JPH03170437A - ポリペプチド含有の皮下または筋肉内投与用医薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ポリベプチドと少なくとも１種のアミ，′酸
を含有する皮下（ｓｃ）または筋肉内（ｉｍ）投与用の
液体医薬組戊物、そのような医薬組或物の製造方法、お
よびポリペプチドの溶液中へのＳＣまたはｉｍ投与に適
当なアミノ酸の使用に関する。

治療的に使用される蛋白質の提供形態は、わずかな例外
を除いて静脈内投与に限られている。

ポリベプチドの経口投与は、ポリペプチドが胃腸管内で
分解するため、多くの場合戊功しない。

多様な方法を用いて、たとえばリポソーム中へのマイク
ロエンカプセレーションにより、ポリペプチドを経口的
に投与できる提供形態を開発することがすでに試みられ
てきた。しかしながら現在まで、これらの方法は低分子
量のポリベブチドの場合に適しているにすぎない。

したがって、ポリペプチドをｓｃまたはｉｍで投与する
ことが試みられてきた。しかしながら、この場合には、
従来のｉｖ投与に比較して、ｓｃまたはｉｍ投与は生物
学的利用性が著しく劣る、あるいは局所的な不耐性反応
を生じることがあるという問題が起こってくる。

しかし一方、ｓｃおよびｉｍ投与形態には、ｉｍ投与に
比べてきわめて重要な利点がある。とくに、患者自身で
治療が可能なこと、および治療の長期間持続作用が期待
できることが挙げられる。

ｗｏ　８６／０６９６２号およびＥＰ−Ａ−０．２９２
．９０８号には、ヒドロキシルアミンまたはメチルアミ
ンの存在下における蛋白質のＳＣまたはｉｎ投与が記載
されている。しかしながら、これらの物質はその限られ
た耐容性のため、制限された様式でしか使用できない。

本発明の目的はしたがって、Ｓｃまたはｉｍ投与に適当
な、ポリペプチド含有製剤を利用可能にすることにあっ
た。

この目的は本発明により、少なくとも１種のアミノ酸、
またはアミノ酸の塩、誘導体または類縁体をポリペプチ
ド含有溶液に混和することによって達戊される。好まし
くは、Ｄ−またはＬ−アミノ酸が混和される。

驚くべきことに、このような物質の添加は、ｓｃまたは
ｉｍ投与されるポリベプチドの生物学的利用性および耐
容性を劇的に改善し、したがってそれらのＳＣまたはｉ
ｍ投与を可能にすることが明らかにされた。

本発明の目的に適当な物質は、たとえば、リジン、オル
ニチン、アルギニン、ジアミノピメリン酸、アグマチン
、タレアチニン、グアニジノ酢酸、アセチルオルニチン
、シトルリン、アルギニノコハク酸、トラネキサム酸ま
たはε−アミノカプロン酸である。それらのすべてに共
通な特徴は、アミノ基またはグアニジノ基の形態での塩
基性基の存在である。

とくに適当な組合せは、アルギニンとリジンの好ましく
は０．００１−１モル／１２、とくに好ましくは０．Ｏ
ｌ〜０．５モル／ｌであることが明らかにされている。

ｓｃまたはｉｍ投与されたポリペプチドの生物学的利用
性は、ポリペプチドおよび所望により慣用の添加物たと
えば安定剤を含有する溶液に比較して著しく上昇する。

これらの物質による生物学的利用性に対するこの好まし
い影響および／または耐容性の改善は、とくにｔ−ＰＡ
　（組織プラスミノーゲンアクティベーター）　、ｔ−
ＰＡ変異体、ヒルジン、ウロキナーゼ、ＡＴＩ［Ｉ　（
アンチスロンビンＩＩＩ）、第Ｘ■因子、ＥＰＯ（エリ
スロボエチン）、フ才冫・ビレブランド因子およびＰＰ
４　（胎盤蛋白質４）について認めることができた。上
述の物質が本発明によって添加された蛋白質の活性は凍
結乾燥し、投与前に滅菌水に溶解されたのちにも維持さ
れた。

本発明の一態様においては、ポリペプチド含有溶液を、
緩衝液たとえば濃度０．００１〜０，１モル／ｌ好まし
くは０．Ｏｌ〜０．０５モル／ｌ，ｐＨ２〜１０好まし
くは４〜９のリン酸塩、ｔｒｉｓ−グリシン、酢酸塩ま
たはクエン酸緩衝液で、他のアミノ基もしくはグアニジ
ノ基をもっていてもよいアミノ酸またはアミノ酸誘導体
少なくとも１種たとえばリジン、オルニチン、アルギニ
ン、ジアミノビメリン酸、アグマチン、クレアチニン、
グアニジノ酢酸、アセチルオルニチン、シトルリン、ア
ルギニノコハク酸、トラネキサム酸またはε−アミノカ
ブロン酸好ましくはリジン、オルニチンまたはアルギニ
ンを０．００５〜０．５モル／ｌ好ましくはｏ．ｏｉ〜
０．３モル／ｌの濃度含有する緩衝液に対して、２〜３
０゜Ｃ好ましくは４〜ｌ５゜Ｃで透析する。

透析溶液の伝導度は好ましくは１〜５０ｍＳｉ（２０゜
Ｃ）、さらに好ましくは５　〜３０ｍＳｉ　（　２０°
Ｃ）である。浸透圧（　ｏｓｍｏｅａ　ｌ　ｉ　ｔｙ）
は］．　ｏ〜２０００ｍＯｓｍｏ　ｌ、好ましくは］０
０〜１０００ｍｏｓｍｏｌである。

透析完了後、ポリペプチド含有溶液は、濃縮または希釈
して所望の最終濃度に調整する。ついでこの溶液を滅菌
枦過し、瓶に充填し、また所望により凍結乾燥する。

本発明の溶液は医薬用にも獣医薬にも同様に適している
。生理学的に耐容性のある物質のみが添加されているの
で、本発明による溶液の投与によって炎症や皮膚刺激ま
たは血管損傷を生じることはない。

本発明の製剤を使用することにより、ｓｃまたはｉｍ投
与で、予防および治療の両者が可能なポリペプチドの血
漿濃度を達戊することができる。

実施例により本発明を例示する。

実施例　ｌ ｓｃおよびｉｍ投与用蛋白質溶液の製造１．　　ｒ−ｔ
−ＰＡ（＋Ａｃｔｉｌｙｓｅ）はＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ
　ｆｎｇｅｌ−ｈｅｉｍから購入した。

２．　ウロキナーゼ（ＵＫ）（”ＡｃＬｏｓｏ！）はＢ
ｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅから入手した。

３．　　Ｆ　　Ｘ　Ｉ［［　（ＲＦｉｂｒｏｇａｍｍｉ
ｎ）はＢｅｈｒ　ｉｎｇｗｅｒｋｅから入手した。

４．　アンチトロンビンＩｎ（ＡＴＩＩＩ）（”Ｋｙｂ
ｅｒｎｉｎ）はＢｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅから入手した
。

５。　ｒ　−　ヒルジンは、ＥＰ　Ｏ，３１６．６５０
号の方法によって調製した。

６．　　ｒ−ｔ−ＰＡ変異体（Ｎｏ．１）はＥＰ　Ｏ，
２２７，４６２号の方法によって調製した。

７．７オン・ヒ′ノレプラント（ｖＷ）はＤＥ３，９０
４，３５４号の方法によって調製した（ｖＷｌｍｇはｖ
Ｗ抗原１００Ｕに相当する）。

８．　　ＰＰ４１ｉＥＰ　Ｏ，１２３，３０７号の方法
ニよッテ調製した。

９．ｒ−エリスロボイエチン（ＥＰＯ）はＥＰＯ，１２
３，３０７号の方法によって調製した（ＥＰＯｌｍｇは
ＥＰＯ抗原８０，ＯＯＯＵに相当する）。

蛋白質１〜４は蒸留水に溶解した。

蛋白質ｌ〜９はついＣ以下の緩衝液（第１表）に対して
透析した。

ロ，Ｕつ ロ． Ｘ Ｘ 昶１ ｔｔ１ Ｘ Ｘ Ｘ Ｘ Ｘ × Ｘ Ｘ Ｘ ｔ１ 透析後、得られた溶液を滅菌炉過し、使用時まで−２０
℃で凍結した。

実施例　２ 実施例ｌの溶液を解凍し、各１＋ＩＩＱを動物（ラット
またはウサギ）にｓｃおよびｉｍ（大腿二頭筋）投与し
た。ｉｍ投与の場合には、計１ｍ（ｌを４つのタイプに
分けて投与した。

動物は次のように処置した。

試験物質 ｒ−ｔ−ＰＡ ウロキナーゼ Ｆ　　ＸＩ［Ｉ ＡＴｎｌ ｒ−ヒルジン ｒ−ｔ−ＰＡ変異体 ７オン●ビレプラント ＰＰ４ ＥＰＯ 用　　　量 ３．３／８．２報／ｋ９ ５＋ｍ９／ｋｇ １０１１１９／ｋ９ ｌＯ鴫／７２９ １０ｍｅ／ｋｇ １．７ＷＩｇ／ｋｇ ３００Ｕ／ｋｇ １０ｍｙ／ｋｙ ２０００Ｕ／ｋｙ 動物数 ラット　ウサギ （各群あたり） ３ ３ ３ ０、ｌ５、３０，　６０、１２０、１８０、２４０およ
び３４０分後（ｒ−ｔ−ＰＡ変異体）または０１３０、
６０、１２０，　１８０、２４０，　３００，　３６０
、４２０および４５０分後（ｒ−ｔ−ＰＡ，　　ヒノレ
ジン、ウロキナーゼ、Ａ丁１［［、ＦＸＩ［ｒ、７オン
・ビレプラント、ＥＰＯ，　ＰＰ４）　、血液（＋クエ
ンＭ）を採取した。血液サン．プルは直ちに遠心分離し
、得られた加クエン酸血漿は測定時まで−２０’Ｃに凍
結した。試験物質の血漿濃度は次のように測定した。

ｒ−ｔ−ＰＡ　　　　　　　　ＥＬＩＳＡ　　　（Ｂｊ
ｏｐｏｏｌ，　Ｓｗｅｄｅｎ）ウロキナーゼ　　　　　
　　ＥＬＩＳＡ　　　　（Ｂｉｏｐｏｏｌ，　Ｓｗｅｄ
ｅｎ）Ｆ　　ＸＩ［［　　　　　　　　　　　活性試験
　　（Ｂｅｈｒ　ｉｎｇｗｅｒｋｅ）抗トロンビンｍ　
　　　　　　ＥＬＩＳＡ　　　　（Ｂｅｈｒｉｎｇｖｅ
ｒｋｅ）ｒ−ヒノレジンＥＬＩＳＡ　　　　（Ｂｅｈｒ
ｉｎｇｗｅｒｋｅ）ｒ−ｔ−ＰＡ変異体　　　　　　　
ＥＬＩＳＡ　　　　（Ｂｉｏｐｏｏｌ，　Ｓｗｅｄｅｎ
）フォン・ビレプラント　　　ＥＬＩＳＡ　　　　（Ｓ
ｔａｇｏ，　Ｆｒａｎｃｅ）ｐ　ｐ　４　　　　　　　
　ＥＬＩＳＡ　　　（Ｂｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅ）ｒ−
エリスロボイエチン　　ＥＬＩＳＡ　　　　（Ｂｅｈｒ
ｉｎｇｗｅｒｋｅ）測定値は第１図および第２図に示す
ようにグラフで表示した。ついで曲線下面積（ＡＵＧ）
を計算した。この値は生物学的利用性を示すものであり
、他の投与形態との間での比較が可能である。データは
、本発明による溶液の投与が、ウロキナーゼとｒ−ヒル
ジンの場合を徐いて、とくに５０投与の場合に、明らか
に良好な生物学的利用性を保証するものであることを示
している。

本発明による投与形態を用いた場合、ヒルジンおよびウ
ロキナーゼのｓｃおよびｉｍ投与に際して投与部位に生
じる出血は、驚くべきことに、これらの物質を慣用の投
与形態で投与した場合に比べて明らかに低減することが
明らかにされｌこ　。

出血を生じた動物数 ヒルジン ０．０５Ｍ　　ｔｒｉｓ Ｏ．ＩＭ　ＮａＣＱ ３／３　　　　２／３ （１例は出血のために死亡） ヒルジン ０．２Ｍアルギニン ０．２Ｍリジン ｐＨ　７．５ ０／３ ０／３ ウロキナーゼ ０．０５Ｍ　　ｔｒｉｓ Ｏ．ｌＭ　ＮａＣＱ ｐＨ　７．５ ２／３ ２／３ ウロキナ ０．２Ｍアルギニン ０．２Ｍ　リジン ｐＨ　７．５ １／３ ０／３ ラットにおけるＬ−ＰＡの生物学的利用性肇獣決 ｌ ＡＵＧ士偏差（％） ３５８±１０％ ３６±１３％ ３８６±　２％ ５３±１４％ ７５６±　２％ ４２３±　３％ ６６９±１７％ ３８２±１１％ １８４±１８％ ８７±　２％ ６００±４％ ３２０±１２％ ６１０±１０％ ２９０土１１％ ラットにおけるｔ−ＰＡ変異体の生物学的利用性ｎ　　
　　　　ＡＵＣ士偏差（％） ２１１３±　２％ ２　　　　　　　　　　１３±２０％ ２２９５±０．５％ ２１６ｌ±ｌ２％ ２　　　　　　　　１５２４±１３％ ２　　　　　　　　１１１９士１４％ ２　　　　　　　　１４１４±２％ ２　　　　　　　　　１２７７±２１％２　　　　　　
　　　３２±　５％ ２　　　　　　　　３４土１０％ （全動物が投与直後に死亡） （全動物が投与直後に死亡） ２　　　　　　　　３Ｏｆ１２％ ２　　　　　　　　３９±９％ 緩衝液　　投与形態 １１１ｎ ■，抗トロンビン■の生物学的利用性（ウサギ）緩衝液
　　投与形態　　ｎ　　　　　　ＡＵＣ士偏差（％）ｌ
　　　　　ｉｍ　　　　　３　　　　　　　４５０，０
００±２８ｓｃ　　　　　３　　　　　　　５７．００
０±１９３　　　　　ｉｍ　　　　　３　　　　　　　
６０１，０００±１５ｓｃ　　　　　３　　　　　　　
１１６．４００±１８Ｘ■の生物学的利用性（ウサギ） 檄艶歴　　投与形態 ｌ　　　　　　　ｉｍ ＡＵＣ士偏差（％） ２２８．０００±２５ ３５．０００±１２ ６０　，　６００±２３ ６２．０００±２０ ７オン・ビレプラント因子の生物学的利用性（ウサギ）
嫉丸底　　投与形態 ｌ　　　　　　　ｉｍ ＡＵＣ士偏差（％） ２３１ｆｌ４ ６ｌ±２０ ７１５±１６ ｌ２±１４

【図面の簡単な説明】

第１図および第２図は、ｔ−ＰＡ変異体を本発明による
溶液としてまたは慣用の緩衝液中溶液として、それぞれ
ｉｍおよびＳＣ投与した場合の血漿中ｔ−ＰＡ変異体濃
度の経時的変化を示すグラフである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）ポリペプチド含有の皮下または筋肉内投与用医薬組
   成物を製造する方法において、このポリペプチド溶液中
   に少なくとも１種のアミノ酸またはアミノ酸の塩、誘導
   体もしくは類縁体を混和することを特徴とする方法。 ２）アミノ酸はＤ−またはＬ−アミノ酸である請求項１
   記載の方法。 ３）アミノ酸は塩基性アミノ酸である請求項１記載の方
   法。 ４）アミノ酸はリジン、オルニチン、アルギニン、ジア
   ミノピメリン酸、アグマチン、クレアチニン、グアニジ
   ノ酢酸、アセチルオルニチン、シトルリン、アルギニノ
   コハク酸、トラネキサム酸またはε−アミノカプロン酸
   である請求項１記載の方法。 ５）アルギニンおよびリジンを混和する請求項１記載の
   方法。 ６）アミノ酸は０．００１〜１モル／ｌの濃度で混和す
   る請求項１記載の方法。 ７）アミノ酸は０．０１〜０．５モル／ｌの濃度で混和
   する請求項１記載の方法。 ８）蛋白質はｔ−ＰＡ、ｔ−ＰＡ変異体、ヒルジン、ウ
   ロキナーゼ、ＡＴIII、ＦＸIII、ＥＰＯ、フォン・ビル
   プブラント因子またはＰＰ４である請求項１記載の方法
   。 ９）皮下または筋肉内投与に適当なポリペプチドの溶液
   の製造に際してのアミノ酸の使用。