JPH02138193A - β−グルカン類に対する特異性の高いアメボサイト・ライセート及びその製造方法 - Google Patents
β−グルカン類に対する特異性の高いアメボサイト・ライセート及びその製造方法Info
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- JPH02138193A JPH02138193A JP63292494A JP29249488A JPH02138193A JP H02138193 A JPH02138193 A JP H02138193A JP 63292494 A JP63292494 A JP 63292494A JP 29249488 A JP29249488 A JP 29249488A JP H02138193 A JPH02138193 A JP H02138193A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
(産業上の利用分野〕
本発明は、カブトガニから得られるアメボサイト・ライ
セートに係り、特に、β−グルカン類に対する特異性の
高いアメボサイト・ライセート及びその調製方法に関す
るものである。
セートに係り、特に、β−グルカン類に対する特異性の
高いアメボサイト・ライセート及びその調製方法に関す
るものである。
カブトガニ(Limulus polyphemus、
Tachypleustridentatus、 T
、gigas等)の血リンパ液より取得されるアメボサ
イト・ライセートのダラム陰性菌表層物質「エンドトキ
シン」 (リポポリサッカライド)による凝固現象は、
「リムルステスト」の−船名でエンドトキシン特異的検
出法として医学、薬学の領域で広く利用されている。こ
の様なアメボサイト・ライセートの凝固を起こす物質と
しては、エンドトキシン以外にトリプシン様プロテアー
ゼ(トリプシン、トロンビン等)及びβ−グルカン類(
β−結合を有するグルコースポリマー及びその誘導体)
が知られている。
Tachypleustridentatus、 T
、gigas等)の血リンパ液より取得されるアメボサ
イト・ライセートのダラム陰性菌表層物質「エンドトキ
シン」 (リポポリサッカライド)による凝固現象は、
「リムルステスト」の−船名でエンドトキシン特異的検
出法として医学、薬学の領域で広く利用されている。こ
の様なアメボサイト・ライセートの凝固を起こす物質と
しては、エンドトキシン以外にトリプシン様プロテアー
ゼ(トリプシン、トロンビン等)及びβ−グルカン類(
β−結合を有するグルコースポリマー及びその誘導体)
が知られている。
アメボサイト・ライセートのエンドトキシンによる凝固
現象は、エンドトキシン性凝固酵素前駆体活性化因子に
よる凝固酵素前駆体の活性化と、活性型凝固酵素の働き
によるコアギュローゲンの繊維状コアギュリンへの転換
により起こることが明らかにされている。一方、アメポ
サイト・ライセードのβ−グルカンによる凝固現象がβ
−グルカン性凝固酵素前駆体活性化因子による凝固酵素
前駆体の活性化と、活性型凝固酵素の働きによるコアギ
ュローゲンの繊維状コアギュリンへの転換により起こり
、アメボサイト・ライセートに含まれるエンドトキシン
性凝固酵素前駆体活性化因子とβ−グルカン性凝固酵素
前駆体活性化因子が異なるものであること力<Mori
taらにより報告され(FEBS Letters、1
29.2.318−321)、硫酸化多糖類を担体とす
る液体クロマトグラフィーを用いたβ−グルカン性凝固
酵素前駆体活性化因子の除去を特徴とするエンドトキシ
ンに対する特異性の高いアメボサイト・ライセートの調
製法が岩永らにより開示されている。(特開昭59−2
7829)〔発明が解決しようとする課題〕 しかしながら、前述した岩永らの方法によって、エンド
トキシンに対する特異性の高いアメボサイト・ライセー
トの調製法は確立されているが、−方、真菌類の菌体成
分であるβ−グルカンに対する特異性の高いアメボサイ
ト・ライセートを得る方法は未だ確立されていない。
現象は、エンドトキシン性凝固酵素前駆体活性化因子に
よる凝固酵素前駆体の活性化と、活性型凝固酵素の働き
によるコアギュローゲンの繊維状コアギュリンへの転換
により起こることが明らかにされている。一方、アメポ
サイト・ライセードのβ−グルカンによる凝固現象がβ
−グルカン性凝固酵素前駆体活性化因子による凝固酵素
前駆体の活性化と、活性型凝固酵素の働きによるコアギ
ュローゲンの繊維状コアギュリンへの転換により起こり
、アメボサイト・ライセートに含まれるエンドトキシン
性凝固酵素前駆体活性化因子とβ−グルカン性凝固酵素
前駆体活性化因子が異なるものであること力<Mori
taらにより報告され(FEBS Letters、1
29.2.318−321)、硫酸化多糖類を担体とす
る液体クロマトグラフィーを用いたβ−グルカン性凝固
酵素前駆体活性化因子の除去を特徴とするエンドトキシ
ンに対する特異性の高いアメボサイト・ライセートの調
製法が岩永らにより開示されている。(特開昭59−2
7829)〔発明が解決しようとする課題〕 しかしながら、前述した岩永らの方法によって、エンド
トキシンに対する特異性の高いアメボサイト・ライセー
トの調製法は確立されているが、−方、真菌類の菌体成
分であるβ−グルカンに対する特異性の高いアメボサイ
ト・ライセートを得る方法は未だ確立されていない。
即ち、従来、β−グルカンに対する特異性の高い分画を
得るには、硫酸化多糖類を担体とする液体クロマトグラ
フィーに吸着されたβ−グルカン性凝固酵素前駆体活性
化因子を溶出させ、このβ−グルカン性凝固酵素前駆体
活性化因子と凝固酵素前駆体を組み合わせる方法が用い
られていた。
得るには、硫酸化多糖類を担体とする液体クロマトグラ
フィーに吸着されたβ−グルカン性凝固酵素前駆体活性
化因子を溶出させ、このβ−グルカン性凝固酵素前駆体
活性化因子と凝固酵素前駆体を組み合わせる方法が用い
られていた。
しかし、この方法で分画したβ−グルカン性凝固酵素前
駆体活性化因子は、凝固酵素の内在性の基質であり、合
成基質を用いて凝固酵素前駆体活性を測定する際に阻害
作用をもつコアギュローゲンを含んでいるため、β−グ
ルカンに対する感度が低い。また、高価で調製の面倒な
、硫酸化多糖類を吸着担体とする液体クロマトグラフィ
ー用充填剤を使用しなければならないといった欠点もあ
った。
駆体活性化因子は、凝固酵素の内在性の基質であり、合
成基質を用いて凝固酵素前駆体活性を測定する際に阻害
作用をもつコアギュローゲンを含んでいるため、β−グ
ルカンに対する感度が低い。また、高価で調製の面倒な
、硫酸化多糖類を吸着担体とする液体クロマトグラフィ
ー用充填剤を使用しなければならないといった欠点もあ
った。
本発明は、上述した従来技術の問題点を解消するために
提案されたもので、その目的は、カブトガニの血リンパ
液より取得されるアメボサイトの抽出液(アメボサイト
・ライセート)より、エンドトキシン性凝固酵素前駆体
活性化因子を除去し、β−グルカン類に対する特異性及
び感度の高いアメボサイト・ライセート及び該アメボサ
イト・ライセートの調製方法を提供することにある。
提案されたもので、その目的は、カブトガニの血リンパ
液より取得されるアメボサイトの抽出液(アメボサイト
・ライセート)より、エンドトキシン性凝固酵素前駆体
活性化因子を除去し、β−グルカン類に対する特異性及
び感度の高いアメボサイト・ライセート及び該アメボサ
イト・ライセートの調製方法を提供することにある。
本発明者らはスルホプロピル基を吸着担体とするイオン
交換クロマトグラフィーにアメボサイト・ライセートを
付することにより、アメボサイト・ライセート中のエン
ドトキシン性凝固酵素前駆体活性化因子を、より簡便に
除去できるという新規事実を見出し本発明に到達した。
交換クロマトグラフィーにアメボサイト・ライセートを
付することにより、アメボサイト・ライセート中のエン
ドトキシン性凝固酵素前駆体活性化因子を、より簡便に
除去できるという新規事実を見出し本発明に到達した。
即ち、本発明のβ−グルカン類に対する特異性の高いア
メボサイト・ライセート及びその調製方法は、以下の点
を特徴とするものである。
メボサイト・ライセート及びその調製方法は、以下の点
を特徴とするものである。
(1)カブトガニから得られるアメボサイト・ライセー
トを、スルホプロピル基を吸着担体とするイオン交換液
体クロマトグラフィーに付し、エンドトキシン性凝固酵
素前駆体活性化因子を含む画分を除去することによりβ
−グルカン類に対する特異性の高いアメボサイト・ライ
セートを製造する方法。
トを、スルホプロピル基を吸着担体とするイオン交換液
体クロマトグラフィーに付し、エンドトキシン性凝固酵
素前駆体活性化因子を含む画分を除去することによりβ
−グルカン類に対する特異性の高いアメボサイト・ライ
セートを製造する方法。
(2)上記の製造方法により得られる、β−グルカン類
に対する特異性の高いアメボサイト・ライセート。
に対する特異性の高いアメボサイト・ライセート。
本発明でいうアメボサイト・ライセートとは、イオン強
度0.05以下の塩溶液、好ましくはNaC1を含むト
リス−塩酸緩衝液でカブトガニのアメボサイトを抽出し
て得られるものである。
度0.05以下の塩溶液、好ましくはNaC1を含むト
リス−塩酸緩衝液でカブトガニのアメボサイトを抽出し
て得られるものである。
また、本発明で用いられるイオン交換クロマトグラフィ
ーは、イオン強度0.05以下の塩溶液、好ましくはN
aC1を含むトリス−塩酸緩衝液で平衡化したスルホプ
ロピル基を吸着担体とするものである。この様なイオン
交換クロマトグラフィーに、前記アメボサイト・ライセ
ートを付すことにより、アメポサイト・ライセード中に
含まれるエンドトキシン性凝固酵素前駆体活性化因子を
イオン交換吸着体に吸着させ、β−グルカンに対する特
異性の高いアメボサイト・ライセートを非吸着画分に得
ることができる。次いでイオン強度0.2を超える塩溶
液、好ましくはNaC1を含むトリス−塩酸緩衝液を用
いて溶出させることによりエンドトキシン性凝固酵素前
駆体活性化因子を採取することができる。
ーは、イオン強度0.05以下の塩溶液、好ましくはN
aC1を含むトリス−塩酸緩衝液で平衡化したスルホプ
ロピル基を吸着担体とするものである。この様なイオン
交換クロマトグラフィーに、前記アメボサイト・ライセ
ートを付すことにより、アメポサイト・ライセード中に
含まれるエンドトキシン性凝固酵素前駆体活性化因子を
イオン交換吸着体に吸着させ、β−グルカンに対する特
異性の高いアメボサイト・ライセートを非吸着画分に得
ることができる。次いでイオン強度0.2を超える塩溶
液、好ましくはNaC1を含むトリス−塩酸緩衝液を用
いて溶出させることによりエンドトキシン性凝固酵素前
駆体活性化因子を採取することができる。
次に本発明を実施例により説明する。但し、本発明はこ
の実施例により限定されるものでない。
の実施例により限定されるものでない。
アメリカ産カブトガニ(Limulus polyph
emus)血リンパ液よりアメボサイトを無菌的に採取
し、このアメボサイトをpH8,0の20mMトリス−
塩酸緩衝液で抽出して得られたアメボサイト・ライセー
トを、pH8,0の2011IMトリスー塩酸緩衝液で
平衡化した5P−Toyopearl 650C(東ソ
ー株式会社製)カラムに付す。吸着されずに溶出される
画分を回収することによりエンドトキシンに対しては反
応せず、β−グルカンに対して濃度依存的に反応するア
メボサイト・ライセート調製物が得られる。
emus)血リンパ液よりアメボサイトを無菌的に採取
し、このアメボサイトをpH8,0の20mMトリス−
塩酸緩衝液で抽出して得られたアメボサイト・ライセー
トを、pH8,0の2011IMトリスー塩酸緩衝液で
平衡化した5P−Toyopearl 650C(東ソ
ー株式会社製)カラムに付す。吸着されずに溶出される
画分を回収することによりエンドトキシンに対しては反
応せず、β−グルカンに対して濃度依存的に反応するア
メボサイト・ライセート調製物が得られる。
本調製物を用いてのβ−グルカンの定量法は以下のとお
りである。即ち、試料0.1mZ、本調製物0、1 m
l 、 20mMの?!gc12を含むpH8,0の3
20mM )リス−塩酸緩衝液0.1mI、 1m
MのBoc−Leu−Gly−Arg−MCA Q、1
m/を混合し37°Cで15分間保持した後、10%酢
酸21B!を加えて反応を停止し、螢光強度を励起波長
346nm 、測定波長442nmで測定することによ
り遊離されるAMCIを求める。試料の代わりに既知濃
度のβ−グルカンを用いて同様の操作で作成した検量線
にあてはめることによりβ−グルカン濃度を求めること
ができる。
りである。即ち、試料0.1mZ、本調製物0、1 m
l 、 20mMの?!gc12を含むpH8,0の3
20mM )リス−塩酸緩衝液0.1mI、 1m
MのBoc−Leu−Gly−Arg−MCA Q、1
m/を混合し37°Cで15分間保持した後、10%酢
酸21B!を加えて反応を停止し、螢光強度を励起波長
346nm 、測定波長442nmで測定することによ
り遊離されるAMCIを求める。試料の代わりに既知濃
度のβ−グルカンを用いて同様の操作で作成した検量線
にあてはめることによりβ−グルカン濃度を求めること
ができる。
なお、標準′!#J質としてカルボキシメチル化カード
ランを用いて作成した検量線を第1図に示す。
ランを用いて作成した検量線を第1図に示す。
また本調製物がエンドトキシンに対しては反応しないこ
とを示すために、試料の代わりに既知濃度のエンドトキ
シンを用いた場合の結果を第2図に示す。第1図及び第
2図より明らかなように、本調製物はエンドトキシンに
対しては反応せず、β−グルカンに対しては濃度依存的
に反応する。
とを示すために、試料の代わりに既知濃度のエンドトキ
シンを用いた場合の結果を第2図に示す。第1図及び第
2図より明らかなように、本調製物はエンドトキシンに
対しては反応せず、β−グルカンに対しては濃度依存的
に反応する。
且I」uしIL
SP−Toyopearl 650Cで処理する前のア
メボサイト・ライセートを用いて上記と同様の操作で測
定した結果を第3図、第4図に示す。第2図と第4図を
比較すると明らかなように5P−Toyopearl
650Cで処理することによりエンドトキシンに対する
感受性が消失し、第1図と第3図を比較すると明らかな
ように5P−Toyopearl 650Cで処理する
ことによりβ−グルカンに対する感受性が向上する。
メボサイト・ライセートを用いて上記と同様の操作で測
定した結果を第3図、第4図に示す。第2図と第4図を
比較すると明らかなように5P−Toyopearl
650Cで処理することによりエンドトキシンに対する
感受性が消失し、第1図と第3図を比較すると明らかな
ように5P−Toyopearl 650Cで処理する
ことによりβ−グルカンに対する感受性が向上する。
5P−Toyopearl 650Cで処理する前後の
エンドトキシン性凝固酵素前駆体活性化因子(Fact
or CおよびFactor B)の活性を第1表に示
す。Factor Cの活性の測定方法は試料0.1
d、エンドトキシン(1u g /m) 0.1 ml
、 20mMのMgChを含むpH8,0の320mM
)リス−塩酸緩衝液0.1mj!を混合し37°Cで
10分間保持した後、0.1dの1 mM Boc−V
al−Pro−Arg−MCA O,1ralを添加し
さらに37°Cで5分間保持した後、10%酢酸2dを
加えて反応を停止し、蛍光強度を励起波長346nm、
測定波長442nmで測定することにより遊離されるA
MC量を求める。
エンドトキシン性凝固酵素前駆体活性化因子(Fact
or CおよびFactor B)の活性を第1表に示
す。Factor Cの活性の測定方法は試料0.1
d、エンドトキシン(1u g /m) 0.1 ml
、 20mMのMgChを含むpH8,0の320mM
)リス−塩酸緩衝液0.1mj!を混合し37°Cで
10分間保持した後、0.1dの1 mM Boc−V
al−Pro−Arg−MCA O,1ralを添加し
さらに37°Cで5分間保持した後、10%酢酸2dを
加えて反応を停止し、蛍光強度を励起波長346nm、
測定波長442nmで測定することにより遊離されるA
MC量を求める。
Factor Bの活性の測定方法は試料0.1 d、
エンドトキシン(1u g/m) 0.1 ail、精
製Factor C(1u g / rtdl ) 0
.1 ml、 20mMのMgC1,を含むpH8,0
の320mM l−リスー塩酸緩衝液o、i戚を混合し
37°Cで10分間保持した後、0.1mの1 mM
Boc−Leu−Thr−Arg−MCA 0.1 厩
を添加しさらに37°Cで30分間保持した後、10%
酢酸2In1を加えて反応を停止し、蛍光強度を励起波
長346nm、測定波長442nmで測定することによ
り遊離されるAMCIを求める。5PToyopear
l 650Cで処理したアメポサイト・ライセードはエ
ンドトキシン性凝固酵素前駆体活性化因子活性を示さな
い。
エンドトキシン(1u g/m) 0.1 ail、精
製Factor C(1u g / rtdl ) 0
.1 ml、 20mMのMgC1,を含むpH8,0
の320mM l−リスー塩酸緩衝液o、i戚を混合し
37°Cで10分間保持した後、0.1mの1 mM
Boc−Leu−Thr−Arg−MCA 0.1 厩
を添加しさらに37°Cで30分間保持した後、10%
酢酸2In1を加えて反応を停止し、蛍光強度を励起波
長346nm、測定波長442nmで測定することによ
り遊離されるAMCIを求める。5PToyopear
l 650Cで処理したアメポサイト・ライセードはエ
ンドトキシン性凝固酵素前駆体活性化因子活性を示さな
い。
5P−Toyopearl 650Cで処理する前後の
SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動図を第5図に示
す。矢印で示したものがコアギュローゲンであり5P−
Toyopearl 650Cで処理したアメボサイト
・ライセートはコアギュローゲンを含んでいない。
SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動図を第5図に示
す。矢印で示したものがコアギュローゲンであり5P−
Toyopearl 650Cで処理したアメボサイト
・ライセートはコアギュローゲンを含んでいない。
(来夏以下余白)
第1表
〔発明の効果〕
本方法によりエンドトキシンに対しては反応せず、β−
グルカンに対する特異性の高いアメボサイト・ライセー
トを容易に得ることができる。
グルカンに対する特異性の高いアメボサイト・ライセー
トを容易に得ることができる。
また、本方法により取得されるアメポサイト・ライセー
ドの調製物は、エンドトキシンに対しては反応せず、β
−グルカンに対しては濃度依存的に高感度に反応するた
め、β−グルカン類に対する特異性の高い高感度な定量
用試薬として利用できる。さらに、β−グルカンは真菌
類の菌体成分であるので、β−グルカンの定量による真
菌症の診断薬としても利用できる。本調製物はβ−グル
カン性の抗癌剤(クレスチン、レンチナンなど)とも反
応するためこれらの抗癌剤の血中濃度の測定にも可能で
ある。
ドの調製物は、エンドトキシンに対しては反応せず、β
−グルカンに対しては濃度依存的に高感度に反応するた
め、β−グルカン類に対する特異性の高い高感度な定量
用試薬として利用できる。さらに、β−グルカンは真菌
類の菌体成分であるので、β−グルカンの定量による真
菌症の診断薬としても利用できる。本調製物はβ−グル
カン性の抗癌剤(クレスチン、レンチナンなど)とも反
応するためこれらの抗癌剤の血中濃度の測定にも可能で
ある。
【図面の簡単な説明】
第1図は、標準物質としてカルボキシメチル化カードラ
ンを用いて作成した検量線、第2図は、実施例において
得られたβ−グルカンに対する特異性の高い分画が、エ
ンドトキシンに対して反応しないことを示す図、第3図
及び第4図は5pToyopearl未処理の場合の測
定結果を示す図、第5図はアメボサイト・ライセートの
5DS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動図を示す。
ンを用いて作成した検量線、第2図は、実施例において
得られたβ−グルカンに対する特異性の高い分画が、エ
ンドトキシンに対して反応しないことを示す図、第3図
及び第4図は5pToyopearl未処理の場合の測
定結果を示す図、第5図はアメボサイト・ライセートの
5DS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動図を示す。
Claims (2)
- (1)カブトガニから得られるアメボサイト・ライセー
トを、スルホプロピル基を吸着担体とするイオン交換液
体クロマトグラフィーに付し、エンドトキシン性凝固酵
素前駆体活性化因子を含む画分を除去することによりβ
−グルカン類に対する特異性の高いアメボサイト・ライ
セートを得ることを特徴とするβ−グルカン類に対する
特異性の高いアメボサイト・ライセートの製造方法。 - (2)請求項1記載の製造方法により得られる、β−グ
ルカン類に対する特異性の高いアメボサイト・ライセー
ト。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP63292494A JP2564632B2 (ja) | 1988-11-21 | 1988-11-21 | β−グルカン類に対する特異性の高いアメボサイト・ライセート及びその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP63292494A JP2564632B2 (ja) | 1988-11-21 | 1988-11-21 | β−グルカン類に対する特異性の高いアメボサイト・ライセート及びその製造方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH02138193A true JPH02138193A (ja) | 1990-05-28 |
JP2564632B2 JP2564632B2 (ja) | 1996-12-18 |
Family
ID=17782547
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP63292494A Expired - Fee Related JP2564632B2 (ja) | 1988-11-21 | 1988-11-21 | β−グルカン類に対する特異性の高いアメボサイト・ライセート及びその製造方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP2564632B2 (ja) |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0476459A (ja) * | 1990-07-19 | 1992-03-11 | Taiyo Fishery Co Ltd | β―グルカン類に対する特異性の高いアメボサイト・ライセート及びその製造方法 |
EP0491047A1 (en) * | 1990-06-21 | 1992-06-24 | Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha (Seikagaku Corporation) | Method for determining (1- 3)-beta-d-glucan |
EP0598903A1 (en) * | 1991-03-14 | 1994-06-01 | Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | (1$m(8)3)-$g(b)-D-GLUCAN ASSAYING AGENT |
WO1996006858A1 (fr) * | 1994-09-01 | 1996-03-07 | Seikagaku Corporation | PROTEINE FIXANT LE (1→3)-β-D-GLUCANE, ANTICORPS RECONNAISSANT LA PROTEINE ET UTILISATION DE LA PROTEINE ET DE L'ANTICORPS |
US5571683A (en) * | 1991-12-25 | 1996-11-05 | Maruha Corporation | β-glucans detection reagents and methods of detecting β-glucans |
US5681710A (en) * | 1991-03-14 | 1997-10-28 | Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Reagent for determining (1→3)-β-D-glucan |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP7358509B2 (ja) | 2019-12-11 | 2023-10-10 | 富士フイルム株式会社 | カブトガニ由来組換えFactorG及びこれを用いたβ-グルカンの測定方法 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS6245530A (ja) * | 1985-08-23 | 1987-02-27 | Otsuka Pharmaceut Co Ltd | 肝実質細胞増殖因子 |
-
1988
- 1988-11-21 JP JP63292494A patent/JP2564632B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS6245530A (ja) * | 1985-08-23 | 1987-02-27 | Otsuka Pharmaceut Co Ltd | 肝実質細胞増殖因子 |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0491047A1 (en) * | 1990-06-21 | 1992-06-24 | Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha (Seikagaku Corporation) | Method for determining (1- 3)-beta-d-glucan |
JPH0476459A (ja) * | 1990-07-19 | 1992-03-11 | Taiyo Fishery Co Ltd | β―グルカン類に対する特異性の高いアメボサイト・ライセート及びその製造方法 |
EP0598903A1 (en) * | 1991-03-14 | 1994-06-01 | Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | (1$m(8)3)-$g(b)-D-GLUCAN ASSAYING AGENT |
US5681710A (en) * | 1991-03-14 | 1997-10-28 | Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Reagent for determining (1→3)-β-D-glucan |
US5571683A (en) * | 1991-12-25 | 1996-11-05 | Maruha Corporation | β-glucans detection reagents and methods of detecting β-glucans |
WO1996006858A1 (fr) * | 1994-09-01 | 1996-03-07 | Seikagaku Corporation | PROTEINE FIXANT LE (1→3)-β-D-GLUCANE, ANTICORPS RECONNAISSANT LA PROTEINE ET UTILISATION DE LA PROTEINE ET DE L'ANTICORPS |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2564632B2 (ja) | 1996-12-18 |
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