JPH0220293A - 抗腫瘍抗生物質LL―E33288γ↓2の製造法 - Google Patents
抗腫瘍抗生物質LL―E33288γ↓2の製造法Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は抗腫瘍抗生物質LL−E33’288γ2好気
性発酵によりヨード又はブロム同族体のいずれかとして
製造する方法に関する。
性発酵によりヨード又はブロム同族体のいずれかとして
製造する方法に関する。
要するに本発明は抗腫瘍抗生物質LL−E 33288
γ2−Bt−及びLL−E33288γ2−Iの新規な
好気性発酵法を記述する。
γ2−Bt−及びLL−E33288γ2−Iの新規な
好気性発酵法を記述する。
−緒にしてLL−E33288複合体として公知の抗生
物質及び抗腫瘍剤の同族体は、一連の関連米国特許願、
即ち1984年11月16日付けの特許願第672,0
31号、1985年10月17日付けの特許願第787
,066号、及び1987年1月30日付けの特許願第
009,321号に記述され且つ特許請求されている。
物質及び抗腫瘍剤の同族体は、一連の関連米国特許願、
即ち1984年11月16日付けの特許願第672,0
31号、1985年10月17日付けの特許願第787
,066号、及び1987年1月30日付けの特許願第
009,321号に記述され且つ特許請求されている。
これらの特許願は、L’L−E33288複合体、その
成分、即ちL L−E 33288 a + 13
r、LL−E33288α+ I、LL E332
88(Z2 Br、LL E332881J2 1
.L、I−。
成分、即ちL L−E 33288 a + 13
r、LL−E33288α+ I、LL E332
88(Z2 Br、LL E332881J2 1
.L、I−。
F、 33288 a 3B r 、 L L ’ E
33288a3−1.LL−E33288α’、−B
r、I−LE33288β、−Br、L、L−E332
88β1、LL−E33288β2−Br、LL−E3
3288β2−1.LL−E33288γB r 、
LL E 33288 r + I 、及びLLE
33288δ、−1及びこれらの、ミクロモノスポラ・
エチノスポラ亜種カリチエンシス或いはその天然の又は
誘導された変種の新しい種を用いる好気性発酵による製
造法を記述している。
33288a3−1.LL−E33288α’、−B
r、I−LE33288β、−Br、L、L−E332
88β1、LL−E33288β2−Br、LL−E3
3288β2−1.LL−E33288γB r 、
LL E 33288 r + I 、及びLLE
33288δ、−1及びこれらの、ミクロモノスポラ・
エチノスポラ亜種カリチエンシス或いはその天然の又は
誘導された変種の新しい種を用いる好気性発酵による製
造法を記述している。
本発明は抗腫瘍抗生物質LL−E33288γ2好気性
発酵によりヨード又はブロム同族体のいずれかとして製
造する方法に関する。
発酵によりヨード又はブロム同族体のいずれかとして製
造する方法に関する。
LL−E33288γ2−■は次の試験において示され
るように抗腫瘍剤として活性である。
るように抗腫瘍剤として活性である。
リンパ球 血 P388試験
用いた動物はB D F +の雌のマウスであった。
試験群当り5又は6匹のマウスを用いた。腫瘍の移植は
、リンパ球白血病P388の細胞1×106コを含む希
腹水液0.5mlの腹腔的注射により、0白目として行
なった。次いで試験化合物を、無菌の、発熱物質を含ま
ない食塩水中0.5mlの容量で、〈腫瘍移植に対して
)1.5及び9白目に指示投薬量で腹腔内投与した。3
0日間にわたり規則的な基準でマウスを秤量し、生存数
を記録した。
、リンパ球白血病P388の細胞1×106コを含む希
腹水液0.5mlの腹腔的注射により、0白目として行
なった。次いで試験化合物を、無菌の、発熱物質を含ま
ない食塩水中0.5mlの容量で、〈腫瘍移植に対して
)1.5及び9白目に指示投薬量で腹腔内投与した。3
0日間にわたり規則的な基準でマウスを秤量し、生存数
を記録した。
処置した(T)/未処置の(C)動物に対する中位生存
期間を計算した。結果を第1表に示す。
期間を計算した。結果を第1表に示す。
メラニン沈着黒色腫(Melanotic Me l
anoma)B16試験 用いた動物はBDFlの雌のマウスであった。
anoma)B16試験 用いた動物はBDFlの雌のマウスであった。
試験当り5又は6匹のマウスを用いた。メラニン沈着黒
色JiB 16の腫瘍の1g部分を、バランスのとれた
冷塩溶液10m1中で均質化し、そしてこの均質化物の
0.5+nN画分を試験マウスの各に腹腔内移植した。
色JiB 16の腫瘍の1g部分を、バランスのとれた
冷塩溶液10m1中で均質化し、そしてこの均質化物の
0.5+nN画分を試験マウスの各に腹腔内移植した。
次いで試験化合物を1〜9日目日日li瘍接種日に対し
て)に指示投薬量で腹腔内投与した。60日間にわたり
規則的な基準でマウスを秤量し、生存数を記録した。処
置しな(T)/未処置の(C)動物に対する割合及び中
位生存期間を計算した。結果を第■表に示す。
て)に指示投薬量で腹腔内投与した。60日間にわたり
規則的な基準でマウスを秤量し、生存数を記録した。処
置しな(T)/未処置の(C)動物に対する割合及び中
位生存期間を計算した。結果を第■表に示す。
第■表
LL−E332880.005 34
162γ2−1 0.0025
38 1810.00125 3
3.5 1600.0006 2
8.5 1360.0003 2
6 124LL−E33288γ2−1
は第1図に示す紫外線スペクトル、第1I図に示すプロ
トン核磁気共鳴スペクトル、第■図に示す赤外線スペク
トル、及び第■図に示す質量スペクトルを有する。
162γ2−1 0.0025
38 1810.00125 3
3.5 1600.0006 2
8.5 1360.0003 2
6 124LL−E33288γ2−1
は第1図に示す紫外線スペクトル、第1I図に示すプロ
トン核磁気共鳴スペクトル、第■図に示す赤外線スペク
トル、及び第■図に示す質量スペクトルを有する。
LL−E33288γ2−Iは以下に示す如き推定構造
を有する: 抗腫瘍剤LL−E33288γ21及びLLE3328
8γ2−Brはミクロモノスポラ・エチノスポラ亜種カ
リチエンシスの新種の制御された条件下での培養中に生
成しうる。この微生物はアメリカン・サイアナミド社医
学研究部門(Medical Re5earch
Division+American Cyanam
idCo、、Pearl River+New Y
。
を有する: 抗腫瘍剤LL−E33288γ21及びLLE3328
8γ2−Brはミクロモノスポラ・エチノスポラ亜種カ
リチエンシスの新種の制御された条件下での培養中に生
成しうる。この微生物はアメリカン・サイアナミド社医
学研究部門(Medical Re5earch
Division+American Cyanam
idCo、、Pearl River+New Y
。
rk)のカルチャー・コレクションに培養物番号LL−
E33288として保管されている。この新しい微生物
の生活培養物は、米国農業省北部研究センター、カルチ
ャー・コレクション研究所(Culture Co1
1ection Lab。
E33288として保管されている。この新しい微生物
の生活培養物は、米国農業省北部研究センター、カルチ
ャー・コレクション研究所(Culture Co1
1ection Lab。
ratory+Nothern RegionaI
Re5earch Center、、U、S、De
partment of Agriculture
、Peoria、I 11.)に預託され。現在種表示
NRRL−15839のもとに永久コレクションに加え
られている。2つの誘導された変種、即ちLL−R33
288γ2−I及びLL−R33288r 2 B
rも生成するLL−R33288−R66(NRRL−
15975)及びLL−R33288−UV784(N
RRL−18149)もこの貯蔵所に預託しである。本
特許願の未決中における上記種表示のもとの該培養物へ
の接近は、C,F、R,@1.14及び35U、S、C
,@ 122のちとに権利の与えられた特許及び登録商
標庁長官(Commissioner of Pa
tents and Trademarks)によ
り決定されたものには可能となる。そのような培養物の
公共が利用する時のすべての制限は、本特許願が米国特
許として認められた場合、最終的にとり除かれよう。
Re5earch Center、、U、S、De
partment of Agriculture
、Peoria、I 11.)に預託され。現在種表示
NRRL−15839のもとに永久コレクションに加え
られている。2つの誘導された変種、即ちLL−R33
288γ2−I及びLL−R33288r 2 B
rも生成するLL−R33288−R66(NRRL−
15975)及びLL−R33288−UV784(N
RRL−18149)もこの貯蔵所に預託しである。本
特許願の未決中における上記種表示のもとの該培養物へ
の接近は、C,F、R,@1.14及び35U、S、C
,@ 122のちとに権利の与えられた特許及び登録商
標庁長官(Commissioner of Pa
tents and Trademarks)によ
り決定されたものには可能となる。そのような培養物の
公共が利用する時のすべての制限は、本特許願が米国特
許として認められた場合、最終的にとり除かれよう。
ミクロモノスポラ・エチノスポラ亜種カリチエンシスN
RRL−15839,15971、又は18149の培
養は多種類の液体培養媒体中で行なうことができる。L
L−R33288γ、−1及びL L E 3328
8 r 2 B rの製造に有用な媒体は同化しうる
炭素源例えば殿粉、糖、糖蜜、グリセロールなど;同化
しうる窒素源例えば蛋白質、蛋白質加水分解物、ポリペ
プチド、アミノ酸、トウモロコシ浸漬液なと;及び無機
アニオン及びカチオン例えばカリウム、ナトリウム、ア
ンモニウム、カルシウム、サルフェート、カーボネニト
、ホスフェート、クロライドなど;及び臭素又はヨウ素
源例えば(ブロム誘導体が所望ならば)臭化ナトリウム
又は(ヨード誘導体が所望ならば)ヨウ化カリウム、を
含む。痕跡量の元素例えばホウ素、モリブデン、銅など
は媒体の他の成分の不純物として供給される。タンク及
びビンでのばっ気は、無菌の空気を発酵媒体中に又はそ
の表面上に強制的に送入することによって供給される。
RRL−15839,15971、又は18149の培
養は多種類の液体培養媒体中で行なうことができる。L
L−R33288γ、−1及びL L E 3328
8 r 2 B rの製造に有用な媒体は同化しうる
炭素源例えば殿粉、糖、糖蜜、グリセロールなど;同化
しうる窒素源例えば蛋白質、蛋白質加水分解物、ポリペ
プチド、アミノ酸、トウモロコシ浸漬液なと;及び無機
アニオン及びカチオン例えばカリウム、ナトリウム、ア
ンモニウム、カルシウム、サルフェート、カーボネニト
、ホスフェート、クロライドなど;及び臭素又はヨウ素
源例えば(ブロム誘導体が所望ならば)臭化ナトリウム
又は(ヨード誘導体が所望ならば)ヨウ化カリウム、を
含む。痕跡量の元素例えばホウ素、モリブデン、銅など
は媒体の他の成分の不純物として供給される。タンク及
びビンでのばっ気は、無菌の空気を発酵媒体中に又はそ
の表面上に強制的に送入することによって供給される。
タンク中での更なる撹拌は機械的な羽根によって付与さ
れる。消泡剤例えばシリコーンも必要に応じて添加しう
る。
れる。消泡剤例えばシリコーンも必要に応じて添加しう
る。
本発明は以下の限定を意味しない特別な実施例と関連し
て更に詳細に記述されよう。
て更に詳細に記述されよう。
実施例1
隻長蔓α41
1次接種物を生長させるために用いた代表的な媒体を次
の配合に従って準備した: ビーフ抽出物 約0.3% トリプトン 約0.5% デキストロース 約0.5% デキストリン 約2.4% 炭酸カルシウム 約0.4% イースト抽出物 約0,5% 水 100%にするのに十分な量 この媒体をpH7,0に調節し、次いで殺菌した。この
無菌媒体100m1’部分をフラスコ中に入れ、これに
培養物NRRL−15839の凍結した菌糸を接種した
。この接種した媒体を回転振とう機にとりつけ、32℃
で48時間激しく撹拌した。次いでこの接種した媒体を
用いて、14Iの発酵器内の上記無菌媒体101に接種
した。この媒体を撹拌しなから48時間32℃に保温し
て2次接種物を得た。次いでこの2次接種物を用いて、
タンク内の上記無菌媒体3001に接種し、そして羽根
を180〜20Orpmで駆動させることによって撹拌
しなから30℃で48時間培養し、3次又は種接種物を
得た。
の配合に従って準備した: ビーフ抽出物 約0.3% トリプトン 約0.5% デキストロース 約0.5% デキストリン 約2.4% 炭酸カルシウム 約0.4% イースト抽出物 約0,5% 水 100%にするのに十分な量 この媒体をpH7,0に調節し、次いで殺菌した。この
無菌媒体100m1’部分をフラスコ中に入れ、これに
培養物NRRL−15839の凍結した菌糸を接種した
。この接種した媒体を回転振とう機にとりつけ、32℃
で48時間激しく撹拌した。次いでこの接種した媒体を
用いて、14Iの発酵器内の上記無菌媒体101に接種
した。この媒体を撹拌しなから48時間32℃に保温し
て2次接種物を得た。次いでこの2次接種物を用いて、
タンク内の上記無菌媒体3001に接種し、そして羽根
を180〜20Orpmで駆動させることによって撹拌
しなから30℃で48時間培養し、3次又は種接種物を
得た。
実施例2
久4久ル降
発酵媒体を次の配合に従って準備した:デキストロース
約0.5%サクロース
約1.5%ペプトン、バクテリヤ学的純度級 約
0.2%二二塩性性燐酸カリウム 約0.01%I
I蜜 約0.5%炭酸カルシウム
約0.5%ヨウ素源*
痕跡量水 100%にするのに十分な量
*L L E 33288 r 2 B rを製造
する場合には、痕跡量の臭素源を用いるべきである。
約0.5%サクロース
約1.5%ペプトン、バクテリヤ学的純度級 約
0.2%二二塩性性燐酸カリウム 約0.01%I
I蜜 約0.5%炭酸カルシウム
約0.5%ヨウ素源*
痕跡量水 100%にするのに十分な量
*L L E 33288 r 2 B rを製造
する場合には、痕跡量の臭素源を用いるべきである。
上記媒体の28001部分を殺菌し、次いで実施例1に
記述した如く製造した3次(種)接種物300−Iを接
種した。ばつ気は無菌空気0.531/マツシュl/分
の速度で行ない、110rpmで駆動する羽根で撹拌し
た。温度を約28℃に保ち、発酵を約97時間後に終了
させ、この時点でマツシュを収穫した。
記述した如く製造した3次(種)接種物300−Iを接
種した。ばつ気は無菌空気0.531/マツシュl/分
の速度で行ない、110rpmで駆動する羽根で撹拌し
た。温度を約28℃に保ち、発酵を約97時間後に終了
させ、この時点でマツシュを収穫した。
この発酵は、抗バクテリヤ活性、生化学的誘導分析、T
LC及びHPLC分析によLLL−E33288γ2−
Iの製造に関して監視した。
LC及びHPLC分析によLLL−E33288γ2−
Iの製造に関して監視した。
実施例3
LL−E33288γ2−1及びLL−E33288δ
、−Iの 合 の予 的 実施例2に記述した如く行なった発酵からの全収穫マツ
シュをpH6に調節し、次いでマツシュの容量の1への
酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル抽出物を脱溶媒し、
次いでメタノール及びヘキサン間に分配することによっ
て脱脂した。このメタノール相を乾固するまで濃縮した
。得られた粘稠なゴム状物を塩化メチレン中に入れ、シ
リカゲルでの清浄(clean−up)クロマトグラフ
ィーに供した。所望の代謝物を、塩化メチレン中3〜5
%メタノールの段階的グラジェントを用いて分画した。
、−Iの 合 の予 的 実施例2に記述した如く行なった発酵からの全収穫マツ
シュをpH6に調節し、次いでマツシュの容量の1への
酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル抽出物を脱溶媒し、
次いでメタノール及びヘキサン間に分配することによっ
て脱脂した。このメタノール相を乾固するまで濃縮した
。得られた粘稠なゴム状物を塩化メチレン中に入れ、シ
リカゲルでの清浄(clean−up)クロマトグラフ
ィーに供した。所望の代謝物を、塩化メチレン中3〜5
%メタノールの段階的グラジェントを用いて分画した。
γ1−■、γ2−I、δ、−1及びεI代謝物を含有す
る回収された固体を、ウォータ−ズ(Wate rs)
LC1500型分取装置により分割した。クロマトグラ
フィーは、アセトニトリル45部及び0.2M酢酸アン
モニウム溶液(PH7,0>55部からなる溶媒系を用
いる逆相プレパック(Prepak)カートリッジによ
り行なった。このクロマトグラフィーで回収された物質
はL L −E 33288γ2−1及びLL−E 3
3288δ、−Iの混合物であった。
る回収された固体を、ウォータ−ズ(Wate rs)
LC1500型分取装置により分割した。クロマトグラ
フィーは、アセトニトリル45部及び0.2M酢酸アン
モニウム溶液(PH7,0>55部からなる溶媒系を用
いる逆相プレパック(Prepak)カートリッジによ
り行なった。このクロマトグラフィーで回収された物質
はL L −E 33288γ2−1及びLL−E 3
3288δ、−Iの混合物であった。
実施例4
LL−E33288γ2−Iの単離
LL−E33288γ2−I及びLL−E 33288
δ、−−Iを含有する実施例3の生成物の250111
g部分を、C18ボンダパック(B o n d a
pak)担体〈粒径25μ)の1インチの充填カラムに
仕込み、そしてセパレーションズ・テクノロジー・ラブ
(Separations Techno l og
y Lab)800A装置を用いてHPLCに供した
。この溶媒系はアセトニトリル35部及び0.1M酢酸
アンモニウム(pH4.5)緩衝液65部からなった。
δ、−−Iを含有する実施例3の生成物の250111
g部分を、C18ボンダパック(B o n d a
pak)担体〈粒径25μ)の1インチの充填カラムに
仕込み、そしてセパレーションズ・テクノロジー・ラブ
(Separations Techno l og
y Lab)800A装置を用いてHPLCに供した
。この溶媒系はアセトニトリル35部及び0.1M酢酸
アンモニウム(pH4.5)緩衝液65部からなった。
200+mZずつ画分を集めた。
=16−
クロマトグラフィーは254nmで監視した。画分2及
び3を一緒にし、脱溶媒し、そして酢酸エチルで抽出し
た。この抽出物を乾燥し、次いで数M1まで濃縮し、そ
して撹拌しなからヘキサン20社に滴下した。沈殿を集
め、乾燥し、LL−E33288γ2113mgを得た
。
び3を一緒にし、脱溶媒し、そして酢酸エチルで抽出し
た。この抽出物を乾燥し、次いで数M1まで濃縮し、そ
して撹拌しなからヘキサン20社に滴下した。沈殿を集
め、乾燥し、LL−E33288γ2113mgを得た
。
実施例5
LL E33288 2 Iの
LL−E33288γ2−1及びL I−−E 332
88δ、−−Iを含有する実施例3の生成物104mg
部分をアセトニトリル3mlに溶解した。この溶液に、
アセトニトリル0.2m4中ジチオスレイトール11.
2+agの溶液を添加した。2.5時間後、この混合物
を濾過し、炉液を7.5mlまで希釈し、実施例4に記
述した如きCl1lボンダパツクの1インチの充填した
カラムに仕込んだ。このカラムをアセトニトリル:0.
1M酢酸アンモニウム(pH4,5)[衝液(35:6
5)で展開し、245 n mで監視し、そして200
+ffiずつ画分を集めた。両分3〜6を一緒にし、脱
溶媒し、酢酸エチルで抽出した。この抽出物を乾燥し、
2〜3mlに濃縮し、そしてヘキサノ20v11に滴下
した。得られた沈殿を集め、アセトンの沸とう温度で高
真空下に乾燥し、L L E 33288 r 2
I 13 mgを灰色がかった固体として得た。
88δ、−−Iを含有する実施例3の生成物104mg
部分をアセトニトリル3mlに溶解した。この溶液に、
アセトニトリル0.2m4中ジチオスレイトール11.
2+agの溶液を添加した。2.5時間後、この混合物
を濾過し、炉液を7.5mlまで希釈し、実施例4に記
述した如きCl1lボンダパツクの1インチの充填した
カラムに仕込んだ。このカラムをアセトニトリル:0.
1M酢酸アンモニウム(pH4,5)[衝液(35:6
5)で展開し、245 n mで監視し、そして200
+ffiずつ画分を集めた。両分3〜6を一緒にし、脱
溶媒し、酢酸エチルで抽出した。この抽出物を乾燥し、
2〜3mlに濃縮し、そしてヘキサノ20v11に滴下
した。得られた沈殿を集め、アセトンの沸とう温度で高
真空下に乾燥し、L L E 33288 r 2
I 13 mgを灰色がかった固体として得た。
実施例6
LL−E33288γ2−Iの 離
LL−F、33288γ2−1及びLL−E33288
δ、−−Iを含む実施例3の生成物の250111g部
分をアセトニトリル5.5mlに溶解した。
δ、−−Iを含む実施例3の生成物の250111g部
分をアセトニトリル5.5mlに溶解した。
この溶液にアセトニトリル0.5mf中ジチオスレイト
ール25mgの溶液を添加した。反応を1.5時間行な
い、次いで枦遇した。炉液を3〜4mlまで濃縮し、同
容量の0.1M酢酸アンモニウム(pH4’、5>M衝
液を添加した。この混合物を実施例5に記述したように
クロマトグラフィーに供し、アセトニトリル:0.1M
酢酸アンモニウム(p H4。
ール25mgの溶液を添加した。反応を1.5時間行な
い、次いで枦遇した。炉液を3〜4mlまで濃縮し、同
容量の0.1M酢酸アンモニウム(pH4’、5>M衝
液を添加した。この混合物を実施例5に記述したように
クロマトグラフィーに供し、アセトニトリル:0.1M
酢酸アンモニウム(p H4。
5)W衝液(38:62>で展開した。流出物を254
nmで監視し、200iずつ画分を集めた。
nmで監視し、200iずつ画分を集めた。
画分3.4及び5を一緒にし、乾燥し、脱溶媒し、そし
て酢酸エチルで抽出した。この抽出物を乾燥し、数社ま
で濃縮し、撹拌しなからヘキサノ20M1に滴下した。
て酢酸エチルで抽出した。この抽出物を乾燥し、数社ま
で濃縮し、撹拌しなからヘキサノ20M1に滴下した。
この沈殿を集め且つ乾燥して、LL −E 33288
7−2 I 25 mgを灰色がかった固体として
得た。
7−2 I 25 mgを灰色がかった固体として
得た。
第1.2.3、及び4図はLL、−E33288γ2−
Iの、それぞれ紫外線スペクトル、プロ1ヘン核磁気共
鳴スペクトル、赤外線スペクトル、及び質量スペクトル
を示す。 特許出願人 アメリカン・サイアナミド・カンパ手続補
正書(放) 平成1年7月 3日 特許庁長官 吉 1)文 毅 殿 1、事件の表示 平成1年特許願第120619号 2、発明の名称 抗腫瘍抗生物質LL−E33288γ2の製造法3、補
正をする者 事件との関係 特許出願人 名称 アメリカン・サイアナミド・カンパニ4、代理人
〒107 1、補正命令の日付 なし 6、補正の対象 図面 7、補正の内容
Iの、それぞれ紫外線スペクトル、プロ1ヘン核磁気共
鳴スペクトル、赤外線スペクトル、及び質量スペクトル
を示す。 特許出願人 アメリカン・サイアナミド・カンパ手続補
正書(放) 平成1年7月 3日 特許庁長官 吉 1)文 毅 殿 1、事件の表示 平成1年特許願第120619号 2、発明の名称 抗腫瘍抗生物質LL−E33288γ2の製造法3、補
正をする者 事件との関係 特許出願人 名称 アメリカン・サイアナミド・カンパニ4、代理人
〒107 1、補正命令の日付 なし 6、補正の対象 図面 7、補正の内容
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、有機体ミクロモノスポラ・エチノスポラ(Micr
omonosporaechinospora)亜種カ
リチエンシス(calichensis)NRRL−1
5839、又はNRRL−15975及びNRRL−1
8149を含むその変種を、炭素、窒素、ヨウ素、及び
無機塩の同化しうる源を含有する液体媒体中において、
実質的な抗生物質活性が該媒体に付与されるまで好気的
に発酵させ、次いでこれからLL−E33288γ_2
−Iを回収することを特徴とする抗腫瘍抗生物質LL−
E33288γ_2−Iの製造法。 2、炭素、窒素、ヨウ素及び無機塩の同化しうる源を含
有し且つ有機体ミクロモノスポラ・エチノスポラ亜種カ
リチエンシスNRRL−15829、又はNRRL−1
5975及びNRRL−18149を含むその変種の生
活培養物を予め接種した液体媒体を好気的に発酵させ、
該発酵培養物を約24〜32℃の温度で約90〜200
時間維持し、マツシユを収穫し、そしてそれからLL−
E33288γ_2−Iを抽出することを特徴とする抗
腫瘍抗生物質LL−E33288γ_2−Iの製造法。 3、有機体ミクロモノスポラ・エチノスポラ(Micr
omonosporaechinospora)亜種カ
リチエンシス(calichensis)NRRL−1
5839、又はNRRL−15975及びNRRL−1
8149を含むその変種を、炭素、窒素、ヨウ素、及び
無機塩の同化しうる源を含有する液体媒体中において、
実質的な抗生物質活性が該媒体に付与されるまで好気的
に発酵させ、次いでこれからLL−E33288γ_2
−Brを回収することを特徴とする抗腫瘍抗生物質LL
−E33288γ_2−Brの製造法。 4、炭素、窒素、ヨウ素及び無機塩の同化しうる源を含
有し且つ有機体ミクロモノスポラ・エチノスポラ亜種カ
リチエンシスNRRL−15829、又はNRRL−1
5975及びNRRL−18149を含むその変種の生
活培養物を接種した液体媒体を好気的に発酵させ、該発
酵培養物を約24〜32℃の温度で約90〜200時間
維持し、マツシユを収穫し、そしてそれからLL−E3
3288γ_2−Brを抽出することを特徴とする抗腫
瘍抗生物質LL−E33288γ_2−Brの製造法。 5、a)マツシユをpH6に調節し、そしてマツシユの
容量の1/2の酢酸エチルで抽出し;b)この酢酸エチ
ル抽出物を、メタノール及びヘキサン間に分配すること
により脱溶媒及び脱脂し; c)メタノール部分を脱溶媒し、塩化メチレンに溶解し
、そして塩化メチレン中3〜5%メタノールの段階的グ
ラジエントで流出させるシリカゲルのクロマトグラフィ
ーにかけ、そしてLL−E33288γ_1、LL−E
33288γ_2、LL−E33288δ_1及びLL
−E33288εの混合物を得; d)これらの成分を、溶媒系アセトニトリル:0.2M
酢酸アンモニウム(pH7.0)(45:55)を用い
る逆相クロマトグラフィーにより分画して、LL−E3
3288γ_2及びLL−E33288δ_1の混合物
を得;そして e)この混合物をアセトニトリル:0.1M酢酸アンモ
ニウム(pH4.5)を用いるクロマトグラフィーで分
画してLL−E33288γ_2を得る、 工程を含んでなる特許請求の範囲第1〜4項記載のいず
れかに記述した如く誘導される全収穫マツシユからのL
L−E33288γ_2の抽出法。 6、a)混合物をアセトニトリルに溶解し;b)ジチオ
スレイトールのアセトニトリル中溶液と反応させ; c)アセトニトリル:0.1M酢酸アンモニウム(pH
4.5)(35:65)で流出させるクロマトグラフィ
ーで分離し; d)活性画分を脱溶媒し且つ酢酸エチルで抽出し; e)この抽出物をヘキサンに添加し、そしてLL−E3
3288γ_2を回収する、 工程を含んでなるLL−E33288γ_2及びLL−
E33288δ_1の混合物からLL−E33288γ
_2を分離する方法。
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JP2001033037A (ja) * | 1999-07-02 | 2001-02-09 | Beru Ag | セラミック加熱ロッド及び該セラミック加熱ロッドを備えたグロープラグ及びこれらの製造方法 |
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