JPH029382A

JPH029382A - 新抗生物質ｉｋｄ−８３４４物質及びその製造法並びにこれを有効成分とする抗腫瘍剤

Info

Publication number: JPH029382A
Application number: JP63159948A
Authority: JP
Inventors: Masahiro Nishii; 西井　正廣
Original assignee: IKEDA MOHANDOU KK
Current assignee: IKEDA MOHANDOU KK
Priority date: 1988-06-28
Filing date: 1988-06-28
Publication date: 1990-01-12

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、新抗生物質及びその製造法並びにこれを有効
成分とする抗腫瘍剤に関するものである。

〔従来の技術〕

これまでに種々の抗腫瘍剤が開発されているが、低毒性
でしかも顕著な抗腫瘍活性を示すものは極めて少ないの
が現状である。

〔発明が解決しようとする課題〕

従って、この発明の目的の１つは、低毒性で著しい抗腫
瘍活性を示し、種々の腫瘍の治療に顕著な効果を発揮し
得る物質を提供することである。

この発明の別の目的は、上記物質の発酵による生産方法
を提供することである。

この発明のもう１つの目的は、有効成分として上記物質
を含有する抗腫瘍剤を提供することである。

〔課題を解決するための手段〕

本発明の目的は、新規抗生物質ＩにＤ−８３４４物質に
より達成される。

以下、本発明の抗腫瘍活性を有するＩＫＤ−８３４４物
質及びその製造法について述べる。

本発明方法において用いる微生物は、新抗生物質ＩＫＤ
−８３４４物質の生産能を有するアルカロミセス属と命
名した新種の放線菌に属する菌種である。

その−例として、アルカロミセス・エスピー・Ｎａ３３
４４　　（Ａｌｃａｌｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ、Ｎ１１８３
．４４　）と呼称される微生物が前記の特性を有する新
菌株で本発明の新抗生物質ＩＫＤ−８３４４物質を有利
に生産するものであり、本発明方法に有効に利用し得る
微生物として挙げられる。

また、前記アルカロミセス・エスピー・Ｎα８３４４の
自然的及び遺伝子工学的方法をも含む人工的変異株はも
ちろん、アルカロミセス属に属する菌種で、後述の新抗
生物質ＩＫＤ−８３４４物質の生産能を有する微生物は
すべて本発明方法において使用することができる。

前記アルカロミセス・エスピー・Ｎα８３４４株（以下
、単にｒ８３４４株」という。）は、本発明者らによっ
て静岡県沼津市で採取した土壌試料中より発見された微
生物であり、通商産業省工業技術院微生物工業技術研究
所に、昭和６３年６月１５日付けで寄託され、その微生
物寄託番号は、「徴工研菌寄第１００６３号」である。

８３４４株の形態学的特徴、培養性状及び生理学的性質８３４４株の形態学的特徴、培養性状及び生理学的性質
の研究は、シェージングとゴツトリーブの方法（Ｓｈｉ
ｒｌｉｎｇ、　Ｂ、　Ｂ、　ａｎｄ　Ｄ、　Ｇｏｔｔｌ
ｉｅｂ　：Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒ　ｃｈａｒａｃｔｅ
ｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓ
ｐｅｃｉｅｓ、　　Ｉｎｔ、　Ｊ、　５ｙｓｔ、　Ｂａ
ｃｔｅｒｉｏｌ、、　１６　　：　　３１３〜３４０．
１９６６）、日本放線菌研究全編「放線菌の同定実験法
」　（日本放線菌研究会事務局、昭和６０年）及び駒形
和男編「微生物の化学分類実験法」　（学会出版センタ
ー　１９８２年）を参考にして行った。

形態学的観察は光学及び電子顕微鏡を用い、改良チロシ
ン寒天培地（ｐＨ７）上で２７℃で１週間生育させた培
養株で行った。

培養性状の観察は、シコクロース・硝酸塩寒天培地、グ
ルコース・アスパラギン寒天培地、グリセリン・アスパ
ラギン寒天培地、スターチ・無機塩寒天培地、チロシン
寒天培地、栄養寒天培地、イースト・麦芽寒天培地、オ
ートミール寒天培地、改良チロシン寒天培地、ベネット
寒天培地及びスターチ・イースト寒天培地の１１種類を
用いて行った。各々の培地についてｐＨ７及び１％炭酸
ナトリウムを加えたＰｌｌｌｏの２条件下で２７℃、３
週間培養して検討した。この研究で使用した色の標示方
法は、ＪＩＳ　　Ｚ　　８７２１準拠〔標準色標、第７
版（日本規格協会）〕に基づいた。

細胞壁組成の分析は長谷用と清野の方法（放線菌の同定
実験法、４７〜６７、昭和６０年）を引用した。菌体は
酵母エキス・グルコース培地を用い、ｐＨ７あるいはｐ
Ｈ１０の条件で２７℃、３日間培養して得た。

炭素源の利用性はブリドハム及びゴツトリーブの方法（
Ｐｒｉｄｏｈａｍ、　Ｔ、　Ｇ、　ａｎｄ　Ｄ、　Ｇｏ
ＬＬｌｉｅｂ：　Ｔｈｅｕｔ口１ｚａｔｉｏｎ　　ｏｆ
　　ｃａｒｂｏｎ　　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　　ｂｙ　　
ｓｏｍｅＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｊａｌｅｓ　　ａｓ　ａ
ｎ　ａｉｄ　ｆｏｒ　ｓｐｅｃｉｅｓｄｅｔｅｒｍｉｎ
ａｔｉｏｎ、Ｊ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、、　　５　６、
１０７〜１ｉ４．１９４８）に従って行った。

生育温度の検討はｐＨ７及び１％炭酸す）　ＩＪウムを
加えたｐＨｌ０のベネット斜面寒天培地で検討した。生
育ｐＨの検討はベネット及びスターチ・イースト斜面寒
天培地を用いて、２７℃で培養することにより検討した
。ゼラチン液化はグルコース・ペプトン・ゼラチン培地
、単純ゼラチン培地及びイーｘトー麦芽・ゼラチン培ｍ
（ｐＨ７、ｐＨｌｏ）で２０℃、２７℃で培養して調べ
た。澱粉の加水分解は澱粉・無機塩寒天培地上で観察し
た。ミルクのペプトン化は脱脂牛乳培地中（ｐｔ１７）
２７℃、３５℃で観察した。メラニン色素の産生はチロ
シン寒天培地、改良チロシン寒天培地及びトリプトン・
酵母エキスブロス（ｐ！（７、ｐ）１１０　）にて観察
した。

〔Ｉ〕形態的特徴８３４４株は気中菌糸を形成し、成熟した胞子鎖は、直
線状または波状（Ｒｅｃｔｉｆｌｅｘｉｂｉｌｅｓ　）
で２０個以上の胞子の長い連鎖が認められた。胞子は長
円形で、その大きさは０．５〜０．７μＸ０．７μ×１
．Ωμ位であり、またその表面は平滑であった。

［Ｌ］培養性状８３４４株は、ｐＨ７及びｐＨ１０のいずれの条件下で
も生育し、生育状況はほぼ同様であったが、気菌糸の着
生はｐＨｌ０の方がかなり良かった。但し、改良チロシ
ン寒天培地上ではｐＨ７の条件下で豊富な気閑糸の着生
が見られた。また、可溶性色素はｐＨ７のチロシン及び
改良チロシン培地上でのみ若干認められた。各培地での
観察結果は表−１のようであった。

表−１８３４４株の培養性状９７２ノ９／１ンシュクロース・硝酸塩寒天培地グルコース・アスパラギン寒天培地グリセリン・アスパラギン寒天培地スターチ・無機塩寒天培地チロシン寒天培地６：栄養寒天培地７：イースト・麦芽寒天培地８：オートミール寒天培地９：改良チロシン寒天培地１０：ベネット寒天培地１１：スターチ・イースト寒天培地Ｇ：生育、へＭ：気菌糸の着生及び色、Ｒ：雇主菌糸（
裏面）の色、ＳＰ：可溶性色素表中の（）内は、ＪＩＳ　　Ｚ　　８７２１？＄拠〔ａ
準色標、第７版（日本規格協会）〕に基づいた色の表示
方法を表す。

［［［Ｅ細胞壁の組成細胞壁成分としてＬＬ型及びメソ型の２．６−ジアミノ
ピメリン酸の存在が認められた。

メソ型ジアミノピメリン酸がｐＨ７、ｐＨ１Ｏいずれの
培養でも認められたが、特に１１８１０で培養した場合
にその量が多くなる傾向であり、ＬＬ型の約１／２〜２
／３であった。

また、細胞糖としてはグルコースとリボースの存在が認
められた。

ＣＩＶ’ｌ生理学的性質８３４４株はＩ］Ｈ７、ρ）１１０のいずれの条件にお
いても１５℃から３５℃で生育するが、１０℃及び４０
℃では生育しなかった。

生育ｐＨの範囲は、５．５以下ではほとんど生育せず、
６〜１Ｏ１５で生育し、１１では生育しなかった。また
、澱粉を加水分解し、ミルクを凝固ペプトン化した。

ゼラチンの液化は培地及びｐＨによって異なった結果が
得られたが、イースト・麦芽ゼラチン培地においてはｐ
ｆ（７、ｐｔＨＯともわずかに液化が見られた。また、
メラニン色素の産生は認められなかった。

利用し得る炭素源はＬ−アラビノース、Ｄ−キシロース
、Ｄ−グルコース、Ｄ−フラクトース及びＤ−マンニト
ールであった。

生理学的性質を表−２に、炭素源の利用性を表−３にま
とめた。

表−２８３４４株の生理学的性質表−３８３４４株の炭素源の利用性 ■ラフィノースのＤ７ンニトール　　ｌ　　　　　＋＋七＋・・かなり
利用する、＋・・利用する、−・・利用しない。

Ｌ　Ｖ　］抗生物質生産能８３４４株はＩＫＤ−８３４４物質の他、アンチマイシ
ン系抗生物質（Ｈａｒａｄａ、　Ｙ、、に、　［ｌｚｕ
。

ａｎｄ　　＾、　＾ｓａ＋　　：　　Ｊ、　　＾ｎｔｉ
ｂｉｏｔ、、　　１１Δ、　　３２．　１９５８゜Ｌｉ
ｕ、　　Ｗ、　　ａｎｄ　Ｆ、　　Ｍ、Ｓｔｒｏｎｇ　
：　Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓａｃ、。

８１．４３８７．１９５９）を生産する。

８３４４株は上記の諸性質から、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓ属に類似している。しかし、細胞壁成分としてＬＬ
型に加えてメソ型ジアミノピメリン酸も有することから
、ＬＬ型のみを有することを特徴とするＳｔｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓ属には分類されない。

細胞壁中にＬ　Ｌ型及びメソ型ジアミノピメリン酸を有
する放線菌の属としては、大村らが発見したＫｉｊａｓ
ａｔｏｓｐｏｒｉａ＠だけが知られている。このＫｉｔ
ａｓａｔＯｓｐｏｒ＋ａ属には、Ｋ、５ｅｔａｌｈａ　
（Ｋ、５ｅｔａｅ）（Ｋ已ａｓａｔｏｓｐｏｒｉａ、　
　　ａ　　ｎｅｗ　　ｇｅｎｕｓ　　ｏｆ　　ｔｈｅ　
　ｏｒｄｅｒＡｃｔ　＋ｎｏｍｙｃｅｔａ　ｌｅｓ、Ｊ
、＾ｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、３　５　　、　１０１３〜
１０１９．１９８２）と　Ｋ、　ｐｈｏｓａｌａｃ＋ｎ
ｅａ及びに９ｇｒｉｓｅｏｌａ　（Ｔｗｏ　ｎｅｗ　５
ｐｅｃｉｅｓ　ｏｒ　ｔｈｅ　ｇｅｎｕｓＫｉｔａｓａ
ｔｏｓｐｏｒｉａ、　Ｋ＋ｔａｓａｔｏｓｐｏｒｉａ　
ｐｈｏｓａｌａｃｉｎｅａｓｐ、ｎｏｖ、　ａｎｄに１
ｔａｓａｔｏａｐｏｒｉａ　ｇｒ＋５ｅｏｌａ　ｓｐ、
ｎｏｖｌＪ、　　Ｇｅｎｅｒａｌ　　Ａｐｐｌ、　　！
Ｊｉｃｒｏｂｉｏ１．，３　０　　、　３７７〜３８７
．１９８４）の３種が現在までに発見されている。しか
し、これらの菌はいずれも細胞糖としてガラクトースを
有していること、生育ｐＨの範囲が９以下であること、
炭素源としてＤ−マンニトールを利用しないこと及び抗
生物質の生産能の点で明らかに８３４４株と異なる。

従って、８３４４株はＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属ある
いはＫｉｔａｓａｔｏｓｐｏｒｉａ属のいずれにも分類
されない。

一方、好アルカリ性あるいは耐アルカリ性の放線菌につ
いては三上らの報告（Ｄｉａｍｉｎｏｐｉｍｅｌ　１ｃ
ａｃ＋ｄ　ｐｒｏＣ＋ｌｅｓ　ｏｒ　ａｌｋａｌｏｐｈ
ｉｌｉｃ　ａｎｄ　ａｌｋａｌｉｎｅ−ｒｅｓｉｓｔａ
ｎｔ　５ｔｒａｉｎｓ　ｏｆ　Ａｃｔｉｏｎｏｍｙｃｅ
ｔｅｓ、　Ｊ、Ｇｅｎ。

Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、　　１２８．１７０９〜１７１
２．１９８２）がある。彼らは従来Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙ
ｃｅｓ属に分類されていた３種の放線菌をアルカリ性で
培養するとその菌体中にメソジアミノピメリン酸が含ま
れることを報告しているが、中性培地で培養した場合に
ついては未記載であり、また属の特定にまでは至ってい
ない。

従って、８３４４株は既知のいずれの放線菌の属にも分
類不能であり、新しい属に属するものと考えられる。

８３４４株の特徴はｐＨ１０，５でも生育できる好アル
カリ性あるいは耐アルカリ性菌であり、細胞壁成分とし
てＬＬ型及びメソ型ジアミノピメリン酸を有し、特徴的
な糖を持たないことにある。

このような性質から、８３４４株の属する属をアルカロ
ミセス（＾Ｉｃａｌｏｍｙｃｅｓ）属と命名した。

ＩＫＤ−８３４４物質の産生本発明のＩＫＤ−８３４４物質は、アルカロミセス属に
属するＩＫＤ−８３４４物質生産菌株（例えば、＾Ｉｃ
ａｌｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ、　Ｎα８３４４　）を、好気
的条件下に利用し得る炭素源及び窒素源を含有する栄養
培地中で生育させる（例えば、振盪培養、深部培養等）
ことにより生産させる。工業的に有利に培養するために
は、前記生産菌の胞子Ｕ濁液または培養液を培地に接種
し、通気撹拌培養を行えばよい。

培地の栄養源としては特に限定されることはなく、微生
物の培養に通常用いられる炭素源、窒素源その他を培地
中に含有させることができる。炭素源としては、澱粉、
デキストリン、グルコース、グリセリン、マンニトール
等が、また窒素源としては、酵母エキス、ペプトン、大
豆粉、肉エキス、コーンステイープリカー、麦芽、綿実
粕、乾燥酵母、米ぬか、ふすま等、並びにアンモニウム
塩、硝酸塩、尿素、アミノ酸等の有機または無機の窒素
化合物が用いられる。その他、無機塩類、例えば、食塩
、燐酸塩類、カリウム、カルシウム、亜鉛、マンガン、
コバルト、鉄などの金属塩類を適宜に添加してもよく、
必要に応じて消泡剤として、液体パラフィン、動物油、
植物油、鉱油またはシリコーン等を添加してもよい。ま
た、培地のｐＨをアルカリ′生にする場合には炭酸ナト
リウム、炭酸水素ナトリウム、セスキ炭酸ナトリウム、
リン酸３−ナトリウム等を加える。さらには、脂肪酸、
または脂肪酸のエステルを加えることもできる。

培養ｐＨ１培膠温度、培養時間等の条件は使用菌の発育
に適し、しかもＩＫＤ−８３４４物質の生産が最高とな
るような条件が選ばれる。例えば、培養のｐＨは６〜１
１がよく、培養の温度は１５〜３５℃がよく、好ましく
は２０〜３０℃がよい。

培養時間は２４〜１６８時間、好ましくは４８〜９６時
間がよい。しかし、これらの培養組成物、培地の水素イ
オン濃度、培養温度、撹拌等の培養条件は使用する菌株
の種類や、外部の条件などに応じて好ましい結果が得ら
れるように適宜調節されるべきであることは言うまでも
ない。このようにして得られる培養液からＩＫＤ−８３
４４物質を回収するには、抗生物質の回収及び精製に通
常使用されている種々の方法（例えば、適当な溶媒また
はそのような溶媒の混合物を用いての溶媒抽出法、クロ
マトグラフィー、適当な溶媒またはそのような溶媒の混
合物からの再結晶法）に何するっ具体的には［ＫＤ−８
３４４物質は培養濾液及び菌体の両方に存在するので、
培養濾液中からは水不混和性の溶媒、例えば、酢酸エチ
ル、クロロホルム、エーテル等の溶媒、菌体からは酢酸
エチル、メタノール、アセトン等の適当な溶媒またはそ
れらの混合物を用いて抽出することにより回収すること
ができる。菌体を分離せずに培養液をそのまま上記抽出
操作に付すこともできる。向流分配法も抽出の範鴫に入
れることができる。

抽出物を通常の方法により処理し、ＩＫＤ−８３４４物
質を得る。例えば、抽出物を減圧濃縮し、通常の精製方
法、例えば、クロマトグラフィーにかけあるいは適当な
溶媒またはそれらの混合物からの再結晶により精製する
。

ＩＫＤ−８３４４物質を含む抽出物をクロロホルム等の
溶媒に溶解し、例えば、シリカゲルカラムクロマトグラ
フィーにかけ、クロロホルム、メタノール等の適当な溶
媒またはそれらの混合物を用いて溶出することにより分
離できる。このようにして得たＩＫＤ−８３４４物質は
、通常の方法（例えば、セファデックスＬＨ−２０等を
用いたゲル濾過法、薄層クロマトグラフィー、液体クロ
マトグラフィー）によりさらに精製することができ、水
、メタノール、アセトン等を用いた再結晶により純粋な
物質として得ることができる。

ＩＫＤ−８３４４物質の物理化学的性質１）　形状及び
色：白色粉末。

ンり分子量（１＝”　Ａ　Ｂ　−Ｍ　Ｓ　）　　：ｍ／
　ｚ　　８４５　　（Ｍ＋Ｈ）” ｍ／　ｚ　　８６７　　（Ｍ十Ｎａ）”３）分子式：％式％：：）：易溶：酢酸エチル、メタノール、エーテル可溶：ヘキサ
ン、石油エーテル不溶：水８）　呈色反応：陽性：１０％硫酸／メタノール、ヨード蒸気陰性；エー
ルリッヒ反応、オルシノール反応及びニンヒドリン反応９）　紫外部吸収スペクトル：特徴的な吸収なし１０）赤外吸収スペクトル：（ＫＢｒ錠剤中の主な極大値）２９９０．２９５０．２９００．１７４０．１７１０．
１４６０Ｓ１４１５．１３８０゜１３３５．１３００．
１２７０．１２３０．１１８０．１１４０．１０８０．
１０００゜９７０．９４０．９００．８１５　　ｃｍ−
’１１）薄層クロマトグラフィー（Ｒｆ値）クロロホル
ム：メタノール　ｌＯ：１　　０．２５酢酸エチル：メ
タノール：ノロアンモニア１０：１：０．１　　０．２
７酢酸エチル；メタノール：酢酸２０：１コ０．１　　　　０．５１１２＞　１３（ｊ＊磁気共鳴スペクトル（ｃＤ［！３）
δ（Ｐｐｍ）：　１０．９．１３．８．１４．４．２１
．３．２９．５．２９．７．３０．８．３０．９．３２
．２．３４．ｏ、３６．３．４１．２．４５．６．４５
．７．５３．４．７２，３．７４．８．７５．０．７５
．３．７９．６．８０．１．８ｏ、６．１７５．２．２
１２．０ＩＫＤ−８３４４物質の分子式はＣ＊ａＨｔｓｏ　１２
であり、１３Ｃ核磁気共鳴スペクトルで２４個の炭素の
みが観察されることより、ＩＫＤ−８３４４物質は二量
体であると推定される。

ＩＫＤ−８３４４物質の生物学的性質本発明のＩＫＤ−８３４４物質は、次に示すように著し
い抗腫瘍活性と抗菌活性を有しており、医薬として有用
な化合物である。

１〉　抗菌スペクトルペーパーディスク法で検討したｒＫＤ−８３４４物質１
０００μｇ／−の濃度での阻止円の直径（叩）を以下に
示す。なお、細菌類及びカンジダ菌は３７℃、２４時間
培養後、白磨閑は２７℃、４８時間培養後に判定した。

表−４１ＫＯ−８３４４物質の抗菌スペクトル供　　　
与　　　閑　　　　１阻止円直径ＩＫＤ−８３４４物質
はカンジダ閑に対して抗菌活性を示した。

２）　マウス白血病細胞Ｌ５１７８Ｙ細胞に対する増殖
阻害活性ＩＫＤ−８３４４物質を、培養液〔馬血清１０％添加）
４”／シャー培地（Ｆｉｓｃｈｅｒｓ　ｍｅｄｉｕｍ）
　（日永製薬オ）〕に１０００μｇ／−になるように懸
濁し、さらに培養液で順次希釈して０．００２μｇ／−
の検液を調製した。これを最高濃度として、２倍、４倍
希釈液をつくり、その１ｒｎｌずつを１ｒｎｌ中にＬ５
１７８Ｙ細胞を２Ｘ１０’個含む培養液１−に加え、３
７℃、７２時間直立静止培養した。

培養終了後、培養液中の細胞数を、コールタ−カウンタ
ー（ＺＢＩ型）を用いて測定し、検体群（Ｎ＝６）と対
照群（Ｎ　＝　６　）の細胞数の平均値の比より増殖阻
害率を求めた。Ｉ　Ｃｓ。は各濃度における阻害率から
対数確立紙を用いて求めた。

表−５ＩＫＯ−８３４４物質のマウス白血病細胞Ｌ５１７８Ｙ
細胞に対する増殖阻害活性した。検体は０゜５％ＣＭＣ
（カルボキシメチルセルロース）生理食塩水に懸濁した
。対照群には０．５％ＣＭＣ生理食塩水を投与した。検
体投与群、対照群とも１群６匹とした。Ｐ３８８細胞接
種後、３０日間動物を観察し、検体投与群（Ｔ）と対照
群（］の生存日数の中間値（＋ｎｅｄｉａｎ　ｓｕｒｖ
ｉｖａｌｔｉｍｅ：ＭＳＴ）から、次式に従って延命率
（ＩＬＳ）を求めた。

この結果より、［Ｃｓ。は０．０００５４　μｇ／ｍｌ
と−一り、ＩＫＤ−８３４４物質の腫瘍細胞に対する増
殖阻害活性は著しく強いものであった。

３）Ｐ３８８担ガンマウスに対する延命効果ＢＤＦ、雄
性マウス（平均体重２０ｇ）の腹腔内に、ＤＢＡ／２マ
ウスで継代培養したＰ３８８白血病細胞ｌＸｌ０’個を
接種し、１日後より、１日１回連続９日間またはｌ、５
．９日後に、冬用１のＩＫＤ−８３４４物質をマウスに
腹腔内投与表−６に示したようにＩＫＤ−８３４４物質
は、０、２５　ｍｇ／ｋｇ以上の連日９日間投与、及び
３、Ｏｍｇ／ｋｇの間欠３回投与で、Ｐ３８８白血病に
対して優れた延命効果を示した。

表−６１ＫＤ−８３４４物質のＰ３８８白血病に対する
延命効果使用動物：　　ＢＤＦ、マウス、雄性腫瘍の接種部位：　腹腔内（ＩＸＩＯ’個１０．１ｍ！
／マウス）検体の投与部位；　腹腔内（０，２ｒｎ１／マウス）１
群の動物数６匹８３４４本：ＩＫＤ−８３４４物質４）急性毒性ＢＤＦ、７ウスに復腔内投与で、５　Ｂ／ｋｇ　１回投
与、又は２　ｍｇ／ｋｇ　１日１回連日５日間投与して
も死亡例は認められなかった。

以上のように本発明のＩＫＤ−８３４４物質は、潰れた
抗＠瘍活性を示し、抗腫瘍剤として有用である。以下、
ＩＫＤ−８３４４物質を有効成分とする抗腫瘍剤につい
て述べる。

ＩＫＤ−８３４４物質の治療的利用本発明の抗腫瘍剤は、経口及び非経口投与のいずれも使
用可能であり、経口投与する場合は、軟・硬カプセル剤
または錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、ＩｉＡ溶剤、懸濁
剤として使用される。非経口投与する場合は、注射剤、
点滴剤、平削、乳剤、懸濁剤として、また軟膏剤、クリ
ーム剤、液剤、バッグ剤、テープ剤として、粘膜または
経皮吸収が維持できるような剤型で投与され得る。

本発明の有効成分の製剤化は、医薬的に許容し得る界面
活性剤、賦形剤、滑沢剤、佐剤及びその他を用いて適宜
行うことができ、固体、半固体、液体等の製剤を得るこ
とができる。さらに、安定化剤、着色剤及び香料を使用
してもよい。活性成分は、製剤中に、疾病の治療または
予防に十分な量で含有されている。

この製剤を人間に使用する場合、静脈内、筋肉内、経口
または経皮投与により使用することが望ましい。投与量
は、対象腫瘍を有効に治療するに十分な債であり、腫瘍
の症状、投与経路、剤型などによって左右されるが、一
般に、経口投与の場合、１日当たり、約０．０００１〜
２ｍｇ／ｋｇ体重の範囲で、その上限は好ましくは約０
．５　ｍｇ／ｋｇ体重シ？度であり、非経口投与の場合
、その上限は約１ｍｇ７ｋｇ体型埋度であり、好ましく
は約０．２　ｍｇ／ｋｇ体頃程度体重程度以下の実施例及び製剤例は単に本発明の例示目的に提供
され、その範囲を限定するものではない。

実１ち例グルコース２．０ｇ、可溶性数分１．Ｏｇ、大豆粉ＬＪ
、　５ｇ、屹繰酵母０．４ｇ、食塩０．２　ｇ　、牛肉
エキス０．１ｇ及びリン酸二カリウムＯ，ＯＯ５ｇを含
む液体培地（９０ｍＩ！、ｐＨ８，５）を５０〇−容坂
ロフラスコに入れ、１２０℃で２０分間高圧滅菌した。

滅菌後、別に高圧滅菌した１０％炭酸ナトリウム水溶液
を１０ｄ加え、最終ｐＨを約ｌＯとした。この培地に前
記８３４４株［＠工研菌寄第１００６３号」の斜面培養
物の１白金耳を接種し、振幅７　ｃ＋ｎ、回転数１４　
Ｏｒｐｍの往復式振盪機上２８℃で９６時間振盪培養し
た。この培養液１−を、前記培地１００−を含む坂ロフ
ラスコ４０本に連醸し、２８℃で７２時間培養した。

得られた培養液は毎分９５００回転で１０分間遠心し、
培養上清と菌体に分け、培養上清は半量の酢酸エチルで
３回抽出した。菌体は９５％含水アセトンで抽出後、濃
縮し、同様に酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル抽出液
を合し、濃縮乾固後、得られた油状物質をシリカゲル（
１５０ｇ）を用いたカラムクロマトグラフィーにかけた
。あらかシメクロロホルム＋５ｏｏｙ、ついで／／四ロ
ホ７１１、：メタノール混液（３０：　ｌ）１５００ｍ
ｌ！で洗浄したカラムに上記油状物質をかけ、クロロホ
ルム：メタノール混液（１０：１）で溶出した。活性区
分を濃縮し、粗物質（３０７ｍｇ）を得た。

この粗物質を少量のメタノールに溶かし、メタノールで
調製したセファデックスＬＨ−２０のカラム（２，８ｃ
ｍＸ　８０ｃｍ）にかけ、メタノールで溶出した。溶出
液は８ｄずつ分取し、活性分画３８から４５までを隼め
、濃縮乾固し、ここにヘキサンを加えて抽出した。ヘキ
サン可溶分をア七トン２ｒｎｌに溶かし、ｏ、　ａ　ｏ
　ｉ規定塩酸２ｍｌを加えて、５℃で３０分間放置して
生じた沈澱をガラスフィルターで濾取し、冷水で洗浄後
乾燥して、ＩＫＤ８３４４物質の精製粉末５４．９　ｍ
ｇを得た。製剤例１　（注射、点滴剤）ＩＫＤ−８３４４物質５０ｍｇを含有すルヨうに粉末ブ
ドウ糖５ｇを加えてバイアルに無菌的に分配し、密封し
たうえ、窒素、ヘリウム等の不活性ガスを封入して冷暗
所に保存する。使用前に０゜８５％生理的食塩水１００
−を添加して静脈内注射剤とし、１日１〜１０（ｌｔ７
！を症状に応じて静脈内注射または点滴で投与する。

製剤例２（錠剤）以下の灰分組成で大入用錠剤１００個を調製した。

ＡＩＩＫＤ−８３４４物ｌＲ２，０ｇ乳　　　　　　　　　　　　　糖　　　　　　　　１７
．９４ｇヒドロキシプロピルセルロース　　０．０６ｇ
ステアリン酸マグネシウム　　　　０．２ｇＣＢ）酢酸フタル酸セルロース　　　　　０．６ｇヒドロキシ
プロピルメチル　　　　０．６　　　ｇセルロースフタ
レート〔Ａ〕の成分をとり、よく混合し、これを直接加圧する
か、またはよく練合した後、押し出し型製粒機のスクリ
ーンを通して頚粒成形を行い、十分乾燥後、加圧して錠
剤を調製した。

更に、必要に応じて成形した錠剤によく溶解したＣＢ）
の基剤を被覆して腸溶性錠剤とする。

製剤例３　（カプセル剤）以下の成分で大人用カプセル剤１００個を調製した。

［Ａ］ＩＫＤ−８３４４物質　　　　　　２．Ｏｇ乳　　　　
　　　　　　　　　糖　　　　　　　　１０．４６ｇヒ
ドロキシプロピルセルロース　　０．０４ｇ〔Ｂ〕酢酸フタル酸セルロース　　　　　１．０ｇヒドロキシ
プロピルメチル　　　　１．０ｇセルロースフタレート上記の〔Ａ）成分をとり、よく混合した後、常法に従っ
て粒状に成形し、これをよく乾燥して篩別し、カプセル
用に適した顆粒剤とし、これをカプセルに充填してカプ
セル剤を調製した。更に必要に応じ、このＩ￥粒剤を浮
遊流動させながら溶解したＣＢ）の基剤を被覆し、腸溶
性の顆粒剤として、これをカプセルに充填して腸溶性カ
プセル剤とする。

〔発明の効果〕

本発明の新規抗生物質ＩＫＤ−８３４４物質は低毒性で
、すぐれた抗腫瘍活性を有している。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ＩＫＤ−８３４４物質の赤外線吸収スペクト
ルを示す図面であり、第２図は、ＩＫＤ−８３４４物質
の　１Ｈ核磁気共鳴スペクトルを示す図面であり、第３
図はｒＫＤ−８３４４物質の３Ｃ核磁気共鳴スペクトル
を示す図面である。１、＄件の表示昭和６３年特許願第１５９９４８号・・・・・・達成される。”を次のとおり訂正する。「　本発明の目的は、下記の式で表される新規抗生物質
ＩＫＤ−８３４４物質により達成される。３、補正をする者事件との関係株式会社４、代７、補正の内容３゜４、同第２６頁４行の“推定される。”を「推定され、更に
検討の結果、前述の構造式を有することが明らかとなっ
た。」と訂正する。同第３４頁１１行〜１５行の“あらかじめ・・・・・・
溶出した。′を次のとおり訂正する。「カラムに上記油状物質をかけ、クロロホルム！５００
ｄ、ついでクロロホルム：メタノール混液（３０：１）
１５００−で洗浄後、クロロホルム：メタノール混液（
１０：ｌ）で溶出した。」特許請求の範囲（１）　　下記の式で表される抗生物質ＩＫＤ−８３４
４物質。（２）　　アルカロミセス（Ａｌｃａｌｏｍｙｃｅｓ）
属に属する抗生物質ＩＫＤ−８３４４物質生産菌を培養
し、その培養物から抗生物質Ｉ　Ｋ　Ｄ　−８３４４物
質を分離、採取することを特徴とする抗生物質ＩＫＤ−
８３４４物質の製造法。（３）　　アルカロミセス・エスピー・Ｎα８３４４（
Ａｌｃａｌｏｍｙｃａｓ　ｓｐ、　Ｎα８３４４）。（４）　　抗生物質ＩＫＤ−８３４４物質を有効成分と
して含有することを特徴とする抗腫瘍剤。 −／　／

Claims

【特許請求の範囲】

（１）下記の理化学的性質を有することを特徴とする新
抗生物質ＩＫＤ−８３４４物質。（イ）形状及び色：白色粉末。（ロ）分子量（ＦＡＢ−ＭＳ）：ｍ／ｚ８４５（Ｍ＋Ｈ）＾＋ｍ／ｚ８６７（Ｍ＋Ｎａ）＾＋（ハ）分子式：Ｃ＿４＿８Ｈ＿７＿６Ｏ＿１＿２（ニ）元素分析：炭素：６８．５２％水素：９．０８％窒素：０％（ホ）融点：１３３〜１３６℃ （ヘ）比旋光度：〔α〕＾１＾７＿Ｄ＝＋４０．２°（ｃ＝１．０、メタ
ノール）（ト）溶解性：易溶：酢酸エチル、メタノール、エーテル可溶：ヘキサン、石油エーテル不溶：水（チ）呈色反応：陽性：１０％硫酸／メタノール、ヨード蒸気陰性：エー
ルリッヒ反応、オルシノール反応及びニンヒドリン反応（リ）赤外部吸収スペクトル：（ＫＢｒ錠剤中の主な極大値）２９９０、２９５０、２９００、１７４０、１７１０、
１４６０、１４１５、１３８０、１３３５、１３００、
１２７０、１２３０、１１８０、１１４０、１０８０、
１０００、９７０、９４０、９００、８１５ｃｍ＾−＾
１（ヌ）＾１＾３Ｃ核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ＿
３）δ（ｐｐｍ）：１０．９、１３．８、１４．４、２
１．３、２９．５、２９．７、３０．８、３０．９、３
２．２、３４．０、３６．３、４１．２、４５．６、４
５．７、５３．４、７２．３、７４．８、７５．０、７
５．３、７９．６、８０．１、８０．６、１７５．２、
２１２．０
（２）アルカロミセス（Ａｌｃａｌｏｍｙｃｅｓ）属に
属する抗生物質ＩＫＤ−８３４４物質生産菌を培養し、
その培養物から新抗生物質ＩＫＤ−８３４４物質を分離
、採取することを特徴とする新抗生物質ＩＫＤ−８３４
４物質の製造法。
（３）アルカロミセス・エスピー・Ｎｏ．８３４４（Ａ
ｌｃａｌｏｍｙｃｅｓｓｐ．Ｎｏ．８３４４）。
（４）抗生物質ＩＫＤ−８３４４物質を有効成分として
含有することを特徴とする抗腫瘍剤。