JPH03187378A - 酵素前駆体ファクターcの調整方法及びその調整試薬 - Google Patents
酵素前駆体ファクターcの調整方法及びその調整試薬Info
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- JPH03187378A JPH03187378A JP32489689A JP32489689A JPH03187378A JP H03187378 A JPH03187378 A JP H03187378A JP 32489689 A JP32489689 A JP 32489689A JP 32489689 A JP32489689 A JP 32489689A JP H03187378 A JPH03187378 A JP H03187378A
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Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、カブトガニから得られるアメボサイト・ライ
セートを利用した測定に係わり、特に、エンドトキシン
をトリガーとする酵素前駆体ファクターCの誘導体の調
製法及びファクターCの誘導体によるエンドトキシンの
定量法に関する。
セートを利用した測定に係わり、特に、エンドトキシン
をトリガーとする酵素前駆体ファクターCの誘導体の調
製法及びファクターCの誘導体によるエンドトキシンの
定量法に関する。
カブトガニ(Limulus 赳り吐弘址+ 4tri
dentatus+ i、 幻1特+ Carcino
scor ios rotu−ndicarda)の血
リンパ液より取得されるアメボサイト・ライセートのダ
ラム陰性菌表層物質「エンドトキシン」 (リポポリサ
ッカライド)による凝固現象は、「リムルステスト」の
−船名でエンドトキシン特異的検出法として医学、薬学
の領域で広く利用されている。アメボサイト・ライセー
トの凝固を起こす物質としてはエンドトキシン以外にト
リプシン様プロテアーゼ(トリプシン、トロンビン等)
及びβ−グルカン類(β−結合を有するグルコースポリ
マー及びその誘導体)が知られている。
dentatus+ i、 幻1特+ Carcino
scor ios rotu−ndicarda)の血
リンパ液より取得されるアメボサイト・ライセートのダ
ラム陰性菌表層物質「エンドトキシン」 (リポポリサ
ッカライド)による凝固現象は、「リムルステスト」の
−船名でエンドトキシン特異的検出法として医学、薬学
の領域で広く利用されている。アメボサイト・ライセー
トの凝固を起こす物質としてはエンドトキシン以外にト
リプシン様プロテアーゼ(トリプシン、トロンビン等)
及びβ−グルカン類(β−結合を有するグルコースポリ
マー及びその誘導体)が知られている。
アメボサイト、ライセードのエンドトキシンによる凝固
現象はエンドトキシン性凝固酵素前駆体活性化因子によ
る凝固酵素前駆体の活性化と、活性型凝固酵素の働きに
よるコアギュローゲンの繊維状コアギュリンへの転換に
より起こることが明らかにされている。一方アメボサイ
ト・ライセートのβ−グルカンによる凝固現象がβ−グ
ルカン性凝固酵素前駆体活性化因子による凝固酵素前駆
体の活性化と、活性型凝固酵素の働きによるコアギュロ
ーゲンの繊維状コアギュリンへの転換により起こり、ア
メボサイト・ライセートに含まれるエンドトキシン性凝
固酵素前駆体活性化因子とβ−グルカン性凝固酵素前駆
体活性化因子が異なるものであることがMoritaら
により報告された(FEBS Letters、129
.2,318−321)。
現象はエンドトキシン性凝固酵素前駆体活性化因子によ
る凝固酵素前駆体の活性化と、活性型凝固酵素の働きに
よるコアギュローゲンの繊維状コアギュリンへの転換に
より起こることが明らかにされている。一方アメボサイ
ト・ライセートのβ−グルカンによる凝固現象がβ−グ
ルカン性凝固酵素前駆体活性化因子による凝固酵素前駆
体の活性化と、活性型凝固酵素の働きによるコアギュロ
ーゲンの繊維状コアギュリンへの転換により起こり、ア
メボサイト・ライセートに含まれるエンドトキシン性凝
固酵素前駆体活性化因子とβ−グルカン性凝固酵素前駆
体活性化因子が異なるものであることがMoritaら
により報告された(FEBS Letters、129
.2,318−321)。
硫酸化多糖類を担体とする液体クロマトグラフィーを用
いたβ−グルカン性凝固酵素前駆体活性化因子の除去を
特徴とするエンドトキシンに対する特異性の高いアメボ
サイト・ライセートの調製法が春永らにより開示されて
いる。(特開昭59−27829号) そこで、硫酸化多糖類!類を吸着担体とする液体クロマ
トグラフィー用充填剤を使用することで、アメボサイト
・ライセート中のエンドトキシンをトリガーとする酵素
前駆体を分画することが常法とされてきた。しかし、硫
酸化多糖類を吸着担体とするアフィニティークロマトグ
ラフィーのみでは高純度ファクターCを精製することは
できなかった。
いたβ−グルカン性凝固酵素前駆体活性化因子の除去を
特徴とするエンドトキシンに対する特異性の高いアメボ
サイト・ライセートの調製法が春永らにより開示されて
いる。(特開昭59−27829号) そこで、硫酸化多糖類!類を吸着担体とする液体クロマ
トグラフィー用充填剤を使用することで、アメボサイト
・ライセート中のエンドトキシンをトリガーとする酵素
前駆体を分画することが常法とされてきた。しかし、硫
酸化多糖類を吸着担体とするアフィニティークロマトグ
ラフィーのみでは高純度ファクターCを精製することは
できなかった。
アメボサイト・ライセート中にはβ−グルカンをトリガ
ーとするカスケード系とエンドトキシンをトリガーとす
るカスケード系の二系列の凝固系があり、従来、市販さ
れているリムラス試薬の中にはβ−グルカンをトリガー
とするカスケード系を除去したものもあるが、血液中の
エンドトキシンを定量する際にライセード中の酵素が血
液中のプロテアーゼによって水解し、非エンドトキシン
性の反応をすることもあるので正確な測定値が得られな
いことがあった。
ーとするカスケード系とエンドトキシンをトリガーとす
るカスケード系の二系列の凝固系があり、従来、市販さ
れているリムラス試薬の中にはβ−グルカンをトリガー
とするカスケード系を除去したものもあるが、血液中の
エンドトキシンを定量する際にライセード中の酵素が血
液中のプロテアーゼによって水解し、非エンドトキシン
性の反応をすることもあるので正確な測定値が得られな
いことがあった。
カブトガニの血リンパ液より取得されるアメボサイトの
抽出液(アメボサイト・ライセート)中のエンドトキシ
ンをトリガーとするファクターCを簡便な方法で単離精
製し、このファクターCを用いてエンドトキシンを定量
することにすなわち、これらカスケード系の酵素を除去
したファクターCを用いることでエンドトキシンに対し
て特異性の高い臨床試薬を提供することはすでに提案し
た。
抽出液(アメボサイト・ライセート)中のエンドトキシ
ンをトリガーとするファクターCを簡便な方法で単離精
製し、このファクターCを用いてエンドトキシンを定量
することにすなわち、これらカスケード系の酵素を除去
したファクターCを用いることでエンドトキシンに対し
て特異性の高い臨床試薬を提供することはすでに提案し
た。
(特願平1−211462号)
しかしながら、従来のこれらの技術にあっては、有機溶
媒中に存在するエンドトキシンの定量は不可能であった
。
媒中に存在するエンドトキシンの定量は不可能であった
。
いままで測定が不可能であった有機溶媒中のエンドトキ
シンも定量することができ、デヒドロコール酸等の発熱
物質試験の必要とする油相性注射薬剤中のエンドトキシ
ンも定量可能とするものである。
シンも定量することができ、デヒドロコール酸等の発熱
物質試験の必要とする油相性注射薬剤中のエンドトキシ
ンも定量可能とするものである。
本発明者らは、カブトガニ(Limulus 匹り地四
u+田映狸旦並tridentatus+工、 ワtシ
、 Carcinos仔」状態ro tund 1ca
rda)からアメボサイト・ライセートを調製し、スル
ホプロピル基を吸着担体とするイオン交換クロマトグラ
フィーにアメボサイト・ライセートを付することにより
、アメボサイト・ライセート中のエンドトキシン性凝固
酵素前駆体活性化因子群より、ファクターCをより簡便
にかつ高純度に採取できるという新規事実を見出したこ
と(特願平1−211462号参照)を基礎にし、さら
に発展させることにより本発明に到達したのである。す
なわち本発明はファクターCをポリエチレングリコール
で修飾することによって有機溶媒中に存在するエンドト
キシンの定量測定を可能にした。
u+田映狸旦並tridentatus+工、 ワtシ
、 Carcinos仔」状態ro tund 1ca
rda)からアメボサイト・ライセートを調製し、スル
ホプロピル基を吸着担体とするイオン交換クロマトグラ
フィーにアメボサイト・ライセートを付することにより
、アメボサイト・ライセート中のエンドトキシン性凝固
酵素前駆体活性化因子群より、ファクターCをより簡便
にかつ高純度に採取できるという新規事実を見出したこ
と(特願平1−211462号参照)を基礎にし、さら
に発展させることにより本発明に到達したのである。す
なわち本発明はファクターCをポリエチレングリコール
で修飾することによって有機溶媒中に存在するエンドト
キシンの定量測定を可能にした。
本発明は次の(1)エンドトキシン測定用のポリエチレ
ングリコール−ファクターCを調製する方法、(2)ポ
リエチレングリコール−ファクターCを有効成分として
含むエンドトキシンの測定試薬及び(3)ポリエチレン
グリコール−ファクターCを利用したエンドトキシンの
測定法に関する。
ングリコール−ファクターCを調製する方法、(2)ポ
リエチレングリコール−ファクターCを有効成分として
含むエンドトキシンの測定試薬及び(3)ポリエチレン
グリコール−ファクターCを利用したエンドトキシンの
測定法に関する。
そして本発明は次の構成を有するものである。
1、カブトガニのアメボサイト・ライセート又はそれを
含む液体をスルホプロピル基を吸着担体とする液体クロ
マトグラフィーに付し、エンドトキシンをトリガーとす
る凝固酵素前駆体ファクターCを高純度に含む画分を調
製し、高純度ファクターCを活性化ポリエチレングリコ
ールと反応せしめてエンドトキシン測定用ポリエチレン
グリコール−ファクターCを調製する方法。
含む液体をスルホプロピル基を吸着担体とする液体クロ
マトグラフィーに付し、エンドトキシンをトリガーとす
る凝固酵素前駆体ファクターCを高純度に含む画分を調
製し、高純度ファクターCを活性化ポリエチレングリコ
ールと反応せしめてエンドトキシン測定用ポリエチレン
グリコール−ファクターCを調製する方法。
2、上記1項で調製したポリエチレングリコールファク
ターC及び次の゛−一般式 :式% (式中、R+はN末端に結合した保護基、Xはp−ニト
ロアニリンまたは4−メチルクマリンを表わす。)とか
らなることを特徴とするエンドトキシンの測定試薬。
ターC及び次の゛−一般式 :式% (式中、R+はN末端に結合した保護基、Xはp−ニト
ロアニリンまたは4−メチルクマリンを表わす。)とか
らなることを特徴とするエンドトキシンの測定試薬。
3、上記1項で調製したポリエチレングリコール−ファ
クターC及び次の一般式: %式% (式中、R,は、N末端に結合した保護基を表す。
クターC及び次の一般式: %式% (式中、R,は、N末端に結合した保護基を表す。
Xはp−ニトロアニリンまたは4−メチルクマリンを表
わす。)とエンドトキシンを反応せしめ、遊離したXの
量を光学的に測定することを特徴とするエンドトキシン
の測定法。
わす。)とエンドトキシンを反応せしめ、遊離したXの
量を光学的に測定することを特徴とするエンドトキシン
の測定法。
そして、上記R,−Val−Pro−^rg−xに含ま
れる化合物としては、 Boc−Val−Pro−Arg−MCA、 Boc−
Val−Pro−Arg−pNA+Bz−Val−Pr
o−^rg−MCA、Bz−Val−Pro−^rg−
pNA。
れる化合物としては、 Boc−Val−Pro−Arg−MCA、 Boc−
Val−Pro−Arg−pNA+Bz−Val−Pr
o−^rg−MCA、Bz−Val−Pro−^rg−
pNA。
(式中、Bocはt−ブチルオキシカーボニル基、ρN
Aはp−ニトロアニリン、NCAは次式の113 4−メチルクマリル−7−ア藁ドを示す)等が挙げられ
る。
Aはp−ニトロアニリン、NCAは次式の113 4−メチルクマリル−7−ア藁ドを示す)等が挙げられ
る。
ポリエチレングリコール−ファクターCの製法は次の通
りである。
りである。
イオン強度0.05以下の塩溶液、好ましくはNaCl
を含むトリス−塩酸緩衝液でカブトガニのアメボサイト
を抽出して得られるアメボサイト・ライセートを、同じ
くイオン強度0.05以下の塩溶液、好ましくはNaC
1を含むトリス−塩酸緩衝液で平衡化したスルホプロピ
ル基を吸着担体とするイオン交換クロマトグラフィーに
付すことによりアメボサイト・ライセート中に含まれる
エンドトキシン性凝固酵素前駆体活性化因子をイオン交
換吸着体を吸着させる。次いでイオン強度0.20以下
の塩溶液、好ましくはNaClを含むトリス−塩酸緩衝
液でコアギュローゲン(Coagulogen)画分を
溶出後、イオン強度0.20を越え、2.0以下の塩溶
液、好ましくは500mM NaC1を含むトリス−塩
酸緩衝液で溶出することにより高純度ファクターCを採
取することができる。このファクターCを活性化ポリエ
チレングリコール(PEGz)と反応させることにより
ポリエチレングリコール−ファクターCを調製する。
を含むトリス−塩酸緩衝液でカブトガニのアメボサイト
を抽出して得られるアメボサイト・ライセートを、同じ
くイオン強度0.05以下の塩溶液、好ましくはNaC
1を含むトリス−塩酸緩衝液で平衡化したスルホプロピ
ル基を吸着担体とするイオン交換クロマトグラフィーに
付すことによりアメボサイト・ライセート中に含まれる
エンドトキシン性凝固酵素前駆体活性化因子をイオン交
換吸着体を吸着させる。次いでイオン強度0.20以下
の塩溶液、好ましくはNaClを含むトリス−塩酸緩衝
液でコアギュローゲン(Coagulogen)画分を
溶出後、イオン強度0.20を越え、2.0以下の塩溶
液、好ましくは500mM NaC1を含むトリス−塩
酸緩衝液で溶出することにより高純度ファクターCを採
取することができる。このファクターCを活性化ポリエ
チレングリコール(PEGz)と反応させることにより
ポリエチレングリコール−ファクターCを調製する。
(1)ファクターCの活性すなわちエンドトキシン感受
性因子の活性測定法。
性因子の活性測定法。
ファクターCはアメボサイト・ライセート又はそれを含
む液体をスルホプロピル基を吸着担体とする液体クロマ
トグラフィーにて処理し、溶離液の各両分がファクター
C活性を有するか否かを測定してファクターCを含有す
る両分を特定する。
む液体をスルホプロピル基を吸着担体とする液体クロマ
トグラフィーにて処理し、溶離液の各両分がファクター
C活性を有するか否かを測定してファクターCを含有す
る両分を特定する。
その際の活性測定法を示す。溶離の状態は第1図に示す
。
。
クロマトグラフィーの各画分のエンドトキシン感受性因
子(ファクターC)の活性の測定は次の方法により行っ
た。この方法により、各両分のファクターCが含有され
ている割合を測定した。
子(ファクターC)の活性の測定は次の方法により行っ
た。この方法により、各両分のファクターCが含有され
ている割合を測定した。
各画分100μ11エンドトキシン(リボポリサツカラ
イド、 L P S)(100ng/d)10(bz
lと20mMのMgC1,を含む320mM Tri
s−CI(pH8,0) bufferlo。
イド、 L P S)(100ng/d)10(bz
lと20mMのMgC1,を含む320mM Tri
s−CI(pH8,0) bufferlo。
μ之並びに基質Boc−Val−Pro−Arg−MC
Aを1mM濃度で注射用蒸留水に溶解したもの100μ
lを混合し37°Cで15分間保持した後、10%酢酸
2 rdを加えて反応を停止し、蛍光強度を励起波長3
46nm、測定波長442nmで測定することにより遊
離される静C(4−メチルアミックマリン)量を測定し
た。
Aを1mM濃度で注射用蒸留水に溶解したもの100μ
lを混合し37°Cで15分間保持した後、10%酢酸
2 rdを加えて反応を停止し、蛍光強度を励起波長3
46nm、測定波長442nmで測定することにより遊
離される静C(4−メチルアミックマリン)量を測定し
た。
(2)活性化ポリエチレングリコールの調製法15gの
モノメトキシポリエチレングリコール(平均分子i5,
000)と5gのモレキュラーシープ3A(1/16)
を含むベンゼン(100ml)に、炭酸ナトリウム(5
g)と塩化シアヌル(0,28g、二回再結晶)を加え
、80゛Cで120時間還流する。反応液を冷却濾過し
、石油エーテル(200mJりを加えて、活性化ポリエ
チレングリコール(PGEz)を沈澱させる。アセトン
に溶解後、石油エーテルで沈澱させる精製操作を3回繰
り返す。さらにゲル濾過により精製し、活性化PGE、
を得る。
モノメトキシポリエチレングリコール(平均分子i5,
000)と5gのモレキュラーシープ3A(1/16)
を含むベンゼン(100ml)に、炭酸ナトリウム(5
g)と塩化シアヌル(0,28g、二回再結晶)を加え
、80゛Cで120時間還流する。反応液を冷却濾過し
、石油エーテル(200mJりを加えて、活性化ポリエ
チレングリコール(PGEz)を沈澱させる。アセトン
に溶解後、石油エーテルで沈澱させる精製操作を3回繰
り返す。さらにゲル濾過により精製し、活性化PGE、
を得る。
本発明における活性化ポリエチレングリコールとは、タ
ンパク質表面に効率よくポリエチレングリコール鎖を導
入するために塩化シアヌルに1つ又は2つのモノメトキ
シポリエチレングリコール鎖を結合したものであって、
具体的なものとしては下記の式を有するものが挙げられ
る。
ンパク質表面に効率よくポリエチレングリコール鎖を導
入するために塩化シアヌルに1つ又は2つのモノメトキ
シポリエチレングリコール鎖を結合したものであって、
具体的なものとしては下記の式を有するものが挙げられ
る。
(3) ポリエチレングリコール−ファクターCの1
周製法 カブトガニ血球Logを20mM Tris−CI(p
H8,0)bufferで抽出したアポサイト・ライセ
ード60dを上記緩衝液で平衡化した5P−Toyop
earl 650 C(10X30cm)にかけ、上記
緩衝液500dで洗浄することにより、素通り画分とし
て非エンドトキシン性凝固酵素前駆体活性化因子を得た
。(特開昭63−292494)さらに0.2M Na
Clを含む20+nM Tris−CI(pH8,0)
buffer 500mで溶出後、0.5M NaC1
を含む20mMTris−CI(pH8,0) buf
fer 500dで溶出した画分に目的とするファクタ
ーCを得た。(第1図参照)このファクターC画分80
戚を5ephadex G−15にまり脱塩し、凍結乾
燥後40mM四ホウ酸緩衝液(pH10,0)buff
er lOm!で溶解したものに1.4gの活性化ポリ
エチレングリコールを加えて、37°Cで1時間反応さ
せる。反応溶液を限外濾過して、ポリエチレングリコー
ルを除いた後、凍結乾燥してポリエチレングリコール−
ファクターCを得た。
周製法 カブトガニ血球Logを20mM Tris−CI(p
H8,0)bufferで抽出したアポサイト・ライセ
ード60dを上記緩衝液で平衡化した5P−Toyop
earl 650 C(10X30cm)にかけ、上記
緩衝液500dで洗浄することにより、素通り画分とし
て非エンドトキシン性凝固酵素前駆体活性化因子を得た
。(特開昭63−292494)さらに0.2M Na
Clを含む20+nM Tris−CI(pH8,0)
buffer 500mで溶出後、0.5M NaC1
を含む20mMTris−CI(pH8,0) buf
fer 500dで溶出した画分に目的とするファクタ
ーCを得た。(第1図参照)このファクターC画分80
戚を5ephadex G−15にまり脱塩し、凍結乾
燥後40mM四ホウ酸緩衝液(pH10,0)buff
er lOm!で溶解したものに1.4gの活性化ポリ
エチレングリコールを加えて、37°Cで1時間反応さ
せる。反応溶液を限外濾過して、ポリエチレングリコー
ルを除いた後、凍結乾燥してポリエチレングリコール−
ファクターCを得た。
(4)エンドトキシンの定量
(a) (3)で調製した凍結乾燥ポリエチレン−フ
ァクターCに注射用蒸留水5 mlを加え熔解する。フ
ァクターCl0(bzf、10pg/−から10’pg
/dの濃度のエンドトキシン(日本薬局方標準品)1m
MのBoc−Van−Pro−Arg−MCA 100
.!/ 1を混合し37℃、60分間保温する。 さら
に11.1%酢酸2成を加え反応を停止する。(第2図
Δで示す) (b) (3)で精製した凍結乾燥ポリエチレン−フ
ァクターCにエタノール5 mlを加え溶解する。ファ
クターCI00μl、10pg/dから10’pg/d
の濃度のエンドトキシン(エタノールに溶解した日本薬
局方標準品)及びエタノールに溶解した1mMBocV
al−Pro−Arg−MCA 100μlを混合し3
7°C160分間保温する。さらに15%酢酸2戚を加
え反応を停止する。(第2図○で示す) 反応を停止した後、反応液の蛍光強度を励起波長346
r+m 、測定波長442nmで測定することにより遊
離されるAMC(4−メチルアごツクマリン)量を測定
した。
ァクターCに注射用蒸留水5 mlを加え熔解する。フ
ァクターCl0(bzf、10pg/−から10’pg
/dの濃度のエンドトキシン(日本薬局方標準品)1m
MのBoc−Van−Pro−Arg−MCA 100
.!/ 1を混合し37℃、60分間保温する。 さら
に11.1%酢酸2成を加え反応を停止する。(第2図
Δで示す) (b) (3)で精製した凍結乾燥ポリエチレン−フ
ァクターCにエタノール5 mlを加え溶解する。ファ
クターCI00μl、10pg/dから10’pg/d
の濃度のエンドトキシン(エタノールに溶解した日本薬
局方標準品)及びエタノールに溶解した1mMBocV
al−Pro−Arg−MCA 100μlを混合し3
7°C160分間保温する。さらに15%酢酸2戚を加
え反応を停止する。(第2図○で示す) 反応を停止した後、反応液の蛍光強度を励起波長346
r+m 、測定波長442nmで測定することにより遊
離されるAMC(4−メチルアごツクマリン)量を測定
した。
上記の(a)及び(ロ)で示したように、本発明の測定
法又は測定試薬を使用したエンドトキシンの測定は、水
溶液中に含まれるエンドトキシン及び有機溶媒中に含ま
れるエンドトキシンの両方に適用できるものである。
法又は測定試薬を使用したエンドトキシンの測定は、水
溶液中に含まれるエンドトキシン及び有機溶媒中に含ま
れるエンドトキシンの両方に適用できるものである。
エンドトキシンに対する特異性の高い定量用試薬として
利用でき、さらに、エンドトキシンはダラム陰性菌の菌
体成分であるので、エンドトキシンの定量による敗血症
の診断薬としても利用できる。従来不可能とされていた
有機溶媒中のエンドトキシンの定量も可能となった。
利用でき、さらに、エンドトキシンはダラム陰性菌の菌
体成分であるので、エンドトキシンの定量による敗血症
の診断薬としても利用できる。従来不可能とされていた
有機溶媒中のエンドトキシンの定量も可能となった。
第1図はエンドトキシン感受性因子(ファクターC)の
クロマトグラフィーによる溶離を示す図である。 第2図はファクターC及びポリエチレンゲルコール−フ
ァクターCのエンドトキシンに対する定量性を示した図
である。図中、○はポリエチレングリコール−ファクタ
ーCを示し、ΔはファクターCを示す。
クロマトグラフィーによる溶離を示す図である。 第2図はファクターC及びポリエチレンゲルコール−フ
ァクターCのエンドトキシンに対する定量性を示した図
である。図中、○はポリエチレングリコール−ファクタ
ーCを示し、ΔはファクターCを示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、カブトガニのアメボサイト・ライセート又はそれを
含む液体をスルホプロピル基を吸着担体とする液体クロ
マトグラフィーに付し、エンドトキシンをトリガーとす
る凝固酵素前駆体ファクターCを高純度に含む画分を調
製し、高純度ファクターCを活性化ポリエチレングリコ
ールと反応せしめてエンドトキシン測定用ポリエチレン
グリコール−ファクターCを調製する方法。 2、上記1項で調製したポリエチレングリコール−ファ
クターC及び次の一般式: R_1−Val−Pro−Arg−x (式中、R_1はN末端に結合した保護基、xはp−ニ
トロアニリンまたは4−メチルクマリンを表わす。)を
有する基質化合物とからなることを特徴とするエンドト
キシンの測定試薬。 3、上記1項で調製したポリエチレングリコール−ファ
クターC及び次の一般式: R_1−Val−Pro−Arg−x (式中、R_1はN末端に結合した保護基、xはp−ニ
トロアニリンまたは4−メチルクマリンを表わす。)を
有する基質化合物とエンドトキシンを反応せしめ、遊離
したxの量を光学的に測定することを特徴とするエンド
トキシンの測定法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP32489689A JPH03187378A (ja) | 1989-12-16 | 1989-12-16 | 酵素前駆体ファクターcの調整方法及びその調整試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP32489689A JPH03187378A (ja) | 1989-12-16 | 1989-12-16 | 酵素前駆体ファクターcの調整方法及びその調整試薬 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH03187378A true JPH03187378A (ja) | 1991-08-15 |
Family
ID=18170837
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP32489689A Pending JPH03187378A (ja) | 1989-12-16 | 1989-12-16 | 酵素前駆体ファクターcの調整方法及びその調整試薬 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH03187378A (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SG107124A1 (en) * | 1994-08-19 | 2004-11-29 | Univ Singapore | Expression of carcinoscorpius rotundicauda factor c in eukaryotes |
EP1409984A4 (en) * | 2001-06-28 | 2006-07-19 | Cambrex Bio Science Walkersvil | METHOD AND REAGENT FOR DETECTING ENDOTOXIN |
-
1989
- 1989-12-16 JP JP32489689A patent/JPH03187378A/ja active Pending
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SG107124A1 (en) * | 1994-08-19 | 2004-11-29 | Univ Singapore | Expression of carcinoscorpius rotundicauda factor c in eukaryotes |
EP1409984A4 (en) * | 2001-06-28 | 2006-07-19 | Cambrex Bio Science Walkersvil | METHOD AND REAGENT FOR DETECTING ENDOTOXIN |
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