JPH03277967A - アフィニティクロマトグラフィー用吸着体 - Google Patents
アフィニティクロマトグラフィー用吸着体Info
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- JPH03277967A JPH03277967A JP2080256A JP8025690A JPH03277967A JP H03277967 A JPH03277967 A JP H03277967A JP 2080256 A JP2080256 A JP 2080256A JP 8025690 A JP8025690 A JP 8025690A JP H03277967 A JPH03277967 A JP H03277967A
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Landscapes
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、アフィニティクロマトグラフィー用吸着体に
関する。
関する。
特定の蛋白質・ウィルス等を精製収得するには従来遠心
分離法・イオン交換法・ゲル濾過法等が採用されており
、これらの方法を適宜組み合わせたり、反復して用いら
れる。ところが、これらの方法を組み合わせ、あるいは
反復して実施する場合、各工程毎に複雑な操作を必要と
し、また、長時間要する上それらの工程を経るに従って
目的物の損失減量が生じる問題がある。
分離法・イオン交換法・ゲル濾過法等が採用されており
、これらの方法を適宜組み合わせたり、反復して用いら
れる。ところが、これらの方法を組み合わせ、あるいは
反復して実施する場合、各工程毎に複雑な操作を必要と
し、また、長時間要する上それらの工程を経るに従って
目的物の損失減量が生じる問題がある。
別の精製法としてアフィニテイクロマトグラフィーがあ
る。このものは、生化学的な特異性のあるアフィニティ
（！ｌ！和力）を相互に持つ２種類の物質または物質
群の一方をリガンドとして水不溶性の担体に固定化して
固定相とし、この固定相に対するアフィニテイの差を利
用して目的物質をこれに混在する不純物から分離・精製
するクロマトグラフィーであって、生化学、特に酵素化
学の分野に於ける９踏・精製に広く用いられている。上
記担体としては、従来、デキストラン・アガロ−弱いた
め高流速が得られず、また価格的に非常に高価なもので
あるため、工業スケールでは、導入し難いという問題が
発生している。
る。このものは、生化学的な特異性のあるアフィニティ
（！ｌ！和力）を相互に持つ２種類の物質または物質
群の一方をリガンドとして水不溶性の担体に固定化して
固定相とし、この固定相に対するアフィニテイの差を利
用して目的物質をこれに混在する不純物から分離・精製
するクロマトグラフィーであって、生化学、特に酵素化
学の分野に於ける９踏・精製に広く用いられている。上
記担体としては、従来、デキストラン・アガロ−弱いた
め高流速が得られず、また価格的に非常に高価なもので
あるため、工業スケールでは、導入し難いという問題が
発生している。
（発明の目的）
本発明は、従来のアフィニティクロマトグラフィーに於
ける問題、特に吸着体に於ける問題を解決するためにな
されたものであって、物理的強度に優れているのみなら
ず、吸着及び溶出効率が高く、しかも目的物質以外の不
純物の非特異的な吸着がない価格的に安価なアフィニテ
ィクロマトグラフィー用吸着体を提供することを目的と
する。
ける問題、特に吸着体に於ける問題を解決するためにな
されたものであって、物理的強度に優れているのみなら
ず、吸着及び溶出効率が高く、しかも目的物質以外の不
純物の非特異的な吸着がない価格的に安価なアフィニテ
ィクロマトグラフィー用吸着体を提供することを目的と
する。
本発明によるアフィニティクロマトグラフィー用吸着体
は、ペクチン酸−セルロースゲルを担体とし、この担体
上にリガンドな共有結合にて固定化されていることを特
徴とする。必要に応じてリガンドの吸着体上での自由度
を高めるために、吸着体とリガンドとをスペーサ基を介
在させて共有結合にて結合させることができる。このス
ペーサ基は、予め吸着体に結合させておき、この後に、
このスペーサ基にリガンドを結合させてもよく、あるい
は、スペーサ基を予めリガンドに結合させ、これを吸着
体に結合させてもよい。さらに必要に応じて吸着体及び
リガンドの両者に予めスペーサ基を結合させ、これらを
相互に結合さすこともできる。
は、ペクチン酸−セルロースゲルを担体とし、この担体
上にリガンドな共有結合にて固定化されていることを特
徴とする。必要に応じてリガンドの吸着体上での自由度
を高めるために、吸着体とリガンドとをスペーサ基を介
在させて共有結合にて結合させることができる。このス
ペーサ基は、予め吸着体に結合させておき、この後に、
このスペーサ基にリガンドを結合させてもよく、あるい
は、スペーサ基を予めリガンドに結合させ、これを吸着
体に結合させてもよい。さらに必要に応じて吸着体及び
リガンドの両者に予めスペーサ基を結合させ、これらを
相互に結合さすこともできる。
上記スペーサ基として用い得る化合物は少なくとも二官
能性の有機化合物であり、多官能性の重合体を排除する
ものではないが、特に、炭素数１〜１２の炭素鎖基を有
する二官能性の有機化合物が好ましい、このようなスペ
ーサ基として機能する化合物の具体例としてたとえば、
ヘキサメチレンジアミン・ドデカメチレンジアミン・キ
シリレンジアミン等のジアミン類、グリシン・β−アミ
ノプロピオン酸・Ｔ−アミノ酪酸・ε−アミノカプロン
酸・ε−アミノカプリル酸等のアミノアルキルカルボン
酸、リジン・グルタミン酸・β−アラニン・アルギニン
等のアミノ酸類等が好ましく用いられるが、これらに限
定されるものではない。
能性の有機化合物であり、多官能性の重合体を排除する
ものではないが、特に、炭素数１〜１２の炭素鎖基を有
する二官能性の有機化合物が好ましい、このようなスペ
ーサ基として機能する化合物の具体例としてたとえば、
ヘキサメチレンジアミン・ドデカメチレンジアミン・キ
シリレンジアミン等のジアミン類、グリシン・β−アミ
ノプロピオン酸・Ｔ−アミノ酪酸・ε−アミノカプロン
酸・ε−アミノカプリル酸等のアミノアルキルカルボン
酸、リジン・グルタミン酸・β−アラニン・アルギニン
等のアミノ酸類等が好ましく用いられるが、これらに限
定されるものではない。
前記したペクチン酸−セルロースゲル粒子に、直接にリ
ガンドを共有結合にて結合するか、または、ペクチン酸
−セルロースゲル粒子にスペーサ基を結合し、このスペ
ーサ基にリガンドを共有結合にて結合するための方法は
、特に制限されず、従来より知られている任意の方法に
よる事ができる。例えば、好ましい方法の一つとして、
結合試薬として水溶性カルボジイミドを用いる方法を挙
げることができる。例えばアミノアルキルカルボン酸を
、ペクチン酸−セルロースゲル粒子に結合サセ、次いで
、このペクチン酸−セルロースゲル粒子に結合されたア
ミノアルキルカルボン酸に水溶性カルボジイミドを用い
て、同様にしてリガンドを共有結合にて結合させること
ができる。
ガンドを共有結合にて結合するか、または、ペクチン酸
−セルロースゲル粒子にスペーサ基を結合し、このスペ
ーサ基にリガンドを共有結合にて結合するための方法は
、特に制限されず、従来より知られている任意の方法に
よる事ができる。例えば、好ましい方法の一つとして、
結合試薬として水溶性カルボジイミドを用いる方法を挙
げることができる。例えばアミノアルキルカルボン酸を
、ペクチン酸−セルロースゲル粒子に結合サセ、次いで
、このペクチン酸−セルロースゲル粒子に結合されたア
ミノアルキルカルボン酸に水溶性カルボジイミドを用い
て、同様にしてリガンドを共有結合にて結合させること
ができる。
係る方法に於いて用いる水溶性カルボジイミドとしては
、例えば、ｌ−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロ
ピル）カルボジイミド塩酸塩・ｌシクロへキシル−３−
（２−モノホリノエチル）カルボジイミド−メトーｐ−
トルエンスルホネーをペクチン酸−セルロースゲル粒子
に結合させるには、従来より知られている通常の方法及
び条件によることができる。
、例えば、ｌ−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロ
ピル）カルボジイミド塩酸塩・ｌシクロへキシル−３−
（２−モノホリノエチル）カルボジイミド−メトーｐ−
トルエンスルホネーをペクチン酸−セルロースゲル粒子
に結合させるには、従来より知られている通常の方法及
び条件によることができる。
また官能基が水酸基である時は、臭化シアンにより反応
させ、官能基を活性化することによってスペーサ基を結
合させ、次いで上記と同様にしてリガンドを共有結合に
て結合させることができる。
させ、官能基を活性化することによってスペーサ基を結
合させ、次いで上記と同様にしてリガンドを共有結合に
て結合させることができる。
また、ペクチン酸−セルロースゲル粒子に直接にリガン
ドを結合させることもできる。
ドを結合させることもできる。
るアフィニティクロマトグラフィー用吸着体を分Ｍ・精
製することができる。
製することができる。
本発明によるアフィニティクロマトグラフィー用吸着体
は、従来のアフィニティクロマトグラフィーにおける膨
潤ゲルと同様にして用いることができる。従って吸着体
は、カラム法・回分法の両者に使用し得る。
は、従来のアフィニティクロマトグラフィーにおける膨
潤ゲルと同様にして用いることができる。従って吸着体
は、カラム法・回分法の両者に使用し得る。
〔実施例）
以下に実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明は、
これら実施例により何ら限定されるものではない。
これら実施例により何ら限定されるものではない。
実施例１
＋１１ ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（以
下ＮＡＤと略す）吸着体の調製 ペクチン酸−セルロースゲル５０ｍＪ（乾燥重量８ｇ）
を４０ｇのＣＮＢ ｒでｐＨ１１で活性化し、洗浄後、
これに８−アミノカプロン酸の溶液（２０ｇを２００ｍ
ｊ！の０． Ｉ Ｍ Ｎ ａ ＨＣＯｓＯ，０１Ｍ
ＨＣｊ・０．５Ｍ ＮａＣ１溶液で順次洗浄し、最
後に十分水洗した。洗浄したゲルを次いでジシクロへキ
シルカルボジイミドのピリジン溶液（８０ｇ／ １９２
ｍＪ）を加え、密栓してｌＯ日間室温で撹拌する。その
後ガラスフィルターで濾取し水、エタノールで洗浄しＮ
ＡＤ吸着体を得た。
下ＮＡＤと略す）吸着体の調製 ペクチン酸−セルロースゲル５０ｍＪ（乾燥重量８ｇ）
を４０ｇのＣＮＢ ｒでｐＨ１１で活性化し、洗浄後、
これに８−アミノカプロン酸の溶液（２０ｇを２００ｍ
ｊ！の０． Ｉ Ｍ Ｎ ａ ＨＣＯｓＯ，０１Ｍ
ＨＣｊ・０．５Ｍ ＮａＣ１溶液で順次洗浄し、最
後に十分水洗した。洗浄したゲルを次いでジシクロへキ
シルカルボジイミドのピリジン溶液（８０ｇ／ １９２
ｍＪ）を加え、密栓してｌＯ日間室温で撹拌する。その
後ガラスフィルターで濾取し水、エタノールで洗浄しＮ
ＡＤ吸着体を得た。
（比較例１）
比較のために、セファロース４Ｂ（ファルマシア社製ア
ガロース系担体）２００ｍｊ （乾燥重量８ｇ）を４０
ｇＣＮＢｒでｐＨ１ｌで活性化し、洗浄後これにε−ア
ミノカプロン酸の溶液を加え、上記（実施例１）と同様
に反応を行い、次いでＮＡＤｔｇ液（１，６ｇを水４８
ｍｌ溶解）ジシクロへキシルカルボジイミドのピリジン
溶液を加えＮＡＤ吸着体を調製した。その結果を図１に
示す。
ガロース系担体）２００ｍｊ （乾燥重量８ｇ）を４０
ｇＣＮＢｒでｐＨ１ｌで活性化し、洗浄後これにε−ア
ミノカプロン酸の溶液を加え、上記（実施例１）と同様
に反応を行い、次いでＮＡＤｔｇ液（１，６ｇを水４８
ｍｌ溶解）ジシクロへキシルカルボジイミドのピリジン
溶液を加えＮＡＤ吸着体を調製した。その結果を図１に
示す。
（２） グリセルアルデヒド３リン酸脱水素酵素・乳
酸脱水素酵素・牛血清アルブミン（以下ＣＰＤＨ・ＬＤ
Ｈ−ＢＳＡと略す）混合溶液からの各成分の分離 上で得たＮＡＤ吸着体を１０１０Ｘ１０３のカラムに充
填し試料： ＣＰＤＨ（４，Ｉ Ｕ） ・Ｌ Ｄ Ｈ
次ぎに０．１５ｍＭ ＮＡＤｌｌ−１０ｍＭ ＮＡ
ＤＨで順次溶出を行った。なお流速は、ｌ ｒｎ １
／ ８ｍ１ｎとした。得られたカラムクロマトの結果を
図１に示す。
酸脱水素酵素・牛血清アルブミン（以下ＣＰＤＨ・ＬＤ
Ｈ−ＢＳＡと略す）混合溶液からの各成分の分離 上で得たＮＡＤ吸着体を１０１０Ｘ１０３のカラムに充
填し試料： ＣＰＤＨ（４，Ｉ Ｕ） ・Ｌ Ｄ Ｈ
次ぎに０．１５ｍＭ ＮＡＤｌｌ−１０ｍＭ ＮＡ
ＤＨで順次溶出を行った。なお流速は、ｌ ｒｎ １
／ ８ｍ１ｎとした。得られたカラムクロマトの結果を
図１に示す。
本発明の吸着体によれば、比較例のそれに比べＣＰＤＨ
−ＬＤＨ−ＢＳＡの回収効率が高く、また流速を上げて
も回収効率に余り影響がないことが明らかである。（表
１） 〔発明の効果〕 以上のように、本発明によるアフイニテイクロマトグラ
フィー用吸着体は、ペクチン酸−セルロースゲル粒子を
担体とし、この担体上に、リガンドが共有結合にて結合
されている。従って係る吸着体は、生体物質移動の場で
ある細胞壁マトリックスを保持したペクチン酸−セルロ
ースゲルを担体としているため、生体物質に対する安定
性に優れている。また、硬質ゲルであるため、従来高流
速を得るためには、ビーズ状ゲルでなければならなかっ
たが本担体は、破砕型にもかかわらず従来担体が非常に
安価に提供され得るため、当然のごとく、本担体を用い
たアフィニティクロマトグラフィー用吸着体も安価とな
り、本吸着体を工業スケールに導入した場合大きなメリ
ットを与え得るものである。
−ＬＤＨ−ＢＳＡの回収効率が高く、また流速を上げて
も回収効率に余り影響がないことが明らかである。（表
１） 〔発明の効果〕 以上のように、本発明によるアフイニテイクロマトグラ
フィー用吸着体は、ペクチン酸−セルロースゲル粒子を
担体とし、この担体上に、リガンドが共有結合にて結合
されている。従って係る吸着体は、生体物質移動の場で
ある細胞壁マトリックスを保持したペクチン酸−セルロ
ースゲルを担体としているため、生体物質に対する安定
性に優れている。また、硬質ゲルであるため、従来高流
速を得るためには、ビーズ状ゲルでなければならなかっ
たが本担体は、破砕型にもかかわらず従来担体が非常に
安価に提供され得るため、当然のごとく、本担体を用い
たアフィニティクロマトグラフィー用吸着体も安価とな
り、本吸着体を工業スケールに導入した場合大きなメリ
ットを与え得るものである。
表
Claims (1)
- １、ペクチン酸−セルロースゲルを担体とし、この担体
上にリガンドが共有結合にて固定化されていることを特
徴とするアフィニティクロマトグラフィー用吸着体。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2080256A JPH03277967A (ja) | 1990-03-27 | 1990-03-27 | アフィニティクロマトグラフィー用吸着体 |
| PCT/JP1990/001493 WO1991007427A1 (en) | 1989-11-16 | 1990-11-15 | Carrier for column chromatography, process for separating and purifying water-soluble polymeric substance using said carrier, novel pectic acid-cellulose gel and process for preparing the same, and adsorbent for affinity chromatography |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2080256A JPH03277967A (ja) | 1990-03-27 | 1990-03-27 | アフィニティクロマトグラフィー用吸着体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03277967A true JPH03277967A (ja) | 1991-12-09 |
Family
ID=13713234
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2080256A Pending JPH03277967A (ja) | 1989-11-16 | 1990-03-27 | アフィニティクロマトグラフィー用吸着体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH03277967A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010095673A1 (ja) * | 2009-02-20 | 2010-08-26 | チッソ株式会社 | 免疫グロブリン精製用セルロース系ゲル |
-
1990
- 1990-03-27 JP JP2080256A patent/JPH03277967A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010095673A1 (ja) * | 2009-02-20 | 2010-08-26 | チッソ株式会社 | 免疫グロブリン精製用セルロース系ゲル |
| CN102326075A (zh) * | 2009-02-20 | 2012-01-18 | Jnc株式会社 | 免疫球蛋白纯化用纤维素类凝胶 |
| US8912117B2 (en) | 2009-02-20 | 2014-12-16 | Jnc Corporation | Cellulose gel for purification of immunoglobulin |
| JP5692059B2 (ja) * | 2009-02-20 | 2015-04-01 | Jnc株式会社 | 免疫グロブリン精製用セルロース系ゲル |
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