JPH04287685A

JPH04287685A - コラゲナーゼ産生微生物

Info

Publication number: JPH04287685A
Application number: JP12888491A
Authority: JP
Inventors: Kosaku Murata; 幸作村田; Shiro Abe; 阿部　士朗; Toshihiro Kuno; 智弘久野
Original assignee: Gunze Ltd
Current assignee: Gunze Ltd
Priority date: 1991-03-15
Filing date: 1991-03-15
Publication date: 1992-10-13

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、土壌より分離して得ら
れたフラホバクテリウム属に属する新規微生物に関し、
更に詳しくは、コラゲナーゼを産生する新規微生物の提
供に関する。

【０００２】

【従来の技術】コラゲナーゼは、従来、クロストリジウ
ム・ヒストリティカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　　ｈ
ｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ）の生産する酵素が最も良く知
られている。かかるコラゼナーゼは、動物組織の細胞分
散などの生化学試薬として幅広く利甲されるだけなく、
最近では椎間板ヘルニアの治療など臨床領域においても
、需要が増大しつつある。しかし、本菌はガス壊疽菌と
して古くから知られる嫌気性の病原菌であり、酵素の大
量生産には適さない。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、大量生産か
容易で経済性のあるコラゲナーゼ生産菌を自然界より検
索し、フラボバクテリウム属に属する２５９−１株およ
び４８９−１株という新規な微生物が培地中にコラゲナ
ーゼを産生することを見いだし、本発明を完成したもの
である。

【０００４】

【課題を解決するための手段】しかるに、本発明は以下
の菌学的性質を有するフラボバクテリウム・エスピー（
Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ｓｐ．）２５９−１
株（微工研菌寄第１２００５号）、およびフラボバクテ
リウム・エスピー４８９−１株（微工研菌寄第１２００
６号）からなる群から選択されたコラゲナーゼ産生微生
物の提供に関するものである

【０００５】Ａ．形態学的性質（１）形および大きさいずれの株も桿菌、大きさは、２５９−１株：０．８×４．０〜４．５μｍ４８９−１
株：０．８×２．０〜２．５μｍ（２）多形性２５９−１株：０．８×２２．０μｍに伸長する。４８９−１株：なし（３）運動性いずれの株もなし。（４）胞子いずれの株もなし。（５）グラム染色いずれの株も陰性。（６）抗酸性いずれの株も陰性。

【０００６】Ｂ．生育状態（１）肉汁寒天平板培養２５９−１株：コロニーは円形、光沢あり、不透明な黄
白色、半球状。４８９−１株：コロニーは円形、光沢あり、不透明な黄
色、半球状。（２）肉汁寒天斜面培養２５９−１株：帯状に生育し、光沢のある不透明な黄白
色のコロニーを形成する。４８９−１株：帯状に生育し、光沢のある不透明な黄色
のコロニーを形成する。（３）肉汁液体培養いずれの株も全体に濁る。（４）肉汁ゼラチン穿刺培養。いずれの株も液化する。（５）リトマス・ミルクいずれの株も凝固する。

【０００７】Ｃ．生理学的性質（１）硝酸塩の還元いずれの株も陰性。（２）脱窒反応いずれの株も陰性。（３）ＭＲテストいずれの株も陰性。（４）ＶＰ反応いずれの株も陰性。（５）インドールの生成２５９−１株：陰性。４８９−１株：陽性。（６）硫化水素の生成２５９−１株：弱い陽性。４８９−１株：陽性。（７）デンプンの加水分解２５９−１株：陰性。４８９−１株：陽性。（８）クエン酸の利用２５９−１株：コーサーの培地、クリステンセンの培地
で利用する。４８９−１株：コーサーの培地では利用しない。クリス
テンセンの培地では利用する（９）無機窒素源の利用いずれの株も硝酸塩、アンモニウム塩を利用しない。（１０）色素の生成２５９−１株：黄色の色素をわずかに生成する。４８９−１株：黄色の色素を生成する。（１１）ウレアーゼいずれの株も陽性。（１２）オキシダーゼいずれの株も陽性。（１３）カタラーゼいずれの株も陽性。（１４）生育の温度範囲いずれの株も１０〜３７℃ （１５）生育のｐＨ範囲２５９−１株：４．８〜９．６４８９−１株：５．７〜８．１（１６）酸素に対する態度いずれの株も好気性。（１７）Ｏ−Ｆテスト２５９−１株：陰性４８９−１株：酸化型（１８）糖類からのガスの生成いずれの菌もなし。（１９）糖類からの酸の生成表１の通り。

【表１】尚、図１には２５９−１株の、図２には４８９−１株の
電子顕微鏡による菌体の拡大写真を示した。以下、本発
明菌株のスクリーニング方法について例示する。

【０００８】

【実施例】（１）１次スクリーニング培地１を３ｍｌ分注した試験管に土壌懸濁水２５ｕｌを
加え、３０℃で２日間培養した。この培養上澄をペーパ
ーディスクに加え、コラーゲンゲルプレート上に供試し
た。３０℃で１８時間インキュベートした後、ハローを
形成した試料についてその培養液を培地２で希釈培養し
、土壌単離菌を得た。

【０００９】（２）２次スクリーニング（１）の方法で
得た土壌単離菌を培地１で３０℃、２日間培養した。こ
の培養上澄をペーパーディスクに加え、コラーゲンゲン
ゲルプレート上に供試した。３０℃で１８時間インキュ
ベートした後、ハローを形成した微生物をコラゲナーゼ
生産菌として採取した。

【００１０】

【００１１】

【発明の効果】本発明は、大量生産が容易で経済性のあ
るコラゲナーゼ生産菌を自然界より得たものである。

【図面の簡単な説明】

【図１】２５９−１株の菌体の電子顕微鏡写真を示す。

【図２】４８９−１株の菌体の電子顕微鏡写真を示す。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】　　以下の菌学的性質を有するフラボバク
テリウム・エスピー（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　
　ｓｐ．）２５９―１株（微工研菌寄第１２００５号）
、およびフラボバクテリウム・エスピー４８９−１株（
微工研菌寄第１２００６号）からなる群から選択された
コラゲナーゼ産生微生物。Ａ．形態学的性質（１）形および大きさいずれの株も桿菌、大きさは、２５９−１株：０．８×４．０〜４．５μｍ４８９−１
株：０．８×２．０〜２．５μｍ（２）多形性２５９−１株：０．８×２２．０μｍに伸長する。４８９−１株：なし（３）運動性いずれの株もなし。（４）胞子いずれの株もなし。（５）グラム染色いずれの株も陰性。（６）抗酸性いずれの株も陰性。Ｂ．生育状態（１）肉汁寒天平板培養２５９−１株：コロニーは円形、光沢あり、不透明な黄
白色、半球状。４８９−１株：コロニーは円形、光沢あり、不透明な黄
色、半球状。（２）肉汁寒天斜面培養２５９−１株：帯状に生育し、光沢のある不透明な黄白
色のコロニーを形成する。４８９−１株：帯状に生育し、光沢のある不透明な黄色
のコロニーを形成する。（３）肉汁液体培養いずれの株も全体に濁る。（４）肉汁ゼラチン穿刺培養。いずれの株も液化する。（５）リトマス・ミルクいずれの株も凝固する。Ｃ．生理学的注質（１）硝酸塩の還元いずれの株も陰性。（２）脱窒反応いずれの株も陰性。（３）ＭＲテストいずれの株も陰性。（４）ＶＰ反応いずれの株も陰性。（５）インドールの生成２５９−１株：陰性。４８９−１株：陽性。（６）硫化水素の生成２５９−１株：弱い陽性。４８９−１株：陽性。（７）デンプンの加水分解２５９−１株：陰性。４８９−１株：陽性。（８）クエン酸の利用２５９−１株：コーサーの培地、クリステンセンの培地
で利用する。４８９−１株：コーサーの培地では利用しない。クリス
テンセンの培地では利用する。（９）無機窒素源の利用いずれの株も硝酸塩、アンモニウム塩を利用しない。（１０）色素の生成２５９−１株：黄色の色素をわずかに生成する。４８９−１株：黄色の色素を生成する。（１１）ウレアーゼいずれの株も陽性。（１２）オキシダーゼいずれの株も陽性。（１３）カタラーゼいずれの株も陽性。（１４）生育の温度範囲いずれの株も１０〜３７℃ （１５）生育のｐＨ範囲２５９−１株：４．８〜９．６４８９−１株：５．７〜８．１（１６）酸素に対する態度いずれの株も好気性。（１７）Ｏ−Ｆテスト２５９−１株：陰性４８９−１株：酸化型（１８）糖類からのガスの生成いずれの菌もなし。（１９）糖類からの酸の生成表１の通り。【表１】