JPH04270279A - １−アザビシクロ［２．２．２］オクト−３−イル１，４−ジヒドロ−２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェニル）−５−ニトロピリジン−３−カルボキシレ−トの異性体類 - Google Patents

Abstract

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Description

【発明の詳細な説明】 【産業上の利用分野】１−アザビシクロ［２．２．２］
オクト−３−イル　１，４−ジヒドロ−２，６−ジメチ
ル−４−（３−ニトロフェニル）−５−ニトロピリジン
−３−カルボキシレ−トの異性体類およびそれらの無毒
の酸付加塩類は強心剤としての効用および例えば鬱血性
心不全の如き心臓脈管障害の治療における効用を有する
有用なカルシウムアゴニストである。 【従来の技術】筋肉の収縮におけるカルシウムイオンの
欠かせない役割は前世紀から周知である。カルシウムイ
オンの作用が細胞内で起きる骨格筋とは対照的に、平滑
筋および心筋の作用はカルシウムの細胞外濃度に大部分
依存している。従って、細胞外カルシウムの調節が数種
の心臓脈管障害の治療において重大の役割を演じる。こ
れらのイオンを調節するために使用されている最も一般
的な試薬はカルシウム拮抗質すなわちカルシウムチャン
ネル遮蔽剤である。簡単に述べると、これらはカルシウ
ムイオンの細胞内への加入を「遅らせ」、そしてそれに
より心筋の力すなわち収縮性を減少させて血圧を低下さ
せる。さらに、これらの試薬は冠動脈の異常な血管収縮
により生じるアンギナの治療および古典的な労力と関連
したアンギナにおける用途も見いだされている。これら
のイオンを調節するための他のさらに規模の小さい種類
の試薬はカルシウムアゴニストすなわちカルシウムチャ
ンネル活性剤である。これらの化合物は細胞壁を通るカ
ルシウムイオンの運動を促進させ、その結果として収縮
性を増加させる。それらは例えば鬱血性心不全の如き減
じられた心臓血液搏出量障害の治療において有用である
。一方、それらをカルシウムチャンネルの薬学的研究に
おける手段として使用することもできる。１，４−ジヒ
ドロ−２，６−ジメチル−５−ニトロ−４−（２−トリ
フルオロメチルフェニル）−３−ピリジン−３−カルボ
ン酸メチル［ＢＡＹ　Ｋ　８６４４、Ｍ．シュラム（Ｓ
ｃｈｒａｍｍ）、Ｇ．トーマス（Ｔｈｏｍａｓ）、Ｒ．
トワード（Ｔｏｗａｒｄ）およびＧ．フランコヴィアク
（Ｆｒａｎｋｏｗｉａｋ）、ネーチャー（Ｎａｔｕｒｅ
）、３０３、５３５（１９８３）、ドイツ特許ＤＥ３，
４４７，１６９およびヨーロッパ特許１８６，０２８Ａ
２］がジヒドロピリジンカルシウムアゴニストの原型で
あり、それの薬学的性質は充分に研究されている。それ
は強力な正の変力性効果を引き起こす。Ｈ．ロッグ（Ｒ
ｏｇｇ）他［Ｂｉｏｃｈｅｍ．　Ｂｉｏｐｈｙｓ．　Ｒ
ｅｓ．　Ｃｏｍｍｕｎ．、１１８；８４２、１９８４、
ヨーロッパ特許１１１，４５３および１１１，４５５］
は、４−［２−（ジフルオロメトキシ）フェニル］−１
，４，５，７−テトラヒドロ−２−メチル−５−オキソ
フロ［３，４−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸エチル（
ＣＧＰ２８３９２）を開示しており、そして細胞外カル
シウムイオン濃度を投与量依存的方法で増加させるそれ
の能力を記載している。この型の薬学的試薬の生物学的
活性に対する立体化学性の影響は、Ｒ．Ｐ．ホッフ（Ｈ
ｏｆｆ）、Ｕ．Ｔ．リューグ（Ｒｕｅｇｇ）、Ａ．ホフ
（Ｈｏｆ）およびＡ．フォーゲル（Ｖｏｇｅｌ）により
記載されている［Ｊ．　Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．　Ｐｈ
ａｒｍａｃｏｌ．、７、６８９（１９８５）、英国特許
２，１４５，８９５およびドイツ特許３，４３８，８８
４］。ラセミ体４−（４−ベンゾフラザニル）−１，４
−ジヒドロ−２，６−ジメチル−５−ニトロピリジン−
３−カルボン酸２−プロピルはカルシウムアゴニズムの
典型的な結果である低い脱分極水準においては兎の大動
脈環の収縮を強めるが、高い脱分極水準においては収縮
および放射性カルシウム吸収を抑制する。Ｒエナンチオ
マーも収縮および放射性カルシウム吸収を抑制し、そし
て刺激剤活性は示さない。しかしながら、Ｓエナンチオ
マーは脱分極−誘発性収縮に関する濃度−応答曲線をほ
とんど平行方式で左に移行させ、それは収縮を強める。 この化合物は全ての脱分極水準において放射活性カルシ
ウム吸収を依存的に強める。従って、このジヒドロピリ
ジンの立体異性体類はそれらの立体化学性によってカル
シウム加入遮蔽剤またはカルシウム加入強化剤として行
動する。β−アミノ−４−（２−クロロフェニル）−１
，４−ジヒドロ−６−メチルピリジン−３−カルボン酸
エチルに関しても、Ｐ．グジョルストラップ（Ｇｊｏｒ
ｓｔｒｕｐ）、Ｈ．ハーディング（Ｈａｒｄｉｎｇ）、
Ｒ．イサクソン（Ｉｓａｋｓｓｏｎ）およびＣ．ウェス
テールンド（Ｗｅｓｔｅｒｌｕｎｄ）［Ｅｕｒ．　Ｊ．
　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１２２、３５７（１９８６）
］により、同様な結果が記されている。このジヒドロピ
リジンの光学的異性体類が猫の乳頭筋および鼠の門脈中
で反対の活性を有することが見いだされている。（＋）
エナンチオマーはカルシウムイオンの活性を抑制し従っ
てこれらの組織の収縮力を減少させるが、（−）エナン
チオマーはカルシウムの効果に刺激を与えそして収縮力
を相当増加させることが見いだされている。容易にわか
るように、種々の構造的に異なるジヒドロピリジン類が
カルシウムアゴニスト活性を有している。実際に、Ｐ．
グジョルストラップ（Ｇｊｏｒｓｔｒｕｐ）他［Ｅｕｒ
．　Ｊ．　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１２２、３５７（１
９８６）］は「（カルシウムチャンネルに対する）アゴ
ニストの特異的適合性の原因となる構造的特徴は不明瞭
のようである」と述べている。１，４−ジヒドロピリジ
ン−３−カルボン酸エステルのアルキル部分中で塩基性
アミンを有するカルシウムチャンネル改質剤が比較的少
ししか記載されていない。他のカルシウムアゴニストで
あるエチル−３−アニリノカルボニル−４−（２−クロ
ロフェニル）−１，４−ジヒドロ−２，６−ジメチルピ
リジン−３−カルボン酸２−（２−ピリジル）（ＹＣ−
１７０）が、Ｙ．ハットリ（Ｈａｔｔｏｒｉ）、Ｈ．ナ
カヤ（Ｎａｋａｙａ）、Ｎ．トウセ（Ｔｏｈｓｅ）およ
びＭ．カンノ（Ｋａｎｎｏ）［Ｊ．　Ｐｈａｒｍａｃｏ
ｌ．　Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．、２３８、６７０］により記
されている。この試薬は単離されたモルモットの心房中
で正の変力性効果を生じ、そして単離された鼠の大動脈
片中で収縮を誘発した。しかしながら、このアゴニスト
は低濃度のカリウムを用いて部分的に脱分極された心房
中では収縮緊張の減少を引き起こし、そして高濃度のカ
リウムにより予備収縮された大動脈に対しては弛緩効果
を生じた。これらの結果は、ＹＣ−１７０がカルシウム
アゴニストとしてだけでなく細胞膜電圧に依存してカル
シウム拮抗質としても作用することを示している。１−
アザビシクロ［２．２．２］オクタン−３−オールとア
リールまたはアラルキルカルボン酸類とのエステル類は
一般的にカルシウムチャンネル遮蔽活性を有する（Ｌ．
ノロンハ−ブロブ（Ｎｏｒｏｎｈａ−Ｂｌｏｂ）、Ｃ．
リチャード（Ｒｉｃｈａｒｄ）およびＤ．Ｃ．ユープリ
チャード（Ｕ’Ｐｒｉｃｈａｒｄ）、Ｂｉｏｃｈｅｍ．
　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈｙｓ．　Ｒｅｓ．　Ｃｏｍｍｕｎ
．、１４７、１８２−１８８、１９８７）。ここに記さ
れている１−アザビシクロ［２．２．２］オクト−３−
イル　１，４−ジヒドロ−２，６−ジメチル−４−（３
−ニトロフェニル）−５−ニトロピリジン−３−カルボ
キシレ−トの新規な異性体類は、それらがカルシウムイ
オンの生理学的運動に力を与えそしてカルシウム誘発性
の平滑筋収縮性を強めるという能力により証明されてい
るように有力なカルシウムチャンネルアゴニストである
。これらの活性は、強心剤としての有用性および例えば
鬱血性心不全の如き心臓障害におけるこれらの異性体類
の有用性を示している。 【課題を解決する手段】本発明は、式Ｉの４種の立体異
性体類群を提供するものである。 【化２】 ここで、不斉中心ａおよびｂは同一であってもまたは異
なっていてもよくそしてＲまたはＳ絶対配置を有する。 本発明はまた、前記化合物の製薬上受入れられる塩類、
該化合物を含有している製剤組成物、並びに強心作用の
生成および鬱血性心不全の治療におけるそれらの用途に
も関するものである。本発明の化合物は、上記式の１−
アザビシクロ［２．２．２］オクト−３−イル１，４−
ジヒドロ−２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェニ
ル）−５−ニトロピリジン−３−カルボキシレ−トの新
規な異性体類およびそれらの製薬上受入れられる塩類で
ある。 該化合物は有効なカルシウムチャンネルアゴニストであ
り、そのためにそれらは強心剤としておよび例えば鬱血
性心不全の如き心臓脈管障害の治療において有用である
。従って、本発明は有効量の個々の異性体類および製薬
上受入れられる担体からなるそのような用途のための製
剤組成物も包含している。本発明はまたカルシウムチャ
ンネルアゴニストとしてのおよび種々の心臓脈管障害を
治療するための該組成物の使用方法も包含している。 本発明の好適な化合物は、（＋ａ，−ｂ）−１−アザビ
シクロ［２．２．２］オクト−３−イル　１，４−ジヒ
ドロ−３，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェニル）
−５−ニトロピリジン−３−カルボキシレ−トである。 本発明の化合物は、遊離塩基の効用を有する製薬上受入
れられる酸付加塩の形状で使用することができる。当技
術で周知の方法により製造されるそのような塩類は、無
機または有機酸類の両者、例えばマレイン酸、フマル酸
、安息香酸、アスコルビン酸、パモイックアシッド（４
，４’−メチレンビス（３−ヒドロキシ−２−ナフトエ
酸）、琥珀酸、ビスメチレンサリチル酸、メタンスルホ
ン酸、エタンスルホン酸、酢酸、シュウ酸、プロピオン
酢酸、酒石酸、サリチル酸、クエン酸、グルコン酸、乳
酸、リンゴ酸、マンデル酸、桂皮酸、シトラコン酸、ア
スパラギン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、イタコン
酸、グリコール酸、ｐ−アミノ安息香酸、グルタミン酸
、ベンゼンスルホン酸、塩酸、臭化水素酸、硫酸、シク
ロヘキシルスルファミン酸、燐酸および硝酸など、を用
いて製造される。本発明の化合物が光学的異性体として
存在出来る範囲に於いて、異性体類およびラセミ体混合
物の両方が本発明に包含されると理解すべきである。さ
らに、本発明の化合物の全ての可能な他の異性体形も本
発明の範囲である。本発明の化合物は、認定されている
薬学的実施法に従い、適切投与量の上記式の化合物を担
体と共に加えることにより、例えば錠剤、カプセル、注
射、エーロゾルなどの如き一般的投与単位形で、経口的
にまたは非経口的に投与することができる。好適には、
化合物またはそれの酸付加塩を希望する活性を生じるの
に充分な量を含んでいる錠剤またはカプセル状で経口的
に動物に対して投与する。各投与単位は活性成分を約１
０ｍｇ−約４００ｍｇ、好適には約３０ｍｇ−約２００
ｍｇの量で含有している。有利には、等しい投与量が１
日に２−４回投与され、１日の投与摂取量は約６０ｍｇ
−約６００ｍｇ、好適には約１００ｍｇ−約３００ｍｇ
、である。使用される薬学的担体は例えば、固体または
液体であることができる。固体担体の例は、乳糖、白土
、庶糖、滑石、ゼラチン、寒天、ペクチン、アラビアゴ
ム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸などであ
る。 液体担体の例は、シロップ、落花生油、オリーブ油、水
などである。同様に、担体または希釈剤は当技術で周知
の時間遅延物質、例えばモノステアリン酸グリセリール
またはジステアリン酸グリセリール、を単独でまたはワ
ックスと共に含有することができる。多種の薬学的形状
を使用することができる。すなわち、固体担体を使用す
る場合には、調合物を錠剤にすることも、粉末もしくは
ペレット状で硬質ゼラチンカプセル中に入れることも、
またはトローチもしくはロゼンジの形状にすることもで
きる。固体担体の量は広く変化できるが、好適には約２
５ｍｇ−約１ｇである。液体担体を使用する場合には、
調合物はシロップ、乳化液、軟質ゼラチンカプセル、例
えばアンプルの如き殺菌性注射用液体、または水性もし
くは非水性液体懸濁液の形状である。本発明の化合物は
、１−アザビシクロ［２．２．２］オクタン−３−オー
ル（３−キヌクリジノール）のエナンチオマー類を用い
る１，４−ジヒドロ−２，６−ジメチル−４−（３−ニ
トロフェニル）−５−ニトロピリジン−３−カルボン酸
のエナンチオマー類のエステル化により製造することが
できる。３−ニトロベンズアルデヒドをｎ−ブチルアミ
ンと縮合させてイミンを与え、それをさらに１−ニトロ
−２−プロパノンと縮合させて４−（３−ニトロフェニ
ル）−３−ニトロ−３−ブテン−２−オンを与えること
により酸は製造された。アセト酢酸２−シアノエチルの
アミノ化により製造された２−シアノエチル　３−アミ
ノブト−２−エノエ−トに対するこのケトンのシクロ付
加により、１，４−ジヒドロ−２，６−ジメチル−４−
（３−ニトロフェニル）−５−ニトロピリジン−３−カ
ルボン酸の２−シアノエチルエステルが得られ、それか
らアルカリ性加水分解により酸が得られる。メタノール
からのブルシン塩の再結晶化により、酸が分割される。 ３−キヌクリジノールのエナンチオマー類は、Ｂ．リン
グダール（Ｒｉｎｇｄａｈｌ）、Ｂ．レスル（Ｒｅｓｕ
ｌ）およびＲ．ダールボム（Ｄａｈｌｂｏｍ）［Ａｃｔ
ａ．　Ｐｈａｒｍ．　Ｓｅｕｃ．、１６、２８１（１９
７９）］の工程により得られる。下記の実施例は本発明
を説明するものである。温度は摂氏温度で表示されてお
り、ＮＭＲ信号はテトラメチルシランの内部標準からの
ｐｐｍダウンフィールドとして示されている。 【実施例】実施例Ｉ １，４−ジヒドロ−２，６−ジメチル−４−（３−ニト
ロフェニル）−５−ニトロピリジン−３−カルボン酸６
０ｍｌの水に、６０ｇ（０．５７モル）の１−ニトロ−
２−プロパノールおよび９２ｇ（０．５７モル）の二ク
ロム酸ナトリウムを加えた。生成した混合物を氷浴中で
冷却し、そして反応混合物の温度を１０℃以下に保ちな
がら６０ｍｌの濃硫酸の５０ｍｌの水中溶液を２時間に
わたり加えた。混合物をさらに５時間攪拌し、６００ｍ
ｌの水で希釈し、そしてエーテルで４回抽出した。有機
層を一緒にし、そして硫酸マグネシウム上で乾燥した。 溶媒を除去すると、６２．１ｍｌの液体が得られ、それ
は放置すると結晶化した。生成した固体をエーテルから
再結晶化させて、３６．４ｇの１−ニトロ−２−プロパ
ノンを与えた。１Ｈ　ＮＭＲ　５．５（ｓ，２Ｈ）、２
．４（ｓ，３Ｈ）。６４ｇ（０．４２モル）の３−ニト
ロベンズアルデヒドのベンゼン中溶液に、２９．２ｇの
ｎ−ブチルアミンを加えた。混合物をディーン−スター
ク・トラップを備えたフラスコ中で加熱還流した。９０
分後に、理論的量の水が分離し、混合物を冷却し、そし
て溶媒を真空下で除去して、８４．４ｇのＮ−（３−ニ
トロベンジリデン）−１−ブタンアミンを与えた。２８
．６ｇ（０．３９モル）のブタンアミンの７５ｍｌの無
水酢酸中溶液に、１５ｇの１−ニトロ−２−プロパノン
を加えた。白色沈澱がほとんど一度に生成した。混合物
を固体が溶解するまで静かに暖め、冷却し、５時間攪拌
し、注意深く水に注ぎ、そしてエーテルで抽出した。有
機層を分離し、水で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で
乾燥し、そして溶媒を減圧下で除去した。０℃で一夜貯
蔵した後に、残渣が結晶化した。生成した固体をジブチ
ルエーテルから再結晶化させて、９．３ｇの４−（３−
ニトロフェニル）−３−ニトロ−３−ブテン−２−オン
を与えた。１Ｈ　ＮＭＲ　８．４（ｍ，２Ｈ）、７．７
（ｍ，２Ｈ）、７．５（ｓ，１Ｈ）、２．５（ｓ，３Ｈ
）。１０ｍｌのメタノールに、２０ｇ（０．１３モル）
のアセト酢酸２−シアノエチルを加えた。溶液を氷中で
冷却し、そして遅いアンモニア気体流を５時間にわたり
通した。反応フラスコに栓をし、そして０℃において一
夜貯蔵した。生成した固体を集め、少量のメタノールで
洗浄し、そして高真空下で乾燥して、１１．１ｇ（０．
０７２モル）の２−シアノエチル　３−アミノブト−２
−エノエートを与えた。１Ｈ　ＮＭＲ　４．６（ｓ，１
Ｈ）、４．３（ｔ，２Ｈ）、２．８（ｔ，２Ｈ）、２．
０（ｔ，３Ｈ）。　　１００ｍｌのエタノールに１１．
８ｇ（０．０５モル）の４−（３−ニトロフェニル）−
３−ニトロ−３−ブテン−２−オンおよび７．７ｇ（０
．０５モル）の２−シアノエチル　３−アミノブト−２
−エノエ−トを加えた。 混合物を一夜加熱還流し、冷却し、そして濾過した。生
成した黄色固体を少量のエタノールで洗浄し、そして高
真空下で乾燥して、１３．８５ｇ（０．０３７モル）の
１，４−ジヒドロ−２，６−ジメチル−４−（３−ニト
ロフェニル）−５−ニトロピリジン−カルボン酸２−シ
アノエチルを与えた。１Ｈ　ＮＭＲ　１０．０（ｍ，１
Ｈ）、８．２（ｍ，２Ｈ）、７．９（ｍ，２Ｈ）、５．
５（ｍ，１Ｈ）、４．３（ｔ，２Ｈ）、３．３（ｓ，１
Ｈ）、２．４（ｓ，３Ｈ）、２．３（ｓ，３Ｈ）。５０
ｍｌの１，２−ジメトキシエタンに、７．２ｇ（０．０
２モル）の１，４−ジヒドロ−２，６−ジメチル−４−
（３−ニトロフェニル）−５−ニトロピリジン−カルボ
ン酸２−シアノエチルを加えた。この溶液に２３ｍｌの
１．０Ｍ水酸化ナトリウムを１５分間にわたり滴々添加
した。４時間後に、混合物を水で希釈し、そして酢酸エ
チルで３回抽出した。水層を分離し、２Ｍ塩酸で酸性（
ｐＨ＜２）とし、そして０℃で１時間貯蔵した。生成し
た固体を濾過し、そして高真空下で乾燥して、６．１ｇ
（０．０１８モル）の黄色固体である１，４−ジヒドロ
−２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェニル）−５
−ニトロピリジン−３−カルボン酸を与えた。１Ｈ　Ｎ
ＭＲ　９．２（ｍ，１Ｈ）、８．２（ｓ，１Ｈ）、７．
８（ｍ，２Ｈ）、７．５（ｍ，２Ｈ）、５．４（ｓ，１
Ｈ）、２．５（ｓ，３Ｈ）、２．２（ｓ，３Ｈ）。 実施例ＩＩ （＋）−１，４−ジヒドロ−２，６−ジメチル−４−（
３−ニトロフェニル）−５−ニトロピリジン−３−カル
ボン酸 １４．５ｇ（０．０３３モル）のブルシン二水和物の３
００ｍｌの酢酸ｎ−ブチル中溶液に、実施例Ｉに記され
ている如くして製造された１，４−ジヒドロ−２，６−
ジメチル−４−（３−ニトロフェニル）−５−ニトロピ
リジン−３−カルボン酸を加えた。混合物を１００℃に
加熱し、そして溶解させるのに充分なメタノール（約１
００ｍｌ）を加えた。混合物を一夜放置し、濾過し、そ
して生成した固体を酢酸ブチル／メタノールから再結晶
化させた。 全ての再結晶化からの母液を保存した。結晶を２５ｍｌ
の２Ｍ塩酸中に溶解させ、そして混合物を酢酸エチルで
２回抽出した。有機層を一緒にし、食塩水で洗浄し、硫
酸マグネシウム上で乾燥し、そして溶媒を減圧下で除去
して、４．１ｇ（０．０１２９モル）の（＋）−１，４
−ジヒドロ−２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェ
ニル）−５−ニトロピリジン−３−カルボン酸を与えた
。［α］Ｄ２０＝＋２４°。 実施例ＩＩＩ （−）−１，４−ジヒドロ−２，６−ジメチル−４−（
３−ニトロフェニル）−５−ニトロピリジン−３−カル
ボン酸 実施例ＩＩに記されている如き（＋）異性体の製造から
得られた一緒にした母液から、溶媒を除去した。生成し
た固体を酢酸ｎ−ブチルおよびシクロヘキサンの混合物
から１回再結晶化させた。このようにして得られた結晶
を酢酸エチル／シクロヘキサンから２回再結晶化させた
。生成した固体を２Ｍ塩酸中に溶解させ、そして混合物
を酢酸エチルで２回抽出した。有機層を一緒にし、２Ｍ
塩酸で２回、食塩水で１回洗浄し、そして硫酸マグネシ
ウム上で乾燥して、（−）−１，４−ジヒドロ−２，６
−ジメチル−４−（３−ニトロフェニル）−５−ニトロ
ピリジン−３−カルボン酸を与えた。［α］Ｄ２０＝−
２４．８°。 実施例ＩＶ （＋ａ，−ｂ）−１−アザビシクロ［２．２．２］オク
ト−３−イル　１，４−ジヒドロ−２，６−ジメチル−
４−（３−ニトロフェニル）−５−ニトロピリジン−３
−カルボキシレ−ト　フマ−ル酸塩 １００ｍｌの塩化メチレンに、２ｇ（０．００６２５モ
ル）の（−）−１，４−ジヒドロ−２，６−ジメチル−
４−（３−ニトロフェニル）−５−ニトロ−３−ピリジ
ンカルボン酸、１．７ｇ（０．００６５モル）のトリフ
ェニルホスフィンおよび１．４ｇ（０．００６５モル）
の二硫化ジピリジニルを加えた。生成した混合物を室温
で一夜攪拌し、溶媒を減圧下で除去し、そして残渣を活
性ＩＩＩアルミナ上で酢酸エチルを溶離剤として用いる
クロマトグラフィーにかけた。１００ｍｌの塩化メチレ
ンに、このチオエステルおよび１．０ｇ（０．００７８
モル）の（＋）−１−アザビシクロ［２．２．２］オク
タン−３−オール［Ｂ．リングダール（Ｒｉｎｇｄａｈ
ｌ）他、Ａｃｔａ．　Ｐｈａｒｍ．　Ｓｅｕｃ．、１６
、２８１（１９７９）；Ｌ．Ｈ．ステルンバッハ（Ｓｔ
ｅｒｎｂａｃｈ）およびＳ．カイゼル（Ｋａｉｓｅｒ）
、Ｊ．　Ａｍ．　Ｃｈｅｍ．　Ｓｏｃ．、７４、２２１
５（１９５２）］を加えた。２．６ｇ（０．０１３モル
）のテトラフルオロホウ酸銀の１００ｍｌのベンゼン中
溶液を加えた。混合物を一夜攪拌し、そして塩化メチレ
ンおよび飽和炭酸水素ナトリウム水溶液の間に分配させ
た。有機層を分離し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し
、そして溶媒を減圧下で除去した。残渣を活性ＩＩＩア
ルミナ上で酢酸エチルから酢酸エチル中５％メタノール
への勾配で溶離するクロマトグラフィーにかけて、３５
０ｍｇの結合されたエステルを与えた。この物質を１８
ｍｌの沸騰している２−プロパノール中に溶解させ、そ
して０．２５ｇのフマル酸を加えた。一夜冷却した後に
、溶液を再び加熱還流し、３ｍｌのシクロヘキサンを加
え、そして混合物を自然に冷却した。結晶を濾過により
集め、そして高真空下で乾燥して、２６２ｍｇの（＋ａ
，−ｂ）−１−アザビシクロ［２．２．２］オクト−３
−イル　１，４−ジヒドロ−２，６−ジメチル−４−（
３−ニトロフェニル）−５−ニトロピリジン−３−カル
ボキシレ−ト　フマ−ル酸塩、融点１４４−１４７℃、
を与えた。１Ｈ　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）８．１（ｍ
，２Ｈ）、７．６５（ｍ，２Ｈ）、６．６（ｓ，２Ｈ）
、５．４（ｓ，１Ｈ）、４．９（ｍ，ＨＯＤにより不明
瞭にされた）、３．２−２．１（ｍ，１２Ｈ）、２．１
−１．５（ｍ，５Ｈ）；ＩＲ（ＫＢｒ）２９４５、１７
１０、１５３０ｃｍ−１；ＨＰＬＣ（４０：１５：２５
、ＭｅＯＨ：ＴＨＦ：Ｈ２Ｏ、５ｍＭヘプタンスルホン
酸）Ｔｒ＝１１．４分、Ｋｐ＝３．５、ホヮットマン・
パーチシル１０−ＯＤＳ−２、１ｍｌ／分；［α］Ｄ２
０＝−９５．６°（ｃ＝０．９０、ＭｅＯＨ）；Ｃ２１
Ｈ２４Ｎ４Ｏ６　Ｃ４Ｈ４Ｏ４　０．５Ｈ２Ｏに関する
分析、計算値：Ｃ，５４．２５；Ｈ，５．２８；Ｎ，１
０．１１。実測値：Ｃ，５３．９２；Ｈ，５．３２；Ｎ
，９．８６。 実施例Ｖ （−ａ，−ｂ）−１−アザビシクロ［２．２．２］オク
ト−３−イル　１，４−ジヒドロ−２，６−ジメチル−
４−（３−ニトロフェニル）−５−ニトロピリジン−３
−カルボキシレ−ト　フマ−ル酸塩 この化合物は（−）−１−アザビシクロ［２．２．２］
オクタン−３−オール［Ｂ．リングダール（Ｒｉｎｇｄ
ａｈｌ）他、Ａｃｔａ．　Ｐｈａｒｍ．　Ｓｅｕｃ．、
１６、２８１（１９７９）；Ｌ．Ｈ．ステルンバッハ（
Ｓｔｅｒｎｂａｃｈ）およびＳ．カイゼル（Ｋａｉｓｅ
ｒ）、Ｊ．　Ａｍ．　Ｃｈｅｍ．　Ｓｏｃ．、７４、２
２１５（１９５２）］および（−）−１，４−ジヒドロ
−２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェニル）−５
−ニトロピリジン−３−カルボン酸（実施例ＩＩＩ）か
ら実施例ＩＶに記されている工程に従い製造されて、（
−ａ，−ｂ）−１−アザビシクロ［２．２．２］オクト
−３−イル　１，４−ジヒドロ−２，６−ジメチル−４
−（３−ニトロフェニル）−５−ニトロピリジン−３−
カルボキシレ−トフマ−ル酸塩、融点１４１−１４２℃
、を与えた。１Ｈ　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）８．１（
ｍ，２Ｈ）、７．７（ｍ，２Ｈ）、６．６（ｓ，２Ｈ）
、５．５（ｓ，ＨＯＤにより不明瞭にされた）、４．９
（ｍ，ＨＯＤにより不明瞭にされた）、３．５−２．２
（ｍ，１２Ｈ）、２．１−１．５（ｍ，５Ｈ）；ＩＲ（
ＫＢｒ）２９４５、１７１０、１５３０ｃｍ−１；ＨＰ
ＬＣ（４０：１５：２５、ＭｅＯＨ：ＴＨＦ：Ｈ２Ｏ、
５ｍＭヘプタンスルホン酸）Ｔｒ＝１１．４分、Ｋｐ＝
３．５、ホヮットマン・パーチシル１０−ＯＤＳ−２、
１ｍｌ／分；［α］Ｄ２０＝−８５．６°（ｃ＝１．２
５、ＭｅＯＨ）。Ｃ２１Ｈ２４Ｎ４Ｏ６　Ｃ４Ｈ４Ｏ４
　に関する分析、計算値：Ｃ，５５．１４；Ｈ，５．１
８；Ｎ，１０．２８。実測値：Ｃ，５４．９０；Ｈ，５
．２９；Ｎ，１０．１４。 実施例ＶＩ （＋ａ，＋ｂ）−１−アザビシクロ［２．２．２］オク
ト−３−イル　１，４−ジヒドロ−２，６−ジメチル−
４−（３−ニトロフェニル）−５−ニトロピリジン−３
−カルボキシレ−ト　フマ−ル酸塩 この異性体は（＋）−１−アザビシクロ［２．２．２］
オクタン−３−オール［Ｂ．リングダール（Ｒｉｎｇｄ
ａｈｌ）他、Ａｃｔａ．　Ｐｈａｒｍ．　Ｓｅｕｃ．、
１６、２８１（１９７９）；Ｌ．Ｈ．ステルンバッハ（
Ｓｔｅｒｎｂａｃｈ）およびＳ．カイゼル（Ｋａｉｓｅ
ｒ）、Ｊ．　Ａｍ．　Ｃｈｅｍ．　Ｓｏｃ．、７４、２
２１５（１９５２）］および（＋）−１，４−ジヒドロ
−２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェニル）−５
−ニトロピリジン−３−カルボン酸（実施例ＩＩ）から
実施例ＩＶに記されている工程に従い製造されて、（＋
ａ，＋ｂ）−１−アザビシクロ［２．２．２］オクト−
３−イル　１，４−ジヒドロ−２，６−ジメチル−４−
（３−ニトロフェニル）−５−ニトロピリジン−３−カ
ルボキシレ−トフマ−ル酸塩、融点１５４−１５６℃、
を与えた。１Ｈ　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）８．１（ｍ
，２Ｈ）、７．６（ｍ，２Ｈ）、６．５（ｓ，１Ｈ）、
５．４（ｓ，１Ｈ）、４．８（ｍ，ＨＯＤにより不明瞭
にされた）、３．４−２．１（ｍ，１２Ｈ）、２．１−
１．５（ｍ，５Ｈ）；ＩＲ（ＫＢｒ）２９６０、１７１
０ｃｍ−１；ＨＰＬＣ（４０：１５：２５、ＭｅＯＨ：
ＴＨＦ：Ｈ２Ｏ、５ｍＭヘプタンスルホン酸）Ｔｒ＝１
１．２分、Ｋｐ＝３．４８、ホヮットマン・パーチシル
１０−ＯＤＳ−２、１ｍｌ／分；［α］Ｄ２０＝−８７
．４°（ｃ＝１．７５、ＭｅＯＨ）。 Ｃ２１Ｈ２４Ｎ４Ｏ６　Ｃ４Ｈ４Ｏ４　に関する分析、
計算値：Ｃ，５５．１４；Ｈ，５．１８；Ｎ，１０．２
８。実測値：Ｃ，５５．３６；Ｈ，５．３１；Ｎ，１０
．４９。 実施例ＶＩＩ （−ａ，＋ｂ）−１−アザビシクロ［２．２．２］オク
ト−３−イル　１，４−ジヒドロ−２，６−ジメチル−
４−（３−ニトロフェニル）−５−ニトロピリジン−３
−カルボキシレ−トフマ−ル酸塩 この異性体は、（−）−１−アザビシクロ［２．２．２
］オクタン−３−オール［Ｂ．リングダール（Ｒｉｎｇ
ｄａｈｌ）他、Ａｃｔａ．　Ｐｈａｒｍ．　Ｓｅｕｃ．
、１６、２８１（１９７９）；Ｌ．Ｈ．ステルンバッハ
（Ｓｔｅｒｎｂａｃｈ）およびＳ．カイゼル（Ｋａｉｓ
ｅｒ）、Ｊ．　Ａｍ．　Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、７４、２
２１５（１９５２）］および（＋）−１，４−ジヒドロ
−２，６−ジメチル−４−（３−ニトロフェニル）−５
−ニトロピリジン−３−カルボン酸（実施例ＩＩ）から
、実施例ＩＶに記されている工程に従い製造された。該
フマル酸塩は１５２−１５６℃で融解した。１ＨＮＭＲ
（ＤＭＳＯ−ｄ６）８．１（ｍ，２Ｈ）、７．６（ｍ，
２Ｈ）、６．６（ｍ，２Ｈ）、５．４（ｓ，１Ｈ）、４
．７５（ｍ，ＨＯＤにより不明瞭にされた）、３．２−
２．１（ｍ，１２Ｈ）、２．１−１．３（ｍ，５Ｈ）；
ＩＲ（ＫＢｒ）２９５４、１７０８ｃｍ−１；ＨＰＬＣ
（４０：１５：２５、ＭｅＯＨ：ＴＨＦ：Ｈ２Ｏ、５ｍ
Ｍヘプタンスルホン酸）Ｔｒ＝１１．６分、Ｋｐ＝３．
６４、ホヮットマン・パーチシル１０−ＯＤＳ−２、１
ｍｌ／分；［α］Ｄ２０＝−９７．６°（ｃ＝１２．１
５、ＭｅＯＨ）。Ｃ２１Ｈ２４Ｎ４Ｏ６　Ｃ４Ｈ４Ｏ４
　に関する分析、計算値：Ｃ，５５．１４；Ｈ，５．１
８；Ｎ，１０．２８。実測値：Ｃ，５５．０４；Ｈ，５
．４０；Ｎ，１０．３１。 実施例ＶＩＩＩ 原形質膜を越えるカルシウム内向きのフラックスの相乗
化 この試験システムは、化合物が電圧感応性カルシウムチ
ャンネルを介して細胞中にカルシウムを送るための化合
物の相対的能力を評価するために開発された。この技術
は、細胞内の遊離カルシウム濃度における変化を監視す
るために高カルシウム親和性蛍光染料を使用している。 細胞に保護された非蛍光形のカルシウム感応性染料を培
養させた。この化合物は細胞壁を透過し、そして細胞に
入る。そこでそれは酵素により蛍光性染料であるクイン
２に変換され、それは細胞から出ることはできない。ク
イン２はカルシウムイオンに対する高い親和性を有して
おり、そしてカルシウムが染料に結合されている時には
、複合体は蛍光を発し、蛍光強度はカルシウムイオン濃
度に比例している。電圧感応性カルシウムチャンネルは
媒体に対する塩化カリウムの添加により活性化され、そ
してカルシウムイオン内向きのフラックスが起きる。 蛍光の増加を測定して、対照値であるカルシウム内向き
のフラックスの相対的測定値を与える。別個のキュベッ
ト中で、塩化カリウムおよび試験化合物の両者を細胞に
投与し、そして蛍光を測定した。カルシウムアゴニスト
は細胞内へのカルシウムの内向きのフラックスを増加さ
せるはずであり、従って蛍光の増加があるはずである。 対照値より上の％刺激が蛍光の増加から得られる。大量
の電圧依存性カルシウムチャンネルを含有している識別
された鼠の神経細胞（神経芽細胞腫ｘ膠腫）雑種細胞（
ＮＧ１０８−１５）を、これらの化合物を試験するため
の組織原料として使用した。簡単に述べると、ＮＧ１０
８−１５細胞を１０％ＣＯ２中で３７℃においてブルタ
ミン（１．０ｍＭ）、胎牛血清（ＦＢＳ；１０％）およ
びハイポキサンチン（１００μＭ）、アミノプテリン（
１．０μＭ）、並びにチミジン（２０μＭ）が補充され
ているダルベッコ改質エーグル培地（ＤＭＥＭ）中で培
養した。識別は、ジブチル環式ＡＭＰを用いる処理（４
日間、１．０ｍＭ）により誘発された［Ｌ．ノロンハ−
ブロブ（Ｎｏｒｏｎｈａ−Ｂｌｏｂ）、Ｃ．リチャード
（Ｒｉｃｈａｒｄ）およびＤ．ユープリチャード（Ｕ’
Ｐｒｉｃｈａｒｄ）、Ｊ．　Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．、５
０、１３８１−１３９０、１９８８］。細胞を暖かいＤ
１食塩水（組成：１３７ｍＭ　ＮａＣｌ、５．４ｍＭ　
ＫＣｌ、０．１７ｍＭ　Ｎａ２ＰＯ４、０．２２ｍＭ　
ＫＨ２ＰＯ４、５．５ｍＭ　グルコース）中での静かな
攪拌により、細胞を収穫した。分散された細胞（５×１
０６個の細胞／ｍｌ）をクイン２アセトキシメチルエス
テル（クイン２−ＡＭ、カルシウム特異性染料）［１０
０μＭ、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中］と共に
３７℃で６０分間培養した。細胞を次に氷冷媒体中で希
釈し、遠心し、そして氷冷ＨＥＰＥＳ緩衝液（組成：１
３０ｍＭ　ＮａＣｌ、５．０ｍＭ　ＫＣｌ、６．０ｍＭ
　グルコース、１．０ｍＭ　ＭｇＣｌ２、１．０ｍＭ　
ＣａＣｌ２、および２ｍＭ　ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４）
中で２回（１，５００Ｘｇ、３分間）洗浄した。蛍光を
、パーキン−エルマーＬＳ−５分光光度計上で３３９お
よび４９２ｎｍの励起および発光波長においてそれぞれ
１５および２０ｎｍのスリット幅で監視した。細胞（−
３Ｘ１０６／キュベット）を懸濁液中で３７℃において
磁気セルスタラーを用いて保った。脱分極はＫＣｌ（５
０ｍＭ）を用いて誘発されるか、またはＫＣｌおよびカ
ルシウムアゴニストであるＢＡＹ　Ｋ　８６４４の同時
添加により示される。蛍光における変化は、最終値およ
び初期値の間の差から計算された。結果は、塩化カリウ
ム刺激（対照）を越える百分率増加分として表示された
。　　これらの試験の結果を表Ｉに示す。 カルシウムイオン誘発性平滑筋収縮性の強化この試験は
、試験化合物がカルシウムイオンにより引き起こされる
筋肉収縮を強める能力の測定である。筋肉の試料を緊張
下で装置中に入れて、それの長さを測定し、そして塩化
カリウムの添加（カルシウムチャンネルを活性化させる
ため）およびその後のカルシウムイオン溶液の添加によ
り収縮させた。カルシウム働筋の添加は追加カルシウム
イオンの内向きのフラックスを引き起こすはずであり、
それによりさらに筋肉の収縮を引き起こすはずである。 この追加収縮を誘発するのに必要な試験化合物の最低濃
度を測定し、同時にえられた最大収縮およびそれに達し
た時の濃度も測定した。雄の白モルモットの回腸を３−
４ｃｍ部分に切断した。腸筋叢が結合している縦の筋肉
を環状筋肉から分離した。組織をタイロード溶液（１３
７ｍＭの塩化ナトリウム、２．７ｍＭの塩化カリウム、
１．８ｍＭの塩化カルシウム、１．１ｍＭの塩化マグネ
シウム、０．４ｍＭの燐酸二水素ナトリウム、および５
．６ｍＭのデキストロース）を含有している１０ｍｌの
水冷却筒付ガラス組織浴中に懸濁させた。浴を３７℃に
保ち、そして９５％酸素／５％二酸化炭素を通気させた
。各調製物を０．３ｇの休止緊張下で懸濁させた。組織
を２４分間にわたりカルシウムを含まないタイロード溶
液と交換し、４分間毎に溶液を完全に置換させた。次に
塩化カリウムを加えて８０ｎＭの浴濃度とし、そしてカ
ルシウム溶液を累積的に加えて浴カルシウムイオン濃度
を０．１−８．０ｍＭに増加させた。組織を正常タイロ
ード中でそして次にカルシウムを含まないタイロード中
で再び平衡化した。組織を薬品に６分間露呈した後に累
積的添加工程を繰り返すことにより、薬品の存在下での
カルシウム誘発収縮の強化を測定した。応答を、薬品の
不存在下でのカルシウムイオンにより誘発された最大収
縮に関して表示した。この実験からのデータを表ＩＩに
示す。増加に関するしきい値は、カルシウム誘発収縮の
強化を生じた化合物の最低濃度である。最大強化は、最
大対照カルシウム誘発収縮の百分率として表示されてい
る対照応答を越えた増加分である。最大強化を生じた化
合物の濃度も挙げられている。 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　表ＩＩ式Ｉ異性体類　　　　　　　　増加に
関する　　　　　最大強化　　　　　　　最大強化にお
ける　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　しきい
値（ｎＭ）　　　（％最大収縮）　　　濃度（ｎＭ）　
　　　　　（−ａ，−ｂ）　　　　　　　　　　　　１
０　　　　　　　　　　　　１８％　　　　　　　　　
　　　　１０（−ａ，＋ｂ）　　　　　　　　　　１０
０　　　　　　　　　　　　１３％　　　　　　　　　
１０００（＋ａ，−ｂ）　　　　　　　　　　　　１０
　　　　　　　　　　　　１５％　　　　　　　　　　
　　　１０（＋ａ，＋ｂ）　　　　　　　　　　　　１
０　　　　　　　　　　　　１１％　　　　　　　　　
　　１００ＢＡＹ　Ｋ　８６４４　　　　　１０　　　
　　　　　　　　　３８％　　　　　　　　　　　１０
０（参考標準）　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　【化３】

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　式： 【化１】 ［式中、（ａ）および（ｂ）は同一であってもまたは異
   なっていてもよい不斉中心でありそしてＲまたはＳ絶対
   配置を有する］の化合物。
2. 【請求項２】　　中心（ａ）が右旋性でありそして中心
   （ｂ）が左旋性である、請求項１に記載の化合物。
3. 【請求項３】　　（ａ）および（ｂ）中心が左旋性であ
   る、請求項１に記載の化合物。
4. 【請求項４】　　（ａ）および（ｂ）中心が右旋性であ
   る、請求項１に記載の化合物。
5. 【請求項５】　　中心（ａ）が左旋性でありそして中心
   （ｂ）が右旋性である、請求項１に記載の化合物。
6. 【請求項６】　　請求項１に記載の化合物および製薬上
   受入れられる担体を含んでいる製剤組成物。
7. 【請求項７】　　治療を必要とする患者に有効量の請求
   項６に記載の組成物を投与することからなる、強心作用
   を生じさせる方法。
8. 【請求項８】　　治療を必要とする患者に有効量の請求
   項６に記載の組成物を投与することからなる、鬱血性心
   不全の治療方法。