JPH0374677B2

JPH0374677B2 -

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Publication number: JPH0374677B2
Application number: JP59264579A
Authority: JP
Priority date: 1984-12-17
Filing date: 1984-12-17
Publication date: 1991-11-27
Also published as: JPS61141889A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、新規な抗生物質SF−2197B物質及
びその製造法に関するものである。更に詳しく述
べれば、新規な抗生物質SF−2197B物質及びミ
クロビスポラ属に属するSF−2197B物質生産菌
を培養し、培養物からSF−2197B物質を採取す
ることよりなる該物質の製造法に関するものであ
る。本発明者らは、種々のグラム陽性菌及び陰性菌
並びに嫌気性菌に抗菌活性を有する新規、かつ有
用な抗生物質を探索した結果、ミクロビスポラ属
に属する菌株の培養物中に新規抗生物質SF−
2197B物質が生産されていることを見い出し、そ
の有効物質を培養物中から純粋に単離し、その理
化学的性状及び生物学的性状を確定することによ
り、本発明を完成させた。本発明に使用されるSF−2197B物質生産菌の
一例としては、静岡県焼津市の士壌より分離され
た放線菌SF−2197株がある。SF−2197株の菌学
的性状は下記の通りである。形態的性質グルコース・アスパラギン寒天，ベネツト寒
天等で単純分枝の気菌糸をよく着生し、気菌糸
上に多数の互生する短い胞子連鎖を形成する。
電子顕微鏡による観察では、胞子の連鎖は２個
の場合が多いが、３個の連鎖もかなり見うけら
れ、４個の場合もある。胞子の表面はスムー
ス、胞子の形態は長円形〜卵形で大きさは0.4
〜0.6×0.6〜1.2μmである。運動性は認められ
ない。基中菌糸はよく伸長、分枝し分断は見ら
れない。その他胞子のう，菌核，結束糸等の特
殊な構造は観察できなかつた。各種培地上での生育状態

【表】 SF−2197株の各種培地上での生育状態は、
この表に示した通りである。培養は28℃、観察
は14〜21日培養後に行つた。生理的性質 (1) 生育温度範囲：イースト麦芽寒天において
15〜42℃の温度範囲に生育し、25〜30℃で良
好に生育する。 (2) ゼラチンの液化：陰性 (3) スターチの加水分解：陰性 (4) 脱脂乳のペプトン化：陰性脱脂乳の凝固：陰性 (5) 硝酸塩の還元：陰性 (6) 耐塩性：５％食塩では生育するが、７％以
上では生育しない。 (7) メラニン様色素の生成：疑わしい炭素源の利用性（プリードハム・ゴツトリー
ブ寒天培地） (1) 利用する糖：Ｄ−グルコース，Ｄ−フラク
トース，Ｄ−キシロース，グリセロール，Ｌ
−アラビノース，D.マンニトール，ラフイ
ノース，Ｌ−ラムノース，シユークロース (2) 利用しない糖：ｉ−イノシトール細胞壁組成ベツカー（Becker）らの方法〔Appl.
Microbiol.，12，421（1964）〕及びルシバリエ
（Lechevalier）の方法〔J.Lab.Clin.Med.，71，
934（1968）〕により分析した結果、全細胞加水
分解物中のジアミノピメリン酸はDL型であり、
キシロース，アラビノースは検出できなかつ
た。以上の菌学的性状から、SF−2197株は放線菌
の中でミクロビスポラ（Microbispora）属とミ
クロテトラスポラ（Microtetraspora）属の中間
的菌株と考えられるが、主として胞子連鎖が２個
であることを重視し、ミクロビスポラ属に所属さ
せることにした。従つて、本発明者らはSF−2197株をミクロビ
スポラ・エスピー・SF−2197（Microbispora sp.
SF−2197）と命名した。なお、本菌株は微工研
に、受託番号第7213号（FERM Ｐ−7213）とし
て寄託されている。 SF−2197株は、他の放線菌の菌株の場合にみ
られるように、その性状が変化しやすく、例えば
紫外線，エツクス線，放射線，薬品等を用いる人
工変異手段で変異しうるものであり、いずれの変
異株であつてもSF−2197B物質の生産能を有す
るものはすべて本発明の方法に使用することがで
きる。本発明の方法では、前記菌株を通常の微生物が
利用しうる栄養物を含有する培地で培養する。栄
養源としては従来より放線菌の培養に利用されて
いる公知のものが使用できる。例えば炭素源とし
てグルコース，グリセロール，シユークロース，
スターチ，水あめ、デキストリン，糖密，オート
ミール，食用油等を使用しうる。また、窒素源と
しては大豆粉，小麦胚芽，綿実かす，トマトケチ
ヤツプ，コーンステイープリカー，肉エキス，ペ
プトン，酵母エキス，硫酸アンモニウム，硝酸ナ
トリウム等を使用しうる。その他必要に応じて炭
酸カルシウム，塩化ナトリウム，塩化コバルト，
リン酸塩，硫酸マグネシウム等の無機塩類を添加
する他、菌の生育を助け、SF−2197B物質の生
産を促進するごとき有機及び無機物質を適当に添
加することができる。培養法としては、一般抗生物質生産の公知の方
法と同じく、好気的条件下での液体培養法、特に
探部培養法が最も適している。培養に適当な温度
は20℃〜35℃であるが、多くの場合25℃〜30℃の
範囲で培養することが好ましい。 SF−2197B物質の生産は、使用する培地や培
養方法によつても異なるが、振盪培養法あるいは
培養タンクを用いる深部培養法では通常２〜７日
の間でその蓄積が最高に達する。 SF−2197B物質の検定にあたつては次の方法
が用いられる。検定用培地としてはガム寒天培地
（日水製薬）を用いる。検定菌としてはバクテロ
イデス・フラギリス（Bacteroides fragilis）を
用いる。 SF−2197B物質は0.25μg／ml〜1μg／mlにおい
て、濃度の対数と阻止円径との関係は直線関係を
示し、それぞれ16.4mm〜23.3mmの阻止円径を与え
る（ペーパーデイスク平板法）。本発明により得られるSF−2197B物質は脂溶
性，中性物質である。これを培養物より採取する
に当つて、その抽出，精製にはアンバーライト
XAD−２（ローム・アンド・ハース社製），ダイ
ヤイオンHP−20（三菱化成社製）等の合成吸着
剤，セフアデツクスLH−20，トヨパールHW−
40（東洋ソーダ社製）等のゲル濾過剤，ヘキサン
による沈澱法，酢酸エチル等による溶媒抽出法，
シリカゲルによるカラムクロマトグラフイー等が
有効であるが、以下の方法が効率的である。即
ち、培養液より菌体その他の固型物をケイソウ土
等の濾過助剤を用いて濾別し、次いで、濾液中の
有効成分をダイヤイオンHP−20に吸着させる。
樹脂部を水洗後、50％メタノール水で予洗後、有
効成分を80％アセトン水で溶出する。活性画分を
減圧濃縮し、アセトンを溜去した濃縮液から酢酸
エチルで有効成分を抽出する。この抽出液を減圧
濃縮後、ｎ−ヘキサンを加え有効成分を沈澱させ
る。沈澱物をセフアデツクスLH−20，シリカゲ
ル等のカラムクロマトグラフイー，高速液体クロ
マトグラフイー等を適宜組合わせることにより
SF−2197B物質の純品を得ることができる。以下にSF−2197B物質の理化学的性状を示す。 (1) 元素分析値：炭素59.22％，水素9.31％，窒
素12.37％，酸素19.1％（差） (2) 分子量：質量分析（SIMS）によりｍ／z481
に（M⁺＋１）のピークが認められることか
ら分子量は480と考えられる。 (3) 融点：78℃ (4) 比旋光度：〔α〕²⁵ _p＝−20.2゜
（Cl，メタノール） (5) 紫外部吸収スペクトル：特徴的吸収を示さな
い。 (6) 赤外部吸収スペクトル：臭化カリウム錠中で
測定したスペクトルは第１図に示した通りで
あり、下記の吸収ピークを有する。吸収ピーク（νcm^-1）：3300，2950，2920，
2850，1720，1660，1620，1540，1440，
1420，1360，1250，1160，1060，990，920，
860 (7) 溶解度：メタノール，クロロホルム，アセト
ン，酢酸エチルに可溶。水，ｎ−ヘキサンに
不溶。 (8) 呈色反応：レミユー，ヨウ素試薬及び塩化第
２鉄試薬陽性。ニンヒドリン及び硫酸試薬陰性。 (9) 薄層クロマトグラフイーのRf値：シリカゲ
ル60 F254（メルク社製）クロロホルム−メタノール（10：１） 0.51 ベンゼン−アセトン（１：１） 0.42 (10) 中性，酸性，塩基性の区別：中性 (11) 物質の色：白色 (12) ¹H−NMRスペクトル：重クロロホルム中
400MHzで測定したスペクトルを第２図に示
す。 (13) ¹³C−NMRスペクトル：重クロロホルム中
100MHzで測定したスペクトルを第３図に示
した通りであり、下記の吸収ピークを有す
る。吸収ピーク（ppm）：11.65，13.99，16.10，
20.92，22.43，24.28，26.20，26.36，28.53，
31.76，32.71，34.85，36.69，36.90，47.36，
50.27，63.05，169.81，172.20，177.39，
208.13 次に、SF−2197B物質の各種細菌に対する最
小発育阻止濃度（MIC）を第１表に、また各種
嫌気性菌に対する最小発育阻止濃度（MIC）を
第２表に示す。これらの表が示すごとく、SF−
2197B物質は種々のグラム陽性菌及び嫌気性菌に
抗菌活性を有し、これら細菌や嫌気性菌に起因す
るヒト、動物の疾病の予防および治療に用いられ
る。

【表】

【表】以上述べた諸性状より本発明の化合物に類似す
る既知抗生物質としてSF−2197A物質（特願昭
58−189591）があげられるが、SF−2197A物質
とは質量分析値及びNMRスペクトルより明らか
に区別されることにより、SF−2197B物質を新
規な抗生物質と判定するに至つた。以下に本発明の実施例を示すが、これらは単な
る一例であつて、本発明を限定するものではな
い。ここに例示しなかつた多くの変法あるいは修
飾手段を用い得ることはもちろんである。実施例１種菌用培地（グルコース．０％，スターチ1.0
％，ペプトン0.5％，イーストエキス0.3％，大豆
粉0.2％，ミートエキス0.2％，炭酸カルシウム0.1
％）を100ml容三角フラスコに20ml分注滅菌後、
ミクロビスポラ・エスピーSF−2197株（FERM
Ｐ−7213）をイーストスターチ寒天斜面培養より
３〜４白金耳接種し、28℃で３日間培養した。得
られた種菌50mlを、上記培地１を５容三角フ
ラスコ２本に分注滅菌したものに接種し、28℃で
24時間振盪培養した。次に、この種菌１を、上記培地35を50容
ジヤーフアーメンター２基に入れ滅菌後接種し、
28℃で24時間培養した。この種培養液30を滅菌
した生産培地（水飴6.0％，大豆油0.3％，サング
レイン（サントリー社製）1.0％，綿実粕1.5％，
グルテンミール1.2％，小麦胚芽0.8％，炭酸カル
シウム0.2％）200を含む300容ステンレスタ
ンク２基に接種し、28℃で４日間通気撹拌培養し
た（通気量200／分，撹拌初期100回転／分，２
日目から150回転／分）。培養終了後、培養液のPHを2.0に調節し、ケイ
ソウ土を助剤に用いて濾過し培養液280を得た。実施例２実施例１で得られた培養液280をPH7.0に調節
後、ダイヤイオンHP−20（三菱化成社製）15
にバツチ法にて有効成分を吸着させた。樹脂を回
収後、塔につめ30の水で洗浄したのち50％メタ
ノール水60にて予洗を行つた。さらに、80％ア
セトン水にて溶離した。活性区分30を集め、減
圧濃縮し、アセトンを溜去した。濃縮液10に酢
酸エチル10を加え有効物質を抽出した。この抽出液を減圧下で濃縮し、100mlになつた
ところｎ−ヘキサン１を加えて放置すると、有
効物質は沈澱した。上澄を除去した後、沈澱物を
メタノールに溶解させ、セフアデツクスLH−20
（フアルマシア社製）700mlの塔に付し、メタノー
ルで展開すると、20ml分画でフラクシヨン24〜36
に有効物質が溶出した。この活性フラクシヨンを
合併し、減圧下で濃縮乾固すると、SF−2197B
物質の粗粉末7.8ｇが得られた。この粗粉末をクロロホルムで充填したワコーゲ
ルＣ−200（和光純薬製）250mlの塔に付し、クロ
ロホルム−メタノール（50：１）混液で展開する
と、15ml分画でフラクシヨン80〜130に有効物質
が溶出した。活性フラクシヨンを合併し、濃縮乾
固すると、SF−2197B物質の粗粉末1.9ｇが得ら
れた。この1.9ｇをメタノールで充填したトヨパ
ールHW−40（東洋ソーダ社製）500mlの塔に付し
メタノールにて展開すると、20ml分画でフラクシ
ヨン24〜30に活性フラクシヨンが得られた。この
活性フラクシヨンを合併し減圧下で濃縮乾固する
と、SF−2197B物質の粗粉末880mgが得られた。実施例３実施例２で得られたSF−2197B物質の粗粉末
300mgを１mlのメタノールに溶解し、YMC−
PACK Ｓ−343（ODS）（山村化学社製）のカラ
ム（20φ×250mm）を用いた高速液体クロマトグ
ラフイーで４ml／分の流速にて70％メタノールで
展開し、活性画分を濃縮乾固し、80mgの粗粉末を
得た。さらに、この粗粉末をアセトニトリルで充填し
たLH−20 200mlの塔に付し、アセトニトリルに
て展開し、活性画分を減圧下で濃縮乾固してSF
−2197B物質の白色粉末17mgを得た。本物質は前
記の理化学的性質を有する。

【図面の簡単な説明】

第１図はSF−2197B物質の臭化カリウム錠中
での赤外部吸収スペクトルである。第２図はSF
−2197B物質の重クロロホルム溶液中での ¹H−
NMRスペクトルである。第３図はSF−2197B物
質の重クロロホルム溶液中での ¹³C−NMRスペ
クトルである。

Claims

【特許請求の範囲】１下記の理化学的性質を有するSF−2197B物
質。１）元素分析値：炭素59.22％，水素9.31％，
窒素12.37％，酸素19.1％２）分子量：質量分析（SIMS）によりｍ／
z481に（M⁺＋１）のピークが認められるこ
とから分子量は480と考えられる。３）融点：78℃ ４）比旋光度：〔α〕²⁵ _p＝−20.2゜５）紫外部吸収スペクトル：特徴的吸収を示さ
ない。６）赤外部吸収スペクトル：下記の吸収ピーク
（νcm^-1）を有する。 3300，2950，2920，2850，1720，1660，
1620，1540，1440，1420，1360，1250，
1160，1060，990，920，860 ７）溶解度：メタノール，クロロホルム，アセ
トン，酢酸エチルに可溶。水，ｎ−ヘキサン
に不溶。８）呈色反応：レミユー，ヨウ素試薬及び塩化
第２鉄試薬陽性。９）薄層クロマトグラフイーのRf値：シリカ
ゲル60F254（メルク社製）クロロホルム−メタノール（10：１） 0.51 ベンゼン−アセトン（１：１） 0.42 10）中性，酸性，塩基性の区別：中性 11）物質の色：白色 12） ¹³C−NMRスペクトル：下記の吸収ピー
ク（ppm）を有する。 11.65，13.99，16.10，20.92，22.43，24.28，
26.20，26.36，28.53，31.76，32.71，34，85，
36.69，36.90，47.36，50.27，63.05，169.81，
172.20，177.39，208.13 ２ミクロビスポラ属に属する抗生物質SF−
2197B生産菌を培地に培養し、培養物から下記の
理化学的性質を有するSF−2197B物質を単離す
ることを特徴とする新抗生物質SF−2197B物質
の製造法。１）元素分析値：炭素59.22％，水素9.31％，
窒素12.37％，酸素19.1％２）分子量：質量分析（SIMS）によりｍ／
z481に（M⁺＋１）のピークが認められるこ
とから分子量は480と考えられる。３）融点：78℃ ４）比旋光度：〔α〕²⁵ _p＝−20.2゜５）紫外部吸収スペクトル：特徴的吸収を示さ
ない。６）赤外部吸収スペクトル：下記の吸収ピーク
（νcm^-1）を有する。 3300，2950，2920，2850，1720，1660，
1620，1540，1440，1420，1360，1250，
1160，1060，990，920，860 ７）溶解度：メタノール，クロロホルム，アセ
トン，酢酸エチルに可溶。水，ｎ−ヘキサン
に不溶。８）呈色反応：レミユー，ヨウ素試薬及び塩化
第２鉄試薬陽性。９）薄層クロマトグラフイーのRf値：シリカ
ゲル60 F254（メルク社製）クロロホルム−メタノール（10：１） 0.51 ベンゼン−アセトン（１：１） 0.42 10）中性，酸性，塩基性の区別：中性 11）物質の色：白色 12） ¹³C−NMRスペクトル：下記の吸収ピー
ク（ppm）を有する。 11.65，13.99，16.10，20.92，22.43，24.28，
26.20，26.36，28.53，31.76，32.71，34.85，
36.69，36.90，47.36，50.27，63.05，169.81，
172.20，177.39，208.13