JPH0211234B2

JPH0211234B2 -

Info

Publication number: JPH0211234B2
Application number: JP10632986A
Authority: JP
Inventors: Hideaki Kobayashi
Original assignee: QP Corp
Current assignee: Kewpie Corp
Priority date: 1986-05-09
Filing date: 1986-05-09
Publication date: 1990-03-13
Also published as: JPS62262998A

Description

【発明の詳細な説明】

〔産業上の利用分野〕本発明は実質的に残存酵素活性を有さないリゾ
リン脂質含有物の製造法に関するものである。〔従来の技術〕リゾリン脂質はリン脂質から脂肪酸が一つ切断
されて水酸基により置換されたものなので、リン
脂質より親水性が高く、よつてこのものよりPHや
温度変化に対してより安定なエマルジヨンを形成
しうる天然の強力な界面活性剤である。このため
にリゾリン脂質は食品、化粧品、医薬品等の分野
においてリン脂質よりその応用範囲が広いとされ
ている。リゾリン脂質は従来天然のリン脂質含有物質か
ら製造されている。例えば、特開昭55−315号公
報が開示している「天然型リゾレシチンの新規な
製造法」を代表的な方法として挙げることができ
る。この従来法によれば、レシチン含有量の多い
動植物組織ホモジネートにパンクレアチンを作用
させ、反応後加熱処理して蛋白質を熱変性させた
のち過により分別した凝固蛋白質からそれに吸
着しているリゾレシチンを一連の有機溶媒抽出等
の手段により分離し、次いでこの有機溶媒抽出の
場合には抽出液から使用溶媒を留去して目的とす
る天然性リゾレシチンを得ている。〔発明が解決しようとする問題点〕しかしこうして得られたリゾレシチンにはパン
クレアチンの一構成酵素であるホスホリパーゼ
A₂の酵素活性が残存しているのが認められてい
る。ホスホリパーゼA₂は分子内に多数のジスル
フイド結合を含み、そのために加熱や有機溶媒等
に対して極めて高い安定性を示し、これらによつ
ては容易に失活しないことが知られている
（Biochim.Biophys.Acta.、第159巻、第113頁、
1968年参照）。それ故、ホスホリパーゼA₂の酵素
活性が残存しているリゾレシチンは、食品、化粧
品、医薬品等の製造に用いた際例えばその基質で
あるリン脂質が存在するなどするとPHが４以下の
場合を除いてこのリン脂質を加水分解して新たに
脂肪酸を生成してしまうなど、製品の安定性を低
下させてしまいその商品価値を著しく損ねるよう
になる。よつて、このようなリゾレシチンの使用
は制限されてしまう。ホスホリパーゼA₂の残存酵素活性を実質的に
有さないリゾリン脂質含有物を得るために、その
製造工程ににおいて各種の溶剤を用いた溶剤分
別、シリカゲル等を用いたカラム処理等を組合わ
せて実施することによりある程度の目的達成は期
待し得ても、その操作には時間や費用がかかりす
ぎ、しかも収率も低下するなど種々の問題点が認
められる。このような現状にあつて、本発明は、実質的に
残存酵素活性を有さないリゾリン脂質含有物を工
業的規模で容易にしかも高い収率で製造しうる方
法を提供することを目的とする。〔問題点を解決するための手段〕本発明者は上記の目的に即して鋭意研究を重ね
た結果、天然のリン脂質含有物質を酵素反応に付
した後、一旦その水分含量が10％以下になるまで
乾燥させるならば次いで極性溶媒を用いて溶媒抽
出したのち使用溶媒を除去するだけで容易に残存
酵素活性を実質的に有さないリゾリン脂質含有物
を従来より一段と高い収率で製造することができ
ることを見出し、本発明を完成するに至つた。本発明は、天然のリン脂質含有物質にホスホリ
パーゼA₂製剤あるいはホスホリパーゼA₂を含む
酵素製剤を作用させて上記含有物質中のリン脂質
を分解してリゾリン脂質にした後、この物質の水
分含量が10％以下になるまで乾燥させ、次いで極
性溶媒を用いてこの物質からリゾリン脂質を抽出
し、この抽出液から上記極性溶媒を留去すること
を特徴とする、実質的に残存酵素活性を有さない
リゾリン脂質含有物の製造法を提供するものであ
る。本発明の方法において使用する天然のリン脂質
含有物質は動物、植物、微生物など生体由来のリ
ン脂質を含む物質であつて、具体的には、リン脂
質が多く含まれている動植物組織あるいは微生物
菌体、例えば鶏卵黄、牛脳、豚脳、大豆、菜種、
クロレラ細胞、糸状菌菌体（クスダマカビ属菌菌
体など）；およびこれら動植物組織あるいは微生
物菌体から抽出した粗リン脂質抽出物、例えば市
販大豆リン脂質（通常リン脂質含量60％以上）、
市販卵黄リン脂質（通常リン脂質含量30％以上）、
等を挙げることができる。尚、使用に際して、例
えば動植物組織、微生物菌体などを用いるときは
酵素作用を効果的に行なわせるためにこれらは破
砕状物あるいは液状物にして用いるとよい。本発明の方法によれば、上記したような天然の
リン脂質含有物質にまず、ホスホリパーゼA₂製
剤あるいはホスホリパーゼA₂を含む酵素製剤を
作用させ該物質中のリン脂質を分解してリゾリン
脂質にする。ここにおいて、ホスホリパーゼA₂
製剤あるいはホスホリパーゼA₂を含む酵素製剤
としては、例えば動物の膵臓から抽出した酵素の
混合物、即ちパンクレアチン；パンクレアチンを
熱処理に付してプロテアーゼ、リパーゼを失活さ
せてホスホリパーゼA₂を富化させたもの（特開
昭59−第88040号公報参照）；動物膵臓由来の精製
ホスホリパーゼA₂製剤；蛇毒、ハチ毒由来のホ
スホリパーゼA₂製剤等を用いればよい。これら
の市販品が好ましく用いられる。これらの酵素製剤を用いた酵素反応は、常法に
従つて実施に際して適宜決定した条件下で行えば
よく、本発明において特に限定的でない。尚、リ
ゾリン脂質への変換率を高めるには酵素による分
解時間を長くすればよい。本発明の方法によれば、酵素反応によつて得ら
れた反応生成物は次いでその水分含量を10％以下
になるまで乾燥する。この水分含量を10％以下と
することは本発明の方法の臨界的な条件である。
後述の試験例１の結果から明らかなように水分含
量が10％を超えると次の溶媒抽出工程において使
用酵素の一部が抽出液中に移行され易くなり、よ
つてホスホリパーゼA₂の酵素活性が残存してい
る最終製品が得られるようになるからである。この際、乾燥手段は特に限定的でなく、従来の
いかなる乾燥手段も利用しうる。但し、乾燥の際
反応生成物に熱をかけ過ぎて加熱変性を生じさせ
ないようにこのものの温度が80℃以上にならない
ようにすべきである。噴霧乾燥、凍結乾燥等の手
段を採用すると上記生成物自体の温度は高々60℃
程度にしかならないのでこの中に存在する蛋白質
が全く、またはほとんど加熱変性を受けず、それ
故後述の試験例２の結果から明らかなように次の
溶媒抽出工程においてリゾリン脂質の抽出効率が
よく、延いては最終製品の収率を高めうる。尚、
水分含量が10％以下にまで乾燥された反応生成物
は通常粉末状になつている。本発明の方法によれば、上記のようにして得ら
れた粉末状物は次いで極性溶媒による溶媒抽出に
付し、この物質からリゾリン脂質を抽出する。こ
の際極性溶媒としては、特に限定的でないが、エ
タノール、メタノール、クロロホルム−メタノー
ル混合液、酢酸エチルなどが用いられ、特にエタ
ノールおよびメタノールが好ましく用いられる。
尚、ヘキサン、アセトン等の非極性溶媒ではリゾ
リン脂質に対する抽出力が小さく、よつて本発明
においては好ましくない。また、溶媒抽出は常法
に従つて実施すればよく特に限定的でない。本発明の方法によれば、こうして得られた抽出
液から用いた溶媒を、例えば減圧下で留去すれ
ば、実質的に残存酵素活性を有さないリゾリン脂
質含有物が得られる。この最終製品は、出発原料
中のリン脂質が一般的には10〜100％の変換率で
リゾリン脂質に換えられたもので、そのリゾリン
脂質としては、組成的に通常リゾホスフアチジル
コリン（LPC）、リゾホスフアチジルエタノール
アミン（LPE）、リゾホスフアチジン酸（LPA）、
リゾホスフアチジルイノシトール（LPI）、リゾ
ホスフアチジルセリン（LPS）等を含むものであ
る。よつて、この最終製品の全組成は、具体的に
は、例えば中性脂質68％、リン脂質32％（このう
ちリゾ型は30％）から成るようなものである。リ
ゾリン脂質の最終製品中で占める割合が10％未満
であるとこのものを食品、化粧品、医薬品等の分
野で用いた際リゾリン脂質の特性が生かされた製
品が得難くなる。また、この最終製品は実質的に
残存酵素活性を有さないものであるが、ここにお
いて「実質的に残存酵素活性を有さない」とは、
残存ホスホリパーゼA₂の酵素活性が最終製品１
ｇ当り0.1IU以下であることを意味する。但し、
1IU（１国際単位）は１分間に1μmolの脂肪酸を
基質から遊離する酵素活性の量を示す。残存酵素
活性が0.1IU／ｇを超すと、このものを原料とし
て他の製品に配合したとき保存中に酵素反応が進
んで遊離脂肪酸が生成するなどしてその製品の変
質を招いてしまう。本発明の方法によつて得られたリゾリン脂質含
有物は上記したように実質的に残存酵素活性を有
さないものであるので、従来のリン脂質は無論、
従来のリゾリン脂質含有物に比べて、例えば界面
活性剤として使用した場合高温でも、また広いPH
域でも安定なエマルジヨンを形成し得るばかり
か、食品、化粧品、医薬品等の製造に用いた際こ
れら製品の保存安定性を向上させることができ、
よつてこれら分野において従来のリン脂質または
リゾリン脂質含有物では原料となり得ないとされ
ていた製品の開発も期待できるものである。〔作用〕従来のリゾリン脂質含有物の製造法、典型的に
は前述した特開昭55−315号公報で開示せる方法、
に比し、本発明の方法において天然のリン脂質含
有物質を酵素反応に付した後リゾリン脂質を溶媒
抽出するに先立ち、従来行なわれていたように酵
素反応生成物を加熱処理後過するに代えてこの
酵素反応生成物を水分含量が10％以下になるまで
乾燥させることにより何故上記したように実質的
に残存酵素活性を有さないリゾリン脂質含有物が
得られるのかその理由は定かでないが、多分、従
来の方法におけるように過しただけの凝固蛋白
質中には後述の試験例の結果より明らかなように
通常約28％程度もの水分がまだ保存されているた
めか、次いで溶媒抽出に付した際加熱処理しても
失活してない使用酵素の一部が水の存在により形
成されているリゾリン脂質のミセル中に取り込ま
れ、そのまま抽出液中に移行してしまうのに対
し、本発明の方法によれば、酵素反応生成物は全
くあるいはほとんど熱変性を受けずにその水分含
量が10％以下にされているために抽出に際して使
用酵素が抽出液に移行し難く、よつて実質的に残
存酵素活性を有さないリゾリン脂質含有物が高収
率で得られるのではないかと推定される。〔発明の効果〕本発明の効果を以下の試験例１および２の結果
でもつて説明する。尚、本発明において％はすべ
て重量％である。試験例１この試験例は、本発明の方法において酵素反応
生成物の水分含量を10％以下とすることにより得
られる最終製品が如何に残存酵素活性を実質的に
有さないものであるかを示す。鶏卵黄100Kgにパンクレアチン（和光純薬製）
５Kgを清水10に溶解した液を加え、1N水酸化
ナトリウム水溶液でPHを7.0〜8.0に保ちつつ撹拌
しながら35〜45℃で６時間酵素反応を行なつた。
得られた酵素反応生成物をそのまま噴霧乾燥に処
し（吸気温度：130〜150℃、排気温度：50〜75
℃、反応生成物自体の温度：50〜60℃）、水分含
量4.8％の乾燥卵黄42Kgを得た。次いで、こうして得られた乾燥卵黄を用意した
２容ビーカーに各100ｇずつ取り、それぞれ加
湿操作を行なつた後１日間放置して全体を均一化
し、水分含量が4.8％、9.1％、13.6％および21.0
％の粉末状物を得た。上記水分含量の粉末状物を収容しているビーカ
ー中にそれぞれエタノール１を加えて40〜45℃
で10分間撹拌下抽出操作を行なつた後過して得
られた抽出液を真空濃縮に処し、いずれも黄色ペ
ースト状のリゾリン脂質含有物を得た。次いで各含有物を収率および残存酵素活性につ
いて調べた。その結果を下記の表１に示す。尚、
水分含量はケツト式水分計を用いて測定し（温度
105℃）、またホスホリパーゼA₂の残存酵素活性
の測定はBiochim.Biophys.Acta.、第159巻、第
105頁（1968年）に記載されている方法に準じて
行なつた。

【表】上記表１の結果より、水分含量が10％以下では
残存酵素活性が認め難いのみ対して、10％を超え
ると残存酵素活性がかなり認められるようになる
ことがわかる。試験例２この試験例は、酵素反応後の操作において従来
法（特開昭55−315号公報で開示せる方法）によ
る酵素反応生成物の加熱処理後過という操作に
代えて本発明の方法により該生成物を水分含量10
％以下まで乾燥させることにより如何に最終製品
が収率および残存酵素活性の点で有利に得られる
かを示す。上記の試験例１の方法に準じて得られた酵素反
応後の卵黄液２Kgを95〜100℃にて１時間加熱変
性処理した後加圧過で脱水し、水分含量28.0％
の固形物(A)1194ｇを得た。この降加圧過ではこ
れ以上水分含量を減らすことはできなかつた。こうして得られた固形物(A)のうち500ｇを凍結
乾燥に処して水分含量1.6％の乾燥物(B)365ｇを得
た。他方、上記試験例１の方法に準じて得られた酵
素反応後の卵黄液２Kgを加熱変性処理せずにその
まま噴霧乾燥に処し（吸気温度：130〜150℃、排
気温度：50〜75℃、反応生成物自体の温度：50〜
60℃）、水分含量4.3％の粉末(C)840ｇを得た。このようにして得られた資料Ａ、ＢおよびＣ各
200ｇに次いでそれぞれエタノール２を加えて
40〜45℃で10分間撹拌下抽出操作を行なつた後
過して得られた抽出液を真空濃縮に処し、いずれ
も黄色ペースト状のリゾリン脂質含有物を得た。次いで各含有物を収率および残存酵素活性につ
いて調べた。その結果を下記の表２に示す。

〔実施例〕

以下、本発明を実施例でもつて更に詳しく説明
する。実施例１鶏卵黄100Kgパンクレアチン（和光純薬製）５
Kgを清水10に溶解した液を加え、1N水酸化ナ
トリウム水溶液でPHを7.0〜8.0に保ちつつ撹拌し
ながら35〜45℃で６時間酵素反応を行なつた。得
られた酵素反応生成物をそのまま噴霧乾燥に処し
（吸気温度：130〜150℃、排気温度：50〜75℃、
反応生成物自体の温度：50〜60℃）、水分含量5.2
％の乾燥卵黄42.5Kgを得た。この乾燥卵黄にエタノール400を加えて40〜
45℃で10分間撹拌下抽出操作を行なつた後過し
て得られた抽出液を真空濃縮に処し（品質30℃以
下）、黄色ペースト状のリゾリン脂質含有物19.5
Kg（収率19.5％）を得た。次いでこの含有物の脂質組成をイヤトロスキヤ
ンTH10（(株)ヤトロン社製）を用いて下記の測定
条件の下で調べたところ、中性脂質（主にトリグ
リセリド、コレステロール）67.9％およびリン脂
質32.1％（このうちLPCおよびLPEは30.6％）で
あつた。測定条件ロツド：クロマロツドＳ−（シリカゲル）展開溶剤：クロロホルム：メタノール：水 80 ： 35 ：３（ｖ／ｖ／ｖ）展開距離：10cm 更に最終製品を残存酵素活性について調べたと
ころ0.1IU／ｇ以下であつた。尚、抽出液を分離
した後の残渣には約20IU／ｇの残存活性が認め
られた。実施例２市販の大豆リン脂質製品（リン脂質含量62％）
200Kgに市販の精製ホスホリパーゼA₂製剤（動物
膵臓由来品：100IU／mg）70ｇを清水３に溶解
した液を加え、4N水酸化カルシウム水溶液でPH
8.5に保ちつつ撹拌しながら50〜55℃で24時間酵
素反応を行なつた。次いで清水200Kgおよび賦形
剤としてデキストリン粉末40Kgを加えてホモジナ
イザーで乳化したのち噴霧乾燥に処し（吸気温
度：150〜170℃、排気温度：50〜75℃、乳化物自
体の温度：60℃）、水分含量3.8％の粉末228Kgを
得た。この粉末にメタノール2000を加えて40〜45℃
で20分間撹拌下抽出操作を行なつた後過して得
られた抽出液を真空濃縮に処し、褐色ペースト
182Kg（収率91％）を得た。次いでこのペーストの脂質組成を上記実施例１
の場合と同様にして調べたところ、中性脂質（主
にトリグリセリド、ステロール類）22.0％および
リン脂質78.0％（このうちリゾ型34.2％）であつ
た。また、残存酵素活性は0.1IU／ｇ以下であつた。実施例３用意した牛脳（破砕状物）150Kgに市販のホス
ホリパーゼA₂製剤（蛇毒由来品300IU／ｇ）30ｇ
を清水５に溶解した液を加え、1N水酸化カル
シウム水溶液でPH8.5に保ちつつ撹拌しながら40
〜50℃で６時間酵素反応を行なつた。得られた酵
素反応生成物をそのまま凍結乾燥に処して水分含
量1.4％の乾燥物68.4Kg得た。この乾燥物にエタノール680を加えて40〜45
℃で10分間撹拌下抽出操作を行なつた後過して
得られた抽出液を真空濃縮に処し、黄色ペースト
状リゾリン脂質含有物10.2Kg（収率6.8％）を得
た。次いでこの含有物の脂質組成を上記実施例１の
場合と同様にした調べたところ、中性脂質（主に
コレステロール）20％およびリン脂質46％（この
うちリゾ型21％）および糖脂質（主にセレブロシ
ド）34％であつた。また、残存酵素活性は0.1IU／ｇ以下であつた。

Claims

【特許請求の範囲】１天然のリン脂質含有物質にホスホリパーゼ
A₂製剤あるいはホスホリパーゼA₂を含む酵素製
剤を作用させて上記含有物質中のリン脂質を分解
してリゾリン脂質にした後、この物質の水分含量
が10％以下になるまで乾燥させ、次いで極性溶媒
を用いてこの物質からリゾリン脂質を抽出し、こ
の抽出液から上記極性溶媒を留去することを特徴
とする、実質的に残存酵素活性を有さないリゾリ
ン脂質含有物の製造法。２乾燥は噴霧乾燥あるいは凍結乾燥により行な
う、特許請求の範囲第１項に記載の実質的に残存
酵素活性を有さないリゾリン脂質含有物の製造
法。３極性溶媒としてエタノールあるいはメタノー
ルを用いる、特許請求の範囲第１項に記載の実質
的に残存酵素活性を有さないリゾリン脂質含有物
の製造法。