JPH01254771A - 新規チオローダミン及びその新規製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野］ 本発明は新規のチオローダミン及びチオキザントンから
のチオローダミンの製造方法に関する。

〔従来の技術〕

構造式（１） で表されるローダミン１２３は化学療法剤として知られ
ている。この化合物の通常の合成方法は、以下の反応（
２） を実施した後、場合により酸をエステル化し、そして精
製を行うことからなる。しかしながら、これを生体内で
用いるには、充分な天然又は固有の細胞毒が欠如してい
るので、例えば高体温又は感光エネルギーによる活性化
が更に必要であった。

この化合物は優れた水溶性薬物動態性及び生体分散性を
有し、ローダミン類の一般的分類に沿って広範に用いら
れてきた。

〔発明が解決すべき課題〕

ローダミン類の望ましい水溶性を有すると共に向上した
細胞毒性を有する化合物が、本発明以前から探求されて
いた。オキサ複素環式化合物のチオ類似体が、改良され
た細胞毒性を有することを示唆する若干の証拠は本発明
以前から存在したが、前記の反応（２）に示した通常の
方法を用いて弐（１）の化合物のチオ類似体を製造する
ことはできなかった。

〔課題を解決するだめの手段］ 本発明の１つの観点によれば、前記の課題は、構造式 （式中、Ｒ及びＲ３は相互に独立して水素原子又は炭素
原子１〜５個のアルキル式であり、そしてＺはアニオン
である） で表されるチオローダミンによって解決される。

本発明の別の観点によれば、前記の課題は、（ａ）構造
式 （式中、Ｒは前記と同じ意味である） で表されるチオキサントンと式 （式中、Ｒ２は炭素原子１〜５個のアルキル基である） で表される化合物との間で付加反応を行い、（ｂ）工程
（ａ）で得られた化合物を強酸中で脱水して９−（２−
オキサゾリニルフェニル）−チオキサンチリウム塩を形
成し、 （Ｃ）１２１２９７９７１口を酸で加水分解して９−（
２−カルボキシフェニル）チオキサンチリウム塩とし、
そして （ｄ）場合により、工程ＣＣ）で招、られた化合物を、
炭素原子１〜５個のアルカノール及び強酸中でエステル
化する 各工程を含む、前記構造式で表されるチオキサントンか
らのチオローダミンの製造方法によって解決される。

本発明者は前記の構造をもつ新規チオローダミンを調製
することができることを見出した。前記の構造式におい
てＲ及びＲ５は各々独立して水素原子又は炭素原子１〜
５個のアル；トル基である。

Ｒの場合、「アルキル基」は非置換の直鎖又は分枝アル
キル基を意味し、例えばメチル基、エチル基、プロピル
基、イソプロピル基、ブチル基、ペンデル基等を挙げる
ことができる。Ｒ１の場合に、アルキル基はＲと同じ非
置換のものを含むと共に、置換アルキル基（置換基はア
リール基例えばフェニル基から選ばれ、例えばフェネチ
ル基又はヘンシル基となる）も含まれる。

ｚｅのアニオンとしては多種類のものが有用である。例
えば、ハライド例えばクロライド、ブロマ・イド、ヨー
シト及びフルオライド；スルホネート例えば脂肪族及び
芳香族スルホネート例えばメタンスルホネート、トリフ
ルオロメタンスルホネート、ｐ−１ルエンスルホネート
（トシレート）、ナフタレンスルホネート及び２−ヒド
ロキシエタンスルホネート；スルファメート例えばシク
ロヘキサンスルファメート；スルフェート例えばメチル
スルフニー１−及びエヂルスルフェート；ビスルフェー
ト；ボレート；テトラフルオロボレート；ペルクロレー
ト；ニトレート；アルキル及びジアルキルホスフェ−１
・例えばジメチルホスフェート、ビニチルホスエート及
びメチル水素ホスフェート；ピロホスフェート例えばト
リメチルピロホスフェート及びジエチル水素ピロホスフ
ェート；及びカルボキシレート好ましくはカルボキシ置
換及びヒドロキシ置換カルボキシレートである。カルボ
キシレートの好ましい例としては、アセテート、プロピ
オネート、バレレート、サイトレート、マレエート、フ
マレート、ラクテート、スフシネ−ｊ〜、タートレート
及びベンゾエートが含まれる。

最も好ましいアニオンはハライドであり、特にはクロラ
イドである。なぜなら、それらは他のアニオンと比べて
色素により大きな水溶性を付与するからである。

前記のチオローダミン化合物の最も好ましい例は、３．
６−ビス（ジメチルアミノ）　−９−（２＝メトキシカ
ルボニルフエニル）チオキサンチリウムクロライドであ
る。

これらの化合物は、標準としてのローダミン６Ｇに対し
て測定した場合に約５０％の相対量子収量ををする蛍光
色素として有用である。

更に、これらの化合物は細胞毒の向上から、特に固体腫
瘍の処理に用いる化学療法剤としてを用である。ローダ
ミン１２３と比較した場合の改良された又は向上した細
胞毒は試験管内テストから明らかである。

本発明のチオローダミンのＩＣｓ。濃度を確認するため
に実施した方法を以下に述べる。（ＩＣ５゜は腫瘍の生
長を５０％阻害する試験管内のモル濃度である。この濃
度が低い程、毒性が高い。）ヒト結腸癌及びヒト肺癌ラ
インのＩＣ６゜値に関しては癒着性単層培養を用いた。

平板培養の前の２日間、アメリカン・タイプ・ティシュ
−・カルチャー・コレクションから得た多数の細胞を選
んでストックとして生長させた。試験管内テストの時ま
でに細胞がそのプラトーに達しないことを保証する故と
した。分析の１日日において、前記のストックから非同
調的対数的生長細胞を選び、コラボラティブ・リサーチ
（Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）か
ら得た５％（ｖ／ν）ウシ胎児血清及び５％（ｖ／ν）
ＮＵ血清を補充したＲｒ’旧１６４０培地並びに２０ｍ
Ｍ１１ＥＰＥＳ　バッファーすなわち４−（２−ヒドロ
キシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸からな
る通常の完全培地中に懸濁させた。２重供給マニホルド
を備えたＣｅｔｕｓ／Ｐｅｒｋｉｎ　ＩＥＩｍｅｒ自動
ピペット装置を用いて通常の９６穴組織培養仮に平板培
養させた。次に、５％ＣＯ２を含有する湿潤雰囲気中で
、細胞を４８時間３７°Ｃでインキュベーションした。

続いて、５％ＣＯ□含有の湿潤インキュベーター内で、
量を変化させた供試化合物の存在下で３７℃において３
時間赤色光下で細胞をインキュベーションした。６６−
１ｏ範囲の濃度に互って化合物をテストした。３時間後
、薬品処理した細胞を前記の完全培地で１回洗浄し、４
細胞倍加時間（このセルラインの場合には約７日間）を
達成するのに適した時間、完全培地中でインキュベーシ
ョンした。培地を除去し、リン酸緩衝化塩水を（ＰＢＳ
）（カルシウム又はマグ不シウムカチオン不合）中に溶
解させた０、　１％（ｗ／ν）中性赤色色素によって９
１１６．８５で３７゛Ｃにおいて１〜２時間細胞を染色
した。同じＰｌｕｓで細胞を２回洗浄し、乾かした。渦
動の中性赤色色素は、１％（ｖ／ｖ）氷酢酸中の５０％
（ｖ／ｖ）エタノールで各ウェルから溶出した。各ウェ
ルの吸光度は、５４０ｎｍにセントしたＰｅｒｋｉｎ−
Ｅ１ｍｅｒ吸光度濃度計を用いて定量した。成る濃度の
化合物における細胞生長阻害率（％）は以下の式から計
算した。

ここで、Ａｔは薬品候補化合物で処理した細胞の吸光度
、Ａｕは溶媒だ−すで処理した対照の吸光度、そしてＡ
ｂは培地及びウェルだシナ（バンクグラウンド）の吸光
度である。これらの結果をＦ　（ｘ）対供試化合物の対
数濃度としてプロットした。次に、プロットしたデータ
を、関数 Ｆ　（ｘ）−１００−（１００（ｘ／Ａ）Ｂ／（１±（
ｘ／Ａ）Ｂ）］〔ここで、Ｘは供試化合物の濃度であり
、ＡはＩＣｓ。値（プロット上の５０％阻害）であり、
そしてＢは適合させた関数の指数である〕の曲線に適合
させた。

プロトコールに続いて、３，６−ビス（ジメチルアミノ
）−９−（２−メトキシカルボニルフェニル）チオキサ
ンチリウムクロライド（後記製造例４）を、ヒト肺腺癌
及びヒ１〜結腸癌に対してテストした。対照としてロー
ダミン１２３　もテストした。

ＩＣ６゜値は以下のとおりである。

製造例４’０．８１μモル　　　　０．８１μモルロー
ダミン１２３　　＞１２．５μモル　　　＞１２．５μ
モル（＊）製造例４の化合物はマウスの白血病の治療に
おいてローダミン１２３より優れていることは観察され
なかったが、白血病よりも固体１Ｉ１１席に対して、明
白な癌に対する有用性がある。

令−」戊 本発明以前においては、これらの化合物の製法は知られ
ていなかった。すなわち、前記式（１）の化合物の製造
に用いる方法は、米国特許筒３．６８７，６７８号の記
載にもかかわらず、チオ類似体の製造に用いることはで
きなかったと思われる。

ずなわら、ローダミン１２３の製造に用いる前記（２）
の方法は、これを前記出発材料のチオ類似体に適用する
と失敗する。なぜなら、出発フェノールのメルカプ１類
似体及び無水フタル酸はチオ上１−ダミンを生成しない
からである。

本発明の別の観点によれば、前記の本発明方法が見出さ
れた。この方法において、Ｒ及びＲ２は独立して水素原
子又は炭素原子１〜５個のアルキル基例えばメチル基、
エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基及び
ペンチル基である。

工程（ｂ）の強酸は好ましくはフン化ホウ素酸であり、
工程（Ｃ）の強酸は好ましくはｌｌＣｆである。

以下の製造方法を以下に説明する。

この製造例は従来のものである。アセトン１５ｍｌ中の
３．６−ヒ′ス（ジメチルアミノ）チオ＝Ｉ−サンテン
７２０：ｎｇ（２，５ミリモル）の’ｔ８　Ｑ＆に、過
マンガン酸カリウム１．１９ｇ（７，５ミリモル）を滴
加した。

混合物を室温で一晩かきまぜた。固体の二酸化マンガン
を’ｄＷ　ｉＵし、クロじ１ホルムで洗った。得られた
ｄ、？液から生成物２２０　ｍｇが得られた。クロロホ
ルムで二酸化マンガンを５ｏｘｌｅｔ抽出したところ、
冷却後に更に生成物４４０　ｍｇが得られた。両分を一
諸にしてフランシュクロー２１−グラフィー処Ｅｌ（２
，１：Ｉ　Ｃ１１２ＣＩ２　ｚ　／　ＥｔｏＡｃ）　し
たところ、ｇ＋ｔ＋ｒｙ、＋、ｘ　３　、６−ビス（ジ
メチルアミノ）チオキサントン５５０　＋ｎｇ（７３％
）が得られた。

この化合物も従来法と同様にして、乾燥テトラヒドロフ
ラン（ＴＩＩＦ）　７５瀬中の２−（２−ブロモフェニ
ル）−４，４−ジメチル−２−オキサゾリン１．５５ｇ
（６，１ミリモル）の溶液に一７８°Ｃで、初期反応温
度を一７０°Ｃ以下に保つ速度で、１．７　Ｍ（１２，
２ミリモル）Ｌ〜プチルリウチム７．４　ｍｌを加える
方法によって１シソ造した。

一６０°Ｃにおいて乾燥ＴＩＩＰ　５０ｍ１！中の製造
例１の化合物１．４　ｇ（４，７ミリモル）の）代濁液
に、カニユーレを介して、製造例２の反応混合物を摘加
して移すことにより、製造例１の化合物に製造例２の化
合物を加えた。添加終了後、冷却浴を除去し、反応混合
物を放置して室温に暖めた。２時間かきまぜて９−（２
−オキザゾリニルフェニル）チオキサンチリウム塩を形
成させた後、４９％フッ化ホウ素酸（水中）３ｍｇ！、
を滴加し、続いて無水ジエチルエーテル１００雁を迅速
に滴加した。固体を濾別し、エーテルで洗って、生成物
２．３８ｇ　　（９３％）を得た。フラッシュクロマト
グラフィー（１０：ＩＣ１ｌ　２ＣＩ！、ｚ　／　Ｍｅ
Ｏｌｌ　（４９％フン化ホウ素酸０．５％を含む）〕に
よって分析用試料を精製した。

この化合物は新規である。更にイオン交換Ｇこよって別
の塩も製造することができる。

実施例１の反応生成物（１ｇ）を無水メタノール１００
ｍ１中でａ？Ａし、この中へガス状１１Ｃ！を定期的に
２４時間に亘って通気し、前記製造例３で形成したオー
１−サヅリン環を加水分解した。この溶ｆ（１を外部か
らＯ″Ｃへ冷却し、激しく撹拌してし）る２０％Ｎ　ａ
　Ｏｔｌ冷液中へ徐々に注いだ。得られた沈殿を濾別し
、水で洗い、空気乾燥して遁；１［酸形の目的化合ＩＭ
Ｏ，ｃｉ８．．をｔＨＨ′Ｆだ。フラッシュクロマ１−
グラフィーによって分析用試料を得た。融点２６８〜２
６９°Ｃ０ＦＤｍ／ｅ　４０２　（ＭＬ）；　’ＩＩ　
ＮＭＲ（ＣＤＣＩ！、：＋）６２．９８　（ｓ、　１２
１１゜ＮＭｅ）、　ｔ３．４８　（ｄｄ、　Ｊ＝２．６
．８．９１１ｚ、　２１１）、　６．７６　（ｄ。

Ｊ＝２．５１１ｚ、　２１１）、　６．８８　（ｄ、　
Ｊ＝８．９１１ｚ、　２１１Ｌ　７．５９（ｍ、　　３
１１）、　　１３．０　　（ｄ、　　Ｊ＝７．４１１ｚ
、　　ＩＩＩ）。

夫庭斑主：３，６−ビス　ジメチルアミノ　−９続いて
、実施例２のカルボキシ１−１−　（Ｄ）８０ｍｇをメ
タノール中の５％ＨＣｆｆｉ５ｍＲ中で１８時間還流し
た。真空下でメタノール性＋ＩＣ／！を除去した後、残
留物をジクロロメタン中へ溶解し、フラケル（３２〜６
０ミクロンサイズ）カラムを通して最初はアセトニトリ
ル及びメタノールを用いて非エステル化出発材料を除去
した。次に、生成物を、θ＝ＩＩＣｆ４滴を含有するア
セトニトリル二メタノール（１：　１　　ｖ／ｖ）　１
００ｍｆで溶出し、純粋なチオローダミン（Ｅ）８５ｍ
ｇを得た。Ｆ、Ｄ、ｍ／ｃ　４１７（Ｍ”）；’ＩＩ　
ＮＭＲ（ＣＤＣＬ／ＴＭＳ）δ３．３１　（ｓ、　１２
１１．　ＮＭｅ）　、　３．５９（ｓ、　３１１．　Ｃ
ＯｚＭｅ）、　６．９３　（ｄ、　Ｊ＝９．４１１ｚ、
　２Ｈ）、　７．１６（ｄ、　　Ｊ＝９．４１１ｚ、　
　２１り、　　７．２９　　（ｓ、　　２１１Ｌ　　７
．７　　（ｍ、　　３Ｈ）。

８．２９　（ｄ、　Ｊ＝７．４Ｈｚ、　ＩＩＩ）。

Ｘ−□り缶貫↓二３，６−ビス　ジメチルアミノ−９−
色素として以下の性質をもつことが分かった。

相対量子収率は前記のとおり（具体的には４９％）であ
った（Ｓｔ”ＥＸ　Ｆｌｕｏｒｏｌｏｇ　Ｉｔ分光光度
計を用いた）。

色素として以下の性質をもつことが分かった。

５６３ｎｍ　　　　２４．５４０　　　　　５６２ｎｍ
　　　５９０ｎｍ相対星子収率は４９％であった。

〔発明の効果〕

ローダミン化合物の水溶性とチオ化合物の細胞毒性とを
有するチオローダミン化合物を提供することが本発明の
有利な技術的効果である。

新規の蛍光色素を提供することも本発明の有利な技術的
効果である。

前記化合物の製造方法を提供することも本発明の有利な
技術的効果である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、構造式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ及びＲ＿１は相互に独立して水素原子又は炭
   素原子１〜５個のアルキル基であり、そしてＺはアニオ
   ンである） で表されるチオローダミン。 ２、（ａ）構造式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒは水素原子又は炭素原子１〜５個のアルキル
   基である） で表されるチオキサントンと式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＿２は炭素原子１〜５個のアルキル基である
   ） で表される化合物との間で付加反応を行い、 （ｂ）工程（ａ）で得られた化合物を強酸中で脱水して
   ９−（２−オキサゾリニルフェニル）−チオキサンチリ
   ウム塩を形成し、そして （ｃ）オキサゾリン環を酸で加水分解して９−（２−カ
   ルボキシフェニル）チオキサンチリウム塩とする 各工程を含む、前記構造式で表されるチオキサントンか
   らのチオローダミンの製造方法。