JPH0266460A - 抗体を測定する方法および試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、抗体を、液相中に溶けて存在する３種以上の
受容体Ｒ１＋　Ｒ２＋　　Ｒ３（ただしＲｏは測定すべ
き抗体と結合可能であり、Ｒ２は固相との結合を媒介し
、Ｒ３は標識を担持する〕と共にインキュベートし、生
じた複合体を固相と結合させて溶液から分離し、これら
の相の１方にある標識を測定することにより抗体を測定
する方法ならびにこれに適した試薬に関する。

〔従来の技術〕

抗体は、Ｂリンパ球および血しようが、対応する抗原と
接触することにより産生し、抗体形成を引き起こす抗原
と特異的に対向しているタンパク質分子である。生体は
一方で、体外分子、たとえば外来の卵白、細菌またはビ
ールスの侵入に対する応答としての抗体、他方で自己免
疫疾患が存在する場合の自己細胞に対する抗体を産生ず
る。従って、特異的抗体の検定により、疾患の進行また
は自己免疫疾患の存在を診断することができる。

抗体は、免疫検定法の原理により、詳細に検定すること
ができる。これについて競合による放射線免疫検定法、
酵素免疫検定法ならびにサンドインチ法のような一連の
変法が公知である。

多様な変法の概括は、たとえば文献（八、Ｈ，Ｗ、Ｍ。

５ｃｈｕｕｒｓおよびＢ、に、ｖａｎ　Ｗｅｅｍｅｎ　
ｉｎ　Ｄｔ、　Ｇｅｓ、ｆ。

Ｋ１１ｎ、　Ｃｈｅｍｉｅ　ｓ、ｖ、−Ｍｉｔｔｅｉｌ
ｕｎｇｅｎ　１／７９　）に記載されている。この場合
、競合法を除いた全ての変法において、測定すべき抗体
と特異的に反応する物質を固相と結合させなければなら
ない。この物質は、測定すべき抗体と特異的に反応する
抗原またはハプテンであるか、または測定すべき抗体に
対向する抗体、たとえばクラス特異的抗体であってもよ
い。ここで記載された方法の欠点は、各テストに対して
特異的固相を提供しなければならない点である。

さらに、前記文献には、測定すべき抗体に由来する抗体
クラスに対向する抗体を固相に固定しているテスト方法
が記載されている。この固相の存在下に、測定すべき抗
体を含有する試料溶液を、これに対する特異的抗原なら
びに同様に抗原と結合可能な標識抗体と一緒にインキュ
ベートする。この場合、測定すべき抗体と、添加した標
識抗体とは抗原と結合しようとして競合する。均一相中
であらかじめ製造された、なお遊離抗体価を有する免疫
複合体は、固相と結合した抗体に固定され、検定される
。固相と結合する速度は、液相中で免疫複合体を形成す
る速度よシ明らかに遅いため、固相結合は競合原理によ
らず、滴定反応として進行する。しかしこの方法は、試
料溶液中に少量存在する抗体の検定のために十分な感度
を有していない。この方法を実施するために必要な特異
的抗体の量は極めて多い。

〔発明が解決しようとする課題〕

従って、本発明の課題は、簡単な方法で抗体を敏感に検
出し、その際抗体の必要量を減少させることができるよ
うな方法を提供することであった。

〔課題を解決するための手段〕

この課題は、抗体を免疫検定法の原理により、液相中に
溶けて存在する、３種以上の受容体Ｒ１＋　　Ｒ２＋　
Ｒ３（ただしＲ□は測定すべき抗体と特異的に結合可能
な受容体であυ、Ｒ２は固相との結合を媒介し、Ｒ３は
標識を担持する〕と共にインキュベートし、生じた複合
体な固相と結合させて溶液から分離し、これらの相の一
方にある標識を測定することにより抗体を測定するため
の方法において、受容体Ｒ２としてＲ１と特異的に結合
可能な受容体と、特異的に結合可能な物質Ｓ１とからな
る抱合体を使用し、Ｒ３としてＲ１と特異的に結合可能
な受容体と標識との抱合体を使用し、生じた複合体を、
Ｓｌと特異的に結合可能な成分に結合させることにより
固相上に固定させることを特徴とする抗体の測定方法に
よシ解決される。

意相外に、本発明による方法を用いて、この感度を著し
く改善することができる。さらに、この方法を実施する
ためには、極少量の抗体を必要とするにすぎない。

本発明の方法において、測定すべき抗体を含有する試料
を、全て液相中に溶けて存在する３種の受容体と共にイ
ンキュベートする。この場合、受容体Ｒ０は、測定すべ
き抗体と特異的に結合可能な受容体であ）、抗原または
抗イデオタイプ抗体であってもよい。受容体Ｒ２は、Ｒ
１と特異的に結合可能であり、固相との結合を媒介する
。このためこの受容体は相応して誘導化されている。受
容体Ｒ３は同様にＲ１と特異的に結合可能であり、さら
に標識を担持している。

試料溶液中で受容体Ｒ２と受容体Ｒ３は測定すべき抗体
と一緒になって、受容体Ｒ□と結合しようとして競合す
る。試料溶液中に抗体が多ければ多いほど、よシ多くの
抗体がＲ１と結合し、受容体Ｒ２とＲ３のための結合箇
所はよシ少なくなる。抗原を示すエピトープの数に依存
して、Ｒ１とＲ２Ｆ　Ｒ３および／または測定すべき抗
体との複合体が形成される。１つ以上の受容体Ｒ２を含
有する複合体のみが固相と結合でき、１つ以上の受容体
Ｒ３と結合している複合体のみが検定反応に応答する。

受容体Ｒ１と、受容体Ｒ２と、ならびに場合によｌ）　
：Ｒ１３と、および／または測定すべき抗体とから形成
された複合体は、受容体Ｒ２中で結合した特異的に結合
可能な物質Ｓｌを介して固相と結合する。この場合、結
合部は、固相に固定されておシかつＳユと結合可能な成
分を介して直接性なわれるかまたは同相との結合を媒介
する成分を介して行なわれる。固相と液相とを分けた後
に、標識は双方の相で測定することができ、この場合、
結合した標識が多く測定されればそれだけ、試料中の測
定すべき抗体の割合は少ない。

本発明の方法で使用される受容体Ｒユは、抗体と結合可
能な２つ以上のエピトープを有する、測定すべき抗体と
特異的に結合可能な抗原である。

受容体Ｒ２として、本発明の場合、Ｒ１と特異的に結合
可能な受容体と、特異的に結合可能な物質Ｓ１とからな
る抱合体を使用する。Ｒ工と特異的に結合可能な成分は
、抗体またはこの断片であり、使用した抗原との結合に
用いられる。

受容体Ｒ２の特異的に結合可能な物質Ｓｌは、固相との
結合を媒介する。この場合、特異的に結合可能な物質Ｓ
ｌは特異的に相互に結合するペアーのパートナ−である
のが有利である。この種のペアーは当業者に公知である
。たとえば次のペアーが公知である：抗原−抗対；ハプ
テンー抗一体；ビオチン−アビジン／ストレプトアビジ
ン；タンパク質−抗タンパク質；タンパク質Ａ−免疫グ
ロブリン；ヘモグロ「ンーハブトグロビン；酵素−基質
。Ｓｌとしてヘプテン、たとえばジゴキシン、ｐ−ニト
ロフェノール、すにｙ、Ｆ’ＩＴＣ、特にビオチンを使
用するのが有利である。Ｓｌと、Ｒ１に特異的に結合可
能な受容体との結合は公知の方法で行なわれる。これに
ついての方法は、当業者には公知である。

使用した第３の受容体は、Ｒ１と特異的に結合可能な受
容体と、〜標識との抱合体である。標識として、酵素、
放射性物質、同位体、螢光物質、化学的発光物質を使用
し、これらの標識の測定は、当業者に公知の方法によシ
実施することができる。抱合体の製造は自体公知の方法
で行うことができる。

受容体Ｒ２およびＲ３に対して使用する特異的に結合可
能な受容体は、受容体Ｒ０として使用される抗原と結合
可能な抗体またはこの断片である。これらの特異的に結
合可能な受容体と、測定すべき抗体とは、抗原と結合す
るように競合すべきであるため、ここでは測定すべき抗
体と同じように抗原と反応する、つｔ、ｂ同じ結合容量
を有する受容体を使用することが重要である。従って、
Ｒ２およびＲ３に対する受容体としては、測定すべき抗
体と同じ結合容量を有する多クローン性抗体を使用する
。同様に、単クローン性抗体から検出された抗原に関す
るエピトープが測定すべき抗体によっても検出されるこ
とが保証されている場合には、単クローン性抗体を使用
してもよい。

双方の受容体Ｒ２とＲ３は、一方で生じた複合体の固定
を保証するため、受容体Ｒ２がＲユと十分に結合するこ
とができ、他方７では標識を介してのみ測定可能なため
、受容体Ｒ５が十分に結合するような割合で使用しなけ
ればならない。

抗原、Ｒ２、Ｒ３および／または測定すべき抗体とから
なる複合体の固相への固定は、特異的に結合可能な物質
Ｓ□を介して行なう。この場合２つの変法がある。一方
の有利な実施態様では、固相と、ド、に特異的に結合可
能な成分とを結合させる。このため、特異的に結合する
ペアーのＳｌに対する相補助パートナ−を、公知の方法
で固相と結合させる。受容体Ｒ２＋Ｒ３および測定すべ
き抗体と、Ｒ１との競合反応は、均一相中で受容体Ｒ１
と、”２と、Ｒ３との反応が行なわれ、つまシネ均一相
との結合よシも著しく速く進行するため、固相の存在下
でインキュベーションを行う場合でも妨害されない。も
ちろん、同様にあらかじめ複合体の形成を実施し、次い
で固相を添加し、添加後に壁形成を行ってもよい。固相
としては、ポリマー材料ならびにセルロース含有材料ま
たはガラスが適している。ポリスチロール、ポリメタク
リレート、テフロン、ポリアミド、スチロールと、アク
リルニトリルとからのコポリマー　ガラス、セルロース
生成物が特に適していることが判明した。

固相は任意の形で、たとえば管、微量滴定板、球、膜、
粒末、粒子または繊維フリースとして存在する。

特異的に結合可能な成分は、公知の方法で固相と結合す
ることができる。この場合、結合は固相に直接行うか、
またはスペーサーもしくは結合プロティンを介して行な
う。この方法は当業者に公知である。たとえば、西ｒイ
ツ国特許出願公開第３６４０４１２号明細書に記載され
た方法が、固相マトリックスを製造するのに適している
。

他方の本発明による方法の実施態様では、第２の特異的
に結合可能な物質Ｓ２を固相と結合させる。この物質Ｓ
２は、物質Ｓ１と同様に、先に定義したような、特異的
に結合するペアーのパートナ−である。Ｓｌと８２が同
じであることが特に有利である。固定するためには、Ｓ
ｌおよびＳ２についてそれぞれ１つ以上の結合箇所を有
している成分を添加する。この成分は、ＳｌもしくはＳ
２に対して２つ以上の結合箇所を有する分子であっても
よく、同様にそれぞれＳｌもしくはＳ２に対して％異的
な結合箇所を有する２つの異なる分子からの抱合体であ
っても・よい。さらに、この成分は架橋した形で、つま
、６ｓ□もしくはＳ２と結合可能な物質とのポリマーを
使用してもよい。

Ｓよと８２としてはそれぞれビオチンを使用するのが有
利である。固定化するために、モノマーまたはポリマー
の形で存在するアビシンまたはストレプトアぎジンを使
用してもよい。

溶液にこの成分を添加することにより、抗原およびＲ２
＋Ｒ３および／または測定すべき抗体から形成された抱
合体は、成分と８１との結合および成分と８２との結合
によシ固相に固定される。これらの相は液体を除去する
ことにより簡単に分離することができる。相の分離後に
、標識は双方の相の一方で、公知方法で測定することが
でき、抗原に特異的な抗体の量に対する尺度である。

か 本発明による方法は、１工程２多くとも２工程で実施可
能であるため、容易に実施することができる。従って、
この方法は自動分析装置に適用する可能性がある。この
方法は競合的に進行するため、サンドウィッチ法または
免疫測定法として構成されている全ての、今までに公知
でかったいてい使用された測定法に比べて、必要な抗体
の量を著しく減少することができる。

それにもかかわらず、本発明による方法で、極めて良い
結果が得られ、この場合、公知方法と比べて感度をよシ
いっそう改善することができた。

本発明の他の対象は、受容体Ｒ１ｓ　Ｒ２、Ｒ３ならび
に固相を物理的に相互に分離して含有し、その際Ｒ□は
測定すべき抗体と特異的に結合する受容体であり、Ｒ２
はＲ１と特異的に結合可能な受容体と、特異的に結合可
能な物質Ｓ１とからの抱合体であり、Ｒ３はＲ□と特異
的に結合可能な受容体と標識とからの抱合体であるよう
な、抗体を測定、するための試薬である。

本発明による試薬に対して、Ｓｌと特異的に結合可能な
成分と結合している固相を使用する。

固定化を特異的に結合可能なペアー〇−オチンーアビジ
ン／ストレプトアビジンを介して行うことが特に有利で
ある。

第２の特異的に結合可能な物質Ｓ２が結合している固相
を使用することも同様に有利でＬＪ）、この場合、試薬
が付加的に、Ｓｌと８２に対してそれぞれ１つ以上の結
合箇所を有する成分を含有する。固相には、受容体Ｒ２
中に結合しているものと同様の特異的に結合可能な物質
を結合させるのが有利である。

この実施態様においても、結合ペアーとしてビオチンと
アビジン／ストレゾトアピジンを使用するのが特に有利
である。

〔実施例〕

本発明を次に図面および実施例につき詳説する。

実施例中で記載したＨＢｃ　Ａｇに対する単クローン性
抗体は、Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ　ｏ
ｆ　ＡｎｉｍａｌＣｅｌｌ　Ｃｕ１ｔｕｒｅｓに次の番
号：　ＥＣＡＣＣ８８０２２５０７で寄託されている。

例　　１ ＨＢｃＡｇに対する抗体を測定するための受容体Ｒ２お
よびＲ３を製造した。

ａ）　　ＨＢｃＡｇ　（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ　−Ｃ
ｏｒｅ　−Ａｎｔｉｇｅｎ）に対する単クローン性抗体
と、ビオチンとの抱合体の製造 Ｄ−ピオチン−６−アミノカプロン酸−Ｎ−ヒドロキシ
スクシンイミドエステル６＋！／ａｎ’ジメチルスルホ
キシドにあらかじめ溶かした。

引き続き抗体１０ＩＩｔ９／Ｍを、１５倍のモル過剰量
のビオチン化試薬を有するリン酸カリウム緩衝液（ｐ）
１７　’）　３０ミリそル／ｌ中で２５°Ｃで１時間イ
ンキュベートした。引き続きリン酸カリウム緩衝液（ｐ
Ｈ７）約２ミリモル／ｌを透析した。

ｂ）　　ＨＢｃ、Ａｇ　（ＥＣＡＣＣ８８０２２５０７
）に対する単り６フン性抗体と、ペルオキシダーゼとか
らなる抱合体 セイヨウワサビのペルオキシダーゼを、ナカネ（Ｎａｋ
ａｎｅ　）が記載した過ヨウ素酸塩法（Ｗｉｌｓｏｎ、
　Ｍ、Ｂ、、　Ｎａｋａｎｅ、　Ｐ、に、　”Ｉｍｍｕ
ｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｒｅ１ａｔｅｄ
　Ｓｔａｉｎｉｎｇ　ＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓＷ、Ｋｎｏ
ｐｐ、　ＨＯｌｕｂｅｒおよびＧ　、Ｗｉ　ｃ　ｋ　＋
出版社Ｅｌｓｅｖｉｅｒ　／　Ｎｏｒｔｈ　−Ｈｏ１ｌ
ａｎｄ　ＢｉｏｍｅｄｉｃａｌＰｒｅｓｓ　Ａｍｓｔｅ
ｒｄａｍ　Ｎｅｗ　Ｙｃｒｋ　１９７８−＋　２１５〜
２２４頁）Ｋより酸化した。次いで抗体１０■と酸化し
たペルオキシダーゼ１２ＩＮｉとを全容量４．６−で、
ＦＪ″１９．４で、２５℃で相互に抱合させた。この結
合を１時間後に、０℃でトリエタノールアミン２０ミリ
モル／ｌと水素化ホウ素ナトリウム１．５ミリモル／ｌ
とを添加し、−８，９で６０分間温装するととＫよシ停
止させた。

引き続きこの抱合体を、リン酸カリウム緩衝液（ｐ）１
７．５）５０ミリモル／ｌおよびＮａＣＪ１５０ミリ％
　ル／ｌ中のスーパローゼ（５ｕｐｅｒｏｓｅ　６ｐｒ
ｅｐ　ｇｒａｄｅ　）のｒ／Ｉ／ａ過によシ分別した。

例　　２ ヒト血清中のＨＢｃ抗原に対する抗体の含量を測定した
。このため次の試薬を使用した。

試薬１：再結合したＨＢｃＡｇ　　１００　ｎｇ／ｌ（
欧州特許出願公開第００１３８２８ 号明細書によ）製造） 試薬２：　ＨＢｃＡｇ　（ＥＣＡＣＣ８８０２２５０７
）に対するげオチン化単りローン性抗体５０　ｎｇ／−
（例１ａによシ製造）およびＨＢｃＡｇに対する単クロ
ーン性抗体と、ペルオ キシダーゼとの抱合体（例１ｂによシ 製造、ＰＯＤ活性度２５　ｍＵ　／ｍｌ　）、リン酸ナ
トリウム緩衝液４０ミリモル／ １ｃｐＨ７，４、ポリエーテルグリコール（Ｐｌｕｒｏ
ｎｉｃ　Ｆ　−６８）　０．５１％、ウシ血清アルジミ
ン０．２チ、ウシＩｇＧＯ０１俤、酒石酸ナトリウム０
．２モル／ｌ　）ストレゾドアぎジン−サーモ−ウシ血
清アルブミン（８ｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ　−Ｔｈｅｒ
ｍｏ　−Ｒｌｎｄｅｒｓｅｒｕｍａｌｂｕｍｉｎ　）で
被榎されたポリスチロール管（西ドイツ国特許ｔ５願公
開第３６４０４１２号明細書に記載されたと同様に製造
）中に、試料２００μｌをぎペットで入れ、前後しても
しくは同時に試薬１と試薬２とをそれぞれ５００μｌづ
つ添加した。室温で１時間インキュベートした後に、水
道水で３回洗浄し、ＡＢＴＳ（２，２′−アジノージ−
〔６−ニテルーペンズテアゾリンースルホン酸（６）　
−７−ジアンモニウム塩）１ｒ／Ｌｌ（１，９ミリモル
／ｌ）を基質の反応のためにピヘットで添加し、さらに
室温で１時間インキュベートした。吸光度は４０５　ｎ
ｍで層厚５ｍｌを有するセルで測定し、１ｃＩｎセルに
換算した。

第１図は、陰性血清で陽性血性を希釈することにより得
られた検量線を示す図である。表１中にこの測定値をま
とめた。

表　　１ 例２ 例６ 希釈ＨＢｃ　　　　　吸光度４０５ｎｍ　　吸光度４０
５ｎｍ１　：　　２０００　　　０．０４８　　　　０
．０４０１　　：　　４０００　　　　　０．１９５　
　　　　　０゜８０６１　：　　８０００　　　０．７
９２　　　　１．８５６１　　：　　１６０００　　　
　　１．４８９　　　　　　２．５６５１　　：　　３
２０００　　　　　２．０７０　　　　　　２．７６７
陰性血清　　　　２．５７０　　　　２゜８４５検定限
界　　　　１．０５０　　　　１．２２５例　６（比較
例） 比較のため、先行技術から公知のようなＨＢＣＡｇに対
する抗体の測定を実施した。このため、ポリスチロール
管に、リン酸塩緩衝液（ＰＨ７，４）４０　Ｓりそル／
ｌ中の、ＨＢｃＡｇ　（ＥＣＡＣＣ８８０２２５０７’
）に対する単クローン性抗体３μｇ／ｄからなる溶液１
．５１Ｌｌを充填し、室温で２４時間インキュベートし
た。溶液を取シ除いた後に、管に、Ｎａ（Ｊ　［１，９
チ、ウシ血清アルブミン０．３％、ショ糖２％を有する
緩衝液２ｄを充填し、３０分間インキュベートした。こ
の溶液を取シ除いた後に、管は、開口を下にして２１°
Ｃで１晩じゆうインキュベートした。さらに例２に記載
したと同様の方法を実施するが、ストレゾトアピジンー
サーモーＲ８Ａで被覆されたポリスチロール管の代わり
に、ＨＢｃＡｇに対する単クローン性抗体で被覆された
ポリスチロール管を使用し、ＨＢｃＡｇに対するピオチ
ン化単りローン性抗体なしで試薬２を製造した。

この結果は表１に記載した。第２図は陰性血清で陽性血
清を希釈することにょシ得られた検量線を示す図である
。

例　　４ 血清中のＨＢｃ抗原に対する抗体を測定するために競争
テストを実施した。このため、ストレプトアビジン−サ
ーモ−ウシ血清アルブミンで被覆されたポリスチロール
管（例２と同様に製造）中へ、次の成分からなる試薬５
００μ！；ＨＢｃＡｇ（ＥＣＡＣＣ８８０２２５０７）
に対するぎオチン化単りローン性抗体５０　ｎｇ　／　
Ｔｎｌ　（例１ａにより製造、受容体Ｒ２）、再結合Ｈ
Ｂｃ、Ａｇ　１００ｎｇ　ｌ　ｒｎｌ　（欧州特許出願
公開第００１３８２８号明細書に記載された方法によシ
製造、受容体Ｒ２）と、試料２００μｌとをリン酸ナト
リウム緩衝液４０ミリモル／１（ｐＨ７−４，ポリエー
テルグリコール（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ　Ｆ　−６８）　０
−５　％、ウシ血清アルブミン０．２　％　、ウシ１ｇ
Ｇ　Ｏ，１％、酒石酸す）　ＩＪウム０゜２−！ニル／
ｌ）を有する溶液中にインキュベートして、２ペツトで
入れた。

室温で１時間インキュベートした後に、第２の試薬５０
０μｌ〔前記した緩衝液中の、ＨＢｃＡｇに対する単ク
ローン性抗体と、ペルオキシダーゼとの抱合体（例１ｂ
によシ得られる、受容体した後に、水道水で６回洗浄し
、Ａ　Ｂ　Ｔ　８１ｍ１（１，９ミ！ｊモル／ｌ）を基
質反応のためにビペットで添加し、室温で１時間インキ
ュベートした。吸光度を４０５　ｎｍで、層厚５０を有
するセルで測定し、１ｃｍセルに換算した。

この測定値は表２にまとめた。

例　　５ 競争原理により、ＨＢｃ抗原に対する抗体を測定するた
め、ストレプトアビジン−サーモ−ウシ血清アルブミン
で被覆されたポリスチロール管（西ドイツ国特許出願公
開第３６４０４１２号明細曹に記載されたと同様に製造
）中に、リン酸ナトリウム緩衝液４０ミリモル／１ＣＰ
Ｈ７，４、ポリエーテルグリコール（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ
　Ｆ６８　）　０．５％、ウシ血清アルブミン０．２％
、ウシＩｇＧ　Ｏ−１％　、酒石酸ナトリウム０．２モ
ル／ｌ〕中の試料２００μｌおよび再結合ＨＢｃＡｇ１
００ｎｇ／ｌｎＪからなる試薬１（欧州特許出願公開第
００１３８２８号明細書によシ製造）をピペットで入れ
た。１時間インキュベートした後に、前記試薬１で挙げ
た緩衝液中の、次の成分からなる試薬２： ＨＥｃＡ５に対するビオチン化率クローン性抗体（例１
ａによシ製造）　　　　　５０ｎｇ／ｄＨＢｃＡｇに対
する単クローン性抗体と、ペルオキシダーゼとの抱合体
（例１ｂに記載したと同様に製造）　　　　　　　　　
２５　ｍＵ　／プを添加し、さらに室温で１時間インキ
ュベートした。さらに例６に記載したと同様に行った。

得られた測定値は表２にまとめた。

表　　２

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明による方法によるＨＢｃＡｇに対する
抗体の測定についての検量線をグラフで示す図および第
２図は、先行技術によるＨＢｃＡｇに対する抗体の測定
についての検量線をグラフで示す図である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、免疫検定法の原理により、抗体を、液相中に溶けて
   存在する、３種以上のＲ＿１、Ｒ＿２、Ｒ＿３〔ただし
   Ｒ＿１は測定すべき抗体と特異的に結合可能な受容体で
   あり、Ｒ＿２は固相との結合を媒介し、Ｒ＿３は標識を
   担持する〕の受容体と共にインキメベートし、生じた複
   合体を固相と結合させて溶液から分離し、これらの相の
   一方にある標識を測定することにより抗体を測定する方
   法において、受容体Ｒ＿２としてＲ＿１と特異的に結合
   可能な受容体と、特異的に結合可能な物質Ｓ＿１とから
   なる抱合体を使用し、Ｒ＿３としてＲ＿１と特異的に結
   合可能な受容体と標識との抱合体を使用し、生じた複合
   体を、Ｓ＿１と特異的に結合可能な成分に結合させるこ
   とにより固相に固定化することを特徴とする抗体の測定
   方法。 ２、測定すべき抗体に３種の受容体の全てを同時に添加
   する請求項１記載の方法。 ３、測定すべき抗体を、まず受容体Ｒ＿１と、場合によ
   りＲ＿２もしくはＲ＿３と一緒にインキュベートし、次
   いで受容体Ｒ＿２およびＲ＿３またはＲ＿３もしくは、
   Ｒ＿３だけを添加する請求項１記載の方法。 ４、免疫検定法の原理により、請求項１から３までのい
   ずれか１項記載の、抗体を測定する試薬において、前記
   試薬は３種の受容体Ｒ＿１、Ｒ＿２、Ｒ＿３ならびに固
   相を物理的に相互に分離して含有し、その際Ｒ＿１は測
   定すべき抗体と特異的に結合可能な受容体であり、Ｒ＿
   ２はＲ＿１と特異的に結合可能な受容体と、特異的に結
   合可能な物質Ｓ＿１とからなる抱合体であり、Ｒ＿３は
   Ｒ＿１と特異的に結合可能な受容体と、標識との抱合体
   であることを特徴とする抗体を測定するための試薬。