JPH03210302A - 過硫酸化ヘパリン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は低分子量の過硫酸化（ｓｕｐｅｒｓｕｌｆａｔ
ｅｄ）ヘパリン、その製薬学的に許容し得る塩、その製
造方法及びそれらを活性成分として含む製薬学的な組成
物に関する。

本発明を要約すれば、本発明によりヘパリンの解重合及
び過硫酸化の方法及びこうして得られる過硫酸化ヘパリ
ンが開示され、本方法は−１０ないし＋２０℃の温度で
２ないし６％の遊離の無水硫酸（三酸化硫黄）を含む発
煙硫酸（ｏｌｅｕｍ）でヘパリンを処理することを含ん
で成り、得られたヘパリンは２０００ないし５０００の
分子量及び３４ないし４．３の硫酸化度（ｓｕｌｆａｔ
ｉｏｎ　ｄｅｇｒｅｅ）を有し、それらの総ては顕著な
抗トロンビン活性を有することである。

米国特許第４．７２７，０６３号は硫酸及びクロロスル
ホン酸の混合物を用いる同時的解重合及び硫酸化による
、少なくとも２．５の硫酸化度及び２０００ないし９０
００の範囲の分子量を有する低分子量ヘパリンを開示し
ている。

上記の報告は一連の過硫酸化ヘパリンを開示しているが
、そのいずれもが３．５までの硫酸化度を有していない
。

欧州特許第２１４．８７９号はグリコサミングリカン（
ＧＡＧ）の硫酸化を開示しており、その方法では載接の
ＧＡＧを特殊な有機溶剤に可溶な塩に転換し、該塩を該
有機溶剤に溶解し、こうして得られた溶液が慣用の硫酸
化試薬で処理されている。上記の方法によれば解重合を
起こすことな（過硫酸化ＧＡＧを得ることが可能である
が、開示された過硫酸化ＧＡＧは、三糖類の場合を除い
て、３．４１を越える硫酸化度を有することはない。

米国特許第３．４５４．５６０号は５８重重量型量％よ
り低くない濃度の硫酸による、コンドロイチン硫酸塩の
解重合及び硫酸化方法を開示している。該報告によれば
、解重合及び硫酸化に使用される硫酸は無水硫酸又はク
ロロスルホン酸のような他の硫酸化剤を含むことができ
るが、同報告はそのような環境においても硫酸化反応に
関与するのは硫酸のみであることを明記している。

ヘパリンの場合は、該ヘパリンを発煙硫酸と反応させる
ことにより低分子量の過硫酸化ヘパリンを得ることが可
能であることが見出された。

驚くべきことに発煙硫酸中に含まれる無水硫酸が硫酸化
に必要であり、硫酸のみの使用は顕著な硫酸化を行うこ
とな（解重合をもたらすか、或いは完全な分解を起こす
結果を招くことが見出された。

又発煙硫酸との反応により比較的狭い範囲内の分子量を
有し、従来記載された過硫酸化ヘパリンの総てよりも高
い硫酸化度を有する、新規な低分子量の過硫酸化ヘパリ
ンが得られることが見出された。

更に発煙硫酸との反応によりヘパリンから得られた新規
低分子量過硫酸化ヘパリンは顕著に低下した抗凝血活性
、極めて良好な抗トロンビン活性、及び従来既知の低分
子量ヘパリンよりも事実上高いリポ蛋白質脂肪分解酵素
（ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｌｉｐａｓｉｃ）活性を有す
ることが見出された。

最後に驚くべきことには、本発明の低分子量過硫酸化ヘ
パリンは米国特許第４，７２７，０６３号のヘパリン及
び生成物と対照的に強力なトロンビン阻害剤であること
が見出された。

従って本発明はその一つの態様によれば、下肥の態様ニ 一分子量は約２０００ないし約５０００ダルトンである
こと、 一硫酸基／カルボキシル基比で表した硫酸化度は３．５
ないし４．５であること、 一抗トロンビンＩＩＩにより仲介されない直接的抗トロ
ンビン活性を持つこと、 を有するヘパリン成分の混合物から成る新規低分子量過
硫酸化ヘパリン、及びそれらの製薬学的に許容し得る塩
に関する。

本発明の低分子量過硫酸化ヘパリンの中では、２９００
ないし４５００の間の分子量を有するものが特に優れて
おり、３０００ないし４０００の間の分子量を有するも
のが好適である。これら後者の中では３３００の平均分
子量を有するヘパリン成分の混合物が顕著な性質を有し
ている。

本発明の低分子量過硫酸化ヘパリンの分子量は、ＴＳＫ
　　５Ｗ２０００カラムを用いたＨＰＬＣによるゲル透
過クロマトグラフィー（Ｇｅｌ　Ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ
Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）により測定された。

本発明の低分子量過硫酸化ヘパリンは３１２ｎｍにおい
てＵＶスペクトルに極大吸収を示す。かような極大の存
在は米国特許第４．７２７．０６３号に開示されたヘパ
リン又は生成物も持たない、本発明の生成物に特有な特
質である。かような極大は該ヘパリンを１ｍｌ当たり１
０鳳９含む水溶液中で測定された。

元素分析の観点からは、本発明の低分子量過硫酸化ヘパ
リンは１１．７ないし１２．１の炭素／窒素（Ｃ／Ｎ）
比（モル比を基準として）及び２５ないし２．９の炭素
／硫黄比（Ｃ／Ｓ）を有する。

本発明の低分子量過硫酸化ヘパリンの硫酸化度は少なく
とも３．６であり、及び３．６ないし４５、好適には３
．６５ないし４．３である。

本発明の他の態様によれば、本発明はヘパリンを−１０
及び３０℃の間の温度で発煙硫酸で処理することを含ん
で成る、２０００ないし５０００の分子量及び３．５な
いし４．５の硫酸化度を有する低分子量の過硫酸化ヘパ
リンの製造方法に関する。

出発原料として使用されるヘパリンは標準的ヘパリン、
又は良好な性質を有すれば任意の他の市販の入手し得る
ヘパリンであることができる。

般にヘパリンのナトリウム塩が使用されるが、他の塩も
便利に使用できる。原料ヘパリンは無水物であることが
好ましく、従って例えば約５０−６０℃の温度で前もう
て脱水を行うことが適当である。

解重合及び硫酸化反応に使用される発煙硫酸は２ないし
７％の遊離の無水硫酸を含むことが好適であり、それは
水が完全に硫酸に転化され、且つ所望量の無水硫酸が存
在するまで、２０％の無水硫酸を含む発煙硫酸を濃硫酸
に添加することによってその場で製造される。

発煙硫酸中のヘパリンの濃度は約５ないし約２０型量／
容量％の範囲であることができる。実際には、ヘパリン
各１ｇ当たり５ないし１５ｍ１の発煙硫酸を使用するこ
とが得策である。

反応時間は数分ないし１時間以上の範囲であり、明らか
に温度に依存する：事実上５−１０分間ないし７５分間
の範囲の時間に亙り−１０ないし＋３０℃の温度で操作
することが可能である。

所望の最終生成物はアルカリ塩基、好適には水酸化ナト
リウムを用いる硫酸の中和、及びこうして得られた硫酸
アルカリの除去後、透析及び随意続いての凍結乾燥によ
って低分子量の過硫酸化ヘパリンを分離する、既知の方
法を用いて回収される。

特に興味ある生成物は極めて狭い分子量分布を有し、従
って際立って良好な薬理学的活性を有する過硫酸化ヘパ
リンを得るように、脱塩された生成物をゲル濾過により
処理することによって製造される。

低分子量過硫酸化ヘパリンは使用された水酸化アルカリ
の塩として、好適にはナトリウム塩として単離され、該
塩はイオン交換樹脂を用いる交換反応により、他の塩、
例えばカルシウム塩に転換することができる。

アミノ酸塩、特にリジン及びアルギニン塩は極めて興味
あるものである。これらの塩は最初にナトリウム塩を陽
イオン交換カラム、例えば酸型のアンバーライト（Ａｍ
ｂｅｒｌｉｔｅ）　Ｉ　Ｒ１２０に通して低温（約５℃
）でパーコレートし、溶離液を直接アミノ酸の水溶液中
に集め、及び凍結乾燥により塩を単離して得られる。

ヘパリンの過硫酸化の既知の方法に比較して、本発明の
方法は著しい利点を有している。より詳細には、欧州特
許第２１４，８７９号に開示された方法に比較して、本
発明の方法は有機溶剤を用いないので溶剤の除去及び回
収の工程を必要とせず、更に本発明の方法は市販のヘパ
リンを有機溶剤に可溶な塩に転化することなく、直接使
用することができる。米国特許第４．７２７．０６３号
に開示された方法に比較して、本発明の方法は既知の方
法の特徴をなす気体の発生も気泡の生成もなく、更に本
発明の方法は、反応媒体中の水の存在が重要であり、解
重合皮を調節する米国特許第４７２７．０６３号の方法
と異なっており、本発明の方法の場合には反応環境が驚
くべくほど厳密に無水的である。

本発明の低分子量過硫酸化ヘパリンは良好であり、先行
技術に記載された対応する総ての生成物とは質的に異な
る、極めて興味ある薬理学的性質を有する。

より詳細には、本発明の新規生成物はヘパリンの抗凝血
活性に遥かに劣る、極めて小さい抗凝血活性を示す。米
国薬局方の試験管内方法によれば、本発明の低分子量過
硫酸化ヘパリンは１８−２２ＩＵ／■９の活性を有する
が、市販の注射用ヘパリンは約１０倍高い、７Ｏ−１８
０１Ｕ／寓りの活性を有する。

対照的に本発明の低分子量過硫酸化ヘパリンの抗トロン
ビン活性は兎の頚静脈のｔ（うっ）血誘発血栓症試験に
アダ［ＮＩＡＤ＾］等、Ｐｈａｒｍａｃ、　ＲｅｓＣｏ
ｍｍｕｎ、　１１．３４９．１９７９）によれば、事実
上ヘパリンの活性と同一である。

更にヘパリンに比較して、本発明の低分子量過硫酸化ヘ
パリンは、ラットにおける出血時間試験（デジャナ［Ｄ
ＥＪＡＮＡ］等、Ｔｈｒｏｍｂ、　Ｈａｅｍｏｓｔ、　
４８．１０８．１９８２）により実証されたように、１
０倍以上も低い活性を示し、本発明の生成物は出血を誘
発し易くない利点を有する。

更に又本発明の低分子量過硫酸化ヘパリンは従来知られ
ているヘパリン及び低分子貴過硫酸化ヘパリンの活性よ
りも遥かに高い、極めて高度なリボ蛋白質脂肪分解酵素
活性を有する。

５Ｈ−４０／１　（実施例１参照）と称される本発明の
代表的な生成物のリボ蛋白質脂肪分解酵素活性を皮下投
与後の兎の血漿について測定し、市販のナトリウムヘパ
リン（ディオシンス［Ｄｉｏｓｙｎｔｈ］、ロット番号
１３３４）及び米国特許第４．７２７．０６３号の実施
例１に開示されたように製造された生成物（ＡＨ−１６
、硫酸化度３．０）と比較した。試験された生成物は体
重２．６−２．８９の、前夜から絶食させたニューシー
ラント兎に投与された。血液の取り出しは投与後０−３
０−６０−９０−１２０−１８０−２４０分の時間毎に
クエン酸塩中で行われた。

リボ蛋白質脂肪分解酵素活性はトリグリセリド（イント
ラリピド［Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ］）を含む基質を用い
た血漿のインキュベーションから放出された遊離の脂肪
酸を投与することにより評価された。この試験において
は、生成物５Ｈ−４０／１はヘパリンよりも１０倍以上
活性であり、対照生成物ＡＨ−１６よりも２倍以上活性
であることが示された。

更に本発明の低分子量過硫酸化ヘパリン、及び特に分別
後に得られたヘパリンは、直接的トロンビン阻害剤であ
り、これは別な驚くべき及び独特の性質を構成するもの
である。かような特性は抗トロンビンＩ［Ｉ　（ＡＴＩ
Ｉりの存在又は不存在のいずれかにおいてヒトトロンビ
ンに対するアミド分解（ａｓｉｄｏｌｙｔｉｃ）活性の
試験管内試験により明らかにされる。トロンビンは４０
５ｎｍに強い吸収を有するｐ−ニトロアニリンを放出す
る、合成基質クロモシム（Ｃｈｒｏｉｏ−ｚｙｍ）　Ｔ
　Ｈ−ベーリンジャ−（ＢＯｅｒｉｎｇｅｒ）　（トシ
ル−Ｇ　Ｉ　ｕ−Ｐ　ｒ　ｏ−Ａ　ｒ　ｇ−ｐニトロア
ニリド）に対し作用する。４０５ｎｍにおけるＯＤの変
化は試験中のトロンビンの量に比例する。阻害剤の存在
において、０Ｄ４Ｄ５の変化Ｉは減少する。この試験を
用いて弱い直接的トロンビン阻害及びＡＴＩ［［の存在
における強い阻害を与えるヘパリン、及び強い直接的ト
ロンビン阻害及びＡＴＩ［［の存在における増大を与え
る米国特許第４．７２７，０６３号の過硫酸化ヘパリン
と異なり、本発明の生成物はトロンビンに強い直接的阻
害を与え、ＡＴｍの存在における阻害の増大をもたらさ
ないことが観察された。

従って驚くべきことに本発明の低分子量の過硫酸化ヘパ
リンは、ＡＴＩＩ［に対する親和性を持たないことが見
出された。

本発明の低分子量の過硫酸化ヘパリンは極めて低い毒性
を有し、経口的又は非経口的投与のいずれにも充分許容
性がある。従ってそれらは抗トロンビン剤及び抗アテロ
ーム性動脈硬化剤として有用な薬物の有価な活性成分を
構成する。特にそれらの高いリボ蛋白質脂肪分解酵素的
活性により、それらは極めて興味ある抗脂血症（ａｎｔ
ｉｉｐｅｒｌｉｐｅｍ−ｉｃ）剤としての可能性がある
。

従って別の態様によれば、本発明は活性成分として、本
発明の低分子量過硫酸化ヘパリンを含む製薬学的な組成
物を提供する。

本発明の製薬学的な組成物は経口、舌下、皮下、静脈、
経皮、又は直腸投与用として服用量単位で及び製薬学的
賦形剤と混合して製剤化することができる。便利な投与
形態は経口投与剤の間では、錠剤、粉末、顆粒、及び非
経口的投与剤の中では溶液、特に皮下、筋肉内又は静脈
内投与用の溶液を含んでいる。

本発明の製薬学的組成物は上記の形態又は経路で、トロ
ンビン及び脂質の病的な増加の場合、特に血栓症の予防
及びアテロームの治療の際に動物及びヒトに投与される
。

前記の指標の一日量は０．１ないし１００　肩ｇ／に９
の範囲であり、各単位投薬量は活性成分を１ないし１０
００−９含むことができる。こうした単位投薬量は凝固
及び脂質代謝の疾患及びアテロームの治療のため一日量
ないし３回投与できる。

下記の実施例は本発明を更に説明するものである。得ら
れた生成物のＨＰＬＣ図形は第１図に報告されている。

実施例　１ ６０℃で６５時間真空乾燥された５０９のナトリウムヘ
パリン（ブタの粘膜製−ディオシンスロット番号１３３
４）を強力に撹拌しながら＋５℃に保たれた４％ＳＯｓ
発煙硫酸４０Ｃ）＋１に添加する。＋５℃で１０分間撹
拌後、温度を徐々に２０℃に上げ、３０分間保持する。

次いで反応混合物を５１の冷水（２−３℃）中に滴下し
て加え、ｐＨが５と９との間になるように同時に３０％
（重量／容量）水酸化ナトリウム溶液を添加する。溶液
を一夜２−３℃に保ち、結晶化した硫酸ナトリウムを真
空濾過により分離する。

濾液（約７１）を限外濾過（Ｓ１０Ｙ３膜を備えたアミ
コン［Ａｍ１ｃｏｎ］　Ｄ　Ｃ１０Ｌ　Ａにより）（３
０００カツトオフ）により脱塩（ｓａｌｔ　ｏｕｔ）シ
、限外濾過により濃縮し、凍結乾燥する。下記の特性−
元素分析　　　　　Ｃ１５，６８％ ８　　２．９３％ Ｎ　　　１．５６％ Ｓ　　１６．４８％ 一硫酸基／カルボキシル基比　４．３〇−平均分子量　
　　　　　４１００ダルトンを有する４７．４９の生成
物（ＳＨ４０）が９４．８１％の収率で得られる。

実施例　２ ６０℃で４８時間真空乾燥された５ｇのナトリウムヘパ
リン（ブタの粘膜製−ディオシンスロット番号１３３４
）を強力に撹拌しながら、＋１０℃に保たれた２％ＳＯ
８発煙硫酸３５＋＋／に添加する。

懸濁液を１０℃で５分間撹拌し、次いで温度を２５℃に
上げ、更に２５分間撹拌する。次いで２−３℃に冷却さ
れた５００ｍ／の水中に徐々に滴下し、同時に３０％水
酸化ナトリウムを添加して溶液を中和し、ｐＨを５ない
し９の間に調節する。

結晶化した硫酸ナトリウムを分離後、溶液を真空下に濃
縮し、他の硫酸ナトリウムを除去後、０゜３ＭのＮａＣ
と平衡処理されたセファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）
Ｇ　５０　（Ｋ　５０　／　１００　）カラムにかける
。溶離液の最初の１０００ｍ／を捨て、次ぎの２５０１
ＡＩを集め、脱塩して、ＹＭ２膜（カットオフ１０００
）を備えた限外濾過器アミコン８４００セル中で濃縮す
る。

凍結乾燥により下記の特性ニ ー元素分析　　　　　Ｃ１５，４８％ ８　　２．８９％ Ｎ　　　１．５３％ ８　１６．３３％ 一硫酸基／カルボキシル基比　４゜２４−平均分子量　
　　　　　３３００ダルトンを有する１、８９の生成物
（ＳＨ４０／１）が３６．１６％の収率で得られる。

実施例　３ ６０℃で４８時間真空乾燥された５９のナトリウムヘパ
リン（ブタの粘膜製−ディオンンスロット番号１３３４
）を強力に撹拌しながら一５℃に保たれた２％ＳＯｓ発
煙硫酸３５ｍＺに添加する。

−５℃で１５分間撹拌後、温度を上げ、２０℃に６０分
間保つ。それを５００ｍ／の氷−水中に徐々に滴下して
加え、同時にそれに３０％水酸化ナトリウム溶液を加え
てｐＨを５ないし９の間に保つ。溶液を一夜冷却（４−
５℃）し、結晶化した硫酸ナトリウムを分離後、溶液を
真空下に６０Ｍ１に濃縮し、透析袋スペクトレーバ（Ｓ
ＰＥＣＴＲＡＰＯＲ）　１中で水に対して透析する。最
後に溶液を真空下に濃縮し、凍結乾燥する。下記の特性 −元素分析　　　　　Ｃ１５，７１％ Ｈ２，９９％ Ｎ　　　１．５５％ Ｓ　　１６．６３％ −硫酸基／カルボキシル基比　４．２３−平均分子量　
　　　　　３５００ダルトンを有する５、５９の生成物
（ＳＨ４０／２）が１１０％の収率で得られる。

実施例　４ ６０℃で４８時間真空乾燥された３５９のナトリウムヘ
パリン（ブタの粘膜型−ディオシンスロット番号１３３
４）を強力に撹拌しながら＋１０℃に保たれた３、５％
Ｓ０３発煙硫酸４００＊１に添加する。

＋１０℃で５分間撹拌後、温度を上げ、＋２５℃に３０
分間保つ。それを５１の氷−水中に滴下して加え、同時
にそれに３０％（重量／容量）水酸化ナトリウム溶液を
加えて中和する。＋５℃で結晶化した硫酸ナトリウムを
分離後、溶液（約７１）を螺旋状カートリッジ５１０Ｙ
３、カットオフ３０００、を備えた限外濾過器アミコン
ＤＣ１０ＬＡで限外濾過する。透過液を同じ濾過器及び
カットオフ１００００のＳ　　１０　Ｙ３を用いて濃縮
し、硫酸ナトリウムが完全に除去されるまで洗浄し、及
び凍結乾燥する。下記の特性ニー元素分析　　　　　Ｃ
１６，９７％ ８　　３．２６％ Ｎ　　　１．６９％ ８　１６．１９％ 一硫酸基／カルボキシル基比　３．６５−平均分子量　
　　　　　３６５０ダルトンを有する１２．９５ｗの生
成物（ＳＨ４１Ｂ）が３７％の収率で得られる。

実施例　５ ６０℃で４８時間真空乾燥された５０９のナトリウムヘ
パリン（ブタの粘膜型−ディオシンスロット番号１３３
４）を−５℃に保たれた２、５％ＳＯｓ発煙硫酸４００
ｍ１に添加する。

−５℃で５０分間撹拌後、温度を上げて＋２０℃に５０
分間保ち、次いで再度＋５℃に下げ、反応混合物を５１
の氷−水中に滴下し、同時にそれに３０％（重量／容量
）水酸化ナトリウム溶液を加えて中和する。次いで反応
は実施例４のように行われる。下記の特性ニ ー元素分析　　　　　Ｃ１７，２２％ ８　　　３．２２％ Ｎ　　　　１．６７％ ３　１５．８８％ 一硫酸基／カルボキシル基比　３．８５−平均分子量　
　　　　　４１００ダルトンを有する２５．４ｇの生成
物（ＳＨ４３Ｂ）が５０．２９％の収率で得られる。

実施例　６ 実施例３に記載されたようにして得られた５９の生成物
を２００Ｒ１の蒸留水に溶解し、５℃に冷却されたクロ
マトグラフィーカラム中で４００ｔ／のイオン交換樹脂
ｌＲ１２０Ｈ“中を通すことによって酸型に転換する。

得られた溶液を１０＠ｌの蒸留水中に懸濁された６４０
ｕの水酸化カルシウムで中和し、凍結乾燥する。過硫酸
化ヘパリンのカルシウム塩から成る、５．１４９の生成
物が得られる。

実施例　７ 実施例３に記載されたようにして得られた５ｇの生成物
を２０（１ｍｌの蒸留水に溶解し、５℃に冷却されたク
ロマトグラフィーカラム中で４００ｍｅのイオン交換樹
脂ｌＲ１２０Ｈ”中を通すことによって酸型に転換する
。得られた溶液を２．６４９のアルギニン塩基で中和し
、凍結乾燥する。過硫酸化ヘパリンのアルギニン塩から
成る、７．５８ｇの生成物が得られる。

実施例　８ 実施例３に記載されたようにして得られた５９の生成物
を２００＠Ｊの蒸留水に溶解し、５℃に冷却されたクロ
マトグラフィーカラム中で４００ｍｊ’のイオン交換樹
脂ｌＲ１２０Ｈ“中を通すことによって酸型に転換する
。得られた溶液を２．７６９のリジン塩基で中和し、凍
結乾燥する。過硫酸化ヘパリンのリジン塩から成る、７
．６９の生成物が得られる。

実施例　９ ６０℃で４８時間真空乾燥された１００ｇのナトリウム
ヘパリン（ブタの粘膜型−ディオシンスロット番号１３
３４）を強力に撹拌しながら−５℃に保たれた２％ＳＯ
１発煙硫酸４００ｍ／に添加する。

懸濁液を＋１２℃で５分間撹拌し、次いで温度を２５℃
に上げ、更に２５分間撹拌する。次いで溶液を１０１の
氷−水中に滴下して加え、同時にそれに３０％水酸化ナ
トリウム溶液を加えて中和し、ｐＨを５ないし９の間に
保つ。最終ｐＨが６゜７である中和された溶液を一夜５
℃で放置する。

結晶化により分離する硫酸ナトリウムを真空濾過により
除去し、及び濾液、約２０１を濃縮し、螺旋状カートリ
ッジＳ　　１０　　Ｙ３　（カットオフ３０００）を備
えた限外濾過器アミコンＤＣＩＯを用いて脱塩する。

濃縮された溶液（５００ｍｌ）を次いで０．３ＭのＮａ
Ｃ１と平衡させた２５１のセファデックスＧ５０（ファ
ルマシア［Ｐｈａｒｍａｃｉａ］）カラムを含むアミコ
ンカラム０　１８０Ｘ１０００を用いてクロマトグラフ
にかける。最初の溶離液７５００ｍ１を捨て、続＜４５
００ｍ１を集め、濃縮し、及びＹＭ２膜（カットオフ１
０００）を備えた限外濾過器アミコン２０００のセル中
で脱塩する。

５００＊Ｊの溶液が得られ、凍結乾燥により下記の特性
ニ ー元素分析　　　　　Ｃ１６，８５％ ８　　２．３９％ Ｎ　　　１．６３％ ８　１６．５０％ 一硫酸基／カルボキシル基比　４．３３−平均分子量　
　　　　　３４３６ダルトンを有する３５９の生成物（
ＳＨ１４Ｄ）が得られる。

本発明の主なる特徴及び態様は以下の通りである。

１、下記の特性ニ 一分子量が約２０００ないし約５０００であること −硫酸基／カルボキシル基の比として表した硫酸化度が
３．５ないし４．５であること、−抗トロンビンＩＩＩ
により仲介されない直接的な抗トロンビン活性を有する
こと、 を示すヘパリン成分の混合物を含有して成る、低分子量
の過硫酸化ヘパリン、又はその製薬学的に許容し得る塩
の一種。

２．２９００ないし４５００の間から成る分子量を有す
る、上記１に記載の低分子量の過硫酸化ヘパリン。

３．３０００ないし４０００の間から成る分子量を有す
る、上記１に記載の低分子量の過硫酸化ヘパリン。

４、約３３００の平均分子量を有する、上記１に記載の
低分子量の過硫酸化ヘパリン。

５、　３．６ないし４．５の間の硫酸化度を有する、上
記工ないし４に記載の低分子量の過硫酸化ヘパリン。

６、　３．６５ないし４．３の間の硫酸化度を有する、
上記工ないし５に記載の低分子量の過硫酸化ヘパリン。

７．１■ｌ当たり該ヘパリンを１１０１Ａ含む水溶液中
で測定されると、３１２ｎｍに紫外スペクトルの極大を
示すことを特徴とする、上記工ないし６に記載の低分子
量の過硫酸化ヘパリン。

８、ナトリウム、カルシウム、アルギニン、リジン塩の
形態にある、上記工ないし７に記載の低分子量の過硫酸
化ヘパリン。

９．５０−６０℃で前もって脱水されたヘパリンを−１
０ないし＋３０℃の間から成る温度で、２ないし７％の
遊離の三酸化硫黄を含む発煙硫酸と反応させることを特
徴とする、上記１ないし８に記載の低分子量の過硫酸化
ヘパリンの製造方法。

１０、発煙硫酸中のヘパリンの出発濃度が約２ないし約
７型量／容量％であり、各１９のヘパリンに対し５ない
し１５ｍ１の発煙硫酸が使用されることを特徴とする、
上記９に記載の方法。

１１、活性成分として上記工ないし８に記載の低分子量
の過硫酸化ヘパリンを有する、製薬学的組成物。

１２．０．１ないし１０００ｍｇの活性成分を含む服用
量単位の形態にある、上記１１に記載の製薬学的組成物
。

【図面の簡単な説明】

第１図はＴＳＫ　５Ｗ２０００カラムを用いた本発明の
生成物である過硫酸化ヘパリンのＨＰＬＣ図形を示し、 図面ＡＳＢ、Ｃ，Ｄ及びＥは夫々実施例１．２．３．４
及び５の生成物のＨＰＬＣ図形を示している。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記の特性： −分子量が約２０００ないし約５０００であること −硫酸基／カルボキシル基の比として表した硫酸化度が
   ３．５ないし４．５であること、−抗トロンビンIIIに
   より仲介されない直接的な抗トロンビン活性を有するこ
   と、 を示すヘパリン成分の混合物を含有して成る、低分子量
   の過硫酸化ヘパリン、又はその製薬学的に許容し得る塩
   の一種。 ２、５０−６０℃で前もって脱水されたヘパリンを−１
   ０ないし＋３０℃の間から成る温度で、２ないし７％の
   遊離の三酸化硫黄を含む発煙硫酸と反応させることを特
   徴とする、特許請求の範囲１項に記載の低分子量の過硫
   酸化ヘパリンの製造方法。 ３、活性成分として特許請求の範囲１項に記載の低分子
   量の過硫酸化ヘパリンを有する、製薬学的組成物。