JPH0245758A - 水溶性高分子物質と低分子成分とが共存する試料の分析方法及び前処理方法並びにクロマトグラフイー用充填剤 - Google Patents
水溶性高分子物質と低分子成分とが共存する試料の分析方法及び前処理方法並びにクロマトグラフイー用充填剤Info
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- JPH0245758A JPH0245758A JP63197372A JP19737288A JPH0245758A JP H0245758 A JPH0245758 A JP H0245758A JP 63197372 A JP63197372 A JP 63197372A JP 19737288 A JP19737288 A JP 19737288A JP H0245758 A JPH0245758 A JP H0245758A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、シリカゲル表面に特定の基を導入してなる変
性シリカゲルを用いた水溶性高分子物質と低分子成分と
が共存する試料の分析方法及び前処理方法並びにクロマ
トグラフィー用充填剤に関する。
性シリカゲルを用いた水溶性高分子物質と低分子成分と
が共存する試料の分析方法及び前処理方法並びにクロマ
トグラフィー用充填剤に関する。
医学、生化学、食品化学、高分子化学等の分野では、蛋
白質と共存する微１成分、例えば血清中に存在する薬物
等を逆相高速液体クロマトグラフィーによって分析する
ことが行なわれており、この場合充填剤としてはシリカ
ゲル表面のシラノール基にオクタデシル基等の疎水性ア
ルキル基を導入したものが、溶離液としては水、アルコ
ール、アセトニトリル等の極性溶媒を主体としたものが
従来より使用されている。
白質と共存する微１成分、例えば血清中に存在する薬物
等を逆相高速液体クロマトグラフィーによって分析する
ことが行なわれており、この場合充填剤としてはシリカ
ゲル表面のシラノール基にオクタデシル基等の疎水性ア
ルキル基を導入したものが、溶離液としては水、アルコ
ール、アセトニトリル等の極性溶媒を主体としたものが
従来より使用されている。
しかし、蛋白質と共存する成分を液体クロマトグラフィ
ーで分析するに際し、充填剤として上記疎水性アルキル
キ基導入シリカゲルを用いて試料を前処理をすることな
く直接分析しようとすると、シリカゲル表面に蛋白質が
吸着し、蛋白質のピークと目的成分のピークとが重なっ
て正確な分析が困難となったり、シリカゲル表面上に蛋
白質が沈着し、充填剤を劣化させたり、カラムをつめた
りする。このため、蛋白質を含む試料に対しては。
ーで分析するに際し、充填剤として上記疎水性アルキル
キ基導入シリカゲルを用いて試料を前処理をすることな
く直接分析しようとすると、シリカゲル表面に蛋白質が
吸着し、蛋白質のピークと目的成分のピークとが重なっ
て正確な分析が困難となったり、シリカゲル表面上に蛋
白質が沈着し、充填剤を劣化させたり、カラムをつめた
りする。このため、蛋白質を含む試料に対しては。
前処理として溶媒抽出操作や蛋白質の沈殿除去操作等の
除蛋白処理を施すことが不可欠であり、従って分析操作
が著しく繁雑になるものであった。
除蛋白処理を施すことが不可欠であり、従って分析操作
が著しく繁雑になるものであった。
なお、蛋白質が吸着したり沈着したりすることのない液
体グロマトグラフイー用充填剤として。
体グロマトグラフイー用充填剤として。
シリカゲルの細孔内面部に疎水基を導入すると共に、外
表面部に親水性有機基を導入した部分親水化シリカゲル
が知られている（特開昭６２−１５８ＬＬ３号公報参照
）。上記部分親水化シリカゲルは、親水性と疎水性の両
者の性質を兼ね備えた特異な性状を有する。しかしなが
ら、この部分親水化シリカゲルは、その製造に当り、オ
クタデシル基等の疎水基を導入したシリカゲルにプラズ
マ処理を施すことによりシリカゲル外表面のシラノール
基を顕出させた後、このシラノール基に親水性有機基を
導入するという操作を要し、製造工程が複雑である。
表面部に親水性有機基を導入した部分親水化シリカゲル
が知られている（特開昭６２−１５８ＬＬ３号公報参照
）。上記部分親水化シリカゲルは、親水性と疎水性の両
者の性質を兼ね備えた特異な性状を有する。しかしなが
ら、この部分親水化シリカゲルは、その製造に当り、オ
クタデシル基等の疎水基を導入したシリカゲルにプラズ
マ処理を施すことによりシリカゲル外表面のシラノール
基を顕出させた後、このシラノール基に親水性有機基を
導入するという操作を要し、製造工程が複雑である。
本発明は、上記事情に鑑みなされたもので、蛋白質が吸
着したり沈着したりすることがなく、従って蛋白質と共
存する成分を分析又は分離分取する場合でも試料に除蛋
白前処理を施す必要がなく、このため試料をクロマトグ
ラフィーに直接注入して目的成分を迅速、簡便かつ正確
に分析又は分離分取することを可能にすると共に、蛋白
質の沈着によって劣化することのない変性シリカゲルを
用いた水溶性高分子物質と低分子成分とが共存する試料
の分析方法及び前処理法並びにクロマトグラフィー用充
填剤を提供することを目的とする。
着したり沈着したりすることがなく、従って蛋白質と共
存する成分を分析又は分離分取する場合でも試料に除蛋
白前処理を施す必要がなく、このため試料をクロマトグ
ラフィーに直接注入して目的成分を迅速、簡便かつ正確
に分析又は分離分取することを可能にすると共に、蛋白
質の沈着によって劣化することのない変性シリカゲルを
用いた水溶性高分子物質と低分子成分とが共存する試料
の分析方法及び前処理法並びにクロマトグラフィー用充
填剤を提供することを目的とする。
〔課題を解決するための手段及び作用〕本発明は、上記
目的を達成するため、表面シラノール基の水素原子の一
部又は全部をけい素原子を介して下記式（１） ％式％（１） （但し、Ａは炭素数２〜２４の疎水基、Ｂは親水基を示
す。） に示す基で置換してなる変性シリカゲルを充填したクロ
マトグラフィー用カラムを逆相系で用い、水溶性高分子
物質と低分子成分とを含む試料中の上記高分子物質を溶
出させた後、上記低分子成分を分ａ溶出して、上記高分
子物質と分離した低分子成分を検出することを特徴とす
る水溶性高分子物質と低分子成分とが共存する試料の分
析方法を提供する。
目的を達成するため、表面シラノール基の水素原子の一
部又は全部をけい素原子を介して下記式（１） ％式％（１） （但し、Ａは炭素数２〜２４の疎水基、Ｂは親水基を示
す。） に示す基で置換してなる変性シリカゲルを充填したクロ
マトグラフィー用カラムを逆相系で用い、水溶性高分子
物質と低分子成分とを含む試料中の上記高分子物質を溶
出させた後、上記低分子成分を分ａ溶出して、上記高分
子物質と分離した低分子成分を検出することを特徴とす
る水溶性高分子物質と低分子成分とが共存する試料の分
析方法を提供する。
また、本発明は、表面シラノール基の水素原子の一部又
は全部をけい素原子を介して下記式（１）％式％（１） （但し、Ａは炭素２〜２４の疎水基、Ｂは親水基を示す
。） に示す基で置換してなる変性シリカゲルをクロマトグラ
フの前処理カラムに充填し、該前処理カラムに水溶性高
分子物質と低分子成分とを含む試料を通し、該カラムに
上記試料中の低分子成分を分離して保持すると共に、上
記高分子物質を溶出除去することを特徴とする水溶性高
分子物質と低分子成分とが共存する試料の前処理方法を
提供する。
は全部をけい素原子を介して下記式（１）％式％（１） （但し、Ａは炭素２〜２４の疎水基、Ｂは親水基を示す
。） に示す基で置換してなる変性シリカゲルをクロマトグラ
フの前処理カラムに充填し、該前処理カラムに水溶性高
分子物質と低分子成分とを含む試料を通し、該カラムに
上記試料中の低分子成分を分離して保持すると共に、上
記高分子物質を溶出除去することを特徴とする水溶性高
分子物質と低分子成分とが共存する試料の前処理方法を
提供する。
更に１本発明は、表面シラノール基の水素原子の一部又
は全部をけい素原子を介して下記式（２）に示す基で置
換した変性シリカゲルからなるクロマトグラフィー用充
填剤を提供する。
は全部をけい素原子を介して下記式（２）に示す基で置
換した変性シリカゲルからなるクロマトグラフィー用充
填剤を提供する。
−ｘ−ｙ ・・・ （２）（但
し、Ｘは炭素数４〜２４の疎水基、Ｙは−ＣＨＯＨ−Ｃ
Ｈ２ＯＨ基を含む基を示す。）本発明において９表面シ
ラノール基の水素原子の一部又は全部をけい素原子を介
して上記（１）式又は（２）式の基で置換した変性シリ
カゲルは、（１）式及び（２）式の基が親水性部と疎水
性部とから構成されているので、疎水性部がシリカゲル
表面近くに位置し、かつ親水性部がシリカゲル表面から
遠ざかった状態で、多数の分子がシリカゲル表面に配列
している構造を有し１分子の集合としてみると、シリカ
ゲル表面に近い部分は親油性、遠い部分は親水性である
層構造が多数の分子によって構成されている。それ故、
この変性シリカゲルは親水性と疎水性の両者の性質を兼
ね備えた特異な性状を有し、特に蛋白質等の水溶性高分
子物質を吸着も沈着もさせず、従って蛋白質等の水溶性
高分子物質と共存する成分の分析、分取、前処理カラム
の充填剤としてこの変性シリカゲルを用いると、目的成
分のみがこの充填剤に保持され、水溶性高分子物質は保
持されることなく直ちに溶出する。従って、上記変性シ
リカゲルを分析カラム用充填剤として用いた場合、試料
に除蛋白前処理等の高分子物質除去処理を施す必要がな
く、蛋白質等を含む試料を直接クロマトグラフに注入し
て迅速、簡便かつ正確に目的成分を分離、分析し得ると
共に、蛋白質等の高分子物質の沈着によって劣化するこ
とがない。また前処理カラム用充填剤として用いた場合
、蛋白質等を除去して目的成分のみを容易に濃縮できる
。更に、本発明充填剤は、後述するようにシリカゲルと
特定化合物とを反応させることにより容易に製造するこ
とができる。なお、表面シラノール基の水素原子を上記
（１）式の基で置換した変性シリカゲルのうちＡが炭素
数３の疎水基であるものは従来ゲル浸透クロマトグラフ
ィー用充填剤として用いられているが、この変性シリカ
ゲルを水溶性高分子物質と共存する低分子成分を分析す
るため等の逆相高速液体クロマトグラフィー用充填剤と
して用いルコトは本発明者の新知見である。また、（１
）式の基で置換した変性シリカゲルのうちＡが炭素数４
〜２４の疎水基であり、Ｂが一部 ＨＯＨＣＨｚ○Ｈ基
を含む基であるもの、即ち請求項３の充填剤は本発明者
の見い出した新規物質であり、上述した特異な性状の故
に液体クロマトグラフィーの他、薄層クロマトグラフィ
ー用等として有効に使用されるものである。
し、Ｘは炭素数４〜２４の疎水基、Ｙは−ＣＨＯＨ−Ｃ
Ｈ２ＯＨ基を含む基を示す。）本発明において９表面シ
ラノール基の水素原子の一部又は全部をけい素原子を介
して上記（１）式又は（２）式の基で置換した変性シリ
カゲルは、（１）式及び（２）式の基が親水性部と疎水
性部とから構成されているので、疎水性部がシリカゲル
表面近くに位置し、かつ親水性部がシリカゲル表面から
遠ざかった状態で、多数の分子がシリカゲル表面に配列
している構造を有し１分子の集合としてみると、シリカ
ゲル表面に近い部分は親油性、遠い部分は親水性である
層構造が多数の分子によって構成されている。それ故、
この変性シリカゲルは親水性と疎水性の両者の性質を兼
ね備えた特異な性状を有し、特に蛋白質等の水溶性高分
子物質を吸着も沈着もさせず、従って蛋白質等の水溶性
高分子物質と共存する成分の分析、分取、前処理カラム
の充填剤としてこの変性シリカゲルを用いると、目的成
分のみがこの充填剤に保持され、水溶性高分子物質は保
持されることなく直ちに溶出する。従って、上記変性シ
リカゲルを分析カラム用充填剤として用いた場合、試料
に除蛋白前処理等の高分子物質除去処理を施す必要がな
く、蛋白質等を含む試料を直接クロマトグラフに注入し
て迅速、簡便かつ正確に目的成分を分離、分析し得ると
共に、蛋白質等の高分子物質の沈着によって劣化するこ
とがない。また前処理カラム用充填剤として用いた場合
、蛋白質等を除去して目的成分のみを容易に濃縮できる
。更に、本発明充填剤は、後述するようにシリカゲルと
特定化合物とを反応させることにより容易に製造するこ
とができる。なお、表面シラノール基の水素原子を上記
（１）式の基で置換した変性シリカゲルのうちＡが炭素
数３の疎水基であるものは従来ゲル浸透クロマトグラフ
ィー用充填剤として用いられているが、この変性シリカ
ゲルを水溶性高分子物質と共存する低分子成分を分析す
るため等の逆相高速液体クロマトグラフィー用充填剤と
して用いルコトは本発明者の新知見である。また、（１
）式の基で置換した変性シリカゲルのうちＡが炭素数４
〜２４の疎水基であり、Ｂが一部 ＨＯＨＣＨｚ○Ｈ基
を含む基であるもの、即ち請求項３の充填剤は本発明者
の見い出した新規物質であり、上述した特異な性状の故
に液体クロマトグラフィーの他、薄層クロマトグラフィ
ー用等として有効に使用されるものである。
以下、本発明につき更に詳しく説明する。
本発明に用いる変性シリカゲルは、上述したように表面
シラノール基の一部又は全部をけい素原子を介して上記
（１）式又は（２）式の基で置換したものである。第１
図はこれを模型的に示したもので、１はシリカゲル、２
は細孔であり、表面層３に親水性基Ｂ、Ｙ、その内側層
に疎水性基Ａ。
シラノール基の一部又は全部をけい素原子を介して上記
（１）式又は（２）式の基で置換したものである。第１
図はこれを模型的に示したもので、１はシリカゲル、２
は細孔であり、表面層３に親水性基Ｂ、Ｙ、その内側層
に疎水性基Ａ。
Ｘが配列している。
また、この変性シリカゲルとしては下記式（１ａ）〜（
１ｄ）に示すものを挙げることができる。
１ｄ）に示すものを挙げることができる。
なお、上記（１ａ）〜（１ｄ）式においてＡ。
Ｂは上記と同じもの ａｈ、 Ｒ２はそれぞれ炭素数１
〜５のアルキル基又は水酸基を示す。また、（１ｄ）式
に示すように、ＯＨ基同士が分子間でエーテル結合して
いるものも存在する。
〜５のアルキル基又は水酸基を示す。また、（１ｄ）式
に示すように、ＯＨ基同士が分子間でエーテル結合して
いるものも存在する。
ここで、上記変性シリカゲルにおいて、疎水基Ａ、Ｘと
しては例えばアルキル基、アルキレン基。
しては例えばアルキル基、アルキレン基。
ハロゲン化アルキル基等を挙げることができる。
なお、蛋白質と目的成分とが共存する試料をクロマトグ
ラフに直接注入する場合、蛋白質が移動相中の有機溶媒
によって変性し、沈殿することがあるため、これを防止
する目的で移動層中の有機溶媒含有量を所定濃度以下に
制限する必要が生じることがあり、この場合試料が溶出
しない。しかし。
ラフに直接注入する場合、蛋白質が移動相中の有機溶媒
によって変性し、沈殿することがあるため、これを防止
する目的で移動層中の有機溶媒含有量を所定濃度以下に
制限する必要が生じることがあり、この場合試料が溶出
しない。しかし。
本発明充填剤においては、疎水基Ａ、Ｘの種類を選定し
、疎水基の疎水性を適宜設定することにより、親油性の
高い目的成分でも有機溶媒の含有量を高めることなく溶
出させ得、これにより広範囲の目的成分を分析すること
ができる。
、疎水基の疎水性を適宜設定することにより、親油性の
高い目的成分でも有機溶媒の含有量を高めることなく溶
出させ得、これにより広範囲の目的成分を分析すること
ができる。
また、親水基Ｂとしては例えば−ＣＨ，ＯＨ基を含む基
、−ＣＨｏＨ−ＣＨ，ＯＨ基を含む基、アミド基、ケト
ン基、エーテル基、シアノ基、アミノ基、四級アンモニ
ウム基、カルボキシル基等を挙げることができる。
、−ＣＨｏＨ−ＣＨ，ＯＨ基を含む基、アミド基、ケト
ン基、エーテル基、シアノ基、アミノ基、四級アンモニ
ウム基、カルボキシル基等を挙げることができる。
なお、表面シラノール基の上記（１）又は（２）式の基
による置換率は１０〜１００％であることが好ましい。
による置換率は１０〜１００％であることが好ましい。
本発明に用いる変性シリカゲルの粒子形状に制限はなく
、球状、破砕状等の適宜形状とすることができる。また
１粒径、細孔の大きさ、表面積等も適宜選定されるが、
本発明においては細孔の口径を６０〜１２０人とするこ
とが望ましく、これにより蛋白質が細孔内に入り込み、
カラム内で保持されるのを防止すると共に、目的成分は
低分子であるので上記細孔内に自由に出入りし得、カラ
ムに保持されるものである。
、球状、破砕状等の適宜形状とすることができる。また
１粒径、細孔の大きさ、表面積等も適宜選定されるが、
本発明においては細孔の口径を６０〜１２０人とするこ
とが望ましく、これにより蛋白質が細孔内に入り込み、
カラム内で保持されるのを防止すると共に、目的成分は
低分子であるので上記細孔内に自由に出入りし得、カラ
ムに保持されるものである。
本発明に用いる変性シリカゲルの製法に限定はないが、
シリカゲルと下記式（３）、即ちＲ＋ （但し、（３）式においてＡ、Ｂは上記と同じもの、Ｒ
’、Ｒ’、Ｒ’はそれぞれハロゲン原子、炭素数１〜５
のアルキル基又は−ＯＨ基（Ｒは炭素数１〜５のアルキ
ル基である）を示すが、Ｒ４Ｒ５，Ｒ’の少なくとも１
つはハロゲン原子又は−ＯＨ基である。） で示される化合物とを反応させる二とにより容易に得る
ことができる。
シリカゲルと下記式（３）、即ちＲ＋ （但し、（３）式においてＡ、Ｂは上記と同じもの、Ｒ
’、Ｒ’、Ｒ’はそれぞれハロゲン原子、炭素数１〜５
のアルキル基又は−ＯＨ基（Ｒは炭素数１〜５のアルキ
ル基である）を示すが、Ｒ４Ｒ５，Ｒ’の少なくとも１
つはハロゲン原子又は−ＯＨ基である。） で示される化合物とを反応させる二とにより容易に得る
ことができる。
なお、上記（３）式の化合物として、具体的には下記の
ものを例示することができる。但し、Ｍｅはメチル基、
Ｅｔはエチル基、ｎは２〜２４の整数である。
ものを例示することができる。但し、Ｍｅはメチル基、
Ｅｔはエチル基、ｎは２〜２４の整数である。
ＣＨｌ
（Ｅｔ○）２Ｓ ｉ （４Ｈ＠−０−ＣＨ□−Ｃ−Ｃ
ソ Ｑ （ＣＨ，）、５ｉ−Ｃ，Ｈ６−ＣＮ ＣＨ，Ｓ ｉ −Ｃ，Ｈ，−ＣＮ （ＣＨ３０）３Ｓ ｉ −Ｃ，Ｈ，−ＣＮ〔発明の効果
〕 以上説明したように、本発明においては、充填剤に蛋白
質等の水溶性高分子物質が吸着も沈着もしないので、蛋
白質等の水溶性高分子物質と共存する目的成分の迅速、
簡便かつ正確な分析が可能であり、かつ濃縮も容易に行
なうことができると共に、充填剤が蛋白質等の沈着によ
って劣化することがないものである。即ち水溶性高分子
物質として蛋白質を例として説明すれば、本発明で充填
剤として用いる変性シリカゲルは蛋白質と全く相万作用
をせず、従って充填剤に対して蛋白質の吸着や沈着がな
いので、蛋白質と目的成分とを同時にこの充填剤を充填
したカラムに導入すると、目的成分はこの充填剤の疎水
基に保持されるのに対して蛋白質はそのままカラム外に
排出される。従って、蛋白質と共存する微量成分を分析
する場合、従来のように面倒な除蛋白処理を必要とせず
、本発明変性シリカゲルを充填したカラムに試料を通す
だけで、最初に蛋白質が確実に分離溶出され、微量成分
は保持されるのでこれを簡単に分析できる。また、本発
明変性シリカゲルは、このような性質を利用して前処理
カラムに目的成分のみを濃縮する場合、及び分取等にも
好適に用いられる。
ソ Ｑ （ＣＨ，）、５ｉ−Ｃ，Ｈ６−ＣＮ ＣＨ，Ｓ ｉ −Ｃ，Ｈ，−ＣＮ （ＣＨ３０）３Ｓ ｉ −Ｃ，Ｈ，−ＣＮ〔発明の効果
〕 以上説明したように、本発明においては、充填剤に蛋白
質等の水溶性高分子物質が吸着も沈着もしないので、蛋
白質等の水溶性高分子物質と共存する目的成分の迅速、
簡便かつ正確な分析が可能であり、かつ濃縮も容易に行
なうことができると共に、充填剤が蛋白質等の沈着によ
って劣化することがないものである。即ち水溶性高分子
物質として蛋白質を例として説明すれば、本発明で充填
剤として用いる変性シリカゲルは蛋白質と全く相万作用
をせず、従って充填剤に対して蛋白質の吸着や沈着がな
いので、蛋白質と目的成分とを同時にこの充填剤を充填
したカラムに導入すると、目的成分はこの充填剤の疎水
基に保持されるのに対して蛋白質はそのままカラム外に
排出される。従って、蛋白質と共存する微量成分を分析
する場合、従来のように面倒な除蛋白処理を必要とせず
、本発明変性シリカゲルを充填したカラムに試料を通す
だけで、最初に蛋白質が確実に分離溶出され、微量成分
は保持されるのでこれを簡単に分析できる。また、本発
明変性シリカゲルは、このような性質を利用して前処理
カラムに目的成分のみを濃縮する場合、及び分取等にも
好適に用いられる。
以下、実施例を示し１本発明を具体的に説明するが１本
発明は下記実施例に限定されるものではない。
発明は下記実施例に限定されるものではない。
下記方法によりＮ００１〜８の本発明充填剤を製造した
。
。
ａユよ（３−グリシドキシプロビルトリメトキシシラン
によりシリル化した充填剤）細孔径約６０人、平均粒径
５−の球状シリカゲルＬｏｇを減圧中１２０℃で２時間
乾燥した後、水０．６４加えて含水した。このシリカゲ
ルを三ツロフラスコに入れ、トルエン３５−１００％ｐ
−トルエンスルホン酸、アセトニトリル溶液２００成、
３−グリシドキシプロビルトリメトキシシラン５ｍＱを
加え、１１０℃で１６時間加熱した。冷却後、ガラスフ
ィルターを用いて吸引濾過し、更にトルエン２００Ｉａ
Ｑ、アセトン２００ＩＩＩＱの順で洗浄し、ガラスフィ
ルターを用いて吸引濾過した。
によりシリル化した充填剤）細孔径約６０人、平均粒径
５−の球状シリカゲルＬｏｇを減圧中１２０℃で２時間
乾燥した後、水０．６４加えて含水した。このシリカゲ
ルを三ツロフラスコに入れ、トルエン３５−１００％ｐ
−トルエンスルホン酸、アセトニトリル溶液２００成、
３−グリシドキシプロビルトリメトキシシラン５ｍＱを
加え、１１０℃で１６時間加熱した。冷却後、ガラスフ
ィルターを用いて吸引濾過し、更にトルエン２００Ｉａ
Ｑ、アセトン２００ＩＩＩＱの順で洗浄し、ガラスフィ
ルターを用いて吸引濾過した。
このシリカゲルを２００ａＱナスフラスコにとり。
１０１Ｎ硫酸水溶液５０ｍＱを加え、１時間加熱還流し
た。冷却後、グラスフィルター（Ｇ４）を用いて吸引濾
過し、水２００ｍＱで洗浄し、吸引濾過した１次にシリ
カゲルを再度２００ＩＩＩＱナスフラス：Ｉ ニド４Ｊ
、１０ｎ＋ＭＩＪン酸緩衝液（ｐＨ８，０）５０−を加
え、１時間加熱還流した。冷却後、グラスフィルター（
Ｇ４）を用いて吸引濾過し、水２００−、メタノール１
００ｄ、ジエチルエーテル１００ｄの順で洗浄し、吸引
濾過した後、真空乾燥器にて６０°Ｃで２時間乾燥し、
本発明充填剤を得た。
た。冷却後、グラスフィルター（Ｇ４）を用いて吸引濾
過し、水２００ｍＱで洗浄し、吸引濾過した１次にシリ
カゲルを再度２００ＩＩＩＱナスフラス：Ｉ ニド４Ｊ
、１０ｎ＋ＭＩＪン酸緩衝液（ｐＨ８，０）５０−を加
え、１時間加熱還流した。冷却後、グラスフィルター（
Ｇ４）を用いて吸引濾過し、水２００−、メタノール１
００ｄ、ジエチルエーテル１００ｄの順で洗浄し、吸引
濾過した後、真空乾燥器にて６０°Ｃで２時間乾燥し、
本発明充填剤を得た。
ｅユ」工（−官能性シリル化剤で３−グリコキシアルキ
ルシリル化した充填剤） シリル化剤としてジメチェルエトキシー３−グリシドキ
シプロピルシランを用い、上記Ｎｏ、１と同じ方法で製
造した。
ルシリル化した充填剤） シリル化剤としてジメチェルエトキシー３−グリシドキ
シプロピルシランを用い、上記Ｎｏ、１と同じ方法で製
造した。
ｅユ良工（アルキル基の異なるシリル化剤で３−グリコ
キシアルキルシリル化した充填剤）シリル化剤として４
−グリシドキシブチルトリメトキシシランを用い、上記
Ｎｏ、１と同じ方法で製造した。但し、シリル化剤の量
は２．６１１ＩＱ。
キシアルキルシリル化した充填剤）シリル化剤として４
−グリシドキシブチルトリメトキシシランを用い、上記
Ｎｏ、１と同じ方法で製造した。但し、シリル化剤の量
は２．６１１ＩＱ。
加水分解時間は各１時間とした。
遇５哄」１Ｎ−隻工Ａ工（同上）
シリル化剤として４−グリシドキシ−１−メチルブチル
トリメトキシシランを用い、上記Ｎ００１と同じ方法で
製造した。但し、シリル化剤の量は２．８ ｍＱ、加水
分解時間は各１時間とした。
トリメトキシシランを用い、上記Ｎ００１と同じ方法で
製造した。但し、シリル化剤の量は２．８ ｍＱ、加水
分解時間は各１時間とした。
笑」１剤」（旦よ」−（同上）
シリル化剤として６−ゲリシドキシヘキシルトリメトキ
シシランを用い、上記Ｎｏ、１と同じ方法で製造した。
シシランを用い、上記Ｎｏ、１と同じ方法で製造した。
但し、シリル化剤の量は２．９ ａＱ。
加水分解時間は各１時間とした。
ａユ６（エーテル結合を含まないシリル化剤でジヒドロ
キシアルキルシリル化した充填剤）シリル化剤として２
− （３，４−エポキシシクロヘキシルエチル）トリメ
トキシシランを用い、上記Ｎｏ、１と同じ方法で製造し
た。但し、シリル化剤の量は２．６ｄ、加水分解時間は
各１時間とした。
キシアルキルシリル化した充填剤）シリル化剤として２
− （３，４−エポキシシクロヘキシルエチル）トリメ
トキシシランを用い、上記Ｎｏ、１と同じ方法で製造し
た。但し、シリル化剤の量は２．６ｄ、加水分解時間は
各１時間とした。
Ａｌ共」１ｙ」と１１−（同上）
シリル化剤として１，２−エポキシへキシルトリメトキ
シシランを用い、上記Ｎ００１と同じ方法で製造した。
シシランを用い、上記Ｎ００１と同じ方法で製造した。
但し、シリル化剤の量は２．４ｄ。
加水分解時間は各１時間とした。
ｊ［哄Ｊ乱下二免よ」ヨ■−同上）
シリル化剤として１．２−エポキシオクチルトリメトキ
シシランを用い、上記Ｎｏ、１と同じ方法で製造した。
シシランを用い、上記Ｎｏ、１と同じ方法で製造した。
但し、シリル化剤の量は２．６ｄ、加水分解時間は各３
時間とした。
時間とした。
次に、上記Ｎ００１〜８の充填剤をそれぞれ内径４．６
園、長さ１５０１のステンレス製カラムに平衡スラリー
法によって充填し、充填カラムを作成すると共に、これ
ら充填カラムを用いて下記に示す牛血清アルブミンの回
収試験、ベンゼン及びナフタレンの分析試験及び血清試
料注入試験を行なった。
園、長さ１５０１のステンレス製カラムに平衡スラリー
法によって充填し、充填カラムを作成すると共に、これ
ら充填カラムを用いて下記に示す牛血清アルブミンの回
収試験、ベンゼン及びナフタレンの分析試験及び血清試
料注入試験を行なった。
血′アルブミンの口
各カラムに下記分析条件で牛血清アルブミンを通し、そ
の回収率を調べた。結果を第１表に示す。
の回収率を調べた。結果を第１表に示す。
分析条件；
試 料 １％血清アルブミン／１００ｍＭリン酸緩衝
液（ｐＨ６，８） 移動相 アセトニトリル：１００ｍＭリン酸緩衝液（２
０：８０） 流 速 １ ｄ ／ ｗｉｎ 検出波長 ２９５ｎｍ 第１表 上記各カラムを用い、下記分析条件でウラシル、ベンゼ
ン及びナフタレンの混合溶液の分析を行ない、各成分の
保持時間を調べた。結果を第２表に示す。
液（ｐＨ６，８） 移動相 アセトニトリル：１００ｍＭリン酸緩衝液（２
０：８０） 流 速 １ ｄ ／ ｗｉｎ 検出波長 ２９５ｎｍ 第１表 上記各カラムを用い、下記分析条件でウラシル、ベンゼ
ン及びナフタレンの混合溶液の分析を行ない、各成分の
保持時間を調べた。結果を第２表に示す。
分析条件；
移動相 アセトニトリル：水（１０：９０）、但し、Ｎ
ｏ、４及びＮｏ、８の充填剤を用いたカラムの場合はア
セトニトリル：水（３０ニア０） 速 １ ｍＱ ／ ｆｆ１ｉｎ 流 検出波長 ２５４ｎｍ 第２表 流 速 検出波長 試料注入量 剤を充填したカラムの場合は１ｏ： ９０、Ｎｏ、５．Ｎｏ、８の充填剤を 充填したカラムの場合は２０：８０） １ｍＱ／ｎ＋ｉｎ ２０ｎ１１ ２０越 第 ３ 表 カルバマゼピン１０ ｐ４＜ ／ ｍＱを含む血清を下
記分析条件で上記Ｎ ｏ 、 １ 、 Ｎ ｏ 、 ５
、 Ｎ ｏ 、 ８の充填剤を充填したカラムに直接
注入し、カルバマゼピンの分析を行なった。得られたク
ロマトグラムを第３表の通り第２〜４図に示す。
ｏ、４及びＮｏ、８の充填剤を用いたカラムの場合はア
セトニトリル：水（３０ニア０） 速 １ ｍＱ ／ ｆｆ１ｉｎ 流 検出波長 ２５４ｎｍ 第２表 流 速 検出波長 試料注入量 剤を充填したカラムの場合は１ｏ： ９０、Ｎｏ、５．Ｎｏ、８の充填剤を 充填したカラムの場合は２０：８０） １ｍＱ／ｎ＋ｉｎ ２０ｎ１１ ２０越 第 ３ 表 カルバマゼピン１０ ｐ４＜ ／ ｍＱを含む血清を下
記分析条件で上記Ｎ ｏ 、 １ 、 Ｎ ｏ 、 ５
、 Ｎ ｏ 、 ８の充填剤を充填したカラムに直接
注入し、カルバマゼピンの分析を行なった。得られたク
ロマトグラムを第３表の通り第２〜４図に示す。
分析条件；
移 動 相 アセトニトリル：１００ｍＭリン酸緩衝液
（ｐＨ６，８）（Ｎｏ、１の充填 フェノパルビタール４０Ｐｇ／ｄ、フェニトイン２０ｑ
／ｍＱ及びカルバマゼピン１０．／ｍＱを含む血清を下
記分析条件で上記Ｎ ｏ 、 ２の充填剤を充填したカ
ラムに直接注入し、分析を行なった。得られたクロマト
グラムを第５図に示す。
（ｐＨ６，８）（Ｎｏ、１の充填 フェノパルビタール４０Ｐｇ／ｄ、フェニトイン２０ｑ
／ｍＱ及びカルバマゼピン１０．／ｍＱを含む血清を下
記分析条件で上記Ｎ ｏ 、 ２の充填剤を充填したカ
ラムに直接注入し、分析を行なった。得られたクロマト
グラムを第５図に示す。
分析条件；
移 動 相 テトラヒド口フラン：アセトニトリル：１
００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ ６，８） （５： ５ ： ９０） 流 量 １ｄ／ｍｉｎ 検出波長 ２２０ｎｍ 試料注入量 １０ｄ 次に６−グリシドキシへキシルシリル化したシリカゲル
をカラムに充填して前処理カラムとして用い、第６図に
示す装置を用いてカラムスイッチング法によって血清中
カルバマゼピンの分析を行なった。この場合、前記Ｎｏ
、５の充填剤を内径４．６ｍ、長さ３０閤のステンレス
製カラムに平衡スラリー法によって充填し、前処理用充
填カラムを作成した。また、まず前処理用移動相をバル
ブの点線で示す流路に流すことにより前処理カラムに試
料を濃縮した後、バルブを切り換え、分析用移動相をバ
ルブの実線で示す流路に流すことにより前処理カラム中
の試料を分析カラムに導入した。この処理装置付き高速
液体クロマトグラフによってカルバマゼピン１ｏｌＬｇ
／ｒａを含む血清を下記条件で分析した。得られたクロ
マトグラムを第７図に示す。
００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ ６，８） （５： ５ ： ９０） 流 量 １ｄ／ｍｉｎ 検出波長 ２２０ｎｍ 試料注入量 １０ｄ 次に６−グリシドキシへキシルシリル化したシリカゲル
をカラムに充填して前処理カラムとして用い、第６図に
示す装置を用いてカラムスイッチング法によって血清中
カルバマゼピンの分析を行なった。この場合、前記Ｎｏ
、５の充填剤を内径４．６ｍ、長さ３０閤のステンレス
製カラムに平衡スラリー法によって充填し、前処理用充
填カラムを作成した。また、まず前処理用移動相をバル
ブの点線で示す流路に流すことにより前処理カラムに試
料を濃縮した後、バルブを切り換え、分析用移動相をバ
ルブの実線で示す流路に流すことにより前処理カラム中
の試料を分析カラムに導入した。この処理装置付き高速
液体クロマトグラフによってカルバマゼピン１ｏｌＬｇ
／ｒａを含む血清を下記条件で分析した。得られたクロ
マトグラムを第７図に示す。
この方法は、極微量成分を簡単に前処理カラムに濃縮で
きるので、血清中の極微量代謝化合物の分析等に有効で
ある。
きるので、血清中の極微量代謝化合物の分析等に有効で
ある。
前処理条件；
移 動 相 １００ｍＭリン酸緩衝液（ＰＨ６，８）流
速 １ ｍＱ ／ ｗｉｎ前処理時間 １
０ｍ１ｎ 試料注入量 ２〇− 分析条件； 分析用カラム ＯＤＳ （４，６ｍｍφＸ１５０ｍ５Ｌ
、）移 動 相 アセトニトリル：１００ｎ＋Ｍリン酸
緩衝液（ｐＨ６，８）（３０： ７０）流
速 ｌ ｍＱ ／ ｗｉｎ測定波長２２りｎ＋ｍ 以上の結果より、本発明の変性シリカゲルは、蛋白質等
の水溶性高分子物質を吸着しないと共に。
速 １ ｍＱ ／ ｗｉｎ前処理時間 １
０ｍ１ｎ 試料注入量 ２〇− 分析条件； 分析用カラム ＯＤＳ （４，６ｍｍφＸ１５０ｍ５Ｌ
、）移 動 相 アセトニトリル：１００ｎ＋Ｍリン酸
緩衝液（ｐＨ６，８）（３０： ７０）流
速 ｌ ｍＱ ／ ｗｉｎ測定波長２２りｎ＋ｍ 以上の結果より、本発明の変性シリカゲルは、蛋白質等
の水溶性高分子物質を吸着しないと共に。
液体クロマトグラフィー用充填剤として優れた性質を有
することが認められる。
することが認められる。
第１図は本発明に用いる変性シリカゲルを模型的に説明
する説明図、第２図乃至第５図はそれぞれ本発明分析方
法によって血清中のカルバマゼピン等を分析したクロマ
トグラム、第６図は前処理カラムを用いた分析装置を示
す概略図、第７図は本発明前処理方法によって前処理カ
ラムに血清中のカルバマゼピンを濃縮し、このカルバマ
ゼピンをＯＤＳカラムで分析したクロマトグラムである
。 出願人 財団法人 化学品検査協会 代理人 弁理士 小 島 隆 司 第２図 第５図 第６図 前処′ＩＬ用移動相
する説明図、第２図乃至第５図はそれぞれ本発明分析方
法によって血清中のカルバマゼピン等を分析したクロマ
トグラム、第６図は前処理カラムを用いた分析装置を示
す概略図、第７図は本発明前処理方法によって前処理カ
ラムに血清中のカルバマゼピンを濃縮し、このカルバマ
ゼピンをＯＤＳカラムで分析したクロマトグラムである
。 出願人 財団法人 化学品検査協会 代理人 弁理士 小 島 隆 司 第２図 第５図 第６図 前処′ＩＬ用移動相
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、表面シラノール基の水素原子の一部又は全部をけい
素原子を介して下記式（１） −Ａ−Ｂ・・・（１） （但し、Ａは炭素２〜２４の疎水基、Ｂは親水基を示す
。） に示す基で置換してなる変性シリカゲルを充填したクロ
マトグラフィー用カラムを逆相系で用い、水溶性高分子
物質と低分子成分とを含む試料中の上記高分子物質を溶
出させた後、上記低分子成分を分離溶出して、上記高分
子物質と分離した低分子成分を検出することを特徴とす
る水溶性高分子物質と低分子成分とが共存する試料の分
析方法。 ２、表面シラノール基の水素原子の一部又は全部をけい
素原子を介して下記式（１） −Ａ−Ｂ・・・（１） （但し、Ａは炭素数２〜２４の疎水基、Ｂは親水基を示
す。） に示す基で置換してなる変性シリカゲルをクロマトグラ
フの前処理カラムに充填し、該前処理カラムに水溶性高
分子物質と低分子成分とを含む試料を通し、該カラムに
上記試料中の低分子成分を分離して保持すると共に、上
記高分子物質を溶出除去することを特徴とする水溶性高
分子物質と低分子成分とが共存する試料の前処理方法。 ３、表面シラノール基の水素原子の一部又は全部をけい
素原子を介して下記式（２）に示す基で置換した変性シ
リカゲルからなるクロマトグラフィー用充填剤。 −Ｘ−Ｙ・・・（２） （但し、Ｘは炭素数４〜２４の疎水基、Ｙは−ＣＨＯＨ
−ＣＨ＿２ＯＨ基を含む基を示す。）
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63197372A JP2792038B2 (ja) | 1988-08-08 | 1988-08-08 | 水溶性高分子物質と低分子成分とが共存する試料の分析方法及び前処理方法並びにクロマトグラフイー用充填剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63197372A JP2792038B2 (ja) | 1988-08-08 | 1988-08-08 | 水溶性高分子物質と低分子成分とが共存する試料の分析方法及び前処理方法並びにクロマトグラフイー用充填剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0245758A true JPH0245758A (ja) | 1990-02-15 |
| JP2792038B2 JP2792038B2 (ja) | 1998-08-27 |
Family
ID=16373406
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63197372A Expired - Fee Related JP2792038B2 (ja) | 1988-08-08 | 1988-08-08 | 水溶性高分子物質と低分子成分とが共存する試料の分析方法及び前処理方法並びにクロマトグラフイー用充填剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2792038B2 (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005010528A1 (ja) * | 2003-07-28 | 2005-02-03 | Reverse Proteomics Research Institute Co., Ltd. | 非特異的物質の除去方法 |
| WO2005036173A1 (ja) * | 2003-10-14 | 2005-04-21 | Reverse Proteomics Research Institute Co., Ltd. | 非特異的物質の除去方法 |
| JP2006312117A (ja) * | 2005-05-06 | 2006-11-16 | Canon Inc | 生理活性物質の分離用材料及びその製造方法 |
| JP2009198252A (ja) * | 2008-02-20 | 2009-09-03 | Fuji Silysia Chemical Ltd | シリカゲル、クロマトグラフ装置、分離方法、及びシリカゲルの製造方法 |
| JP2015193711A (ja) * | 2014-03-31 | 2015-11-05 | 信越化学工業株式会社 | 粘着剤組成物、粘着偏光板及び液晶表示装置 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS573043A (en) * | 1980-05-05 | 1982-01-08 | Varian Associates | Production of mixed phase chromatography composite |
-
1988
- 1988-08-08 JP JP63197372A patent/JP2792038B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| JPWO2005036173A1 (ja) * | 2003-10-14 | 2006-12-21 | 株式会社リバース・プロテオミクス研究所 | 非特異的物質の除去方法 |
| JP4491419B2 (ja) * | 2003-10-14 | 2010-06-30 | 株式会社リバース・プロテオミクス研究所 | 非特異的物質の除去方法 |
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| JP2015193711A (ja) * | 2014-03-31 | 2015-11-05 | 信越化学工業株式会社 | 粘着剤組成物、粘着偏光板及び液晶表示装置 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2792038B2 (ja) | 1998-08-27 |
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