JPH02203271A - ビリルビンの測定法 - Google Patents

ビリルビンの測定法

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JPH02203271A
JPH02203271A JP2077589A JP2077589A JPH02203271A JP H02203271 A JPH02203271 A JP H02203271A JP 2077589 A JP2077589 A JP 2077589A JP 2077589 A JP2077589 A JP 2077589A JP H02203271 A JPH02203271 A JP H02203271A
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JP
Japan
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reaction
surfactant
reagent
bilirubin
measurement
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Pending
Application number
JP2077589A
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English (en)
Inventor
Norimitsu Arai
紀光 荒井
Toshihito Kanejima
才仁 金島
Masaharu Hasegawa
長谷川 正春
Kazuhiko Kasai
和彦 笠井
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Sanko Junyaku Co Ltd
Katayama Chemical Industries Co Ltd
Original Assignee
Sanko Junyaku Co Ltd
Katayama Chemical Industries Co Ltd
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Publication date
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 (産業上の利用分野) 本発明は、体液中の総ビリルビンの正確かつ効率的な測
定方法に関する。
(従来の技術) 生体中のビリルビンは、間接型ビリルビンと直接型ビリ
ルビンと1ご大別されている。間接型ビリルビンはビリ
ルビンそのものであり、水にきわめて難溶性であるが、
血液中では通常はとんどアルブミンに結合していて水溶
化されている。一方、直接型どりルピンは、砲台型ビリ
ルビンとも云われ、水に溶けやすい構造になっている。
直接型ビリルビンは、ジアゾ試薬と直接反応させて測定
される。総ビリルビンは、間接型ビリルビンと直接型ビ
リルビンを含むもので、総ビリルビンを測定する場合、
間接型ビリルビンの反応を容易に進4′:fさせるため
にダイフィリン、安息香酸ナトリウム−カフェイン、界
面活性剤、エチレングリコール、ジメチルスルホキシド
等の有機溶媒を促進剤として加えて測定される。
ビリルビンの測定法として、 EvelyローMall
oy 法、  Jendrassik 法、アルカリア
ゾビリルビン法が古くから使用されていたが、これらは
試薬の安定性が悪い、操作法が複雑であるという難点が
あり、代わって安定でより使いやすい安定化ジアゾニウ
ム塩法がよく使用されるようになった。
さらに、近年に至ってビリルビンオキシダーゼを用いた
特異性の高い酵素法が開発され、臨床検査室で採用され
つつある。この酵素法は、従来の化学的測定法であるジ
アゾニウム塩漬の性能をうわまわり、ヘモグロビン、ア
スコルビン酸、乳びの影響が少なく、憬れた測定法であ
る。しかし、最近、度重なる体外用診断薬の保険点数の
改正に伴い、医療費が大きく削減されてきたことを考え
合わせると酵素法は高価なビリルビンオキシダーゼを用
いるので検査費用がかさむという問題がある。
やはり、高価な酵素法を使わずに、ヘモグロビン、アス
コルビン酸、乳びの影響をうけないで測定できる安価な
安定化ジアゾニウム塩法の開発が強く望まれている。
(発明が解決しようとする間朋点) 本発明者は、安定化ジアゾニウム塩法を用いて総ビリル
ビンを測定する方法について鋭意研究を重ねた結果、本
発明を完成したものである。
本発明の目的は、■安定化ジアゾニウム塩法により、試
薬を2試薬にわけて自己ブランクがとれるようにするこ
と、■ヘモグロビン、アスコルビン酸、乳びの影響をう
けないこと、■各種自動分析に適応できる、ようにした
総ビリルビンの測定法を提供することである。
(問題を解決するための手段) 本発明の要旨は、発色剤である安定化ジアゾニウム塩を
用いて、総ビリルビン中の間接型どりルピンの反応を促
進させるために必要な促進剤として、界面活性剤を含む
試薬と、界面活性剤以外のエチレングリコール、ジメチ
ルスルホキシド、ダイフィリン、安息香酸ナトリウム−
カフェイン、安5g、香酸ナトリウムーダイフィリン、
芳香族カルボン酸等の反応促進剤を含む試薬とにわけて
反応させ、かつ検体中の共存物質の影響を回避すること
によって特異性を高めたことを特徴とする総ビリルビン
の測定法に存する。
ヘモグロビン、アスコルビン酸、fLびの影響を避ける
ためには、自己ブランクがとれるように試薬を2試薬に
わけてあらかじめ検体ブランクをとって測定することが
最近の自動分析装置で容易になった。
しかしながら、安定化ジアゾニウム塩は中性、またはア
ルカリに近いほど不安定であるので、酸性条件ドで反応
させ、使用しなければならない。酸性条件下では総ビリ
ルビンの反応性がl15i端に悪くなるので反応を容易
に進イ1させるためには、界面活性剤や、界面活性剤以
外のダイフィリン、安、a、Pr酸ナトリウム−カフェ
イン、 安、0.6酸ナトリウム−ダイフィリン、芳香
族カルボン酸、エチレングリコール、ジメチルスルホキ
シド等の反応促進剤から適切に反応効率の良い反応促進
剤を選ぶ必要がある。ところが、第1試薬に界面活性剤
である反応促進剤または/および丘記に示した界面活性
剤以外の反応促進剤を加えて、検体と予め反応させた場
合、反応時間を長く置くほど、発色剤(安定化ジアゾニ
ウム塩)を含む第2試薬を加えても、総ビリルビンの反
応が抑制され、完結しないのがこれまでの厄介な問題だ
った。従って従来は反応促進剤を第1試薬に加えること
ができず、第2試薬に加えざるを7)$なく、ビリルビ
ンの反応を短時間で終わらせることが困難であった。酸
性条件下で乳びやヘモグロビンの影響を回避するために
は、第1試薬に界面活性剤を加えることが望ましい。
本発明者は、界面活性剤および界面活性剤以外の反応促
進剤を組み合わせて、ジアゾニウム塩の反応を容易に進
行させることができることに着眼したものである。
すなわち、第1試薬に界面活性剤を加え、第2試薬にそ
の他の界面活性剤または界面活性剤以外の反応促進剤お
よび安定化ジアゾニウム塩を加えて、検体と反応させる
ものである。
安定化ジアゾニウム塩としては、従来から用いられるも
のが使用可能であり、例えば、特願昭55−55420
.57−64190号に示された2、4−ジクロルフエ
ニルジアゾニウム−1,5−ナフタリンジスルホン酸お
よびその塩類、 p−スルファニルベンゼンジアゾニウ
ム−1,5−ナフタリンジスルホン酸およびその塩類、
パラニトロベンゼンジアゾニウム四フッ化ホウ酸および
その塩類、ジアゾ化スルファニル酸四フッ化ホウ酸およ
びその塩類などが用いられる。その他ジアゾニウム塩に
ナフタリンジスルホン酸およびその塩類、四フッ化ホウ
酸およびその塩類、塩化亜鉛などによって安定化されて
いる発色剤であれば、本発明に使用できる。
また、界面活性剤には、非イオン界面活性剤、両性界面
活性剤、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤
等数多くあるが、本発明において特にこれらを陽定する
ものでない。
(発明の効果) 本発明は、安定かつ安価な安定化ジアゾニウム塩法を用
いて、■2種類以上の反応促進剤を組み合わせて2試薬
にわけ、総ビリルビンの反応を容易にし、自己ブランク
がとれるようにしたこと、■それによりヘモグロビン、
アスコルビン酸、乳びの影響を回避したこと、■各種自
動分析に適応できるようにしたことで総ビリルビンの測
定が迅速でかつ゛精度が向上したことである。
以下に本発明の実施例をあげてさらに具体的に説明する
実施例 第1試某 塩酸  −・−−−−−一−−−−−−−−−−−−−
−−−−−−−・−0,5Nポリオキシエチレン アルキルエーテル −・−−一一−−−−−−−・−・
−1,5%第2試薬 バラニトロベンゼン ジアゾニウム・B F h −−−−−−−−−−一〜
−〜−0.1%ダイフィリン −一一一一−−−〜−−
−−−・−一−−−−−−−−−−−−〜−〜−8%塩
酸 −−−〜−−−−−−−−−〜−−−−−−・−一
−−−−−−−−−−−〜−・−−−−−0,5N検体
50μlを第1試薬2mlに加え、37°C15分間加
温したのち、第2試11m1加え、5分間加温する。5
40nmで吸光度を測定し、反応終了時間を求めた。
(比較例1) 第1試薬 塩酸 −一一一−−−・−一一一一一−−−−−−・−
〜−−−−−−−−−・−・−0、5N第2試薬 バラニトロベンゼン ジアゾニウム・B F 1−−−−−−−−−−−−−
−−0. 1%ダイフィリン −−−−・−一−−−−
〜−一−−−・−−−−−−−−−・−−−−−8%塩
酸 =−・−・・−一−−−−−−−・−・−・−・−
−−−−−−−−−−−−−−−−0,5N検体50μ
lを第1試葉2m]に加え、37°C55分間加温した
のち、第2試薬1ml加え、5分間加温する。540n
mで吸光度を測定し、反応終了時間を求めた。
(比較例2) 第4l 塩酸−一−−−−−−・−−〜−−−−−−・−−−一
−−・−−m−−・−一−−−〜−−−−0.5Nポリ
オキシエチレン アルキルエーテル −−〜〜−−−−−−−−−−−−
−−−1、5%第2試薬 バラニトロベンゼン ジアゾニウム・B F 4− ・−−−−−−−−−0
、1%ポリオキシェチ1/ン アルキルエーテル −・−−−−−−−−−−−−−1
、5%塩酸 −一一−−−−−−−−−−−−=−−−
−一−−−−−−−−−−・−−−−−−−−−0,5
N検体50μmを第1試薬2mlに加え、37℃、5分
間加温したのち、第2試11m1加え、 5分間加温す
る。540nmで吸光度を測定し、反応終了時間を求め
た。
結果 ビリルビン20mg/dlを含む血清を検体に用いて総
ビリルビン反応の終了時間を測定した結果、第1表から
界面活性剤とダイフィリンの組合せにより、総ビリルビ
ンの反応が容易lこ進行することがわかる。
第 表

Claims (2)

    【特許請求の範囲】
  1. (1)安定化ジアゾニウム塩を用いる総ビリルビンの測
    定において、検体に反応促進剤である界面活性剤を含む
    第1の反応試液と界面活性剤以外の反応促進剤及び安定
    化ジアゾニウム塩を含む第2の反応試液を順次加えて測
    定することを特徴とする総ビリルビンの測定法。
  2. (2)界面活性剤以外の反応促進剤がダイフィリンまた
    は/および安息香酸等の芳香族カルボン酸(またはその
    塩類)を含むことを特徴とする請求項(1)記載の総ビ
    リルビンの測定法。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1996017251A1 (fr) * 1994-12-02 1996-06-06 Nitto Boseki Co., Ltd. Procede de determination quantitative de bilirubine

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1996017251A1 (fr) * 1994-12-02 1996-06-06 Nitto Boseki Co., Ltd. Procede de determination quantitative de bilirubine
US5872009A (en) * 1994-12-02 1999-02-16 Nitto Boseki Co., Ltd. Method for measuring bilirubin

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