JPH02131489A - シリル化剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規なモノシリル化剤及び共有結合した官能
基を有するシリカクロマトグラフィー担体の調製におけ
る該モノシリル化剤の使用法に係る。

共有結合した官能基を有するシリカ固定相（一般に「結
合固定相」と称される）は、液クロマトグラフィーにお
いて最も一般的に使用される充填剤である。

これら化合物は、性能が良いこと、及び結合できる官能
基について融通性があること（これにより各種の分離及
び精製処理に関して好適なものとなるため）により広く
利用されている。

この種の固定相の不活性担体としてシリカが使用される
が、これは該生成物の各種特性によるものである。すな
わち、充分に化学的に不活性であること、表面積が大き
いこと、粒径（３ないし２００μｊ＋）及び孔径（６０
ないし１０００人）の選択が広範囲で可能であること、
摩擦及び圧力に対する機械的安定性が大きいこと、多量
での入手が可能であることである。

結合相の調製で使用される試薬は、ケイ素原子の１以上
が適当な化学基での置換によって活性化される有機ケイ
素化合物である。活性化されるケイ素原子の数に応じて
、シリル化剤はモノー、ジ、又はトリーシリル化剤に区
分される。

モノシリル化剤は、一般式 （Ｒ．Ｒｔ．　Ｒ３）Ｓｉ　　Ｘ （式中、ＸＩ；！ＣＩ２　　，Ｂｒ　　．ＨＪ−．（Ｃ
Ｈｓ）Ｊ　　，ＣＦ３ＣＯＯ−｝ＩＱ−　，ＣＨ，Ｏ−
，ＣＨ３ＣＨ．Ｏ−の如き基であり、Ｒ．．　Ｒ．及び
Ｒ，は炭素原子１ないし２２個のアルキル残基、アリー
ル残基、アミノ、ヒドロキシ、シアノ及びカルボキシ基
の如き官能基を含有するアルキル残基である）で表され
るものである　［Ｌｏｒｋ　Ｋ．Ｄ．，Ｕｎｇｅｒ　Ｋ
．Ｋ．，　Ｋｉｎｋｅｌ　Ｊ．Ｎ．　ｒジャーナル・オ
ブ・クロマトグラフィ−（Ｊ．　Ｃｈｒｏｍ４）Ｊ　３
５２　（Ｉ９８６），１９９−２１１；　Ｓｚａｂｏ　
Ｋ．，　Ｌｅ　Ｈａ　Ｎ．．　Ｚｅｌｔｎｅｔ　Ｐ．，
Ｋｏｖａｔｓ　Ｅ．　ｒヘルペチカ・シミカ・アクタ（
Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．　Ａｃｔａ４）Ｊ　６７　（Ｉ９
８４）．　２１２８−４２］．ジー及びトリーシリル化
剤は次式で表される。

（Ｒ１，　　Ｒｔ）Ｓｉ　　（Ｘ）ｔ Ｒ，Ｓｉ　−　（Ｘ）− （式中、Ｘ，　Ｒ．及びＲ，は前記と同意義である。）
これらシリル化剤は、いずれもシリカの表面遊離シラノ
ールと反応してシロキサン結合を形成する。しかしなが
ら、反応の化学量論量は使用するモノー、ジー又はトリ
ーシリル化剤に応じて異なる。

モノシリル化剤の場合、反応は下記のとおりであり、得
られる固定相は単層である。

これに対し、ジー又はトリーシリル化剤の場合には、シ
リカ表面の１又は２のシラノールがシリル化剤と反応し
て、下記の種類の固定相を生成する。

ジシリル化剤 トリシリル化剤 反応体の加水分解によってシリカ上に形成されたＳｉ−
ＯＨ基は、順次他のシリル化剤と反応し、分枝状シロキ
サン鎖を生ずる。

しかしながら、ジー及びトリーシリル化剤の使用に関す
る重要な問題点は、微量の水の存在下において、これら
シリル化剤の溶液の重合化を生ずることがあり、これに
より、ポリシロキサン鎖を生じ、ついで遊１１ｓｉ−Ｘ
基を介してシリカに結合することにある。

得られる固定相は重要相と称される。

一般に、遊離基Ｘの数が等しい場合、ジー及びトリーシ
リル化剤はシリカのシラノールとより迅速に反応し、シ
リカ表面上に、従来のモノシリル化剤よりも密なコーテ
ィング層を生ずる。しかしながら、残念なことには、゛
コーティング層における均質性に欠けるため、得られる
固定層のクロマトグラフィー特性の再現性が乏しい。

これらの欠点は単層固定相の調製では見られないため、
現在では、クロマトグラフィー担体として該単層固定相
を使用すること、すなわちシリヵ表面上に許容されるコ
ーティングを生成しうる最高の反応性を有するモノシリ
ル化剤を使用することが主流となっている。

この目的に使用される化合物の中で、モノクロロトリア
ルキルシランは充分に反応性があり、安価かつ入手か容
易であるため、最も一般的に使用されている。

しかしながら、塩酸を発生するため、反応（Ｉ）の完了
までの進行が妨げられる。塩基の添加（生成する塩を中
和し、反応（Ｉ）の完了を可能にする）はいくつかの欠
点を有する。すなわち、過剰量の使用により、シリカを
損なう原因となったり、生成したシロキサン結合を加水
分解することを防止するため、塩基を徐々に添加しなけ
ればならないこと；さらに、その場での塩の生成により
、主に孔内において高い塩濃度を生じ、析出の危険があ
ることである。

反応（Ｉ）における弐〇Ｘで表される化合物の生成に伴
う問題点を解消するため、特殊な遊離基（Ｘ＝（ＣＨ３
）ｔＮ　　，Ｈ２Ｎ　　）の使用が提案されており、こ
れらに相当して生成する化合物ＨＸ（ジメチルアミン又
はアンモニア）は揮発性であり、不活性ガス流によって
反応雰囲気から除去される［Ｓｚａｂｏ　Ｋ．，Ｌｅ　
Ｈａ　Ｎ，，　Ｚｅｌｔｎｅｒ　Ｐ．，　Ｋｏｖａｔｓ
　Ｅ．　ｒＨｅｌｖ．　Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ．　Ｊ　６
７　（Ｉ９８４），　２１２８−４２コ。これら化合物
はシリカに対して高いシリル化活性を有するが、これら
の合成に伴われる重大な問題点のため、工業的な使用は
許容されない。

実際、これら化合物の合成では、液状ジメチルアミン又
は液体アンモニアを使用して、従って非常に低い温度で
操作する必要がある。該化合物は非常に反応性があり、
無水条件下に維持するため、特殊な処置を講ずる必要が
ある。最後に、アンモニア及びジメチルアミンはいずれ
も室温においてガス状の有毒物質である。

発明者らは、結合固定相の調製用モノシリル化剤と・し
て、新規なＮ．　Ｏ−ビスーシリルカルバメート（容易
に合成される化合物であり、従来使用されている相当の
クロロシランによって得られるものよりも高いコーティ
ング度を与える）を使用できることを見出し、本発明に
至った。

さらに詳述すれば、本発明の新規なＮ，　Ｏ−ビスシリ
ルカルバメートは、一般式（Ｉ） （Ｒ＋，　Ｒｔ，　Ｒｓ）Ｓｉ−ＮＨ−ＣＯ−０−Ｓｔ
（Ｒ１，　Ｒｔ，　Ｒ３）（式中、Ｒｌ及びＲ，は互い
に独立して炭素原子ｌないし２２個を含有する直鎖状又
は分枝状アルキル基であり、Ｒ３は炭素原子４ないし２
２個を含有する直鎖状又は分枝状アルキル基、アミノ、
ヒドロキシ、ハロゲン、シアノ及びカルボキシの中から
独立して選ばれる１以上の基で置換された炭素原子ｌな
いし２２個の直鎖状又は分枝状アルキル基、炭素原子６
ないし１２個の単環一又は多環シクロアルキル基、シク
ロアルキル−（Ｃ＋−４）アルキル基、又は任意に１以
上の（Ｃ＋−）アルキル基で置換されたフエニル又はナ
フチル基ゼある）で表される。

本発明の目的について一般式（Ｉ）で表される好適な化
合物は、該一般式（Ｉ）におけるＲ，が前記のものであ
り、Ｒ，及びＲ，が互いに独立して炭素原子！ないし４
個の直鎖状又は分枝状アルキル基である化合物である。

最も好適な化合物は、一般式（Ｉ）におけるＲ１及びＲ
，が互いに独立して炭素原子！ないし４個の直鎖状又は
分枝状アルキル基であり、Ｒ３が炭素原子４ないし２２
個の直鎖状又は分枝状アルキル基、又は上述の如く置換
された炭素原子１ないし２２個の直鎖状又は分枝状アル
キル基である化合物である。

上述の一般式（Ｉ）で表されるもの以外のいくつかのＮ
，　Ｏ−ビスーシリルカルバメート、特にＮ，　０−ビ
ス−（トリメチルシリル）カルバメート及びＮ，Ｏ−ビ
ス−（トリエチルシリル）カルバメートがアルコール、
フェノール及びカルボン酸用のシリル化剤として使用さ
れることが知られている［Ｂｉｒｋｏｆｅｒ　Ｌ．，　
Ｓｏｍｍｅｒ　Ｐ．　ｒジャーナル・オブ・オルガノメ
タリック・ケミストリ−（Ｊ．　Ｏｒｇａｎｏｍｅｔ．
Ｃｈｅｍ４）Ｊ　９９（Ｉ９７５）．　Ｃｌ−Ｃ４］。

本発明の化合物は、相当するハロシラン（代表的にはク
ロロシラン）及びカルバミン酸アンモニウムを原料とし
、次式（２）に従って容易に合成される。

２（Ｒ＋，Ｒｔ．Ｒｓ）ＳｉＸ　＋　ＨｔＮＣＯＯＮＨ
４＃（　１　）　＋　ＮＨｄＸ　＋ＨＸ（ＩＩ）　　　
　　　　（Ｉ［［） （ここで、Ｘはハロゲン原子、代表的には塩素である。

） 該反応は、カルバミン酸アンモニウム（Ｉ［Ｉ）を、反
応に必要な化学量論量に少なくとも相当する量のハロシ
ラン（ＩＩ）と接触させることによって行われる。一般
に、八ロシランをわずかに過剰量（５−２０モル％）で
使用することが好適であり、特に、反応を非無水条件下
で行う場合、大過剰量のハロシラン（ＩＩ）を使用する
ことが好ましい。

反応は、非極性又は極性の非プロトン性、不活性有機溶
媒［たとえば任意にハロゲン化した脂肪族又は芳香族炭
化水素（トルエン、キシレン、四塩化炭素、塩化メチレ
ン、ジクロルエタン等）、線状又は環状エーテル（ジイ
ソブ口ピルエーテル、テトラヒド口フラン）、及びジオ
キサン、ジメチルスルホキシド等］中、原料のカルバミ
ン酸アンモニウムのモル量と少なくとも等しいモル量の
非求核塩基（反応中に生成する塩酸の受容体として作用
する）の存在下で行われる。

該反応は約−ｌＯ℃から反応混合物の還流温度までの温
度で行われる。好適な具体例によれば、反応体を低温（
好ましくは−１０ないし＋１０℃）で接触させ、ついで
反応混合物を還流させて反応の進行をスピードアップさ
せる。反応終了後（一般に、完了には数時間を要する）
、生成した沈殿物を炉去する。

得られた溶液（一般式（Ｉ）の所望化合物を含有する）
を固定相の調製にそのまま使用でき、又は必要であれば
晶出又は非溶媒の添加による沈殿によって化合物（Ｉ）
を溶液から回収できる。

一般式（ＩＩ）の原料ハロシラン、特にクロロシラン［
（■）におけるＸ＝Ｃ（２］は市販品であり、又は公知
の方法に従って、又は公知の方法を特殊な基質に単に応
用することによって容易に調製される。

該一般的方法としては、たとえば、触媒としてヘキサク
口口白金酸を使用するビニル化合物のヒドロシリル化反
応 Ｒ！ Ｒｓ’−ＣＨ”ＣＨｔ　＋　Ｈ−Ｓｔ（Ｒ＋．Ｒｔ）Ｃ
１２−）Ｒｓ’−ＣＨ＊−ＣＨｔ−Ｓｉ−ＣＩ２Ｒｔ ［Ｊ．Ｌ．　Ｓｐｅｉｓｅｒら［ジャーナル・オブ・ジ
・アメリカン・ケミカル・ソサエティー　（Ｊ．Ａｍ．
Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ４）７８　（Ｉ９５６），　ｐ．２２
７８−９及びｒＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｊ　７９
（Ｉ９５７），　ｐ．９７４−５１、又は次式で示され
るクロロジアルキルシランと好適に選択されたグリニャ
−ル試薬との反応がある。

ＲＪｇＢｒ　＋　Ｃ（２（Ｒ＋．Ｒｔ）ＳｉＨ→（ＲＩ
．Ｒ１．Ｒ３）Ｓｉｌｌ　＋　ＭｇＢｒＣ１２本発明の
新規なシリル化剤を使用してシリカ固定相を調製するシ
リル化反応は次の反応式に従って進行する。

表面シラノールの数を最大（８μモル／Ｘりとするため
、公知の如く、まず原料シリカを１以上の鉱酸で加水分
解する。好適な酸は塩酸、硫酸、硝酸、及びこれらの混
合物である（米国特許第４．３２４，６８９号参照）。

しかし、希塩酸を使用してシリカの前処理を行うことが
好ましい。（Ｕｎｇｅｒ　Ｋ．Ｋ．ｒＪ．Ｃｈｒｏ＋ａ
．ＬｉｂｒａｒｙＪ　１６　（Ｉ９７９）．　ｐｐ．９
９　−　１０４）。

結合固定相の調製に関して好適に使用されるシリカ粒の
直径は問題ではなく、１５０μ１程度である（好適には
直径５ないし５０μ！である）。

加水分解処理は室温で簡単に行われ、ついでシリカを中
性となるまで水で洗浄し、含有された水を除去するため
、水と混和しない不活性有機溶媒（代表的には低級アル
カノール、たとえばメタノール、エタノール、ブタノー
ル）で洗浄し、最後に乾燥させる。

このようにして得られたシリカを、極性の非プロトン性
又は非極性の好ましくは高沸点を有する不活性有機溶媒
（たとえばトルエン、キシレン、ピコリン、ルチジン等
）中に懸濁化させる。

これらの溶媒について、微量の水によるシリル化剤（Ｉ
）の加水分解を防止するため、使用前に乾燥させること
が好ましい。

必要な当量数のカルバメート（Ｉ）（一般に、シリカの
表面積から算定した表面シラノールの総理論数の６０−
　１００％に相当）を懸濁液に添加する。ついで、懸濁
液を一般に還流温度（いずれにしても２００℃以下の温
度）に加熱し、数時間反応させる。

高温の場合には、短い反応時間で充分であることから、
必要な反応時間は温度によっても左右される。しかしな
がら、ＩＩＱ−　１２０℃で操作する場合、一般に１０
−１２時間で充分である。

ついで、このようにして得られた官能化シリカを炉取し
、極性の非プロトン性又は非極性、不活性有機溶媒で数
回洗浄して微量のシリル化剤（Ｉ）を除去し、任意に低
級アルカノール（代表的にはメタノール）で洗浄して不
純物を除去する。乾燥後、このようにして得られた単層
官能化シリカを、クロマトグラフィーカラム又は薄層ク
ロマトグラフィー担体の調製に使用できる。

得られた官能化シリカのＣ含量に関する元素分析では、
結合している炭素の量が、従来使用されている相当のク
ロロシランの如き他のシリル化剤を使用して得られるも
のよりも多いことが観察される。

一般式（Ｉ）で表される新規な化合物を使用することに
よって得られる利点は次のとおりである。

すなわち、相当するクロロ誘導体と比較して、同じ条件
下で調製した場合、コーティング度の大きい固定相を生
成すること；シリル化反応の間にＣＯ，及びＮＨ３が発
生するが、不活性ガス流によって反応環境から容易に除
去されること；相当するクロロ誘導体及びカルバミン酸
アンモニウムを原料として容易に合成されることである
。

以下の実施例において本発明をさらに説明するが、これ
らの実施例は本発明を限定するものではない。

実施例ｌ Ｎ，　Ｏ−ビス＝（ジメチルオクタデシルシリル）カル
バメート 無水の四塩化炭素（７　５ｊ＋Ｉ２）中にカルバミン酸
アンモニウム（３．９１ｇ、５０ミリモル）を溶解させ
た。得られた溶液を０℃に冷却し、ついでジメチルオク
タデシルク口ロシランＣ３６．４４９、１０５ミリモル
）の四塩化炭素（２０ｘ（Ｊ）溶液を添加し、つづいて
トリエチルアミン（７，７１１２、５５ミリモル）を添
加した。

温度を８０℃に上昇させ、混合物を４時間反応させた。

ついで、不活性雰囲気下で反応混合物を炉過し、炉液に
ヘキサンを添加して化合物を沈殿させた。

該混合物は、”ＳｉＮｌｌｌＲ分光法［１８，Ｏ９　ｐ
Ｐｆｌｌ　［（Ｒｌ．　Ｒ！．Ｒ４）Ｓｉ−０］及び３
．３５７　１）Ｉ）ｆｆｉ　［（Ｒｔ．　Ｒ＊，　Ｒ３
）Ｓｉ　　Ｎ］にＮ，Ｏ−ビス−（トリアルキルシリル
）カルバメートの特徴的な２つのピークを示すコ及び質
量分光測定［６８ｌにおける分子ピークが測定されない
場合であっても、他のピークが測定された：ｍ／　ｅ　
６６６（Ｍ＋−　１５）メチル基を失ったもの；ｍ／　
ｅ　４２８（Ｍ＋−　２５３）ＣＨａ（ＣＨｚ）＋ｔ基
を失ったもの；ＩＩｌ／ｅ　３５６　ＮＨ．−ＣＯＯ−
Ｓｉ（ＣＨ３（Ｃｕｅ）　ＩｔｃＨ＊）フラグメントに
相当］の両分析法によって標記化合物と同定された。

回収された生成物（３０．６９、収率９０％）を無水ト
ルエン（Ｉ００３１（！，カルバメート中４５ｍＭ）に
溶解させ、不活性雰囲気に維持した。

実施例２ 結合固定相の調製 Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ（登録商標）Ｓｔ−６０シリカゲ
ル（５，Ｏ９、１０μｍ，　６０人、不規則な形状を有
する、Ｍｅｒｃｋ）を２　Ｍ　ＨＣ１２（５０１１２）
に２時間懸濁させ、中性となるまで水で洗浄し、ついで
メタノールで洗浄し、最後に室温で１２時間、１２０℃
で１２時間乾燥させた。

このように処理したシリカの一部Ｃ４．５９、全シラノ
ール量１８ミリモル）を無水トルエン（７０ｉ（２）中
に懸濁化し、Ｎ，　０−ビス−（ジメチルオクタデシル
シリル）カルバメート（Ｉ５．１０ｘｅＳ１３．５ｍｅ
ｑ）を添加した。

反応混合物を減圧下に３０秒間維持し、１２時間還流さ
せた。

得られたシリカをトルエン及びメタノールで洗浄し、室
温で乾燥させた。

元素分析では、１５％の量の炭素（Ｉ．５μモル（脂肪
族残基）／ｔ”に相当）がシリカに結合していることを
示した。

固状Ｒ＠Ｓｉ及び１３ｃ交差偏光マジックアングルＮＭ
Ｒ分光法（ｓｏｌｉｄｅ　ｓｔａｔｅ　”Ｓｉ　ａｎｄ
　”Ｃ　ｃｒｏｓｓ　ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ　ｍａ
ｇｉｃ　ａｎｇｌｅ　ＮＭＲ　ｓｐｅｃｔｏｒｏｓｃｏ
ｐｙ）（ピーク及びこれらの解釈については後述する）
により、生成物が単層相であることを確認した［１３ａ
ｙｅｒ　Ｅ．，Ａｌｂｅｒｔ　Ｋ．，　Ｒｅｉｎｅｒｓ
　Ｊ．，　Ｎｉｅｄｅｒ　Ｍ．ｒＪ．　Ｃｈｒｏｍ．Ｊ
２６４　（Ｉ９８３）．　　１９７−２１３１。

”Ｓｉ　　（ｐｐｍ）　　：　　１２．９０　　（＝３
ｉ−ｏ−Ｒ）；−１０１．６８（＝Ｓｉ−ＯＨ）；　−
　１１０．９６（＝Ｓｉ−０　−Ｓｉ＝） １３Ｃ　　（ｐｐｍ）　　：　　−０．３７０（Ｉ’、
ｌ’）；１３，Ｏ１９（Ｉ８）；１８，００４（Ｉ）；
２３．１９０（２、１７）　，３０．２４２（４−　１
５）；３２．３７８（Ｉ６）；３３．９７４（３）１′ たカラムは２８０００プレート／Ｒを有する。

比較例 実施例２と実質的に同様に操作し、ただしＮ，　０ビス
ー（ジメチルオクタデシルシリル）カルバメート１３．
５ｍｅｑの代りにジメチルオクタデシルク口ロシラン１
９．８ミリモルを使用して反応を行ったとコロ、Ｃ含量
１２．１％（脂肪族残基１．２μモル／ｅに相当）を有
する結合固定相が得られた。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　一般式（ I ） （Ｒ＿１，Ｒ＿２，Ｒ＿３）Ｓｉ−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ−Ｓ
   ｉ（Ｒ＿１，Ｒ＿２，Ｒ＿３）（式中、Ｒ＿１及びＲ＿
   ２は互いに独立して炭素原子１ないし２２個を含有する
   直鎖状又は分枝状アルキル基であり、Ｒ＿３は炭素原子
   ４ないし２２個を含有する直鎖状又は分枝状アルキル基
   、アミノ、ヒドロキシ、ハロゲン、シアノ及びカルボキ
   シの中から独立して選ばれる１以上の基で置換された炭
   素原子１ないし２２個の直鎖状又は分枝状アルキル基、
   炭素原子６ないし１２個の単環−又は多環シクロアルキ
   ル基、シクロアルキル−（Ｃ＿１＿−＿４）アルキル基
   、又は任意に１以上の（Ｃ＿１＿−＿４）アルキル基で
   置換されたフェニル又はナフチル基である）で表される
   、化合物。 ２　請求項１記載のものにおいて、前記Ｒ＿１及びＲ＿
   ２が互いに独立して炭素原子１ないし４個の直鎖状又は
   分枝状アルキル基である、化合物。 ３　請求項２記載のものにおいて、Ｒ＿３が、炭素原子
   ４ないし２２個を含有する直鎖状又は分枝状アルキル基
   、アミノ、ヒドロキシ、ハロゲン、シアノ及びカルボキ
   シの中から独立して選ばれる１以上の基で置換された炭
   素原子１ないし２２個の直鎖状又は分枝状アルキル基で
   ある、化合物。 ４　Ｎ，Ｏ−ビス−（ジメチルオクタデシルシリル）カ
   ルバメートである請求項３記載の化合物。 ５　シリカクロマトグラフ担体用シリル化剤として使用
   する、請求項１−４のいずれか１項に記載の化合物の使
   用法。 ６　シリル化による結合シリカ固定相の製法において、
   請求項１−４のいずれか１項に記載の化合物をシリル化
   剤として使用することを特徴とする、結合シリカ固定相
   の製法。 ７　請求項６記載の製法において、前記シリル化剤と接
   触させる前に、シリカを強酸で加水分解する、結合シリ
   カ固定相の製法。 ８　請求項７記載の製法において、前記強酸が塩酸であ
   る、結合シリカ固定相の製法。 ９　請求項７記載の製法において、加水分解処理につづ
   いて、シリカを極性の非プロトン性又は非極性、不活性
   有機溶媒中に懸濁させ、シリカ表面のシラノール総理論
   数の６０ないし１００％の当量数の請求項１記載の化合
   物と反応させる、結合シリカ固定相の製法。 １０　請求項９記載の製法において、前記有機溶媒が高
   沸点溶媒である、結合シリカ固定相の製法。 １１　請求項１０記載の製法において、前記有機溶媒が
   トルエン、キシレン、ピコリン及びルチジンの中から選
   ばれるものである、結合シリカ固定相の製法。 １２　請求項６−１１のいずれか１項に記載の製法にお
   いて、前記シリカ粒が直径５ないし５０μｍを有するも
   のである、結合シリカ固定相の製法。 １３　請求項６−１２のいずれか１項に記載の方法によ
   って得られた結合シリカ固定相。