 洗浄バッファー(50%EtOH 50%(40mMト
リス、4mM EDTA、6M NaCl、pH7.
4)) 結合バッファー(50mM トリス、1mM EDT
A、6M NaClO4、pH7.5) 溶出バッファー(10mM トリス、1mM EDT
A、pH8.0) ニトロセルロース(5.0μM AE98 オーダー
#19020 ロット643317 S&S) ニトロセルロース(0.45μm BA85 ロット
#9039/7 S&S) 1×TAE(1×=89mM トリス−ホウ酸、2mM
EDTA、89mMホウ酸)中の1%アガロースゲル 泳動マーカー染色液 TEバッファー iPrOH EtOH KSCN 8M 塩酸グアニジン TBSバッファー NaClO4 プレップ ア ジーン キット方法 :7つの同一サンプル(248μlのTEバッファ
ーおよび1.3μlのλ DNA)を調製した。各工程
で結合バッファーを変える以外は実施例4と正確に同じ
方法で、ブロッターを使用して7サンプルをニトロセル
ロース膜に結合させる。
リス、4mM EDTA、6M NaCl、pH7.
4)) 結合バッファー(50mM トリス、1mM EDT
A、6M NaClO4、pH7.5) 溶出バッファー(10mM トリス、1mM EDT
A、pH8.0) ニトロセルロース(5.0μM AE98 オーダー
#19020 ロット643317 S&S) ニトロセルロース(0.45μm BA85 ロット
#9039/7 S&S) 1×TAE(1×=89mM トリス−ホウ酸、2mM
EDTA、89mMホウ酸)中の1%アガロースゲル 泳動マーカー染色液 TEバッファー iPrOH EtOH KSCN 8M 塩酸グアニジン TBSバッファー NaClO4 プレップ ア ジーン キット方法 :7つの同一サンプル(248μlのTEバッファ
ーおよび1.3μlのλ DNA)を調製した。各工程
で結合バッファーを変える以外は実施例4と正確に同じ
方法で、ブロッターを使用して7サンプルをニトロセル
ロース膜に結合させる。
【0053】DNA溶液を750μlの結合バッファー
に添加し、次にウエルに添加する。液体を通過させ、1
分間風乾する。ウエルにそれぞれの結合バッファー75
0μlを添加し、液体の通過後1分間風乾する。750
μlの洗浄バッファーで洗浄する。液体の通過後1分間
風乾する。
に添加し、次にウエルに添加する。液体を通過させ、1
分間風乾する。ウエルにそれぞれの結合バッファー75
0μlを添加し、液体の通過後1分間風乾する。750
μlの洗浄バッファーで洗浄する。液体の通過後1分間
風乾する。
【0054】各ウエルを以下のように丸く切り、遠心チ
ューブに入れる。溶出バッファー50μlを添加し、6
0℃において10分間加熱する。
ューブに入れる。溶出バッファー50μlを添加し、6
0℃において10分間加熱する。
【0055】溶出されたDNAサンプルをゲル電気泳動
により分析し、そしてスタンダードDNAサンプルと比
較する。この結果から、イソプロパノール、プロパノー
ル、およびエタノールがDNAを保持したが、カオトロ
プによるDNAの保持は顕著に少ないことが示唆され
る。
により分析し、そしてスタンダードDNAサンプルと比
較する。この結果から、イソプロパノール、プロパノー
ル、およびエタノールがDNAを保持したが、カオトロ
プによるDNAの保持は顕著に少ないことが示唆され
る。
【0056】
【実施例7】この実験の目的は、クラミジア(Chla
mydia)溶解物に加えたλDNAが、イソプロパノ
ールを結合バッファーとして用いた場合に珪そう土に結
合するか否かを測定するものである。
mydia)溶解物に加えたλDNAが、イソプロパノ
ールを結合バッファーとして用いた場合に珪そう土に結
合するか否かを測定するものである。
【0057】物質: イソプロパノール(アルドリッヒ、ミルウオーキー、W
I 02610MW) プレップ ア ジーン キット(バイオラッド 416
40) λDNA −(BRL 503μg/803μl) クラミジア(−)溶解物 ウエイクカントリー ヘルス部門(Wake Coun
try HealthDept.)のクラミジア(−)
溶解物 TEバッファー(10mM トリス塩酸、1mM ED
TA、pH8) TAEバッファー(1×) エチジウム ブロマイド(10mg/1mlストック
(シグマ Cat #E−875 ロット #97E−
3722)) 1×TAEバッファー中の4%ヌシーブ(NuSiev
e)アガロース φX174 RF DNAのHaeIII分解物(BR
L Cat #5611SA ロット #94010
3) λ DNAのHindIII分解物(BRL Cat
#5612SA ロット#940104) タイプII電気泳動マーカー染色液(25%フィコル、
0.25%ブロムフェノールブルー、0.25% キシ
レンシアノール) 電気泳動ユニット:BRL ホライズン 58 サブマリンユニット パワーユニット:ファルマシア タイプ EPS 50
0/400 写真装置:ポラロイド タイプ 50ランドカメラ ポラロイド タイプ 57フィルム フォトダイン ライト ボックス UV その他:シリコン化された滅菌ミクロ遠心チューブ ゲル/ローディングピペット チップス(ストラタジー
ン、ラジョラ、CA) サンプル、調製および方法:それぞれ250μlのクラ
ミジア(−)ヒト サンプルを含む13サンプルを調製
する。各サンプルにλDNAの1:10希釈液を10μ
lずつ添加する。14番目のサンプルは水250μlお
よびλDNAの1:10希釈液10μlを含み、クラミ
ジア(−)ヒト サンプルを含まないように調製され
る。
I 02610MW) プレップ ア ジーン キット(バイオラッド 416
40) λDNA −(BRL 503μg/803μl) クラミジア(−)溶解物 ウエイクカントリー ヘルス部門(Wake Coun
try HealthDept.)のクラミジア(−)
溶解物 TEバッファー(10mM トリス塩酸、1mM ED
TA、pH8) TAEバッファー(1×) エチジウム ブロマイド(10mg/1mlストック
(シグマ Cat #E−875 ロット #97E−
3722)) 1×TAEバッファー中の4%ヌシーブ(NuSiev
e)アガロース φX174 RF DNAのHaeIII分解物(BR
L Cat #5611SA ロット #94010
3) λ DNAのHindIII分解物(BRL Cat
#5612SA ロット#940104) タイプII電気泳動マーカー染色液(25%フィコル、
0.25%ブロムフェノールブルー、0.25% キシ
レンシアノール) 電気泳動ユニット:BRL ホライズン 58 サブマリンユニット パワーユニット:ファルマシア タイプ EPS 50
0/400 写真装置:ポラロイド タイプ 50ランドカメラ ポラロイド タイプ 57フィルム フォトダイン ライト ボックス UV その他:シリコン化された滅菌ミクロ遠心チューブ ゲル/ローディングピペット チップス(ストラタジー
ン、ラジョラ、CA) サンプル、調製および方法:それぞれ250μlのクラ
ミジア(−)ヒト サンプルを含む13サンプルを調製
する。各サンプルにλDNAの1:10希釈液を10μ
lずつ添加する。14番目のサンプルは水250μlお
よびλDNAの1:10希釈液10μlを含み、クラミ
ジア(−)ヒト サンプルを含まないように調製され
る。
【0058】サンプルのうちの5つとスタンダードに
は、20μlのプレップ ア ジーンローディング マ
トリックスを添加し、次に750μlのイソプロパノー
ルを添加して室温で10分間撹拌する。他の8サンプル
には最初にイソプロパノールを添加し、次に結合マトリ
ックスを添加して撹拌する。後の実験は13サンプルす
べてとスタンダードについて全く同様に実施した。
は、20μlのプレップ ア ジーンローディング マ
トリックスを添加し、次に750μlのイソプロパノー
ルを添加して室温で10分間撹拌する。他の8サンプル
には最初にイソプロパノールを添加し、次に結合マトリ
ックスを添加して撹拌する。後の実験は13サンプルす
べてとスタンダードについて全く同様に実施した。
【0059】サンプルを室温で10分間撹拌後、1分間
遠心分離し、デカントし、そして上清を捨てる。750
μlのイソプロパノールで洗浄し、室温で10分間撹拌
し、遠心分離し、デカントし、そして上清を捨てる。5
0℃で10分間加熱して結合マトリックスを乾燥させ
る。25μlのプレップ ア ジーン溶出バッファーを
添加する。50℃で10分間加熱し、1.5分間遠心分
離する。上清を集めて、各14サンプルから得られた溶
出画分を混ぜて溶出段階を繰り返すことにより、14の
(50μl)溶出DNAサンプルが得られる。これらの
溶出サンプルをゲル電気泳動により分析することによ
り、どのDNAが溶出されたかを測定する。
遠心分離し、デカントし、そして上清を捨てる。750
μlのイソプロパノールで洗浄し、室温で10分間撹拌
し、遠心分離し、デカントし、そして上清を捨てる。5
0℃で10分間加熱して結合マトリックスを乾燥させ
る。25μlのプレップ ア ジーン溶出バッファーを
添加する。50℃で10分間加熱し、1.5分間遠心分
離する。上清を集めて、各14サンプルから得られた溶
出画分を混ぜて溶出段階を繰り返すことにより、14の
(50μl)溶出DNAサンプルが得られる。これらの
溶出サンプルをゲル電気泳動により分析することによ
り、どのDNAが溶出されたかを測定する。
【0060】この実験から、DNAは細胞残渣(即ち、
炭素化合物、蛋白質、核酸、等々)を含むサンプルから
取得できることが証明される。コントロールのλDNA
とヒトDNAは共にサンプルから取得される。また、こ
の実験から、多くの異なるプロトコルはイソプロパノー
ルを結合バッファーとして使用することができ、そして
サンプルから高いパーセンテージでDNAを取得するこ
とも証明される(例えば、結合段階において加熱を行う
か否か、2つの結合段階が使用できるか1つの結合段階
が使用できるか、洗浄段階は50%エタノールおよび5
0%の低濃度のEDTA、pH8.0バッファーを使用
できるかまたは洗浄しないかである。試薬の添加順序は
重要でなく、言い換えれば、結合バッファーまたは結合
マトリックスを最初に添加しても各サンプルから回収さ
れるDNAの量に顕著な差はない。)。
炭素化合物、蛋白質、核酸、等々)を含むサンプルから
取得できることが証明される。コントロールのλDNA
とヒトDNAは共にサンプルから取得される。また、こ
の実験から、多くの異なるプロトコルはイソプロパノー
ルを結合バッファーとして使用することができ、そして
サンプルから高いパーセンテージでDNAを取得するこ
とも証明される(例えば、結合段階において加熱を行う
か否か、2つの結合段階が使用できるか1つの結合段階
が使用できるか、洗浄段階は50%エタノールおよび5
0%の低濃度のEDTA、pH8.0バッファーを使用
できるかまたは洗浄しないかである。試薬の添加順序は
重要でなく、言い換えれば、結合バッファーまたは結合
マトリックスを最初に添加しても各サンプルから回収さ
れるDNAの量に顕著な差はない。)。
【0061】本発明は特定の修飾に関して記述されてい
るが、それらの詳細は限定のための構成ではなく、本発
明の趣旨および目的から離れる事なく、さまざまな等価
物、変化および修飾を加えてもよく、そしてそのような
等価物が本明細書に含まれることが理解される。
るが、それらの詳細は限定のための構成ではなく、本発
明の趣旨および目的から離れる事なく、さまざまな等価
物、変化および修飾を加えてもよく、そしてそのような
等価物が本明細書に含まれることが理解される。
Claims (10)
- 【請求項1】 親水性表面にDNAを結合させるため
に、水溶性有機溶媒を添加することよりなる、溶液から
DNAを精製する方法。 - 【請求項2】 水溶性有機溶媒が、イソプロパノール、
プロパノールおよびエタノールからなる群から選択され
る溶媒である、請求項1記載の方法。 - 【請求項3】 水溶性有機溶媒が、約1%ないし約99
%のエタノール、約1%ないし約99%のイソプロパノ
ールおよび約1%ないし約99%のプロパノールからな
る群から選択される溶媒である、請求項1記載の方法。 - 【請求項4】 親水性表面が、セライト珪そう土、シリ
カポリマー、珪酸マグネシウム、シリコーン窒素化合
物、珪酸アルミニウムおよび二酸化珪素からなる群から
選択される、請求項1記載の方法。 - 【請求項5】 親水性表面がセライト珪そう土である、
請求項4記載の方法。 - 【請求項6】 下記工程からなる、溶液からDNAを精
製する方法: (a) 前記溶液に親水性表面を添加し; (b) 水溶性有機溶媒を添加し; (c) (a) および(b) 工程からの成分を含むDNA溶液を
液体画分と非液体画分に分離し; (d) (c) 工程からの非液体画分を洗浄し; (e) (d) 工程からの非液体画分から液体画分を分離し;
そして (f) (e) 工程からの非液体画分からDNAを遊離させ
る。 - 【請求項7】 親水性表面が、セライト珪そう土、シリ
カポリマー、珪酸マグネシウム、シリコーン窒素化合
物、珪酸アルミニウムおよび二酸化珪素からなる群から
選択される、請求項6記載の方法。 - 【請求項8】 水溶性有機溶媒が、イソプロパノール、
プロパノールおよびエタノールからなる群から選択され
る溶媒である、請求項6記載の方法。 - 【請求項9】 水溶性有機溶媒が、約1%ないし約99
%のイソプロパノール、約1%ないし約99%のプロパ
ノールおよび約1%ないし約99%のエタノールからな
る群から選択される溶媒である、請求項6記載の方法。 - 【請求項10】 さらに溶出バッファーを添加する工程
(g) を含む、請求項6記載の方法。
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Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US69511391A | 1991-05-03 | 1991-05-03 | |
US695113 | 1991-05-03 |
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---|---|
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JPH0751065B2 JPH0751065B2 (ja) | 1995-06-05 |
Family
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Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
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JP (1) | JPH0751065B2 (ja) |
CA (1) | CA2067711C (ja) |
DE (1) | DE69212216T2 (ja) |
SG (1) | SG49924A1 (ja) |
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2004502458A (ja) * | 2000-07-12 | 2004-01-29 | キアゲン ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 核酸の単離方法 |
JP2006501850A (ja) * | 2002-10-04 | 2006-01-19 | ワットマン インコーポレイテッド | 核酸精製システムの媒体上に核酸を保存するツールとして、化学物質を用いる方法および材料 |
JP2006211973A (ja) * | 2005-02-04 | 2006-08-17 | Fuji Photo Film Co Ltd | 核酸の分離精製方法 |
JP2008220377A (ja) * | 1998-10-23 | 2008-09-25 | Qiagen Gmbh | 表面における核酸の単離及び精製のための方法並びに手段 |
US7824855B2 (en) | 2004-03-26 | 2010-11-02 | Fujifilm Corporation | Method for selectively separating and purifying RNA and method for separating and purifying nucleic acid |
JP2011530278A (ja) * | 2008-08-08 | 2011-12-22 | ケンブリッジ エンタープライズ リミティド | 核酸の単離 |
JP2020024202A (ja) * | 2018-08-06 | 2020-02-13 | 積水化学工業株式会社 | 分析用具及び洗浄方法 |
Families Citing this family (76)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2102264C (en) * | 1992-11-13 | 2000-08-01 | Daniel Lee Woodard | Boron silicates, aluminum silicates, phosphosilicates and purification of dna |
DE4321904B4 (de) * | 1993-07-01 | 2013-05-16 | Qiagen Gmbh | Verfahren zur chromatographischen Reinigung und Trennung von Nucleinsäuregemischen |
WO1995006652A1 (en) * | 1993-08-30 | 1995-03-09 | Promega Corporation | Nucleic acid purification compositions and methods |
US5503816A (en) * | 1993-09-27 | 1996-04-02 | Becton Dickinson And Company | Silicate compounds for DNA purification |
US5438127A (en) * | 1993-09-27 | 1995-08-01 | Becton Dickinson And Company | DNA purification by solid phase extraction using a PCl3 modified glass fiber membrane |
US5438129A (en) * | 1993-09-27 | 1995-08-01 | Becton Dickinson And Company | DNA purification by solid phase extraction using partially fluorinated aluminum hydroxide adsorbant |
US5561064A (en) * | 1994-02-01 | 1996-10-01 | Vical Incorporated | Production of pharmaceutical-grade plasmid DNA |
JP3379758B2 (ja) * | 1994-02-07 | 2003-02-24 | クイアジェン・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング | イソプロパノール含有水溶液を用いる核酸のトランスフェクション効率の増強 |
US5834303A (en) * | 1994-11-04 | 1998-11-10 | Tomy Seiko Co., Ltd. | Method and device for extraction and purification of DNA |
GB9425138D0 (en) | 1994-12-12 | 1995-02-08 | Dynal As | Isolation of nucleic acid |
JP2965131B2 (ja) | 1995-07-07 | 1999-10-18 | 東洋紡績株式会社 | 核酸結合用磁性担体およびそれを用いる核酸単離方法 |
US5804684A (en) * | 1995-08-24 | 1998-09-08 | The Theobald Smith Research Institute, Inc. | Method for isolating nucleic acids |
US5783686A (en) * | 1995-09-15 | 1998-07-21 | Beckman Instruments, Inc. | Method for purifying nucleic acids from heterogenous mixtures |
WO1997025314A1 (en) * | 1996-01-11 | 1997-07-17 | Florida State University | Novel dicationic perylene dye and use for precipitation and quantitation of dna |
US5777098A (en) * | 1996-07-23 | 1998-07-07 | University Of North Dakota Medical Education Research Foundation | DNA purification procedure |
US6872527B2 (en) | 1997-04-16 | 2005-03-29 | Xtrana, Inc. | Nucleic acid archiving |
US5817798A (en) * | 1997-09-17 | 1998-10-06 | Abbott Laboratories | Rapid RNA isolation procedure in the presence of a transition metal ion |
CA2304017C (en) * | 1997-09-17 | 2007-05-01 | Gentra Systems, Inc. | Apparatuses and methods for isolating nucleic acid |
US6914137B2 (en) | 1997-12-06 | 2005-07-05 | Dna Research Innovations Limited | Isolation of nucleic acids |
US7670768B1 (en) | 1998-02-02 | 2010-03-02 | Qiagen North American Holdings, Inc. | Processes for isolating, amplifying and characterizing DNA |
DE19856064C2 (de) * | 1998-12-04 | 2000-11-30 | Invitek Gmbh | Universelles Verfahren zur Isolierung von DNA aus beliebigen Ausgangsmaterialien |
WO2000034521A1 (en) * | 1998-12-08 | 2000-06-15 | Boston Probes, Inc. | Methods, kits and compositions for the identification of nucleic acids electrostatically bound to matrices |
JP2002535003A (ja) * | 1999-01-29 | 2002-10-22 | マックス−プランク−ゲゼルシャフト・ツア・フェルデルング・デア・ヴィッセンシャフテン・エー・ファオ | アポトーシスを誘導するdna配列の単離方法及び検出システム |
US7790865B1 (en) | 1999-02-02 | 2010-09-07 | Qiagen North American Holdings, Inc | Eluting reagents, methods and kits for isolating DNA |
US6383783B1 (en) | 1999-09-21 | 2002-05-07 | 3M Innovative Properties Company | Nucleic acid isolation by adhering to hydrophobic solid phase and removing with nonionic surfactant |
US6936414B2 (en) * | 1999-12-22 | 2005-08-30 | Abbott Laboratories | Nucleic acid isolation method and kit |
US20030228600A1 (en) * | 2000-07-14 | 2003-12-11 | Eppendorf 5 Prime, Inc. | DNA isolation method and kit |
US20020068280A1 (en) * | 2000-12-06 | 2002-06-06 | Jeff Fairman | Compositions and methods for DNA purification from whole blood |
JP3580801B2 (ja) * | 2001-08-01 | 2004-10-27 | 富士写真フイルム株式会社 | 核酸の分離精製方法 |
US7148343B2 (en) * | 2001-10-12 | 2006-12-12 | Gentra Systems, Inc. | Compositions and methods for using a solid support to purify RNA |
US7893228B2 (en) * | 2001-10-12 | 2011-02-22 | Qiagen North American Holdings, Inc. | Compositions and methods for using a solid support to purify RNA |
US20050032105A1 (en) * | 2001-10-12 | 2005-02-10 | Bair Robert Jackson | Compositions and methods for using a solid support to purify DNA |
DE60234464D1 (de) | 2001-11-28 | 2009-12-31 | Applied Biosystems Llc | Zusammensetzungen und Verfahren zur selektiven Nukleinsäureisolierung |
AU2003202026A1 (en) | 2002-01-16 | 2003-09-02 | Dynal Biotech Asa | Method for isolating nucleic acids and protein from a single sample |
GB0212826D0 (en) | 2002-05-31 | 2002-07-10 | Dna Res Innovations Ltd | Materials and methods relating to polyions and substance delivery |
KR20020059286A (ko) * | 2002-06-11 | 2002-07-12 | (주) 인더씨 코리아 | 규산염 광분을 이용한 플라스미드 디엔에이 추출 방법 및추출 키트 |
JP3890360B2 (ja) * | 2002-07-19 | 2007-03-07 | 富士フイルム株式会社 | 核酸の分離精製方法 |
JP4025135B2 (ja) * | 2002-07-19 | 2007-12-19 | 富士フイルム株式会社 | 核酸の分離精製方法 |
US20040110132A1 (en) * | 2002-12-06 | 2004-06-10 | Affymetrix, Inc. | Method for concentrate nucleic acids |
US7601491B2 (en) | 2003-02-06 | 2009-10-13 | Becton, Dickinson And Company | Pretreatment method for extraction of nucleic acid from biological samples and kits therefor |
US7682818B2 (en) * | 2003-03-28 | 2010-03-23 | Fujifilm Corporation | Apparatus for separating and purifying nucleic acid and method for separating and purifying nucleic acid |
CN100395257C (zh) * | 2003-05-08 | 2008-06-18 | 慈溪市中鼎生物技术有限公司 | 钾离子酸性水溶液和利用这种溶液的dna提取方法和试剂盒 |
US20050059024A1 (en) | 2003-07-25 | 2005-03-17 | Ambion, Inc. | Methods and compositions for isolating small RNA molecules |
JP2005095003A (ja) * | 2003-09-03 | 2005-04-14 | Fuji Photo Film Co Ltd | 核酸の分離精製方法 |
EP1664295A4 (en) * | 2003-09-09 | 2007-12-05 | Fujifilm Corp | PROCESS FOR INSULATING AND PURIFYING NUCLEIC ACID |
EP1524317B1 (en) * | 2003-10-13 | 2015-03-04 | Roche Diagnostics GmbH | Methods for isolating nucleic acids |
CA2482097C (en) | 2003-10-13 | 2012-02-21 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Methods for isolating nucleic acids |
US20050130177A1 (en) | 2003-12-12 | 2005-06-16 | 3M Innovative Properties Company | Variable valve apparatus and methods |
ATE466080T1 (de) * | 2003-12-16 | 2010-05-15 | Qiagen North American Holdings | Formulierungen und verfahren zum denaturieren von proteinen |
US7727710B2 (en) * | 2003-12-24 | 2010-06-01 | 3M Innovative Properties Company | Materials, methods, and kits for reducing nonspecific binding of molecules to a surface |
US7939249B2 (en) * | 2003-12-24 | 2011-05-10 | 3M Innovative Properties Company | Methods for nucleic acid isolation and kits using a microfluidic device and concentration step |
WO2006052680A1 (en) | 2004-11-05 | 2006-05-18 | Qiagen North American Holdings, Inc. | Compositions and methods for purifying nucleic acids from stabilization reagents |
JP2008527997A (ja) * | 2005-01-21 | 2008-07-31 | ザ ニューヨーク ブラッド センター インコーポレイテッド | 核酸の抽出及び同定方法 |
EP1844140A1 (en) * | 2005-01-31 | 2007-10-17 | FUJIFILM Corporation | Method for preparing sample solution and sample solution preparing apparatus |
WO2006088907A2 (en) | 2005-02-15 | 2006-08-24 | University Of Virginia Patent Foundation | Nucleic acid isolation methods and materials and devices thereof |
US20060223071A1 (en) * | 2005-04-01 | 2006-10-05 | Wisniewski Michele E | Methods, compositions, and kits for detecting nucleic acids in a single vessel |
EP1845381A4 (en) * | 2005-06-23 | 2012-03-14 | Arkray Inc | ANALYTICAL TOOL |
JP4956727B2 (ja) | 2005-08-30 | 2012-06-20 | 倉敷紡績株式会社 | Rna分離精製方法 |
DE102005047736B4 (de) | 2005-09-29 | 2008-08-14 | Aj Innuscreen Gmbh | Verfahren und System zur Isolierung von Nukleinsäuren aus beliebigen komplexen Ausgangsmaterialien |
US20070141583A1 (en) * | 2005-12-20 | 2007-06-21 | Weiwei Li | Methods of rapid chromatin immunoprecipitation |
DE102007009347B4 (de) | 2007-02-27 | 2009-11-26 | Agowa Gmbh | Verfahren zur Isolierung von Nukleinsäuren |
US20100129878A1 (en) * | 2007-04-25 | 2010-05-27 | Parthasarathy Ranjani V | Methods for nucleic acid amplification |
US8478544B2 (en) | 2007-11-21 | 2013-07-02 | Cosmosid Inc. | Direct identification and measurement of relative populations of microorganisms with direct DNA sequencing and probabilistic methods |
JP5643650B2 (ja) | 2007-11-21 | 2014-12-17 | コスモシド・インコーポレーテッド | ゲノム同定システム |
DE102008010693A1 (de) | 2008-02-22 | 2009-08-27 | Qiagen Gmbh | Neue Matrixmaterialien, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung in Verfahren zur Isolierung von Biomolekülen |
DE102008010692A1 (de) * | 2008-02-22 | 2009-08-27 | Qiagen Gmbh | Neue Matrices, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung in Verfahren zur Isolierung von Biomolekülen |
EP2157181A1 (de) | 2008-08-13 | 2010-02-24 | AGOWA Gesellschaft für molekularbiologische Technologie mbH | Verfahren zur Isolation von Nukleinsäuren und Testkit |
CN102286468A (zh) * | 2011-08-30 | 2011-12-21 | 江苏百帝生物科技有限公司 | 一种循环血dna提取方法和相关的循环血dna提取试剂盒 |
EP2820157B1 (en) | 2012-03-02 | 2019-05-01 | Winthrop-University Hospital | Method for using probe based pcr detection to measure the levels of circulating demethylated beta cell derived dna as a measure of beta cell loss in diabetes |
JP6170154B2 (ja) | 2012-08-28 | 2017-07-26 | バイオキューブシステム インコーポレイテッド | 生物学的試料から核酸増幅反応用生物学的分子を迅速に分離するための多孔性固体相及びその用途 |
EP3114224B1 (en) | 2014-03-07 | 2018-05-09 | IFP Privates Institut für Produktqualität GmbH | Method and kit of parts for extraction of nucleic acids |
DE102014214173B4 (de) | 2014-07-21 | 2016-09-08 | Aj Innuscreen Gmbh | Verfahren zur selektiven größenfraktionierten Isolierung von Nukleinsäuren |
ES2940905T3 (es) | 2014-11-07 | 2023-05-12 | Ist Innuscreen Gmbh | Procedimiento para la separación y el aislamiento selectivo fraccionado en tamaño de mezclas de ácidos nucleicos |
EP4303311A3 (en) | 2017-09-18 | 2024-04-03 | Phase Scientific International, Ltd. | Method for using aqueous two-phase system for the isolation, purification and/or concentration of short nucleic acid fragments |
RU188425U1 (ru) * | 2018-08-02 | 2019-04-11 | Мераб Георгиевич Чикобава | Дозированная форма для выделения днк |
RU188424U1 (ru) * | 2018-08-02 | 2019-04-11 | Мераб Георгиевич Чикобава | Дозированная форма для выделения днк |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS63150294A (ja) * | 1986-11-22 | 1988-06-22 | キアゲン・ゲーエムベーハー | 長鎖核酸を分離する方法 |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4830969A (en) * | 1981-08-31 | 1989-05-16 | The Research Foundation Of State University Of New York | Process for the rapid and simple isolation of nucleic acids |
GB8405763D0 (en) * | 1984-03-06 | 1984-04-11 | Shell Int Research | Dissolution of nucleotides and polynucleotides in non-aqueous solvents |
US4900677A (en) * | 1986-09-26 | 1990-02-13 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Process for rapid isolation of high molecular weight DNA |
US4935342A (en) * | 1986-12-01 | 1990-06-19 | Syngene, Inc. | Method of isolating and purifying nucleic acids from biological samples |
CA1297431C (en) * | 1987-04-24 | 1992-03-17 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Process for the isolation of nucleic acids |
DE3724442A1 (de) * | 1987-07-23 | 1989-02-02 | Europ Lab Molekularbiolog | Verfahren und vorrichtung zur reinigung von m-13-phagen-dna |
US4923978A (en) * | 1987-12-28 | 1990-05-08 | E. I. Du Pont De Nemours & Company | Process for purifying nucleic acids |
EP0328256A1 (en) * | 1988-01-21 | 1989-08-16 | Owens-Corning Fiberglas Corporation | Glass fibers coated with agarose for use as column packing or chromatographic media for bioseparations |
US5075430A (en) * | 1988-12-12 | 1991-12-24 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Process for the purification of DNA on diatomaceous earth |
US5106966A (en) * | 1989-07-10 | 1992-04-21 | University Of Kansas | Use of gel polymer for dna extraction with organic solvents |
-
1992
- 1992-04-30 CA CA002067711A patent/CA2067711C/en not_active Expired - Fee Related
- 1992-05-01 EP EP92303971A patent/EP0512767B1/en not_active Revoked
- 1992-05-01 DE DE69212216T patent/DE69212216T2/de not_active Revoked
- 1992-05-01 SG SG1996009342A patent/SG49924A1/en unknown
- 1992-05-06 JP JP4113578A patent/JPH0751065B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1993
- 1993-06-23 US US08/081,485 patent/US5405951A/en not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS63150294A (ja) * | 1986-11-22 | 1988-06-22 | キアゲン・ゲーエムベーハー | 長鎖核酸を分離する方法 |
Cited By (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008220377A (ja) * | 1998-10-23 | 2008-09-25 | Qiagen Gmbh | 表面における核酸の単離及び精製のための方法並びに手段 |
JP2004502458A (ja) * | 2000-07-12 | 2004-01-29 | キアゲン ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 核酸の単離方法 |
JP2006501850A (ja) * | 2002-10-04 | 2006-01-19 | ワットマン インコーポレイテッド | 核酸精製システムの媒体上に核酸を保存するツールとして、化学物質を用いる方法および材料 |
US7824855B2 (en) | 2004-03-26 | 2010-11-02 | Fujifilm Corporation | Method for selectively separating and purifying RNA and method for separating and purifying nucleic acid |
JP2006211973A (ja) * | 2005-02-04 | 2006-08-17 | Fuji Photo Film Co Ltd | 核酸の分離精製方法 |
JP2011530278A (ja) * | 2008-08-08 | 2011-12-22 | ケンブリッジ エンタープライズ リミティド | 核酸の単離 |
JP2016082980A (ja) * | 2008-08-08 | 2016-05-19 | ケンブリッジ・エンタープライズ・リミテッドCambridge Enterprise Limited | 核酸の単離 |
JP2018042565A (ja) * | 2008-08-08 | 2018-03-22 | ケンブリッジ・エンタープライズ・リミテッドCambridge Enterprise Limited | 核酸の単離 |
JP2020024202A (ja) * | 2018-08-06 | 2020-02-13 | 積水化学工業株式会社 | 分析用具及び洗浄方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2067711C (en) | 2000-08-08 |
US5405951A (en) | 1995-04-11 |
EP0512767A1 (en) | 1992-11-11 |
EP0512767B1 (en) | 1996-07-17 |
SG49924A1 (en) | 1998-06-15 |
JPH0751065B2 (ja) | 1995-06-05 |
DE69212216D1 (de) | 1996-08-22 |
CA2067711A1 (en) | 1992-11-04 |
DE69212216T2 (de) | 1997-01-02 |
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