JPH03198790A - 5―エチニル―1―β―D―リボフラノシルイミダゾール―4―カルボキサミドの製造法 - Google Patents
5―エチニル―1―β―D―リボフラノシルイミダゾール―4―カルボキサミドの製造法Info
- Publication number
- JPH03198790A JPH03198790A JP34305689A JP34305689A JPH03198790A JP H03198790 A JPH03198790 A JP H03198790A JP 34305689 A JP34305689 A JP 34305689A JP 34305689 A JP34305689 A JP 34305689A JP H03198790 A JPH03198790 A JP H03198790A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- carboxamide
- reaction
- ethynyl
- formula
- ribofuranosylimidazole
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- SWQQELWGJDXCFT-PNHWDRBUSA-N 1-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-ethynylimidazole-4-carboxamide Chemical compound C#CC1=C(C(=O)N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SWQQELWGJDXCFT-PNHWDRBUSA-N 0.000 title claims abstract description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 20
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 20
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 claims abstract description 11
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 claims abstract description 11
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- VTEPZBCRFBNYNX-UHFFFAOYSA-N 5-ethynyl-1h-imidazole-4-carboxamide Chemical compound NC(=O)C=1N=CNC=1C#C VTEPZBCRFBNYNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 12
- OQRXBXNATIHDQO-UHFFFAOYSA-N 6-chloropyridine-3,4-diamine Chemical compound NC1=CN=C(Cl)C=C1N OQRXBXNATIHDQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 102100036286 Purine nucleoside phosphorylase Human genes 0.000 claims description 9
- 108010009099 nucleoside phosphorylase Proteins 0.000 claims description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 7
- ANFFQBLIBYTTIG-RKEPMNIXSA-N 2-[(3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-1h-imidazole-5-carboxamide Chemical compound NC(=O)C1=CNC(C2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)=N1 ANFFQBLIBYTTIG-RKEPMNIXSA-N 0.000 claims description 2
- -1 ribofuranosyl thymine Chemical compound 0.000 abstract description 8
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 abstract description 6
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 abstract description 5
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 abstract description 4
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 abstract description 3
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 abstract description 3
- UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 1-beta-D-Xylofuranosyl-NH-Cytosine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 abstract description 2
- MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N Crotonoside Natural products C1=NC2=C(N)NC(=O)N=C2N1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N 0.000 abstract description 2
- UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N Cytidine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N 0.000 abstract description 2
- NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N D-guanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 abstract description 2
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 abstract description 2
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 abstract description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 abstract description 2
- UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N cytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N 0.000 abstract description 2
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 abstract description 2
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 abstract description 2
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 abstract description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 abstract 2
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N Thymine Natural products CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract 1
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 abstract 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 abstract 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 abstract 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 description 29
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 18
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 14
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 12
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 10
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 9
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 8
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 8
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 7
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 6
- XGLWVTWOUNGGLJ-UHFFFAOYSA-N 5-ethynyl-1h-imidazole-4-carbonitrile Chemical compound C#CC=1NC=NC=1C#N XGLWVTWOUNGGLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000005904 alkaline hydrolysis reaction Methods 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 125000003808 silyl group Chemical group [H][Si]([H])([H])[*] 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000193385 Geobacillus stearothermophilus Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 239000007810 chemical reaction solvent Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical compound C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 4
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BXDZOYLPNAIDOC-UHFFFAOYSA-N N-[5-[(5-tert-butyl-1,3-oxazol-2-yl)methylsulfanyl]-1,3-thiazol-2-yl]-1-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindol-4-yl]amino]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethylamino]-2-oxoethyl]piperidine-4-carboxamide Chemical compound CC(C)(C)c1cnc(CSc2cnc(NC(=O)C3CCN(CC(=O)NCCOCCOCCOCCNc4cccc5C(=O)N(C6CCC(=O)NC6=O)C(=O)c45)CC3)s2)o1 BXDZOYLPNAIDOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000000475 acetylene derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 230000002140 halogenating effect Effects 0.000 description 3
- 238000005658 halogenation reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- FXDZENHLUPCZJG-UHFFFAOYSA-N 5-iodo-1h-imidazole-4-carbonitrile Chemical compound IC=1NC=NC=1C#N FXDZENHLUPCZJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CBHOOMGKXCMKIR-UHFFFAOYSA-N azane;methanol Chemical compound N.OC CBHOOMGKXCMKIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002585 base Substances 0.000 description 2
- WXNOJTUTEXAZLD-UHFFFAOYSA-L benzonitrile;dichloropalladium Chemical compound Cl[Pd]Cl.N#CC1=CC=CC=C1.N#CC1=CC=CC=C1 WXNOJTUTEXAZLD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- DIKBFYAXUHHXCS-UHFFFAOYSA-N bromoform Chemical compound BrC(Br)Br DIKBFYAXUHHXCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- UXTMROKLAAOEQO-UHFFFAOYSA-N chloroform;ethanol Chemical compound CCO.ClC(Cl)Cl UXTMROKLAAOEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- OWFXIOWLTKNBAP-UHFFFAOYSA-N isoamyl nitrite Chemical compound CC(C)CCON=O OWFXIOWLTKNBAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 2
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- FPGGTKZVZWFYPV-UHFFFAOYSA-M tetrabutylammonium fluoride Chemical compound [F-].CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC FPGGTKZVZWFYPV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GJFNRSDCSTVPCJ-UHFFFAOYSA-N 1,8-bis(dimethylamino)naphthalene Chemical compound C1=CC(N(C)C)=C2C(N(C)C)=CC=CC2=C1 GJFNRSDCSTVPCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- URMSSWRCAKSNMZ-JXOAFFINSA-N 1-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]imidazole-4-carboxamide Chemical compound C1=NC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 URMSSWRCAKSNMZ-JXOAFFINSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DDFHBQSCUXNBSA-UHFFFAOYSA-N 5-(5-carboxythiophen-2-yl)thiophene-2-carboxylic acid Chemical compound S1C(C(=O)O)=CC=C1C1=CC=C(C(O)=O)S1 DDFHBQSCUXNBSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BJXDBXQZKWQSBV-UHFFFAOYSA-N 5-ethynyl-1h-imidazole Chemical compound C#CC1=CNC=N1 BJXDBXQZKWQSBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UCDBLYHPJMMFMY-UHFFFAOYSA-N 8-bromoquinoline-4-carbonitrile Chemical compound C1=CN=C2C(Br)=CC=CC2=C1C#N UCDBLYHPJMMFMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035404 Autolysis Diseases 0.000 description 1
- JQJPBYFTQAANLE-UHFFFAOYSA-N Butyl nitrite Chemical compound CCCCON=O JQJPBYFTQAANLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SAPMYLUHMZNWET-UHFFFAOYSA-N C[Si](C)(C)C#C.C[Si](C)(C)C#C Chemical compound C[Si](C)(C)C#C.C[Si](C)(C)C#C SAPMYLUHMZNWET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000925662 Enterobacteria phage PRD1 Endolysin Proteins 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JLTDJTHDQAWBAV-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethylaniline Chemical compound CN(C)C1=CC=CC=C1 JLTDJTHDQAWBAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 101150006573 PAN1 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 1
- 102000045595 Phosphoprotein Phosphatases Human genes 0.000 description 1
- 108700019535 Phosphoprotein Phosphatases Proteins 0.000 description 1
- 101710101148 Probable 6-oxopurine nucleoside phosphorylase Proteins 0.000 description 1
- 102000030764 Purine-nucleoside phosphorylase Human genes 0.000 description 1
- 102000001853 Pyrimidine Phosphorylases Human genes 0.000 description 1
- 108010054917 Pyrimidine Phosphorylases Proteins 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930003270 Vitamin B Natural products 0.000 description 1
- 229930003471 Vitamin B2 Natural products 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- RTRQQBHATOEIAF-UUOKFMHZSA-N acadesine Chemical compound NC1=C(C(=O)N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 RTRQQBHATOEIAF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 1
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- YXJDFQJKERBOBM-TXICZTDVSA-N alpha-D-ribose 1-phosphate Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](OP(O)(O)=O)[C@H](O)[C@@H]1O YXJDFQJKERBOBM-TXICZTDVSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000003254 anti-foaming effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 230000031709 bromination Effects 0.000 description 1
- 238000005893 bromination reaction Methods 0.000 description 1
- 229950005228 bromoform Drugs 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 150000003857 carboxamides Chemical class 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 150000001989 diazonium salts Chemical class 0.000 description 1
- YNHIGQDRGKUECZ-UHFFFAOYSA-N dichloropalladium;triphenylphosphanium Chemical compound Cl[Pd]Cl.C1=CC=CC=C1[PH+](C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1[PH+](C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 YNHIGQDRGKUECZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- GGSUCNLOZRCGPQ-UHFFFAOYSA-N diethylaniline Chemical compound CCN(CC)C1=CC=CC=C1 GGSUCNLOZRCGPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- GCFHZZWXZLABBL-UHFFFAOYSA-N ethanol;hexane Chemical compound CCO.CCCCCC GCFHZZWXZLABBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002534 ethynyl group Chemical group [H]C#C* 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000005189 flocculation Methods 0.000 description 1
- 230000016615 flocculation Effects 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 150000002460 imidazoles Chemical class 0.000 description 1
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940079865 intestinal antiinfectives imidazole derivative Drugs 0.000 description 1
- 230000026045 iodination Effects 0.000 description 1
- 238000006192 iodination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- CEQFOVLGLXCDCX-WUKNDPDISA-N methyl red Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1\N=N\C1=CC=CC=C1C(O)=O CEQFOVLGLXCDCX-WUKNDPDISA-N 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- XTAZYLNFDRKIHJ-UHFFFAOYSA-N n,n-dioctyloctan-1-amine Chemical compound CCCCCCCCN(CCCCCCCC)CCCCCCCC XTAZYLNFDRKIHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 108010028584 nucleotidase Proteins 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- RVVRADJOWNIVAV-UHFFFAOYSA-N oxolane;hydrate;hydrochloride Chemical compound O.Cl.C1CCOC1 RVVRADJOWNIVAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PIBWKRNGBLPSSY-UHFFFAOYSA-L palladium(II) chloride Chemical compound Cl[Pd]Cl PIBWKRNGBLPSSY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- NFHFRUOZVGFOOS-UHFFFAOYSA-N palladium;triphenylphosphane Chemical compound [Pd].C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 NFHFRUOZVGFOOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004810 partition chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 description 1
- 239000002342 ribonucleoside Substances 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 230000028043 self proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- GRONZTPUWOOUFQ-UHFFFAOYSA-M sodium;methanol;hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+].OC GRONZTPUWOOUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 235000013555 soy sauce Nutrition 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- ILMRJRBKQSSXGY-UHFFFAOYSA-N tert-butyl(dimethyl)silicon Chemical group C[Si](C)C(C)(C)C ILMRJRBKQSSXGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 150000003606 tin compounds Chemical class 0.000 description 1
- IMFACGCPASFAPR-UHFFFAOYSA-N tributylamine Chemical compound CCCCN(CCCC)CCCC IMFACGCPASFAPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000026 trimethylsilyl group Chemical group [H]C([H])([H])[Si]([*])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 235000019156 vitamin B Nutrition 0.000 description 1
- 239000011720 vitamin B Substances 0.000 description 1
- 235000019164 vitamin B2 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011716 vitamin B2 Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明はヌクレオシドホスホリラーゼを含有する酵素調
製物を用いた5−エチニル−1−β−り一すボフラノシ
ルイミダゾール−4−カルボキサミドの製造法に関する
ものである。
製物を用いた5−エチニル−1−β−り一すボフラノシ
ルイミダゾール−4−カルボキサミドの製造法に関する
ものである。
式(1)
ジノシルイミダゾール−4−カルボキサミドは抗腫瘍活
性を有し、抗腫瘍剤としての開発が期待されでいる化合
物である(特開平1−221388号公報参照)。
性を有し、抗腫瘍剤としての開発が期待されでいる化合
物である(特開平1−221388号公報参照)。
従来、式(1)で表わされる化合物は、化学的に合成さ
れていた。しかし、゛その合成法は、■反応工程が長く
、最終単離収率が低い、■スズ化合物などの重金属を使
用する場合があるなど欠点を有し、必ずしも満足できる
ものではながった。さらに、式c丁〕化合物の合成原料
化合物である5アミノ−1−β−D−リボフラノシルイ
ミダゾール−4−カルボキサミドは極めて高価であり、
合成原料としては適当でないという問題も指摘されてい
た。
れていた。しかし、゛その合成法は、■反応工程が長く
、最終単離収率が低い、■スズ化合物などの重金属を使
用する場合があるなど欠点を有し、必ずしも満足できる
ものではながった。さらに、式c丁〕化合物の合成原料
化合物である5アミノ−1−β−D−リボフラノシルイ
ミダゾール−4−カルボキサミドは極めて高価であり、
合成原料としては適当でないという問題も指摘されてい
た。
一方、酵素的または微生物的にイミダゾール誘導体をリ
ボシル化した例はいくつが報告されているものの(たと
えば、特開昭51−1693号公報、特開昭58−13
394号公報参照)、酵素的に5−エチニルイミダゾー
ル−4−カルボキサミドをリボシル化した例は報告され
ておらず、またその可能性も示唆されていない。
ボシル化した例はいくつが報告されているものの(たと
えば、特開昭51−1693号公報、特開昭58−13
394号公報参照)、酵素的に5−エチニルイミダゾー
ル−4−カルボキサミドをリボシル化した例は報告され
ておらず、またその可能性も示唆されていない。
本発明者らは、上述の問題を解決するために種々研究を
重ねた結果、安価にかつ大量に入手可能な5−エチニル
イミダゾール−4−カルボキサミ1へとリボース供与体
とをヌクレオシドホスホリラーゼを含有する酵素調製物
の存在下反応させることにより極めて容易に前記式[1
)化合物を調製することができることを発見し、本発明
を完成させた。
重ねた結果、安価にかつ大量に入手可能な5−エチニル
イミダゾール−4−カルボキサミ1へとリボース供与体
とをヌクレオシドホスホリラーゼを含有する酵素調製物
の存在下反応させることにより極めて容易に前記式[1
)化合物を調製することができることを発見し、本発明
を完成させた。
すなわち、本発明は式(II)
で表わされる5−エチニルイミダゾール−4−力ルポキ
サミドとリボース供与体とをヌクレオシドホスホリラー
ゼを含有する酵素調製物の存在下反応させて式CI) で表わされる5−エチニル−1−β−D−リボフラノシ
ルイミダゾール−4−カルボキサミドを生成させ、これ
を取得することを特徴とする5−エチニル−1−β−D
−リボフラノシルイミダゾール−4−カルボキサミドの
製造法に関するものである。
サミドとリボース供与体とをヌクレオシドホスホリラー
ゼを含有する酵素調製物の存在下反応させて式CI) で表わされる5−エチニル−1−β−D−リボフラノシ
ルイミダゾール−4−カルボキサミドを生成させ、これ
を取得することを特徴とする5−エチニル−1−β−D
−リボフラノシルイミダゾール−4−カルボキサミドの
製造法に関するものである。
以下、本発明方法を詳細に説明する。
1.5−エチニルイミダゾール−4−カルボキサミド
本発明方法に使用する5−エチニルイミダゾール−4−
カルボキサミドは、たとえば次のような方法により調製
することができる。
カルボキサミドは、たとえば次のような方法により調製
することができる。
まず、5−アミノイミダゾール−4−カルポニ4
1〜リル(CA [5098−1」、−3)(特開昭4
9−1−16063号参照))の5位をハロゲン化して
5−ハロゲノイミダゾール−4−カルボニトリルを合成
する。
9−1−16063号参照))の5位をハロゲン化して
5−ハロゲノイミダゾール−4−カルボニトリルを合成
する。
上記のハロゲン化反応は、ジアゾニウム化合物を経由す
るハロゲン化反応であり、たとえばNa」rとRjch
ardsonの方法(J、Org、Chem、、 45
、3969〜3974(1,980)参照)に憎しで
実施することができる。
るハロゲン化反応であり、たとえばNa」rとRjch
ardsonの方法(J、Org、Chem、、 45
、3969〜3974(1,980)参照)に憎しで
実施することができる。
具体的には、ハロゲン化剤としては、臭素化のためには
トリブロモメタン、ヨウ素化のためにはショートメタン
を使用し、これらのハロゲン化剤は反応溶媒としても作
用する。ハロゲン化反応は、5−アミノイミダゾール−
4−カルボニトリルj−モルに対して2〜30倍モルの
亜硝酸アルキル(たとえば亜硝酸イソアミル、亜硝酸ブ
チルなど)を上述のハロゲン化剤に溶解させ、50℃〜
溶媒還流温度で10分〜30時間反応させることにより
実施することができる。
トリブロモメタン、ヨウ素化のためにはショートメタン
を使用し、これらのハロゲン化剤は反応溶媒としても作
用する。ハロゲン化反応は、5−アミノイミダゾール−
4−カルボニトリルj−モルに対して2〜30倍モルの
亜硝酸アルキル(たとえば亜硝酸イソアミル、亜硝酸ブ
チルなど)を上述のハロゲン化剤に溶解させ、50℃〜
溶媒還流温度で10分〜30時間反応させることにより
実施することができる。
次に、上記の5−ハロゲノイミダゾール−4一
カルボニトリルと式〔■〕
HCECY (111〕〔式中、
Yはシリル基を示す。〕で表わされるシリル化アセチレ
ン誘導体を反応させてイミダゾール環5位にシリル化エ
チニル基を導入し、次いでシリル基を除去して5−エチ
ニルイミダゾール4−カルボニトリルを調製する。
Yはシリル基を示す。〕で表わされるシリル化アセチレ
ン誘導体を反応させてイミダゾール環5位にシリル化エ
チニル基を導入し、次いでシリル基を除去して5−エチ
ニルイミダゾール4−カルボニトリルを調製する。
上記式(m)中、Yで表わされるシリル基としては、ト
リメチルシリル、t−ブチルジメチルシリル、メチルジ
−t−ブチルシリル、トリプロピルシリルなどのシリル
基が例示される。
リメチルシリル、t−ブチルジメチルシリル、メチルジ
−t−ブチルシリル、トリプロピルシリルなどのシリル
基が例示される。
5−ハロゲノイミダゾール−4−カルボニトリルとシリ
ル化アセチレン誘導体との反応は、反応溶媒中、好まし
くはパラジウム触媒の存在下、5−ハロゲノイミダゾー
ル−4−カルボニトリル1モルに対してシリル化アセチ
レン誘導体1〜3倍モル、好ましくは1〜2倍モル使用
し、反応温度50〜150℃、好ましくは90〜110
℃で1〜30時間反応させることにより実施することが
できる。
ル化アセチレン誘導体との反応は、反応溶媒中、好まし
くはパラジウム触媒の存在下、5−ハロゲノイミダゾー
ル−4−カルボニトリル1モルに対してシリル化アセチ
レン誘導体1〜3倍モル、好ましくは1〜2倍モル使用
し、反応温度50〜150℃、好ましくは90〜110
℃で1〜30時間反応させることにより実施することが
できる。
反応溶媒としては、塩基性溶媒(トリエチルアミン、ト
リブチルアミン、トリオクチルアミン、N、N、N’
、N’−テトラメチル−1,8−ナフタレンジアミン、
ジメチルアニリン、ジエチルアニリン、ピリジンなど)
単独またはこれらの塩基性溶媒とアセトニトリル、N、
N−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、N
、N−ジメチルアセトアミド、テトラヒドロフラン、ジ
オキサンなどの溶媒との混合溶媒を用いることができる
。
リブチルアミン、トリオクチルアミン、N、N、N’
、N’−テトラメチル−1,8−ナフタレンジアミン、
ジメチルアニリン、ジエチルアニリン、ピリジンなど)
単独またはこれらの塩基性溶媒とアセトニトリル、N、
N−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、N
、N−ジメチルアセトアミド、テトラヒドロフラン、ジ
オキサンなどの溶媒との混合溶媒を用いることができる
。
パラジウム触媒としては、ビス(アセトニトリル)パラ
ジウムジクロリド、ビス(トリフェニルホスフィン)パ
ラジウムジクロリド、ビス(ベンゾニトリル)パラジウ
ムジクロリド、テトラキス(トリフェニルホスフィン)
パラジウムなどを使用することができる。
ジウムジクロリド、ビス(トリフェニルホスフィン)パ
ラジウムジクロリド、ビス(ベンゾニトリル)パラジウ
ムジクロリド、テトラキス(トリフェニルホスフィン)
パラジウムなどを使用することができる。
シリル基の除去は常法に従って行えばよく、たとえば、
塩酸−テトラヒドロフラン−水を用いる酸性加水分解、
メタノール−アンモニアを用いるアルカリ性加水分解、
フッ化アンモニウム、テト− ラブチルアンモニウムフルオリド等による処理などによ
り実施することができる。
塩酸−テトラヒドロフラン−水を用いる酸性加水分解、
メタノール−アンモニアを用いるアルカリ性加水分解、
フッ化アンモニウム、テト− ラブチルアンモニウムフルオリド等による処理などによ
り実施することができる。
最後に、5−エチニルイミダゾール−4−カルボニトリ
ルを加水分解反応に付して5−エチニルイミダゾール−
4−カルボキサミドを調製する。
ルを加水分解反応に付して5−エチニルイミダゾール−
4−カルボキサミドを調製する。
加水分解反応としては、ニトリル誘導体から酸アミド誘
導体を調製する際に採用されている加水分解反応を適用
することができる。具体的には、酸性加水分解反応、中
性加水分解反応またはアルカリ性加水分解反応、好まし
くは、中性加水分解反応またはアルカリ性加水分解反応
、さらに好ましくはアルカリ性加水分解反応が適用され
る。
導体を調製する際に採用されている加水分解反応を適用
することができる。具体的には、酸性加水分解反応、中
性加水分解反応またはアルカリ性加水分解反応、好まし
くは、中性加水分解反応またはアルカリ性加水分解反応
、さらに好ましくはアルカリ性加水分解反応が適用され
る。
アルカリ性加水分解反応についてさらに具体的に説明す
れば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アン
モニウム(またはアンモニア)などの塩基の存在下、5
−エチニルイミダゾール−4−カルボニトリルと過酸化
水素を10〜50℃、好ましくは室温にて1分〜10時
間反応させることにより加水分解反応を実施することが
できる。
れば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アン
モニウム(またはアンモニア)などの塩基の存在下、5
−エチニルイミダゾール−4−カルボニトリルと過酸化
水素を10〜50℃、好ましくは室温にて1分〜10時
間反応させることにより加水分解反応を実施することが
できる。
反応溶媒としては上記反応を妨害しないもので8−
あればよく、具体的にはメタノール、エタノール等のア
ルコール性溶媒などを用いることができる。
ルコール性溶媒などを用いることができる。
このようにして得られた5−エチニルイミダゾール−4
−カルボキサミドは核酸塩基の単離精製に常用されてい
る方法(たとえば、吸着またはイオン交換などの各種ク
ロマ1〜グラフイー、再結晶法など)を適宜組み合わせ
て単離精製することができる。
−カルボキサミドは核酸塩基の単離精製に常用されてい
る方法(たとえば、吸着またはイオン交換などの各種ク
ロマ1〜グラフイー、再結晶法など)を適宜組み合わせ
て単離精製することができる。
■、リボース供与体
本発明方法に使用するリボース供与体はヌクレオシドホ
スホリラーゼの作用により上述の5−エチニルイミダゾ
ール−4−カルボキサミドとリボース供与体の糖部分が
N−グリコシド結合を形成しうるちのであればよい。具
体的にはイノシン。
スホリラーゼの作用により上述の5−エチニルイミダゾ
ール−4−カルボキサミドとリボース供与体の糖部分が
N−グリコシド結合を形成しうるちのであればよい。具
体的にはイノシン。
グアノシン、ウリジン、アデノシン、シチジン、リボフ
ラノシルチミンなどのりボヌクレオシドおよびリボース
−1−リン酸を例示することができる。
ラノシルチミンなどのりボヌクレオシドおよびリボース
−1−リン酸を例示することができる。
+11 、リン酸供与体
リボース供与体としてリボヌクレオシドを使用0
する場合には、反応液にリン酸供与体を共存させる。本
発明方法で使用するリン酸供与体としては。
発明方法で使用するリン酸供与体としては。
反応液中でリン酸イオンに解離しうるちのであればよく
、たとえば遊離型のリン酸またはリン酸塩(たとえば、
ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属塩、カルシウ
ム、マグネシウムなどのアルカリ土類金属塩、アンモニ
ウム塩など)が使用される。また、リン酸供与体として
は、反応液中でリン酸イオンを解離しうる系、たとえば
各種リン酸エステル誘導体とホスファターゼの組み合わ
せ、ヌクレオチドとヌクレオチダーゼの絹み合わせなど
を利用することもできる。
、たとえば遊離型のリン酸またはリン酸塩(たとえば、
ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属塩、カルシウ
ム、マグネシウムなどのアルカリ土類金属塩、アンモニ
ウム塩など)が使用される。また、リン酸供与体として
は、反応液中でリン酸イオンを解離しうる系、たとえば
各種リン酸エステル誘導体とホスファターゼの組み合わ
せ、ヌクレオチドとヌクレオチダーゼの絹み合わせなど
を利用することもできる。
■、ヌクレオシドホスホリラーゼ
本発明方法で使用するヌクレオシドホスホリラーゼを含
有する酵素調製物とは本発明の反応を触媒することので
きるピリミジンヌクレオシドホスホリラーゼおよび/ま
たはプリンヌクレオシドホスホリラーゼを含有する酵素
調製物を指称し、酵素の由来、精製度合、調製形態など
は特に制限されない。すなわち、酵素の由来としては動
物、微生物いずれであってもよい。以下、調製の容易な
微生物からの酵素調製物の調製方法の一例を説明する。
有する酵素調製物とは本発明の反応を触媒することので
きるピリミジンヌクレオシドホスホリラーゼおよび/ま
たはプリンヌクレオシドホスホリラーゼを含有する酵素
調製物を指称し、酵素の由来、精製度合、調製形態など
は特に制限されない。すなわち、酵素の由来としては動
物、微生物いずれであってもよい。以下、調製の容易な
微生物からの酵素調製物の調製方法の一例を説明する。
(1) 使用微生物
使用微生物としてはバチルス属、好ましくはバチルス・
ステアロサーモフィラスに属する微生物を使用する。
ステアロサーモフィラスに属する微生物を使用する。
そのような微生物を具体的に例示すれば、バチルス・ス
テアロサーモフィラスT H6−2、p −21、P−
23など(いずれもヤマサ醤油■敷地内の土壌より分離
した土壌分離菌株)を例示することができる。その菌株
群の中の最も代表的な菌株であるTH6−2の菌学的性
質を以下に示す。
テアロサーモフィラスT H6−2、p −21、P−
23など(いずれもヤマサ醤油■敷地内の土壌より分離
した土壌分離菌株)を例示することができる。その菌株
群の中の最も代表的な菌株であるTH6−2の菌学的性
質を以下に示す。
T H6−2の菌学的性質
(A)形態
■ 細胞の形および大きさ
短稈状(Rod) 、 0.6〜1..1.X2〜7−
■ 胞子の有無 有 ■ 胞子のうの膨化の有無 有 ■ 細胞内の胞子の部位および大きさ ]] 末端部または中央部、0.8×0.8〜]、Oρ1 ■ ダラム染色性 グラムバリアプル(培養初期はダラム陽性)(I3)各
培地での生育状態 ■ 肉汁寒天斜面培地 生育の様相:生育旺盛、表面平滑、不透明、培地変化な
し ■ 肉汁寒天平板培地 生育の様相二円形コロニー形成、薄く広がる、粘性を示
す、不透明、周縁波状 ■ リドマス・ミルク培地 生育せず (C)生理的性質 ■ 酸素存在下での生育:生育する ■ 酸素非存在下での生育:生育せず ■ カタラーゼ:陽性 ■ v−pテスト:陰性 ■ メチルレッドテスh (pHj、n V−P br
oth):<pH6 2 ■ 加水分解能 カゼイン:陰性 ゼラチン:陽性 デンプン:陽性 ■ クエン酸の利用:陽性 ■ 硝酸塩の還元:陽性 ■ インドールの生成:陰性 [相] 塩化ナトリウムまたは塩化カリウムの要求性:
陰性 ■ 糖質からの酸の生成 陽性ニゲルコース、アラビノース、キジロス、フラクト
ース、フル1−−ス 陰性:デンプン、グリセロール、ショ糖、ラフィノース ■ 各pHによる生育 6.8で生育、5.7で生育せず [相] 塩化ナトリウム存在下での生育2%NaC]存
在下:生育する 5%NaC]存在下:生育せず ■ 生育範囲 生育pH範囲二6.5〜9.0 3 4 生育温度範囲=35〜65℃ [相] グルコース存在下での生育 グルコース0.5%以上の存在下で生育せず これらの菌学的性質をBargey’s Manual
−ofSystematコc Bacterjolog
y (第8版)の分類基準と照合したところ、本分離菌
はバチルス・ステアロサーモフィラスに属するものであ
ることが判明し、バチルス・ステアロサーモフィラス
T H62と命名した。またP −21、P−23も同
じ菌学的性質を示した。なお、TH6−2は工業技術院
微生物工業技術研究所に寄託されており、受託番号とし
て微工研菌寄第10526号が与えられている。
■ 胞子の有無 有 ■ 胞子のうの膨化の有無 有 ■ 細胞内の胞子の部位および大きさ ]] 末端部または中央部、0.8×0.8〜]、Oρ1 ■ ダラム染色性 グラムバリアプル(培養初期はダラム陽性)(I3)各
培地での生育状態 ■ 肉汁寒天斜面培地 生育の様相:生育旺盛、表面平滑、不透明、培地変化な
し ■ 肉汁寒天平板培地 生育の様相二円形コロニー形成、薄く広がる、粘性を示
す、不透明、周縁波状 ■ リドマス・ミルク培地 生育せず (C)生理的性質 ■ 酸素存在下での生育:生育する ■ 酸素非存在下での生育:生育せず ■ カタラーゼ:陽性 ■ v−pテスト:陰性 ■ メチルレッドテスh (pHj、n V−P br
oth):<pH6 2 ■ 加水分解能 カゼイン:陰性 ゼラチン:陽性 デンプン:陽性 ■ クエン酸の利用:陽性 ■ 硝酸塩の還元:陽性 ■ インドールの生成:陰性 [相] 塩化ナトリウムまたは塩化カリウムの要求性:
陰性 ■ 糖質からの酸の生成 陽性ニゲルコース、アラビノース、キジロス、フラクト
ース、フル1−−ス 陰性:デンプン、グリセロール、ショ糖、ラフィノース ■ 各pHによる生育 6.8で生育、5.7で生育せず [相] 塩化ナトリウム存在下での生育2%NaC]存
在下:生育する 5%NaC]存在下:生育せず ■ 生育範囲 生育pH範囲二6.5〜9.0 3 4 生育温度範囲=35〜65℃ [相] グルコース存在下での生育 グルコース0.5%以上の存在下で生育せず これらの菌学的性質をBargey’s Manual
−ofSystematコc Bacterjolog
y (第8版)の分類基準と照合したところ、本分離菌
はバチルス・ステアロサーモフィラスに属するものであ
ることが判明し、バチルス・ステアロサーモフィラス
T H62と命名した。またP −21、P−23も同
じ菌学的性質を示した。なお、TH6−2は工業技術院
微生物工業技術研究所に寄託されており、受託番号とし
て微工研菌寄第10526号が与えられている。
(2)微生物の培養
微生物を培養するための培地としては、上述の微生物が
資化可能な炭素源および窒素源を適当量含有し、さらに
必要に応じて無機塩、微量発育促進物質、消泡剤などを
添加したものを使用する。
資化可能な炭素源および窒素源を適当量含有し、さらに
必要に応じて無機塩、微量発育促進物質、消泡剤などを
添加したものを使用する。
具体的には、炭素源としては糖類(グルコース、サッカ
ロースなど)、天然炭水化物(糖蜜、廃糖蜜、澱粉、麦
、館、米など)、アルコール類、脂肪酸類、炭化水素類
など、窒素源としては、肉エキス、酵母エキス、大豆加
水分解物、カザミノ酸、各種アミノ酸、尿素なと、無機
塩としては各種金属(亜鉛、鉄、マグネシウム、ナトリ
ウム、カルシウム、カリウムなど)を含有するりん酸塩
、塩酸塩、硫酸塩など、微量発育促進物質としてはビタ
ミンB□、ビタミンB2、パン1へテン酸、ビオチンな
どが例示される。
ロースなど)、天然炭水化物(糖蜜、廃糖蜜、澱粉、麦
、館、米など)、アルコール類、脂肪酸類、炭化水素類
など、窒素源としては、肉エキス、酵母エキス、大豆加
水分解物、カザミノ酸、各種アミノ酸、尿素なと、無機
塩としては各種金属(亜鉛、鉄、マグネシウム、ナトリ
ウム、カルシウム、カリウムなど)を含有するりん酸塩
、塩酸塩、硫酸塩など、微量発育促進物質としてはビタ
ミンB□、ビタミンB2、パン1へテン酸、ビオチンな
どが例示される。
培養は、通常、液体培養法(振盪培養、通気撹拌培養、
静置培養、連続培養など)によって行えばよい。
静置培養、連続培養など)によって行えばよい。
培養条件は、通常、培養開始のp Hを6.5〜9.0
に調整し、約35〜65℃の温度条件下で目的とする酵
素活性が十分に得られるまで、具体的には5〜50時間
程度培養する。
に調整し、約35〜65℃の温度条件下で目的とする酵
素活性が十分に得られるまで、具体的には5〜50時間
程度培養する。
(3)酵素調製物の調製
本発明方法で使用する酵素調製物としては、微生物の培
養物自体、培養物から通常の分離手段】5 (遠心分離、沈澱分離、凝集分離、洗浄など)によって
分離された生菌体、またはその菌体処理物を例示するこ
とができる。
養物自体、培養物から通常の分離手段】5 (遠心分離、沈澱分離、凝集分離、洗浄など)によって
分離された生菌体、またはその菌体処理物を例示するこ
とができる。
生菌体の菌体処理物をさらに具体的に例示すれば、生菌
体を機械的破壊(ワーリング・ブレンダ、フレンチ・プ
レス、ホモジナイザー、乳鉢などによる)、凍結融解、
乾燥(凍結乾燥、風乾。
体を機械的破壊(ワーリング・ブレンダ、フレンチ・プ
レス、ホモジナイザー、乳鉢などによる)、凍結融解、
乾燥(凍結乾燥、風乾。
アセ1〜ン乾燥などによる)、自己消化(トルエン。
酢酸エチルなどの溶媒処理による)、酵素処理(リゾチ
ームなどの細胞壁溶解酵素による)、超音波処理、浸透
圧ショック法、化学的処理(塩類溶液、酸性溶液、アル
カリ性溶液、界面活性剤、キレ−1〜剤などによる)な
どの−船釣処理法に従って処理して得た生菌体の破壊物
もしくは生菌体の細胞壁もしくは/および細胞膜を変性
させたもの、あるいは酵素活性を有する両分を抽出し、
必要に応じて酵素活性を有する抽出画分を一般的な酵素
精製法(塩析処理、等電点沈澱処理、有機溶媒沈澱処理
、各種クロマトグラフィー処理、透析処理などによる)
に従って処理して本発明の目的6 とする酵素活性を有する両分を分画することによって得
られる粗酵素または精製酵素などを挙げることができる
。このような培養物、生菌体および菌体処理物は固定化
処理を施さない遊離の状態で使用してもよく、また包括
法、架橋法、吸着法など通常の方法により固定化処理を
施した固定化物として使用してもよい。
ームなどの細胞壁溶解酵素による)、超音波処理、浸透
圧ショック法、化学的処理(塩類溶液、酸性溶液、アル
カリ性溶液、界面活性剤、キレ−1〜剤などによる)な
どの−船釣処理法に従って処理して得た生菌体の破壊物
もしくは生菌体の細胞壁もしくは/および細胞膜を変性
させたもの、あるいは酵素活性を有する両分を抽出し、
必要に応じて酵素活性を有する抽出画分を一般的な酵素
精製法(塩析処理、等電点沈澱処理、有機溶媒沈澱処理
、各種クロマトグラフィー処理、透析処理などによる)
に従って処理して本発明の目的6 とする酵素活性を有する両分を分画することによって得
られる粗酵素または精製酵素などを挙げることができる
。このような培養物、生菌体および菌体処理物は固定化
処理を施さない遊離の状態で使用してもよく、また包括
法、架橋法、吸着法など通常の方法により固定化処理を
施した固定化物として使用してもよい。
上述の酵素調製物の調製はいずれも通常使用されている
方法により行うことができる。
方法により行うことができる。
■0反応条件
5−エチニルイミダゾール−4−カルボキサミドおよび
リポース供与体、さらに必要によりリン酸供与体を水ま
たは緩衝液に溶解または懸濁したものを反応液とし、こ
の反応液を上述の酵素調製物と接触させて、5−エチニ
ル−」−一β−p −IJボフラノシルイミダゾールー
4−カルボキサミドを酵素的に合成する。
リポース供与体、さらに必要によりリン酸供与体を水ま
たは緩衝液に溶解または懸濁したものを反応液とし、こ
の反応液を上述の酵素調製物と接触させて、5−エチニ
ル−」−一β−p −IJボフラノシルイミダゾールー
4−カルボキサミドを酵素的に合成する。
反応は通常、35〜80℃の範囲で効率よく進行するが
、特に40〜70℃程度の反応温度が好ましい。反応温
度が35℃以下のときは反応速度が遅く、反応効率がよ
くない。また、80℃以」二の反応温度ではヌクレオシ
ドホスホリラーゼ活性を低下させるおそれがある。
、特に40〜70℃程度の反応温度が好ましい。反応温
度が35℃以下のときは反応速度が遅く、反応効率がよ
くない。また、80℃以」二の反応温度ではヌクレオシ
ドホスホリラーゼ活性を低下させるおそれがある。
反応液の液性は通常p H5〜1o、好ましくはp H
6〜9の範囲に保たれればよい。反応中にpHが変動す
るときは酸またはアルカリを用いて好ましいp H範囲
に補正すればよい。
6〜9の範囲に保たれればよい。反応中にpHが変動す
るときは酸またはアルカリを用いて好ましいp H範囲
に補正すればよい。
生成した5−エチニル−1−β−D−リボフラノシルイ
ミダゾール−4−カルボキサミドは公知の方法またはこ
れを応用した方法によって分離精製することができる。
ミダゾール−4−カルボキサミドは公知の方法またはこ
れを応用した方法によって分離精製することができる。
たとえば、イオン交換クロマトグラフィー、吸着クロマ
トグラフィー、分配クロマ1−グラフィー、ゲル濾過法
など各種のクロマトグラフィー、自流分配、向流抽出な
ど二液相間の分配を利用する方法、濃縮、冷却、有機溶
媒添加など溶解度の差を利用する方法などのヌクレオシ
ドの分離精製の使用されている一般的な分離精製法を単
独で、あるいは適宜に組み合わせて行えばよい。
トグラフィー、分配クロマ1−グラフィー、ゲル濾過法
など各種のクロマトグラフィー、自流分配、向流抽出な
ど二液相間の分配を利用する方法、濃縮、冷却、有機溶
媒添加など溶解度の差を利用する方法などのヌクレオシ
ドの分離精製の使用されている一般的な分離精製法を単
独で、あるいは適宜に組み合わせて行えばよい。
以下、参考例、実施例を示し本発明を具体的に説明する
。
。
参考例 5−エチニルイミダゾール−4−カルボキサミ
ドの合成 5−アミノイミダゾール−4−カルボニトリル3.24
g(30,Ommol、)を100℃の油浴中ショート
メタン1.50 m(1,に溶解させ、さらに亜硝酸イ
ソアミル15m1)を加え30分間反応させた。
ドの合成 5−アミノイミダゾール−4−カルボニトリル3.24
g(30,Ommol、)を100℃の油浴中ショート
メタン1.50 m(1,に溶解させ、さらに亜硝酸イ
ソアミル15m1)を加え30分間反応させた。
反応後、反応液をシリカゲルカラムに吸着させ、エタノ
ール−クロロホルムで溶出して目的化合物含有画分を濃
縮し、5−ヨードイミダゾール−4カルボニトリルの粉
末4.50g (収率70.0%)を得た。
ール−クロロホルムで溶出して目的化合物含有画分を濃
縮し、5−ヨードイミダゾール−4カルボニトリルの粉
末4.50g (収率70.0%)を得た。
元素分析:C,H2N3Iとして
計算値 C,21,94% ; H,0,92% ;
N、19.]、!1%実測値 C,22,15ダ; H
,0,77石;N、19.0部5−ヨードイミダゾール
−4−カルボニトリル220■とビス(ベンゾニトリル
)パラジウムジクロリド18■(5mo1%)を封管に
入れ、アルゴンガスを通気し、アセトニ1−リルに溶解
させた。
N、19.]、!1%実測値 C,22,15ダ; H
,0,77石;N、19.0部5−ヨードイミダゾール
−4−カルボニトリル220■とビス(ベンゾニトリル
)パラジウムジクロリド18■(5mo1%)を封管に
入れ、アルゴンガスを通気し、アセトニ1−リルに溶解
させた。
9−
これにトリエチルアミン0 、 16mQ (1、2m
mol)とトリメチルシリルアセチレン(トリメチルシ
Tノルエチン) 1.2mmolを加え、100’Cの
油汁?中で反応させた。反応後、反応液をセライトで濾
過し、エタノールで洗浄後、シリカゲルカラム番こで精
製し、5−(2−トリメチルシリル−1−エチンー1−
イル)イミダゾール−4−カルボニ1〜1ノルを得た。
mol)とトリメチルシリルアセチレン(トリメチルシ
Tノルエチン) 1.2mmolを加え、100’Cの
油汁?中で反応させた。反応後、反応液をセライトで濾
過し、エタノールで洗浄後、シリカゲルカラム番こで精
製し、5−(2−トリメチルシリル−1−エチンー1−
イル)イミダゾール−4−カルボニ1〜1ノルを得た。
」1記の化合物をそのままアンモニア−メタノールの溶
液に溶解させ、室温にて6時間反応させた。
液に溶解させ、室温にて6時間反応させた。
反応後、溶媒を情夫し、得られた残渣をシリカゲルカラ
ムにて精製し、含水メタノールより結晶イヒして5−エ
チニルイミダゾール−4−カルボニトリル122■(収
率65%)の結晶を得た。
ムにて精製し、含水メタノールより結晶イヒして5−エ
チニルイミダゾール−4−カルボニトリル122■(収
率65%)の結晶を得た。
融点:169°C
元素分析: c 6Ha N aとして計算値 C,6
1,53% ; H,’2.58%; N、35.88
%実測値 C,61,50%: H,2,52%; N
、35.78%’H−NMR(DMSO−d6): 13.7 (bs、IH2H1) + 7.990 (s、LH,H−2)、5.02 (s、LH,C:
CH) 5−エチニルイミダゾール−4−カルボニトリル11.
7 mg (1,、Ommol)をIN水酸化ナトリウ
ム−メタノール(1,:L)混合溶媒6mQ、に溶解し
、これに過酸化水素水Q、1mQを加え、室温で45分
間撹拌反応させた。反応後、溶媒を留去して、残渣をシ
リカゲルカラムに吸着させ、0〜16%エタノール−ク
ロロホルム混合溶媒で溶出し、エタノール−n−ヘキサ
ン混合溶媒より結晶化して5−エチニルイミダゾール−
4−カルボキサミドの結晶を得た。
1,53% ; H,’2.58%; N、35.88
%実測値 C,61,50%: H,2,52%; N
、35.78%’H−NMR(DMSO−d6): 13.7 (bs、IH2H1) + 7.990 (s、LH,H−2)、5.02 (s、LH,C:
CH) 5−エチニルイミダゾール−4−カルボニトリル11.
7 mg (1,、Ommol)をIN水酸化ナトリウ
ム−メタノール(1,:L)混合溶媒6mQ、に溶解し
、これに過酸化水素水Q、1mQを加え、室温で45分
間撹拌反応させた。反応後、溶媒を留去して、残渣をシ
リカゲルカラムに吸着させ、0〜16%エタノール−ク
ロロホルム混合溶媒で溶出し、エタノール−n−ヘキサ
ン混合溶媒より結晶化して5−エチニルイミダゾール−
4−カルボキサミドの結晶を得た。
融点:208〜209℃(分解)
元素分析: C6H,N、○として
計算値 C,53,33% ; H,3,73% ;
N、31.10%実測値 C,53,18% ; 11
.3.66% ; N、3]、15%UV (H2O中
): λmax 262nm(中性) 249nm(酸性) 279nm(塩基性) ’H−NMR(1つ MS 〇 −d G)
:]、3.0 (bs、 LH,H−1)、7.7
L(s、 LH,J(−2)、 7.52,7.
22(bs、2H,NH2)、4.52 (s、LH
,CECH) 実施例 ]− イーストペプトンパウダー(■イワキ製)1,5%、ポ
リペプトン(Difco社11)1.0%を含む殺菌済
みの培地(pH7,5)10mQにバチルス・ステアロ
サーモフィラス TH6−2(微工研菌寄第10526
号)を植菌し、50℃で16時間振盪培養後、培養液を
遠心分離して菌体(約200■)を集菌した。得られた
湿菌体(ペースト状)200mgは、10mM 5−
、r、チニルイミダゾール=4−カルボキサミド(E
I CA) 、 15mMリボース供与体および15m
Mリン酸二水素カリウムを含有する基質溶液(pH6,
0)2.F5mQに添加して60’Cで48時間撹拌条
件下反応させた。
N、31.10%実測値 C,53,18% ; 11
.3.66% ; N、3]、15%UV (H2O中
): λmax 262nm(中性) 249nm(酸性) 279nm(塩基性) ’H−NMR(1つ MS 〇 −d G)
:]、3.0 (bs、 LH,H−1)、7.7
L(s、 LH,J(−2)、 7.52,7.
22(bs、2H,NH2)、4.52 (s、LH
,CECH) 実施例 ]− イーストペプトンパウダー(■イワキ製)1,5%、ポ
リペプトン(Difco社11)1.0%を含む殺菌済
みの培地(pH7,5)10mQにバチルス・ステアロ
サーモフィラス TH6−2(微工研菌寄第10526
号)を植菌し、50℃で16時間振盪培養後、培養液を
遠心分離して菌体(約200■)を集菌した。得られた
湿菌体(ペースト状)200mgは、10mM 5−
、r、チニルイミダゾール=4−カルボキサミド(E
I CA) 、 15mMリボース供与体および15m
Mリン酸二水素カリウムを含有する基質溶液(pH6,
0)2.F5mQに添加して60’Cで48時間撹拌条
件下反応させた。
反応後、5−エチニル−1−β−D−リボンラノシルイ
ミダゾール−4−カルボキサミド(EICA R)の生
成率を、高速液体クロマI〜グラフィー(カラム:YM
C−AQ302 (○DS)、[山村化学研究所製)、
溶出剤=5%アセトニトリル含有20mMトリス塩酸緩
衝液(pH7,5)、検出:260nmにおける吸収)
を用いて測定した。
ミダゾール−4−カルボキサミド(EICA R)の生
成率を、高速液体クロマI〜グラフィー(カラム:YM
C−AQ302 (○DS)、[山村化学研究所製)、
溶出剤=5%アセトニトリル含有20mMトリス塩酸緩
衝液(pH7,5)、検出:260nmにおける吸収)
を用いて測定した。
その結果を第1表に示す。
第1−表
*1 変換率は対5−エチニルイミダゾール−4カルボ
キサミド比で表わした。
キサミド比で表わした。
実施例 2
実施例1と同じ反応を下記の条件下で行った。
反応条件
基質溶液(p H6、○) ” : 2.5mAヌク
レオシドホスホリラーゼ:200mg湿菌体3 反応温度 :60’C反応時間
二〇〜48時間1)20mM E 工CA
、30mMウリジンおよび30鱈リン酸二水素カリウム
含有 反応後、実施例1と同じ方法によりEICA、Rの生成
率を測定した。その結果を第1図に示す。
レオシドホスホリラーゼ:200mg湿菌体3 反応温度 :60’C反応時間
二〇〜48時間1)20mM E 工CA
、30mMウリジンおよび30鱈リン酸二水素カリウム
含有 反応後、実施例1と同じ方法によりEICA、Rの生成
率を測定した。その結果を第1図に示す。
第1図からEICARの生成率は対EICA比で50%
を超えるものであった。
を超えるものであった。
第1図はEICARの経時的な生成率を示したものであ
る。 4
る。 4
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1)式〔II〕 ▲数式、化学式、表等があります▼〔II〕 で表わされる5−エチニルイミダゾール−4−カルボキ
サミドとリボース供与体とをヌクレオシドホスホリラー
ゼを含有する酵素調製物の存在下反応させて式〔 I 〕 ▲数式、化学式、表等があります▼〔 I 〕 で表わされる5−エチニル−1−β−D−リボフラノシ
ルイミダゾール−4−カルボキサミドを生成させ、これ
を取得することを特徴とする5−エチニル−1−β−D
−リボフラノシルイミダゾール−4−カルボキサミドの
製造法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP34305689A JPH03198790A (ja) | 1989-12-27 | 1989-12-27 | 5―エチニル―1―β―D―リボフラノシルイミダゾール―4―カルボキサミドの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP34305689A JPH03198790A (ja) | 1989-12-27 | 1989-12-27 | 5―エチニル―1―β―D―リボフラノシルイミダゾール―4―カルボキサミドの製造法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH03198790A true JPH03198790A (ja) | 1991-08-29 |
Family
ID=18358601
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP34305689A Pending JPH03198790A (ja) | 1989-12-27 | 1989-12-27 | 5―エチニル―1―β―D―リボフラノシルイミダゾール―4―カルボキサミドの製造法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH03198790A (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8461192B2 (en) | 2007-09-13 | 2013-06-11 | The University Of South Florida | Method of selectively inhibiting PKCiota |
-
1989
- 1989-12-27 JP JP34305689A patent/JPH03198790A/ja active Pending
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8461192B2 (en) | 2007-09-13 | 2013-06-11 | The University Of South Florida | Method of selectively inhibiting PKCiota |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JPH02308797A (ja) | 2′,3′‐ジデオキシプリンヌクレオシド類及びその製造方法 | |
KR870002167B1 (ko) | 리바비린의 제법 | |
EP0411158B1 (en) | Process for producing nucleosides by using phosphorylases obtainable from Bacillus stearothermophilus | |
JPS6360999B2 (ja) | ||
JPH03198790A (ja) | 5―エチニル―1―β―D―リボフラノシルイミダゾール―4―カルボキサミドの製造法 | |
JPS6111598B2 (ja) | ||
JP2800187B2 (ja) | 5−メチルウリジンの製造方法 | |
EP0090417B1 (en) | Process for producing 3'-deoxyguanosine | |
JP4173815B2 (ja) | 2’−デオキシグアノシンの製造法 | |
KR920005726B1 (ko) | 리보누클레오시드(ribonucleoside)의 제조방법 | |
JPH0422559B2 (ja) | ||
JPH0335915B2 (ja) | ||
JPH09502881A (ja) | アラビノヌクレオチドの製造方法 | |
JPS58190396A (ja) | リバビリンの製造法 | |
JPS59143599A (ja) | トリアゾ−ルヌクレオシドの製造法 | |
JPS6150597B2 (ja) | ||
JPH038760B2 (ja) | ||
JPH0337919B2 (ja) | ||
JPS61146194A (ja) | 3′−デオキシグアノシンの製造法 | |
JPH0314439B2 (ja) | ||
JPS6337636B2 (ja) | ||
JPH04297487A (ja) | 2′−デオキシリボシルゼアチン及びその製造方法 | |
JPS62126993A (ja) | マルト−スの製法 | |
JPS594117B2 (ja) | バシルス属アミラ−ゼg6によるオリゴ糖の製造法 | |
JPS63317093A (ja) | 2’−デオキシリバビリンの製造方法 |