JP3509864B2 - 試験片用グルコース検量剤および対照物質 - Google Patents
試験片用グルコース検量剤および対照物質Info
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Description
準となり、そしてこれらを有効にするのに有用な検量剤
および対照物質に関するものである。より特定すると、
本発明は非血清基剤の水性グルコース検量剤および対照
物質並びにこの検量剤および対照物質の製造方法に関す
るものである。
各種物質の同定および定量に関係している。測定される
物質の多数の例を挙げることができるが、これらにはコ
レステロール、尿素、カチオンおよびグルコースが含ま
れる。これらの被検体の例およびその他のものは尿およ
び血液などの多様な体液中で分析される。
重要である。血液中のグルコース値は経口摂取する炭水
化物の量およびインスリンによって調節される。インス
リンが多すぎるとグルコース値が低下し、少なすぎると
グルコース値が異常に高くなる。どちらの状況も糖尿病
患者にとって重大な健康問題をもたらすことになる。
分はナースステーション、診療所および家庭などの非実
験室的環境下で実施される。試験は尿中のグルコースを
測定することによって頻繁に実施される。血液中のグル
コース値が上昇するにつれて、腎臓のグルコース再吸収
能力を超えてしまい、グルコースが尿中に排出される。
ルコース測定の方が患者の状態のより正確な反映を提供
する。尿中のグルコース値は血液中のグルコース値と腎
臓のグルコース再吸収能力とによって決まるので、尿中
グルコースは血液中のグルコース値を正確には反映しな
い。したがって、尿試料によって糖尿病患者のグルコー
ス値がどれだけ低いかを知ることはできない。
よび血液中のグルコースを検出するのに広く使用されて
いる。これらの器具は使用が簡単であるという特徴があ
る。一般に、こうした試験片は、酵素システム、および
測定される被検体と試験片が接触した時に、検出シグナ
ルとなる発色または変色をする呈色指示薬などの試薬を
しみ込ませておいた吸着紙部分を一方の末端に備えたプ
ラスチック片からなっている。試験片上に形成された呈
色を、グルコースの各種濃度に検量対応させて得た標準
呈色図と比較することによって、この呈色の変化から測
定することができる。しかし、最近になって、血液中の
グルコース値をより正確に調節するために、呈色の変化
を反射光度計で測定し、これによって定量するという装
置が開発された。反射率測定を使用してグルコースを測
定する反応系の例としては、グルコースオキシダーゼ/
ペルオキシダーゼ法などの酸化反応、およびグルコース
オキシダーゼ/フェリシアン化物法などの還元反応があ
る。後者の方法はFreitag,米国特許第4,929,545号に詳
細に記載されており、この内容を参考としてここに引用
する。また、電流の変化を測定する電気化学的手法によ
ってグルコースを測定する装置も開発された。この技術
の一例としては、PCT出願明細書No.PCT/US90/07374に記
載された電流測定バイオセンサー法があり、この内容を
参考としてここに引用する。
て正確である必要があることが理解されるはずである。
特に自動化システムおよび装置が使用される場合、分析
要素の信頼性および実施された測定の有効性が保障され
ることが重要である。この目的のために、検量剤および
対照試薬が使用される。
ry,N.W.Tietz,Ed.,1986,p.430において、“標準物質”
を、“ある装置の検量標準またはある測定法の検定のた
めに使用し得るほどに十分確定された1またはそれ以上
の特性を有する物質またはその本体”と定義している。
“検量および試験用物質”は、“被検体の濃度またはそ
の他の数量値を測定するために試験試料と比較する標準
物質または溶液”と定義される。
質”を“もっぱら定性的比較目的のみに分析され、検量
目的には使用されない標本または溶液”と定義してい
る。この標準的な参考文献には、さらに、対照物質の必
要条件として以下のように記載されている:“それらは
定期的に長期にわたって分析できるように、アリコート
またはバイアル入りで入手できる安定な物質でなければ
ならない。反復測定間の差異が分析方法のみに起因する
ように、各バイアル毎の変化がほとんどないことが必要
である。” 上記の参考文献の第433ページにおいて、どのように
したら対照物質のマトリックスを分析される物質と同一
にし得るかについて議論されている。このため、対照物
質の一型として修飾ヒト血清が議論されている。実際、
現在の技術では、用語“対照血清”を、血清を基剤とす
る対照物質を示すものとして認識されている。この技術
用語をここで使用するが、これは以後使用する、いかな
る型の血清をも基剤とせず、また含んでもいない対照物
質を示す用語“対照試薬”とは異なるものである。
が満足すべき判定基準の一つは安定性である。しかし、
血清を基剤とする対照物質はその中に含まれる各種成分
によって固有の不安定性を有する。さらに、血清はその
起源によって異なるので、各血清間での均等性が保証さ
れない。このように、時によっては非血清または血清を
含まない媒体を基剤とする検量剤または対照物質が必要
となる。
“対照試薬”の例はRyanに発効された、“安定なグルコ
ース対照物質”に関する米国特許第4,729,959号に記載
されている。この対照物質は、水性懸濁液中に固定赤血
球細胞とともに約40〜500mg/dlの範囲のグルコースを含
有する。示されたグルコース濃度の範囲は、例えば血液
中に存在するグルコースの範囲のほぼ全部を丁度網羅す
るのに十分である。
性対照試薬の問題点が指摘されている。簡単に述べる
と、赤血球は血液に対して、水を基剤とする系にはな
い、ある程度の粘性を与えることである。この問題はMa
stに発効された米国特許第3,920,580号においても認識
されている。この特許によれば、水性溶液は一定性がな
く、この物質を乾燥試薬片に使用した場合には再現性が
見られなかったことが述べられている。Mastは、グルコ
ースおよび水とともに抗拡散剤を使用することによっ
て、好適な試薬を製造することができると記載してい
る。Mastが示す抗拡散剤にはポリビニルピロリドン、ポ
リビニルアルコール、ポリエチレングリコール、デキス
トランおよびウシ血清アルブミンが含まれる。効果的な
量は抗拡散剤が約3〜35%であると述べられている。ま
た、この対照溶液は特定の色または物理的特徴を得るた
めに補助剤を含んでいてもよい。これには着色ラテック
ス粒子および水不溶性レーキ染料が含まれる。
から環境室温の範囲まで液体状態で安定な標準対照物質
について記載している。Maurukasの組成物は、水性の生
体物質から20〜40%の水分を除去し、代わりに実質的に
同濃度の炭素原子数2〜5のアルキレンポリオールを添
加することによって製造される。示唆されたアルキレン
ポリオールはエチレングリコール、プロピレングリコー
ル、ブチレングリコール、ペンタンジオールおよびグリ
セロールである。記載された組成物は逐次マルチチャン
ネル自動分析計を使用する血清の分析に好適であると言
われている。全血試料を使用したグルコースの測定のた
めの試験片へのこの組成物の適用可能性については何ら
示されていない。
こで参考として引用する)において、粘性剤としてポリ
スチレンスルホン酸塩を使用した非血清を基剤とするグ
ルコース測定用対照試薬について述べている。
ら使用せずに、好適なグルコース検量剤および対照試薬
を形成することができることが今回見出された。正確に
は、ジプロピレングリコールと既定量のグルコースと
水、そして任意の添加物質とを組み合わせることによっ
て、好適なグルコース検量剤または対照試薬を製造する
ことができる。
およびジプロピレングリコールを含む非血清基剤のグル
コース検量剤および対照試薬である。ジプロピレングリ
コールの好ましい濃度は試薬組成物に対し約20〜30重量
%である。全く予期しなかったことに、本発明の組成物
はグルコース測定用の試験片などの試験器具の検量標準
となり、またこれらを有効にするのに有用であることが
わかった。緩衝液、保存剤、生物致死剤、イオン性塩ま
たは界面活性剤などの添加物質を単独でまたは各種添加
剤を組み合わせて3つの必須成分に混合してもよい。本
発明の別の態様はグルコース、水、およびジプロピレン
グリコールを共に混合することによって検量剤または対
照試薬を製造する方法である。
ジプロピレングリコールである。もちろん水は他の成分
が溶解した試薬溶液を形成するために使用する。“既
定”とは、実際の試薬の形成前にグルコースの濃度を選
択した、という意味である。当分野における技術者は認
識するはずであるが、この濃度は変えることができる。
上に示したように、この分野では、例えば対照物質につ
いて40〜500mg/dlの範囲と認識されるが、物質を検量目
的に使用する場合、例えば10〜700mg/dlのより広い範囲
を考えてもよい。
媒(水)、既定量のグルコースおよびジプロピレングリ
コールである。ジプロピレングリコールは例えば試薬の
約20〜約30重量%の範囲で存在するのがよい。ジプロピ
レングリコールの重量パーセントは、この試薬を使用す
る特定の試験器具と、検量剤または対照物質について必
要とされる試薬の最終粘性および必要とされる拡散また
は透過特性などの規準とに応じて決定されるべきもので
ある。当然、選択された特定量のジプロピレングリコー
ルは、グルコース測定に対して逆干渉しないか、または
試薬の安定性に悪影響を及ぼさないものである必要があ
る。対照物質が全血と等しい粘性を有する必要はない。
しかし、試験片の試薬マトリックスに通ずるこの物質の
透過性、すなわちグルコースアナライトの拡散速度が全
血の透過性に近似することが望ましい。
液、保存剤、界面活性剤、およびイオン性塩などの典型
的な添加剤が含まれる。緩衝液に関しては、好ましい種
類として、スクシネート、HEPES(4−[2−ヒドロキ
シエチル−1−ピペラジン]エタンスルホン酸)、CHES
(2−[N−シクロヘキシルアミノ]エタンスルホン
酸)、MOPS(3−[N−モルホリノ]プロパンスルホン
酸)、MEPS(2−[N−モルホリノ]エタンスルホン
酸)、およびCAPS(3−[シクロヘキシルアミノ−1−
1−プロパン]スルホン酸)緩衝液がある。好ましい保
存剤または生物致死剤には、商品名GERMALL 115(GAF C
hemicals Corp.)として入手可能なイミダゾリジニル尿
素、メチルパラベン(メチル−p−ヒドロキシベンゾエ
ート)またはCOSAN 145(Cosan Chemical Corp.)とし
て入手可能なメタノール(((2−(ジヒドロ−5−メ
チル−3(2H)−オキサゾイリル)−1−メチレトキ
シ)メトキシ)メトキシ)、フェノキシエタノールおよ
びゲンタマイシンスルフェートの単独または組合せが含
まれる。
も望ましい。体液試料がしばしばその特性の1つとして
特定の色調を有していることから、このことが必要な場
合がある。対照試薬が、ある体液試料について検量する
のに使用されている時、色調を含めてできるだけ試験体
液と同様の条件で検量するのに有用である。
の組成で製造した; HEPES,Na塩 30mM HEPES,遊離酸 30mM CaCl2 130mM NaCl 120mM GERMALL 115 0.3% メチルパラベン 0.3% 水 77.5% ジプロピレングリコール 22.5% この試薬をNaOHで最終pH7.5に調整した。製造後、試
薬をアリコートに分割し、既定量のグルコースを添加し
た。選択した理論的または標的グルコース値は10,20,4
0,60,80,100,130,180,300,550および700mg/dlである。
続いて各検量剤/対照混合物をバイアルに分割し、2つ
づつを各種温度条件下で保存した。
において1週間保存した後、次にその効力について試験
した。上に説明したように、対照物質の最も重要な特徴
の1つは一定性であり、これを使用して得られた値が実
施毎に十分均一であるべきであるということを意味す
る。
ルコース測定系を含有する試験片に、25℃で保存した各
対照試薬を適用した。簡単に述べると、この公報には、
電流測定バイオセンサー系を使用したグルコースの測定
が記載されている。
電流の読みの平均、標準偏差および変動係数を算出し
た。ヘキソキナーゼ測定法およびHITACHI 705(Boehrin
ger Mannheim Corp.,Indianapolis,IN)分析機を使用し
て、試料の標準グルコース値を測定した。得られた結果
を下記表1に示す。
の比較によってわかるように、これらの結果は、一定性
の水準が検量および対照試薬に要求される範囲として十
分であることを示している。
あって本発明を限定するものではないこと、そしてこの
発明の精神および範囲内のその他の態様が当分野の技術
者に示唆されるものであることが理解されるはずであ
る。
Claims (9)
- 【請求項1】既定量のグルコース、水およびジプロピレ
ングリコールの混合物を含有するグルコース測定用の検
量剤または対照試薬。 - 【請求項2】ジプロピレングリコールの量が検量剤また
は対照試薬に対して20〜30重量%である、請求項1記載
の検量剤または対照試薬。 - 【請求項3】さらに緩衝液を含有する、請求項1記載の
検量剤または対照試薬。 - 【請求項4】さらに保存剤を含有する、請求項1記載の
検量剤または対照試薬。 - 【請求項5】さらにイオン性塩を含有する、請求項1記
載の検量剤または対照試薬。 - 【請求項6】緩衝液、保存剤およびイオン性塩をさらに
含有する、請求項1記載の検量剤または対照試薬。 - 【請求項7】既定量のグルコース、水およびジプロピレ
ングリコールを混合することを含む、グルコース測定用
の検量剤または対照試薬の製造方法。 - 【請求項8】ジプロピレングリコールの量が検量剤また
は対照試薬に対して20〜30重量%である、請求項7記載
の方法。 - 【請求項9】既定量のグルコース、水およびジプロピレ
ングリコールとともに、さらに緩衝液、保存剤、および
無機塩からなる群から選択された物質を混合することを
含む、請求項7記載の方法。
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