JPH02203271A - ビリルビンの測定法 - Google Patents
ビリルビンの測定法Info
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- JPH02203271A JPH02203271A JP2077589A JP2077589A JPH02203271A JP H02203271 A JPH02203271 A JP H02203271A JP 2077589 A JP2077589 A JP 2077589A JP 2077589 A JP2077589 A JP 2077589A JP H02203271 A JPH02203271 A JP H02203271A
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
(産業上の利用分野)
本発明は、体液中の総ビリルビンの正確かつ効率的な測
定方法に関する。
定方法に関する。
(従来の技術)
生体中のビリルビンは、間接型ビリルビンと直接型ビリ
ルビンと1ご大別されている。間接型ビリルビンはビリ
ルビンそのものであり、水にきわめて難溶性であるが、
血液中では通常はとんどアルブミンに結合していて水溶
化されている。一方、直接型どりルピンは、砲台型ビリ
ルビンとも云われ、水に溶けやすい構造になっている。
ルビンと1ご大別されている。間接型ビリルビンはビリ
ルビンそのものであり、水にきわめて難溶性であるが、
血液中では通常はとんどアルブミンに結合していて水溶
化されている。一方、直接型どりルピンは、砲台型ビリ
ルビンとも云われ、水に溶けやすい構造になっている。
直接型ビリルビンは、ジアゾ試薬と直接反応させて測定
される。総ビリルビンは、間接型ビリルビンと直接型ビ
リルビンを含むもので、総ビリルビンを測定する場合、
間接型ビリルビンの反応を容易に進4′:fさせるため
にダイフィリン、安息香酸ナトリウム−カフェイン、界
面活性剤、エチレングリコール、ジメチルスルホキシド
等の有機溶媒を促進剤として加えて測定される。
される。総ビリルビンは、間接型ビリルビンと直接型ビ
リルビンを含むもので、総ビリルビンを測定する場合、
間接型ビリルビンの反応を容易に進4′:fさせるため
にダイフィリン、安息香酸ナトリウム−カフェイン、界
面活性剤、エチレングリコール、ジメチルスルホキシド
等の有機溶媒を促進剤として加えて測定される。
ビリルビンの測定法として、 EvelyローMall
oy 法、 Jendrassik 法、アルカリア
ゾビリルビン法が古くから使用されていたが、これらは
試薬の安定性が悪い、操作法が複雑であるという難点が
あり、代わって安定でより使いやすい安定化ジアゾニウ
ム塩法がよく使用されるようになった。
oy 法、 Jendrassik 法、アルカリア
ゾビリルビン法が古くから使用されていたが、これらは
試薬の安定性が悪い、操作法が複雑であるという難点が
あり、代わって安定でより使いやすい安定化ジアゾニウ
ム塩法がよく使用されるようになった。
さらに、近年に至ってビリルビンオキシダーゼを用いた
特異性の高い酵素法が開発され、臨床検査室で採用され
つつある。この酵素法は、従来の化学的測定法であるジ
アゾニウム塩漬の性能をうわまわり、ヘモグロビン、ア
スコルビン酸、乳びの影響が少なく、憬れた測定法であ
る。しかし、最近、度重なる体外用診断薬の保険点数の
改正に伴い、医療費が大きく削減されてきたことを考え
合わせると酵素法は高価なビリルビンオキシダーゼを用
いるので検査費用がかさむという問題がある。
特異性の高い酵素法が開発され、臨床検査室で採用され
つつある。この酵素法は、従来の化学的測定法であるジ
アゾニウム塩漬の性能をうわまわり、ヘモグロビン、ア
スコルビン酸、乳びの影響が少なく、憬れた測定法であ
る。しかし、最近、度重なる体外用診断薬の保険点数の
改正に伴い、医療費が大きく削減されてきたことを考え
合わせると酵素法は高価なビリルビンオキシダーゼを用
いるので検査費用がかさむという問題がある。
やはり、高価な酵素法を使わずに、ヘモグロビン、アス
コルビン酸、乳びの影響をうけないで測定できる安価な
安定化ジアゾニウム塩法の開発が強く望まれている。
コルビン酸、乳びの影響をうけないで測定できる安価な
安定化ジアゾニウム塩法の開発が強く望まれている。
(発明が解決しようとする間朋点)
本発明者は、安定化ジアゾニウム塩法を用いて総ビリル
ビンを測定する方法について鋭意研究を重ねた結果、本
発明を完成したものである。
ビンを測定する方法について鋭意研究を重ねた結果、本
発明を完成したものである。
本発明の目的は、■安定化ジアゾニウム塩法により、試
薬を2試薬にわけて自己ブランクがとれるようにするこ
と、■ヘモグロビン、アスコルビン酸、乳びの影響をう
けないこと、■各種自動分析に適応できる、ようにした
総ビリルビンの測定法を提供することである。
薬を2試薬にわけて自己ブランクがとれるようにするこ
と、■ヘモグロビン、アスコルビン酸、乳びの影響をう
けないこと、■各種自動分析に適応できる、ようにした
総ビリルビンの測定法を提供することである。
(問題を解決するための手段)
本発明の要旨は、発色剤である安定化ジアゾニウム塩を
用いて、総ビリルビン中の間接型どりルピンの反応を促
進させるために必要な促進剤として、界面活性剤を含む
試薬と、界面活性剤以外のエチレングリコール、ジメチ
ルスルホキシド、ダイフィリン、安息香酸ナトリウム−
カフェイン、安5g、香酸ナトリウムーダイフィリン、
芳香族カルボン酸等の反応促進剤を含む試薬とにわけて
反応させ、かつ検体中の共存物質の影響を回避すること
によって特異性を高めたことを特徴とする総ビリルビン
の測定法に存する。
用いて、総ビリルビン中の間接型どりルピンの反応を促
進させるために必要な促進剤として、界面活性剤を含む
試薬と、界面活性剤以外のエチレングリコール、ジメチ
ルスルホキシド、ダイフィリン、安息香酸ナトリウム−
カフェイン、安5g、香酸ナトリウムーダイフィリン、
芳香族カルボン酸等の反応促進剤を含む試薬とにわけて
反応させ、かつ検体中の共存物質の影響を回避すること
によって特異性を高めたことを特徴とする総ビリルビン
の測定法に存する。
ヘモグロビン、アスコルビン酸、fLびの影響を避ける
ためには、自己ブランクがとれるように試薬を2試薬に
わけてあらかじめ検体ブランクをとって測定することが
最近の自動分析装置で容易になった。
ためには、自己ブランクがとれるように試薬を2試薬に
わけてあらかじめ検体ブランクをとって測定することが
最近の自動分析装置で容易になった。
しかしながら、安定化ジアゾニウム塩は中性、またはア
ルカリに近いほど不安定であるので、酸性条件ドで反応
させ、使用しなければならない。酸性条件下では総ビリ
ルビンの反応性がl15i端に悪くなるので反応を容易
に進イ1させるためには、界面活性剤や、界面活性剤以
外のダイフィリン、安、a、Pr酸ナトリウム−カフェ
イン、 安、0.6酸ナトリウム−ダイフィリン、芳香
族カルボン酸、エチレングリコール、ジメチルスルホキ
シド等の反応促進剤から適切に反応効率の良い反応促進
剤を選ぶ必要がある。ところが、第1試薬に界面活性剤
である反応促進剤または/および丘記に示した界面活性
剤以外の反応促進剤を加えて、検体と予め反応させた場
合、反応時間を長く置くほど、発色剤(安定化ジアゾニ
ウム塩)を含む第2試薬を加えても、総ビリルビンの反
応が抑制され、完結しないのがこれまでの厄介な問題だ
った。従って従来は反応促進剤を第1試薬に加えること
ができず、第2試薬に加えざるを7)$なく、ビリルビ
ンの反応を短時間で終わらせることが困難であった。酸
性条件下で乳びやヘモグロビンの影響を回避するために
は、第1試薬に界面活性剤を加えることが望ましい。
ルカリに近いほど不安定であるので、酸性条件ドで反応
させ、使用しなければならない。酸性条件下では総ビリ
ルビンの反応性がl15i端に悪くなるので反応を容易
に進イ1させるためには、界面活性剤や、界面活性剤以
外のダイフィリン、安、a、Pr酸ナトリウム−カフェ
イン、 安、0.6酸ナトリウム−ダイフィリン、芳香
族カルボン酸、エチレングリコール、ジメチルスルホキ
シド等の反応促進剤から適切に反応効率の良い反応促進
剤を選ぶ必要がある。ところが、第1試薬に界面活性剤
である反応促進剤または/および丘記に示した界面活性
剤以外の反応促進剤を加えて、検体と予め反応させた場
合、反応時間を長く置くほど、発色剤(安定化ジアゾニ
ウム塩)を含む第2試薬を加えても、総ビリルビンの反
応が抑制され、完結しないのがこれまでの厄介な問題だ
った。従って従来は反応促進剤を第1試薬に加えること
ができず、第2試薬に加えざるを7)$なく、ビリルビ
ンの反応を短時間で終わらせることが困難であった。酸
性条件下で乳びやヘモグロビンの影響を回避するために
は、第1試薬に界面活性剤を加えることが望ましい。
本発明者は、界面活性剤および界面活性剤以外の反応促
進剤を組み合わせて、ジアゾニウム塩の反応を容易に進
行させることができることに着眼したものである。
進剤を組み合わせて、ジアゾニウム塩の反応を容易に進
行させることができることに着眼したものである。
すなわち、第1試薬に界面活性剤を加え、第2試薬にそ
の他の界面活性剤または界面活性剤以外の反応促進剤お
よび安定化ジアゾニウム塩を加えて、検体と反応させる
ものである。
の他の界面活性剤または界面活性剤以外の反応促進剤お
よび安定化ジアゾニウム塩を加えて、検体と反応させる
ものである。
安定化ジアゾニウム塩としては、従来から用いられるも
のが使用可能であり、例えば、特願昭55−55420
.57−64190号に示された2、4−ジクロルフエ
ニルジアゾニウム−1,5−ナフタリンジスルホン酸お
よびその塩類、 p−スルファニルベンゼンジアゾニウ
ム−1,5−ナフタリンジスルホン酸およびその塩類、
パラニトロベンゼンジアゾニウム四フッ化ホウ酸および
その塩類、ジアゾ化スルファニル酸四フッ化ホウ酸およ
びその塩類などが用いられる。その他ジアゾニウム塩に
ナフタリンジスルホン酸およびその塩類、四フッ化ホウ
酸およびその塩類、塩化亜鉛などによって安定化されて
いる発色剤であれば、本発明に使用できる。
のが使用可能であり、例えば、特願昭55−55420
.57−64190号に示された2、4−ジクロルフエ
ニルジアゾニウム−1,5−ナフタリンジスルホン酸お
よびその塩類、 p−スルファニルベンゼンジアゾニウ
ム−1,5−ナフタリンジスルホン酸およびその塩類、
パラニトロベンゼンジアゾニウム四フッ化ホウ酸および
その塩類、ジアゾ化スルファニル酸四フッ化ホウ酸およ
びその塩類などが用いられる。その他ジアゾニウム塩に
ナフタリンジスルホン酸およびその塩類、四フッ化ホウ
酸およびその塩類、塩化亜鉛などによって安定化されて
いる発色剤であれば、本発明に使用できる。
また、界面活性剤には、非イオン界面活性剤、両性界面
活性剤、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤
等数多くあるが、本発明において特にこれらを陽定する
ものでない。
活性剤、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤
等数多くあるが、本発明において特にこれらを陽定する
ものでない。
(発明の効果)
本発明は、安定かつ安価な安定化ジアゾニウム塩法を用
いて、■2種類以上の反応促進剤を組み合わせて2試薬
にわけ、総ビリルビンの反応を容易にし、自己ブランク
がとれるようにしたこと、■それによりヘモグロビン、
アスコルビン酸、乳びの影響を回避したこと、■各種自
動分析に適応できるようにしたことで総ビリルビンの測
定が迅速でかつ゛精度が向上したことである。
いて、■2種類以上の反応促進剤を組み合わせて2試薬
にわけ、総ビリルビンの反応を容易にし、自己ブランク
がとれるようにしたこと、■それによりヘモグロビン、
アスコルビン酸、乳びの影響を回避したこと、■各種自
動分析に適応できるようにしたことで総ビリルビンの測
定が迅速でかつ゛精度が向上したことである。
以下に本発明の実施例をあげてさらに具体的に説明する
。
。
実施例
第1試某
塩酸 −・−−−−−一−−−−−−−−−−−−−
−−−−−−−・−0,5Nポリオキシエチレン アルキルエーテル −・−−一一−−−−−−−・−・
−1,5%第2試薬 バラニトロベンゼン ジアゾニウム・B F h −−−−−−−−−−一〜
−〜−0.1%ダイフィリン −一一一一−−−〜−−
−−−・−一−−−−−−−−−−−−〜−〜−8%塩
酸 −−−〜−−−−−−−−−〜−−−−−−・−一
−−−−−−−−−−−〜−・−−−−−0,5N検体
50μlを第1試薬2mlに加え、37°C15分間加
温したのち、第2試11m1加え、5分間加温する。5
40nmで吸光度を測定し、反応終了時間を求めた。
−−−−−−−・−0,5Nポリオキシエチレン アルキルエーテル −・−−一一−−−−−−−・−・
−1,5%第2試薬 バラニトロベンゼン ジアゾニウム・B F h −−−−−−−−−−一〜
−〜−0.1%ダイフィリン −一一一一−−−〜−−
−−−・−一−−−−−−−−−−−−〜−〜−8%塩
酸 −−−〜−−−−−−−−−〜−−−−−−・−一
−−−−−−−−−−−〜−・−−−−−0,5N検体
50μlを第1試薬2mlに加え、37°C15分間加
温したのち、第2試11m1加え、5分間加温する。5
40nmで吸光度を測定し、反応終了時間を求めた。
(比較例1)
第1試薬
塩酸 −一一一−−−・−一一一一一−−−−−−・−
〜−−−−−−−−−・−・−0、5N第2試薬 バラニトロベンゼン ジアゾニウム・B F 1−−−−−−−−−−−−−
−−0. 1%ダイフィリン −−−−・−一−−−−
〜−一−−−・−−−−−−−−−・−−−−−8%塩
酸 =−・−・・−一−−−−−−−・−・−・−・−
−−−−−−−−−−−−−−−−0,5N検体50μ
lを第1試葉2m]に加え、37°C55分間加温した
のち、第2試薬1ml加え、5分間加温する。540n
mで吸光度を測定し、反応終了時間を求めた。
〜−−−−−−−−−・−・−0、5N第2試薬 バラニトロベンゼン ジアゾニウム・B F 1−−−−−−−−−−−−−
−−0. 1%ダイフィリン −−−−・−一−−−−
〜−一−−−・−−−−−−−−−・−−−−−8%塩
酸 =−・−・・−一−−−−−−−・−・−・−・−
−−−−−−−−−−−−−−−−0,5N検体50μ
lを第1試葉2m]に加え、37°C55分間加温した
のち、第2試薬1ml加え、5分間加温する。540n
mで吸光度を測定し、反応終了時間を求めた。
(比較例2)
第4l
塩酸−一−−−−−−・−−〜−−−−−−・−−−一
−−・−−m−−・−一−−−〜−−−−0.5Nポリ
オキシエチレン アルキルエーテル −−〜〜−−−−−−−−−−−−
−−−1、5%第2試薬 バラニトロベンゼン ジアゾニウム・B F 4− ・−−−−−−−−−0
、1%ポリオキシェチ1/ン アルキルエーテル −・−−−−−−−−−−−−−1
、5%塩酸 −一一−−−−−−−−−−−−=−−−
−一−−−−−−−−−−・−−−−−−−−−0,5
N検体50μmを第1試薬2mlに加え、37℃、5分
間加温したのち、第2試11m1加え、 5分間加温す
る。540nmで吸光度を測定し、反応終了時間を求め
た。
−−・−−m−−・−一−−−〜−−−−0.5Nポリ
オキシエチレン アルキルエーテル −−〜〜−−−−−−−−−−−−
−−−1、5%第2試薬 バラニトロベンゼン ジアゾニウム・B F 4− ・−−−−−−−−−0
、1%ポリオキシェチ1/ン アルキルエーテル −・−−−−−−−−−−−−−1
、5%塩酸 −一一−−−−−−−−−−−−=−−−
−一−−−−−−−−−−・−−−−−−−−−0,5
N検体50μmを第1試薬2mlに加え、37℃、5分
間加温したのち、第2試11m1加え、 5分間加温す
る。540nmで吸光度を測定し、反応終了時間を求め
た。
結果
ビリルビン20mg/dlを含む血清を検体に用いて総
ビリルビン反応の終了時間を測定した結果、第1表から
界面活性剤とダイフィリンの組合せにより、総ビリルビ
ンの反応が容易lこ進行することがわかる。
ビリルビン反応の終了時間を測定した結果、第1表から
界面活性剤とダイフィリンの組合せにより、総ビリルビ
ンの反応が容易lこ進行することがわかる。
第
表
Claims (2)
- (1)安定化ジアゾニウム塩を用いる総ビリルビンの測
定において、検体に反応促進剤である界面活性剤を含む
第1の反応試液と界面活性剤以外の反応促進剤及び安定
化ジアゾニウム塩を含む第2の反応試液を順次加えて測
定することを特徴とする総ビリルビンの測定法。 - (2)界面活性剤以外の反応促進剤がダイフィリンまた
は/および安息香酸等の芳香族カルボン酸(またはその
塩類)を含むことを特徴とする請求項(1)記載の総ビ
リルビンの測定法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2077589A JPH02203271A (ja) | 1989-02-01 | 1989-02-01 | ビリルビンの測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2077589A JPH02203271A (ja) | 1989-02-01 | 1989-02-01 | ビリルビンの測定法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH02203271A true JPH02203271A (ja) | 1990-08-13 |
Family
ID=12036530
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2077589A Pending JPH02203271A (ja) | 1989-02-01 | 1989-02-01 | ビリルビンの測定法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH02203271A (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1996017251A1 (fr) * | 1994-12-02 | 1996-06-06 | Nitto Boseki Co., Ltd. | Procede de determination quantitative de bilirubine |
-
1989
- 1989-02-01 JP JP2077589A patent/JPH02203271A/ja active Pending
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1996017251A1 (fr) * | 1994-12-02 | 1996-06-06 | Nitto Boseki Co., Ltd. | Procede de determination quantitative de bilirubine |
US5872009A (en) * | 1994-12-02 | 1999-02-16 | Nitto Boseki Co., Ltd. | Method for measuring bilirubin |
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