JPH01199589A - 発酵法によるｌ−リジンの製造法 - Google Patents

発酵法によるｌ−リジンの製造法

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JPH01199589A
JPH01199589A JP63023542A JP2354288A JPH01199589A JP H01199589 A JPH01199589 A JP H01199589A JP 63023542 A JP63023542 A JP 63023542A JP 2354288 A JP2354288 A JP 2354288A JP H01199589 A JPH01199589 A JP H01199589A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は発酵法によるＬ　−リジンの製造法に関する。
Ｌ　−リジンを飼料、医薬品７食品など広い分野で種々
の用途を有する。
従来の技術 従来、コリネ型グルタミン酸生産菌の各種栄養要求性株
や、各種薬剤耐性株、各種薬剤感受性株などによるＬ−
’Ｊリジン製造法が知られている。
また抗生物質耐性株を用いる方法（Ｉｌ、　Ｓ、　Ｐ　
３ｆｉ８７８１ｆｌ）や、バチルス属細菌の生産ずろ抗
菌性物質に耐性を有する菌株を用いる方法（特開昭５９
−１ｆｉ９４９７＞も知られている。
しかしながら、イツリン類縁物質に対して耐性を有する
菌株についての報告はない１．また、特開昭５９−１６
９４！１７に記載されたバチルス属細菌の生産する抗菌
性物質に耐性を有する菌株を用いる方法において、その
目的とするところはバチルス属細菌の混入によるリジン
生産菌の生育阻害の防止であり、リジン生産菌のリジン
生産能向上を目的とするものではない。
発明が解決しようとする課題 飼料、医薬品１食品またはその原料など広い分野で種々
の用途を有するＬ　−リジンを工業的に安価に製造する
方法の開発が望まれている。
課題を解決するだめの手段 本発明者は、Ｌ−リジンを工業的に安価に製造するため
に、発酵法によるＬ−リジンを製造法について鋭意検ｉ
＝１を行った。その結果、ｌ−−ＩＪリジ生産閑の生産
能が、イツリン類縁物質に対する耐性を付与することに
より向上することを見出し本発明を完成した。
以下に本発明の詳細な説明する。
本発明は、コリネ型りルタミン酸生産閑に属し、イツリ
ン類縁物質に耐性を有し、かつＬ　−リジンを生産能有
する微生物を培地に培養し、培養物中にＬ　−リジンを
生成蓄積させ、該培養物よりＩ−−−リジンを採取する
ことを特徴とする発酵法によるＬ−リジンを製造法を促
供する。
本発明でいうイツリン類縁物質とは、バチルス属細ｆＭ
ｉの生産する抗生物質であり、イツリン−Δ。
イツリン−Ｃ，マイコスチリン、ハンロマイシン−Ｌな
とがイ列示される〔ハイオニ１−ミカ・工・ハイオフイ
シ力・アクタ（Ｂｉｏｃｈｉｍ、　　ｌ］１ｏｐｈｙＳ
、八ｃｔａ）６８４　、　２０７〜２１１（１９８２）
　ｌ］。
本発明の変異株の親株としては、コリネバクテリウム属
またはブレビバクテリウム属などのコリネ型りルタミン
酸生産菌に属し、リジン生産能を有する菌株ならいずれ
でもよい。具体的にはコリネバクテリウム・グルタミク
ムＨ−３１４９（微工研条寄第１５８号）およびコリネ
バクテリウム・グルタミクム＋１−４４１２　（微工研
条寄第１０６９号）などが挙げられる。
本発明における変異株の誘導は、例えば」１記親株をＮ
−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソクアニンン２５
０Ｊ１ｇ／ｍｌで３０℃、３０分処理し、親株が生育阻
害を示す濃度のイツリン類縁物質を含む最少培地寒天平
板」二に生育する変異株を取得することにより行うこと
ができる。このようにして取得したイツリン類縁物質に
対する耐性変異株を培養し、Ｌ　−リジンを生産能調べ
ることによりＬ−リジンを産能が向」ニした変異株を分
離することができる。
以下に親株および親株より誘導したイツリン類縁物質（
イツリンＡおよびイツリンＣの１＝１混合物）耐性変異
株の例を示す。
チアリジン耐性、リファンピシン耐性。
ストレプトマイノン耐性、６−アザウランル耐性 耐性株　コリネバクテリウム・クルタミクムＩド４９３
３チアリンン耐性、リファンピシン耐性。
ストレプトマインン耐性、６−アザウラシル耐性、イツ
リン類縁物質耐性 チアリジン耐性１　リファンピシン耐性。
ストレプトマイノン耐性、６−了ザウランル耐性、β−
ナフトキノリン耐性 耐性株　コリネバクゾリウム・グルタミクムｌｌ−４９
３４チアリジン耐性、リファンピシン耐性７ストレブト
マイノン耐性、６−アザウランル耐性、β−ナフトキノ
リン耐性。
イツリン類縁物質耐性 得られたイツリン類縁物質耐性変異株であるコリネバク
テリウム・グルタミクムｌ−４９３４株は、昭和６３年
１月１４日伺で］１業技術院微生物工業技術研究所く微
工研）にｌ’ｔＥＲＭ　ＩＭＰ−１６５５として寄託さ
れている。
一ト記各菌株をイツリン（イツリンΔおよびイツリンＣ
の１１混合物）２００μｇ　／　ｍ　ｌを含む最少寒天
平板〔グルコース］Ｏｇ／Ｃ塩化アンモニウムＩｇ／、
１２．尿素２ｇ／、ｉ！、ＫＨ２ＰＯ，Ｉｇ／ＣＫ　　
２ＨＰ　　Ｏｔ　　　３　　ｇ／　　、ｉ！、　　　Ｍ
ｇＣβ　２　・　　２Ｔ−１２００，４ｇ／ＣＦ　ｅ　
５０．−７８２０　１０ｍｇ／ＣＭｎ　　ＳＯ，・　４
　　Ｉ−Ｉ　２０　　１　０ｍｇ／　ＣＺｎ　　ＳＯ４
・７１（ｚｏ　　１ｍｇ／、＆、　Ｃｕ５Ｏ＋・５Ｉ−
Ｔ２Ｏ１ｍｇ／、ｉ！、　　　（ＮＩ−Ｉ＋ＬｔＭｏ　
　７０　□＋　　・　４）ｆ　２０　　　　Ｉｍｇ／Ｉ
Ｉ！。
ビ」チン５０μｇ／ｎ、寒天２０ｇ／β、ｐｉ４７．２
〕上で２４時間培養したときの生育度を第１表に示す。
第　　　１　　　表 （μｇ／ｍ１） ０　　　　　　　　　　＋＋　　　　　　１４　　　　
　　　　＋→　　　　　　＋（２００−−＋＋　＋＋ ＋＋′十分な生育　　　　−３非生育 本発明の方法において用いられる菌の培養に際しては、
一般にアミノ酸の発酵生産に用いられる培地が使用され
る。すなわち閑が資化しうる炭素源、窒素源、無機塩類
、成育因子などを含有する合成培地または天然培地が適
宜用いられる。
炭素源としては、クルコース、フラクトース。
ンユクロース、糖蜜、澱粉加水分解物などの糖類の他、
　ｌｖｌ酸、フマール酸、クエン酸なとの各種有機酸、
エタノール、クリセロール、マンノースなどのアルコー
ル類なとが使用できる。
窒素源としては、アンモニア、塩化アンモニウム、硫酸
アンモニウム、酢酸アンモニウム、燐酸アンモニウムな
どの各種無機塩類や有機酸のアンモニウム塩、アミン類
、その地合窒素化合物ならヒニペプトン、肉エキス、コ
ーン・ステイープ・リカー、カセイン加水分解物、大豆
粕加水分解物。
各種発酵菌体およびその消化物などが用いられる。
無機物としては、隣酸第−カリウム、燐酸第二カリウム
、燐酸マク不シウム、硫酸マク不シウム。
塩化すトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、
炭酸カルシウムなどが用いられる。
その他、ビオチン、チアミン、ニコチン酸、β−アラニ
ン、パントテン酸などのビタミン類や、ロインン、バリ
ン、アスパラギンＷ）１．　　クルタミン酸などのアミ
ノ酸類、ストレプトマイシンなどの各種抗生物質を添加
する場合がある。
培養は振盪培養または深部通気攪拌培養なとの好気的条
件下で行う。培養温度は２０〜４０℃、好ましくは２５
〜３８℃の範囲である。培地のρ１は５〜９の範囲で、
好ましくは中性側近に保持する。培地のｐＩ−■、、Ｉ
ｌ！Ｉ整は炭酸力ルンウム　（ｌｉｊ機または有機の酸
、アルカリ溶液、アンモニア、ｐＨ緩衝液などによって
行う。
培養期間は通常１〜７０間で、培養液中にＬ−リシンが
生成蓄積する。
培養終了後、培養液から菌体などの沈澱物を除去し、イ
オン交換処理法、濃縮法、塩析法１等重点沈澱法などを
併用することにより、培養液からＬ−リシンを回収する
ことができる。
以下に本発明の実施例を示す。
実施例１ コリネバクテリウム・クルタミクムｌｌ−３１，４９，
Ｈ−４４＋２．　ｌｌ−４９３３，１１−１１９３４を
下記の種培地２０ｍ１　（３００ｍｌ容三角フラスコ）
に植菌し、３０℃にて２４時間振盪培養（２２Ｏｒρｍ
）した。この種培養液２ｍｌを下記の生産培地２０ｍｌ
　（３００ｍｌ容三角フラスコ）に植菌し、３０℃にて
７２時間振盪培養（２２０ｒｐｍ）　した。培養終了後
、Ｌ　−ＩＪレシン生成量を酸性鋼ニンヒドリンを用い
る比色法によって測定した。１その結果、培養液中のＬ
−ＩＪレジン成量は塩酸塩として、各々４４ｍｇ／ｍｌ
、　　５２ｍｇ／ｍｌ、　　５３ｍｇ／ｍｌ、　　５４
ｍｇ／ｍｌであった。）Ｉ−４９３３株を用いて得た培
養液１０１００Ｏを遠心分離し、得られた上清液を硫酸
でｐ　Ｈ１，５に調整した後、強酸性イオン交換樹脂ダ
イヤイオン５Ｋ−ＩＢ（Ｈ＋型、三菱化成工業社製）の
カラムに通し、Ｌ　−ＩＪリシン吸着させ、カラムを水
洗後、２規定のアンモニア水で溶出して、Ｌ　−ＩＪリ
シン分を集約だ。集めた両分を濃縮し、濃縮液を塩酸で
ｐ　Ｉ−１２，０に調整した後、エタノールを添加しな
がら冷却することにより、Ｌ−Ｕジン塩酸塩を晶出させ
、結晶４２ｇを得た。
種　培　地　　　　　　　生産培地 酵母エキス　５ｇ／、１２　　　硫酸アン（ニウム　　
４０ｇ／β尿　　　　素　　３ｇ／ｐ　　　Ｍｇ５Ｏ，
・２１１□ＯＯ，５ｇ／、ｆ２ＫＨ２ＰＯ４１，５ｇ　
／　Ｒ尿素　　３ｇ／ｆ！。
Ｋ２ＨＰＯ，０，５ｇ／ｊ２　　　　　炭酸カルシウム
　　　　　３０ｇ／ＡＭｇＳＯ＋・２１１２００．５ｇ
　／　Ｅ　　　ｐｔｌ　７．２ビオチン　　５０μｇ／
Ａ ＰＨ７，２ 発明の効果 本発明によりＬ　−ＩＪリシン工業的に安価に供給する
ことができる。

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. コリネ型グルタミン酸生産菌に属し、イツリン類縁物質
    に耐性を有し、かつＬ−リジン生産能を有する微生物を
    培地に培養し、培養物中にＬ−リジンを生成蓄積させ、
    該培養物よりＬ−リジンを採取することを特徴とする発
    酵法によるＬ−リジンの製造法。
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