【発明の詳細な説明】
リポソームにカプセル 囲されたトステロイド性′症′を いる 法および組
この発明は現在審奎に係属中の+ 1986年6月12日に出願された米国特許
出願筒873,584号、1986年11月24日に出願された米国特許出願筒
934,151号、及び1986年11月24日に出願された米国特許出願筒
号に由来する。
又1夏立夏
この発明は炎症、痛みおよび発熱のような病状の処理をリポソーム中にカプセル
包囲(encapsulate) L/得る非ステロイド性抗炎症剤を含有する
組成物を用いて行うことに関するものである。更に詳しくは、この発明は、非ス
テロイド性抗炎症剤に関連した毒性の副作用を、リポソーム中のこれらの薬剤に
投与することにより軽減する方法について述べているが、その際この組成物は糖
脂質(glycolipid)をも含むことができる。
好ましい具体例においては、この発明は非ステロイド性抗炎症剤または治療剤、
あるいはそれらの類似体や誘導体を胃における抵抗性リポソーム中に実質的にカ
プセル包囲し、このような治療薬を人間を含めた哺乳類に投与したときに伴われ
る胃腸への刺激を軽減するという新規な概念に関するものである。
本明細書に記載されている好ましい組成物及び方法は、カプセルに包囲された非
ステロイド性抗炎症性治療薬やそれらの類似体および誘導体を含有する胃におい
て抵抗性のあるリポソームを提供する。これらの組成物は本来、これまでの療養
、特に長期の療養′@(約3ないし4日より以上に)とあらかじめ組み合わされ
た外生(exogenous)の非ステロイド性抗炎症性治療薬は有さす、した
がって胃腸を痛めることを最少限に抑えている。
見匪食i見
近年の薬学的研究は性質上ステロイド性でない抗炎症治療薬の−グループを開示
した。これらの薬剤は一般にカルボン酸(サルチル酸塩、酢酸塩、プロピオン酸
およびツェナメート類(fenamates)を含む)、ピラゾール類およびオ
キシカム類(oxieams)として分類される。
これらの治療薬は広く認められているものの、一般に胃腸への刺激や障害を潜在
的に有しているという性質がある1例えばインドメタシンは広く使用されている
剤であり、酢酸塩であるが、胃腸の潰瘍を引き起こすことが知られている0例え
ば米国特許第4゜378.354号および第4,421,747号のミクロスギ
ジー(Miklos Ghyzy)等の仕事を参照されたい、これらの特許は、
非ステロイド性抗炎症剤とリン脂質を混合することによって非ステロイド性抗炎
症剤に伴われる潰瘍性を減少させる改善について記載している。
リポソーム類は一般に知られているが、非ステロイド性抗炎症剤の伴う胃腸障害
を回避もしくは最少限に抑えるために必要な条件についてはまだ判明していない
0例えばリヒテンベルガ−(Liehtenberger)等、「サイエンス(
Scianee)J219:1327−1329.1983年3月19日I胃の
細胞保護における表面活性リン脂質の役割Iを参照されたい。
リポソームは取り込まれた水性容量を有する完全に閉鎖された二分子膜層である
。リポソームはユニラメラ小胞体(unila■ellar vesicles
) (一つの二分子膜層によって特徴づけられる玉葱様構造をもち、各層は水性
層によって次ぎの層と分けられている)であることもできる、得られた二分子膜
層の構造は、疎水性(無極性)の脂質の〃尾部〃が二分子層の中心に向かってお
り、一方親水性(極性)のI頭部Iが水性層に向かうといったものとなっている
。
パンガム(Bangha■)等の、最初のリポソーム製造〔ジャーナルオブモレ
キュラーバイオロジー(J、 Mo1.Biol、)、1323g−25219
65〕は有機溶媒中にリン脂質を懸濁させ1次いでこの溶媒を蒸発乾燥させ1反
応容器上にリン脂質の膜を残すことを包含する。続いて適当量の水性層を添加し
、この混合物をI膨張Iさせ、そしてマルチラメラ(multilamella
r)小胞体(MLVs)からなる得られたリポソームを機械的手段で分散させる
。この技術が、ババハジョボウロス(Papahadjiopoulos)等に
よって記載された〔バイオヒミカエトバイオフィジカ ラントアクタ (Bio
chim、 Biophys、 Aeta、)1:狙、 624−638.19
67)小さな音波処理されたユニラメラおよび大きなユニラメラ小胞体の基礎を
提供している。
小胞体を製造するのに用いられてきた他の技術としては逆相蒸発小胞体(REV
)の形成、ババハジコボウラス等米国特許第4,235゜871号、安定なプル
リラメラ小胞体(plurilamellar vesicles)(SPVL
) 、レンダ(Lenk)等米国特許第4,522,803号、単相性小胞体(
s。
nophasic vesicles) (MPV) 、ファウンテイン(Fo
untain)等米国特許第4,588,578号及び凍結融解マルチラメラ小
胞体(FATMLV) 、バリー(Ba11y)等米国特許出願第752,42
3号(1985年7月5日出願)および米国特許出願筒800,545号(19
85年11月21日出願)がある。
リポソーム薬剤体内輸送システム(drug dalivery system
)において、薬剤はリポソーム中にカプセル包囲され治療される患者に投与され
る・例えばラーマン(Rahman)等米国特許第3,993,754号;シア
ーズ(Sears)米国特許第4,145,410号;パバハジョボウロス等米
国特許第4,235,871号;シュナイダー(Schnaider)米国特許
第4,224,179号、レンダ等米国特許第4,522,803号およびファ
ウンテイン等米国特許第4,588,578号を参照されたい。
胃腸の潰瘍を治療するためにリン脂質を使用することに関する記載が文献に出始
めている。この結果は、この脂質の、刺激に対する胃の天然の保護障壁を回復さ
せると称されている能力によるものである0例えばディアル(Dial)等、「
ガストロエンテロロジー(Gastrenterology)、87.379−
385(1984)Jは牛乳の抗潰瘍活性はそのジパルミトイルホスファチジル
コリンの濃縮によるものであると示唆している。他の研究ではリンレシチン〔フ
レメンコン等スカドジャーナルガストロエンテロロジーサブリメント(Scad
、 J、 Ga5troenterd、5upp1.)、19.116−120
.1984)、タイワンセンダン(Malia azedaraeh)植物の果
実および飴貝ペルナヵナリクルス(むμta eanaliculus)の両者
から単離した脂質
【各々、アルーカティブ(Al−にhatib)、ジャパニー
ズジャーナルオブファーマコロジ−(J n、J、Pharmacol、)、3
6.527−533,1984及びレインスフオード等アルゼナイム フォルシ
ュング(Arzneim、−Forth、)、観。
212g−2132,1980)がラットにおける潰瘍保護剤として挙げられて
いる。
ソジウムドデシルスルフェートによって引き起こされた膜潰瘍を評価する別の研
究ではこのような損傷に対する保護剤としてホスファチジルコリンを挙げている
〔マーチン(Martin)等ジャーナルオブファーム77− ’? :IOジ
ジーJ、 Pharm、 Pharmacol、)。
33.754−759.1981)、最後に、リヒテンベルガ−(Lichta
nberger)等〔サイエンス(Science)、219.132?−13
28,1983)は135ugのジパルミトイルホスファチジルコリンおよび各
々15ugのホスフ7チジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、
ホスファチジルイノシトールおよびスフィンゴミエリンからなるリポソーム性リ
ン脂質懸濁液の改善された効果について研究を行なっている。
彼等は胃の上皮とルミナール(lu馳1nal)内容物との間の吸収された疎水
性層の形成により保護が増強されると仮定している。プロスタグラシン類が実験
動物及び人間における胃潰瘍発生および出血に対する保護剤として挙げられて〔
ロバート(Robert)等、ガストロエンテooジー(Gastroente
rology)、77、433,1979およびロバート等、ガストロエンテロ
ロジー、55.481,196g)いるが、リヒテンベルガー等(下記参照)は
プロスタグランジン合成は外部からのリン脂質がもたらす胃の保護にとって必要
とされるものではないと断定している。しかしながら、ラットがプロスタグラン
ジンE2を投与されたとき、ラットの胃粘膜はホスファチジルエタノールアミン
およ′びホスファチジルコリンの濃度においてみられる最大の増加を伴う主な前
表面保護活性剤の2〜6倍の増加を示した。
更に加えて、リヒテンベルガー等、ヨーロッパ特許出願第92121号、 19
83年10月26日公開は潰瘍治療のためのリン脂質組成物を示唆している。胃
および腸の潰瘍の治療のための、プロスタグランジンと結合した同様の組成物の
ための出願は今用等、ヨーロッパ特許a願150732.1985年8月7日公
開である。抗潰瘍組成物を示唆している更に別の文献はエイメン(Amen)等
、米国特許第4,029.773号で、サッカロース、アミノ酸およびトリグリ
セライド混合物に対するものである。
ギチー(Ghyczy)等、米国特許第4,528,193号はリン脂質および
非ステロイド性抗炎症剤を約1:0.1から1:20モル比で含有する組、酸物
及び炎症の治療法を開示している。この混合物は該薬剤と脂質を有機溶媒中に共
溶解し、次いで該溶媒を蒸発除去することによって製造される。あるいは該成分
を水に共混合し、このようにして得られた溶液を次いで凍結乾燥させる。
多くの植物ガラクトリピド、ジガラクトシルジグリセライド(DGDG)がリポ
ソームを製造するために用いられてきている。 DGDGは高級な植物葉緑体お
よびサイラコイド(thylakoid)膜〔フィン(Quinn)等、プログ
レスオブバイオフイジカルモレキュラーバイオロジー(Pro 、 Bio h
s、 Mo1ee、 Biol、)34.109−173,1978)、の全
脂質含量の約40%を占める。このものは葉緑素とサイトクロームを利用した光
システムがリポソームへと再構成されるような研究にこれまで用いられてきた【
各々スプラーグ(Sprague)等、ジャーナルオブセルラーバイオロジー〇
、 Ca1l Biol、)、100552−557.1985.及びモーシェ
ル(Morsehal)等、ジャーナルオブセルラーバイオロジー、虹、 30
1−310.1983)、グルコース放出に依存した補体によって測定されたリ
ポソームにおけるDGDGの免疫活性を含む研究〔アルヴイング(Alving
)等、イムノケミストリー(Im+munoehemistry)、11.47
5−481.1974)および多発性硬化症患者から採った血清のDGDGリポ
ソームとの反応性および補体が仲介するリポソームの溶解を引き起こす能力に関
する研究〔ボッゲス(Boggs)等。
ジャーナルオブノイロロジカルサイエンス(J、 Neurol、 Sci、)
。
並、339−348.1984)が行なわれてきた。 DGDGはリポソームカ
プセル化包囲薬剤を肝細胞に運ぶ目的のための微細なリポソーム成分と示唆され
てきた〔ゲホー(Geho)、米国特許第4,377.567号〕。
N5AID類の望ましくない胃腸に対する副作用を緩衝できる組成物に対する需
要が増してきている。
胃腸に対する最少限の潰瘍性もしくは刺激性で投与し得る非ステロイド性抗炎症
性治療剤及びそれらの類似物、誘導体の形態を提供することがこの発明の目的の
一つである。
経口投与が可能で胃腸の潰瘍、刺激を引き起こさない非ステロイド性抗炎症剤及
びそれらの類似物、誘導体の形態を提供することが本発明の特別な目的である。
非ステロイド性抗炎症剤及びそれらの類似物、誘導体をリポソーム内に含有し、
外生の非ステロイド性抗炎症剤が制限されているかまたは全く存在しない、胃に
抵抗性のあるリボーム製剤を提供することがこの発明の更なる目的である。
また動物に投与されたとき非ステロイド性抗炎症剤を調節された方法で放出する
胃に抵抗性のあるリポソームを提供することがこの発明の別の目的である。
l豆立夏豊
本発明は人間を含めた哺乳類に非ステロイド性抗炎症治療剤を投与するための新
しく、また驚くほど非刺激性の製剤を提供する。
非ステロイド性の抗炎症性治療剤なる語はこのような剤の類似体および誘導体を
含んでいると解すべきである。
更に、特別な組成物が糖脂質を有する非ステロイド性の抗炎症薬に対して提供さ
れる。糖脂質としてはグリコスフィンゴリピドもしくはジガラクトシルジグリセ
ライドのようなガラクトリピドであることができる。この薬剤組成物は上記のグ
リコリピドから構成されるリポソーム組成物であることができる。
更に加えて、この発明は非ステロイド性抗炎症性治療剤を含有する前低抗性リポ
ソームの調製および使用を包含し、この製剤は外生の非ステロイド性抗炎症性治
療剤を本来含まない。
この発明の好ましいリポソームは不飽和脂質、飽和脂質およびそれらの混合物か
ら製造される。飽和脂質は該脂質の長鎖脂肪酸上に炭素−炭素二重結合を含有し
ない、不飽和脂質は水素化されて炭素−炭素二重結合が除去された飽和脂質を得
ることができる。
あるいは飽和脂質は例えば、飽和長鎖脂肪酸を使用して合成することができる。
特に違うと区別しないかぎり飽和および水素化されたという語は、同意的にその
長鎖脂肪酸部分に炭素−炭素二重結合を含有しない脂質を意味するようにここで
は使用される。
この発明は胃において抵抗性のあるリポソームに本来カプセル包囲されている少
なくとも一つの非ステロイド性抗炎症性治療剤を治療的に有効な量、および外生
の非ステロイド性抗炎症剤療剤を本来含有しないものからなる組成物を包含する
。この組成物の好ましいものとしては(1)リポソームが卵ホスファチジルコリ
ンもしくはジガラクトシルジグリセライドから構成され、(2)リポソームが実
質的に、水素他罪もしくは大豆ホスファチジルコリンのような水素化ホスファタ
イドのように飽和された脂質から構成されており、(3)非ステロイド性抗炎症
性治療剤としてインドメタシンが用いられ、(4)非ステロイド性抗炎症性の総
重量としてはその外生のもののパーセンテージが30%より少なく。
25%より少ないのがより好ましく、5%より少ないのが更に好ましい、(5)
実質的に飽和脂質のリポソームにとって安定なプルリラメラ小胞体が好ましいが
、ユニラメラ小胞体もしくは凍結融解されたマルチラメラ小胞体のような実質的
にむらのない溶質分布のリポソーム、および(6)経口投与に適した組成物であ
る。
更に非ステロイド性抗炎症性治療剤がサリチル酸塩、酢酸、プロピオン酸、フェ
ネメート(fans■ates)、ピラゾール、オキシカムおよびそれらの類似
体および誘導体である組成物が含まれる。
この発明はまた、胃において抵抗性のあるリポソームに本来カプセル包囲された
すくなくとも一つの非ステロイド性抗炎症治療剤の治療的に有効な量、および受
容し得る薬剤担体もしくは希釈剤中に外生の非ステロイド性抗炎症治療剤を本来
含有しないものからなる薬剤的投与形態を包含する。この薬剤投与形態の好まし
いものとしては、非ステロイド性抗炎症治療剤の総重量としてその外生のものの
パーセンテージが30%より少なく、25%より少ないのがより好ましく、5%
より少ないのが更に好ましい、最も好ましい具体例として薬剤投与形態は経口投
与用に適用され、特に不飽和脂質のリポソームを単相の小胞体もしくは凍結融解
マルチラメラ小胞体として用い、更にいずれかの小胞体型はインドメタシンを含
有している。同様に、実質的に飽和脂質のリポソームのためにより好ましい投与
形態は安定なプルリラメラ小胞体形態である。更に非ステロイド性抗炎症治療剤
がサリチル酸塩、酢酸。
プロピオン酸、フェネメート、ピラゾール、オキシカムおよびそれらの類似体お
よび誘導体から選ばれたものである組成物が含まれる。
この発明は少なくとも一つの非ステロイド性抗炎症治療剤の薬剤的に有効な服用
量を人間を含む哺乳動物に投与したときに同時に起こる胃腸への刺激を最少限に
する方法をも含み、この方法はこの非ステロイド性抗炎症治療剤を、この非ステ
ロイド性抗炎症治療剤を本来カプセル包囲しており、そしてそこには外生の非ス
テロイド性抗炎症治療剤が本質的に含まれていない胃における抵抗性のあるリポ
ソームの形で上記の暖乳順に投与することを包含するものである。この方法の好
ましいものとしては(1)非ステロイド性抗炎症治療剤の総重量に対し−その外
生のもののパーセンテージが30%より少ない、より好ましくは25%より少な
く、更に好ましくは5%より少ない調剤を使用し、(2)実質的に均質の溶質分
布のリポソームで、特にユニラメラ小胞体類と凍結融解のマルチラメラ小胞体類
のリポソーム類を使用し、リポソームについては安定なプルリラメラ小胞体類を
使用した実質的に飽和脂質から構成されており、そして(3)非ステロイド性抗
炎症治療剤としてインドメタシンを使用し、(4)この組成物の経口投与法を採
用する。更に、非ステロイド性抗炎症剤がサリチル酸塩。
酢酸類、プロピオン酸類、ツェナメート類、ピラゾール類、オキシカム類および
それらの類似体および誘導体から選択されたものであるものをも包含する。
図 の簡単な雷日
第1図:しよ糖勾配遠心分離によるインドメタシン含有EPCMPVの分画、
100.の卵ホスファチジルコリン、 0.25uCiの14C−インドメタシ
ン、および各々15,17,19,21,23もしくは25■のいずれかのイン
ドメタシンからなる単相の小胞体類を直線5−20%しよ糖勾配にかけ、 28
g、0OOX gで2.5時間遠心分離を行った。
第2図:飽和及び不飽和脂質リポソーム類を使用して得られる治療剤の血漿レベ
ルを比較したもの。
只Jし1詳lじ1透朋−
次のような略語が用いられる:
5PLV −安定なプルリラメラ小胞体MLV −マルチラメラ小胞体
MGDG −モノガラクトシル ジグリセライドDGDG −ジガラクトシル
ジグリセライドCH5−コレステロール ヘミサクシネートH5PC−水素化大
豆ホスファチジルコリンTH5−トロフェロール ヘミサクシネートMPV −
単相の小胞体
FATMLV−凍結融解技術により製造されたM L V 5VET −ろ過器
による1魁しくはそれ以上の押し出しによって形成される小胞体類
REV −逆相蒸発小胞体
NSA I D −非ステロイド性抗炎症剤非ステロイド性抗炎症剤は薬剤の中
で非常に効果のある部類の薬剤であるが、その毒性のためにそれらの使用は制限
されている。
我々はリポソーム中にカプセル包囲されたN5AID類を投与するとその効能を
保ったまま潰瘍を含む胃腸に対する副作用を軽減できることを見出した。
この発明で用いられる非ステロイド性抗炎症治療剤は例として次のようなものが
ある:
カルボン酸
サリチル酸塩
アセチルサリチル酸(ASA)
サルサレート
ジフルニサル
フェンドサル
酢酸
インドメタシン
アセメタシン
シンメタシン
ジクロフェナック
フェンクロフェナック
オキセビナツク
クロピラツク
クロメタシン
クラミドキシン酸
プロピオン酸
イブプロフェン
フルルビプロフェン
ナプロキセン
ケトブロフエン
フェノプロフェン
ベノキサブロフエン
インドプロフェン
ピルプロフェン
カプロフェン
オキサブロジン
プラノプロフェン
シュプロフェン
ミクロプロフェン
チオキサプロフェン
アルミノプロフェン
チクロブロフエン
チアプロフェン酸
フラブロフェン
ブクロキシン酸
プロシジン酸
ツェナメート類
メファナミン酸
フルフェナミン酸
メクロフェナメート
ニフルミン酸
トルフェナミン酸
フルニキシン
、クロニキシン
ピラゾール類
フェニルブタシン及び類似体
ペブラゾン(プレナゾン)
アバシン(アザプロパシン)
トリメタジン
モフェブタゾン
ケブゾン
スキシブジン
オキシカム類
ピロキシカム
イソキシカム
テノキシカム
リポソーム製剤において、脂質の疎水性部分が二分子膜の方向へ向き、親水性部
分が水層方向へ向くような二分子膜を形成する脂質が有用である。
この発明で使用する脂質としては、グリコスフィンゴリピドのような糖脂質、お
よびジガラクトシルジグセライド(DGDG)もしくはモノガラクトシルジグリ
セライド(MGDG)のようなガラクトリピド、およびDGDGおよびlまたは
MGDGをホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイソ
シトールもしくはホスファチジルエタノールアミンおよびそれらの誘導体のよう
なリン脂質および各々コレステロールヘミサクシネートやトロフェロールヘミサ
クシネートのようなステロールもしくは二価酸のトコフェロールモノエステルと
組合せた形のものが包含される。
この発明の小胞体類を形成するのに使用し得る糖脂質はグリコスフィンゴリピド
、およびモノガラクトシルジグリセライド(MGDG)もしくはジガラクトシル
ジグリセライド(DGDG)、好ましくはDGDG、のようなガラクトリピドを
包含する。 DGDGは葉緑体における植物脂質として天然に存在し、そして次
の構造:式中各R置換基はC1−C37鎖の範囲にあり、大体20%パルミチン
酸、9%オレイン酸、66%リノール酸、残りはステアリン酸。
リルイン酸および他の脂肪酸である。
を有する〔マイドア、カン、ジャーナルオブケミストリー(Can。
J、Chem、)、46. 30フ1−77.196g)。
このMGDG分子はその極性頭部上に単一の中性ガラクトース残基を有する。生
物物理学的研究(11C−縦の弛緩時間)はMGDG頭部がDGDGやホスファ
チジルグリセロールのような他の脂質の頭部よりも有意に小さいということを示
唆している。それからして、この分子は角の形をした構造をもち、高度に不飽和
なアシル鎖の相互作用が比較的嵩ばった疎水性構造を与えている。このようにM
GDGはラメラ構造を形成するのではなくて、水和の下、ヘキサゴナルー用構造
を形成する。 MGDGと二分子腰層形成脂質との混合物は約60モル%までの
MGDG濃度で二分子膜構造を採用する。 MGDGのより高い割合は脂質性の
微粒子や他の非二分子膜構造となる。
DGDGはMGDGと比較して極性頭部上に追加のガラクトース単位を有し、そ
れによって、比較的嵩ばった頭部を与えるが。
また嵩ばった疎水性アシル鎖をも有するものである。構造的に。
DGDGは円筒形の構造を形成し、膜中に二分子膜組織を導入する。この性質が
DGDGをリポソーム形成のための2種の内の好ましいガラクトリピドとしてい
る。−緒にされた水性分散液中で。
MGDGおよびDGDGは混合ラメラを形成し、2:1の重量比でミセル相を逆
転させる。トリトンX−100により洗剤溶解技術を用いて、MGDGおよびD
GDGの組合せでリポソームを形成するために研究が行なわれてきた。この技術
を用いて二分子膜構造は両方のガラクトリピドを用いてMGDG : DGDG
の重量比20 : 80までのみ形成することができる。Hexn管が30%も
しくはそれより大のMGDGを用いて製剤中に形成される9等重量のMGDGお
よびDGDGを含有する混合物は脂質性粒子を含有するほんの痕せき量の二分子
膜域を有す構造をつくる。
リン脂質類もまた有用である。脂質類は単独もしくは組合せとして利用できる。
「胃における抵抗性」 (以下で詳述するが)を提供する好ましい脂質はスフィ
ンゴミエリン同様、ホスファタイド類、ホスファチジルコリン、ホスファチジル
エタノールアミン。
ホスファチジルグリセロールを包含する。非ステロイド性抗炎症治療剤の制御さ
れた精巧さを要求する投与への適用において特に好ましいのは、実質的に飽和も
しくは水素化脂質、特にホスファタイドそして最も好ましくは水素他罪もしくは
大豆ホスファチジルコリンで構成されるリポソームである。実質的に飽和の脂質
からなるリポソームによって提供される治療剤の制御された精巧さは1本質的に
投与と同時に起こる治療剤の最高点のレベルを回避することにおいて明白である
。この事実は水素化大豆ホスファチジルコリンをラットに経口的に投与したとき
に生じるインドメタシンの血中レベルである第2図がら観察することができる。
最高点の血中レベルは数人の研究者による非ステロイド性抗炎症治療の禁忌徴候
と一致している。
このようなリポソームから成っている飽和脂質の量について言及している「実質
的に」なる語は、少なくとも約1=1の脂質のモル割合に基く不飽和脂質に対す
る飽和脂質を指し、飽和対不飽和が約9:lがより好ましく、そして本質的に全
ての脂質が充分飽和性であることが最も好ましい、飽和脂質のリポソームは他の
脂質、殊にコレステロールと混合することができる。
ある種の脂質は、塩の形となったときのみ両親媒性であって。
酸性の状態ではそうではないため胃に抵抗性のあるリポソームを形成しない、コ
レステロール及びトコフェロールのヘミサクシネート類(各々rCHSJ及びr
TH3J )はこのような物質の見本である。胃腸管における通常の条件にさら
されると、このような物質の両親媒性基形態は水溶性酸形に戻り、これらの物質
を基本としたリポソームは素早く分解する。この分解は胃環境と関連した低いP
Hに接触すると数秒以内に生じる1本発明の好ましい態様の実施において、背低
抗性リポソームのみが利用できる。即ち、背低抗性のリポソームは、胃腸管にお
いて共通したPH条件にさらされたとき、二分子膜構造において安定であること
をやめてしまう脂質を排除した脂質から製造されるリポソームと定義し得る。改
善された安定性をもつ背低抗性のリポソームは、不飽和脂質の水素化もしくは飽
和化によりつくられる。
本発明において用い得るリポソームは、それらに限られないが。
M L V s、小もしくは大のユニラメラ小胞体類(各々5UVsもしくはL
U V s ) 、 V E T s +および均質の溶質分布を有するSP
LVslMPVs、FATMLVsのようなものを含む。
N5AIDおよびDGDGのようなガラクト脂質を含有するリポソーム組成物を
調製するために種々の方法が用いられる。1つの方法では、N5AIDは有機溶
媒中で脂質と一緒にし、この溶液は回転蒸発させて薄膜とし、最終的にその膜は
水性緩衝液のような水性媒体で水和され、リポソームを形成する。このような操
作がM L V sを形成する。
N5AID−ガラクトリピドリポソームを製造する他の方法は有機溶媒中でこの
N5AIDとガラクトリピドを一緒にさせ、この溶液を回転蒸発させて薄膜とし
、そしてこの乾燥した膜を水性緩衝液のような水性媒体の部分標本が既に添加さ
九ているエタノール中に溶解する。この溶液は続いて1回転蓋発させて薄膜とな
し1次いで水性媒体でこの膜を水和し、リポソームを形成する。
このような操作がMPVsを形成する。
N5AID−ガラクトリピドリポソームを製造する更に他の方法としては、有機
溶媒中でガラクトリピドとN5AIDを一緒にし、この溶液を回転蒸発させて薄
膜とし、そしてこの膜をジエチルエーテル中で再S濁させる。水性緩衝液のよう
な水性媒体の少量部分標本を該有機溶媒溶液に添加し、この溶液を窒素ガスの下
で乾燥させ、音波浴で音波処理をしながらペーストとする。このペーストは1次
いで水性媒体で水和しリポソームを形成する。このような操作が5PLVaを形
成する。
N5AID−ガラクトリピドリポソームを製造する更に別の方法は上述のように
してM L V sを形成し、次いでこれらのMLVSを何回もの凍結融解サイ
クルに付す、このようなサイクルは。
まずこのM L V s llI1wa液を急激に冷却して凍結した脂質−水性
媒体混合物を得1次いでこの混合物を温めることにより行なわれる。
この凍結及び加温工程は少なくとも約5回行うことが好ましい。
このような小胞体類は均等な溶質分布を有し、FATMLVsとして知られてい
る。
N5AID−ガラクトリピドリポソームを製造するまた別の方法は上述のように
してM L V sを形成し、次いでこのリポソームを約700pgi、の圧力
下でフィルターを通して押出す、このようにして得られた小胞体類はVETsと
して知られており、カリス(、Cu11is)等、米国特許出願Set、No、
788,017号、 1985年lO月16日出原の方法により製造することが
できる。
有用なリポソーム類のクラスの中で、11造された環境の媒質分布と実質的に等
しい媒質分布を有するという特徴を有するサブクラスのリポソームが好ましい、
このサブクラスはレンダ(Lank)等の米国特許第4,522,803号で定
義されているように安定なプルリラメラ小胞体類(SPLV)として定義するこ
とができ、更にファウンテイン(Fountai口)等の米国特許第4,588
,578号に記載されている単相小胞体類と、メイヤー(Mayer)等「バイ
オヒミカエトバイオフィジカアクタ(Bioehimica at Bioph
ysiea Acta) 817 : 193−196 (1985)Jの「凍
結融解のマルチラメラ小胞体類において観察される溶質分布および取り込み効率
」において記載されいる凍結融解マルチラメラ小胞体類(F A T M L
V s )との両者をも含む、特に米国特許第4,522,803号の方法で製
造されるリポソームは安定な小胞体類とされている。この5PLV型リポソーム
の特別の安定性は溶質平衡に付随した低エネルギー状態に起因すると信じられて
いる。
CH3−およびTHS−含有小胞体類は両者共、小胞体類を製造するために当業
界で知られているどのような方法によっても一般に製造することができる。特に
、ジヤンプ(Janoff)等、米国特許出願第721,630号1発明の名称
ニステロイド性リポソーム。
1985年4月10日出願;ジャノフ等、米国特許比願第773,429号。
発明の名称ニステロイド性リポソーム、1985年9月10日出願;及びジャノ
フ等、米国特許出願第786,740号1発明の名称:アルファートコフェロー
ルを基にした小胞体類、1985年9月】0日出願といった共係属特許出願の手
段を参照されたい、これらの方法によれば、粉体状のCH3−もしくはTHS−
のようなステロールもしくはトコフェロールのジ酸のモノエステルが水性緩衝液
の部分標本に加えられ、その分散液を十分懸濁するように渦巻状に回転させ、M
LVsを形成する。この分散液は次いで水浴中で数時間音波処理をして5UVs
を形成させ、その後、薬剤粉末をこれらの音波処理された小胞体類に直接添加し
、十分分散させるために渦巻状に回転させる。
MGDG/DGDGリポソームを形成するための他の技術は両方の脂質をフッ素
化炭化水素(Freon−22のような)中に該フッ素化炭化水素の沸点より下
で、20℃より下の温度で溶解される。
次いで水性媒体が加えられてエマルジョンを形成する。このエマルジョンを次い
で該フッ素化炭化水素の沸点(例えば20℃)より上の温度に加温して該フッ素
化炭化水素を除去してリポソームを形成させる。
逆相蒸発小胞体類(REV@)を形成するために使用されるMGDGおよびDG
DGの結合された分散液においては、洗浄剤透析技術に比べて、大部分の表面不
規則性が現れる前に、二分子膜層はMGDGをほんの少し多く収容している。4
0:6Gの重量比のMGDG: DGDGを使用して形成されるリポソームは二
分子膜小胞体におけるhex−11円筒状整列を有している。この水性相中の脂
質の固まりはMGDGが70%に到達するまで生じない、MGDGおよびDGD
Gの両者は、リン脂質のような他の脂質、コレステロールエステルのようなステ
ロールもしくはトコフェロールのようなフェノールとうまく結合してリポソーム
を形成することができる。
リポソーム製剤はまたCH8とTH8の組合せ、或いはステロールおよびトコフ
ェロールの他の有機酸誘導体から成ることもできる。
必要な場合には、5PLVおよびMPV操作におけるように。
小胞体製造の間、・有機溶媒を該脂質の溶解のために用いることができる。好適
な有機溶媒としては、種々の極性および誘導特性を有するものが好ましく、クロ
ロホルム、アセトン、メチレンクロライド、ジエチルおよび石油エーテル、およ
びクロロホルムとメタノールの混合物が含まれる。
リポソーム類は、N質二分子膜層によって封入された水性媒体を取り込んでいる
。この水性媒体としては例えば、水もしくは溶解塩もしくは緩衝剤を有する水で
あることができる。このような塩もしくは緩衝剤の例としては塩化ナトリウムお
よびリン酸緩衝生理的食塩水(PBS)であることができる、他の緩衝剤として
、Tris−HCI Cトリス−(ヒドロキシメチル)−アミノメタン塩酸塩〕
、およびI(EPES (N−2−ヒドロキシエチルピペラジン−N’−2−エ
タンスルホン酸)があるが、これらに限定されることはない、緩衝剤は、約5.
0と約9.5の間のpH範囲にあることができる。好ましい具体例においては、
製剤はリン酸緩衝生理的食塩水(PBS)を用いて約5.0と約9.5の間のp
Hで好ましくは約PH7,4で水和される。CH3およびTH5のトリス塩形態
を採用するCH3−およびTH5−含有小胞体の場合、約7.4のPHのトリス
/塩酸緩衝液が使用される。
5PLV法は、少なくとも1つの胃に抵抗性の脂質を少なくとも1つの有機溶媒
に入れ、少なくとも1つの非ステロイド性抗炎症治療剤を含有する最初の水性成
分を加えて、溶液を形成することを包含する。単相(■onophase)を形
成するのに充分な水性成分を使用する0次の段階は蒸発を持続、促進する温度お
よび圧力で膜状となるまで、該単相から有機溶媒を蒸発させる。その次の段階は
、この膜に第2の水性成分を加え、この膜を再懸濁させ脂質小胞体を形成するた
めに該第2水性成分と膜とを撹拌する。得られた物質は、必要とされた外生の非
ステロイド性抗炎症治療剤を洗い流すことができる。この方法はインドメタシン
を用いた実施例4に更に記載されているが、他の非ステロイド性抗炎症にも同様
に応用できると解されるべきである。
非ステロイド性抗炎症治療剤、もしくはそれらの剤の組合せを含有する本発明の
好ましい胃に抵抗性のあるリポソーム類は、外生の非ステロイド性抗炎症治療剤
が非ステロイド性抗炎症治療剤もしくは複数のそれら剤の総重量の約30%より
少ないときには。
外生の非ステロイド性抗炎症治療剤は本来含まれないと考えられる。好ましい製
剤としては、全非ステロイド性抗炎症治療剤の量の約25%より少ないものが外
生のものである。胃腸への刺激や全体的な胃腸の損傷(潰瘍のような)を引き起
こす非ステロイド性抗炎症治療剤の閾値投与量は、その非ステロイド性抗炎症治
療剤。
投与法、調剤および持続期間、哺乳動物およびその現在の状態を含めた多数の栗
因によって変ってくるであろう、一般的に最も好ましい製剤は、最少量の外生の
非ステロイド性抗炎症治療剤を有し、そして、これらの製剤は存在する非ステロ
イド性抗炎症治療剤(類)の全重量の約5%より少ない外生の非ステロイド性抗
炎症治療剤を有する点が特徴的であり、いくつかのものは1%より少ない、この
発明を用いるに当って、更に考えられるのは非ステロイド性抗炎症治療剤の血中
における半減期(half−1ife)である。
特別の理論に縛られているわけではないが、より長い半減期を有する非ステロイ
ド性抗炎症治療剤は、胃腸障害を引き起こすより大きな傾向がある。もちろん、
この因子は上述のような他の因子類とつり合わせることができる。インドメタシ
ン、トルメタシン。
イブプロフェン、ジクロフェナック、フェノプロフェン、アセチルサリチリック
およびメクロフェナメートは4時間以下の血中標準半減期を一般に有することが
他の人によって示されている。メツエナミン酸およびフルルビプロフェンは各々
約4時間および6時間の血中標準半減期を一般に有することが他の人によって示
されている。ナプロキセン、ジフルニサール、スリンダック、ピロキシカムおよ
びフェニルブタシンは1o時閏以上ないし3日の半減期を有することが他の人に
よって示されている0本発明の生成物および方法による胃腸への刺激の改良の度
合いは、各非ステロイド性抗炎症治療剤に応じて、変化すると予測されるが、比
較的短い半減期をもつようになると言えるであろう。
リポソームにカプセル包囲された非ステロイド性抗炎症治療剤は1本来外生の非
ステロイド性抗炎症治療剤は含まず、このものは脂質と非ステロイド性抗炎症治
療剤を単に混合物として共投与した場合よりも、胃腸障害を引き起こすことがか
なり少ない、後者の共投与の場合には、非ステロイド性抗炎症治療剤の実質的に
全てが外生のものである限界状況を明らかに包含する。
この発明の背低抗性のMPLリポソームを製造する際に、脂質と非ステロイド性
抗炎症治療剤の各標本を、好ましくは約6:1の重量比(脂質:非ステロイド性
抗炎症治療剤)を越える割合で無水エタノールに共溶解する。非ステロイド性抗
炎症治療剤と脂質の両溶解性を含む種々の条件に応じて、一般的に100■の脂
質につき約1 m Qのエタノールからの比が使用される。簡便さのために実験
室では200■の脂質に対して5mAのエタノールが好ましい。
水性成分がエタノール有機溶媒に約25:1から約1:1(溶媒:水性成分)の
エタノールとの比率で加えられる。得られた単相を回転蒸発jrotoevap
oration)下、減圧下に膜が形成されるまで置く、この膜は所望の濃度に
まで再水和し得るが、1mflの水溶液につき200■の脂質が好ましい、この
方法は、サリチル酸塩、酢酸類、プロピオン酸類、ツェナメート類、ピラゾール
類、オキシカム類およびそれらの類似体、誘導体を用いて利用することができる
。
各非ステロイド性抗炎症治療剤は溶解性の範囲、リポソームの取り込み範囲およ
び望ましい投与量を包含する特別な1組の物理的性質を与えるので、取りこまれ
た/外生の非ステロイド性抗炎症治療剤を決定する好ましい試験方法は実施例6
に存在するが。
他の好ましい試験方法も当業界でよく知られており、また有用である。
リポソームに取り込まれた外生の非ステロイド性抗炎症治療剤の相対量を決定す
るために、当業者によく知られている多数の方法を用いることができる。しよ糖
勾配遠心分離物を放射線標識する方法が採用された。
この放射線標識方法では放射線でラベルした非ステロイド性抗炎症治療剤を脂質
溶媒中に供給し、その後少量の非標識水性物質を添加する。続いて、この溶媒を
回転蒸発のような便利ないずれかの方法で除去する。エタノールの場合1回転蒸
発は約50℃の昇温下、約1〜100mHgのような減圧下で簡便に行われる。
当業者は他の溶媒および他の非ステロイド性抗炎症治療剤のための適当な反応条
件を明らかに理解するであろう。
溶媒の除去後、この物質は生理的食塩水のような適当な水溶液中に再懸濁される
。
得られたリポソーム類は、続いて薬剤装填のために試験されることができる。こ
れは非リポソーム性物質から何らかの分離手段でリポソーム類を分離することに
よって行われる。しよ糖勾配遠心分離はこのような1つの手段である。
しよ糖のカラムが用いられる場合には、この方ラムは遠心分離し、その後、フラ
クションを集め、シンチレーションカウンター内で測定する。このようなカラム
の底における放射線標識は、外生の非ステロイド性抗炎症剤を表わし、上部にお
けるフラクションはリポソームに取り込まれた非ステロイド性抗炎症治療剤を表
わす、それから外生のものおよび取り込まれたもののパーセンテージは計算する
ことができる。
インドメタシンの増加しているレベルを含有する実施例4の方法によってつくら
れた卵ホスホチジルコリン(EPC)/インドメタシンリポソーム製剤は1重量
比で約6:1より低いリン脂質:薬剤の洛北で、非ステロイド性抗炎症結晶を含
有する高濃度の外生の物質が明らかとなることを示している(第1図)、より伝
い比率では、5%しよ糖勾配の上部でインドメタシンはリポソーム構造と全く一
緒に沈殿する。したがって、全ての続く研究において、約6:1重量比、即ち約
2.6:1モル比のより高いリン脂質/インドメタシン比が採用された場合、外
生の非ステロイド性抗炎症薬の本来の欠除を伴って、薬剤の完全なカプセルによ
る包囲を保証する。約50:1の重量比がまた好ましく、20:1の比が最も好
ましい。
各非ステロイド性抗炎症治療剤は1本来、外生の治療剤の存在しない製剤におい
て、特に好適な脂質:薬剤モル比および重量比を持つことが理解されるべきであ
る。しよ糖勾配もしくは他の適当な試験による簡単な試験は1本来、外生の非ス
テロイド性抗炎症治療剤が存在しないリポソーム製造するために、どのような反
応条件に対しても適当な脂質:薬剤比を制限しない、効果のあるリポソームにカ
プセル包囲された治療剤が投与することができ。
一方で外生の非ステロイド性抗炎症治療剤が約30重量%より高いレベルで本来
存在しないかぎり、潰瘍および胃への刺激は実質的に軽減される。外生の非ステ
ロイド性抗炎症剤に関する限定は。
この発明の臨界的な限定である。非ステロイド性抗炎症治療剤の治療的に有効な
投与量は、望ましい生理的反応が見られる投与量と理解されるべきである。
好ましい具体例におけるインドメタシンについては、約0.5〜4■/kgで投
与されるものの約25%より多くない外生の投与量が利用される。一般に外生の
非ステロイド性抗炎症治療剤が限定されればされるほど、一般的な胃腸への刺激
および全体的な胃腸障害が少なくなる。各非ステロイド性抗炎症治療剤は特別の
リポソーム内への異なった取り込み効率を有するであろう、リポソームによる取
り込みが過剰の外生の非ステロイド性抗炎症治療剤を避けるためには不十分であ
った場合には、リポソーム製剤は洗浄することができる。
この発明のリポソーム製剤は、該製剤の十分な時間、十分な速さの遠心分離によ
りリポソームを沈殿させるが本来の姿を失わせることなく、過剰の外生の非ステ
ロ、イド性抗炎症治療剤を洗い出すことができる。この上清液は傾射法にてうつ
し、リポソームは生理的食塩水もしくは他の水性媒体に再懸濁する。この操作は
十分な外生の非ステロイド性抗炎症治療剤が除去されるまでくり返される。
過剰の外生の非ステロイド性抗炎症治療剤を除去するための、透析もしくはゲル
ろ過のような他の方法が適当であり、当業界でよく知られている。
本発明の組成物および方法は、非ステロイド性抗炎症治療剤を用いて治療した時
に生ずる1人間を含めた哺乳類への副作用を減少させるために有用である。この
効果のいくつかの測定は、以下に記載するように急性および慢性の潰瘍試験によ
って行われる。
ラット(ウィスター、 Vistar)における胃潰瘍は、インドメタシンのよ
うな非ステロイド性抗炎症治療剤の前に約18〜24時間飢餓状態とした動物に
経口もしくは皮下投与によって急激に引き起こすことができる。経口の研究のた
めにはインドメタシンを使用するのが便利であるが、他の非ステロイド性抗炎症
治療剤が同様に用いられる。このモデルは他の非ステロイド性抗炎症治療剤およ
び他の哺乳動物の試験にも有用である。このモデルにおいて。
他の剤および哺乳類に対し単に投与量を変えることによって、胃潰瘍を引き起こ
すであろう、胃潰瘍の工程成績表と違って、それは、インドメタシンによっ゛て
誘導された腸損傷のような非ステロイド性抗炎症作用が生ずるために、動物には
この研究の間、自由に食料や水を摂らせなければならないことを示している。
胃における抵抗性のない(CH8tおよびT)(St)(“t”はトリス塩を示
す)リポソーム内にカプセル包囲されたインドメタシンおよび胃において抵抗性
のあるリポソーム(卵ホスファチジルコリンM P V s )中のインドメタ
シンと比較して、PEG−400中のインドメタシンの種々の投与量でラットに
p、o、投与したものを観察した急性の胃潰瘍効果が第3表に示されている。
薬がP E G−400賦形剤中に完全に溶解された時、実質的に投与に対応し
た潰瘍が生じた0体重−に対し10■のインドメタシンの最高投与量で、平均2
5−の全潰瘍長さが得られた0個々の実験において、この数値は45■の長さに
まで達した。リポソーム製剤において、インドメタシンは十分にその膜中に溶解
された;そしてP E G−400賦形剤と違って1本来外生の薬剤を担持して
いない胃において抵抗性のあるインドメタシン−E P CM P V sの水
溶液は薬の最低量で完全な保護を与えることができ、長期的投与ではより高い投
与量で75%を越えた保護を与える。インドメタシン−CH3tリポソーム類も
しくはインドメタシン−TH3tリポソーム類は両者ともGI管における酸性条
件に感受性であり、薬の最大の投与量で意義ある胃の保護を与えることはなかっ
た。CH3tリポソーム類もしくはインドメタシン−TH3tリポソーム類のよ
うな脂質は共にGI管における酸性条件に感受性で、薬の最大の投与量で意義あ
る胃の保護を与えることはなかった。CHSt(コレステロールヘミサクシネー
ト トリス)およびTH8t (トコフェロールヘミサクシネート トリス)の
ような脂質を代表する脂質は胃において抵抗性ではない。
第4表から分るように、実質的な腸潰瘍はP E G−400中インドメタシン
の続く、くり返しの投与から明らかである。潰瘍形成の阻止は、EPCMPV取
り込み物を4日以上同じスケジュールで投与したとき4*/kg薬剤経口投与量
において明らかである。
急性の胃潰瘍実験において見られるように、インドメタシンCH8tもしくはT
HStリポソーム類に導入されたとき、腸モデルシステムにおいて保護作用の欠
除がまた見られるのである。薬の胃における抵抗性のリポソームによる(M P
V)カプセル包囲によって得られた保護は、腸の損傷が長期投与の後、測られ
たときのP E G−400中の薬に比べて明らかに強調されている(第4表)
、第4表は更に、飽和脂質の背低抗性リポソームによってもたらされる潰瘍から
の保護は非水素化リポソームと少なくとも同等であることを示している。
実質的に飽和脂質を包含するこのようなリポソームのカプセル包囲された非ステ
ロイド性抗炎症治療剤の“調節された解放”が第2図に示されている。水素化大
豆ホスファチジルコリンのこの1調節された解放”パターンは、経口投与により
、全ての治療剤が受けるべき動物に配られる前にいくつかのリポソームが***さ
れるようなレベルのものである。勿論、この要因は、投与すべき量を選択すると
き、リポソームの***の前に十分な治療剤が恋人りにつくられて、動物による摂
取に対して胃腸管中での治療剤の望ましい利用性を獲得するように考慮しなけれ
ばならない。
各非ステロイド性抗炎症治療剤は投与量応答カーブを持ち、そ傷をつくらず、そ
のカーブより上ではリポソームによるカプセル包囲化と外生の治療剤の本来の欠
除が十分な保護をもたらさないことになるであろう、しかしながら、この発明は
、胃腸への刺激を減少させることにより、また潰瘍を回避もしくは減少させるこ
とにより、投与、特に長期的投与(約3もしくは4日、もしくはより長く)を促
進することを目的としている。インドメタシンについては、約2z/kgより低
い1日投与量は一般的に全体的な潰瘍をつくらず、胃腸への刺激を起こすことが
あり得る。この一般的なケースにもかかわらず1本発明で用いられるインドメタ
シンの経口的な人間への投与量は、非カプセル包囲製剤において用いられる投与
量と実質的に同じであり、一般に約1■/kgである。
これらの投与量は人間における胃腸潰瘍をつくるおそれがある。
ここで、引用されている投与量は、カプセル包囲されたリポソームから放出され
た後、摂取のために利用し得る治療剤に関している。実質的に水素化された脂質
からなるリポソームの場合には、治療剤を充分に放出する前にリポソームが排出
される。この事柄は投与すべき投与量を選ぶ際に考慮に入れなければならない。
非ステロイド性抗炎症治療剤の長期投与はこのような剤の使用に当って、よく知
られた方法である0例えば、関節炎の治療において、長期の投与は約3日ないし
4日の短期から治療を受ける人の生涯という長期にわたることもある。
薬剤製剤においては、非ステロイド性抗炎症治療剤を含有するリポソームを水も
しくは生理的食塩水のような薬学的に許容し得る希釈剤もしくは担体、あるいは
他の適当な担体もしくは希釈剤中に懸濁させる。典型的な製剤は、治療的に有効
量を含有する約1ないし10mfiの水溶液を含有する。インドメタシンを含有
する代表的なリポソームは約25■のインドメタシンをその少なくとも70%が
約5ないし6m11の水性媒質中にリポソームにカプセル包囲したものである。
N5AIDsは一般に親脂質性で、好適な薬剤的担体と順に組み合わせられ得る
リポソームの脂質部分内に分画さ九る。担体に対する活性成分の比例割合は、考
慮される投与量同様その化学的性質、溶解性および活性成分の安定性に依存する
のが普通である。
経口投与形態のためには1本発明のN5AID−リポソーム組成物は錠剤、カプ
セル、舐剤、トローチ、粉末剤、シロップ剤、エリキシル剤、水溶液および懸濁
剤等で用いることができる0錠剤の場合には、使用し得る担体はラクトース、ク
エン酸ソジウムおよびリン酸塩を包含する。澱粉のような種々の崩壊剤、ステア
リン酸マグネシウム、ソジウムラウリルスルフェートおよびタルクのような潤滑
剤が錠剤に一般に使用される。カプセル形態での経口投与に対し、有用な希釈剤
はラクトースおよび高分子量のポリエチレングリコールである。経口用に水溶液
が要求されるとき、ある種の甘味剤および/又は香味剤が添加され得る。非経口
的投与、即ち静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、耳内もしくは乳腺内注射のために
は、N5AID−リポソーム組成物の殺菌溶液を製造し、該溶液のpHを好適に
調整し、緩衝化する。静脈用には、溶質の総濃度を該製剤を等強性たらしぬるよ
うに調節すべきである。
それらの使用の他の例として、小胞体取り込み化合物は、ゲル。
オイル、エマルジョン等を含むがそれらに限定されることのない広範囲の局所投
与形態に導入されることができる1例えば、取り込まれた化合物を含有する懸濁
液をリポソーム製剤のいずれかの型(例えば5PLVs、MPVs、FATML
Vi、MLVs。
S U V s 、 L U V s 、 RE v s 、その他)に活性成
分として、その水溶液に添加され得る。これはリン脂質リポソーム中への水不溶
性化合物の取り込みを許容する。このような製剤は局所的クリーム、ペースト、
軟膏、ゲル、ローション等として、炎症を起こした部分に直接使用するために投
与することができる。
N S A X D sは、そのN5AIDにより1日に約20■から約320
0■の範囲で一般的に人間に投与することができる0例えば、インドメタシン投
与量は50−200■7日の範囲である。イブプロフェン投与量は1200−3
200■7日の範囲である。実際の投与量については、一般に医者によって決定
されるべきである。同様に、馬のような他の曙乳動物は、これらの化合物を2
z / kg /日−800電/日(体重に関係なく)の投与量範囲で投与する
ことができる。
例えば、馬に対するナプロキセン投与量は、経口投与による場合は、 10mg
/kg/日を2回に分けて与えるものである。先に述べた医者もしくは獣医は与
えられる患者に対し、適当な投与量を最終的に決定するが、これは患者の徴候の
特質およびひどさと共に個々の患者の年齢、体質および反応性により、変えるこ
とが予期される。
本発明のリポソームは脱水することができ、それによって使用するまで長期間の
貯蔵を可能にする。m準の凍結−乾燥装置もしくは同様の装置がリポソームの脱
水のために使用され得る。またリポソームはそれらを減圧下におくことによって
簡単に脱水することもできる。またその他、リポソームおよびそれらをとり囲む
媒体は脱水に先立ち液体窒素中で凍らせることができる。ジャノフ等の方法、米
国特許出願シリアルナンバー第759,419号、1985年7月26日出願2
発明の名称“脱水されたリポソーム”によれば。
まず凍結してからの脱水は、その製剤中に1もしくはそれ以上の保護する糖を有
することを包含し得る。使用され得る保護する糖の例としては、トレハロース、
マルトース、シュークローズ、グルコース、ラクトースおよびデキストランを包
含するが、これらに限定されることはない、またマルチラメラ小胞体類は、保護
する糖なしにまず凍結を行うことによって脱水され得る。脱水されたリポソーム
が使用されるべき場合、単に水溶液1例えば蒸留水をリポソームに添加しそれを
再水和せしめることによって再水和が達成される。
バリー(Ba11y)等の米国特許出願シリアルナンバー第749,161号1
985年6月26日出願1名称:リポソーム中への抗新生物発生剤のカプセルに
よる包囲の記載によれば、本発明のリポソームはイオン化し得る剤で遠かく的に
装てんし得る。この方法では、透過膜(transmambrane)ポテンシ
ャルは形成中にリポソームの二分子膜を通してつくり出され、イオン化し得る剤
はこの膜間ポテンシャルによってリポソーム中に装填される。このポテンシャル
はリポソーム膜を通じて1もしくは、それ以上の荷電種(例えば、Na令、に4
および/又はH” )に対し、濃度勾配をつくり出すことによって形成される。
この濃度勾配は異なった内部および外部の媒体、すなわち1もしくは、それ以上
の荷電種の異なった濃度を有す内部および外部媒体を有すリポソームを製造する
ことによってつくられる。このリポソーム類は薬剤を装填する前もしくは装填に
続いて脱水することができる。
本発明はN S A I D sの潰瘍発生特質を減少せしめ、このような薬剤
の効能を改善することができる。加えて、ストレスもしくはアルコールの摂取に
よってつくられる潰瘍に対して、本発明のリポソームにより保護が提供され得る
。
本発明の潰瘍保護の具体例において、遊離インドメタシンの潰瘍発生活性が、外
生のインドメタシンが実質的に存在しないリポソーム同様リポソームに取り込ま
れたインドメタシンのそれと比較された。
本発明の抗炎症生物活性の具体例において、リポソーム−薬製剤の効能が、浮腫
を形成する量のカラグリーナン(carageenan)をあらかじめ注射した
先の浮腫強度によっていくつかの具体例において測定された。
インドメタシンのような遊離のN5AIDの投与に続く浮腫の減少がリポソーム
に取り込まれたインドメタシン処理に続くそれと比較された。
これまで述べた記載から分るように、非ステロイド性抗炎症治療剤の治療的に有
効な投与量が胃に抵抗性のリポソームにカプセル化包囲されることができ、この
ものは非ステロイド性抗炎症治療剤療法に通常つきものの胃腸への刺激において
実質的に減少されているのである。胃への刺激の減少は非ステロイド性抗炎症治
療剤の約3日ないし4日を越える長期投与において最も顕著である。
治療法は一部は薬物で治療される哺乳動物、扱われる条件、特に使用される非ス
テロイド性抗炎症治療剤、また該リポソームが***の前に該治療剤を充分放出す
るかどうかによってかなり変ってくるであろう、非ステロイド性抗炎症治療の方
法について何らかのこれといった限定があるわけではないが、この治療はしばし
ば約0.1から10+ag/kg(放出されるものとして)の非ステロイド性抗
炎症治療剤を日に3回投与することにして、数日間から数年の間投与される0本
発明の胃に抵抗性のあるリポソームは経口投与剤として何か好適な薬剤担体に懸
濁して経口的に投与するのが最も便利であるが、何の制限もなく皮下、静脈およ
び腹腔内投与や他の公知の投与方法が同様に考えられる。これら一般的な変数に
もかかわらず、個々の治療的方法は医者により患者の年齢1体調および治療条件
を含めた沢山の要因に応じて個々に決めることができる。更に潰瘍もしくは刺激
が十分回避できなくとも、減少されるであろう。
予」口J
【L
1」」[1
ジガラクトシルジグリセライド(DGDG)の市販のものを得るか、もしくは新
鮮なほうれん草の葉から次の方法によって製造した:
100gのほうれん草の葉を11の細片に刻み、 300mmのイソプロパツー
ルと共に70−80℃のウェアリング(waring)混合機に入れ、この混合
物を2分間高速で混合した。得られたスラリーはファツトマン(Vhatman
) # 1フイルタ一紙の2層を通してろ過し。
そして、この残渣を200mmの熱イソプロパツールで洗浄した。
得られたフィルターケーキを混合機中に200mmのクロロホルム:イソプロパ
ツール(1:lv/v)と共に入れ、上のようにして混合した。得られた均質物
は上のようにしてろ過し、残渣を200mmのクロロホルム:イソプロパツール
(1:1v/v)で、続いて200mgのクロロホルムで洗う、このろ液を真空
中回転蒸発して脂質膜とした。この膜は続いて200mmのクロロホルムに溶解
し、次いでこの溶液を100mmの1%(重量:容積)塩化ナトリウムの水溶液
で分離用ロート中、3回洗った。この有機相を分離し、5mfiのベンゼンをこ
の有機相に添加した。この有機溶媒を真空中で除去して膜を製造した。この膜を
10mfiのベンゼン中に再懸濁し、そして、この分離と溶媒除去工程をくり返
した。この膜を25mAのクロロホルム中に懸濁して貯蔵した。
ジガラクトシルジグリセライドを上の膜懸濁液から次の方法によって精製した=
3時間、100℃で焼成することによって活性化した15gのサリチル酸を50
mj!のクロロホルムと混合した。このサリチル酸のスラリーを20cmX40
cmのカラムに詰め、この層をクロロホルムで2回洗浄した。脂質溶液175g
(5mΩ)をこのカラム中に装填し、この流出割合を1分につき3−5m1lに
調整したm 175mmのクロロホルムをこのカラムに流し、12mfiの分画
中の顔料を除去した;次いで70m 11のクロロホルム:アセトン(1:1v
/v)をこのカラムに流した;次いで700mmのアセトンを流した。最初の5
本の12m2の分画はMGDGを含有し。
分画9−14中のDG6Gがこれに続き、そして最終的には、捨てられた残りの
分画中にはリン脂質が含有されていた。このDGDGの純度はルーサー(Rou
ser)等の方法〔リピッドクロマトグラフィックアナリシス(Lipid C
hromatographic Analysis)。
デツカ−インコーポレーション、ニューヨーク1 t pp、 99−162゜
1967)により薄層クロマトグラフィー(“TLC”)を用いて分析評価した
。
TLCによって決定されたDGDGを含有する分画は一緒に集めら九、減圧下、
膜となるまで回転蒸発させて膜とした。クロロホルム(10mfi)を添加し、
この溶液を予め重量を測定したフラスコに移し、そして減圧下、膜となるまで回
転蒸発させた。脂質膜を含有するフラスコは再び重量を測定し、計算されたその
差がこの脂質の重量とされた。
本発明は次の実施例で具体的に示されるが1本発明はこれらに限定されることは
ない。
笑亙貫よ
ステロイド ′症゛ 1組 の製゛
ジガラクトシルジグリセライド(D G D G)(500■)(セルダリー
リサーチラボラトリーズ(Serdary Re5earch Laborat
ories)。
ロンドン、オンタリオ、カナダ、がら入手〕を5■/ m Qの割合でクロロホ
ルム中に溶かしたものを2511Igのインドメタシンと共により除去した。こ
の得られた脂質−薬剤膜にジエチルエーテル(5mQ)を添加して、この膜を再
懸濁させた。このフラスコを音波浴中に入れ、1.0mfiのPBS、pH7,
4を添加した。この溶媒を音波処理をしながらチッ素流の下、この溶媒を除去し
た。得られた脂質−薬剤ペーストをpH7,4で2.5m QのPBSを用いて
再水和した。得られたリポソームは10■/mQインドメタシンを含有した。
亙里工
′ の誘導 急性
20匹の225−250.の雄ウィスター(Vistar)ラットを薬剤投与前
18−24時間飢餓状態とした。ラットはこの研究の間中、水を摂取することが
許容されていた。遊離薬剤の対照グループの内の10匹のラットは、ポリエチレ
ングリコール400に7 rrrg / mΩの割合で溶解したインドメタシン
の1経口投与量を、そして10■/kg体重の割合で投与された。
投与の後、4時間したらラットは二酸化炭素による酸素欠乏症にて殺し、その胃
を心臓および幽門括約筋のところで切断することにより、外科的に除去した。こ
の胃をより少ない曲線に沿って切開、平らにして生理的食塩水で洗った。潰瘍の
長さを接眼測微計の付いた解剖顕微鏡(dissecting m1crosc
ope) (アメリカンオプティカル、バッファロー、ニューヨーク)の下で測
定し、この長さを足し算し、1回の処理グループにおける全ての動物に対する平
均をとった。
潰瘍保護は潰瘍長さくm=で)を足し、処理群の平均をとってこの値と遊離薬剤
投与群のその値とを比較することによって評価された。潰瘍阻止%はリポソーム
処理された群の潰瘍の平均長さを相当する遊離薬剤投与群の平均長さで割って、
100をかけることによって計算された。
ジガラクトシルジグリセライドで構成されている安定なプルリラメラベシクル類
(SPLVs)に取り込まれたインドメタシンをlO■/kg体重で用い、実施
例1の方法および物質が用いられた;潰瘍保護が実施例1のようにして測定され
た。第1表は、DGDGリポソーム中におけるインドメタシンの経口投与がイン
ドメタシンの潰瘍活性を遊離のインドメタシンのそれに比べて軽減させることを
示している。
亙凰菫又
ゑ皇立藍黒
8匹の約100gの体重の雌のウィスターラットは自由に食物と水を摂取するこ
とを許容されていた0毛のラインのちょうど下の右後足に入れ墨の線を入れた。
はじめの足の容積が、生理的食塩水を含有するトランスジューサー結合血管内血
量計(スチールティングコーポレーション、シカゴ、イリノイ)により測定され
た。
この装置はその足によって置き換えられた体積の結果生じる2つの電極間の電気
的荷電の違いによってその足の容積を計るものである。トランスジューサーはこ
の荷電の違いを置換された容積の立方センチメートルに直す、パースペックス(
perspeス)セル中に足をその書かれた線の所まで浸したあと、この置換容
積を直接測定したものが記録された。
ラットはポリエチレングリコール400中のインドメタシンを2■/kg体重の
割合で経口投与された。
30分間の処理後、ラットは生理的食塩水(0,1MNaCΩ)中1.5%のカ
ラグリーナン0.1mΩを1足裏のふくらみの部分に直接注射された。このカラ
グリーテン投与後2.5時間で、この足の容積が再び測定された。この浮腫の強
さくEI)が測られた:浮腫強度=最終足容積−はじめの足容積はじめの足容積
そしてこの8匹のラットの平均がとられた。
8匹のラットの足容積の平均がとられ、その膨張阻止パーセントが測定された:
%膨張減少:
非処理対照の平均EI−処理された群の平均EI叉夏鼠l
迩IL皺
DGDGでつくられたS P L V sに取り込まれたインドメタシン2■/
kgを用いて、実施例2の方法および物質が採用された。
ラットはこのリポソームを経口的に投与され、膨張軽減%が実施例2のようにし
て測定された。第2表は、遊離のインドメタシン(実施例2)とDGDG−リポ
ソームが取り込んだインドメタシンをこの急性力ラグリーナン足浮腫モデルにお
ける。比較し得る膨張軽減を示している。
大里班土
呈水ス二Al1
200、の脂質を含有する非ステロイド性抗炎症治療剤の製剤を5m皿のエタノ
ール中に溶解した。この溶液に10■のインドメタシンを添加した。得られた溶
液に0.6m皿の生理的食塩水を添加し1次いでこの溶媒を回転蒸発により除去
して膜を残した。
この膜を再懸濁してインドメタシンの所望の濃度でリポソームを形成した。対照
3のリポソームとしてこの物質は2mQの最終的容積とされ、対照4のリポソー
ムについては5m皿とした。
1に鼠旦
5PLV リポソーム ベシクル の ゛フラスコ中で18.48.のインドメ
タシンと369.6 gの卵ホスファチジルコリンを1,848m mのメチレ
ンクロライド中に室温で溶解し、このものに1,108m1!の生理的食塩水が
添加された。この脂質相を溶媒が除去されるまで真空下撹拌しながら留去した。
得られた物質に生理的食塩水を加えて最終容積を3,186リツトルとした。こ
の調製物を投与用に用意した。
ヌ〕1暦」−
“ :Iポソームに 番゛んだ/ の、 ステロイド炎り徒東旦
この実施例においては、 0.25u Ciの′4C−インドメタシンが、実施
例4の方法によって製造された15〜25■の間で変化するインドメタシンを含
有するリポソームの100■製剤中に含まれていた。リポソームの水性相は10
mMのカルシウムを含有するリンゲル生理的食塩水0.3m Qの標本を含んで
いた。これらの標品を連続的Iomfl 、 5−20%シュークローズ勾配ニ
カけ、28g、0OOX g テ2.5時間遠心分離した。このテストの個々の
結果を第1@に示す。
この方法または他の方法により外生の非ステロイド性抗炎症治療剤のパーセンテ
ージを決定するための特定条件は当業者によく知られている。
ヌ】11L
リポソーム の製′
25.000gでの遠心分離を1時間行った後、5mΩの生理的食塩水で3回洗
浄した実施例6のリポソーム製剤は5%より少ない外生のインドメタシンしか持
たない。
並艮匠l
゛ 1、
約211Ig/kgから10■/kgの間の投与量でインドメタシンが0.5m
ΩのPEG−400,賦形剤中で、あるいは200■/−のリン脂質投与量での
リポソームに導入した形で与えられた。試験剤を経口投与後、4時間で動物を二
酸化炭素による酸素欠乏症により殺し、その胃を切り取った。I!Ii織的に誘
導さ九た胃潰瘍のために0゜5mfl中4■/kgおよび50■/kgの間のイ
ンドメタシンを0.5mQ中に溶解したP E G−400投与量が非経口的に
投与された。続く実験に対して30電/kgの投与量が最大の反応を誘導するこ
とが見出された0組織は生理的食塩水中でさっと洗浄し、その内側の粘性表面を
顕微鏡評価のために平らにおいた。目で見える潰瘍は接眼マイクロメータの付い
た解剖顕微鏡(AOオプティカル、バッファロー、NY)を用いて計数した。こ
のテストを用いた結果は潰瘍のミリメートルおよび処理が終った後の潰瘍阻止パ
ーセントで表わされた。全ての研究に対し、1実験群につき最小限10匹の動物
が採用された。実験は3回行なわれ、それによって1グループにつき最小限30
匹が使われていた。
対照例4
腸の゛ の 導 ・
賦形剤中もしくは単相小胞体中の約4■/kgでのインドメタシンの1日に1回
の経口投与を4日間にわたって行った。この例での試験動物はラット(ウィスタ
ー)であった、第5日月に全部の長さの腸が切り出され、付着している腸間膜出
口の反対側で切開された。その粘性表面は生理的食塩水で洗浄し、その潰瘍(穴
もふくめで)を述べたようにしてミリメートルの単位で測定するか。
損傷の全面積を決定することによって測定した。この測定は、引管付属部でSR
立体解剖am鏡〔ツァイス(Zeiss))に光学的に結合したプラニメーター
〔ツィダス(Zxdas) tカールツアイス、***〕によって行なわれた。こ
の例では結果は処置が行われたときの潰瘍面積の全輪8として、また潰瘍の阻止
パーセントとして表わされた。平均値は少なくとも2回の実験からの1群につき
最小限5匹の動物に基き計算された。リポソーム処理された動物におけるよりも
賦形剤中に溶解したインドメタシンを飲んだラットについて20−30%高い死
亡率が観察された。しかしながら、模擬の賦形剤は動物に対して毒性がなかった
。明らかにこの方法は、当業者によって他の非ステロイド性抗炎症治療剤および
他の動物にも容易に応用し得る。
1直■且
ヒ1ボソームを い二 の ′および
飽和および不飽和リポソームの比較のための3種の製剤が実施例5の方法によっ
て製造され、その各々は治療剤としてのインドメタシンを含有していた。これら
は(a)5g のEPCおよび100mgのインドメタシン、(b)5gの水素
化大豆ホスファチジルコリンおよび100■のインドメタシン、および(c)3
.35gの水素化大豆ホスファチジルコリン、 1.645g のコレステロー
ルおよび100■のインドメタシン、からつくられたリポソーム類であったー
得られたリポソーム類は10■/kgの投与量で経口的にラットに投与され、高
圧液体クロマトグラフィーにより24時間にわたってインドメタシンの血中レベ
ルが決定された。第2図に示された結果は、胃に抵抗性のリポソーム中での経口
投与の後、非ステロイド性抗炎症治療剤が血中に放出されて行く明白な血中レベ
ルの様子を示している。水素化さ九た大豆ホスファチジルコリンは、より低い飽
和度の他のリポソームの特徴たるプラズマピークのない“制御された放出”を示
している。この放出パターンは、いくつかのリポソームは、胃腸管から摂取され
る投与量を得るために投与されるべき投与量を選択する際に考慮されねばならな
い全治療剤が体内輸送される前に、排出されてしまうことを示している。
前述の記載は単に本発明を示すものである0本発明の他の例は当業者に直・ちに
明らかであろう、いずれの非ステロイド性抗炎症治療剤も単独もしくは他のもの
との組合せで、いずれの背低抗リポソームにでもまず取り込まれて使用し得るこ
とが特に理解されるべきである。
第1表
インドメタシン−DGDG
SPLVs 10 1.1 97.5
第2表
遊離インドメタシン 2 37.2
第3表
賦形剤中もしくはリポソーム中におけるインドメタシンの短期経口投与からつく
られる胃潰瘍の比較匠)4■中の 2 1,1±0.3−
インドメタシン 4 3,4±0.8−6 9.7±1.2−
8 22.3±3.4−
10 25.3±2.6−
イントメタシンーEPc20100
リポソーム 4 0.8±0.3 76.46 1.8±Q、681,4
8 3.3±0.g &)、2
IQ 3.6±1.1 &)、フ
ィントメ9シン−0TSt 10 2g、7 + 4.8 (−)13.4リポ
ソーム
インドfi ’i シ>TH5t 10 19.4±4,4 23.3★平均の
標準誤差
第4表
賦形剤中もしくはリポソーム中のいずれかにおけるインドメタシンの4日間の長
期経口投与に続く腸の潰瘍の比較e℃−リポソーム 4 91.4士 部、4
86.1ctstリポソーム4 1084.20 + 150.6 (−) 6
4.5THStリポソー4 4 398.6 :l= 230.7 39.5j
PjL図
第2図
投与後の時間
国際調査報告