JPH04505756A - 細胞及び組織を再生させる活性を有する薬剤、該薬剤を含有する安定化された組成物及びそれらの治療的、外科的及び美容学的用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 を 細胞及び組織を再生させる活性を有する薬剤、該薬剤を含有する安定化された組 成物及びそれらの治療的、外科的及び美容学的用途本発明は、細胞及び組織を再 生させる活性を有するデキストランからなる薬剤（ａｇｅｎｔｓ）　、線維芽細 胞成長因子類（ＦＧＦ　ｓ、　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｊ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔ ｏｒｓ　）と共に該薬剤−を含有する安定化された組成物、及びＦＧＦｓの保存 及び細胞培養の様なそれらのインビトロ（ｉｎ　ｖＮｒｏ）での用途、並びに治 療剤、特に治癒（ｈｅａｌｉｎｇ　）及び組織再生のための治療剤または化粧剤 としてのインビボ（ｉｎ　ｖｉｙｏ　）での゛　用途に関する。

線維芽細胞成長因子類（ＦＧＦｓ）の存在は、非常に多くの組織または臓器（脳 、下垂体、網膜、硝子体液、脈絡膜、虹彩、軟骨、腎臓、肝臓、胎盤、黄体、前 立腺、骨、筋等才の抽出物から得られる成長因子の生物学的活性の研究結果とし て、多くのチームによって証明されている。

非常に種々の研究された組織並びにインビトロ及びインビボにおいて、これら因 子によって刺激された非常に種々の細胞の多様性は、これら因子の特性付け、単 離及び完全同定に独立して貢献したチームの数が多いことと共に、該因子を表示 するためにこれらいろいろな著者によって用いられた多くの名称およびイニシャ ルの多重性の原因となっている。

これらすべての抽出物は、ＦＧＦｓのファミリー由来の成長因子を含有し、これ らファミリーは、２種の主なブランチ（ｂｒａｎｃｈｅｓ）に分けることができ る様に思われる。

第一のブランチは、塩基性ＦＧＦ　（ｂａｓｉｃ　ＦＧＦ）　、塩基性線維芽細 胞成長因子（ｂａｓｉｃ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ　ｇｒｏｗｊｈｆａｃｔｏｒ） 　、又は、ヘパリン結合成長因子ＩＩ　（ＨＢＧＦ　Ｉｆ、ｈｅｐａｒｉｎ　ｂ ｉｎｄｉｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　ＩＩ）　、脳由来成長因子（ＢＤ ＧＦＳｂｒａｉｎ−ｄｅｒｉｖｅｄ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　）　、眼由 来成長因子ｎ　（ＥＤＧＦ　ｎ、ｅｙｅ−ｄｅｒｉｖｅｄ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａ ｃｔｏｒ　Ｉｆ）、星状細胞成長因子ＩＩ（ＡＧＦｎ、ａｓｔｒｏｃｙｔｅ　ｇ ｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ　ＩＩ）　、軟骨由来成長因子（ＣＤＧＦ、　ｃａｒｔ ｉｌａｇｅ−ｄｅｒｉｖｅｄ　ｇｒｏｗｌｈ　ｆａｃｔｏｒ　）等の名称で記載 されてきた。一方、ＦＧＦファミリーの第二のブランチは、酸性ＦＧＦ■、ｈｅ ｐａｒｉｎ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｇｒｏｗｌｈ　ｆａｃｔｏｒ　Ｉ）　、脳由来成 長因子１　（ＢＤＧＦ　ｌ５ｂｒａｉｎ−ｄｅｒｉｖｅｄ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａ ｃｊｏｒ　Ｉ）等の名称で記載されてきた。

これら因子は、用いられるターゲットの細胞のタイプによって（ＦＧＦ、ＡＧＦ 、ＥＣＧＦのイニシャルの、線維芽細胞、星状細胞又は内皮細胞の成長因子）、 又はこの因子が抽出された起源によって（例えば、それぞれＢＤＧＦ。

ＲＤＧＦＳＥＤＧＦ、ＣＤＧＦＳＨＤＧＦのイニシャルの、脳、網膜、又は眼、 培養中の軟骨又は肝細胞由来の成長因子）、又は他の生化学的又は生物学的特性 によって（ヘパリン結合成長因子（ＨＢＧＦ、　ｈｅｐａｒｉｎ　ｂｉｎｄｉｎ ｇ　ｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｓ　、）又は腫瘍脈管形成因子（ＴＡＦ、　ｒｕ ｍｏｕｒａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ　ｆａｃｊｏｒ）　）　、命名されてきた。さら にこのファミリーの２種の主なブランチは、その前か後に酸性又は塩基性又は１ 型又は■型を伴ったイニシャルにより名付けられた。

培養中の細胞の生物学的活性に従って、これら因子は精製されることができた。

最初の物理化学的特性（分子量及び等電点）は、塩基性型については１９７５年 という早い時期に発表され（ゴスポダロウィクツ（ＧＯ５ＰＯＤＡＲＯＷＩＣ２ ）、ジャーナル　オブ　バイオロジカル　ケミストリー、（Ｊ。

Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、）　２５０．２５１５）　、酸性型については１９８２年 に発表された（バリタウルトら（ＢＡＲＲＩＴＡＵＬＴ　ｅｔ　ａｔ、、）、Ｊ 、Ｎｅｕｒｏｇｃｉ、、　８．４７７−４９０）。

ＦＧＦの２つの型を均質となるまで精製することにより、それらの−次構造を確 立することが可能となった（塩基性型については、エステら（ＥＳＣＨＮ　ａｔ 、、）　、１９８５年、プロシーディングズ　オブ　ザ　ナショナル　アカデミ −オブ　サイエンス　オブ　ザ　ニー、ニス、ニー、（Ｐｒｏｃ。

Ｎａｊｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳ、　）　８２．６５０７　、酸性型について は、ギメネツジーら（ＧＩＭＥＮＥＸ　Ｇ、ｅｊ　ａｌ、、）、１９８５年、サ イエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）　、２３０．１３８５−１３８８）。

２つの型の単離には、これら因子とヘパリンとの強いアフィニティの証明及びそ れに続く固定化されたヘパリンのアフィニティクロマトグラフィーの使用が、特 に有利であった（シンクら（ＳＨＩＮＧ　Ｎ　ａｔ、、）　１９８４年、サイエ ンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）　、２２３．１２９６−１２９９　）。

インビトロにおいて、ＦＧＦｓは、異なる組織及び掻起源の非常に多くの細胞の 増殖と分化を刺激することが可能であることが知られている。

特に、線維芽細胞、内皮細胞、上皮細胞、ケラチノサイト、軟骨細胞、筋原細胞 、星状細胞等及び神経単位（ｎｅｕｒｏｎａｌ）の生存を挙げることができる。

インビボでは、ＦＧＦｓが神経栄養、脈管形成及び治癒の特性があることが、ま た知られている。

特に、表皮細胞の成長を刺激する方法を記載するフランス国特許第７９　１８２ ８２号を引用することができ、この方法は、特に該表皮細胞の刺激に対する、Ｆ ＧＦを含有する部分的に精製された水性網膜抽出物の役割を示している。

水性網膜抽出物を含有する組成物を用いた、角膜上皮の治癒の方法を示す米国特 許第４　４７７　４３５号も、また知られている。

ＦＧＦｓの存在の証拠やその特性及びインビトロ並びにインビボでの皮膚、血管 、神経、骨、筋肉等の再生と治癒におけるそれらの役割を含む多くの研究も、ま た知られている。

特に参考文献として、脳由来酸性成長因子、その抽出方法並びにその創傷治癒へ の用途を記載している米国特許第４　４４４　７６０号及び上述の脳由来酸性成 長因子を含有する組成物を用いて、血管内皮細胞の成長を刺激する方法を記載し ているヨーロッパ特許出願筒１８６　０８４号を挙げることができる。

上述のＦＧＦｓは、精製によって得られるが、遺伝子組換えによって得られるＦ ＧＦｓもまた、国際特許出願ＰＣＴＵＳ８６１０１８７９から知られている。

少なくとも１種のＦＧＦを基本とした別の治癒組成物が、ヨーロッパ特許出願筒 ２４３　１７９号に記載されており、それは、加えてコラーゲン及びヘパリン及 び／又はグリコアミノグリカンを含んでいる。

これら種々の文献中、ＦＧＦ単独でまたは共同での局部的な適用は、通例の製剤 、例えばクリーム、ペースト、ローション及びゲル、又はＦＧＦｓを徐々に放出 するための重合体、スポンジ、及びポンプ（ｐｕｍｐｓ　）と組み合わされた製 剤を用いて行われた。それは、特に国際特許出願ＰＣＴ　ＵＳ８６１０１８７９ 中に記載され、そこには、組換えＦＧＦ　ｓ及び適当な賦形剤又は担体分子（ｃ ａｒｒｉｅｒ　ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ　）を含む製剤、特にローション、ゲル、緩 効性の形態（ｄｅｌａｙｅｄ−ｒｅｌｅａｓｅ　ｆｏｒｍｓ　）又はクリームが 記載されており、該製剤はもし適当なら抗生物質のような他の活性成分と組み合 せられる。上記特許出願中に記載された緩効性の形態のものは、特にポリマーを 含有する。

得られた組成物は、特に凝固（ｃｌｏｔｔｉｎｇ）の制御、神経学的損傷の改善 及び硬組織の再生における治癒剤として使用することができる。

しかしながら、ＦＧＦは、系統的に治癒を刺激しないことが明らかになっている 、事実、特にＪ、　Ｄｅｒｍａｊｏｌ、　Ｓｉｎｇ。

０ｎｃｏ１．では刺激がなかったことが報告されている。それゆえ、従来のＦＧ Ｆ含浸ポリビニルアルコールスポンジの様ないくつかの組成物を皮下に施用する と、線維芽細胞及び筋原細胞の増殖を誘導するものの、酸性又は塩基性のＦＧＦ の局部的な適用は、最大の効果を得るためにはしばしば繰り返されなければなら ない。

これは、分子の熱不安定性、分子のｐＨ関連不活性化、酵素による蛋白分解及び ＦＧＦｓと細胞膜や基礎膜（ｂａｓａｌ　ｍｅｍｂｒａｎｅｓ　）のグリコアミ ノグリカン、例えばヘパリンサルフェート又はプロテオヘパランサルフェートと の相互作用により、それらが細胞の受容体に接近することを、遮断し得るＦＧＦ ｓの固定化に至る事によるものである。

そのような不利益は、ＦＧＦｓの保存および使用の可能性を限定する。

この様な不利益を軽減するために、ヨーロッパ特許出願筒２６７　０１５号では 、ポリペプチド成長因子、より詳しくは、ＥＧＦ及び特に水の存在下で生物学的 活性の減損に対して該因子を安定化させるに十分な量の水溶性ポリサッカライド を含む組成物を提案している。該特許出願中は、使用できる水溶性のポリサッカ ライドには、セルロース誘。

導体、デンプン、寒天、アルギン酸、アラビアゴム、デキストラン、フルクタン （ｆｒｕｃｊａｎｓ）　、イヌリン、マンナン、キシラン（ｘｙｌａｎｓ）　、 アラビナン（ａｒａｂｉｎａｎｇ　）　、キトサン、グリコーゲン及びグルカン を含む旨記載している。

デキストランでのそれらの研究を追跡するために、発明者らは、官能基を付与さ れた置換デキストラン（ｆｕｎｃｔｉｏｎｘｌｉｚｅｄ　５ｕｂｓｊｉｊｌｅｄ 　ｄｅｘｔｒａｎｓ）の新規な性質を検証した。即ち、該デキストランは、固有 の細胞及び組織を再生する活性（ｃｅｌｌ　ａｎｄ　ｊｉｓｓｕｅ　ｒｅｇｅｎ ｅｒａｔｉｎｇａｃｊｉｖｉｔ７）を有することが発見され、加えて、それらは 、ＦＧＦ組成物に対して安定化作用を有するだけでなく、ＦＧＦの生物学的活性 においてＦＧＦと協力するのである。

出願人は、その結果、細胞と組織を再生する活性を有する薬剤及びＦＧＦｓと共 に該薬剤を含む組成物を提供することに着手した。該組成物は、同じ目的を果た すために従来提案された組成物よりも実用的なニーズをより良く満たすものであ り、特に本発明の組成物は、著しく改良された安定性を有し、保存がより容易と なるので、従来の組成物よりも優れた治療効果を有し、その結果それらの施用の 頻度は著しく減少する。

本発明は、少なくとも１種の官能基を付与された置換デキストラン（ｆｕｎｃｊ ｉｏｎａｌｉｚｅｄ　５ｕｂｓ！Ｎｕｊｅｄ　ｄｅｘｔｔａｎ）からなることを 特徴とする、細胞及び組織を再生する活性を有する薬剤（ａｇｅｎｔ　）に関す る。

該薬剤の有利な態様において、官能基を付与された置換デキストランは、可溶性 のデキストラン及び不溶性のデキストランからなる群から選ばれる。

可溶性の官能基を付与された置換デキストラン（ｉｏｌｕｂｌｅ　ｆｕｎｃｊｉ ｏｎａｌｉｚｅｄ　ｇｕｂｓｔＮｕｔｅｄ　ｄｅｘｔｒａｎｓ　）は、特にフラ ンス国特許第２　５５５　５８９号又はフランス国特許第２　４６１　７２４号 に記載されたそれらを意味するものとして理解される。

不溶性の官能基を付与された置換デキストラン（ｉｎｓｏｌｕｂｌｅ　ｆｕｎｃ ｊｉｏｎａｌｉｚｅｄ　５ｕｂｓｔＨｕｔｅｄ　ｄｅｘｔｒａｎｓ　）は、特に フランス国特許出願第８２　０１６４１号又はフランス国特許第２　４６１　７ ２４号に記載されたそれらを意味するものとして理解される。

そのようなデキストランは安定であり、時間と共にそれらの特性が失われるもの ではない。

さらにそれらは、低い用量で、固有の細胞及び組織を再生する活性、より詳しく は、治癒活性（ｈｅｘｌｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ）を有するという予期せぬ特 性を保持する。

この態様の有利な一つの態様において、官能基を付与された該デキストランは、 カルボキシメチル、ベンジルアミド及びベンジルアミドスルホネート （ｂｅｎｚ７１ａｍｉｄｅｓｕｌｐｈｏｎａｔｅ）からなる群から選択された官 能基を含有する。

本発明はさらに、安定化された組成物であって、上記で定義したような細胞及び 組織を再生する活性を有する薬剤を、少なくとも１種の酸性ＦＧＦ　（ａｃｉｄ 　ＦＧＦ）及び／又は１種の塩基性Ｆ　Ｇ　Ｆ　（ｂａｓｉｃ　Ｆ　Ｇ　Ｆ　） 及び／又は、生物学的活性を有する１種のその誘導体及び／又は１種のそのアナ ログ及び／又は１種のそのフラグメントと共に含み、該薬剤は、長時間の貯蔵又 は温度によって不活性化された酸性及び／又は塩基性ＦＧＦ／ＦＧＦｓの生物学 的活性を、部分的又は全体的に、復活させることができることを特徴とする組成 物に関する。

このような組成物は、細胞及び組織を再生する活性、特に治癒活性を有し、それ は従来の組成物のそれよりも優れている。

本発明組成物の有利な一実施態様においては、該組成物は、上記で定義した細胞 及び組織を再生する活性を有する薬剤の少なくとも１種を０．１〜１０００μｇ ／ｍｌ及び酸性ＦＧＦｓ、塩基性ＦＧＦｓ及び生物学的活性を有するそれらの誘 導体、それらのアナログ及びそれらのフラグメントからなる群から選択された少 なくとも１種のＦＧＦを０．０１ｎｇ〜３００μｇ含有する。

本発明によれば、細胞及び組織を再生する活性を有する薬剤を、単独で又は少な くとも１種のＦＧＦと共に含む安定化された組成物は、他の活性成分及び／又は 少なくとも１種の製薬学的に許容される賦形剤（ｖｅｈｉｃｌｅ　）及び／又は 生理学的に許容される支持体（ｓｕｐｐｏｒｔ　）と組み合わせることができる 。

組み合わされる活性成分は、特に局所麻酔剤、抗感染症剤、血清蛋白及びコラー ゲンからなる群から選ばれる。

特にリドカインを、局所麻酔剤として挙げることができ、また、そのナトリウム 塩、銀塩、誘導体又はスルファジアジン（ｓｕｌｆａｄｉａｚｉｎｅｓ　）を、 静菌性物質として挙げることができる。ストレプトマイシンを抗生物質として挙 げることができ、血清アルブミンまたはフィブロネクチンを血清蛋白として挙げ ることができ、可溶性コラーゲン及びエラスチンを挙げることもできる。

本発明によれば、賦形剤が水の時は、該組成物もまた、緩衝液及び／又は適当な 塩と組み合わせることにより、混合物を例えば塩化ナトリウム当量において（ｉ ｎ　ＮａＣｌ　ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ）　、イオン強度を０．１〜０．２程度に 、ｐＨを６．８〜７．４程度に維持する。

本発明のこのような組み合わせを、以下［マトリクス組成物（ｍａｔｒｉｘ　ｃ ｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）　Ｊと呼ぶ。

該組成物の１つの有利な態様においては、該組成物はリポソームと組み合せられ る。

本発明のその様な組成物を、以下ＦＧＦ／官能基を付与されたデキストラン／リ ポソーム組成物及び官能基を付与されたデキストラン／リポソーム組成物と呼ぶ 。

該組成物の他の有利な態様においては、支持体は特に包帯（ｄｒｅｓｓｉａｇ＠ ）及びバイオマテリアル（ｂｉｏＩＩＩａｊｅｒｉａｌｓ）からなる群から選ば れる。

本発明の組成物の他の態様においては、賦形剤が適当なガスである場合は、組成 物はエアロゾルの形態にある。

「マトリクス」組成物は、直接溶液としてまたはエアロゾルとして適用されるの が有利である。

本発明によれば、該組成物、特に「マトリクス」組成物は、軟膏剤、クリーム、 ペースト又はローションの様な医薬形態中に含まれるか、又はゲル、特にコラー ゲンゲル中に含浸される。

本発明によれば、該組成物、特に上記「マトリクス」組成物は、包帯及びバイオ マテリアルの様な適当な支持体中に含有及び／又は含浸され、それは直接又は間 接的に、細胞の修復を助長する（例えば外科手術の縫合糸又は移植骨片の珊瑚（ ｃｏＩａｌ　）　）。

該「マトリクス」組成物は、皮膚へ塗布する時は、特に伝統的に使用されている クリーム又はローション中、特に「シルウェアテン（ＳＩＬｖＥＡＤＥＮＥ）」 、ｒ　７　＋）　オ（ＭＡＲＩＯ）　Ｊ、「アクアフォア（ＡＱ［ＪＡＰＩｆＯ Ｒ）　Ｊ及び２「エフアリア（ＥＱＵＡＬＩＡ）　Ｊの様なラノリンをベースと したクリーム中に含有させることができ、またそれは、包帯、例えば織物（ｔｅ ｘｔｉｌｅｓ）、合成織物（ｓｙｎｊｈＮｉｃ　ｆａｂｒｉｃｓ　）又はスポン ジでつくられたもの、又は創傷を覆うために使用される天然物、例えばコラーゲ ンゲルや動物由来の真皮（ｄｅｒｍｉｓ）の様な包帯中に含有又は含浸させるこ とができる。

本発明の該「マトリクス」組成物は、ＦＧＦ及び／又は置換され官能基を付与さ れたデキストランが、標的の組織に接触することができ又は該組織にまで拡散す ることができるように、これら種々の形態の包帯を含浸しなければならない。

本発明の組成物は、皮膚移植片の分野で特に発達している従来公知の技術に従っ て、水和（ｈ７ｄｒａｔｉｏｎ　）を維持するべく、特に損傷（ｉｎｊｕｒｙ） の部位上及び開放性損傷（ｏｐｅｎ　１ｎｊｕｒｉｅｓ　）上に保持される。

閉鎖包帯（ｏｃｃｌｕｓｉｖｅ　ｄｒｅｇｓｉｎｇｓ　）は、同様の方法で含浸 または吸着され、またはそれらは、天然の又は合成の支持体を覆うことができる 。

角膜への適用のためには、賦形剤は、眼の耐容性（ｔｏｌｅｒａｎｃｅ　）に適 合しなければならない（例えば、「ラクリブレＪ　（ＬＡＣＲＩＢＵＬＥ）の名 称で販売されている生成物、例えば「ネオ−カドロンＪ　（ＮＥＯ−ＣＡＤＲＯ Ｎ）　（メルクーシャーブードーメ（Ｍｅｒｃｋ−５ｈａｒｐ−Ｄｏｂｍｅ）　 ）の様な生理食塩水又は等張液）。

これら賦形剤は、また保存剤、例えば、ベンジルジメチルアルキルアンモニウム クロライドやナトリウムエチレンジアミンテトラアセテート（ＥＤＴＡ）等を含 むことができる。

本発明によれば、ＦＧＦ／官能基を付与されたデキストラン／リポソーム組成物 又は官能基を付与されたデキストラン／リポソーム組成物は、軟膏剤、クリーム 、ペースト又はローションの様な医薬形態中に含まれるか、又はゲル、特にコラ ーゲンゲル中に含浸される。

不溶性の官能基を付与されたデキストランの場合には、これらは、単独で又はＦ ＧＦと共に、担体、例えば、クリーム、ゼラチン又はコラーゲンゲル等中に、又 は被覆包帯（ｃｏｖｅｒ　ｄｒｅｇｓｉｎｇｓ、　ｐａｎｓｅｍｅｎｔｓ　ｄｅ 　ｒｅｃｏｕｖｒｅｍｅｎｔ　）用の通常の支持体である合成又は天然繊維上に 、含有させることもできる。不溶性の官能基を付与された重合体は、コラーゲン 溶液の添加とゲル化によって、含有させることができる。ワイエーエヌエヌエー エス（ＹＡＮＮＡＳ）の名義の一連の特許に記載された手順を使用することがで きる。

これら特許中（ＵＳ　４　０６０　０８１号）、複合層状組成物（ｃｏｍｐｏｓ Ｎｅ　ｌａｍｉｎａｒ　ｃｏｍｐｏｓ自ｉｏｎ　）は、損傷に接している部分が グリコサミノグリカンで架橋されたコラーゲンで覆われている同等皮膚（ｅｑｕ ｉｙａｌｅｌ　５ｋｉｎ　）を与え、該混合物は、可溶化されたコラーゲンにグ リコサミノグリカンを添加し、全体をゲルタールアルデヒドで沈殿又は架橋する ことにより得られる（米国特許第４　４１８　６９１号）。

本発明の組成物は、特に少なくとも１種の適当なＦＧＦと、再生する活性と安定 化させる活性を有する少なくとも１種の薬剤とを混合することによって得られる 。

該ＦＧＦｓは、天然物起源からの抽出及び精製、化学合成又は他の適当な遺伝子 組換技術によって得られる。

該ＦＧＦｓは、ヒト由来のものであるか又は他の動物、特に他の哺乳類に起源を 発する。

これら、天然物（網膜、脳、下垂体、胎盤、腎等）由来の２種の形態のＦＧＦを 抽出および単離するための方法については、多くの精製方法が従来技術に記載さ れている。

本発明の好ましい方法は、生物特異的な置換されたポリスチレン類（ｂｉｏｓｐ ｅｃｉｆｉｃ　５ｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ　ｐｏｌｌｓ（Ｈｅｎｅｓ）上でのアフ ィニティークロマトグラフィーを利用する方法である、フランス国特許出願第２ 　６１３　９３６号又はバイオケミ−（Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ　）　１９８６年、 （コーチイーら、（ＣＯＵＲＴＹ　ｅｆ　ａｌ、）　）に記載されている方法に 記載されている。

これらの好ましい方法は、強い酸性ｐＨで組織抽出物を処理し、こうすることに よってウィルスのコンタミネーションの危険性を全て取り除く段階、及び固定化 されたヘパリン又は置換されたポリスチレン上でのクロマトグラフィーを使用す る段階を含む。

この様に２種の形態のＦＧＦを、他の蛋白質と共に又は個別に、有意な量の他の 夾雑物質が無い十分な程度の純度で単離及び分離することができる。

前述の特徴の他に、本発明は他の特徴も包含し、それらは、以下に示す本発明の 主題を構成する方法を実行する方法について実施例及びＦＧＦｓの生物学的活性 の保護についての、官能基を付与された置換デキストランの効果を示す実施例に 関する記載にから明確になるであろう。

しかしながら、これら実施例は、本発明の主題を例示するものであって、いかな る場合でも限定を意味するものではないことを、明確に理解しなければならない 。

実施例 実施例１：ＦＧＦｓの安定化方法 １）官能基を付与された置換デキストラン（細胞及び組織の再生剤）の製造 ・３０ｇのデキストランＴ４０　（０，１８５モル）を蒸留水１４６ｍ１中に溶 解し、融解水浴中にて４℃に冷却する。５９．２ｇのＮａＯＨ（１，４８モル） を１００ｍ１の蒸留水に溶かし、４℃に冷却する。該水酸化ナトリウム溶液を、 上記デキストラン溶液に攪拌下徐々に注ぎ込み、全体を２０分間４℃に保つ。次 に６１ｇのＣＩＣＨ２ＣＯＯＨ（０，６４７モル）を、５分後に温度が２０℃に 達するように徐々に添加する。その後、この反応溶液を１０分を要して４０℃に 加熱し、９０分間この温度に保持後、約２０℃に冷却する。濃酢酸を用いてｐＨ を約７に下げる。２リツトルのメタノール中にて全体を沈殿させ、濾過し、１リ ツトルのエタノールで２回洗浄した後、真空下４０℃にて乾燥させる。

・上記のように修飾されたポリマー１０ｇを、ｐＨ３まで酸性化した蒸留水５５ ｍ１に溶解させ、攪拌しながら６０ｍ１のジメチルホルムアミドを非常に徐々に 添加し、この間ｐＨの値を３に維持する。温度を一１５℃に下げ、１４．５ｍｌ のクロル蟻酸イソブチルと共にＮ−メチルモルホリン１２．３ｍｌを添加する。

次いで１２．２ｍｌのベンジルアミンを添加する。３０分後、８００ｍ１のメタ ノール中にてポリマーを沈殿させ、濾過し乾燥させる。

・上記のように修飾されたポリマー９ｇを２５ｍ１の無水塩化メチレン中に分散 させる。０．２６ｍ１のＨ３Ｏ３Ｃ１と２．５ｍｌの塩化メチレンとの混合物を 反応容器に入れ、全体を４時間室温下に維持する。濾過して塩化メチレンにて洗 浄後、生成物を乾燥し、３０ｍ１の水に溶解してｐＨの値を７．０に調整する。

その溶液を緩衝液に対して限外濾過を行い、さらに蒸留水に対して限外濾過を実 施する。得られた溶液を、乾燥したポリマーが得られるまで凍結乾燥させる。

官能基を付与された置換デキストランを製造するにあたっては、ヨーロッパ特許 第００２３８５４号に開示されている他の方法を用いることもできる。

２）ＦＧＦ／ＦＧＦｓの製造 一細胞抽出物／抽出物類（ｃｅｌｌ　ｅｘｔｒａｃｔ／ｅｘｔｒａｃｔｓ）を酢 酸存在下ｐＨ３にて一夜処理した後、固定化ヘパリン又は置換ポリスチレンを用 いたクロマトグラフィーにてＦＧＦｓを分離する。

３）本発明による安定なＦＧＦ組成物の製造−上記１）の操作で得られた乾燥ポ リマーを等張のリン酸塩緩衝液（Ｐ　Ｂ　Ｓ）に４００μｇ　／　ｍ　１の濃度 となるように溶解させることにより、デキストラン溶液を得る。

−上記２）の操作で抽出されたＦＧＦｓを、適切な置換デキストランを含むこの 緩衝液に溶解させ、ＦＧＦの濃度を１００μｇ／ｍｌとする。

実施例２：本発明による安定化された軟膏ＦＧＦ　１０　μｇ ＦＤ　５　ｍｇ カルボキシメチルセルロース　２．５　ｇ非発熱性殺菌精製水　１００　ｍ１ ＦＤ＝下記表■に示すタイプＥの官能基を付与されたデキストラン。

得られるクリームは、ラットの乱切型（ｓｃａｒＬｆｉｃａｔ　１ｏｎ−ｔｙｐ ｅ）の創傷に３日間施用することができる。

実施例３：本発明による安定化された包帯包帯の支持体は、ラボラドワール　フ ールニエ（Ｌａｂ。

ｒａｔｏｉｒｅｓ　ＦＯＵＲＮＩＥＲ）から入手した“パンジル（Ｐａｎｇｉｌ ）″コラーゲンフィルムから構成され、下記の比率にて混合されたＦＧＦと官能 基を付与されたデキストランとの混合物で、受動吸着（ｐａｓｓｉｖｅａｄｓｏ ｒｐｔｉｏｎ）により、含浸されている。

ＦＧＦ　１０　μｇ ＦＤ　５００　μｇ 等張溶液　１０　ｍｌ 上記の溶液中にてコラーゲンフィルムを３０分間４℃にてインキュベートし、種 々の潰瘍及び表面的なまたは深い創傷（ｓｕｐｅｒｆｉｃｉａｌ　ｏｒ　ｄｅｅ ｐ　ｗｏｕｎｄｓ）に用いられる包帯を得る。

この包帯は、真空状態で保存でき、包装（ｐ　ａ　ｃ　ｋ）することができる。

＊インビトロにおけるＦＧＦｓの生物学的活性の保護に関する官能基を付与され た生物特異的（ｂ　１ｏｓｐｅｃ　ｉ　ｆｉｃ）なポリマーの効果の検討 インビトロにおけるＦＧＦｓの生物学的活性の測定に用いられる方法 インビトロにおけるＦＧＦｓの生物学的活性の評価方法は、多数の刊行物に開示 されている。これらはすべて、細胞培養培地に添加される因子（ｆ　ａ　ｃ　ｔ 　ｏ　ｒ　ｓ）の投与量の増加に伴って誘発される細胞数増加の測定、または成 長因子により刺激された細胞内ＤＮＡ中へのトリチウム化チミジンの取込みの増 加に基いている。該２つの方法において、これら増加は、添加される因子投与量 に依存しているので、最大刺激効果と共に投与量効果（ｄｏｓｅ　ｅｆｆｅｃｔ ｓ）および用量応答曲線を確立する事ができる。簡略化のために、刺激の１単位 は、標的細胞上の培養培地１ｍｌに成長因子を添加した場合、用量応答曲線で測 定される最大増加量の半分（５０％）に相当する細胞数増加またはトリチウム化 チミジンの取り込みの増加を誘発させ得る該成長因子の投与量として定義するこ とができる。この定義およびこれら測定の再現性は、とくにプルーエら（ＰＬＯ ＵＥＴ　ｅｔ　ａｌ、）により、１９８４年セルラーアンド　モレキュラー　バ イオロジー（Ｃｅｌｌｕｌａｒａｎｄ　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ） ３０、ｐ。

１０５において説明されている。

実施例Ａ：酸性およびアルカリ性のｐＨ値による酸性および塩基性ＦＧＦｓの不 活性化に対する置換デキストランの保護効果 これらの実験において使用されるＦＧＦｓは、デキストランを含まない（対照） か、もしくは置換デキストランを４００μｇ／ｍｌの濃度で含む等張リン酸塩緩 衝液（ＰＢＳ）１ミリリットル当り１００μｇの濃度の溶液の形態にある。これ ら種々の溶液の１０μｍを取り、ＰＢＳまたはｐＨ２（約ＩＮ）に調整された希 薄酢酸（ＣＨ３ＣＯＯＨ）、またはｐＨ９，０に調整した希薄水酸化ナトリウム （Ｎ　ａ　ＯＨ）の１ｍｌと混合する。これらサンプルを２時間２０℃にてイン キュベート後、それぞれ１μｍを生物学的活性の測定に供した。

図１はＣＣＬ３９繊維芽細胞に対するｂＦＧＦの用量応答曲線を示す。

この図では、横軸にｂＦＧＦ濃度（ｐｇ／ｍｌ）の対数を、縦軸に刺激百分率を プロットしている。

曲線１は対照；曲線２はｐＨ２におけるｂＦＧＦ単独；曲線３はデキストラン存 在下ｐＨ２におけるｂＦＧＦ、曲線４はデキストラン存在下ｐＨ９におけるｂＦ ＧＦ　、曲線５はｐＨ９におけるｂＦＧＦ単独；曲線６はデキストラン存在下の 対照に、それぞれ対応している。

トリチウム化チミジンの取り込み量の増加量は、ｂＦＧＦ単独の用量応答曲線の プラトーにおいて得られる１分間当りのカウント数（ｃｐｍ）の値から、ＦＧＦ の不存在下で細胞内に取り込まれる、同一実験で測定されるトリチウム化チミジ ンのｃｐｍ値を差し引いた値を示す。

曲線３および４は、デキストラン存在下においてｂＦＧＦの刺激力が、酸性およ びアルカリ性の培地においても保持されることを示している。

表Ｉは、酸性および塩基性ＦＧＦｓを用いて得た結果を要約したものである。刺 激の単位は、２時間２０℃にてインキュベートした出発ａＦＧＦまたはｂＦＧＦ について、任意に１に固定する。

表Ｉ ＦＤ＝官能基を付与されたデキストラン。本実施例では下記表■で定義されてい るデキストランＥＨ５＝ヘパラン硫酸（プルエルメル（Ｐｌｏｕｈｅｒｍｅｌ） のビオヴｙｏ！Ｊ　（Ｂ　Ｉ　０ＶＡＬＯＲＩ　Ｓ）より人手、（Ｉ　１　ｅ− ｅ　ｔ−Ｖｔ　１１　ａ　ｉ　ｎｅ。

フランス）） この表は、酸性およびアルカリ性のｐＨ値により引き起こされる酸性および塩基 性ＦＧＦの不活性化に対するＦＤ（官能基を付与されたデキストラン）の保護効 果を示す。

塩基性ＦＧＦをｐＨ２〜９の緩衝溶液中にて２時間２０℃でインキュベートする と、塩基性ＦＧＦの生物学的活性の不活性化を引き起こす。

事実、当初の物質における生物学的効果を誘発させるためには、酸性ｐＨにおい ては５３倍、アルカリ性ｐＨにおいては１３倍の物質を必要とする。

この混合物にＦＤを添加すると、ｐＨ２または９におけるインキュベーションに 対し塩基性ＦＧＦの生物学的活性を完全に保護する。

この２種類の処理に関する限り、酸性ＦＧＦの場合にも同様の結果が観察される 。

実施例Ｂ：短期間および長期間における温度によるＦＧＦＳの不活性化に対する 官能基を付与されたデキストラン（Ｆ　Ｄ）の効果 本実施例においては、実施例Ａと同様に調製したＦＧＦを、下記表■で定義され る官能基を付与されたデキストラン（ＦＤ）４００μｇの存在下又は不存在下で 、４℃、２０℃、３７℃または６０℃において種々の時間インキュベートシた後 、測定に供する。

得られた結果を、下記表■に示す。

表■ Ｆ’Ｄ−官能基を付与されたデキストランＨ５＝ヘパラン硫酸 初期の刺激単位を、任意に１に固定する。

この表は、１週間３７℃での処理により誘発された、酸性および塩基性ＦＧＦの 活性化の強い阻害を示している。

インキュベーション媒体中にＦＤが存在することにより、両タイプのＦＧＦを熱 変性から保護している。

同様の結果が、生物学的にＦＤと等価であるＨ５（ヘパラン硫酸）を用いた場合 にも観察される。

実施例Ｃ：　ＦＧＦの用量応答効果に対する各種の官能基を付与されたデキスト ランの効果 各種の官能基を付与されたデキストランの効果は、下記表■の比として測定され る。

表■ 百分率： Ｄ＝ニブキストラ ン：カルボキシメチル Ｘ：ペンジルアミド Ｙ：ペンジルアミドスルホネート Ｒ／ｕｓは、官能基を付与されたデキストラン非存在下でのａＦＧＦの刺激の単 位の値を、官能基を付与されたデキストラン存在下での刺激の単位で割った比率 の値を表わす。

＊インビボにおけるＦＧＦｓの生物学的活性の保護に関する官能基を付与された 生物特異的なポリマーの効果の検討実施例Ｄ　：　ＦＧＦ／官能基を付与された デキストランの組合せによる治癒効果の動力学的、組織学的および面積測定（ｐ ｌａｎｉｍｅｔｒｉｃ）による検討実験プロトコル： ３００〜４００グラムの雄ウィスターラット（Ｗｉｓｔａｒ　ｒａｔｓ）を用い て実験を行なう。各実験は、動物５匹を１群として使用して行なう。

創傷（ｗｏｕｎｄｓ）の種類： あらかじめ毛を剃った動物の背に、２種類の創傷を作る。

−パンチ（直径０．６ｃｍ）を使用し、筋肉表面（ｍｕｓａｌｅ　ｆｌｏｏｒ） に至るまでの皮膚を除去する。

−メスを使用し、１ｃｍの長さの乱切を作る。これら乱切は皮膚−表皮領域（ｄ ｅ　ｒｍｏ−ｅｐ　ｉ　ｄｅ　ｒｍａ　１ｒｅｇｉｏｎ）を損なうものではない 。

操作： 創傷の種類に応じて、無菌緩衝等張溶液（ｐ　Ｈ７，４）に溶解した種々の物質 混合物を用いて、傷を処置した。パンチによる創傷の場合、正確に測定した切除 組織の通りあらかじめ切り取ったコラーゲン検子（ｃｏｌｌａｇｅｎｐｌｕｇ、 ＧＩＮＧＥＳＴＡＴ）中にこれら溶液を含浸（ｄｅｐｏｓ　ｉ　ｔ）する。

乱切創傷の場合、当該物質は液体の状態で傷の上に直接塗布する。

ＦＧＦ　（酸性、塩基性または混合物のｌｎｇ〜１０μｇ／ｍｌ溶液）と官能基 を付与されたデキストラン（１００ｎｇ〜１　ｍ　ｇ　／　ｍ　１溶液）の組合 せによる効果は、官能基を付与された置換デキストラン単独の効果および反応対 照と考えられるそれぞれの要素（コラーゲン、溶解溶液、ＦＧＦ）の効果と比較 し、評価される。

実験における各動物群は、２４時間の倍の間隔の後に犠牲死させ、創傷部位を剥 して、下記の２種類の検討に用いる。

一創傷の面積測定による外部形態学的分析−組織学的検討 結果： ■−官能基を付与されたデキストランの安定化効果：１２５Ｉで放射標識された ＦＧＦを、官能基を付与されたデキストランの存在下又は不存在下でコラーゲン 検子中に含浸（ｄｅｐｏｓ　ｉ　ｔ）する。

含浸されたコラーゲン中の放射活性の変化を、時間の関数として評価する。

その結果を図２に示す。図２において、横軸に時間（ｈｏｕｒ）による時間が、 縦軸に放射活性の百分率がプロ・ノドされている。曲線７はデキストラン存在下 のＦＧＦに対応し、曲線８はＦＧＦ単独に対応する。

放射活性は、コラーゲンゲル中のものおよび当初使用したのと同様のパンチを用 いて当該創傷から２ｃｍ離れた周域から取り外した皮膚中に含まれているものを 測定する。

■一形態学的および組織学的検討： Ａ）形態学的検討 創傷の変化を肉眼観察することにより、ＦＧＦ十官能基を付与されたデキストラ ンの組合せが表面的治癒（表皮形成＋血餅の消散）の品質および速度に及ぼす非 常に顕著な作用を確認することができる。

１）２４時間後、この組合せ物で含浸されたコラーゲン検子は、創傷の壁面に完 全に付着しており、それを剥すには再生された組織に損傷を与えざるを得ない。

対照実験では、コラーゲン検子の完全付着は、３６〜４８時間後に始めて観察さ れた。

２）ＦＧＦ十官能基を付与されたデキストランの混合物の存在下では、３日後に 再上皮形成（ｒｅ−ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎ）の肉眼観察が可能で あるが、対照実験においては同様の観察が可能となるには５〜７日の実験期間を 必要である。

３）面積測定分析：創傷の外表面の面積測定分析から、再生組織の退縮が全く見 られない事が明かとなった。

搬痕退縮（ｓｃａｒ　ｒｅｔｒａｃｔｉｏｎ）の程度は〜比Ｐ／Ａ　（ここでＰ は創傷の周線（ｐｅｒｉｍｅｔｅｒ）を、Ａは廠痕の面積を示す。）を考慮に入 れて、時間の関数で評価する。

このＰ／Ａ比の大きさの程度は、Ｋ／Ｒのタイプであり、ここでＫは定数であり 、Ｒは初期の円形創傷部の半径である。

時間の関数に関しては、この比がより低く且つより一定であれば、それだけ搬痕 の面積は初期の損傷の面積と同様であることを意味する。その結果、Ｐ／Ａ比が 低ければ低いほど、廠痕の再構築（ｓｃａｒ　４ｅｓｔｒｕｃｔｕｒｉｎｇ）の 程度が制限されていることになる。治癒の品質（ｈｅａｌｉｎｇ　ｑｕａｌｉｔ ｙ）は、このように退縮が存在しないことにより反映され得るものである。

得られた結果を図３に示す。図３において横軸は時間（口数）を、縦軸はＰ／Ａ 比を表わしている。退縮の程度を、対照については口で、ｂＦＧＦについては口 で、ヘパラン硫酸存在下のＦＧＦｓについては回で、官能基を付与されたデキス トランと組合されたＦＧＦ　ｓについては−で示した。

これらの結果を、下記表■および表■にも示した。表■は、治癒面積（ｈｅａｌ 　ｉｎｇ　ａｒｅａ）の百分率を、ｂＦＧＦの存在下又は不存在下における官能 基を付与されたデキストラン（ＦＤ）４Ｈの関数として示すものである。

表■は、同じ条件におけるＰ／Ａ比を示す。

表■ 表■ この退縮に対する官能基を付与されたデキストランの効果は、処理後４日目と８ 日目において、顕著に視認できた。

上記の２つの表は、デキストランの本来の治癒効果（ｉｎｈｅｒｅｎｔ　ｈｅａ ｌｉｎｇ　ｅｆｆｅｃｔ）を明確に示すものである。事実表■では、８日後のＦ Ｄ５μｇ存在下における面積百分率は、ｂＦＧＦ単独１μｇ存在下における値と よく似ており、これらの百分率は対照より低い。

対照実験で観察されるもの或いはＦＧＦ単独またはヘパラン硫酸との混合状態で 存在する場合に観察されるものと比べると、その退縮は著しく小さいものであり 、これらの条件が対照よりすでに明らかにより好ましいことを示している。

Ｂ）組織学的検討 処理された領域を取り除き、固定してパラフィンを含浸させる。組織学的検討は 、７μｍ切片を用いて行う。使用した染色剤は、局所解剖学的および組織化学的 検討を可能とする。

組織学的分析から、ＦＧＦ＋ＦＤの組合せにより伝統的な皮膚表皮の治癒段階が 加速され、再形成組織の品質が改善されていることが分かる。

含浸されたコラーゲンは、健康な周囲組織からの、特に直下にある横紋筋床（ｓ ｔｒｉａｔｅｄ　ｍｕｓｃｌｅｆｌｏｏｒ）の結合組織からの、周囲細胞類（繊 維芽細胞、平滑筋細胞）の非常に急速な転移増殖（ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ） （１日）を可能とする。

同時に、脈管が新たに形成されること（ｎｅｏａｎｇｉ○ｇｅｎｅｓｉｓ）によ り、非常に高密度の毛細血管によって、形成されつつある組織の転移増殖を可能 とする。３日後には（対照の５〜６日後と全く異なり）、創傷の唇縁（ｔｉｐｓ ）の表皮から開始した上皮再形成が両端部を接合する（ｊｏｉｎｓ　ｕｐ　ｔｈ ｅ　ｅｄｇｅｓ）ｏ４４日目は、表皮は完全に再形成され、完全に再組織化（ｒ ｅｏｒｇａｎｉｚｅ）された直下の組織は、対照のかなり低い密度と比較して正 常な密度を有していた。これらの同じ実例により、パンチによる創傷をＦＧＦ十 官能基を付与されたデキストランの混合物で処理した場合、摘出された組織が退 縮している対照とは全く異なって、創傷の縁の退縮が見受けられないことが明か となった。

ｂＦＧＦｓと官能基を付与されたデキストランとの組合せによる治癒特性に対す る効果を、その物を添加しない自然治癒と比較して、図４および図５に示した。

図４は、創傷作成から４日後の対照の廠痕（無処理）の組織切片の写真を示す（ ｘ４０）。図５は、１μｇ／ｍｌのｂＦＧＦと５０１１ｇ／ｍｌの官能基を付与 されたデキストランとの溶液を含浸させたコラーゲン検子で処理した後の搬痕組 織切片を、創傷後４日目における同じく４０倍の写真を示す。

図５は完全に再形成された表皮（Ｅ）を示しているのに対して、図４では表皮は 再生されていない。対照創傷の周囲組織の退縮は、処理された創傷では認められ ない。図４において比較的無秩序であるこの廠痕スペース（ｃｉｃａｔｒｉｃｉ ａｌ　５ｐａｃｅ）は、処理された創傷（図５）の場合には組織化されて十分な 細胞密度を有している。これは、本発明の混合物による局所脈管形成効果を示す 血管の存在により特徴づけられるものである。

以上により、ｂＦＧＦ十官能基を付与されたデキストランの結合は、インビボに おいて、強力な治療剤であり、それは一方においては自然再生過程を加速すると 同時に、他方では細胞修復（ｃｅｌｌ　ｒｅｓｔｏｒａｔｉｏｎ）に必要な種々 のカテゴリーの細胞を急速に動員する等の、退縮現象の不存在により、治癒特性 向上を果たすことが明らかである。

実施例Ｅ：官能基を付与されたデキストランによる治癒効果の組織学的および面 積測定による検討実施例りの場合と全ての点で同一である実験プロトコルに従っ て、官能基を付与されたデキストランの治癒効果を評価する。検討したデキスト ランは、実施例Ｃの表■に記載しているものである。これらの官能基を付与され たデキストランまたはそれらの結合（ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）による治癒効果 は、賦形剤単独、コラーゲン検子または非置換デキストラン（Ａで表わした物質 ）を含浸させたコラーゲン検子の存在下での、２つの対照実験と比較して評価し た。

Ａ−形態学的検討 創傷の変化の肉眼による観察から、表面治癒の速度およびその品質に対する官能 基を付与されたデキストランの明瞭な作用が確立できる。

対照実験と比較すると、創傷が官能基を付与されたデキストランで処理された場 合、賦形剤の付着が加速されている。

上皮の再形成は、ＦＧＦｓの作用の下で観察されたものに匹敵する速度論（ｋｉ ｎｅｔｉｃｓ）に従う。

廠痕の面積Ａに対する創傷の周線Ｐの比率Ｐ／Ａは、廠痕の退縮の程度の非常に 顕著な減少を表わしている。得られた結果を表■に示す。

これらの実験は、上記実施例りにおいて明らかにしたような、廠痕退縮および周 囲の皮膚部の変形の阻害において、官能基を付与されたデキストランが特異的な 役割を果たしていることを確認するものである。

Ｂ−組織学的検討 上述した実施例におけると同一の分析を行う。

対照実験の観察結果と比較すると、官能基を付与されたデキストランを含浸させ たコラーゲンによる創傷部周囲の種々の細胞からの転移増殖が、より速く且つよ り強く進行していることが明らかになった。

新脈管形成は明瞭であるが、ＦＧＦ存在下における観察と比較すると持続性に劣 っている。

表皮は４日目頃には伸展して端と端とを接合する。これは、対照で観察される上 皮再形成より少なくとも２４時間早いものである。

従って、官能基を付与されたデキストランには本来的に治珍効果があり、これは 、調和した輪郭に治癲して、創傷端部の自然収縮を減少させ、コラーゲンを要求 する細胞のような、細胞の再形成に必要である種々の細胞の急速な動員をもたら し、対照実験で観察される場合と比較するとより緻密で且つより血管化された再 生組織を形成する作用により明らかとなる。

このような効果は、官能基を付与された置換デキストランが、その場で（ｉｎ　 ５ｉｔｕ）周囲組織から分泌されるＦＧＦｓの作用を、組織において、強化する という事実から、説明できるかもしれない。

表■ 退縮程度Ｐ／Ａを、対照のコラーゲン単独、Ａ型のデキストランを含浸させたコ ラーゲンおよび上述した各種のデキストランに関して表示した。これらの分子は 、すべて３μｇ／ｍｌの濃度で作用する。

（２）：コラーゲン単独 前述したことから明らかなように、本発明は、これらの実施方法、実施態様およ びここにより明快に記述した使用方法によって、決して限定されるものではない 。逆に、本発明の構成または範囲を逸脱することなく、当業者らによりなされ得 る変更のすべてを包含するものである。

補正書の翻訳文提出書（特許法第１８４条の８）平成３年９月９日国

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. １．官能基を付与された置換デキストランの少なくとも１種からなることを特徴 とする、細胞及び組織を再生する活性を有する薬剤。
2. ２．官能基を付与された置換デキストランが、可溶性デキストラン及び不溶性の デキストランからなる群から選ばれることを特徴とする請求項１に記載の薬剤。
3. ３．該官能基を付与されたデキストランが、カルボキシメチル、ベンジルアミド 及びベンジルアミドスルホネートからなる群から選択された官能基を含有するこ とを特徴とする請求項１又は請求項２に記載の薬剤。
4. ４．少なくとも１種の酸性ＦＧＦ（ａｃｉｄＦＧＦ）及び／又は１種の塩基性Ｆ ＧＦ及び／又は、その生物学的活性を有する１種の誘導体及び／又は１種のアナ ログ及び／又は１種のフラグメントと共に、長時間の貯蔵又は温度によって不活 性化された酸性及び／又は塩基性ＦＧＦ／ＦＧＦｓの生物学的活性を、部分的又 は全体的に、復活させることができる、請求項１乃至３のいずれかに記載の、細 胞及び組織を再生する活性を有する薬剤を含むことを特徴とする安定化された組 成物。
5. ５．上記で定義した細胞及び組織を再生する活性を有する薬剤の少なくとも１種 を０．１〜１０００μｇ／ｍｌ及び酸性ＦＧＦｓ、塩基性ＦＧＦｓ、及び生物学 的活性を有するそれらの誘導体、それらのアナログ及びそれらのフラグメントか らなる群から選択された少なくとも１種のＦＧＦを０．０１ｎｇ〜３００μｇ含 有することを特徴とする請求項４に記載の組成物。
6. ６．他の組み合わされる活性成分を更に含有することを特徴とする、請求項１乃 至３のいずれかに記載の細胞及び組織を再生する活性を有する薬剤を含有する組 成物、又は請求項４又は請求項５で定義した様な、ＦＧＦと共に該薬剤を含む組 成物。
7. ７．該組み合わされる活性成分が、特に局所麻酔剤、抗感染症剤、血清蛋白及び コラーゲンからなる群から選ばれることを特徴とする請求項６に記載の組成物。
8. ８．少なくとも１種の製薬学的に許容される賦形剤及び／又は生理学的に許容さ れる支持体を、更に含有することを特徴とする請求項６又は請求項７に記載の組 成物。
9. ９．賦形剤が水であって、該組成物がまた、緩衝液及び／又は塩類を含有し、当 該混合物の塩化ナトリウム当量におけるイオン強度を０．１〜０．２程度の間に 、ｐＨを６．８〜７．４程度に維持することを特徴とする請求項８に記載の組成 物。
10. １０．適当なリボソーム中に、組み入れられていることを特徴とする請求項６乃 至９のいずれかに記載の組成物。
11. １１．支持体が、特に包帯及びバイオマテリアルからなる群から選ばれることを 特徴とする、請求項８乃至１０のいずれかに記載の組成物。
12. １２．賦形剤が適当なガスの時、エアロゾルの形態にあることを特徴とする請求 項１乃至８のいずれかに記載の組成物。
13. １３．軟膏剤、クリーム、ペースト又はローションの様な医薬形態中に含まれる か、又はゲル、特にコラーゲンゲル中に含浸されることを特徴とする請求項１乃 至１０のいずれかに記載の組成物。
14. １４．直接又は間接的に細胞の修復を助長する包帯及びバイオマテリアルの様な 適当な支持体中に含有及び／又は含浸されていることを特徴とする請求項１乃至 １０のいずれかに記載の組成物。