JPH04503014A - ウィルムス腫瘍遺伝子の位置決定と特徴付け - Google Patents
ウィルムス腫瘍遺伝子の位置決定と特徴付けInfo
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Abstract
Description
Claims (45)
- 1.ヒト染色体11バンドp13のウィルムス腫瘍遺伝子座のヌクレオチドから 本質的に成る単離DNA。
- 2.サイズが約50kbである請求項1の単離DNA。
- 3.第3図のヌクレオチド配列の全部または一部を有する請求項1の単離DNA 。
- 4.単離したウィルムス腫瘍DNA、またはその一部。
- 5.ジンク・フィンガーを含むポリペプチドをコードする請求項4の単離DNA 。
- 6.ヌクレオチド配列が、第3図に示したヌクレオチド配列の全てまたはその一 部、または、実質的に相同なヌクレオチド配列である、llp13ウィルムス腫 瘍遺伝子を含む単離DNAまたはその一部。
- 7.約3kbの分子量を有し、請求項1の単離DNAに結合する単離mRNA。
- 8.請求項1のDNAの全部、または、一部によってコードされるポリペプチド 。
- 9.第3図に示したアミノ酸配列の少なくとも一部、または、実質的に相同なア ミノ酸配列から本質的に成る単離ポリペプチド。
- 10.ウィルムス腫瘍DNAによってコードされるポリペプチドにたいして特異 的な抗体。
- 11.請求項10の抗体によって検出可能な実質的に純粋な蛋白。
- 12.第3図のアミノ酸配列の全部または一部を有するポリペプチドにたいして 特異的な抗体。
- 13.a)細胞中に存在するDNAを、相補性DNAとハイプリダイゼーション できるようにし、 b)手順aで形成されたDNAを、ヒト染色体11バンド13のウィルムス腫瘍 遺伝子座の全部または一部にたいして相補的なヌクレオチド配列であるDNAプ ローブと、相補的ヌクレオチド配列のハイプリダイゼーションが起こるのに適当 な条件下で接触させ、 c)細胞中に存在するDNAの、DNAプローブとのハイプリダイゼーションを 検出する(細胞中に存在するDNAの、DNAプローブとのハイプリダイゼーシ ョンは、ウィルムス腫瘍DNAの存在を示す。) ことから成る細胞中のウィルムス腫瘍DNAの検出法。
- 14.DNAプローブが検出可能なように標識されている請求項13の方法。
- 15.DNAプローブのヌクレオチド配列が、第3図のヌクレオチド配列の全部 または一部である請求項14の方法。
- 16.DNAプローブのヌクレオチド配列が、ジンク・フィンガーを含むポリペ プチドをコードする部分である請求項15の方法。
- 17.DNAプローブのヌクレオチド配列が、第5図に示したWT33ジンク・ フィンガーの一つを含むペプチドをコードするヌクレオチド配列に対応する請求 項14の方法。
- 18.DNAプローブのヌクレオチド配列が、プロリン/グルタミン富裕領域を コードするヌクレオチド配列の一部である請求項14の方法。
- 19.プロリン/グルタミン富裕領域が第4図に示したものである請求項18の 方法。
- 20.ヒトから得た細胞または生物性液体を、a)細胞または液体を、ウィルム ス腫瘍DNA、ウィルムス腫瘍mRNA、または、ウィルムス腫瘍遺伝子産物と 結合することができる少なくとも1個のプローブに接触させ、そして、b)結合 が起こったかどうかを決める ことによって、変化のないウィルムス腫瘍遺伝子または遺伝子産物の有無につい てテストすることから成るヒトにおけるウィルムス腫瘍遺伝子の変化の検出法。
- 21.ヒトから得た細胞または生物性液体中の、ウィルムス腫瘍遺伝子産物の存 在を検出ないし定量するイムノアッセイであって、 a)細胞または液体を、ウィルムス腫瘍遺伝子産物に結合することのできる、少 なくとも1種の第1モノクロナール抗体と反応させ、 b)手順(a)の産物を、第1抗体の結合するエピトープとは別のエピトープで 、ウィルムス腫瘍遺伝子と結合することができる、少なくとも1種の、検出でき るように標識された第2モノクロナール抗体と反応させ、 c)手順(b)の産物を検出または定量することから成る該イムノアッセイ。
- 22.免疫反応性フラグメントを用いる請求項21のアッセイ。
- 23.検出可能な標識が、放射性同位元素、酸素、蛍光性、化学発光性及び電気 化学的物置から成る群から選ばれる請求項21のアッセイ。
- 24.第2の抗体が、ビオチンと結合している請求項21のアッセイ。
- 25.ヒト細胞中の、癌または前癌状態の有無を調べるアッセイ法であって、 a)ヒトから、あらかじめ定めた細胞または液体サンプルを取り、 b)ヒトウィルムス腫瘍遺伝子または遺伝子産物にたいするプロープを、あらか じめ定めた細胞または液体サンプルに加え、c)このプローブから、あらかじめ 定めた細胞サンプルの中のウィルムス腫瘍遺伝子の機能部分に変化または欠失が あるかどうかを決める(ウィルムス腫瘍遺伝子または遺伝子産物の変化または欠 失は、癌または前癌状態を示す。)ことから成る該アッセイ法。
- 26.プローブがヌクレオチド・プローブである請求項25の方法。
- 27.プローブが、欠失があるかどうかを決めるのに使用される請求項25の方 法。
- 28.プローブが、ウィルムス腫瘍遺伝子を含む染色体における欠失に関するプ ローブである請求項25の方法。
- 29.プローブが、第3図で示したウィルムス腫瘍遺伝子からの少なくとも20 個のヌクレオチドに対応する請求項28の方法。
- 30.欠失があるかどうかを決める方法が、ポリメラーゼ連鎖反応の使用を含む 請求項29の方法。
- 31.プローブが抗体プローブである請求項25の方法。
- 32.治療的に有効な量のウィルムス遺伝子産物を、疾患細胞に加えることから 成る、ウィルムス腫瘍遺伝子の変化または欠失で引き起こされた癌または前癌状 態の治療法。
- 33.治療的に有効な量のウィルムス遺伝子産物を、機能的ウィルムス腫瘍遺伝 子を含むレトロウイルスベクターを用いる遺伝子移送技術によって、疾患細胞に 加える請求項32の方法。
- 34.a)機能的なヒトウィルムス腫瘍遺伝子、または、その機能的なフラグメ ントに対応する、ウィルムス腫瘍サプレッサー活性を持つ蛋白を発現させるのに 十分な数のヌクレオチド(当該ベクターは、ヒト全染色体を含まない。)及び、 b)このヌクレオチドセグメントの上流にあるプロモーターを含むヌクレオチド セグメントを含むベクター。
- 35.ヌクレオチドセグメントが、第3図に示した配列と実質的に対応する請求 項34のベクター。
- 36.プロモーターがウィルス性プロモーターであり、ベクターが、エンハンサ ーとポリアデニル化配列も含んでいる請求項34のベクター。
- 37.a)細胞中に存在するDNAを、相補性DNAとハイプリダイゼーション できるようにし、 b)手順(a)で形成されたDNAを、ヒト染色体11バンド13のウィルムス 腫瘍部位の全部または一部にたいして相補的なヌクレオチド配列である、検出可 能なように標識されたDNAプローブと、生じる相補的ヌクレオチド配列のハイ プリダイゼーションと、ウィルムス腫瘍DNA/検出可能標識DNAプロープ複 合体の形成に適切な条件下で接触させ、c)ウィルムス腫瘍DNA/検出可能標 識DNAプローブ複合体の量を測定する ことから成る細胞中のウィルムス腫瘍DNAの定量法。
- 38.第3図のヌクレオチド配列、または、その一部と対応する請求項37の方 法で用いるDNAプローブ。
- 39.第3図のヌクレオチド配列、または、その一部から本質的に成る請求項3 7の方法で用いるDNAプローブ。
- 40.個体から得たサンプル中の、ウィルムス腫瘍遺伝子がコードするポリペプ チドの検出法であって、a)サンプルを、第3図のアミノ酸配列の全部または一 部を有するポリペプチドにたいして特異的な、少なくとも1種の抗体と、ウィル ムス腫瘍遺伝子がコードするポリペプチドと抗体の結合、及び、ウィルムス腫瘍 遺伝子コードポリペプチド/抗体複合体の形成に、適切な条件下で混合させ、b )ウィルムス腫瘍遺伝子コードポリペプチド/抗体複合体を検出する ことから成る該検出法。
- 41.さらに、ウィルムス腫瘍遺伝子コードポリペプチド/抗体複合体を、上記 複合体中に存在する、検出可能に標識された抗体の量を測定することによって定 量することを含む請求項40の方法。
- 42.a)ウィルムス腫瘍DNAの全部または一部にたいして相補的なヌクレオ チド配列であるDNAプローブ、及び、b)容器 を含む、細胞中のウィルムス腫瘍DNAを検出するためのキット。
- 43.a)第3図のアミノ酸配列の全部または一部を有するポリペプチドにたい して特異的な単離抗体、及び、b)容器 を含む、細胞中の、ウィルムス腫瘍遺伝子がコードするポリペプチドを検出する ためのキット。
- 44.モノクロナール抗体である請求項10の抗体。
- 45.モノクロナール抗体である請求項12の抗体。
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