JPH08304397A - 病原体感染の検出方法 - Google Patents
病原体感染の検出方法Info
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- JPH08304397A JPH08304397A JP13844695A JP13844695A JPH08304397A JP H08304397 A JPH08304397 A JP H08304397A JP 13844695 A JP13844695 A JP 13844695A JP 13844695 A JP13844695 A JP 13844695A JP H08304397 A JPH08304397 A JP H08304397A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 病原体感染の診断において、抗体が形成され
るより早い時期から且つ抗体形成後も常に確実な診断を
するためのイムノアッセイを提供する。 【構成】 病原体の少なくとも一つの抗原および同じ病
原体の異なる抗原に対する少なくとも一つの抗体をイム
ノアッセイ法にて同時に測定することによって病原体感
染を検出する方法において、測定すべき物質を含む免疫
複合体をいったん第１の固相上に形成させた後、この免
疫複合体を特異的に第２の固相上へ転移させ、その固相
上で測定すべき物質量の測定を行う。 【効果】 既存の抗体測定キットに比べて約２週間早期
に検出ができ、さらに既存の抗原測定キットのように感
染後日数の経過に伴い測定値が低下するような現象が起
きず常時高い信号値が得られる。
るより早い時期から且つ抗体形成後も常に確実な診断を
するためのイムノアッセイを提供する。 【構成】 病原体の少なくとも一つの抗原および同じ病
原体の異なる抗原に対する少なくとも一つの抗体をイム
ノアッセイ法にて同時に測定することによって病原体感
染を検出する方法において、測定すべき物質を含む免疫
複合体をいったん第１の固相上に形成させた後、この免
疫複合体を特異的に第２の固相上へ転移させ、その固相
上で測定すべき物質量の測定を行う。 【効果】 既存の抗体測定キットに比べて約２週間早期
に検出ができ、さらに既存の抗原測定キットのように感
染後日数の経過に伴い測定値が低下するような現象が起
きず常時高い信号値が得られる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、免疫複合体転移法を用
いて特定の病原体の抗原物質および病原体に対して感作
された抗体物質を同時に測定することにより、感染症の
診断を行うイムノアッセイ法に関する。また、ヒト免疫
不全ウイルス−１（ＨＩＶ−１）のｐ２４抗原、抗ｐ１
７抗体および抗逆転写酵素（ＲＴ）抗体を同時測定する
ことによりＨＩＶ−１感染の診断を行うイムノアッセイ
法に関する。
いて特定の病原体の抗原物質および病原体に対して感作
された抗体物質を同時に測定することにより、感染症の
診断を行うイムノアッセイ法に関する。また、ヒト免疫
不全ウイルス−１（ＨＩＶ−１）のｐ２４抗原、抗ｐ１
７抗体および抗逆転写酵素（ＲＴ）抗体を同時測定する
ことによりＨＩＶ−１感染の診断を行うイムノアッセイ
法に関する。
【０００２】
【従来の技術】抗原物質または抗体物質を測定し分析す
るための手法として、イムノアッセイ法は、簡便かつ特
異性が高いという利点を有する。とりわけ、免疫複合体
転移イムノアッセイ（以下、「免疫複合体転移法」とい
う。）は、サンドイッチ法の欠点であった固相への夾雑
蛋白の吸着ならびにそれに起因するバックグラウンド信
号の発生等を好適に抑制でき、被検体溶液中の抗原物質
または抗体物質を、高感度に測定しうる方法として知ら
れている。この免疫複合体転移法は、一対の固相を用い
てトラップ（捕捉）を例えば２回行うことを含むイムノ
アッセイである。次に、免疫複合体転移法により抗原物
質あるいは抗体物質を測定する場合の操作手順のそれぞ
れ１つのパターンを例として概略的に説明する。また、
以下、本明細書では説明のために、一対の固相のうち、
最初のトラップに用いる固相を第１固相、次のトラップ
に用いる固相を第２固相という。
るための手法として、イムノアッセイ法は、簡便かつ特
異性が高いという利点を有する。とりわけ、免疫複合体
転移イムノアッセイ（以下、「免疫複合体転移法」とい
う。）は、サンドイッチ法の欠点であった固相への夾雑
蛋白の吸着ならびにそれに起因するバックグラウンド信
号の発生等を好適に抑制でき、被検体溶液中の抗原物質
または抗体物質を、高感度に測定しうる方法として知ら
れている。この免疫複合体転移法は、一対の固相を用い
てトラップ（捕捉）を例えば２回行うことを含むイムノ
アッセイである。次に、免疫複合体転移法により抗原物
質あるいは抗体物質を測定する場合の操作手順のそれぞ
れ１つのパターンを例として概略的に説明する。また、
以下、本明細書では説明のために、一対の固相のうち、
最初のトラップに用いる固相を第１固相、次のトラップ
に用いる固相を第２固相という。
【０００３】（１）抗原物質測定の場合（図１） 測定対象となる抗原（図１の参照番号１１、以下同
様）に、２種類の異なる官能基で修飾した特異的抗体
（１２）と標識された特異的抗体（１３）とを反応さ
せ、三者よりなる免疫複合体を形成する。 上記複合体を、抗体１２の一方の官能基に対する受
容体を不溶化した第１固相（１４）にトラップする。免
疫複合体は、被検体溶液中で完成した後にトラップして
も、始めに抗体１２を固相１４上にトラップしておき、
その一端に対して完成するものであってもよい。 固相１４を洗浄後、免疫複合体を転移させるための
転移反応溶液中で、第１固相から免疫複合体を遊離させ
る。 免疫複合体を抗体１２の異なる官能基に対する受容
体を不溶化した第２固相（１５）にトラップする。 固相１５を洗浄後、免疫複合体の測定対象となる抗
原を、で導入した標識を利用して検出定量する。
様）に、２種類の異なる官能基で修飾した特異的抗体
（１２）と標識された特異的抗体（１３）とを反応さ
せ、三者よりなる免疫複合体を形成する。 上記複合体を、抗体１２の一方の官能基に対する受
容体を不溶化した第１固相（１４）にトラップする。免
疫複合体は、被検体溶液中で完成した後にトラップして
も、始めに抗体１２を固相１４上にトラップしておき、
その一端に対して完成するものであってもよい。 固相１４を洗浄後、免疫複合体を転移させるための
転移反応溶液中で、第１固相から免疫複合体を遊離させ
る。 免疫複合体を抗体１２の異なる官能基に対する受容
体を不溶化した第２固相（１５）にトラップする。 固相１５を洗浄後、免疫複合体の測定対象となる抗
原を、で導入した標識を利用して検出定量する。
【０００４】（２）抗体物質測定の場合（図２） 測定対象となる抗体（図２の参照番号２１、以下同
様）に、官能基で修飾した特異的抗原（２２）と標識さ
れた特異的抗原（２３）とを反応させ、三者よりなる免
疫複合体を形成する。 上記複合体を、抗原２２の官能基に対する受容体を
不溶化した第１固相（２４）にトラップする。免疫複合
体は、被検体溶液中で完成した後にトラップしても、始
めに抗原２２を固相２４上にトラップしておき、その一
端に対して完成するものであってもよい。 固相２４を洗浄後、免疫複合体を転移させるための
転移反応溶液中で、第１固相から免疫複合体を遊離させ
る。 免疫複合体を、前記官能基とは異なる抗体２１中の
部位に対して特異的に反応する成分を不溶化した第２固
相（２５）にトラップする。 固相２５を洗浄後、免疫複合体の測定対象となる抗
体を、で導入した標識を利用して検出定量する。
様）に、官能基で修飾した特異的抗原（２２）と標識さ
れた特異的抗原（２３）とを反応させ、三者よりなる免
疫複合体を形成する。 上記複合体を、抗原２２の官能基に対する受容体を
不溶化した第１固相（２４）にトラップする。免疫複合
体は、被検体溶液中で完成した後にトラップしても、始
めに抗原２２を固相２４上にトラップしておき、その一
端に対して完成するものであってもよい。 固相２４を洗浄後、免疫複合体を転移させるための
転移反応溶液中で、第１固相から免疫複合体を遊離させ
る。 免疫複合体を、前記官能基とは異なる抗体２１中の
部位に対して特異的に反応する成分を不溶化した第２固
相（２５）にトラップする。 固相２５を洗浄後、免疫複合体の測定対象となる抗
体を、で導入した標識を利用して検出定量する。
【０００５】免疫複合体転移法に関するさらに詳しい説
明、実例については以下の文献に詳細に記載されてい
る。 （１）ISHIKAWA,E., HASHIDA,S., KOHNO,T., (1991): D
evelopment of ultrasensitive enzyme immunoassay re
viewed with emphasis on factors which limitthe sen
sitivity. MOLECULAR AND CELLULAR PROBES, 5, 81-95 （２）ISHIKAWA,E., HASHIDA,S., KOHNO,T.,et al. (19
93): Principle and applications of ultrasensitive
enzyme immunoassay (Immune complex transferenzyme
immunoassay) for antibodies in body fluids. J. CLI
N. LABORATORY ANALYSIS, 7, 376-393. （３）特開平１−２５４８６８号 「超高感度抗原物質
の測定法」 （４）特開平２−２８５５８号 「超高感度特異的抗
体の測定法」 （５）石川榮治著（１９９３） 「超高感度酵素免疫
測定法」（学会出版センター）
明、実例については以下の文献に詳細に記載されてい
る。 （１）ISHIKAWA,E., HASHIDA,S., KOHNO,T., (1991): D
evelopment of ultrasensitive enzyme immunoassay re
viewed with emphasis on factors which limitthe sen
sitivity. MOLECULAR AND CELLULAR PROBES, 5, 81-95 （２）ISHIKAWA,E., HASHIDA,S., KOHNO,T.,et al. (19
93): Principle and applications of ultrasensitive
enzyme immunoassay (Immune complex transferenzyme
immunoassay) for antibodies in body fluids. J. CLI
N. LABORATORY ANALYSIS, 7, 376-393. （３）特開平１−２５４８６８号 「超高感度抗原物質
の測定法」 （４）特開平２−２８５５８号 「超高感度特異的抗
体の測定法」 （５）石川榮治著（１９９３） 「超高感度酵素免疫
測定法」（学会出版センター）
【０００６】上記のように免疫複合体転移法は、抗原あ
るいは抗体いずれの測定においても従来の技術に比較し
て高感度に検出可能であり、それゆえ感染症の診断にお
いてより早期かつ高精度に感染の判定が可能である。例
えば、抗原の検出に関しては、免疫複合体転移法による
ヒト免疫不全ウィルス−１（ＨＩＶ−１）のｐ２４抗原
の検出に関する報告〔橋田ら、ジャーナル・オブ・クリ
ニカル・マイクロバイオロジー（Ｊ．Ｃｌｉｎ． Ｍｉ
ｃｒｏｂｉｏｌ．）、第３３巻、第２９８頁（１９９
５）〕、抗体の検出に関しては、同じくＨＩＶ−１のｐ
１７、ｐ２４および逆転写酵素に対する抗体の検出に関
する報告〔橋田ら、ジャーナル・オブ・クリニカル・ラ
ボラトリー・アナリシス（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ａｎ
ａｌ）、第８巻、第２３７頁（１９９４）〕などがあ
る。
るいは抗体いずれの測定においても従来の技術に比較し
て高感度に検出可能であり、それゆえ感染症の診断にお
いてより早期かつ高精度に感染の判定が可能である。例
えば、抗原の検出に関しては、免疫複合体転移法による
ヒト免疫不全ウィルス−１（ＨＩＶ−１）のｐ２４抗原
の検出に関する報告〔橋田ら、ジャーナル・オブ・クリ
ニカル・マイクロバイオロジー（Ｊ．Ｃｌｉｎ． Ｍｉ
ｃｒｏｂｉｏｌ．）、第３３巻、第２９８頁（１９９
５）〕、抗体の検出に関しては、同じくＨＩＶ−１のｐ
１７、ｐ２４および逆転写酵素に対する抗体の検出に関
する報告〔橋田ら、ジャーナル・オブ・クリニカル・ラ
ボラトリー・アナリシス（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ａｎ
ａｌ）、第８巻、第２３７頁（１９９４）〕などがあ
る。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】一般に、感染症の免疫
学的診断における病原体抗原自身を測定する方法と病原
体に対して形成された抗体を測定する方法は、それぞれ
特徴を有しているものであり、いずれが好ましいかは検
出すべき病原体の種類や検査の目的などによっていずれ
か一方が選択される。ただし、感染の検出という観点か
ら考えれば、抗体検査の場合、抗体は感染後一定期間以
上経たないと形成されてこないので、感染初期において
は、いかなる高感度測定法を用いても検出は難しいとい
う欠点を持っている。一方、抗原検査の場合も、その病
原体が生体内で活発に増殖している時期でないと検出さ
れにくいという欠点を持っており、特にヒト免疫不全ウ
ィルスに代表されるように感染後しばらくすると病原体
自身が潜在化し無症候化するような場合、その期間の生
体液中の抗原検出は、従来のどのような免疫測定法を用
いても難しい。
学的診断における病原体抗原自身を測定する方法と病原
体に対して形成された抗体を測定する方法は、それぞれ
特徴を有しているものであり、いずれが好ましいかは検
出すべき病原体の種類や検査の目的などによっていずれ
か一方が選択される。ただし、感染の検出という観点か
ら考えれば、抗体検査の場合、抗体は感染後一定期間以
上経たないと形成されてこないので、感染初期において
は、いかなる高感度測定法を用いても検出は難しいとい
う欠点を持っている。一方、抗原検査の場合も、その病
原体が生体内で活発に増殖している時期でないと検出さ
れにくいという欠点を持っており、特にヒト免疫不全ウ
ィルスに代表されるように感染後しばらくすると病原体
自身が潜在化し無症候化するような場合、その期間の生
体液中の抗原検出は、従来のどのような免疫測定法を用
いても難しい。
【０００８】従って、感染後どの時期においてもより正
確に感染の検出を行うためには、高感度の測定方法を用
いて抗原と抗体の双方を測定することが重要であるが、
既存の技術では、異なる２種類のアッセイを行わなけれ
ばならず、操作の手間、時間、費用、器具などの問題に
より実際には、いずれか一方の測定しか行われていな
い。それゆえ、一回の操作で抗原と抗体を高感度に同時
検出し得る測定の開発が望まれていたのである。本発明
の目的は、感染症の診断においていずれの時期の被検体
においても確実に感染の判定をし得るような、免疫複合
体転移法の原理に基づく高感度な抗原と抗体の同時測定
の系を提供することである。
確に感染の検出を行うためには、高感度の測定方法を用
いて抗原と抗体の双方を測定することが重要であるが、
既存の技術では、異なる２種類のアッセイを行わなけれ
ばならず、操作の手間、時間、費用、器具などの問題に
より実際には、いずれか一方の測定しか行われていな
い。それゆえ、一回の操作で抗原と抗体を高感度に同時
検出し得る測定の開発が望まれていたのである。本発明
の目的は、感染症の診断においていずれの時期の被検体
においても確実に感染の判定をし得るような、免疫複合
体転移法の原理に基づく高感度な抗原と抗体の同時測定
の系を提供することである。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明は、 ［１］「病原体の少なくとも一つの抗原」および「同じ
病原体の異なる抗原に対する少なくとも一つの抗体」を
同時に測定することによって病原体感染を検出する方法
であって、下記の工程（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）および
（Ｄ）からなる、上記方法。 工程（Ａ）：被検液に下記成分（１）、（２）、（３）
および（４）を各々少なくとも一つ加えて、測定すべき
抗原を含む免疫複合体および／または測定すべき抗体を
含む免疫複合体を形成せしめる工程。 （１）官能基で修飾された、病原体の測定すべき抗原に
対して特異的に結合する成分 （２）標識された、測定すべき抗原に対して特異的に結
合する成分 （３）官能基で修飾された、同じ病原体であるが（１）
の測定すべき抗原とは異なる抗原に対する測定すべき抗
体に対して特異的に結合する成分 （４）標識された、測定すべき抗体に対して特異的に結
合する成分 工程（Ｂ）：工程（Ａ）で形成された免疫複合体を、
（１）および（３）における官能基に対して特異的に反
応する成分を不溶化した第１固相上に捕捉する工程。 工程（Ｃ）：免疫複合体を上記固相から遊離させ、前記
官能基とは異なる免疫複合体中の部位に対して特異的に
反応する成分を不溶化した第２固相に免疫複合体を捕捉
する工程。 工程（Ｄ）：第２固相上に捕捉された免疫複合体を測定
する工程。 ［２］工程（Ａ）と工程（Ｂ）を同時に行うことを特徴
とする上記［１］記載の方法。 ［３］病原体がヒト免疫不全ウイルス−１（ＨＩＶ−
１）である上記［１］または［２］記載の方法。 ［４］測定すべき抗原がｐ２４であり、測定すべき抗体
が抗逆転写酵素（ＲＴ）抗体および抗ｐ１７抗体である
ことを特徴とする上記［３］記載の方法。 に関する。本発明の方法の概略は、図３に示されるもの
であり、図１の測定法と図２の測定法を組み合わせたも
のである。
病原体の異なる抗原に対する少なくとも一つの抗体」を
同時に測定することによって病原体感染を検出する方法
であって、下記の工程（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）および
（Ｄ）からなる、上記方法。 工程（Ａ）：被検液に下記成分（１）、（２）、（３）
および（４）を各々少なくとも一つ加えて、測定すべき
抗原を含む免疫複合体および／または測定すべき抗体を
含む免疫複合体を形成せしめる工程。 （１）官能基で修飾された、病原体の測定すべき抗原に
対して特異的に結合する成分 （２）標識された、測定すべき抗原に対して特異的に結
合する成分 （３）官能基で修飾された、同じ病原体であるが（１）
の測定すべき抗原とは異なる抗原に対する測定すべき抗
体に対して特異的に結合する成分 （４）標識された、測定すべき抗体に対して特異的に結
合する成分 工程（Ｂ）：工程（Ａ）で形成された免疫複合体を、
（１）および（３）における官能基に対して特異的に反
応する成分を不溶化した第１固相上に捕捉する工程。 工程（Ｃ）：免疫複合体を上記固相から遊離させ、前記
官能基とは異なる免疫複合体中の部位に対して特異的に
反応する成分を不溶化した第２固相に免疫複合体を捕捉
する工程。 工程（Ｄ）：第２固相上に捕捉された免疫複合体を測定
する工程。 ［２］工程（Ａ）と工程（Ｂ）を同時に行うことを特徴
とする上記［１］記載の方法。 ［３］病原体がヒト免疫不全ウイルス−１（ＨＩＶ−
１）である上記［１］または［２］記載の方法。 ［４］測定すべき抗原がｐ２４であり、測定すべき抗体
が抗逆転写酵素（ＲＴ）抗体および抗ｐ１７抗体である
ことを特徴とする上記［３］記載の方法。 に関する。本発明の方法の概略は、図３に示されるもの
であり、図１の測定法と図２の測定法を組み合わせたも
のである。
【００１０】以下、本発明について工程順に説明する。工程（Ａ）について 被検液としては、例えば、血清、血漿、唾液、尿、髄液
等の生体液および緩衝液が挙げられる。測定すべき病原
体としては、細菌、ウィルス、真菌、リケッチア、クラ
ミジア、原虫などが挙げられる。例を挙げれば、結核
菌、淋菌、サルモネラ菌、肺炎球菌、肝炎ウィルス、免
疫不全ウィルス、Ｔ細胞白血病ウィルス、インフルエン
ザウィルス、マイコプラズマ、梅毒スピロヘータ、カン
ジダ菌などである。
等の生体液および緩衝液が挙げられる。測定すべき病原
体としては、細菌、ウィルス、真菌、リケッチア、クラ
ミジア、原虫などが挙げられる。例を挙げれば、結核
菌、淋菌、サルモネラ菌、肺炎球菌、肝炎ウィルス、免
疫不全ウィルス、Ｔ細胞白血病ウィルス、インフルエン
ザウィルス、マイコプラズマ、梅毒スピロヘータ、カン
ジダ菌などである。
【００１１】ここで言う、病原体の測定すべき抗原に対
して特異的に結合する成分とは、通常はその抗原に対し
て作製された抗体が用いられるが、２者のうちの一方
は、例えば抗原と特異的に結合するレクチンや受容体な
どでもよい。抗体は、完全な抗体の代わりにＦａｂ、Ｆ
ａｂ’またはＦ（ａｂ’）2 のようなフラグメントを用
いてもよく、ポリクローナルでもモノクローナルでもよ
い。また、測定すべき抗体に対して特異的に結合する成
分とは、通常はその抗原成分が用いられるが、２者のう
ちの一方は、例えば、抗抗体などでもよい。この場合各
成分の選択には、試薬として用いられる、測定すべき抗
原に対して特異的に結合する成分と測定すべき抗体に対
して特異的に結合する成分とがそれ自身が反応しないこ
とが最も重要である。測定する抗原あるいは抗体の選択
は特に規定されないが、感染をより確実に判定するとい
う目的においては、感染後できるだけ早期に発現する成
分あるいは高い濃度で維持される成分などが選択される
ことが好ましい。ここでいう官能基としては、ジニトロ
フェニル基またはトリニトロフェニル基等のハプテンあ
るいはビオチン等が挙げられる。抗原を測定するための
成分に導入される官能基と抗体を測定するための成分に
導入される官能基は、同一でも異なっていてもかまわな
いが、特に差し障りがなければ、同一である方が工程
（Ｂ）の第１固相の作製上好ましい。
して特異的に結合する成分とは、通常はその抗原に対し
て作製された抗体が用いられるが、２者のうちの一方
は、例えば抗原と特異的に結合するレクチンや受容体な
どでもよい。抗体は、完全な抗体の代わりにＦａｂ、Ｆ
ａｂ’またはＦ（ａｂ’）2 のようなフラグメントを用
いてもよく、ポリクローナルでもモノクローナルでもよ
い。また、測定すべき抗体に対して特異的に結合する成
分とは、通常はその抗原成分が用いられるが、２者のう
ちの一方は、例えば、抗抗体などでもよい。この場合各
成分の選択には、試薬として用いられる、測定すべき抗
原に対して特異的に結合する成分と測定すべき抗体に対
して特異的に結合する成分とがそれ自身が反応しないこ
とが最も重要である。測定する抗原あるいは抗体の選択
は特に規定されないが、感染をより確実に判定するとい
う目的においては、感染後できるだけ早期に発現する成
分あるいは高い濃度で維持される成分などが選択される
ことが好ましい。ここでいう官能基としては、ジニトロ
フェニル基またはトリニトロフェニル基等のハプテンあ
るいはビオチン等が挙げられる。抗原を測定するための
成分に導入される官能基と抗体を測定するための成分に
導入される官能基は、同一でも異なっていてもかまわな
いが、特に差し障りがなければ、同一である方が工程
（Ｂ）の第１固相の作製上好ましい。
【００１２】工程（Ｂ）について 工程（Ａ）の官能基と特異的に結合する成分としては、
例えば、官能基がハプテンであれば抗ハプテン抗体が、
ビオチンであれば（ストレプト）アビジンが挙げられ
る。ただし、官能基と特異的成分の結合は、工程（Ｃ）
において解離しやすい組合せが好ましい。工程（Ａ）で
抗原を測定するための成分に導入される官能基と抗体を
測定するための成分に導入される官能基が異なる場合
は、それぞれの官能基と特異的に結合する２種類の成分
が不溶化されている必要がある。固相としては、従来の
免疫学的測定法において使用されているもの全てを使用
しうる。例えば、ポリスチレン、ポリアクリル、ガラ
ス、アガロース等が挙げられる。また、形状はどのよう
なものであってもよい。固相上への上記成分の不溶化法
も、従来の免疫学的測定法に用いられるいかなる方法で
もよい。固相上に免疫複合体を捕捉後、工程（Ｃ）に移
行する前に固相を洗浄することが好ましい。洗浄方法
は、通常の免疫学的測定法で用いられる方法で行われ
る。工程（Ａ）、（Ｂ）における固相上への免疫複合体
の捕捉は、免疫複合体が被検体溶液中で完成した後に固
相へ捕捉しても、始めに官能基を有する成分を固相上に
捕捉しておき、その一端に対して完成するものであって
もよい。また、工程（Ａ）、（Ｂ）を同時に行ってもよ
い。
例えば、官能基がハプテンであれば抗ハプテン抗体が、
ビオチンであれば（ストレプト）アビジンが挙げられ
る。ただし、官能基と特異的成分の結合は、工程（Ｃ）
において解離しやすい組合せが好ましい。工程（Ａ）で
抗原を測定するための成分に導入される官能基と抗体を
測定するための成分に導入される官能基が異なる場合
は、それぞれの官能基と特異的に結合する２種類の成分
が不溶化されている必要がある。固相としては、従来の
免疫学的測定法において使用されているもの全てを使用
しうる。例えば、ポリスチレン、ポリアクリル、ガラ
ス、アガロース等が挙げられる。また、形状はどのよう
なものであってもよい。固相上への上記成分の不溶化法
も、従来の免疫学的測定法に用いられるいかなる方法で
もよい。固相上に免疫複合体を捕捉後、工程（Ｃ）に移
行する前に固相を洗浄することが好ましい。洗浄方法
は、通常の免疫学的測定法で用いられる方法で行われ
る。工程（Ａ）、（Ｂ）における固相上への免疫複合体
の捕捉は、免疫複合体が被検体溶液中で完成した後に固
相へ捕捉しても、始めに官能基を有する成分を固相上に
捕捉しておき、その一端に対して完成するものであって
もよい。また、工程（Ａ）、（Ｂ）を同時に行ってもよ
い。
【００１３】工程（Ｃ）について 免疫複合体の解離は、複合体を分解させずに行うことが
好ましく、例えば、免疫複合体と固相上の成分との結合
に関与する官能基と同一部位あるいは類似構造を有する
物質を大過剰に加えることで達成される。免疫複合体の
第２固相への結合は、固相上に不溶化された、複合体中
の前記官能基とは異なる部位に対して特異的に反応する
成分を介して行われる。必要であれば、あらかじめ工程
（Ａ）で用いられる成分の一つに第２固相への捕捉のた
めの官能基を導入しておいてもよい。測定すべき抗原を
含む複合体と測定すべき抗体を含む複合体において異な
る部位が捕捉のために使用される場合は、それぞれの部
位に特異的な２種類の成分が不溶化されている必要があ
る。固相上に免疫複合体を捕捉後、工程（Ｄ）に移行す
る前に固相を洗浄することが好ましい。
好ましく、例えば、免疫複合体と固相上の成分との結合
に関与する官能基と同一部位あるいは類似構造を有する
物質を大過剰に加えることで達成される。免疫複合体の
第２固相への結合は、固相上に不溶化された、複合体中
の前記官能基とは異なる部位に対して特異的に反応する
成分を介して行われる。必要であれば、あらかじめ工程
（Ａ）で用いられる成分の一つに第２固相への捕捉のた
めの官能基を導入しておいてもよい。測定すべき抗原を
含む複合体と測定すべき抗体を含む複合体において異な
る部位が捕捉のために使用される場合は、それぞれの部
位に特異的な２種類の成分が不溶化されている必要があ
る。固相上に免疫複合体を捕捉後、工程（Ｄ）に移行す
る前に固相を洗浄することが好ましい。
【００１４】工程（Ｄ）について 第２の固相上に捕捉された免疫複合体の測定を行うに
は、あらかじめ工程（Ａ）で導入された標識を用いて行
われる。標識は、従来の免疫学的測定で用いられるも
の、例えば、酵素、蛍光物質、放射性物質等が挙げられ
る。抗原を測定する系で使用される標識と抗体を測定す
る系で使用される標識は、同一でも異なっていてもよい
が、いわゆる感染の有無を判定するという目的であれば
同一である方が操作上好ましい。また、上記工程（Ａ）
〜（Ｄ）の反応は、通常の免疫学的測定に用いられる条
件下に行われる。
は、あらかじめ工程（Ａ）で導入された標識を用いて行
われる。標識は、従来の免疫学的測定で用いられるも
の、例えば、酵素、蛍光物質、放射性物質等が挙げられ
る。抗原を測定する系で使用される標識と抗体を測定す
る系で使用される標識は、同一でも異なっていてもよい
が、いわゆる感染の有無を判定するという目的であれば
同一である方が操作上好ましい。また、上記工程（Ａ）
〜（Ｄ）の反応は、通常の免疫学的測定に用いられる条
件下に行われる。
【００１５】さらに本発明は、ｐ２４抗原、抗逆転写酵
素（ＲＴ）抗体および抗ｐ１７抗体を同時に測定するこ
とによってＨＩＶ−１感染を検出する方法であって、下
記の工程（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）からなる、上記方
法に関する。 工程（Ａ）：被検液に下記成分（１）、（２）、（３）
および（４）を共に加えて、ｐ２４抗原を含む免疫複合
体および／または抗逆転写酵素（ＲＴ）抗体を含む免疫
複合体および／または抗ｐ１７抗体を含む免疫複合体を
形成せしめる工程。 （１）官能基で修飾された、ｐ２４抗原に対して特異的
に結合する成分 （２）標識された、ｐ２４抗原に対して特異的に結合す
る成分 （３）官能基で修飾された、抗逆転写酵素（ＲＴ）抗体
に対して特異的に結合する成分および官能基で修飾され
た、抗ｐ１７抗体に対して特異的に結合する成分 （４）標識された、抗逆転写酵素（ＲＴ）抗体に対して
特異的に結合する成分および標識された、抗ｐ１７抗体
に対して特異的に結合する成分 工程（Ｂ）：工程（Ａ）で形成された免疫複合体を、
（１）および（３）における官能基に対して特異的に反
応する成分を不溶化した固相上に捕捉する工程。 工程（Ｃ）：固相上に捕捉された免疫複合体を測定する
工程。 工程（Ａ）、（Ｂ）における固相上への免疫複合体の捕
捉は、免疫複合体が被検体溶液中で完成した後に固相へ
捕捉しても、始めに官能基を有する成分を固相上に捕捉
しておき、その一端に対して完成するものであってもよ
い。また、工程（Ａ）、（Ｂ）を同時に行ってもよい。
測定すべき抗原と抗体として、ｐ２４抗原、抗ｐ１７抗
体および抗ＲＴ抗体を選択した場合、免疫複合体転移法
を行わなくても転移をする前の段階である第１固相に捕
捉した状態で測定を行っても、感染を診断するに十分な
効果が得られる。
素（ＲＴ）抗体および抗ｐ１７抗体を同時に測定するこ
とによってＨＩＶ−１感染を検出する方法であって、下
記の工程（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）からなる、上記方
法に関する。 工程（Ａ）：被検液に下記成分（１）、（２）、（３）
および（４）を共に加えて、ｐ２４抗原を含む免疫複合
体および／または抗逆転写酵素（ＲＴ）抗体を含む免疫
複合体および／または抗ｐ１７抗体を含む免疫複合体を
形成せしめる工程。 （１）官能基で修飾された、ｐ２４抗原に対して特異的
に結合する成分 （２）標識された、ｐ２４抗原に対して特異的に結合す
る成分 （３）官能基で修飾された、抗逆転写酵素（ＲＴ）抗体
に対して特異的に結合する成分および官能基で修飾され
た、抗ｐ１７抗体に対して特異的に結合する成分 （４）標識された、抗逆転写酵素（ＲＴ）抗体に対して
特異的に結合する成分および標識された、抗ｐ１７抗体
に対して特異的に結合する成分 工程（Ｂ）：工程（Ａ）で形成された免疫複合体を、
（１）および（３）における官能基に対して特異的に反
応する成分を不溶化した固相上に捕捉する工程。 工程（Ｃ）：固相上に捕捉された免疫複合体を測定する
工程。 工程（Ａ）、（Ｂ）における固相上への免疫複合体の捕
捉は、免疫複合体が被検体溶液中で完成した後に固相へ
捕捉しても、始めに官能基を有する成分を固相上に捕捉
しておき、その一端に対して完成するものであってもよ
い。また、工程（Ａ）、（Ｂ）を同時に行ってもよい。
測定すべき抗原と抗体として、ｐ２４抗原、抗ｐ１７抗
体および抗ＲＴ抗体を選択した場合、免疫複合体転移法
を行わなくても転移をする前の段階である第１固相に捕
捉した状態で測定を行っても、感染を診断するに十分な
効果が得られる。
【００１６】〔実施例〕以下、本発明の有用性を説明す
るために、実施例として免疫複合体転移法により、ヒト
免疫不全ウィルス−１（ＨＩＶ−１）感染者の陽性転換
血清パネルにおけるＨＩＶ−１抗原および抗ＨＩＶ−１
抗体同時測定の例を示すが、もとより本発明はこれに限
られるものではない。
るために、実施例として免疫複合体転移法により、ヒト
免疫不全ウィルス−１（ＨＩＶ−１）感染者の陽性転換
血清パネルにおけるＨＩＶ−１抗原および抗ＨＩＶ−１
抗体同時測定の例を示すが、もとより本発明はこれに限
られるものではない。
【００１７】実験例１ 本実験では、免疫複合体転移法によりＨＩＶ−１のｐ２
４抗原および抗ｐ１７抗体、抗ＲＴ抗体の同時検出を行
った。各物質の精製・調製の詳細、および実験手順の詳
細は次の通りである。 〔各緩衝液〕 緩衝液Ａ：０．１Ｍリン酸ナトリウム、ｐＨ７．０ 緩衝液Ｂ：０．１Ｍリン酸ナトリウム、ｐＨ６．０、５
ｍＭエチレンジアミン四酢酸 緩衝液Ｃ：０．０１Ｍリン酸ナトリウム、ｐＨ７．０、
０．１ｇ／Ｌウシ血清アルブミン（フラクションＶ、イ
ンターゲン、ニューヨーク）、１ｍＭ塩化マグネシウ
ム、１ｇ／Ｌアジ化ナトリウム
４抗原および抗ｐ１７抗体、抗ＲＴ抗体の同時検出を行
った。各物質の精製・調製の詳細、および実験手順の詳
細は次の通りである。 〔各緩衝液〕 緩衝液Ａ：０．１Ｍリン酸ナトリウム、ｐＨ７．０ 緩衝液Ｂ：０．１Ｍリン酸ナトリウム、ｐＨ６．０、５
ｍＭエチレンジアミン四酢酸 緩衝液Ｃ：０．０１Ｍリン酸ナトリウム、ｐＨ７．０、
０．１ｇ／Ｌウシ血清アルブミン（フラクションＶ、イ
ンターゲン、ニューヨーク）、１ｍＭ塩化マグネシウ
ム、１ｇ／Ｌアジ化ナトリウム
【００１８】〔遺伝子組み換えＨＩＶ−１抗原〕遺伝子
組み換えｐ１７（ｒｐ１７）、遺伝子組み換えｐ２４
（ｒｐ２４）および遺伝子組み換え逆転写酵素（ｒＲ
Ｔ）は、これら蛋白質をコードするｃＤＮＡを含む発現
プラスミドを大腸菌に組み込んで発現させた後、塩析や
カラムクロマトグラフィー法にて精製を行うことにより
調製した。各蛋白質の調製法は、ｒｐ１７に関しては、
〔斉藤ら、マイクロバイオロジー・アンド・イムノロジ
ー（Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．＆ Ｉｍｍｕｎｏｌ．）、第
３６巻、第１０５頁（１９９２）〕および〔橋田ら、ジ
ャーナル・オブ・クリニカル・ラボラトリー・アナリシ
ス（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ａｎａｌ．）、第７巻、第
３５３頁（１９９３）〕に、ｒｐ２４に関しては、〔田
中ら、マイクロバイオロジー・アンド・イムノロジー
（Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．＆ Ｉｍｍｕｎｏｌ．）、第３
６巻、第８２３頁（１９９２）〕に、ｒＲＴに関して
は、〔斉藤ら、マイクロバイオロジー・アンド・イムノ
ロジー（Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．＆ Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．）、第３４巻、第５０９頁（１９９０）〕に記載の
公知の方法に従った。
組み換えｐ１７（ｒｐ１７）、遺伝子組み換えｐ２４
（ｒｐ２４）および遺伝子組み換え逆転写酵素（ｒＲ
Ｔ）は、これら蛋白質をコードするｃＤＮＡを含む発現
プラスミドを大腸菌に組み込んで発現させた後、塩析や
カラムクロマトグラフィー法にて精製を行うことにより
調製した。各蛋白質の調製法は、ｒｐ１７に関しては、
〔斉藤ら、マイクロバイオロジー・アンド・イムノロジ
ー（Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．＆ Ｉｍｍｕｎｏｌ．）、第
３６巻、第１０５頁（１９９２）〕および〔橋田ら、ジ
ャーナル・オブ・クリニカル・ラボラトリー・アナリシ
ス（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ａｎａｌ．）、第７巻、第
３５３頁（１９９３）〕に、ｒｐ２４に関しては、〔田
中ら、マイクロバイオロジー・アンド・イムノロジー
（Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．＆ Ｉｍｍｕｎｏｌ．）、第３
６巻、第８２３頁（１９９２）〕に、ｒＲＴに関して
は、〔斉藤ら、マイクロバイオロジー・アンド・イムノ
ロジー（Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．＆ Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．）、第３４巻、第５０９頁（１９９０）〕に記載の
公知の方法に従った。
【００１９】〔ウサギ抗ｒｐ２４抗血清の作製〕ｒｐ２
４を０．２ｍｇ含む生理食塩水０．５ｍｌをフロイント
の完全アジュバンド０．５ｍｌに懸濁し、雌のウサギ
（ニュー・ジーランド・アルビノ・ラビット）の皮内に
注射した。その後、３週間間隔で３回、ｒｐ２４を０．
２ｍｇ含む生理食塩水０．５ｍｌをフロイントの不完全
アジュバンド０．５ｍｌに懸濁したものを、同様に注射
した。最後の注射から２週間目に採血を行い、抗ｒｐ２
４抗血清を得た。
４を０．２ｍｇ含む生理食塩水０．５ｍｌをフロイント
の完全アジュバンド０．５ｍｌに懸濁し、雌のウサギ
（ニュー・ジーランド・アルビノ・ラビット）の皮内に
注射した。その後、３週間間隔で３回、ｒｐ２４を０．
２ｍｇ含む生理食塩水０．５ｍｌをフロイントの不完全
アジュバンド０．５ｍｌに懸濁したものを、同様に注射
した。最後の注射から２週間目に採血を行い、抗ｒｐ２
４抗血清を得た。
【００２０】〔抗体の精製〕ウサギ抗ｒｐ２４抗血清お
よびウサギ抗２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清アル
ブミン抗血清（シバヤギ、群馬）より塩析とイオン交換
クロマトグラフィーを用いる公知の方法〔石川ら、ジャ
ーナル・オブ・イムノアッセイ（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏａｓ
ｓａｙ）、第４巻、第２０９頁（１９８３）〕にて抗ｒ
ｐ２４抗体および抗２，４−ジニトロフェニル−ウシ血
清アルブミン抗体をそれぞれ精製した。
よびウサギ抗２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清アル
ブミン抗血清（シバヤギ、群馬）より塩析とイオン交換
クロマトグラフィーを用いる公知の方法〔石川ら、ジャ
ーナル・オブ・イムノアッセイ（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏａｓ
ｓａｙ）、第４巻、第２０９頁（１９８３）〕にて抗ｒ
ｐ２４抗体および抗２，４−ジニトロフェニル−ウシ血
清アルブミン抗体をそれぞれ精製した。
【００２１】〔チオール基導入蛋白質の調製〕蛋白質へ
のチオール基の導入は、蛋白質のアミノ基を介してＮ−
サクシニミジル−Ｓ−アセチルメルカプトアセテート
（ベーリンガー・マンハイム、ドイツ）を反応させる公
知の方法〔橋田ら、ジャーナル・オブ・クリニカル・ラ
ボラトリー・アナリシス（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ａｎ
ａｌ．）、第８巻、第８６頁（１９９４）〕にて行っ
た。
のチオール基の導入は、蛋白質のアミノ基を介してＮ−
サクシニミジル−Ｓ−アセチルメルカプトアセテート
（ベーリンガー・マンハイム、ドイツ）を反応させる公
知の方法〔橋田ら、ジャーナル・オブ・クリニカル・ラ
ボラトリー・アナリシス（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ａｎ
ａｌ．）、第８巻、第８６頁（１９９４）〕にて行っ
た。
【００２２】〔マレイミド基導入蛋白質の調製〕蛋白質
へのマレイミド基の導入は、蛋白質のアミノ基を介して
Ｎ−サクシニミジル−６−マレイミドヘキサノエート
（同仁化学研究所、熊本）を反応させる公知の方法〔橋
田ら、ジャーナル・オブ・クリニカル・ラボラトリー・
アナリシス、（前出）〕にて行った。
へのマレイミド基の導入は、蛋白質のアミノ基を介して
Ｎ−サクシニミジル−６−マレイミドヘキサノエート
（同仁化学研究所、熊本）を反応させる公知の方法〔橋
田ら、ジャーナル・オブ・クリニカル・ラボラトリー・
アナリシス、（前出）〕にて行った。
【００２３】〔抗体のアフィニティー精製〕 （１）ｒｐ２４−ウサギ非特異ＩｇＧの調製 チオール基を導入したｒｐ２４と、マレイミド基を導入
したウサギ非特異ＩｇＧとを反応させる方法にて調製し
た。ＩｇＧ１分子あたりに結合したｒｐ２４の平均分子
数は、２．５分子であった。 （２）２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清アルブミン
の調製 チオール基を導入したウシ血清アルブミンに、Ｎ−サク
シニミジル−６−マレイミドヘキサノエートを介してε
Ｎ−２，４−ジニトロフェニル−Ｌ−リジンを反応させ
る公知の方法〔橋田ら、ジャーナル・オブ・クリニカル
・ラボラトリー・アナリシス（前出）〕により２，４−
ジニトロフェニル−ウシ血清アルブミンを調製した。ウ
シ血清アルブミン１分子あたりに結合した２，４−ジニ
トロフェニル基の平均の数は６個であった。 （３）蛋白−セファローズ４Ｂの調製 ウサギ非特異ＩｇＧ−ｒｐ２４、２，４−ジニトロフェ
ニル−ウシ血清アルブミン、およびヒトＩｇＧ各々は、
ファルマシア（ウプサラ、スウェーデン）の手引書に従
ってＣＮＢｒ−活性化セファローズ４Ｂに不溶化した。 （４）抗ｒｐ２４抗体（Ｆ（ａｂ’）2 ）、抗２，４−
ジニトロフェニル−ウシ血清アルブミン抗体（ＩｇＧ）
およびウサギ抗ヒトＩｇＧγ鎖抗体（ＩｇＧ）（医学生
物学研究所、名古屋）はそれぞれウサギ非特異ＩｇＧ−
ｒｐ２４、２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清アルブ
ミンおよびヒトＩｇＧ不溶化セファローズ４Ｂカラムに
吸着後、ｐＨ２．５で溶出する公知の方法〔河野ら、ジ
ャーナル・オブ・バイオケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．）、第１００巻、第１２４７頁（１９８６）〕、
〔橋田ら、アナリティカル・レターズ（Ａｎａｌ．Ｌｅ
ｔｔ．）、第１６巻、第３１頁（１９８３）〕によりア
フィニティー精製した。
したウサギ非特異ＩｇＧとを反応させる方法にて調製し
た。ＩｇＧ１分子あたりに結合したｒｐ２４の平均分子
数は、２．５分子であった。 （２）２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清アルブミン
の調製 チオール基を導入したウシ血清アルブミンに、Ｎ−サク
シニミジル−６−マレイミドヘキサノエートを介してε
Ｎ−２，４−ジニトロフェニル−Ｌ−リジンを反応させ
る公知の方法〔橋田ら、ジャーナル・オブ・クリニカル
・ラボラトリー・アナリシス（前出）〕により２，４−
ジニトロフェニル−ウシ血清アルブミンを調製した。ウ
シ血清アルブミン１分子あたりに結合した２，４−ジニ
トロフェニル基の平均の数は６個であった。 （３）蛋白−セファローズ４Ｂの調製 ウサギ非特異ＩｇＧ−ｒｐ２４、２，４−ジニトロフェ
ニル−ウシ血清アルブミン、およびヒトＩｇＧ各々は、
ファルマシア（ウプサラ、スウェーデン）の手引書に従
ってＣＮＢｒ−活性化セファローズ４Ｂに不溶化した。 （４）抗ｒｐ２４抗体（Ｆ（ａｂ’）2 ）、抗２，４−
ジニトロフェニル−ウシ血清アルブミン抗体（ＩｇＧ）
およびウサギ抗ヒトＩｇＧγ鎖抗体（ＩｇＧ）（医学生
物学研究所、名古屋）はそれぞれウサギ非特異ＩｇＧ−
ｒｐ２４、２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清アルブ
ミンおよびヒトＩｇＧ不溶化セファローズ４Ｂカラムに
吸着後、ｐＨ２．５で溶出する公知の方法〔河野ら、ジ
ャーナル・オブ・バイオケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．）、第１００巻、第１２４７頁（１９８６）〕、
〔橋田ら、アナリティカル・レターズ（Ａｎａｌ．Ｌｅ
ｔｔ．）、第１６巻、第３１頁（１９８３）〕によりア
フィニティー精製した。
【００２４】〔アフィニティー精製抗２，４−ジニトロ
フェニル基抗体不溶化ポリスチレンビーズの調製〕着色
ポリスチレンビーズ（直径３．２ｍｍ、イムノケミカ
ル、岡山）をアフィニティー精製ウサギ抗ジニトロフェ
ニル−ウシ血清アルブミン抗体０．１ｇ／Ｌを含む緩衝
液Ａ中に浸し４℃で一晩静置して物理的吸着により不溶
化した。
フェニル基抗体不溶化ポリスチレンビーズの調製〕着色
ポリスチレンビーズ（直径３．２ｍｍ、イムノケミカ
ル、岡山）をアフィニティー精製ウサギ抗ジニトロフェ
ニル−ウシ血清アルブミン抗体０．１ｇ／Ｌを含む緩衝
液Ａ中に浸し４℃で一晩静置して物理的吸着により不溶
化した。
【００２５】〔アフィニティー精製抗ヒトＩｇＧγ鎖抗
体およびストレプトアビジン不溶化ポリスチレンビーズ
の調製〕 （１）ビオチニル−ウシ血清アルブミンの調製 マレイミド基を導入したウシ血清アルブミンにＮ−ビオ
チニル−２−メルカプトエチルアミンを反応させる公知
の方法〔河野ら、ジャーナル・オブ・クリニカル・ラボ
ラトリー・アナリシス（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ａｎａ
ｌ．）、第２巻、第１９頁（１９８８）〕にて、ビオチ
ニル−ウシ血清アルブミンを調製した。ウシ血清アルブ
ミン１分子あたりに導入されたビオチンの平均の数は１
３個であった。 （２）アフィニティー精製抗ヒトＩｇＧγ鎖抗体および
ストレプトアビジン不溶化ポリスチレンビーズの調製 白色ポリスチレンビーズ（直径３．２ｍｍ、イムノケミ
カル、岡山）をアフィニティー精製抗ヒトＩｇＧγ鎖抗
体０．１ｇ／Ｌおよびビオチニル−ウシ血清アルブミン
０．０１ｇ／Ｌを同時に含む緩衝液Ａ中に浸し４℃で一
晩静置して物理的吸着により不溶化した。続いて洗浄
後、ストレプトアビジン０．１ｇ／Ｌを含む緩衝液Ａと
反応させて調製した。
体およびストレプトアビジン不溶化ポリスチレンビーズ
の調製〕 （１）ビオチニル−ウシ血清アルブミンの調製 マレイミド基を導入したウシ血清アルブミンにＮ−ビオ
チニル−２−メルカプトエチルアミンを反応させる公知
の方法〔河野ら、ジャーナル・オブ・クリニカル・ラボ
ラトリー・アナリシス（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ａｎａ
ｌ．）、第２巻、第１９頁（１９８８）〕にて、ビオチ
ニル−ウシ血清アルブミンを調製した。ウシ血清アルブ
ミン１分子あたりに導入されたビオチンの平均の数は１
３個であった。 （２）アフィニティー精製抗ヒトＩｇＧγ鎖抗体および
ストレプトアビジン不溶化ポリスチレンビーズの調製 白色ポリスチレンビーズ（直径３．２ｍｍ、イムノケミ
カル、岡山）をアフィニティー精製抗ヒトＩｇＧγ鎖抗
体０．１ｇ／Ｌおよびビオチニル−ウシ血清アルブミン
０．０１ｇ／Ｌを同時に含む緩衝液Ａ中に浸し４℃で一
晩静置して物理的吸着により不溶化した。続いて洗浄
後、ストレプトアビジン０．１ｇ／Ｌを含む緩衝液Ａと
反応させて調製した。
【００２６】〔２，４−ジニトロフェニル−ビオチニル
−ウシ血清アルブミン−アフィニティー精製抗ｒｐ２４
Ｆａｂ’の調製〕 （１）メルカプトアセチル−２，４−ジニトロフェニル
−ウシ血清アルブミンの調製 ２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清アルブミンにＮ−
サクシニミジル−Ｓ−アセチルメルカプトアセテートを
反応させてチオール基を導入した。アルブミン１分子当
たりにたチオール基の平均の数は、５．２個であった。 （２）６−マレイミドヘキサノイル−ビオシチンの調製 ビオシチン（シグマ、ミズーリ州、米国）７．５μｍｏ
ｌを含む緩衝液Ａ０．４５ｍｌとＮ−サクシニミジル−
６−マレイミドヘキサノエート５μｍｏｌを含むＮ，Ｎ
−ジメチルホルムアミド０．０５ｍｌを混合し、３０℃
で３０分反応させて、６−マレイミドヘキサノイル−ビ
オシチンを調製した。 （３）２，４−ジニトロフェニル−ビオチニル−ウシ血
清アルブミンの調製 メルカプトアセチル−２，４−ジニトロフェニル−ウシ
血清アルブミン６．６ｍｇ（０．１μｍｏｌ）を含む緩
衝液Ｂ０．１ｍｌと（２）の６−マレイミドヘキサノイ
ル−ビオシチン溶液０．２ｍｌ（２μｍｏｌ）を混合
し、３０℃で３０分反応させた。反応後、Ｎ−エチルマ
レイミド５μｍｏｌを含む緩衝液Ｂを０．０５ｍｌを添
加し、３０℃で１５分反応させた。その後、セファデッ
クスＧ−５０（ファイン、ファルマシア）を用い、緩衝
液Ａでゲル濾過精製を行った。アルブミン１分子あたり
導入されたビオシチン分子の平均の数は５．２個だっ
た。 （４）６−マレイミドヘキサノイル−２，４−ジニトロ
フェニル−ビオチニル−ウシ血清アルブミンの調製 ２，４−ジニトロフェニル−ビオチニル−ウシ血清アル
ブミンにＮ−サクシニミジル−６−マレイミドヘキサノ
エートを用いてマレイミド基を導入した。アルブミン１
分子あたりに導入されたマレイミド基の平均の数は３．
９個だった。 （５）アフィニティー精製抗ｒｐ２４Ｆａｂ’の調製 アフィニティー精製抗ｒｐ２４Ｆ（ａｂ’）2 を２−メ
ルカプトエチルアミンで還元する公知の方法〔石川ら、
ジャーナル・オブ・イムノアッセイ（前出）〕にて抗ｒ
ｐ２４Ｆａｂ’を調製した。 （６）２，４−ジニトロフェニル−ビオチニル−ウシ血
清アルブミン−アフィニティー精製抗ｒｐ２４Ｆａｂ’
の調製 アフィニティー精製抗ｒｐ２４Ｆａｂ’０．６１ｍｇ
（１３ｎｍｏｌ）を含む緩衝液Ｂ０．６ｍｌと６−マレ
イミドヘキサノイル−２，４−ジニトロフェニル−ビオ
チニル−ウシ血清アルブミン０．１７ｍｇ（２．６ｎｍ
ｏｌ）を含む緩衝液Ｂ０．１ｍｌを混合し、４℃で２０
時間反応させた。反応後、１μｍｏｌの２−メルカプト
エチルアミンを含む緩衝液Ｂを０．０１ｍｌ添加し、３
０℃で１５分反応させ、さらに２μｍｏｌのＮ−エチル
マレイミドを含む緩衝液Ｂを０．０２ｍｌ添加し、３０
℃で１５分反応させた。続いて反応液をウルトロゲルＡ
ｃＡ３４（ＩＢＦ・バイオテクニクス、フランス）にア
プライし、０．１Ｍ塩化ナトリウムを含む０．０１Ｍリ
ン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．０を用いて溶出し、ゲ
ル濾過精製を行った。アルブミン１分子あたりに結合し
た抗ｒｐ２４Ｆａｂ’の平均の数は２．０分子だった。
−ウシ血清アルブミン−アフィニティー精製抗ｒｐ２４
Ｆａｂ’の調製〕 （１）メルカプトアセチル−２，４−ジニトロフェニル
−ウシ血清アルブミンの調製 ２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清アルブミンにＮ−
サクシニミジル−Ｓ−アセチルメルカプトアセテートを
反応させてチオール基を導入した。アルブミン１分子当
たりにたチオール基の平均の数は、５．２個であった。 （２）６−マレイミドヘキサノイル−ビオシチンの調製 ビオシチン（シグマ、ミズーリ州、米国）７．５μｍｏ
ｌを含む緩衝液Ａ０．４５ｍｌとＮ−サクシニミジル−
６−マレイミドヘキサノエート５μｍｏｌを含むＮ，Ｎ
−ジメチルホルムアミド０．０５ｍｌを混合し、３０℃
で３０分反応させて、６−マレイミドヘキサノイル−ビ
オシチンを調製した。 （３）２，４−ジニトロフェニル−ビオチニル−ウシ血
清アルブミンの調製 メルカプトアセチル−２，４−ジニトロフェニル−ウシ
血清アルブミン６．６ｍｇ（０．１μｍｏｌ）を含む緩
衝液Ｂ０．１ｍｌと（２）の６−マレイミドヘキサノイ
ル−ビオシチン溶液０．２ｍｌ（２μｍｏｌ）を混合
し、３０℃で３０分反応させた。反応後、Ｎ−エチルマ
レイミド５μｍｏｌを含む緩衝液Ｂを０．０５ｍｌを添
加し、３０℃で１５分反応させた。その後、セファデッ
クスＧ−５０（ファイン、ファルマシア）を用い、緩衝
液Ａでゲル濾過精製を行った。アルブミン１分子あたり
導入されたビオシチン分子の平均の数は５．２個だっ
た。 （４）６−マレイミドヘキサノイル−２，４−ジニトロ
フェニル−ビオチニル−ウシ血清アルブミンの調製 ２，４−ジニトロフェニル−ビオチニル−ウシ血清アル
ブミンにＮ−サクシニミジル−６−マレイミドヘキサノ
エートを用いてマレイミド基を導入した。アルブミン１
分子あたりに導入されたマレイミド基の平均の数は３．
９個だった。 （５）アフィニティー精製抗ｒｐ２４Ｆａｂ’の調製 アフィニティー精製抗ｒｐ２４Ｆ（ａｂ’）2 を２−メ
ルカプトエチルアミンで還元する公知の方法〔石川ら、
ジャーナル・オブ・イムノアッセイ（前出）〕にて抗ｒ
ｐ２４Ｆａｂ’を調製した。 （６）２，４−ジニトロフェニル−ビオチニル−ウシ血
清アルブミン−アフィニティー精製抗ｒｐ２４Ｆａｂ’
の調製 アフィニティー精製抗ｒｐ２４Ｆａｂ’０．６１ｍｇ
（１３ｎｍｏｌ）を含む緩衝液Ｂ０．６ｍｌと６−マレ
イミドヘキサノイル−２，４−ジニトロフェニル−ビオ
チニル−ウシ血清アルブミン０．１７ｍｇ（２．６ｎｍ
ｏｌ）を含む緩衝液Ｂ０．１ｍｌを混合し、４℃で２０
時間反応させた。反応後、１μｍｏｌの２−メルカプト
エチルアミンを含む緩衝液Ｂを０．０１ｍｌ添加し、３
０℃で１５分反応させ、さらに２μｍｏｌのＮ−エチル
マレイミドを含む緩衝液Ｂを０．０２ｍｌ添加し、３０
℃で１５分反応させた。続いて反応液をウルトロゲルＡ
ｃＡ３４（ＩＢＦ・バイオテクニクス、フランス）にア
プライし、０．１Ｍ塩化ナトリウムを含む０．０１Ｍリ
ン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．０を用いて溶出し、ゲ
ル濾過精製を行った。アルブミン１分子あたりに結合し
た抗ｒｐ２４Ｆａｂ’の平均の数は２．０分子だった。
【００２７】〔β−Ｄ−ガラクトシダーゼ−アフィニテ
ィー精製抗ｒｐ２４Ｆａｂ’の調製〕大腸菌由来のβ−
Ｄ−ガラクトシダーゼ（ベーリンガー・マンハイム、ド
イツ）にＮ，Ｎ−ｏ−フェニレンジマレイミドを用いて
マレイミド基を導入し、アフィニティー精製ウサギ抗ｒ
ｐ２４Ｆａｂ’と反応させる公知の方法〔石川ら、ジャ
ーナル・オブ・イムノアッセイ、（前出）〕にて調製し
た。β−Ｄ−ガラクトシダーゼ１分子あたりに結合した
アフィニティー精製抗ｒｐ２４Ｆａｂ’の平均の数は、
１．５分子であった。
ィー精製抗ｒｐ２４Ｆａｂ’の調製〕大腸菌由来のβ−
Ｄ−ガラクトシダーゼ（ベーリンガー・マンハイム、ド
イツ）にＮ，Ｎ−ｏ−フェニレンジマレイミドを用いて
マレイミド基を導入し、アフィニティー精製ウサギ抗ｒ
ｐ２４Ｆａｂ’と反応させる公知の方法〔石川ら、ジャ
ーナル・オブ・イムノアッセイ、（前出）〕にて調製し
た。β−Ｄ−ガラクトシダーゼ１分子あたりに結合した
アフィニティー精製抗ｒｐ２４Ｆａｂ’の平均の数は、
１．５分子であった。
【００２８】〔２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清ア
ルブミン−ｒｐ１７の調製〕マレイミド基を導入した
２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清アルブミンとチオ
ール基を導入したｒｐ１７を反応させ２，４−ジニトロ
フェニル−ウシ血清アルブミン−ｒｐ１７を調製した。
アルブミン１分子あたりに結合したｒｐ１７の平均の数
は２．８分子であった。
ルブミン−ｒｐ１７の調製〕マレイミド基を導入した
２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清アルブミンとチオ
ール基を導入したｒｐ１７を反応させ２，４−ジニトロ
フェニル−ウシ血清アルブミン−ｒｐ１７を調製した。
アルブミン１分子あたりに結合したｒｐ１７の平均の数
は２．８分子であった。
【００２９】〔２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清ア
ルブミン−ｒＲＴの調製〕マレイミド基を導入した２，
４−ジニトロフェニル−ウシ血清アルブミンとチオール
基を導入したｒＲＴを反応させ２，４−ジニトロフェニ
ル−ウシ血清アルブミン−ｒＲＴを調製した。アルブミ
ン１分子あたりに結合したｒＲＴの平均の数は１．９分
子であった。
ルブミン−ｒＲＴの調製〕マレイミド基を導入した２，
４−ジニトロフェニル−ウシ血清アルブミンとチオール
基を導入したｒＲＴを反応させ２，４−ジニトロフェニ
ル−ウシ血清アルブミン−ｒＲＴを調製した。アルブミ
ン１分子あたりに結合したｒＲＴの平均の数は１．９分
子であった。
【００３０】〔β−Ｄ−ガラクトシダーゼ−ｒｐ１７の
調製〕Ｎ，Ｎ−ｏ−フェニレンジマレイミドを用いてマ
レイミド基を導入したβ−Ｄ−ガラクトシダーゼとチオ
ール基を導入したｒｐ１７を反応させβ−Ｄ−ガラクト
シダーゼ−ｒｐ１７を調製した。β−Ｄ−ガラクトシダ
ーゼ１分子あたりに結合したｒｐ１７の平均の数は２．
５分子であった。
調製〕Ｎ，Ｎ−ｏ−フェニレンジマレイミドを用いてマ
レイミド基を導入したβ−Ｄ−ガラクトシダーゼとチオ
ール基を導入したｒｐ１７を反応させβ−Ｄ−ガラクト
シダーゼ−ｒｐ１７を調製した。β−Ｄ−ガラクトシダ
ーゼ１分子あたりに結合したｒｐ１７の平均の数は２．
５分子であった。
【００３１】〔β−Ｄ−ガラクトシダーゼ−ｒＲＴの調
製〕 （１）マレイミド−β−Ｄ−ガラクトシダーゼの調製 β−Ｄ−ガラクトシダーゼ２．５ｍｇ（４．６ｎｍｏ
ｌ）を含む緩衝液Ａ０．１９ｍｌに４，４’−ジチオジ
ピリジン（ナカライテスク、京都）４００ｎｍｏｌを含
むＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド０．０１ｍｌを添加
し、３０℃で１５分インキュベートした。セファデック
スＧ−５０（ファルマシア）でゲル濾過精製を行った
後、Ｎ−サクシニミジル−６−マレイミドヘキサノエー
トでマレイミド基を導入した。β−Ｄ−ガラクトシダー
ゼ１分子あたりに導入されたマレイミド基の平均の数は
１．５個であった。 （２）β−Ｄ−ガラクトシダーゼ−ｒＲＴの調製 マレイミド−β−Ｄ−ガラクトシダーゼとチオール基を
導入したｒＲＴを反応させてβ−Ｄ−ガラクトシダーゼ
−ｒＲＴを調製した。β−Ｄ−ガラクトシダーゼ１分子
あたりに結合したｒＲＴの平均の数は１．５個であっ
た。
製〕 （１）マレイミド−β−Ｄ−ガラクトシダーゼの調製 β−Ｄ−ガラクトシダーゼ２．５ｍｇ（４．６ｎｍｏ
ｌ）を含む緩衝液Ａ０．１９ｍｌに４，４’−ジチオジ
ピリジン（ナカライテスク、京都）４００ｎｍｏｌを含
むＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド０．０１ｍｌを添加
し、３０℃で１５分インキュベートした。セファデック
スＧ−５０（ファルマシア）でゲル濾過精製を行った
後、Ｎ−サクシニミジル−６−マレイミドヘキサノエー
トでマレイミド基を導入した。β−Ｄ−ガラクトシダー
ゼ１分子あたりに導入されたマレイミド基の平均の数は
１．５個であった。 （２）β−Ｄ−ガラクトシダーゼ−ｒＲＴの調製 マレイミド−β−Ｄ−ガラクトシダーゼとチオール基を
導入したｒＲＴを反応させてβ−Ｄ−ガラクトシダーゼ
−ｒＲＴを調製した。β−Ｄ−ガラクトシダーゼ１分子
あたりに結合したｒＲＴの平均の数は１．５個であっ
た。
【００３２】〔ＨＩＶ−１陽性転換血清パネル〕ＨＩＶ
−１陽性転換血清パネルは、ノース・アメリカン・バイ
オロジカルス社（フロリダ州、米国）およびボストン・
バイオメディカ社（マサチューセッツ州、米国）より購
入した。
−１陽性転換血清パネルは、ノース・アメリカン・バイ
オロジカルス社（フロリダ州、米国）およびボストン・
バイオメディカ社（マサチューセッツ州、米国）より購
入した。
【００３３】〔β−Ｄ−ガラクトシダーゼの活性測定〕
β−Ｄ−ガラクトシダーゼの測定は、４−メチルウンベ
リフェリルガラクトシドを基質とする公知の方法〔石川
ら、ジャーナル・オブ・イムノアッセイ、（前出）〕で
反応させ、生成した４−メチルウンベリフェロンの蛍光
強度を分光蛍光光度計（ＲＦ−５１０、島津製作所、京
都）で測定した。蛍光値は、１×１０-8Ｍの４−メチル
ウンベリフェロンの示す蛍光強度を１００として補正を
行った。
β−Ｄ−ガラクトシダーゼの測定は、４−メチルウンベ
リフェリルガラクトシドを基質とする公知の方法〔石川
ら、ジャーナル・オブ・イムノアッセイ、（前出）〕で
反応させ、生成した４−メチルウンベリフェロンの蛍光
強度を分光蛍光光度計（ＲＦ−５１０、島津製作所、京
都）で測定した。蛍光値は、１×１０-8Ｍの４−メチル
ウンベリフェロンの示す蛍光強度を１００として補正を
行った。
【００３４】〔免疫複合体転移法による血清検体中のｐ
２４抗原および抗ｐ１７抗体、抗ＲＴ抗体の同時測定〕
血清検体０．０１ｍｌを０．４Ｍ塩化ナトリウム、１０
０ｆｍｏｌの抗ｐ２４Ｆａｂ’コンジュゲート（２，４
−ジニトロフェニル−ビオチニル−ウシ血清アルブミン
−アフィニティ精製抗ｐ２４Ｆａｂ’およびβ−Ｄ−ガ
ラクトシダーゼ−アフィニティ精製抗ｐ２４Ｆａ
ｂ’）、３０ｆｍｏｌのｒｐ１７、ｒＲＴコンジュゲー
ト（２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清アルブミン−
ｒｐ１７、−ｒＲＴおよびβ−Ｄ−ガラクトシダーゼ−
ｒｐ１７、−ｒＲＴ）、０．１ｍｇのウサギ非特異Ｆ
（ａｂ’）2 および０．０５ｍｇの不活化β−Ｄ−ガラ
クトシダーゼ（ムテイン、ベーリンガー・マイハイム）
を含む緩衝液Ｃ、０．１４ｍｌと混合した溶液にアフィ
ニティ精製抗２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清アル
ブミン抗体不溶化着色ポリスチレンビーズ２個を添加
し、室温で一晩インキュベートした。反応後、反応液を
除去し、ポリスチレンビーズを０．１Ｍ塩化ナトリウム
を含む緩衝液Ｃ、２ｍｌで２回洗浄した。続いて、着色
ポリスチレンビーズは０．１Ｍ塩化ナトリウム、１ｍＭ
εＮ−２，４−ジニトロフェニル−Ｌ−リジンを含む緩
衝液Ｃ、０．１５ｍｌ中でストレプトアビジンおよびア
フィニティ精製抗ヒトＩｇＧγ鎖抗体不溶化白色ポリス
チレンビーズとともに室温で３時間インキュベートし
た。反応後、白色ポリスチレンビーズを前述と同様の方
法で洗浄し、結合したβ−Ｄ−ガラクトシダーゼの活性
を３０℃、２．５時間で測定した。結果をカットオフイ
ンデックスにより図４、５のＤにおよび相対蛍光強度に
より図６のＡに示す。
２４抗原および抗ｐ１７抗体、抗ＲＴ抗体の同時測定〕
血清検体０．０１ｍｌを０．４Ｍ塩化ナトリウム、１０
０ｆｍｏｌの抗ｐ２４Ｆａｂ’コンジュゲート（２，４
−ジニトロフェニル−ビオチニル−ウシ血清アルブミン
−アフィニティ精製抗ｐ２４Ｆａｂ’およびβ−Ｄ−ガ
ラクトシダーゼ−アフィニティ精製抗ｐ２４Ｆａ
ｂ’）、３０ｆｍｏｌのｒｐ１７、ｒＲＴコンジュゲー
ト（２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清アルブミン−
ｒｐ１７、−ｒＲＴおよびβ−Ｄ−ガラクトシダーゼ−
ｒｐ１７、−ｒＲＴ）、０．１ｍｇのウサギ非特異Ｆ
（ａｂ’）2 および０．０５ｍｇの不活化β−Ｄ−ガラ
クトシダーゼ（ムテイン、ベーリンガー・マイハイム）
を含む緩衝液Ｃ、０．１４ｍｌと混合した溶液にアフィ
ニティ精製抗２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清アル
ブミン抗体不溶化着色ポリスチレンビーズ２個を添加
し、室温で一晩インキュベートした。反応後、反応液を
除去し、ポリスチレンビーズを０．１Ｍ塩化ナトリウム
を含む緩衝液Ｃ、２ｍｌで２回洗浄した。続いて、着色
ポリスチレンビーズは０．１Ｍ塩化ナトリウム、１ｍＭ
εＮ−２，４−ジニトロフェニル−Ｌ−リジンを含む緩
衝液Ｃ、０．１５ｍｌ中でストレプトアビジンおよびア
フィニティ精製抗ヒトＩｇＧγ鎖抗体不溶化白色ポリス
チレンビーズとともに室温で３時間インキュベートし
た。反応後、白色ポリスチレンビーズを前述と同様の方
法で洗浄し、結合したβ−Ｄ−ガラクトシダーゼの活性
を３０℃、２．５時間で測定した。結果をカットオフイ
ンデックスにより図４、５のＤにおよび相対蛍光強度に
より図６のＡに示す。
【００３５】比較例１ 本比較例では、免疫複合体転移法によりＨＩＶ−１のｐ
２４抗原の検出を行った。各物質の精製・調製の詳細は
下記以外、実験例１と全て同じである。 〔ストレプトアビジン不溶化ポリスチレンビーズの調
製〕白色ポリスチレンビーズ（直径３．２ｍｍ、イムノ
ケミカル、岡山）をビオチニル−ウシ血清アルブミン
０．１ｇ／Ｌを含む緩衝液Ａ中に浸し４℃で一晩静置し
て物理的吸着により不溶化した。続いて洗浄後、ストレ
プトアビジン０．１ｇ／Ｌを含む緩衝液Ｃと反応させて
調製した。
２４抗原の検出を行った。各物質の精製・調製の詳細は
下記以外、実験例１と全て同じである。 〔ストレプトアビジン不溶化ポリスチレンビーズの調
製〕白色ポリスチレンビーズ（直径３．２ｍｍ、イムノ
ケミカル、岡山）をビオチニル−ウシ血清アルブミン
０．１ｇ／Ｌを含む緩衝液Ａ中に浸し４℃で一晩静置し
て物理的吸着により不溶化した。続いて洗浄後、ストレ
プトアビジン０．１ｇ／Ｌを含む緩衝液Ｃと反応させて
調製した。
【００３６】〔血清検体におけるｐ２４抗原の測定〕血
清検体０．０１ｍｌを０．４Ｍ塩化ナトリウム、各々１
００ｆｍｏｌの２，４−ジニトロフェニル−ビオチニル
−ウシ血清アルブミン−アフィニティ精製抗ｐ２４Ｆａ
ｂ’およびβ−Ｄ−ガラクトシダーゼ−アフィニティ精
製抗ｐ２４Ｆａｂ’、０．１ｍｇのウサギ非特異Ｆ（ａ
ｂ’）2 を含む緩衝液Ｃ、０．１４ｍｌと混合した溶液
にアフィニティ精製抗２，４−ジニトロフェニル−ウシ
血清アルブミン抗体不溶化着色ポリスチレンビーズ２個
を添加し、室温で４時間インキュベートした。反応後、
反応液を除去し、ポリスチレンビーズを０．１Ｍ塩化ナ
トリウムを含む緩衝液Ｃ、２ｍｌで２回洗浄した。続い
て、着色ポリスチレンビーズは０．１Ｍ塩化ナトリウ
ム、１ｍＭεＮ−２，４−ジニトロフェニル−Ｌ−リジ
ンを含む緩衝液Ｃ、０．１５ｍｌ中でストレプトアビジ
ン不溶化白色ポリスチレンビーズとともに室温で３時間
インキュベートした。反応後、白色ポリスチレンビーズ
を前述と同様の方法で洗浄し、結合したβ−Ｄ−ガラク
トシダーゼの活性を３０℃、２．５時間で測定した。結
果をカットオフインデックスにより図４、５のＤに示し
た。
清検体０．０１ｍｌを０．４Ｍ塩化ナトリウム、各々１
００ｆｍｏｌの２，４−ジニトロフェニル−ビオチニル
−ウシ血清アルブミン−アフィニティ精製抗ｐ２４Ｆａ
ｂ’およびβ−Ｄ−ガラクトシダーゼ−アフィニティ精
製抗ｐ２４Ｆａｂ’、０．１ｍｇのウサギ非特異Ｆ（ａ
ｂ’）2 を含む緩衝液Ｃ、０．１４ｍｌと混合した溶液
にアフィニティ精製抗２，４−ジニトロフェニル−ウシ
血清アルブミン抗体不溶化着色ポリスチレンビーズ２個
を添加し、室温で４時間インキュベートした。反応後、
反応液を除去し、ポリスチレンビーズを０．１Ｍ塩化ナ
トリウムを含む緩衝液Ｃ、２ｍｌで２回洗浄した。続い
て、着色ポリスチレンビーズは０．１Ｍ塩化ナトリウ
ム、１ｍＭεＮ−２，４−ジニトロフェニル−Ｌ−リジ
ンを含む緩衝液Ｃ、０．１５ｍｌ中でストレプトアビジ
ン不溶化白色ポリスチレンビーズとともに室温で３時間
インキュベートした。反応後、白色ポリスチレンビーズ
を前述と同様の方法で洗浄し、結合したβ−Ｄ−ガラク
トシダーゼの活性を３０℃、２．５時間で測定した。結
果をカットオフインデックスにより図４、５のＤに示し
た。
【００３７】比較例２ 本比較例では、免疫複合体転移法によりＨＩＶ−１の抗
ｐ２４抗体、抗ｐ１７抗体および抗ＲＴ抗体それぞれの
検出を行った。各物質の精製・調製方法は下記以外、実
験例１と全て同じである。なお、それぞれの実験方法に
ついては、〔橋田ら、ジャーナル・オブ・クリニカル・
ラボラトリー・アナリシス（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ａ
ｎａｌ．）、第７巻、第３５３頁（１９９３）および第
８巻、第８６頁（１９９４）〕、〔橋中ら、ジャーナル
・オブ・クリニカル・マイクロバイオロジー（Ｊ．Ｃｌ
ｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．）、第３２巻、第８１９頁
（１９９４）〕に詳細に記載されている。 〔アフィニティ精製抗ヒトＩｇＧγ鎖抗体不溶化ポリス
チレンビーズの調製〕白色ポリスチレンビーズ（直径
３．２ｍｍ、イムノケミカル、岡山）をアフィニティ精
製抗ヒトＩｇＧγ鎖抗体０．１ｇ／Ｌを含む緩衝液Ａ中
に浸し４℃で一晩静置して物理的吸着により不溶化し
た。
ｐ２４抗体、抗ｐ１７抗体および抗ＲＴ抗体それぞれの
検出を行った。各物質の精製・調製方法は下記以外、実
験例１と全て同じである。なお、それぞれの実験方法に
ついては、〔橋田ら、ジャーナル・オブ・クリニカル・
ラボラトリー・アナリシス（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ａ
ｎａｌ．）、第７巻、第３５３頁（１９９３）および第
８巻、第８６頁（１９９４）〕、〔橋中ら、ジャーナル
・オブ・クリニカル・マイクロバイオロジー（Ｊ．Ｃｌ
ｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．）、第３２巻、第８１９頁
（１９９４）〕に詳細に記載されている。 〔アフィニティ精製抗ヒトＩｇＧγ鎖抗体不溶化ポリス
チレンビーズの調製〕白色ポリスチレンビーズ（直径
３．２ｍｍ、イムノケミカル、岡山）をアフィニティ精
製抗ヒトＩｇＧγ鎖抗体０．１ｇ／Ｌを含む緩衝液Ａ中
に浸し４℃で一晩静置して物理的吸着により不溶化し
た。
【００３８】〔２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清ア
ルブミン−ｒｐ２４の調製〕マレイミド基を導入した
２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清アルブミンとチオ
ール基を導入したｒｐ２４を反応させ２，４−ジニトロ
フェニル−ウシ血清アルブミン−ｒｐ２４を調製した。
アルブミン１分子あたりに結合したｒｐ２４の平均の数
は２．５分子であった
ルブミン−ｒｐ２４の調製〕マレイミド基を導入した
２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清アルブミンとチオ
ール基を導入したｒｐ２４を反応させ２，４−ジニトロ
フェニル−ウシ血清アルブミン−ｒｐ２４を調製した。
アルブミン１分子あたりに結合したｒｐ２４の平均の数
は２．５分子であった
【００３９】〔β−Ｄ−ガラクトシダーゼ−ｒｐ２４の
調製〕Ｎ，Ｎ−ｏ−フェニレンジマレイミドを用いてマ
レイミド基を導入したβ−Ｄ−ガラクトシダーゼとチオ
ール基を導入したｒｐ２４を反応させβ−Ｄ−ガラクト
シダーゼ−ｒｐ２４を調製した。β−Ｄ−ガラクトシダ
ーゼ１分子あたりに結合したｒｐ２４の平均の数は２．
１分子であった。
調製〕Ｎ，Ｎ−ｏ−フェニレンジマレイミドを用いてマ
レイミド基を導入したβ−Ｄ−ガラクトシダーゼとチオ
ール基を導入したｒｐ２４を反応させβ−Ｄ−ガラクト
シダーゼ−ｒｐ２４を調製した。β−Ｄ−ガラクトシダ
ーゼ１分子あたりに結合したｒｐ２４の平均の数は２．
１分子であった。
【００４０】〔血清検体における抗各抗原（ｐ２４、ｐ
１７、ＲＴ）抗体の測定〕血清検体０．０１ｍｌを０．
４Ｍ塩化ナトリウム、１００ｆｍｏｌの各抗原の２，４
−ジニトロフェニルおよびβ−Ｄ−ガラクトシダーゼコ
ンジュゲートおよび０．０５ｍｇの不活化β−Ｄ−ガラ
クトシダーゼ（ムテイン、ベーリンガー・マイハイム）
を含む緩衝液Ｃ、０．１４ｍｌと混合した溶液にアフィ
ニティ精製抗２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清アル
ブミン抗体不溶化着色ポリスチレンビーズ２個を添加
し、室温で一晩インキュベートした。反応後、反応液を
除去し、着色ポリスチレンビーズを０．１Ｍ塩化ナトリ
ウムを含む緩衝液Ｃ、２ｍｌで２回洗浄した。続いて、
着色ポリスチレンビーズは０．１Ｍ塩化ナトリウム、１
ｍＭεＮ−２，４−ジニトロフェニル−Ｌ−リジンを含
む緩衝液Ｃ、０．１５ｍｌ中でアフィニティ精製抗ヒト
ＩｇＧγ鎖抗体不溶化白色ポリスチレンビーズとともに
室温で３時間インキュベートした。反応後、白色ポリス
チレンビーズを前述と同様の方法で洗浄し、結合したβ
−Ｄ−ガラクトシダーゼの活性を３０℃、２．５時間で
測定した。結果をカットオフインデックスにより図４、
５のＣに示す。
１７、ＲＴ）抗体の測定〕血清検体０．０１ｍｌを０．
４Ｍ塩化ナトリウム、１００ｆｍｏｌの各抗原の２，４
−ジニトロフェニルおよびβ−Ｄ−ガラクトシダーゼコ
ンジュゲートおよび０．０５ｍｇの不活化β−Ｄ−ガラ
クトシダーゼ（ムテイン、ベーリンガー・マイハイム）
を含む緩衝液Ｃ、０．１４ｍｌと混合した溶液にアフィ
ニティ精製抗２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清アル
ブミン抗体不溶化着色ポリスチレンビーズ２個を添加
し、室温で一晩インキュベートした。反応後、反応液を
除去し、着色ポリスチレンビーズを０．１Ｍ塩化ナトリ
ウムを含む緩衝液Ｃ、２ｍｌで２回洗浄した。続いて、
着色ポリスチレンビーズは０．１Ｍ塩化ナトリウム、１
ｍＭεＮ−２，４−ジニトロフェニル−Ｌ−リジンを含
む緩衝液Ｃ、０．１５ｍｌ中でアフィニティ精製抗ヒト
ＩｇＧγ鎖抗体不溶化白色ポリスチレンビーズとともに
室温で３時間インキュベートした。反応後、白色ポリス
チレンビーズを前述と同様の方法で洗浄し、結合したβ
−Ｄ−ガラクトシダーゼの活性を３０℃、２．５時間で
測定した。結果をカットオフインデックスにより図４、
５のＣに示す。
【００４１】比較例３ 本比較例では、既存の各種市販ＨＩＶ−１抗体検出診断
キットにより抗体の検出を行った。使用したキットは、
「セロディア−ＨＩＶ」（富士レビオ、東京）、ＨＴＬ
Ｖ−III ・ＥＩＡ「アボット」（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｉｅｓ、イリノイ州、米国）、ウェスタン
・ブロットキット「ＨＩＶ−オルソ」（Ｏｒｔｈｏ Ｄ
ｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ニュー・ジャー
ジー州、米国）の３キットで、測定はいずれもキットの
操作手順書に従って行った。各キットの測定値は、「セ
ロディア−ＨＩＶ」は凝集像を示す最大検体希釈率で、
ＨＴＬＶ−III ・ＥＩＡ「アボット」は、カットオフイ
ンデックスで、「ＨＩＶ−オルソ」は各バンドに対する
反応の有無（＋、−）で表した。結果を図４、５のＡ、
Ｂに示す。
キットにより抗体の検出を行った。使用したキットは、
「セロディア−ＨＩＶ」（富士レビオ、東京）、ＨＴＬ
Ｖ−III ・ＥＩＡ「アボット」（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｉｅｓ、イリノイ州、米国）、ウェスタン
・ブロットキット「ＨＩＶ−オルソ」（Ｏｒｔｈｏ Ｄ
ｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ニュー・ジャー
ジー州、米国）の３キットで、測定はいずれもキットの
操作手順書に従って行った。各キットの測定値は、「セ
ロディア−ＨＩＶ」は凝集像を示す最大検体希釈率で、
ＨＴＬＶ−III ・ＥＩＡ「アボット」は、カットオフイ
ンデックスで、「ＨＩＶ−オルソ」は各バンドに対する
反応の有無（＋、−）で表した。結果を図４、５のＡ、
Ｂに示す。
【００４２】実験例２ 本実験では、実験例１において複合体転移を行う前のア
フィニティ精製抗２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清
アルブミン抗体不溶化着色ポリスチレンビーズに捕獲し
た状態で結合したβ−Ｄ−ガラクトシダーゼの活性を測
定した。各物質の精製・調製方法は実験例１と全て同じ
である。結果を図６のＢに示す。
フィニティ精製抗２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清
アルブミン抗体不溶化着色ポリスチレンビーズに捕獲し
た状態で結合したβ−Ｄ−ガラクトシダーゼの活性を測
定した。各物質の精製・調製方法は実験例１と全て同じ
である。結果を図６のＢに示す。
【００４３】
【発明の効果】上記実験例１、２および比較例１〜３に
よって、以下の３点が確認できた。 （１）免疫複合体転移法による抗原・抗体同時測定の効
果 免疫複合体転移法による抗体測定は、既存の抗体測定キ
ットに比べて、約１週間早期に診断可能である。一方免
疫複合体転移法による抗原測定は、既存の抗体測定キッ
トより約２週間早期に診断可能であるが、感染後時間が
経つに従い測定値が低くなっていく。これに対し、抗原
・抗体の同時測定法では、それぞれの検出力が足しあわ
されて、既存の抗体測定キットによる抗体検出より約２
週間前も、抗体検出後も常時高い信号が得られることが
確認できた。 （２）ＨＩＶ−１感染の早期検出における抗ｐ１７抗体
測定の有用性 従来抗ｐ１７抗体は、それほどよいマーカーとは考えら
れていなかったが、ｐ１７抗原を直接固相に吸着させる
のではなく、液相で反応させることにって、ＨＩＶ−１
の感染後、種々の抗原に対する抗体の中で、ｐ１７に対
する抗体がいち早く高値に出ることがわかり、液相捕捉
系での早期検出におけるｐ１７抗体測定の有用性が確認
できた。 （３）従来サンドイッチ測定法での効果 ｐ２４抗原と抗ｐ１７抗体と抗ＲＴ抗体の組合せ系にお
いては、必ずしも免疫複合体転移法を行わなくても転移
をする前の第１固相に捕捉した状態で測定を行っても十
分な効果が得られることが確認できた。
よって、以下の３点が確認できた。 （１）免疫複合体転移法による抗原・抗体同時測定の効
果 免疫複合体転移法による抗体測定は、既存の抗体測定キ
ットに比べて、約１週間早期に診断可能である。一方免
疫複合体転移法による抗原測定は、既存の抗体測定キッ
トより約２週間早期に診断可能であるが、感染後時間が
経つに従い測定値が低くなっていく。これに対し、抗原
・抗体の同時測定法では、それぞれの検出力が足しあわ
されて、既存の抗体測定キットによる抗体検出より約２
週間前も、抗体検出後も常時高い信号が得られることが
確認できた。 （２）ＨＩＶ−１感染の早期検出における抗ｐ１７抗体
測定の有用性 従来抗ｐ１７抗体は、それほどよいマーカーとは考えら
れていなかったが、ｐ１７抗原を直接固相に吸着させる
のではなく、液相で反応させることにって、ＨＩＶ−１
の感染後、種々の抗原に対する抗体の中で、ｐ１７に対
する抗体がいち早く高値に出ることがわかり、液相捕捉
系での早期検出におけるｐ１７抗体測定の有用性が確認
できた。 （３）従来サンドイッチ測定法での効果 ｐ２４抗原と抗ｐ１７抗体と抗ＲＴ抗体の組合せ系にお
いては、必ずしも免疫複合体転移法を行わなくても転移
をする前の第１固相に捕捉した状態で測定を行っても十
分な効果が得られることが確認できた。
【００４４】
【図１】免疫複合体転移法による抗原測定の１パターン
の概略図である。
の概略図である。
【図２】免疫複合体転移法による抗体測定の１パターン
の概略図である。
の概略図である。
【図３】免疫複合体転移法による抗原・抗体同時測定法
の１パターンの概略図である。
の１パターンの概略図である。
【図４】４種類のＨＩＶ−１感染後陽性転換血清パネル
を用いて、血液採取開始後一定日数経過後採取検体につ
いて、ウェスタンブロットキット（Ａ）、既存の凝集キ
ット（Ｂ）、ＥＬＩＳＡキット（Ｂ）、あるいは免疫複
合体転移法によるｐ２４抗原（Ｄ）、抗ｐ２４抗体
（Ｃ）、抗ｐ１７抗体（Ｃ）、抗ＲＴ抗体（Ｃ）単独測
定の結果と免疫複合体転移法によるｐ２４抗原、抗ｐ１
７抗体および抗ＲＴ抗体の同時測定（Ｄ）の結果を比較
した図である。横軸は血液採取開始後経過日数、縦軸は
各測定法において陰性検体測定より得られたカットオフ
値を１としたときの各測定信号値の補正相対値である。
ただし、ウェスタンブロットの結果は＋、−により、ま
た、凝集法の結果は、凝集を示す最大希釈倍率によりそ
れぞれ表した。
を用いて、血液採取開始後一定日数経過後採取検体につ
いて、ウェスタンブロットキット（Ａ）、既存の凝集キ
ット（Ｂ）、ＥＬＩＳＡキット（Ｂ）、あるいは免疫複
合体転移法によるｐ２４抗原（Ｄ）、抗ｐ２４抗体
（Ｃ）、抗ｐ１７抗体（Ｃ）、抗ＲＴ抗体（Ｃ）単独測
定の結果と免疫複合体転移法によるｐ２４抗原、抗ｐ１
７抗体および抗ＲＴ抗体の同時測定（Ｄ）の結果を比較
した図である。横軸は血液採取開始後経過日数、縦軸は
各測定法において陰性検体測定より得られたカットオフ
値を１としたときの各測定信号値の補正相対値である。
ただし、ウェスタンブロットの結果は＋、−により、ま
た、凝集法の結果は、凝集を示す最大希釈倍率によりそ
れぞれ表した。
【図５】図４と同様の図である。
【図６】ある血清パネルにおいて、免疫複合体転移法に
てｐ２４抗原、抗ｐ１７抗体および抗ＲＴ抗体の同時測
定を行った結果（Ａ）と第１固相に捕捉した段階で測定
した結果（Ｂ）の比較図である。横軸は図４と同じであ
り、縦軸は固相に結合したβ−Ｄ−ガラクトシダーゼ活
性を表す蛍光強度である。点線は、カットオフ値を示
す。
てｐ２４抗原、抗ｐ１７抗体および抗ＲＴ抗体の同時測
定を行った結果（Ａ）と第１固相に捕捉した段階で測定
した結果（Ｂ）の比較図である。横軸は図４と同じであ
り、縦軸は固相に結合したβ−Ｄ−ガラクトシダーゼ活
性を表す蛍光強度である。点線は、カットオフ値を示
す。
Claims (6)
- 【請求項１】 「病原体の少なくとも一つの抗原」およ
び「同じ病原体の異なる抗原に対する少なくとも一つの
抗体」を同時に測定することによって病原体感染を検出
する方法であって、下記の工程（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）
および（Ｄ）からなる、上記方法。 工程（Ａ）：被検液に下記成分（１）、（２）、（３）
および（４）を各々少なくとも一つ加えて、測定すべき
抗原を含む免疫複合体および／または測定すべき抗体を
含む免疫複合体を形成せしめる工程。 （１）官能基で修飾された、病原体の測定すべき抗原に
対して特異的に結合する成分 （２）標識された、測定すべき抗原に対して特異的に結
合する成分 （３）官能基で修飾された、同じ病原体であるが（１）
の測定すべき抗原とは異なる抗原に対する測定すべき抗
体に対して特異的に結合する成分 （４）標識された、測定すべき抗体に対して特異的に結
合する成分 工程（Ｂ）：工程（Ａ）で形成された免疫複合体を、
（１）および（３）における官能基に対して特異的に反
応する成分を不溶化した第１固相上に捕捉する工程。 工程（Ｃ）：免疫複合体を上記固相から遊離させ、前記
官能基とは異なる免疫複合体中の部位に対して特異的に
反応する成分を不溶化した第２固相に免疫複合体を捕捉
する工程。 工程（Ｄ）：第２固相上に捕捉された免疫複合体を測定
する工程。 - 【請求項２】 工程（Ａ）と工程（Ｂ）を同時に行うこ
とを特徴とする請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 病原体がヒト免疫不全ウイルス−１（Ｈ
ＩＶ−１）である請求項１または２記載の方法。 - 【請求項４】 測定すべき抗原がｐ２４であり、測定す
べき抗体が抗逆転写酵素（ＲＴ）抗体および抗ｐ１７抗
体であることを特徴とする請求項３記載の方法。 - 【請求項５】 ｐ２４抗原、抗逆転写酵素（ＲＴ）抗体
および抗ｐ１７抗体を同時に測定することによってＨＩ
Ｖ−１感染を検出する方法であって、下記の工程
（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）からなる、上記方法。 工程（Ａ）：被検液に下記成分（１）、（２）、（３）
および（４）を共に加えて、ｐ２４抗原を含む免疫複合
体および／または抗逆転写酵素（ＲＴ）抗体を含む免疫
複合体および／または抗ｐ１７抗体を含む免疫複合体を
形成せしめる工程。 （１）官能基で修飾された、ｐ２４抗原に対して特異的
に結合する成分 （２）標識された、ｐ２４抗原に対して特異的に結合す
る成分 （３）官能基で修飾された、抗逆転写酵素（ＲＴ）抗体
に対して特異的に結合する成分および官能基で修飾され
た、抗ｐ１７抗体に対して特異的に結合する成分 （４）標識された、抗逆転写酵素（ＲＴ）抗体に対して
特異的に結合する成分および標識された、抗ｐ１７抗体
に対して特異的に結合する成分 工程（Ｂ）：工程（Ａ）で形成された免疫複合体を、該
官能基に対して特異的に反応する成分を不溶化した固相
上に捕捉する工程。 工程（Ｃ）：固相上に捕捉された免疫複合体を測定する
工程。 - 【請求項６】 工程（Ａ）と工程（Ｂ）を同時に行うこ
とを特徴とする請求項５記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13844695A JPH08304397A (ja) | 1995-05-11 | 1995-05-11 | 病原体感染の検出方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13844695A JPH08304397A (ja) | 1995-05-11 | 1995-05-11 | 病原体感染の検出方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08304397A true JPH08304397A (ja) | 1996-11-22 |
Family
ID=15222200
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13844695A Pending JPH08304397A (ja) | 1995-05-11 | 1995-05-11 | 病原体感染の検出方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08304397A (ja) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001020328A1 (fr) * | 1999-09-13 | 2001-03-22 | Nissui Pharmaceutical Co., Ltd. | Procede et kit de detection ou de dosage d'une substance |
| JP2003527606A (ja) * | 2000-03-16 | 2003-09-16 | バイアコア アーベー | 表面結合リガンドから溶出された分析物を捕捉するための方法 |
| JP2008145181A (ja) * | 2006-12-07 | 2008-06-26 | Abbott Japan Co Ltd | パルボウイルスｂ１９の検出法 |
| JP2009085685A (ja) * | 2007-09-28 | 2009-04-23 | Igaku Seibutsugaku Kenkyusho:Kk | インスリン受容体αサブユニットの測定試薬 |
| JP2017032411A (ja) * | 2015-07-31 | 2017-02-09 | シスメックス株式会社 | 被検物質の検出方法、検出用試薬キットおよび検出用試薬 |
| WO2017065261A1 (ja) * | 2015-10-15 | 2017-04-20 | 富士レビオ株式会社 | ヒトパルボウイルスｂ１９抗原および抗体の同時検出方法及びキット |
| JP2018004371A (ja) * | 2016-06-30 | 2018-01-11 | シスメックス株式会社 | 免疫複合体転移法により被検物質を検出するための抗体試薬及びその製造方法、並びにその抗体試薬の利用 |
| JP2021192021A (ja) * | 2020-06-05 | 2021-12-16 | 豊田合成株式会社 | 感染症向け医療用モビリティ |
-
1995
- 1995-05-11 JP JP13844695A patent/JPH08304397A/ja active Pending
Cited By (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001020328A1 (fr) * | 1999-09-13 | 2001-03-22 | Nissui Pharmaceutical Co., Ltd. | Procede et kit de detection ou de dosage d'une substance |
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| JP2003527606A (ja) * | 2000-03-16 | 2003-09-16 | バイアコア アーベー | 表面結合リガンドから溶出された分析物を捕捉するための方法 |
| JP4860085B2 (ja) * | 2000-03-16 | 2012-01-25 | ジーイー・ヘルスケア・バイオサイエンス・アクチボラグ | 表面結合リガンドから溶出された分析物を捕捉するための方法 |
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| US11047852B2 (en) | 2015-07-31 | 2021-06-29 | Sysmex Corporation | Method for detecting analyte, detection reagent kit, and detection reagent |
| WO2017065261A1 (ja) * | 2015-10-15 | 2017-04-20 | 富士レビオ株式会社 | ヒトパルボウイルスｂ１９抗原および抗体の同時検出方法及びキット |
| JPWO2017065261A1 (ja) * | 2015-10-15 | 2018-08-02 | 富士レビオ株式会社 | ヒトパルボウイルスｂ１９抗原および抗体の同時検出方法及びキット |
| US10634676B2 (en) | 2015-10-15 | 2020-04-28 | Fujirebio Inc. | Method and kit for simultaneously detecting human parvovirus B19 antigen and antibody |
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| CN107589249A (zh) * | 2016-06-30 | 2018-01-16 | 希森美康株式会社 | 用于通过免疫复合物转移法检测被检物质的抗体试剂及其制造方法、以及该抗体试剂的用途 |
| US11268956B2 (en) | 2016-06-30 | 2022-03-08 | Sysmex Corporation | Method for producing antibody reagent |
| JP2021192021A (ja) * | 2020-06-05 | 2021-12-16 | 豊田合成株式会社 | 感染症向け医療用モビリティ |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20040301 |