JPH02288837A - ニユーモシステイス・カリニの抑制方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ニューモジステイス・カリニ（Ｐｎｅｎｍｏｃｙｓｔｉ
ｓｃａｒｉｎｉｉ）は日和見性微生物であり、広く蔓延
（ｐｒｅｖａｌｅｎｔ）するが一般Ｇこは休眠状態にあ
り、宿主の体防御が低下したときに宿主中で増殖して発
病させる。一般には肺内に存在するが、肺外感染も報告
されている。免疫が低下した個体中でのこの微生物の肺
感染は一般に肺炎をひきおこし、治療を怠った場合は通
常致命的となる。免疫が低下した個体においては患者か
ら患者への伝染も起こり得るといわれている。個体の免
疫低下状態は通常、遺伝的欠陥、リンパ増殖性（Ｉｙｍ
ｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ）の病気、ガン治療
や免疫抑制薬を用いた治療に由来する症状、あるいはＡ
ＩＤＳによる症状に関連する。はとんどのＡＩＤＳ患者
は最終的にはニューモジステイス・カリニ肺炎（ＰＣＰ
）を患い、この病気の最近の例の多（を占めるに至った
。治療を怠れば、ＰＣＰはほとんどまちがいなく致命的
となる。

Ｐ、カリニ肺炎の最近の治療方法はトリメトプリム／ス
ルファメトキサゾール又はペンタミジンである。トリメ
トプリム／スルファメトキサゾール（ＴＭＰ／ＳＭＺ）
による治療は、発疹、肝機能上昇、悪心および嘔吐、貧
皿、クレアチン上昇、ならびに極端な場合にはステイー
ブンス・ジョンソン（Ｓｔｅｖｅｎｓ−Ｊｏｈｎｓｏｎ
）症候群といった毒性の副作用を高い水準でひき起こす
。ＴＭＰ／ＳＭＺによる副作用はＡＩＤＳ患者に極めて
多く蔓延している。ペンタミジンによる治療もまた、腎
障害、肝毒、低血糖、血液学的異常、および注射部位の
痛みもしくは膿瘍といった毒性の副作用を高い水準でひ
き起こす。治療に由来する死亡率は２０乃至３０パーセ
ントにも達し得る。免疫が低下した患者のＰ、カリニ肺
炎の治療のための改良された方法が強く所望されている
。

本発明は、哺乳動物のニューモジステイス・カリニ感染
の治療又は予防方法に関し、ニューモジステイス・カリ
ニに感染した対象（ヒト又は動物）に、シクロへキサペ
プチド化合物の抗感染ないし感染抑制量を投与すること
からなる。

本発明の範囲内の化合物には、後記に詳述する新規な真
菌代謝産物、脂肪酸側鎖を有する親油性シクロヘギサペ
プチドである既知のエキノカンジン型抗生物質、側鎖ジ
ヒドロもしくはテトラヒドロ還元生成物、環状エーテル
およびエステル誘導体などのエキノカンジン型抗生物質
の簡単な誘導体、あるいはシクロへキサペプチド環ば維
持されているが脂肪酸側鎖が入れ代わっている半合成生
成物が含まれる。文献中のほとんどのこうした化合物は
抗真菌剤として教示されている。

本発明の実施に適した化合物は、天然の抗生物質のみな
らず、天然の抗生物質の簡単な誘導体や後記に詳説する
半合成化合物をも含み、次の式（Ｉ）により表わすこと
ができる。

Ｒ′ 」１記の式および以下の式において、 Ｒ′はＩ４又は０１１； Ｒ”はＨ又はＯ１＋　　。

Ｒ″′はＨｏｌｌ　　−○−アルキル（ＣＣ６） ］　７ だし、Ｒ’はＨ，Ｃｌ−ＣＩ２　フルキ／Ｌ／、　Ｃｌ
−Ｃ７シクｔ：１アルキル、ヒドロキシエチル、低級ア
ルコキシエチル、フリルメチル、テトラヒドロフリルメ
チル。

フェニル、フェニルアルキル（フェニルはハロ。

ヒドロキシ、低級アルキルおよび低級アルコキシで置換
されていてもよい）；Ｒ２は水素又は低級アルコキシ；
又はＲ１とＲ２とＴ：　−（ＣＨｚ）ｚ口（ＣＩ（２）
２−　（Ｑは−ＣＨ２〜、−Ｎ）Ｉ−あるいは−Ｎ−低
級アルキルのような結合基）を形成；ｍは０乃至４； 、ｔｒｔｔはＨ又はＯｆ（。

Ｒ″″′はＨ，ＣＨ３又は（：Ｈ２Ｃ０ＮＨ２ｉＲ″″
″　　はＨ又はＣｌ１ｓ　；そしてＲは、 （Ｂ）　炭素原子６乃至２４の−Ｃ−フルヶニル（Ｃ）
　　Ｒ’　、　　Ｒ”、　　Ｒ″’　　および　Ｒ″″
が０Ｈ２Ｒ″″′　　がＣ）１３のときは、 Ｘ’ 又は （Ａは２価の酸素、イオウ、スルフィニル又はスルホニ
ル；八１は２価の酸素、イオウ、スルフィニル、スルホ
ニル又は−ＮＨ−；　ｘハ水−ｉ！、　クロロ。

ブロモ、ヨード、ニトロ、ＣｌＣ５アルキル、ヒドロキ
シ、　Ｃ，−Ｃ３アルコキシ、メルカプト、ＣｌＣ５ア
ルキルチオ、カルバミル又はＣ，−Ｃ３アルキルカルバ
ミル；Ｘ′はクロロ、ブロモ又はヨード、Ｒ１は水素、
　ＣＩ−四。アルキル又はＣ２Ｃ１ｌ＋アルケニル；Ｗ
はＣＩ　　ＣＩＯアルキレン又はＣｚ　　Ｃ＋ｏアルケ
ニレン；ｍ、ｎおよびｐは０又は１であるが、ｍが０の
ときは、ｎはＯでなければならないｔただし、基Ｒ０お
よびＷ中の炭素原子数の和は４より大きくなければなら
ず２１を越えてはならない；Ｘがメルカプトのときは、
ＡおよびＡＩ　はスルフィニル又はスルホニル がスルフィニル又はスルホニルのときは、それらは等し
い酸化状態になければならない）；（Ｉｆ）Ｒ’がＯＨ
，Ｒ“がＨのときは、Ｙ　　Ｃ　　Ｒ２ （Ｙは以下に示すアミノアシル基 ａ）　　　−Ｃ−Ｚ−ＮＨ　− （ＺはＣＩ　　ＣＩ。アルキレン又はＣ５−　Ｃ６シク
ロアルキレン）； （Ｒ３はヒドロキシメチル、ヒドロキシエチル。

メルカプトメチル、メルカプトエチル、メチルチオエチ
ル、２−チエニル、３−インドロメチル、フェニル、ベ
ンジル、ハロフェニル。

ハロペンシル、Ｃ．Ｃ，アルキルフェニル＋　ＣＩ６３
アルキルベンジル、Ｃ，−Ｃ３アルキルチオフエニル、
ＣＩＣ３アルキルチオベンジル、カルバミルフェニル、
カルバミルベンジル、ＣＩＣ，アルキルカルバミルフェ
ニル又はＣ，−Ｃ３アルキルカルバミルベンジル）： Ｘ′ （Ｘ”は水素又はハロ）） を意味する。

゛アルキル”という用語は、１価の飽和直鎖もしくは有
枝鎖炭化水素基を意味する。“アルケニル”という用語
は１価の不飽和直鎖もしくは有枝鎖炭化水素基であって
３以下の二重結合を有するものを意味する。“低級”と
は炭素原子数６以下を意味する。“ハロ”という用語は
クロロ、ブロモ、フルオロおよびヨードを意味する。

本発明の哺乳類におけるニューモジステイスカリニ感染
の治療又は予防に有用な化合物は一般に白色結晶又は粉
状物質である。それらは一般にアルコール、例えばメタ
ノール及びエタノールに良く溶解し、水及び炭化水素、
例えばヘキサノに良く熔解せずそして多くの通常の溶媒
に中程度に溶解する。天然のシクロへキサペプチド類の
溶解性及び他の多くの性質がＣＲＣｌ１ａｎｄｂｏｏｋ
　ｏｆＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃ　　Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、
　Ｖｏｌ　　ＩＶ、　　Ｐａｒｔ　Ｌ３５５〜３６７ペ
ーシ、　ＣＲＣＰｒｅｓｓ、　Ｉｎｃ、　ＢｏｃａＲａ
ｔｏｎ、　Ｆｌｏｒｉｄａ、　　１９８０にまとめられ
ている。

本質的に好ましい化合物は新規な真菌代謝産物であり、
これはＲ’、Ｒ，Ｒ及びＲが０１１であり、Ｉｌ　”’
　　が−Ｃ１１２ＣＯＮ１１２であり、Ｒ″″″がＣＩ
＋３であるもの、すなわち弐ＩＡ Ｈ によって表わされる化合物である。

この化合物は１−［４，５−ジヒドロキシ−Ｎ２（１０
，１２−ジメチル−１−オキソテトラデシル）−Ｌ−オ
ルニチン−５−（トレオー３−ヒドロキシー１−グルタ
ミン）エキノヵンジンＢと名付けることができるが、便
宜上以下化合物ＩＡという。１　　［（４，Ｒ，５Ｒ）
−４，５−ジヒドロキシ−Ｎ２−　（１０，１２−ジメ
チル−１−オキソテトラデシル）−Ｌ−オルニチン−５
−（トレオー３−ヒドロキシー１−グルタミン）エキノ
カンジンＢと名付けられる異性体が特に好ましい。

以下に化合物ＩＡの製造及び性質が説明されるが、それ
らは共に継続中の１９８７年８月７日出願の米国特許出
願筒１０５，７９５号及び第１０５，７９７号の主題で
もあり、それらにさらに詳述されている。

好ましい化合物、化合物ＩＡ、は次の物理的性質によっ
て特徴付けることができる白色固体である。

分解温度　　　２０６〜２１４℃ 実験式　　　　ｃｓ＋）Ｉｓ□Ｎ［１０１７〔高分解能
ＦＡＢ　（Ｆａｓｔ　Ａｔｏｍ　Ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎ
ｔ質量分光測定、計算値Ｃ５□１１８□ＮＢＯ＋７　＋
Ｌｉ　＝　ＬＯ８５，５９５８実測値　１０８５．６１
４６））　　；アミノ酸組成（スレオニン、ヒドロキシ
プロリンメチルヒドロキシプロリン及びヒドロキシグル
タミン酸の各１当量の全酸加水分解物のトリメチルシリ
ル誘導体のカズクロマトグラム／質量スペクトルによっ
て測定）図１に示したように４００ＭＨｚでＣＤ３０Ｄ
における’ＩＩＮＭＲスペクトル及び１００ＭＩｌｚで
ＣＤ、００において次のような１３ＣＮＭＲ化学シフト
が得られた。

１１．２０　１１．６４　１９．７５．２０．２５．２
０．７８．２７．００２Ｂ、０７　３０．３３　３０．
３７　３０．６１．３０．７６、３１．１９゜３１．２
９．３２．９４．３４．８３．３６．６９．３８．１０
．３８．５４３９．０７．３９．５３．４５．９３．５
１．３９．５３．０１．５５．５９゜５６．３１　５７
．１１　５８．３５．６２．４３．６８．１８．７０．
０８゜７０．５５　７０．６Ｌ　７１．２６．７３．９
４．７５．７２．７５．８４゜７６．８６．１１６．０
６（ｘ２）、　１２９．４３（ｘ２）、　１３２．８６
１５８．２２　１６８．８０．１７２．１６．１７２．
３５．１１２．４０゜１７３．１２．１７４．２４．１
７５．４７．１７６．８８　ｐｐｍ。

この化合物は種々な有機溶媒、例えばメタノール、エタ
ノール、ジメチルホルムアミド、シメチルスルポギシド
等に可溶である。

新規化合物、化合物ＩＡ、の製造を以下に詳細に説明す
る。本発明の他の有用な化合物は、適当な微生物を代わ
りに使用することによって又は次いで説明されるような
他の手順によって同様な方法で製造され得る。

化合物ＩＡはＭｅｒｃｋ　＆　Ｃｏ、＋　ｌｌａｈｗａ
ｙ、　Ｎ、Ｊ、のカルチャー　コレクションにおいてＭ
Ｆ５１７１と命名され、ツァレリオン　アルポリコラ（
Ｚａｌｅｒｉｏｎａｒｂｏｒ　ｉｃｏ　ｌａ）として同
定される微生物の菌株を培養し、培地から該薬剤を回収
することによって製造され得る。化合物ＩＡを製造する
ことができる培養株のサンプルは１２３０１　Ｐａｒｋ
ｌａｗｎ　Ｄｒｉｖｅ。

Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ　　ＭＤ　２０８５２のアメリカン
　タイプ　カルチャー　コレクション（＾ｍｅｒｉｃａ
ｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅＣｏ　１１ｅｃ　ｔ　１
ｏｎ）のカルチャー　コレクションにブタペスト条約（
Ｂｕｄａｐｅｓｔ　Ｔｒｅａｔｙ）の下に寄託されてい
る。このサンプルは入手番号（ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　ｎ
ｕｍｂｅｒ）ＡＴＣＣ２０８６８を与えられている。

ＡＴＣＣ２０８６８のコロニー及び形態の説明を以下に
述べる。

Ａ、形態の説明 球状の、直径約６．０ミクロンの、厚い壁のある、暗色
の厚膜胞子に類似する構造が菌糸体に沿って発生し、し
ばしば簡閲であるように見える。これらの構造は分割す
るように見え、容易には解体しない４〜８個の多細胞群
を形成している。ある培地では、菌糸体のクラスターの
ストランドが一緒になってロープ状の構造になり、多細
胞群が粘液質の物質によって一緒にされたような大きな
りラスターを形成している。

Ｂ、コロニーの説明 １、ツアペック−ドックス（Ｃｚａｐｅｋ−Ｄｏｘ）寒
天コロニーはゆっくりと成長し、成長は広範囲にわたら
ず、不規則な端部を有していて平坦である。

菌糸体は黒く光っていて；表面は、コロニーが時間を経
るに従って、鈍い粒状の、黒色から緑色を帯びた褐色に
なる。

２、コーン寒天 コロニーはゆっくりと成長する。成長は広範囲にわたら
ない。菌糸体は黒色であり、光っている表面は、コロニ
ーが時間を経るに従って、粉状の鈍い黒色になる。

３、ポテト−デキストロース寒天、サブロー（Ｓａｂｏ
ｕｒａｕｄ）マルトール寒天及び酵母抽出物モルト抽出
物−デキストロース寒天 コロニーはゆっくりと成長する。生成は広範囲にわたら
ず、中央でわずかに盛り上り、端部がガラス状で規則的
であるサブロー−マルトース寒天以外、放射状にしわの
ある不規則な端部である。

菌糸体は黒く光っており；コロニーが時間を経るに従っ
て、鈍い粉状の黒になる。

本発明は以下上として特定の菌株に関して説明されるが
、微生物の性質が天然に又は人工的に変化され得ること
はこの技術分野において周知である。従って、天然の選
択によって得られるか、イオン化放射又は紫外線照射の
ような突然変異を起させるものの作用によって産生され
るか、又はニトロソグアニジンのような化学的な突然変
異誘発要因によって産生されるかにかかわらず変種及び
突然変異体を含む属ＡＴＣＣ２０８６８は本発明の範囲
内であると考えられる。

実質的な量の抗生物質活性が培地中、一般にその菌糸体
に検出されるまで栄養培地においてツァレリオン　アル
ポリコラの菌株ＡＴＣＣ２０８６Ｂを培養し、その後発
酵菌糸体から活性成分を適当な溶媒中に回収し、活性成
分の溶液を濃縮し、次に濃縮物質をクロマトグラフ分離
にかけることによって薬剤としての用途に適用できる形
で化合物ＩＡを製造することができる。

発酵は微生物によって同化可能な炭素及び窒素源及び一
般的に低水準の無機塩類を含む培地中で行なわれる。さ
らに、炭素及び窒素の複合源を使用するならば金属は普
通その複合源に存在するけれども、培地に痕跡の金属を
加えることができる。

炭素源にはグリセロール、シュガー、スターチ、及び他
の炭水化物又は炭水化物誘導体、例えばデキストラン、
セレロース（ｃｅｒｅｌｏｓｅ）　、及び複合栄養、例
えばオート麦粉、コーン粉、きび、コーン等がある。培
地に使用される炭素源の正確な量は部分的には培地中の
他の成分に依存するであろう。しかし、通常培地の０．
５重量％と５重量％との間の量の炭水化物が適切である
ことが分っている。これらの炭素源を個別に使用するこ
とができ、またいくつかのそのような炭素源を同じ培地
中で組合せることができる。

窒素源にはアミノ酸、例えばグリシン、アルギニンスレ
オニン、メチオニン等及び複合源、例えば酵母加水分解
物、酵母自己分解物質、酵母細胞、１・７トベースト 酵母エキス、コーン・ステイープ・リカー（ｃｏｒｎｓ
ｔｅｅｐ　ｒｅｑｕｏｒｓ）、シスチラース・ソリュー
ブルス（ｄｉｓｔｉｌｌｅｒｓ　ｓｏｌｕｂｌｅｓ）、
綿実ミール、肉エキス等がある。種々の窒素源を単独又
は組合せて培地の０．２〜９０重量％の範囲の量で使用
することができる。

培地中に入れることができる栄養無機塩には、ナトリウ
ム、カリウム、マグネシウム、アンモニウム、カルシウ
ム、リン酸塩、硫酸塩、塩化物、炭酸塩等のイオンを生
じることが慣用の塩がある。

痕跡の金属、例えばコハル１〜、マンガン、鉄、モリブ
デン、亜鉛、カドミウム等も含むことができる。

発酵を行うために適当な培地は固体又は液体であること
ができる。

固体培地はきび、コーン、オート麦、大豆又は小麦ヘー
スを有することができる。きびヘースを有する１つの培
地が実施例Ａの培地２である。他の代表的な固体培地に
は次のものがある。

培地 町Ｊｕ トウモロコシ（破砕品） イースト抽出物 酒石酸すＩ・リウム グルタミン酸モノナトリウム コーン油 硫酸鉄（ＩＩ）　　・７１１。０ 水 邦」Ｅ埃 雑穀 ２５０ｍｎフラスコ 中の重量又は体積 １　０、　０　ｇ ０、５ｇ ０、１ｇ ０、１ｇ ０、１ｍｆｆ ０、０１ｇ １５　　　２０ｎ＋ｊ！ ５ｇ イースト抽出物 酒石酸す１−リウム 硫酸鉄（ＩＩＩ）　　・７Ｈ２０ スクロース アルファルファ コーン油 水 相ＪＣ 雑穀 イースト抽出物 酒石酸ナトリウム 硫酸鉄（Ｉ［ｆ）　　・７１ｈＯ シリカケル アルファルファ グルタミン酸モノナトリウム コーン油 水 ０、５ｇ ０、１ｇ ｏ．ｏｔｇ Ｏ．５ｇ ０、５ｇ ０、１ｍ＃ １　　５ｍ１２ ５ｇ ０、５ｇ ０、１ｇ ０、０１ｇ ０、５ｇ ０、５ｇ ０、１ｇ ０、１ｍβ 　５ｍｆｆ 培地り 雑穀 イースト抽出物 酒石酸ナトリウム 硫酸鉄（Ｉ［［）　　・７１１□０ ５ｇ ０、５ｇ ０、１ｇ Ｏ．　０　１　ｇ さらに、培地は、小麦、大麦、オートムギ若しくは大豆
を上述の雑穀やトウモロコシの代わりにすることで調製
してもよい。

液体培地もまた用いることが出来る。

より大きい規模での醗酵は、通常、より好都合には液体
培地を用いて行われる。従来の液体培地は化合物ＴＡを
得るのに使用され得るが、そのような培地は、希望する
抗生物質の良好な収率を得るのに好適であるとは見出さ
れていない。しかしながら、グリセロールを約６乃至９
重量パーセント混ぜることによって、希望する抗生物質
化合物の良好な収率が得られることが見出された。好適
な液体培地が含むのは： 囲■旦 グリセロール ペクチン ビーナツツミール ペプトン化ミルク トマトペースト コーンステイープ（Ｃｏｒｎ ラード水（Ｌａｒｄ　Ｗａｔｅｒ） グリシン Ｈ２ＰＯ４ 蒸溜水で全体を１０００ ｍβにする−・−ｐＨ７，０ Ｓｔｅｅｐ） 邦Ｕ デキストロース グリセロール ソイフラワー（Ｓｏｙ　Ｆｌｏｕｒ） ペプトン化ミルク トマトペースト ラード水（Ｌａｒｄ　Ｗａｔｅｒ） リン酸二水素カリウム 塩化コバルト穴水和物　　　　　　　　０．０１ｇ蒸溜
水で全体を１０００ｍ／！にする−・−−−−−ｐＨ７
，０化合物ＩＡを製造するために、抗生物質産生生物の
胞子若しくは菌糸体を好適な培地に接種し好気性条件下
で培養することによって、ＡＴＣＣ２０８６８を含有す
る醗酵培地を調製する。

概してその方法は初めに、栄養培地を含有する寒天傾斜
から貯蔵源の培養物を栄養分供給製造培地（ｎｕｔｒｉ
ｅｎｔ　ｓｅｅｄ−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ　ｍｅｄｉｕｍ
）に接種し、好ましくは２段階の手順を経て、抗ニュー
モジステイス剤（ａｎｔｔｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ　
ａｇｅｎｔ）の製造に於ける種として都合が良いその生
物の生長を得る。

この工程において、ＡＴＣＣ２０８６８の貯蔵培養物源
の斜面部分を、ｐｌ＋範囲５乃至８．１、最善には６乃
至７．５の適当な液体栄養分供給培地中へ接種する。

そして、約１５℃乃至約３０℃、好適には２０℃乃至２
８°Ｃの温度範囲で、攪拌しながらまたは攪拌すること
なしにフラスコを培養する。攪拌する場合は、４００ｒ
ｐｍまでは構わないが、好ましくは約２００乃至２２０
ｒｐｍである。

培養は、２乃至３０日間、好適には２乃至１４日間にわ
たり行われる。培養生長物は、生長に冨んだ時に、普通
は２乃至５日のあいだだが、生成物培地に抗ニューモジ
ステイス剤の生産ために接種されるを常とし、でよい。

しかしながら好適には、第二段階の醗酵が行われ、培養
生長物の部分を接種しそれから類似の条件を、但し通常
は短くした約１乃至３日の培養期間で、用いる。

培養生長物を接種した醗酵製造培地は３乃至３０日間、
通常は７乃至１４日間攪拌しながらまたは攪拌すること
なしに培養する。醗酵は約２０℃乃至約４０°Ｃの温度
範囲で好気的に行われてもよい。最善の結果のために、
約２４℃乃至約３０℃の温度範囲でこれらの醗酵を行な
うのが最も都合がよい。約２４−２８℃の温度が最も好
ましい。

本化合物の製造に好ましい栄養培地のｐｉは、好適な範
囲を約６．０乃至７．５として、約５．０乃至８．５の
範囲に及ぶことが出来る。希望する化合物の製造にとっ
て適当な期間の後、その終わりごろのものは、以下によ
り十分に述べるように、醗酵培地から回収される。

活性材料は次から成る段階によって醗酵培地から回収し
てもよい。

（１）該培地にアルコールを添加し、攪拌し濾過して、
得られたアルコール水溶液中に活性成分を回収する。

（２）濃縮したアルコール水溶液を初めに水溶液の小さ
い体積にまで濃縮し、 （３）得られた濃縮アルコール水溶液を水−非混合性有
機溶媒に密接に接触させて、その中に活性成分を抽出若
しくは分配し、そしてｔａ　Ｋ６し、又はその濃縮され
た溶液をＨｌ”２０吸着及び溶離に処する。それから、 （４）段階（３）で回収された材料を少なくとも一つの
クロマトグラフ分離に処して、各々のクロマトグラフ分
離においてＣａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓに対して
活性を示す溶出分からの活性成分を合わせて′ａ縮し、
化合物ＩＡを回収する。

的確な段階は、醗酵が液体培地内で行われたのか或いは
固体培地内なのかどうか、どんな溶媒が用いられたか、
そしてどんな吸着剤及びその組み合わせが用いられたか
で幾分か異なってよい。

醗酵が固体培地で行われる場合、最初の段階はアルコー
ル溶液を醗酵培地に加えることによって行われ、完全に
混合し、そして濾過し回収してアルコール水溶液濾液を
濃縮する。好ましくは、濃縮された濾液を最初にヘキサ
ン或いは他のアルカンのような低級脂肪族炭化水素溶媒
で逆抽出若しくは洗浄しアルカン可溶性不純物を除去す
る。アルカン洗浄した濾液は水−非混合性の酸化された
有機溶媒で抽出し若しくは分配し、得た溶液は濃縮して
から、カラムに配置し、少なくとも一つ、通常は幾つか
のクロマトグラフ分離段階に処す。

好適なカラムは、シリカゲル、逆相そしてＳ　Ｅ　Ｐ　
ＩＩ　Ａ　Ｉ）Ｅ　ＸＬｌｌ−２０である。

醗酵が液体培地で行われる場合は、一つの方法では一２
菌糸体固体が濾過されて醗酵培地から回収される。アル
コールを菌糸体ケーキに加え、その菌糸体固体をアルコ
ールと完全に混合し、濾過して、濾液は集められて濃縮
される。もう一つの方法では、全ての肉汁は一体積のア
ルコール、好ましくはメタノールを加えることで抽出す
ることができ、濾過して固体不純物を除去する。それか
らアルコール抽出物をＤＩＡＩＯＮ　５Ｐ−２０７また
は他の市販されているスチレン−ジビニルベンゼンコポ
リマーに吸着させる。第二希釈溶液／ＨＰ−２０吸着／
溶出　段階は、クロマトグラフ分離の用意にサンプルを
濃縮するために利用される。時々、第三希釈溶液／ＨＰ
−２０吸着／溶出　段階が体積縮小のためには望ましい
。

固体栄養培地からの若しくは菌糸体バンドからの活性剤
の初期抽出に用いられるアルコール溶媒は、メタノール
、エタノール、イソプロパツールなどの低級アルコール
のいずれであってもよい。

メタノールが好適である。

アルカノールまたはメタノール溶液からの活性剤の抽出
若しくは分配に有用な水〜非混合性非極性有機溶媒は、
酢酸エチル、酢酸イソプロピル、酢酸ブチルなどのエス
テルか、メチルエチルケトンのようなケトンである。低
級脂肪酸エステルが好適である。

クロマトグラフィーによる分離は、非イオン性樹脂を有
する慣用のカラムクロマトグラフィーを用いることによ
って、または逆相樹脂を利用した高性能液体クロマトグ
ラフィーによって行うことができる。抗生化合物ＴＡを
含む両分はカンデイダアルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ　
ａｌｂｉｃａｎｓ）を用いてノ＼イオオートグラフィー
により検出することができる。一般にクロマ（・グラフ
ィーによる２段階以上の分離工程が用いられる。最も好
ましい操作にあっては、１工程以上の分離をカラムクロ
マトグラフィーを用いて行い、最終分離工程をＣｕｅ逆
相樹脂を有する高性能液体クロマトグラフィ＝（ＨＰＬ
Ｃ）を用いて行う。

クロマトグラフィーによる分離に、慣用のカラムクロマ
トグラフィーを用いる場合は、シリカゲルが好ましい吸
着剤である。通常、クロマトグラフィーによる２段階以
上の分離が必要となる。シリカゲルは、異なる溶離剤を
用いる場合でも、全分離工程で使用することができる。

しかし他の吸着剤、例えば５ＥＰＩＩＡＤＥＸ　Ｌｌｌ
−２０（Ｐｈａｒｍａｃｉａ社製）の商品名で販売され
ているデキストランゲルの使用と有利に組み合わせるこ
とができる。他の吸着剤として、？、＋［／ミナやＩＩ
ＩＩＩＩＯＮ　ＩＩＰ−２０，ＨＰ−３０，ＩＩＰ〜４
０．５Ｐ−２０７（三菱化成工業製）や八ＭＢＥＩ？Ｌ
ＩＴＥＸＡＤ−２，ＸＡＤ−４，ＸＡＤ４６　　［ロー
ムアント−ハース（Ｒｏｈｍ　ａｎｄ　Ｈａａｓ社製コ
として商業的に入手し得るスチレン−ジビニルベンゼン
共重合体もまた使用することができる。

シリカケル上クロマトグラフィーによる活性成分の分別
並びに回収にあっては、アルコールの濃度を増大させた
エステル／アルコール混合物が良好な分離を与える。酢
酸エチルとメタノールとの混合物が特に有効であること
が判った。これら混合物は均等（ｉｓｏｃｒａｔｉｃ）
、段階勾配または連続勾配の各県に置いて用いることが
できる。５ＥＰＨＡＤＩＥＸＬＨ−２０のようなデキス
トラン吸着剤を使用する場合は、塩化炭化水素／炭化水
素／アルコール溶剤系を用いることができる。塩化メチ
レン／ヘキサン／メタノールの混合物が特に有効である
ことが分かった。

ＨＰＬＣによる分離を行うには、慣用のクロマトグラフ
ィーから回収された物質を含むアルコール溶液を濃縮し
、残さをメタノールに溶解して市販の逆相樹脂を詰めた
カラム上または文献に詳細に報告されているようにして
製造したシリカゲル／ＣＩ８逆相樹脂を充填したカラム
上に置（ようにする。或いは、上記アルコール溶液を水
で５０％に希釈し、ポンプでカラム上に載せることもで
きる。カラムをメタン／水（１：１または所望により他
の比）を用いて８００−２０００ｐｓｉで操作し、約２
０ｍβ／分の流量を得る。分離を２１０ｎｍにおいてモ
ニターする。

得られた両分の活性をカンディダアルビカンス（Ｃａｎ
ｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ）を用いて検定する。活性
画分を合せ、減圧下で濃縮することによりクロマトグラ
フィー操作から生成物を回収する。生成物は次いで慣用
のクロマトグラフィーあるいは調整用ＨＰＬＣによって
精製することができる。

本発明に包含される他の天然生成物としては、エキノカ
ンディン類（ｅｃｈｉｎｏｃａｎｄｉｎｓ）　ｒ　アク
レアシン類（ａｃｕｌｅａｃｉｎｓ）　、　　ムルンド
カンディン類（ｍｕｌｕｎｄｏｃａｎｄｉｎｓ）　＋　
アスレスタイン［（ａｔｈｌｅｓｔａｉｎ）＋　エキノ
カンディンＴ　（ｅｃｈｉｎｏｃａｎｄｉｎ　Ｔ）とも
呼ばれる］、スボリノフンギン（ｓｐｏｒｉｎｏｆｕｎ
ｇｉｎ）として、または番号による指定によって文献中
に記述されるものを挙げることができる。幾つかのもの
については構造は完全には特定されていないが、これら
化合物は脂肪酸側鎖を有する中性シクロヘキサペプチド
として知られている。

エキノカンディンスとしては、＾ｓｐｅｒｇｉ　ｌ　Ｉ
ｕｓｎｉｄｕｌａｎｓ−ｅｃｈｉｎｕｌａｔｕｓ　（ス
イス特許第５６８．３８６号）により製造されるエキノ
カンディンーＡ［（ｅｃｈｉｎｏｃａｎｄｉｎ−Ａ）　
＋　八−３２２０４−Ａ　としても知られる］　；　Δ
ｓｐ、　ｎ１ｄｕｌａｎｓ　（スイス特許第５６８，３
８６号）及び八ｓｐ。

ｒｕｇｕｌｏｓｕｓ（Ｈｅｌｖ、　Ｃｈｉｍ、　Ａｃｔ
ａ　　６２１１２５２　　（１９７９）　　ｉドイツ特
許第２，５４９，１２７号；ベルギー特許第８３４，２
８９号）により製造される工キノカンデイン−Ｂ　［（
ｅｃｈｉｎｏｃａｎｄｉｎ−Ｂ）　、八３２２０４−Ｂ
並びに５Ｆ−７８１０−Ｆとしても知られる］　　；　
　Ａｓｐ、　ｒｕｇｕｌｏｓｕｓ　　（ドイツ特許筒２
，５４９゜１２７号；ベルギー特許第８３４，２８９号
）により製造されるエキノカンディンーＣ［（ｅｃｈｉ
ｎｏｃａｎｄｉｎ−Ｃ）。

５Ｌ−７８１０−Ｆ　１．１としても知られる］　；Ａ
ｓｐ、ｒｕｇｕｌｏｓｕｓ　（ドイツ特許筒２，５４９
．１２７号；ベルギー特許第８３４　、２８９号）によ
り製造されるエキノカンディンーＤ　［（ｅｃｈｉｎｏ
ｃａｎｄｉｎ−Ｄ）　　Ｓ　Ｌ７８１０−ＦＩＩＩとし
ても知られるコが挙げられる。

エキノカンディンＩＢ、ＣおよびＤはＡｓｐｅｒｇｉｌ
ｌｕｓ　　ｒｕｇｕｌｏｓｕｓ株の発酵によって一緒に
得ることができる。Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　　ｒｕｇ
ｕｌｏｓｕｓの発酵における主な代謝産物はエキノカン
ディンＢでＣ５２Ｈ８＋ＮｑＯ１ｂの分子式を有する。

エキノカンディンＣおよびＤは従たる代謝産物であり、
環式ペプチド環を構成するアミノ酸の幾つかが異なる。

すなわち、エキノカンディンＣはＣ５□ｌＩｓ＋Ｎ７０
＋ｓの分子式を有し、エキノカンディンＢ中に存在する
３、４ジヒドロキシホモチロシンに代えて３−ヒドロキ
シホモチロシンを有する。エキノカンディンＤはＣ５□
Ｈ□Ｎ７０１３の分子式を有し、３．４−ジヒドロキシ
ホモチロシン並びに４．５−ジヒドロキシオルニチンに
代えて３−ヒドロキシホモチロシンおよびオルニチンを
有するものである。

エキノカンディンＢは実施例中に記載されているように
、Ｅｍｅｒｉｃｅｌｌａ　ｎ１ｄｕｌａｎｓの培養によ
っても製造することができる。

アクレアシン類にはアクレアシン−Ａ１アクレアシン−
Ｂ１アクレアシン−Ｃ１アクレアシンＤ１アクレアシン
−Ｂ１アクレアシン−Ｆ、アクレアシン−Ｇ、アクレア
シン−ＡＡ″、アクレアシン−ＤＡ″、アクレアシン−
ＡＧ“、アクレアシン−Ａα、アクレアシン−Ａγ、並
びにアクレアシン−ＤαおよびＤγが含まれる。アクレ
アシン類は米国特許筒３，９７８，２１０号および第４
，２１２゜８５８号、ドイツ特許筒２，５０９，８２０
号並びにベルギー特許第８２６，３９３号に記載されて
いるように、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ａｃｕｌｅａｔ
ｕｓ　　（液体または固体培養菌のいずれか）（好まし
くはＭ４２１４ＦＥＲＭ−Ｐ２３２４）を発酵させ、次
いでその菌糸を水混和性有機溶媒で抽出し、濃縮し、さ
らにクロマトグラフィーにより精製することにより製造
することができる。

文献中に見出だされる他のシクロへキサペプチド抗生物
質は八ｓｐ。

ｓｙｄｏｗｉｃ　隔、Ｙ　−３０４６２（Ｊ、Ａｎｔｉ
ｂｉｏｔｉｃｓ　　４０，２７５および４０，２８１　
　（１９８７）　）により製造されるムルンドカンディ
ン（ｍｕｌｕｎｄｏｃａｎｄｉｎ）　（Ｒ’ＲＪＪ　、
　ＲＬＪｒ　、　Ｒ／７７７はＯＨであり、Ｒ″″′　
はＨであり、Ｒは−ＣＯ（Ｃ）１２）　１Ｏ−Ｃ１１３
Ｃ）１−Ｃ）１２Ｃ）１３テある）である。この抗生物
質は培養菌の濾液と菌糸の双方に存在し、Ｒｏｙ　ｅｔ
　ａｌ、　Ｊ、　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　４０＋２７
５−２８０（１９８７）に、より詳細に記載されている
ように、培養濾液の酢酸エチル抽出物から、シリカゲル
カラムクロマトグラフィーおよび微粒液滴向流クロマト
グラフィーにより単離することができる。

文献中に報告されているもう一つのエキソカンデイン型
環式ペプチドはスポリオフンギン（ｓｐｏｒｉ。

ｆｕｎｇｉｎ）　　（Ｒ’　、、　Ｒ”’およびＲ″”
はＯＨであり、ＲＩＴばＨであり、ＲＪＩＬＴはＣＨ２
Ｃ０Ｎ１１２であり、Ｒ″″′ばＨであり、Ｒは分枝鎖
ＣＩ６脂肪酸基である）であり、この物質はＣｒｙｐｔ
ｏｓｐｏｒｉｏｐｓｉｓ　　（Ｗ　Ｔ　Ｐ○公開、ＷＯ
８２１０Ｏ５８７）菌株ＡＴＣＣ２０５９４またはＮＲ
ＲＬ　　１２１９２を好気的表面培養または浸漬培養と
して種々の慣用の栄養培地上で培養することにより得る
ことができ、菌糸を培養肉汁より分離し、慣用的な方法
、例えばＷｏ　　８２１００５８７に、より詳細に記載
されているように、菌糸をメタノールで均質化し、酢酸
エチルのような水混和性有機溶媒でメタノールから抽出
し、溶媒を除去し、クロマトグラフィーにより精製する
ことにより回収される。

他のエキノカンディン型シクロへキサペプチドとしては
、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｒｕｇｕｌｏｓｕｓ（Ｉｎｄ、　Ｊ、　Ｂ、Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ、　　７．　８１　（１９７０））により製造され
るＸ　−７３、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ（Ｊ
ａｐ、　Ｊ、　Ａｎｔ、、　　１７　２６８　（１９６
４）特公昭４ｌ−１２６８８ｉカナダ特許第６５．１９
２７４号；同７０．２７６０７号）により製造されるａ
ｔｈｌｅｓｔａｉｎＡｃｒｏｐｈｉａｌｏｐｈｏｒａ　
Ｉｉｍｏｎｉｓｐｏｒａ　　（米国特許第４１７３、６
２９号；ドイツ特許筒２．６２８，９６５号）により製
造されるＳ−３１７９４−Ｆ−１，八ｓｐ。

ｎ１ｄｕｌａｎｓおよび八ｓｐ、　ｒｕｇｕｌｏｓｕｓ
　（米国特許第４゜０７４　、２４６号、　　４，０７
４，２４５号：　　４，２８８，５４９号；ドイツ特許
筒２，６４３，４８５号；カナダ特許筒８７．２０６１
２号）により製造されるＡ−３０９１２−ＡまたばＡ−
２２０８２、八ｓｐ、　ｒｕｇｕｌｏｓｕｓ　（米国特
許第４．０２４，２４５号）により製造されルＡ　−３
０９１２−Ｂ　。

Ａ−３０９１２−（ＪよびＡ　−３０９１２−Ｄが挙げ
られる。

天然生成物の変形物質である化合物類としては、側鎖す
なわちＲが不飽和脂肪酸である場合に、これが還元によ
って変形されたものが挙げられる。

これは大気圧下において炭素上Ｐｄを用いて触媒的に行
うことができる。

Ｒ”’　カー　ｏ　−７７１／キル（ＣＩ　　Ｃ６）ま
たは−０ヘンシルである化合物類は、Ｒ″′がＯＨであ
る対応する化合物を、適当なフルカノールと共に、酸性
条件下、室温において数時間ないし一晩中攪拌して混合
物中にエーテルを得、さらに好ましくは反応物を着炭酸
水素塩で急冷し、慣用操作で反応物を回収することによ
り得ることができる。下記実施例中に記載の製法に加え
、イギリス特許公開第２，０５０，３８５Ａにはこれら
化合物の多くの製造について詳細に記載されている。

（式中Ｒ１は水素、アルキルまたは上に定義した置換ア
ルキルであり、Ｒ２は水素またはＣＩ　　Ｃ，＋アルキ
ルであり、あるいはＩ’ｌｌとＲ２とは一緒になって（
Ｃ１１□）２−Ｑ−（ＣＩ＋２）２−　　（式中Ｑは−
ＣＩ＋２−１−Ｎ１１−または−Ｎ　（低級アルキル）
−のような連結基である）を形成する）である化合物は
、Ｒ″′がＯＨであるの化合物と、ｐ−）ルエンスルホ
ン酸、メタンスルホン酸のような有ｍ酸または鉱酸の存
在下、ジメチルホルムアミドのような非プロトン溶媒中
で反応させることにより製造することができ、この方法
はベルギー特許第８５１，３１０号に詳細に記載されて
いる。

アシル側鎖すなわち式中のＲが天然発生脂肪酸から構造
的に特徴のあるアシル基に変形された半合成化合物は、
最初に脂肪酸側鎖を除去した後、特徴的なアシル基を導
入することにより製造することができる。脂肪酸側鎖は
好ましくは酵素的に除去する。シクロへキサペプチド類
を脱アシル化して環式ペプチド核を得るために有用な酵
素は、Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎａｃｅａｅ族のある種の微
生物、特にノーザンリージョナルリサーチセンター（Ｎ
ｏｒｔｈｅｒｎＲｅｇｉｏｎａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　
Ｃｅｎｔｅｒ）、　ＵＳＤＡ＋アグリ力ルチャルリサー
チサービス（Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｒｅ５ｅａｒ
ｃｈＳｅｒｖｉｃｅ＋ペオリア（Ｐｅｏｒｉａ）　　Ｉ
　１１　６１６０４から入手できるかまたはアメリカ合
衆国、メリーランド２０８５２、ロックビル、パークロ
ーンドライヴ１２３０１のアメリカンタイプカルチャー
コレクションから得られるＡ、　ｕｔａｈｅｎｓｉｓ　
ＡＴＣＣ１４５３９として入手し得る微生物Ａ　　ｃｔ
ｉｎｏｐｌａｎｅｓ　　ｕｔａｈｅｎｓｉｓ　　ＮＲＲ
Ｌ１２０５２によって製造されるものである。

酵素はアクチノプラナセアエ（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎａ
ｃｅａｅ）を、温度約２５℃ないし３０℃、ｐＨを約５
．０ないし８．０、好ましくは６．０ないし７，０にて
、培地中で約４０ないし約６０時間、かくはんおよび通
気しながら培養することによって調製することができる
。この培地は以下のものを含有する。（ａｌ同化性の炭
素源、たとえばスクロース、グルコースまたはグリセロ
ール；（ｂ）窒素源、たとえばペプトン、尿素または硫
酸アンモニウム；（Ｃ）りん酸塩源、たとえば可溶性り
ん酸塩および（ｄ）成長促進無機塩。

脱アシル化において、シクロヘキサペプチド化合物また
はシクロへキサペプチド含有基質を、少なくとも４８時
間インキュベートしたアクチノプラナセアエの培養物に
添加する。基質添加後、温度を約２５°Ｃないし約３０
℃の範囲で、培養物のインキュベーションを約２４時間
以上にわたって続ける。

反応はカンジダ　アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａａｌｂ
ｉｃａｎｓ）検定によってモニターすることができる。

最初のシクロへキサペプチド化合物は、カンジダ　アル
ビカンスに対して活性であるが、脱アシル化された核化
合物（ｎｕｃｌｅｕｓ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ）は微生物学
的に不活性である。

その後脱アシル化された核化合物を、半合成化合物の調
製に使用することができる。従来のアシル化法を使用す
ることができる。一つの好ましい方法においては、所望
の酸の２．４．５−）リクロロフェニルエステルを、脱
アシル化核化合物と不活性溶媒中、たとえばジメチルホ
ルムアミド中室温で約１５ないし１８時間反応させる。

これを以下の例により説明する。

下記構造式の脱アシル化核化合物 Ｈ 〔式中、ＥはＨ（化合物ＩＢｉ）を表わす〕を、まず斜
面にアクチノプラネス　ウタヘンシス（Ａｃｔｉｎｏｐ
ｌａｎｅｓ　ｕｔａｈｅｎｓｉｓ）　ＮＲＲＬ　１２０
５２を接種し、該斜面を３０℃で約８ないし１０日間イ
ンキユベートシた後、その斜面培養物を使用して増殖培
地５０ｍ１に接種し、震動させなから３０”Ｃで７２時
間インキュベートしてアクチノプラネス　ウタヘンシス
を発酵させることにより、まず脱アシル化酵素を調製す
ることにより調整することができる。そのインキュベー
トした増殖培地を使用して、第一段階の培地と同じ組成
を有する第二段階の培地４００ｍβに接種し、震動させ
ながら３０°Ｃて約４８時間インキユヘートする。その
後、該培地８００ｍρを使用して、生産培地１００１に
接種し、かくはんと通気を行ない大気圧における空気飽
和の３０％以上の溶解酸素レベルを維持しつつ、約３０
°Ｃで４２時間発酵させ、所望の脱アシル化酵素を得る
。

斜面を調製するだめの培地は、以下の組成を有すること
ができる：ヘビーオー１〜ミール６０．０ｇ；イースト
２．５　ｇ　；　　Ｋ２ＨＰＯ４１，Ｏｇ　；クゼベク
（Ｃｚｅｐｅｋ）　　ミネラル　ストック５．０ｍＡ；
寒天２５．０ｇ；脱イオン水で１βとする。クゼベクミ
ネラル　ストックは以下の組成を有する：ＦｅＳＯ４＋
　　７１１２ｏ　　（２ｍｌ！、中儂塩酸）２ｇ；ＫＣ
ｆｆｌｏｏｇ；門ｇｓｏ４　　・　７１１□０１００ｇ
；脱イオン水で最糸冬ｐｌ＋を６．７に言周整した１ｐ
とする。

第一段階と第二段階の増殖培地両者に適する培地は、以
下の組成を有することができる：へビーオートミール２
０．０ｇ；スクロース２０．０ｇ：イースｌ−２，５ｇ
　；乾燥穀物５．０　ｇ　；　　Ｋ２ＨＰＯ４１，Ｏｇ
　；クゼペク　ミネラル　ストック５．Ｏｍβおよび脱
イオン水でＩＩ２とし最＋ｌｐＨ６，８とする。

生産培地は以下の組成とすることができる：ビーナソツ
　ミールｉｏ、ｏｇ；可溶性ミート　ペプトン５．０ｇ
；スクロース２０．０　ｇ　；　　ＫＨ２ＰＯ４０，５
ｇ　；　　Ｋ２ＨＰＯ４１，２ｇ　；ＭｇＳＯ４・７１
１２００．２５ｇ　：水道水でＩＱとする。

シクロへキサペプチド（Ｉ　Ｂ）のアルコールン容液〔
Ｅはステアロイル（テトラヒドロエキノカンジン（ｔｅ
ｔｒａｈｙｄｒｏｅｃｈｉｎｏｃａｎｄｉｎ）　Ｂ　）
またはバルミトイル 上記生産発酵培地に加え、脱アシル化をカンジダアルビ
カンスに対する検定によりモニターする。

脱アシル化の終了と同時に、核化合物を含有する発酵肉
汁培地を濾過し、ＨＰ−２０樹脂に通して核化合物をカ
ラム上に置き、該化合物を２００３００ｍｆｆ／分の速
度で水／メタノール（７／３）で溶離した。溶出液を、
酸塩化物で処理することにより核化合物についてモニタ
ーし、カンジダ　アルビカンスに対する活性について検
定を行なう。活性を示す溶出液の両分を濃縮して核化合
物（ＩＢ　ｉ）を得る。

このようにして得られた脱アシル化シクロペプチド化合
物を、水／アセトニトリル／酢酸／ピリジン（９　６／
２／１／１）中に溶解して精製し、流速約６０ｍｊ２／
分で逆層液体クロマトグラフィー　（ＬＩＣＩＩＩＩＯ
ＰＲＥＰ　）ＩＰ−１８）により精製し、Ｕ．Ｖモニタ
ーを使用して２８０ｎｍにて分離をモニターする。

２８０ｎｍにおける吸収に基づいて、所望の化合物を含
有する両分を結合させ、減圧下で濃縮してアシル化に使
用するかまたは以後の使用に供するため凍結乾燥する。

エキノカンジンタイプの天然生成物と同し核を有する脱
アシル化シクロヘキサペプチド化合物は、米国特許第４
，２９３，４８２号に更に詳しく記載されている。同じ
ような核を有する他の脱アシル化シクロヘキサペプチド
化合物の同様な調製は、米国特許第４，　１７３，　６
２９号．　　４，２９３，４９０号．　　４，２９９．
７６３号．　４，２９９，７６２号および４，３０４，
７１６号に記載されている。

その後、該脱りシル化化合物を使用して、新規なおよび
／または特異なアシル化化合物を製造することができる
。

特異なアシル誘導体を製造するための脱アシル化核化合
物のアシル化は、式（Ｉ　Ｂ）中のＥが下記式： で表わされる化合物の調製により説明される。そのよう
な化合物は、Ｒが（ｃ）（ｉ）のもとで定義された基で
ある式Ｉの化合物によっても説明される。

アシル化において、アシル基は好ましくはトリクロロフ
ェニルエステルによって導入される。まず、トリクロロ
フェニルエステルを、カップリンフ グ剤、たとえばＮ、Ｎ’−ジシクロへキシルカルボジイ
ミドの存在下、不活性溶媒中たとえば塩化メチレン中、
側鎖酸を２．４．５−）リクロロフェノールで処理する
ことにより調製することができる。２，４．５−１−リ
クロロフェノール約１，１モルおよびカップリング剤１
．０モルを、アルコキシ安息香酸１モルに対し使用する
。混合物を室温で１５ないし１８時間かくはんしてエス
テルを得る。このエステルは、固型物を濾過し、濾液を
減圧下で蒸発して残渣を再結晶することにより回収する
ことができる。

こうして調製されたエステルを、ジメチルホルムアミド
中核化合物の溶液に加え、約１８時間かくはんした後、
溶媒を蒸発して除去する。残渣を洗浄した後、溶離剤と
して酢酸エチル−メタノール（３／２）を使用してシリ
カゲル上でクロマトグラフを行ない、所望のオクチルオ
キシベンゾイル誘導体を得る。これはＥとしてオクチル
オキシベンゾイル基を有する式ＩＢ中に表わされている
。

そのような化合物は、１−　［（４Ｒ，５Ｒ）−４゜５
−ジヒドロキシ−Ｎ２−［４−（オクチルオキシ）ベン
ゾイル］−Ｌ−オルニチン］エキノカンジンＢと命名さ
れる（化合物ｌＢ１１）。

化合物ＩＡに加え他の好ましい化合物には、化合物Ｉ　
Ｂ　ｉｉ　；エキノカンジンＢ　（Ｒ’、Ｒ″。

Ｒ／／／　、　ＲＬｕ１ｌは０■　；Ｒ″″′およびＲ
″″″はＣＩ＋３；Ｒは−Ｃ（ＣＨｚ）４Ｃ）Ｉ＝Ｃ）
ｌ（ＣＨｚ）７ｃＨ３）　；テトラヒドロエキノカンジ
７Ｅｉ　（Ｒ’　、　Ｒ”　、　Ｒ”’、　Ｒ″”はｏ
ｌ（；Ｒ″″′およびＲ″″″はＣＨ，；　Ｒは−Ｃ（
ＣＨｚ）　＋　ｂｃＨａ）　ｉｏ−メチルテトラヒドロ
エキノヵンジンＢ（Ｒ’Ｒ“およびＲ１１ＮはＯＲ，Ｒ
”’は一０ＣＩｈ　；　Ｒ″’　およびＲ／／＃／／は
ＣＨ，ｉ　Ｒは−Ｃ（ＣＨｚ）　１ｂｃＨ３）　　；お
よび０−ペンジルテトラヒドロエキノヵンジンＢ（Ｒ’
、Ｒ“およびＲ／／／／はＯＨ，Ｒ”は−０ＣＨｚＣＪ
ｓ。

Ｒ／１Ｆ７′　およびＲ″″″はＣ１，；　Ｒは−Ｃ（
ＣＨ２）　Ｉ　６ＣＩ＋３）が挙げられる。

哺乳類に於けるニューモシスチスカリニイ感染症の治療
又は予防のために本発明の方法は、式Ｉで表わされるシ
クロへキサペプチド化合物の治療上有効な量又は抗感染
量をニューモシスチスカリニイに感染した患者に又は感
染を受けやすい免疫妥協（ｃｏｍｐｒｏｍｉｓｅｄ）患
者に投与することを包含している。

免疫妥協患者の治療及び抗感染目的に対するシクロへキ
サペプチドの効能はまず免疫抑制ラット及び免疫制御マ
ウスによる研究で定量することができる。

ラットに化合物ＩＡを使用する代表的な研究では、体重
が各々約２００ｇの９匹の雄のスプラグダウレーラソト
を飲料水にデキサメタシンを添加（２，Ｏｎｗ／ｌ！、
）することによって免疫抑制してＰ、カリニイ感染症の
発生を誘発させた。感染を促進するためにラットを低タ
ンパク食で維持した。

７週目の始めにラットを各々３匹ずつの３グループに分
けた。３つのグループは全て残りの研究の間飲料水中の
デキサメタシンと低タンパク食を受けることを続けた。

グループ■のラットは未処理の感染対照として維持し、
グループ■には化合物ＩＡ２ｇを含む滅菌ｄＨ２００，
５ｍｌｌを１日２回２週間腹腔内に注射し、グループ■
にはＰ、カリニイ感染症の公知の治療法である飲料水中
のトリメトプリム−スルファメトキサゾール（ＴＭＰ−
３ＭＺ）　　（ＴＭＰ　２０８■及びＳＭＺ／４１．０
４０ｇ）で２週間処理した。２匹のラットが実験の始め
に死んだ。１匹はグループ■からのものであり（ラット
７２Ａ）、他の１匹はグループ■からのものであった（
ラット７５Ａ）。これらがニューモシスチス肺炎で死ん
だかは決められなかった。

２週間処理した後ラットを犠牲にし、肺組織を取り除い
た。各ラットからの肺の重量をはかり、次に各々のラッ
トに対して嚢胞と寄生体積の数を測定するために処理し
た。この実験の結果は表■に示される。

これらの結果は、化合物ＩＡがＰ、カリニイ感染症に対
して効能があることを証明している。嚢胞は対照ラット
の３．２Ｘ１０Ｒ〜１．５Ｘ１０９の範囲のレベルと比
較した場合、化合物ＩＡで処理したいずれのラットの肺
にも見られなかった。また対照（５，８×１０９〜１．
４×１０１０）と比較した場合、これらのラットの寄生
体積の数（１，０〜２、ｌＸ１０９）にも減少があった
。これらの結果は、ＴＭＰ−５ＭＺラットがＰ、カリニ
イ嚢胞の検出可能なレベルを有することから、Ｐ、カリ
ニイ感染症に対して公知の療法であるＴＭＰ−３ＭＺで
処理した動物に見られるものより優れている。

同様のラットの研究が１−　［（４Ｒ，５Ｒ）４．５−
ジヒドロキシ−Ｎ２−　［４−（オクチルオキシ）ヘン
ゾイル］−Ｌ−ｉｉオルニチン］エギノカンジンＢ（化
合物Ｉ　Ｂ　ｉｉ　）の抗ニューモシスチス活性を測定
するために行なわれた。免疫を抑制した６週間後ラット
にベヒクルのみ、化合物ＩＢ　ｉｉ　　（２ｍｇ／　ｋ
ｇ）又は化合物ＩＡ（２ｍｇ／ｋｇ）を１日２回７日間
注射しこの間免疫抑制が続けられた。この処理後ラット
を犠牲にし、肺１個当りの嚢胞の数を測定した。化合物
ＩＡは〉９９％嚢胞数が減少し化合物Ｉ　Ｂ　ｉｉは約
８４％嚢胞数が減少したくヘヒクル対照１０％ＤＭＳ○
に比べて）。

研究はまたマウス及び式Ｉ範囲内の別の化合物で行なわ
れた。マウス及び別の化合物で行なわれる研究で用いら
れる代表的な方法は次の通りである。

体重が各々２２〜２４ｇの雄のＣＩ＋３／　１ＩｅＮマ
ウスを飲料水にデギサメタゾンを添加することによって
Ｐ、カリニイ感染症の発生を誘発させた。感染を促進す
るためにマウスを低タンパク食で維持した。７菌目の始
めにマウスを６つのグループに無作為に分けた。グルー
プは全て残りの研究の間飲料水中のデキザメタゾン及び
低タンパク食を受けることを続げた。各グループのマウ
スにヘヒクル対照として１０％ＤＭｓｏｉ液０．５ｍｆ
ｆ又は服用量２　ｒＬ＃Ｚ／　ｋｇを得るように薬剤を
含む同じカフテールを１０２回腹腔内に注射した。この
操作を１週間続けた。

この処理の後（合計７週間の免疫抑制）、マウスを犠牲
にし肺組織を取り除いた。次いでこの組織を各マウスに
対して嚢胞の数を測定するために処理した。

種々の化合物に対する結果は表■に示される。

表■ イ土］セし 役１１　１虫 テトラヒドロ エキノカンジンＢ　（ＴＥＢ） ２■／ｋｇ。

９９％ Ｏ−メチル−ＴＥＢ ２■／ｋｇ 〉９９％ ０−ヘンシル−ＴＥＢ ２■／　ｋｇ ９９％ エキノカンジンＢ ２■／　ｋｇ 〉９９％ 化合物ＩＡ ２ｍｇ／ｋｇ 〉９９％ 前述の試験結果及び人に適用したＴＭＰ−３ＭＺに対す
る公知の投薬量範囲から一般にシクロヘキサペプチド抗
ニューモジスト剤（化合物Ｉ）約０．５〜２０．０■／
体重ｋｇが患者の健康状態、体重、年齢及び薬剤に対す
る応答に影響する他の因子並びにヒト患者又は動物に適
用されるかを考慮しながら使用することができる。人間
に適した服用量として表わされる場合これらの量は好ま
しくは非経口投与により１日約３５〜１５００■の範囲
にある。

化合物が通常の医薬配合手法に従って医薬的に使用し得
る担体と共に新規な医薬組成物に処方される場合に顕著
な特性が最も有効に利用される。

新規な組成物は有効化合物を少なくとも１重量％含有す
る。この組成物の製造に於て、化合物■は通常の医薬的
に使用し得る担体のいずれとも密接に混和される。

組成物は経口、直腸、局所、非経口（皮下、筋肉内、静
脈内を含む）肺（鼻腔又は口腔吸入）、鼻腔投与又は通
気法に適した組成物を包含する。

シクロヘキサペプチド抗ニューモシスチス剤の化合物Ｉ
は注射用組成物に処方されることが好ましく、必要なら
ば防腐剤を添加してアンプル又は多回投与容器に単位投
薬形態で存在させることができる。組成物はまた油中又
は２０／８０エタノール／プロピレングリコール又は２
０〜３５％ポリエチレングリコール３００のようなベヒ
クル中懸濁液剤、液剤又は乳剤のような形態を取ること
ができ、沈殿防止剤、安定化剤及び／又は分散剤を含有
することができる。他方有効成分は投与前に適当なベヒ
クルと再構成するために又は通気法で用いるために粉末
形態にあることができる。

明細書で使用される単位投薬形態という言葉は、物理的
に分離している単位を意味し各単位は、医薬担体と共に
所望の治療効果を生じるように計算された所定量の有効
成分を含んでいる。かかる単位用量形態の具体例は、ア
ンプル又は多回投与容器等の単位と判断される。本発明
の単位投薬量は一般にシクロへキサペプチド抗ニューモ
シスチス剤１００〜１０００■を含有する。

式Ｉの化合物の有効な投薬量で患者に投与するためにい
かなる適切な投与経路も使用することができる。例えば
経口、直腸、局所、非経口、眼、肺、鼻腔等を使用する
ことができる。投薬形態は錠剤、トローチ剤、分散剤、
懸濁液側、液剤、カプセル剤、クリーム剤、軟膏、エー
ロゾル剤、通気用散剤等を包含する。

組成物は経口、直腸、局所、非経口（皮下、筋肉的静脈
内を含む）、肺（鼻腔又は口腔吸入）鼻腔投与又は通気
法に適当な組成物を包含する。

吸入による投与に対して本発明の化合物は、圧力容器又
は噴霧器からエーロゾル噴霧の形態で供給することが便
利である。化合物はまた処方することができる粉末とし
て供給することもできこの粉末組成物は通気粉末吸入装
置によって吸入させることができる。吸入に好ましい供
給系は計量された服用量吸入ＣＭＤＩ）エーロゾルであ
り、これは適当な推進薬例えばフルオロカーボン又はヒ
ドロカーボン中化合物■の懸濁液又は溶液として処方す
ることができる。

化合物が医薬的に使用し得る液体担体に難溶性であり、
肺及び気管支に直接治療することが望ましいため、エー
ロゾル投与が好ましい投与方法である。通気法もまた特
に感染が耳や他の体腔に広かってしまう場合に望ましい
方法である。

他方、非経口投与は静脈内滴注投与を用いて使用するこ
とができる。かかる方法では薬剤をアルコール／プロピ
レングリコール又はポリエチレングリコール組成物中に
溶解させることができる。

腹腔内注射も使用することができる。

次の実施例は、化合物ＩＡ及び弐Ｉの他の親油性シクロ
へキサペプチド化合物の製造方法及びニューモシストカ
リニイを制御する本発明に有用な組成物を具体的に説明
するものであるが限定するものとして解釈されるべきで
はない。

黄Ｕ ザレリオン　アルポリコラ（Ｚａｌｅｒｉｏｎ　　Ａｒ
ｂｏｒｉｃｏｌａ）　、ＡＴＣＣ２０８６８として同定
されメルク力ルチュアコレクションに保存されている最
初に水から分離された培養菌８５２５−３０７Ｐの単離
物２のグリセロール中の凍結培養液を発酵に使用した。

凍結培養液２　ｍ１分を解凍し、培地１５４ｍβを含む
２５０ｍ１のハソフルの付いていないエルレンマイヤー
フラスコに無菌的に移植した。接種後培地１を回転攪拌
（２２Ｏｒｐｍ　、２″スロウシエーカー）しながら２
８°Ｃで３日間温置した。この後増殖培地２．０ｍｌを
、培地１を含むいくつかのハソフル付きでない２５０ｍ
ｊ！エルレンマイヤーフラスコの各々に無菌的に移植し
た。接種フラスコを２８℃で２Ｂ間温置した。

成熟種子ブイヨン１２．５ｍｊ！を培地２を含有する５
本の生産フラスコに接種し、静止条件下２５℃で７日間
温置して発酵培地中の抗生物質を得た。

前述の発酵に使用した培地は次の通りである。

培地１　　（ＫＦ種子培地） コーン浸漬液 トマトペース１〜 オート麦粉 グルコース 痕跡性元素混合物 ５ε ０ｇ １０ｇ １０ｇ ０ｍｊ２ 蒸留水 ｐＨ６，８ 痕跡性元素混合物 Ｆｅ５Ｏｓ　・７Ｈ２０ ＭｎＳＯ４−４，Ｈ２Ｏ ＣｕＣｊ２２−　Ｊ２０ ａＣｊ２２ １３Ｂｏ３ （ＮＨｔ）ＪｏＯ□・４Ｈ２０ ＺｎＳＯ４・７１１２０ 蒸留水 全量１０１００Ｏ’ ｇ ｇ ２５■ １００■ ５６■ １９■ ２００■ 全量１０００ｍ７！ 培地２　（Ｆｚｏ４固形培地） 用量／フラスコ アワヘース　　　　　　　　　　　　１５ｇ酵母エキス
　　　　　　　　　　　　、５ｇ酒石酸ナトリウム　　
　　　　　　　、１ｇ硫酸第一鉄　　　　　　　　　　
　　、０１ｇグルタミン酸モノナトリウム　　　　、１
ｇとうもろこし油 　　ｍｌｔ 華■ 固相発酵の５本の２ρフラスコの各々に５００ｍｆｆの
メタノールを添加した。次いでフラスコの内容物を合わ
せ、メタノール可溶性物質を抽出するために攪拌し、次
に混合物を濾過した。更にメタノール可溶性物質を抽出
するために廃ケークを追加のメタノール２５００ｍｆｆ
と攪拌した後混合液を濾過した。

濾液と洗液を合わせ５００ｍＡに濃縮した。

こうして得られた水性メタノール濃縮液を次に酢酸エチ
ル５００ｍＩずつで２回抽出した。廃水溶液をＤＩＡＩ
ＯＮ　ＨＰ−２０カラムに装填し、活性物質を吸着させ
次にこれをメタノールで溶離した。この溶出液を前に得
られた酢酸抽出液と合わせ、合わせた酢酸エチル溶液を
濃縮乾固した。残留物を溶離液として５：５：２の塩化
メチレン／ヘキサン／メタノールを用いて５ＥＰＨＤＥ
Ｘ　ＬＨ−２０２００ｍｌによりクロマトグラフィ処理
した。

カンジダ　アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃ
ａｎｓ）によって定量された有効な両分を合わせ、酢酸
エチル／メタノールで段階勾配溶離を用いてシリカゲル
（ＥＭサイエンス、ＫＥＩＳＥＬＧＥＬ　６０　、　２
３０〜４００メソシユ）２００ｍｌによりクロマトグラ
フィ処理した。このクロマトグラフィからの活性画分を
合わせ濃縮し、７５　：　２５の酢酸エチル／メタノー
ルイソクラデック系を用いてシリカゲルによりクロマト
グラフィ処理した。

次にこのクロマトグラフィからの活性部分を合わせ溶離
溶媒としてメタノールを用いて５ＥＰＨＡＤＥＸＬＨ−
２０１００ｍρに装填した。溶媒を蒸発させた後溶出液
は精製化合物９５ＩＩｙを生成した。化合物は第１図に
示される’ＩＩＮ）ＩＲスペク１−ルを有する白色固体
であった。

実施例Ｂ 主群 実施例へに記載したと同様の方法でメルク力ルチュアコ
レクションからのＡＴＣＣ２０８６８０１本の凍結ヴア
イアルの内容物を解凍し、０．４％寒天を含むＫＦ培地
（培地１）５４ｍｊ＋を含有する２５０ｍβのバッフル
付きでないフラスコに無菌的に移植した。接種後修飾さ
れた培地１を２２Ｏｒｐｍで攪拌しながら２８℃で４８
時間温置した。この後増殖培地１０１ＩＩＩｌを、０．
４％寒天を含むＫＦ培地５００ｍＩｌを含有する２１の
バッフル付きでないフラスコに移植した。接種後得られ
た培地を２２Ｏｒｐｍで攪拌しながら２８℃で２４時間
温置した。

培地２　１２０ｇ及び 酵母エキス　　　　　　　　　　　５重量部酒石酸ナト
リウム　　　　　　　　１重量部硫酸第一鉄　　　　　
　　　　　０．１重量部グルタミン酸モノナトリウム　
　　１重量部とうもろこし油　　　　　　　　　１重量
部からなる保存溶液１２０ｍｌ１を各々含有する２０本
の２βフラスコを１２２℃で２０分間オートクレーブに
かけ次に水８０ｍ１と更に１２２℃で２０分間再びオー
トクレーブにかけた。フラスコを冷却しておき、次いで
上述した通り調製された種子培地２０ｍｊ！を接種し、
接種したフラスコを静止条件下２５℃で１４日間温装し
た。

」 １９本の２！固形発酵フラスコの各々にメタノール１１
を添加し、内容物を合わせ、攪拌し、濾過した。廃ケー
クをメタノール６Ｉｌで２回抽出した。次いで水性メタ
ノール濾液を濃縮し濃縮物を酢酸エチル２１で２回抽出
した。酢酸エチル抽出液を合わせ、乾燥し、約１００ｍ
ｊ！に濃縮した。

次いで濃縮物にメタノール１００ｎｌ及びシリカゲル１
００ｍｊ！を添加し、この成分を密接に接触させ、次に
回転蒸発器で溶媒を除去することによって濃縮物をシリ
カゲルに被覆した。次いで乾燥シリカゲルをシリカゲル
５００ｍ７！のカラムに適用し、カラムを酢酸エチルで
洗浄して不純物を除去し、９：１の酢酸エチル／メタノ
ールで溶離した。カンジダ　アルビカンスに対して陽性
の抗生物質を含有する溶出液を回収し、合わせた。

シリカゲルクロマトグラフィから抗生物質に富む留分を
１０：１０：１の塩化メチレン／ヘキサン／メタノール
２０Ｏｎ＋７！に溶解し、得られた溶液を５ＥＰ）ＩＡ
ＤＥＸｌ、）Ｉ−２０＜予めメタノールに一晩浸漬し、
次に塩化メチレン／ヘキサン／メタノール２００ｎｌで
２回洗浄することによって調製されている）４０ｎｌと
混合した。数分後上澄みを濾過ニヨッテ除去し、５ＥＰ
）ＩＡＤＥＸ　Ｌｌｌ−２０を塩化メチレン／ヘキサン
／メタノール２００　ｍｌで洗浄し次に濾過した。濾液
は活性成分を含まないことがわかり捨てた。デキストラ
ン５ＥＰＨＡＤＥＸ　ＬＨ−２０ビーズに分配した活性
成分をメタノール２００ｍｆｆで２回洗浄して抽出し、
これらのメタノール洗液を合わせ、Ｓ縮した。

次にメタノール濃縮液をシリカゲル２００ｍ＃に注ぎ７
５：２５の酢酸エチル／メタノールで溶離し、溶出液を
合わせ溶媒を蒸発させて化合物ＩＡを得た。化合物ＩＡ
は分解点２０６〜２１４℃を有する白色粉末である。エ
キノカンジンＢ誘導体の製造方法 実施例Ｃ エキノカンジンＢの１１′告 Ａ、１葺 メルク　力ルチュア　コレクションからの培養菌ＭＦ５
１００エメリセラ　ニジュランス（Ｅｍｅｒｉｃｅｌｌ
ａ　ｎ１ｄｕｌａｎｓ）　Ａ　Ｔ　ＣＣ２０９５Ｇを次
の通り種子養成発生に使用した。ＭＦ５１００の凍結ヴ
アイアル（約２．５　ｎｕ’）　　１本を使用してＫＦ
培地５４ｍ＃に接種し、２５０ｍｆのバッフル付きでな
いエルシンマイヤーフラスコ中で２８℃及び２２Ｏｒｐ
ｍで７２時間培養して”Ｂ”期培養液を得た。“Ｂ゛期
培養液５ｍβを使用して２１のバッフル付きでないエル
シンマイヤーフラスコ中のＫＦ培地５００ｍ＃に接種し
、２８℃２２０ｒｐｍで４８時間温置して“Ｃ”期培養
液を得た。

４本の“Ｃ″期フラスコを用いて“Ｄ″期（３００β攪
拌発酵槽）に於ける痕跡性元素混合物＃２を含むＫＦ培
地１６０！に接種した。

この３期の種子養成を８００１の発酵槽中の“Ｅ”規模
発酵に使用した。発酵は、２８℃背圧０．７ｋｇ／ｃｄ
ｌ、通気０．３００ｍ（１分当り５３β）及び攪拌１１
００ｒｐで２３時間行なった。

“Ｅ”期の生産物に次の組成を有する生産培地５７００
／！中で°′Ｄ”期からの５％種子を接種した。

グリセロール　　　　　　　　　８５　ｇ／Ｌペクチン
　　　　　　　　　　　　Ｌｏｇ／Ｌ落花生ミール　　
　　　　　　　　　４　ｇ　／　Ｌペグ１−ン化ミール
　　　　　　　　　４　ｇ／Ｌ乳餅　　　　　　　　　
　　　　　　　４　ｇ　／　Ｌトルトペースト　　　　
　　　　　　　　　４　ｇ／ｒ。

コーン浸漬液　　　　　　　　　　　４　ｇ／Ｌ豚脂水
　　　　　　　　　　　　　　４ｇ／Ｌグリシン　　　
　　　　　　　　　　２　ｇ／Ｌ−塩基性リン酸カリウ
ム　　　　　　２　ｇ／ＬポリグリコールＰ−２０００
１川Ｌ／　Ｌこの培地を１２３°Ｃで２５分間滅菌し、
次いで発酵を温度２８℃、陽圧約Ｑ、　８ｋｇ　／　ｃ
Ｊ　、通気６０００β／分、攪拌速度１２　Ｏｒｐｍ　
、　ｐＨ５，５〜６．５に於て溶存酸素を３０％以上に
維持して約３６時間行なった。

Ｂ、！！ ＨＰＬＣ検定（比較標準エキノカンジンＢに対して）に
よるエキノカンジン８３５５ｇを含む上記発酵からの全
ブイヨンを同量のメタノールで一晩抽出した。希釈した
ブイヨンを遠心してブイヨン固形分を除去し、遠心分離
液を５０＝５０のメタノール／水で平衡にした４５０１
の５Ｐ２０７カラムに吸着させた。１００１の水で洗浄
し、１０００βの５０：５０のメタノール／水で洗浄し
た後、カラムをメタノールで溶離し、溶出液を１８９ρ
に濃縮し、塩化メチレンで分配した。水性メタノール層
を水の添加により５０　：　５．０のメタノール／水に
調節し、メタノールで予め洗浄しｓｏ：ｓｏのメタノー
ル／水で予め平衡にした１００ＡのＨＰ−２０カラムに
吸着させた。５０５０のメタノール／水で洗浄した後カ
ラムを８０　：　２０のメタノール／水で溶離した。８
０：２０の溶出液を水で５０：５０に調節し、次に前の
通り予め平衡にした２７ｎの５Ｐ２０７カラムに吸着さ
せた。次いでこのカラムをメタノールで溶離した。

ＳＰ２０７ｉ９出液の１９ｇアリコートを水で５０　：
　５０のメタノール／水に希釈し、３．９１のアミコン
分取用Ｃ−１８カラムに吸着させた。アセトニトリル／
水（２５ニア５）から１００％アセトニトリルまでの勾
配を７５分間にわたって使用して化合物を溶離した。ア
セトニトリル／水から濃縮及び凍結乾燥した後選択され
た留分は、純度８７〜９１％のエキノカンジン８１６ｇ
を生成した。

前述のエキノカンジンＢの同定及び純度は以前に製造さ
れ精製された以下の性質を有するエキノカンジンＢの試
料とＨＰ　Ｌ　Ｃ及びスペクトルを比較して決定し、そ
の同定はエキノカンジンＢの発表された構造と比較して
確かめた。

実施例り 一トラヒドロエキノカンジンＢの 純度約８７パーセント（ＨＰＬＣ）のエキノカンジンＢ
　（ＥＢ）５．０グラムを無水エタノール１５０ミリリ
ソ１ヘルに溶解し、１気圧の水素下で２０分間予め減圧
したエタノール８０ミリワツトル中１０％Ｐｄ−Ｃに加
えた。添加後、その混合物を１気圧の水素下で４時間す
ばやく攪拌した。

Ｃ８プルハソクス（ＺＯＲＢＡＸ）カラム上で、流速１
ｍｊ！　／ｍｉｎ　、　３０℃で、Ｃ１１３ＣＮ／＋１
２０　　（８１／１９）を用いたＨ　Ｐ　Ｌ　Ｃによる
分析によれば、反応はこの時殆ど完了していた。

反応混合物をセライトバンドを用いて濾過し、そのパッ
ドをエタノールで洗い、その混合物を真空中で濃縮して
固形物を得た。Ｃ１１３ＣＮ／ｌ−１２０（８１／１９
）の５ミリリットルに？容解した０、５グラムのバッチ
１０個でその固形物を精製した。ＨＰ　ＬＣをＣ８プル
ハソクス１インチのカラムで行い、ＢＯ％メタノール／
２０％水を用いて１５ｍｊ！／ｍｉｎの流速で溶出した
。テトラヒドロエギノカンジンＢを３．１５グラム（７
９％）の全収量で得た。

実施例Ｅ Ｏ−メチルデトラヒドロエキノカンジンＢの製テ］・ラ
ヒドロエキノカンジンＢの５５ミリグラムをメタノール
４ミリリットルに？容解した。この溶液にｐ−）ルエン
スルホン酸４．０ミリグラムを加え、その混合物を室温
で３時間攪拌した。ＨＰＬＣ分析によれば、この時反応
が完了していた。

反応混合物をＩＮ重炭酸ナトリウム溶液で冷却し、飽和
塩化ナトリウム溶液で２回洗い、２００ミリリツトルの
イソプロパツール／クロロホルム（２／７）で希釈した
。

有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、溶媒を蒸
発させて残留物として殆ど白色の固形物を得た。後者を
最初メタノールで精製し、ついでＨ２０／ＣＨ３ＣＮ　
　（２：　３）で精製し、４ミリリツトルのフラクショ
ンで０８０バー（１；０ＢＡＲ）サイズＡカラム上を用
いて、１（２０／ＣＨ３ＣＮ　　（２：　３）中で、Ｍ
ＰＬＣによりクロマトグラフした。４２．４■（７６％
）の収量でその化合物を得た。

実施開Ｌ Ｏ−ペンジルテトラヒドロエキノカンジンＢのした。そ
れに無水ベンジルアルコール９７ミリリソトルを加え、
生成した混合物をすべてが完全な溶液になるまで攪拌し
た。生成した溶液にｐ−）ルエンスルホン酸−水和物１
■を加え、混合物を室温で３時間攪拌した。）（ＰＬＣ
分析によれば、その反応は完了したことが示された。反
応混合物はＩＮ重炭酸ナトリウム溶液で、次ぎにイソプ
ロピルアルコール／クロロホルム（３：　７）で希釈し
た。、有機溶液を水で２回洗い、乾燥させ、蒸発させ、
その生成物を残留物として回収した。

次の実施例は本発明を実施するのに有用な新規な組成物
を示すもので、本発明を限定するものと解釈すべきでは
ない。

次の組成を有するエアロゾル組成物を製造することがで
きる。

テトラヒドロエキノカンジンＢの５０ミリグラムをテト
ラヒドロフラン１ミリリツトル中に懸濁化合物１ａ レシチン、ＮＦ液体濃縮物 ２４■ １．２■ トリクロロフルオロメタン ジクロロジフルオロメタン エキノカンジンＢ オレイン酸 トリクロロフルオロメタン ジクロロジフルオロメタン ０−メチルテトラヒドロ エキノカンジンＢ ソルビタントリオレエート トリクロロフルオロメタン ジクロロジフルオロメタン ４、０２５　ｇ １２、１５　ｇ ２４■ １．２■ ４．０２５ｇ １２、１　５　ｇ ２４■ １．２■ ４、０２５　ｇ １２、１５　ｇ 注射可能な懸濁液（ＩＭ）を次のように調製することが
できる。

スＭｉｘ 化合物１ａ　　　　　　　　　　　　　　１０メチルセ
ルロース　　　　　　　　　　５．０ツイーン（Ｔｗｅ
ｅｎ）　　８０　　　　　　　　　０．５ベンジルアル
コール　　　　　　　　　９．０ベンザルコニウムクロ
ライド　　　　　１．０１　ｍｌとする水 一般的情報 エキノカンジンＢについて エメリセラ・ニデユランス（Ｅｍｅｒｉｃｅｌｌａ　ｎ
１ｄｕｌａｎｓ）（アスペルギルス・ニデユランス（Ａ
ｓｐｅｒｇｉｌ　Ｉｕｓｎｉｄｕｌａｎｓ）の後期成長
段階、エキノカンジンＢについての製造微生物として確
立されている）、そしてメルク・カルチャー・コレクシ
ョンでＭＦ５１００として維持されているものを発酵に
用いた。培養菌はブタベスト条約のもとてアメリカン・
タイプ・カルチャー・コレクションに寄託されており、
ＡＴＣＣ番号２０９５６が付されている。

実施例Ｃで記載したようにして製造したエキノカンジン
Ｂを、次のＭＳおよびＮＭＲスペクトルを有するあらか
じめ製造したエキノカンジンＢとパーセント純度につい
て比較し、エキノカンジンＢについての発行された構造
と比較することによって同定した。

スペクトルデー　：　　ＦＡＢ質量スペクトルをＶＣ２
０−２５３質量分析計に記録した。ジチオトレイトール
（ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏｌ）　−ジチオエリトリ
トール（ｄｉｔｈｉｏｃｒｙｔｈｒｉｔｏｌ）　　−Ｌ
　ｉ　Ｉのマトリックスを用いた。そして、Ｍ　＋　Ｌ
　ｉを分子量１０５９に相当するｍ／２１０６６で観察
した。

ＨＮＭＲスペクトル：　スペクトル、第２図がＣＤ、０
０を用いて３００ＭＨｚでヴアリアン（Ｖａｒｉａｎ）
ＸＬ−３０ＯＮＭＲ分析計に記録された。化学シフトが
、内部対象として３．３０　ｐｐｍで溶媒ピークを用い
て零ｐｐｍでのテトラメチルシラン（ＴＭＳ）に対して
ｐｐｍで示されている。

”ＣＮＭＲデータニ　スペクトルが２４°ＣでＣＩ’）
３０１１を用いて１００ＭＨｚでヴアリアンＸ　Ｌ　−
４００ＮＭＲ分光計上に記録された。化学シフトが、内
部対象として４９．０　ｐｐｍでの溶媒ピークを用いて
零ｐｐｍでのテトラメチルシランに対してｐｐｍで与え
られている。

１３Ｃ化学シフト（ＣＤ３０Ｄ、　１００　Ｍｌｌｚ）
　　：　　１１．２８゜１４．４３．１９．６６、２０
．０４．２３．６２　２６．５４．２７．０５゜２８．
１５．２８．２０．　３０．２７（ｘ２）、　３０．４
２．　３０．４６．　３０．７８゜３２．６５．３５．
０８．３６．８２．３８．６０．３９．０６．５１．６
７゜５２．９４．５６．３２．５６．８４．５７．１９
．５Ｂ、６Ｌ　６２．４６゜６８．３３．６９．５９．
６９．７０．７０．８７．７１．２９．７４．６０７５
．５２．７５．７７、７６．９４．１１６．２Ｈｘ２）
、　１２９．０６（ｘ２）。

１２９．６０（ｘ２）、　１３０．９４．１３０．９６
　１３３．０９　１５ｇ、４６１６９．９７．１７２．
４８．１７２．５Ｌ　１７２．７９．１７３．５３゜１
７４．３５　１７６．１９゜

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の実施に好適な化合物ＩＡの、ＣＤ３
０Ｄ中４００　ＭＨｚにおける’ＨＮＭＲスペクトルを
示す。 第２図は、エキノカンジンＢの、ＣＤ３０Ｄ中３００Ｍ
１ｌｚにおける’ＨＮＭＲスペクトルを示す。 手続補正書 平成１年１２−月１４日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中、 Ｒ′はＨ又はＯＨ； Ｒ”はＨ又はＯＨ； Ｒ′″はＨ、ＯＨ、−Ｏ−アルキル（Ｃ＿１−Ｃ＿６）
   、−Ｏ−ベンジル、又は▲数式、化学式、表等がありま
   す▼ ただし、Ｒ＾１はＨ、Ｃ＿１−Ｃ＿１＿２アルキル、Ｃ
   ＿３−Ｃ＿７シクロアルキル、ヒドロキシエチル、低級
   アルコキシエチル、フリルメチル、テトラヒドロフリル
   メチル、フェニル、フェニルアルキル（フェニルはハロ
   、ヒドロキシ、低級アルキルおよび低級アルコキシで置
   換されていてもよい）；Ｒ＾２は水素又は低級アルコキ
   シ；又はＲ＾１とＲ＾２とで−（ＣＨ＿２）＿２Ｑ（Ｃ
   Ｈ＿２）＿２−（Ｑは−ＣＨ＿２−、−ＮＨ−あるいは
   −Ｎ−低級アルキルのような結合基）を形成；ｍは０乃
   至４； Ｒ″″はＨ又はＯＨ； Ｒ″″′はＨ、ＣＨ＿３又はＣＨ＿２ＣＯＮＨ＿２；Ｒ
   ″″″はＨ又はＣＨ＿３；そして Ｒは、 （Ａ）炭素原子６乃至２４の▲数式、化学式、表等があ
   ります▼アルキル（Ｂ）炭素原子６乃至２４の▲数式、
   化学式、表等があります▼アルケニル（Ｃ）Ｒ′、Ｒ″
   、Ｒ′″およびＲ″″がＯＨ、Ｒ″″′がＣＨ＿３のと
   きは、 （ｉ）▲数式、化学式、表等があります▼、 （ｉｉ）▲数式、化学式、表等があります▼、 又は （ｉｉｉ）▲数式、化学式、表等があります▼、 はスルホニル；Ａ＾１は２価の酸素、イオウ、スルフィ
   ニル、スルホニル又は−ＮＨ−；Ｘは水素、クロロ、ブ
   ロモ、ヨード、ニトロ、Ｃ＿１−Ｃ＿３アルキル、ヒド
   ロキシ、Ｃ＿１−Ｃ＿３アルコキシ、メルカプト、Ｃ＿
   １−Ｃ＿３アルキルチオ、カルバミル又はＣ＿１−Ｃ＿
   ３アルキルカルバミル；Ｘ＾１はクロロ、ブロモ又はヨ
   ード；Ｒ＾１は水素、Ｃ＿１−Ｃ＿１＿８アルキル又は
   Ｃ＿２−Ｃ＿１＿８アルケニル；ＷはＣ＿１−Ｃ＿１＿
   ０アルキレン又はＣ＿２−Ｃ＿１＿０アルケニレン；ｍ
   、ｎおよびｐは０又は１であるが、ｍが０のときは、ｎ
   は０でなければならない；ただし、基Ｒ＿１およびＷ中
   の炭素原子数の和は４より大きくなければならず２１を
   越えてはならない；Ｘがメルカプトのときは、Ａおよび
   Ａ＾１はスルフィニル又はスルホニルであってはならな
   い；ＡおよびＡ＾１がスルフィニル又はスルホニルのと
   きは、それらは等しい酸化状態になければならない）； （Ｄ）Ｒ′がＯＨ、Ｒ″がＨのときは、 ▲数式、化学式、表等があります▼ （Ｙは以下に示すアミノアシル基 ａ）▲数式、化学式、表等があります▼ （ＺはＣ＿１−Ｃ＿１＿０アルキレン又はＣ＿５−Ｃ＿
   ６シクロアルキレン）； ｂ）−Ｃ−ＣＨ−ＮＨ− （Ｒ＿３はヒドロキシメチル、ヒドロキシエチル、メル
   カプトメチル、メルカプトエ チル、メチルチオエチル、２−チエニル、 ３−インドロメチル、フェニル、ベンジ ル、ハロフェニル、ハロベンジル、Ｃ＿１−Ｃ＿３アル
   キルフェニル、Ｃ＿１−Ｃ＿３アルキルベンジル、Ｃ＿
   １−Ｃ＿３アルキルチオフェニル、Ｃ＿１−Ｃ＿３アル
   キルチオベンジル、カルバミルフェニル、カルバミルベ
   ンジル、Ｃ＿１−Ｃ＿３アルキルカルバミルフェニル又
   はＣ＿１−Ｃ＿３アルキルカルバミルベンジル）； ｃ）▲数式、化学式、表等があります▼ （Ｘ＾２は水素又はハロ））を意味する。〕で表わされ
   るシクロヘキサペプチド化合物の抗感染量を哺乳動物に
   投与することを特徴とする哺乳動物のニューモシスティ
   ス・カリニ感染の治療又は予防方法。 前記シクロヘキサペプチド化合物を動物体 重１ｋｇ当り０．５乃至２０．０ｍｇの投与量で投与す
   ることを特徴とする請求項１記載の方法。 前記シクロヘキサペプチド化合物をニュー モシスティス・カリニに感染した欠陥免疫系を有する患
   者動物に投与することを特徴とする請求項１記載の方法
   。 前記シクロヘキサペプチド化合物をニュー モシスティス・カリニに感染してＡＩＤＳを示す患者動
   物に投与することを特徴とする請求項１記載の方法。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中、 Ｒ′はＨ又はＯＨ； Ｒ″はＨ又はＯＨ； Ｒ′″はＨ、ＯＨ、−Ｏ−アルキル（Ｃ＿１−Ｃ＿６）
   、−Ｏ−ベンジル、又は▲数式、化学式、表等がありま
   す▼； シクロアルキル、ヒドロキシエチル、低級アルコキシエ
   チル、フリルメチル、テトラヒドロフリルメチル、フェ
   ニル、フェニルアルキル（フェニルはハロ、ヒドロキシ
   、低級アルキルおよび低級アルコキシで置換されていて
   もよい）；Ｒ＾２は水素又は低級アルコキシ；又はＲ＾
   １とＲ＾２とで−（ＣＨ＿２）＿２Ｑ（ＣＨ＿２）＿２
   −（Ｑは−ＣＨ＿２−、−ＮＨ−あるいは−Ｎ−低級ア
   ルキルのような結合基）を形成；ｍは０乃至４； Ｒ″″はＨ又はＯＨ； Ｒ″″′はＨ、ＣＨ＿３又はＣＨ＿２ＣＯＮＨ＿２；Ｒ
   ″″″はＨ又はＣＨ＿３；そして Ｒは、 （Ａ）炭素原子６乃至２４の▲数式、化学式、表等があ
   ります▼アルキル（Ｂ）炭素原子６乃至２４の▲数式、
   化学式、表等があります▼アルケニル（Ｃ）Ｒ′、Ｒ″
   、Ｒ′″およびＲ″″がＯＨ、Ｒ″″′がＣＨ＿３のと
   きは、 （ｉ）▲数式、化学式、表等があります▼、 （ｉｉ）▲数式、化学式、表等があります▼、 又は （ｉｉｉ）▲数式、化学式、表等があります▼ （Ａは２価の酸素、イオウ、スルフィニル又はスルホニ
   ル；Ａ＾１は２価の酸素、イオウ、スルフィニル、スル
   ホニル又は−ＮＨ−；Ｘは水素、クロロ、ブロモ、ヨー
   ド、ニトロ、Ｃ＿１−Ｃ＿３アルキル、ヒドロキシ、Ｃ
   ＿１−Ｃ＿３アルコキシ、メルカプト、Ｃ＿１−Ｃ＿３
   アルキルチオ、カルバミル又はＣ＿１−Ｃ＿３アルキル
   カルバミル；Ｘ＾１はクロロ、ブロモ又はヨード；Ｒ＾
   １は水素、Ｃ＿１−Ｃ＿１＿８アルキル又はＣ＿２−Ｃ
   ＿１＿８アルケニル；ＷはＣ＿１−Ｃ＿１＿０アルキレ
   ン又はＣ＿２−Ｃ＿１＿０アルケニレン；ｍ、ｎおよび
   ｐは０又は１であるが、ｍが０のときは、ｎは０でなけ
   ればならない；ただし、基Ｒ＿１およびＷ中の炭素原子
   数の和は４より大きくなければならず２１を越えてはな
   らない；Ｘがメルカプトのときは、ＡおよびＡ＾１はス
   ルフィニル又はスルホニルであってはならない；Ａおよ
   びＡ＾１がスルフィニル又はスルホニルのときは、それ
   らは等しい酸化状態になければならない）； （Ｄ）Ｒ′がＯＨ、Ｒ″がＨのときは、 ▲数式、化学式、表等があります▼ （Ｙは以下に示すアミノアシル基 ａ）▲数式、化学式、表等があります▼ （ＺはＣ＿１−Ｃ＿１＿０アルキレン又はＣ＿５−Ｃ＿
   ６シクロアルキレン）； ｂ）▲数式、化学式、表等があります▼ （Ｒ＿３はヒドロキシメチル、ヒドロキシエチル、メル
   カプトメチル、メルカプトエ チル、メチルチオエチル、２−チエニル、 ３−インドロメチル、フェニル、ベンジ ル、ハロフェニル、ハロベンジル、Ｃ＿１−Ｃ＿３アル
   キルフェニル、Ｃ＿１−Ｃ＿３アルキルベンジル、Ｃ＿
   １−Ｃ＿３アルキルチオフェニル、Ｃ＿１−Ｃ＿３アル
   キルチオベンジル、カルバミルフェニル、カルバミルベ
   ンジル、Ｃ＿１−Ｃ＿３アルキルカルバミルフェニル又
   はＣ＿１−Ｃ＿３アルキルカルバミルベンジル）； ｃ）▲数式、化学式、表等があります▼ （Ｘ＾２は水素又はハロ））を意味する。〕ならびに製
   薬上許容し得る担体から成ることを特徴とする哺乳動物
   のニューモシスティス・カリニ感染の治療に有用な組成
   物。 ６、吸入法による投与に適していることを特徴とする請
   求項５記載の組成物。 ７、非経口投与に適していることを特徴とする請求項５
   記載の組成物。 ８、単位投与形態であることを特徴とする請求項５記載
   の組成物。 ９、前記化合物が式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I Ａ） を有することを特徴とする請求項１記載の方法。 １０、前記化合物が１−［（４Ｒ、５Ｒ）−４，５−ジ
   ヒドロキシ−Ｎ＾２−（１０，１２−ジメチル−１−オ
   キソテトラデシル）−Ｌ−オルニチン−５−（トレオ−
   ３−ヒドロキシ−１−グルタミン）エキノカンジンＢで
   あることを特徴とする請求項１記載の方法。 １１、前記化合物が１−［（４Ｒ，５Ｒ）−４，５−ジ
   ヒドロキシ−Ｎ＾２−［４−（オクチロキシ）ベンゾイ
   ル］−Ｌ−オルニチン］エキノカンジンＢであることを
   特徴とする請求項１記載の方法。 １２、前記化合物がエキノカンジンＢであることを特徴
   とする請求項１記載の方法。 １３、前記化合物がテトラヒドロエキノカンジンＢであ
   ることを特徴とする請求項１記載の方法。 １４、前記化合物がＯ−メチルテトラヒドロエキノカン
   ジンＢであることを特徴とする請求項１記載の方法。 １５、前記化合物がＯ−ベンジルテトラヒドロエキノカ
   ンジンＢであることを特徴とする請求項１記載の方法。