JP7497293B2 - インターロイキン－３１に対するペプチドワクチン - Google Patents

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Description

本発明は、ペプチドワクチンの分野、ならびに診断手順を含めた臨床的及び科学的手順における組換え型モノクローナル抗体の使用に関する。本発明のペプチドワクチンは、ＩＬ－３１媒介性障害に対するネコ、イヌ、ウマ、またはヒトなどの哺乳類の免疫化及び／または保護に有用である。
アトピー性皮膚炎は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ特別委員会によって「特有の臨床的特徴を伴った、遺伝的素因のある炎症性及び掻痒性のアレルギー性皮膚疾患」と定義されている（Ｏｌｉｖｒｙ ｅｔ ａｌ．Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ２００１；８１：１４３－１４６）。また、当該特別委員会は、イヌの疾患はアレルゲン特異的ＩｇＥに関連していることも認識している（Ｏｌｉｖｒｙ，ｅｔ ａｌ．２００１（前掲）；Ｍａｒｓｅｌｌａ ＆ Ｏｌｉｖｒｙ Ｃｌｉｎｉｃｓ ｉｎ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ ２００３；２１：１２２－１３３）。重度の掻痒は、続発性脱毛症及び紅斑と共に、ペットの飼い主にとって最も目につき心配な症状である。
アレルギー性皮膚炎に関与する潜在的要因は多数あり、十分には理解されていない。食品の成分がアトピー性皮膚炎の誘因となる（Ｐｉｃｃｏ，ｅｔ ａｌ．Ｖｅｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２００８；１９：１５０－１５５）場合もあれば、ノミ、チリダニ、ブタクサ、植物抽出物などのような環境アレルゲンが誘因となる場合もある。遺伝的因子も重要な役割を担う。品種の偏向は確認されていないが、何らかの遺伝様式がアトピー性皮膚炎の素因を高めると考えられている（Ｓｏｕｓａ ＆ Ｍａｒｓｅｌｌａ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ２００１；８１：１５３－１５７；Ｓｃｈｗａｒｔｚｍａｎ，ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９７１；９：５４９－５６９）。
アトピー性皮膚炎の有病率は、全イヌ集団の１０％と推定されている（Ｍａｒｓｅｌｌａ ＆ Ｏｌｉｖｒｙ ２００３（前掲）；Ｓｃｏｔｔ，ｅｔ ａｌ．Ｃａｎａｄｉａｎ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｊｏｕｒｎａｌ ２００２；４３：６０１－６０３；Ｈｉｌｌｉｅｒ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ２００１；８１：１４７－１５１）。全世界で約４５０万頭のイヌが、この慢性的で生涯にわたる状態に罹患している。発生率は増加しているように思われる。イヌの品種及び性別の偏向が疑われているが、地理的地域に応じて大きく変動する可能性がある（Ｈｉｌｌｉｅｒ，２００１（前掲）；Ｐｉｃｃｏ，ｅｔ ａｌ．２００８（前掲））。
ネコアレルギー性皮膚炎は、健康なネコでは反応を誘導しない物質に対する免疫系の異常な応答によって引き起こされると考えられている、炎症性及び掻痒性の皮膚状態である。ネコアレルギー性皮膚炎の最も一貫した特徴は、慢性再発性の掻痒である。ネコのアレルギー性皮膚炎の一般的な臨床症状としては、自己誘発性脱毛、粟粒性皮膚炎、好酸性肉芽腫複合病変（プラーク、肉芽腫、及び無痛潰瘍を含む）、ならびに表皮剥離、びらん、及び／または潰瘍を特徴とする頭頚部に集中した掻痒が挙げられる。品種及び性別の偏向は実証されていないが、若齢のネコが疾患にかかりやすいように思われる（Ｈｏｂｉ ｅｔ ａｌ．Ｖｅｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ ２０１１ ２２：４０６－４１３；Ｒａｖｅｎｓ ｅｔ ａｌ．Ｖｅｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ ２０１４；２５：９５－１０２；Ｂｕｃｋｅｌｙ Ｉｎ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ２０１７；３９：２４２－２５４）。
アレルギー性皮膚炎と診断されたネコに対する現状の治療は、臨床徴候の重症度、期間、及び飼い主の選好に依存し、アレルゲン特異的免疫療法、ならびにグルココルチコイド及びシクロスポリンのような鎮痒薬が含まれる（Ｂｕｃｋｌｅｙ（前掲））。免疫療法治療は一部の患者に有効であるが、頻繁な注射を要し、６～９ヵ月間臨床的改善が見られない場合がある（Ｂｕｃｋｌｅｙ（前掲））。グルココルチコイドやシクロスポリンのような免疫抑制薬は概して有効であるが、長期間使用すると、しばしば望ましくない有害作用が生じる。
ウマアトピー性皮膚炎は、掻痒の潜在的原因として認識されている。ウマアトピー性皮膚炎における環境アレルゲンの役割については、より十分に理解されつつある。当該疾患は、関与するアレルゲン（複数可）に応じて季節性の場合も非季節性の場合もある。年齢、品種、性別の偏向はあまり報告されていない。Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｄａｖｉｓ（ＳＶＭ－ＵＣＤ）の予備研究では、発症年齢の中央値は６．５歳、サラブレッドが最も一般的な品種でウマの２５％を占め、オス（通常は去勢馬）の有病率はメスのほぼ２倍であった。ただし、これらのデータはわずか２４頭のウマからのものであり、全体としての病院集団との比較はまだ行われていない。しばしば顔、遠位四肢、または体幹に向けられる掻痒は、ウマアトピー性皮膚炎における最も一般的な臨床徴候である。脱毛症、紅斑、蕁麻疹、丘疹はいずれも存在し得る。蕁麻疹病変は非常に重症であるが、掻痒性ではない。ウマの蕁麻疹様アトピー性皮膚炎には家族性素因の可能性がある。ウマは続発性膿皮症を有することがあり、これは、過剰な鱗屑、小さな表皮小環、または痂皮を伴う丘疹（「粟粒性皮膚炎」）が特徴である。アトピー性皮膚炎の診断は、臨床徴候及び他の診断、特に昆虫（Ｃｕｌｉｃｏｉｄｅｓ）過敏症の除外に基づく（Ｗｈｉｔｅ Ｃｌｉｎ Ｔｅｃｈ Ｅｑｕｉｎｅ Ｐｒａｃｔ ２００５；４：３１１－３１３；Ｆａｄｏｋ Ｖｅｔ Ｃｌｉｎ Ｅｑｕｉｎｅ ２０１３；２９ ５４１－５５０）。現在、ウマアトピー性皮膚炎の管理は、アレルギー応答により誘発される炎症及び掻痒を抑制することによって対症的に行われると共に、特定の原因に対処することによって（すなわち、原因となるアレルゲンを同定すること及びアレルゲン特異的ワクチンを製剤化することによって）も行われる。対症的アプローチは、典型的には、患者を快適にし自己外傷を最小限に抑えるため、短期的に必要とされる。このアプローチは、抗ヒスタミン剤、必須脂肪酸、ペントキシフィリン、及びグルココルチコイドを含めた局所療法と全身療法との組合せに依存する。環境アレルギーコントロールに対する一次的アプローチは、過敏性反応を誘発するアレルゲンの同定を伴う。アレルゲン特異的免疫療法がアトピー性ウマに有用であり得ることは、皮膚科医によって一般的に認められている。ただし、原則として、ほとんどのウマが改善を示すのは、免疫療法の最初の６ヵ月の後に過ぎない（Ｍａｒｓｅｌｌａ Ｖｅｔ Ｃｌｉｎ Ｅｑｕｉｎｅ ２０１３；２９：５５１－５５７）。また、ウマにおける免疫抑制薬の長期使用は、望ましくない有害作用をもたらす恐れがある。
２型ヘルパーＴ細胞が産生するサイトカインであるインターロイキン３１（ＩＬ－３１）は、ヒト、マウス、及びイヌの掻痒を誘導することが示されている（Ｂｉｅｂｅｒ Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２００８；３５８：１４８３－１４９４；Ｄｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００４；５：７５２－６０；Ｂａｍｍｅｒｔ ｅｔ ａｌ．に対する米国特許第８，７９０，６５１号；Ｇｏｎｚａｌｅｚ ｅｔ ａｌ．Ｖｅｔ Ｄｅｒｍａｔｌ．２０１３；２４（１）：４８－５３）。ＩＬ－３１は、ＩＬ－３１受容体Ａ（ＩＬ－３１ＲＡ）及びオンコスタチンＭ受容体（ＯＳＭＲ）から構成された共受容体に結合する（Ｄｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．２００４（前掲）及びＢｉｌｓｂｏｒｏｕｇｈ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００６ １１７（２）：４１８－２５）。受容体活性化により、ＪＡＫ受容体（複数可）を介しＳＴＡＴがリン酸化される。共受容体の発現は、マクロファージ、ケラチノサイト、及び背根神経節で示されている。
最近、ＩＬ－３１が皮膚炎、掻痒性皮膚病変、アレルギー、及び気道過敏症に関与していることが分かった。Ｚｏｅｔｉｓ Ｉｎｃ．（Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ）が製造したイヌ抗ＩＬ－３１モノクローナル抗体であるＣｙｔｏｐｏｉｎｔ（登録商標）は、アトピー性皮膚炎を有するイヌの掻痒及び皮膚病変を低減することが示されている（Ｇｏｎｚａｌｅｚ ｅｔ ａｌ．２０１３（前掲）；Ｍｉｃｈｅｌｓ ｅｔ ａｌ．Ｖｅｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２０１６；Ｄｅｃ；２７（６）：４７８－ｅ１２９）。哺乳類におけるＩＬ－３１媒介性障害を防止及び治療するための代替的アプローチを提供することが望ましいと考えられる。特に、アトピー性皮膚炎を有するイヌ、ネコ、ウマ、及びヒトにおける掻痒及び皮膚病変を低減するためのワクチンを提供することが望ましいと考えられる。
１つの実施形態において、本発明は、ＩＬ－３１媒介性障害に対し哺乳類を免疫化する及び／または保護するためのワクチン組成物であって、担体ポリペプチドと、ネコＩＬ－３１ミモトープ、イヌＩＬ－３１ミモトープ、ウマＩＬ－３１ミモトープ、またはヒトＩＬ－３１ミモトープから選択される少なくとも１つのミモトープとの組合せ、及びアジュバントを含む、ワクチン組成物を提供する。
ワクチン組成物の１つの実施形態において、イヌＩＬ－３１ミモトープは、アミノ酸配列ＳＶＰＡＤＴＦＥＣＫＳＦ（配列番号１８６）、ＳＶＰＡＤＴＦＥＲＫＳＦ（配列番号１８７）、ＮＳＳＡＩＬＰＹＦＲＡＩＲＰＬＳＤＫＮＩＩＤＫＩＩＥＱＬＤＫＬＫＦ（配列番号１９２）、ＡＰＴＨＱＬＰＰＳＤＶＲＫＩＩＬＥＬＱＰＬＳＲＧ（配列番号１９６）、ＴＧＶＰＥＳ（配列番号２００）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む。
ワクチン組成物の別の実施形態において、ネコＩＬ－３１ミモトープは、アミノ酸配列ＳＭＰＡＤＮＦＥＲＫＮＦ（配列番号１８８）、ＮＧＳＡＩＬＰＹＦＲＡＩＲＰＬＳＤＫＮＴＩＤＫＩＩＥＱＬＤＫＬＫＦ（配列番号１９３）、ＡＰＡＨＲＬＱＰＳＤＩＲＫＩＩＬＥＬＲＰＭＳＫＧ（配列番号１９７）、ＩＧＬＰＥＳ（配列番号２０１）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む。
ワクチン組成物のなおさらなる実施形態において、ウマＩＬ－３１ミモトープは、アミノ酸配列ＳＭＰＴＤＮＦＥＲＫＲＦ（配列番号１８９）、ＮＳＳＡＩＬＰＹＦＫＡＩＳＰＳＬＮＮＤＫＳＬＹＩＩＥＱＬＤＫＬＮＦ（配列番号１９４）、ＧＰＩＹＱＬＱＰＫＥＩＱＡＩＩＶＥＬＱＮＬＳＫＫ（配列番号１９８）、ＫＧＶＱＫＦ（配列番号２０２）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む。
ワクチン組成物のまた別の実施形態において、ヒトＩＬ－３１ミモトープは、アミノ酸配列ＳＶＰＴＤＴＨＥＣＫＲＦ（配列番号１９０）、ＳＶＰＴＤＴＨＥＲＫＲＦ（配列番号１９１）、ＨＳＰＡＩＲＡＹＬＫＴＩＲＱＬＤＮＫＳＶＩＤＥＩＩＥＨＬＤＫＬＩＦ（配列番号１９５）、ＬＰＶＲＬＬＲＰＳＤＤＶＱＫＩＶＥＥＬＱＳＬＳＫＭ（配列番号１９９）、ＫＧＶＬＶＳ（配列番号２０３）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む。
１つの実施形態において、ワクチン組成物に含まれるミモトープは、哺乳類のＩＬ－３１タンパク質とその共受容体との相互作用に関与するＩＬ－３１タンパク質上の領域に特異的に結合する抗ＩＬ－３１抗体またはその抗原結合部分に結合する。１つの実施形態において、当該抗体の当該領域への結合は、以下：
ａ）配列番号１５７（ネコ＿ＩＬ３１＿野生型）によって表されるネコＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１２４から１３５の間の領域、
ｂ）配列番号１５５（イヌ＿ＩＬ３１）によって表されるイヌＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１２４から１３５の間の領域、及び
ｃ）配列番号１６５（ウマ＿ＩＬ３１）によって表されるウマＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１１８から１２９の間の領域
からなる群より選択される１５Ｈ０５エピトープ結合領域の変異によって影響を受ける。
特定の実施形態において、ミモトープは、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列の組合せ：
１）抗体１５Ｈ０５：可変重鎖（ＶＨ）－ＣＤＲ１がＳＹＴＩＨ（配列番号１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＮＩＮＰＴＳＧＹＴＥＮＮＱＲＦＫＤ（配列番号２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＧＦＫＹＤＧＥＷＳＦＤＶ（配列番号３）、可変軽鎖（ＶＬ）－ＣＤＲ１がＲＡＳＱＧＩＳＩＷＬＳ（配列番号４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＡＳＮＬＨＩ（配列番号５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＬＱＳＱＴＹＰＬＴ（配列番号６）、
２）抗体ＺＩＬ１：可変重鎖（ＶＨ）－ＣＤＲ１がＳＹＧＭＳ（配列番号１３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＨＩＮＳＧＧＳＳＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号１４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＶＹＴＴＬＡＡＦＷＴＤＮＦＤＹ（配列番号１５）、可変軽鎖（ＶＬ）－ＣＤＲ１がＳＧＳＴＮＮＩＧＩＬＡＡＴ（配列番号１６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＳＤＧＮＲＰＳ（配列番号１７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＳＦＤＴＴＬＤＡＹＶ（配列番号１８）、
３）抗体ＺＩＬ８：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＹＡＭＳ（配列番号１９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＤＳＶＧＳＧＴＳＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号２０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＦＰＧＳＦＥＨ（配列番号２１）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＴＧＳＳＳＮＩＧＳＧＹＶＧ（配列番号２２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＹＮＳＤＲＰＳ（配列番号２３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＶＹＤＲＴＦＮＡＶ（配列番号２４）、
４）抗体ＺＩＬ９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＤＭＴ（配列番号２５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＤＶＮＳＧＧＴＧＴＡＹＡＶＡＶＫＧ（配列番号２６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＬＧＶＲＤＧＬＳＶ（配列番号２７）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＥＹＹＴＱ（配列番号２８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＲＤＴＥＲＰＳ（配列番号２９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＤＴＧＴＬＶ（配列番号３０）、
５）抗体ＺＩＬ１１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号３１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦＤＹ（配列番号３３）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＳＮＹＹＡＱ（配列番号３４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号３５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号３６）、
６）抗体ＺＩＬ６９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＡＭＫ（配列番号３７）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＴＩＮＮＤＧＴＲＴＧＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３８）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＮＡＥＳＧＣＴＧＤＨＣＰＰＹ（配列番号３９）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＫＹＹＡＱ（配列番号４０）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号４１）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＥＴＮＶ（配列番号４２）、
７）抗体ＺＩＬ９４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＦＭＳ（配列番号４３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＬＩＳＳＤＧＳＧＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号４４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＦＷＲＡＦＮＤ（配列番号４５）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＧＬＮＳＧＳＶＳＴＳＮＹＰＧ（配列番号４６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＤＴＧＳＲＰＳ（配列番号４７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＬＹＴＤＳＤＩＬＶ（配列番号４８）、
８）抗体ＺＩＬ１５４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＲＧＭＳ（配列番号４９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＹＩＲＹＤＧＳＲＴＤＹＡＤＡＶＥＧ（配列番号５０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＤＧＳＳＦＤＹ（配列番号５１）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＡＳＱＳＬＬＨＳＤＧＮＴＹＬＤ（配列番号５２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＶＳＮＲＤＰ（配列番号５３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＭＱＡＩＨＦＰＬＴ（配列番号５４）、
９）抗体ＺＩＬ１５９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＶＭＴ（配列番号５５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＮＳＥＧＳＲＴＡＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号５６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＤＩＶＡＴＧＴＳＹ（配列番号５７）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＴＬＮＲＦＹＴＱ（配列番号５８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号５９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＫＳＡＶＳＩＤＶＧＶ（配列番号６０）、
１０）抗体ＺＩＬ１７１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号６１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号６２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦＤＹ（配列番号６３）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＫＳＬＳＹＹＹＡＱ（配列番号６４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号６５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号６６）、または
１１）ＶＨまたはＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３のうちの少なくとも１つにおける１つ以上のアミノ酸残基の付加、欠失、及び／または置換によってそれぞれの親抗体１５Ｈ０５、ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、もしくはＺＩＬ１７１と相違する、１）～１０）のバリアント
のうちの少なくとも１つを含む、抗ＩＬ－３１抗体またはその抗原結合部分に結合する。
いくつかの実施形態において、本発明のワクチン組成物で用いられるミモトープは、ネコＩＬ－３１に結合する抗ＩＬ－３１抗体またはその抗原結合部分に結合し、このとき、当該抗体は、以下：４２位のリジンからアスパラギンへの置換、４３位のバリンからイソロイシンへの置換、４６位のロイシンからバリンへの置換、４９位のリジンからアスパラギンへの置換、及びこれらの組合せから選択されるフレームワーク２（ＦＷ２）変化を含むＶＬ鎖を含み、このとき、これらの位置は配列番号１２７（ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１）のナンバリングに準拠している。
上記のワクチン組成物の１つの実施形態において、ミモトープは拘束性ミモトープである。特定の実施形態において、拘束性ミモトープは、化学的に連結した環状ペプチドである。
上記のワクチン組成物のいくつかの実施形態において、ミモトープは、担体ポリペプチドと化学的に結合体化している。他の実施形態において、担体ポリペプチド及びミモトープは、組換え融合タンパク質の一部である。
上記のワクチン組成物の１つの実施形態において、ミモトープと組み合わせる担体ポリペプチドは、細菌トキソイドもしくはその誘導体、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、またはウイルス様粒子を含む。１つの実施形態において、ミモトープは、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、Ｂ群Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓからの外膜タンパク質複合体、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素、またはジフテリア毒素の無毒性変異型（ＣＲＭ１９７）から選択される細菌トキソイドまたは誘導体と組み合わされる。別の実施形態において、ミモトープは、ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ、Ｅ．ｃｏｌｉバクテリオファージＱベータ、ノーウォークウイルス、イヌジステンパーウイルス（ＣＤＶ）、またはインフルエンザＨＡから選択されるウイルス様粒子と組み合わされる。特定の実施形態において、ミモトープは、ＣＲＭ１９７を含むまたはそれからなる担体ポリペプチドと組み合わされる。
１つの実施形態において、本発明の上記ワクチン組成物に含まれるアジュバントは、水中油型アジュバント、ポリマー及び水アジュバント、油中水型アジュバント、水酸化アルミニウムアジュバント、ビタミンＥアジュバント、ならびにこれらの組合せから選択される。
１つの実施形態において、アジュバントは、サポニン、ステロール、第４級アンモニウム化合物、及びポリマーを含む製剤である。特定の実施形態において、サポニンはＱｕｉｌ Ａまたはその精製画分であり、ステロールはコレステロールであり、第４級アンモニウム化合物はジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド（ＤＤＡ）であり、ポリマーはポリアクリル酸である。
別の実施形態において、アジュバントは、１つ以上の単離免疫刺激性オリゴヌクレオチド、ステロール、及びサポニンの組合せを含む。特定の実施形態において、１つ以上の単離免疫刺激性オリゴヌクレオチドはＣｐＧを含み、ステロールはコレステロールであり、サポニンはＱｕｉｌ Ａまたはその精製画分である。
また、本発明は、ＩＬ－３１媒介性障害に対し哺乳類を保護する方法も提供する。このような方法は、本発明に従うワクチン組成物を哺乳類に投与することを含む。１つの実施形態において、本発明に従うワクチンが投与される哺乳類は、イヌ、ネコ、ウマ、またはヒトから選択される。特定の実施形態において、ワクチン組成物は、用量当たり約１０μｇ～約１００μｇで、または同等の免疫応答を誘発するための対応する用量で哺乳類に投与される、ＩＬ－３１ペプチドミモトープを含む。１つの実施形態において、ワクチン組成物は、用量当たり約１０μｇでネコなどの哺乳類に投与されるＩＬ－３１ミモトープを含む。
１つの実施形態において、ＩＬ－３１媒介性障害は、掻痒状態またはアレルギー状態である。いくつかの実施形態において、掻痒状態またはアレルギー状態は、アトピー性皮膚炎、湿疹、乾癬、強皮症、及び掻痒から選択される掻痒状態である。他の実施形態において、掻痒状態またはアレルギー状態は、アレルギー性皮膚炎、夏季湿疹、蕁麻疹、ヒーブ、炎症性気道疾患、再発性気道閉塞、気道過敏症、慢性閉塞性肺疾患、及び自己免疫に起因する炎症プロセスから選択されるアレルギー状態である。他の実施形態において、ＩＬ－３１媒介性障害は腫瘍進行である。いくつかの実施形態において、ＩＬ－３１媒介性障害は好酸球性疾患またはマスト細胞腫である。
また、本明細書では、試料中の抗ＩＬ－３１抗体の同一性及び／または量を定量する方法も提供される。このような方法は、ネコＩＬ－３１ミモトープ、イヌＩＬ－３１ミモトープ、ウマＩＬ－３１ミモトープ、及びヒトＩＬ－３１ミモトープから選択される少なくとも１つのミモトープと共に抗ＩＬ－３１抗体を含む試料をインキュベートすることと、試料中の抗ＩＬ－３１同一性及び／または量を定量することとを含む。
１つの実施形態において、試料中の抗ＩＬ－３１抗体の同一性及び／または量を定量するための方法で用いられるイヌＩＬ－３１ミモトープは、アミノ酸配列ＳＶＰＡＤＴＦＥＣＫＳＦ（配列番号１８６）、ＳＶＰＡＤＴＦＥＲＫＳＦ（配列番号１８７）、ＮＳＳＡＩＬＰＹＦＲＡＩＲＰＬＳＤＫＮＩＩＤＫＩＩＥＱＬＤＫＬＫＦ（配列番号１９２）、ＡＰＴＨＱＬＰＰＳＤＶＲＫＩＩＬＥＬＱＰＬＳＲＧ（配列番号１９６）、ＴＧＶＰＥＳ（配列番号２００）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む。
別の実施形態において、このような方法で用いられるネコＩＬ－３１ミモトープは、アミノ酸配列ＳＭＰＡＤＮＦＥＲＫＮＦ（配列番号１８８）、ＮＧＳＡＩＬＰＹＦＲＡＩＲＰＬＳＤＫＮＴＩＤＫＩＩＥＱＬＤＫＬＫＦ（配列番号１９３）、ＡＰＡＨＲＬＱＰＳＤＩＲＫＩＩＬＥＬＲＰＭ ＳＫＧ（配列番号１９７）、ＩＧＬＰＥＳ（配列番号２０１）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む。
さらなる実施形態において、このような方法で用いられるウマＩＬ－３１ミモトープは、アミノ酸配列ＳＭＰＴＤＮＦＥＲＫＲＦ（配列番号１８９）、ＮＳＳＡＩＬＰＹＦＫＡＩＳＰＳＬＮＮＤＫＳＬＹＩＩＥＱＬＤＫＬＮＦ（配列番号１９４）、ＧＰＩＹＱＬＱＰＫＥＩＱＡＩＩＶＥＬＱＮＬＳ ＫＫ（配列番号１９８）、ＫＧＶＱＫＦ（配列番号２０２）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む。
またさらに、このような方法で用いられるヒトＩＬ－３１ミモトープは、アミノ酸配列ＳＶＰＴＤＴＨＥＣＫＲＦ（配列番号１９０）、ＳＶＰＴＤＴＨＥＲＫＲＦ（配列番号１９１）、ＨＳＰＡＩＲＡＹＬＫＴＩＲＱＬＤＮＫＳＶＩＤＥＩＩＥＨＬＤＫＬＩＦ（配列番号１９５）、ＬＰＶＲＬＬＲＰＳＤＤＶＱＫＩＶＥＥＬＱＳＬＳＫＭ（配列番号１９９）、ＫＧＶＬＶＳ（配列番号２０３）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む。
上記の診断方法の１つの実施形態において、ミモトープは、固体表面に結合した捕捉試薬である。１つの実施形態において、試料中の抗体の量を定量化するために、試料がミモトープ捕捉試薬に添加され、次に二次検出試薬が添加される。
また、本発明は、哺乳類からの試料中のＩＬ－３１の量を定量する方法も提供する。このような方法は、固体表面に繋留した標識抗ＩＬ－３１抗体：ＩＬ－３１ミモトープ複合体と共にＩＬ－３１を含む哺乳類試料をインキュベートすることであって、複合体中のミモトープが、ネコＩＬ－３１ミモトープ、イヌＩＬ－３１ミモトープ、ウマＩＬ－３１ミモトープ、及びヒトＩＬ－３１ミモトープからなる群より選択される、インキュベートすることと、試料中のＩＬ－３１のレベルを定量することであって、複合体中のミモトープに対する複合体中の標識抗ＩＬ－３１抗体の親和性が、試料中のＩＬ－３１に対するその親和性よりも低い、定量することとを含む。この方法の１つの実施形態において、定量するステップは、試料中のＩＬ－３１が複合体の標識抗ＩＬ－３１抗体に結合したときに固体表面から解放される標識抗体から来るシグナルを測定することを含み、試料中のＩＬ－３１のレベルは、シグナルに対し反比例する。
１つの実施形態において、試料中のＩＬ－３１の量を定量する方法で用いられるイヌＩＬ－３１ミモトープは、アミノ酸配列ＳＶＰＡＤＴＦＥＣＫＳＦ（配列番号１８６）、ＳＶＰＡＤＴＦＥＲＫＳＦ（配列番号１８７）、ＮＳＳＡＩＬＰＹＦＲＡＩＲＰＬＳＤＫＮＩＩＤＫＩＩＥＱＬＤＫＬＫＦ（配列番号１９２）、ＡＰＴＨＱＬＰＰＳＤＶＲＫＩＩＬＥＬＱＰＬＳＲＧ（配列番号１９６）、ＴＧＶＰＥＳ（配列番号２００）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む。
別の実施形態において、このような方法で用いられるネコＩＬ－３１ミモトープは、アミノ酸配列ＳＭＰＡＤＮＦＥＲＫＮＦ（配列番号１８８）、ＮＧＳＡＩＬＰＹＦＲＡＩＲＰＬＳＤＫＮＴＩＤＫＩＩＥＱＬＤＫＬＫＦ（配列番号１９３）、ＡＰＡＨＲＬＱＰＳＤＩＲＫＩＩＬＥＬＲＰＭ ＳＫＧ（配列番号１９７）、ＩＧＬＰＥＳ（配列番号２０１）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む。
また別の実施形態において、このような方法で用いられるウマＩＬ－３１ミモトープは、アミノ酸配列ＳＭＰＴＤＮＦＥＲＫＲＦ（配列番号１８９）、ＮＳＳＡＩＬＰＹＦＫＡＩＳＰＳＬＮＮＤＫＳＬＹＩＩＥＱＬＤＫＬＮＦ（配列番号１９４）、ＧＰＩＹＱＬＱＰＫＥＩＱＡＩＩＶＥＬＱＮＬＳ ＫＫ（配列番号１９８）、ＫＧＶＱＫＦ（配列番号２０２）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む。
なおさらなる実施形態において、このような方法で用いられるヒトＩＬ－３１ミモトープは、アミノ酸配列ＳＶＰＴＤＴＨＥＣＫＲＦ（配列番号１９０）、ＳＶＰＴＤＴＨＥＲＫＲＦ（配列番号１９１）、ＨＳＰＡＩＲＡＹＬＫＴＩＲＱＬＤＮＫＳＶＩＤＥＩＩＥＨＬＤＫＬＩＦ（配列番号１９５）、ＬＰＶＲＬＬＲＰＳＤＤＶＱＫＩＶＥＥＬＱＳＬＳＫＭ（配列番号１９９）、ＫＧＶＬＶＳ（配列番号２０３）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む。
本発明の上記の診断方法のいずれかにおけるいくつかの実施形態において、ミモトープは、哺乳類のＩＬ－３１タンパク質とその共受容体との相互作用に関与するＩＬ－３１タンパク質上の領域に特異的に結合する抗ＩＬ－３１抗体またはその抗原結合部分に結合する。本発明の診断方法の１つの実施形態において、当該抗体の当該領域への結合は、以下：
ａ）配列番号１５７（ネコ＿ＩＬ３１＿野生型）によって表されるネコＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１２４から１３５の間の領域、
ｂ）配列番号１５５（イヌ＿ＩＬ３１）によって表されるイヌＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１２４から１３５の間の領域、及び
ｃ）配列番号１６５（ウマ＿ＩＬ３１）によって表されるウマＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１１８から１２９の間の領域
からなる群より選択される１５Ｈ０５エピトープ結合領域の変異によって影響を受ける。
本発明の診断方法のいずれかにおける１つの特定の実施形態において、ミモトープは、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列の組合せ：
１）抗体１５Ｈ０５：可変重鎖（ＶＨ）－ＣＤＲ１がＳＹＴＩＨ（配列番号１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＮＩＮＰＴＳＧＹＴＥＮＮＱＲＦＫＤ（配列番号２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＧＦＫＹＤＧＥＷＳＦＤＶ（配列番号３）、可変軽鎖（ＶＬ）－ＣＤＲ１がＲＡＳＱＧＩＳＩＷＬＳ（配列番号４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＡＳＮＬＨＩ（配列番号５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＬＱＳＱＴＹＰＬＴ（配列番号６）、
２）抗体ＺＩＬ１：可変重鎖（ＶＨ）－ＣＤＲ１がＳＹＧＭＳ（配列番号１３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＨＩＮＳＧＧＳＳＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号１４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＶＹＴＴＬＡＡＦＷＴＤＮＦＤＹ（配列番号１５）、可変軽鎖（ＶＬ）－ＣＤＲ１がＳＧＳＴＮＮＩＧＩＬＡＡＴ（配列番号１６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＳＤＧＮＲＰＳ（配列番号１７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＳＦＤＴＴＬＤＡＹＶ（配列番号１８）、
３）抗体ＺＩＬ８：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＹＡＭＳ（配列番号１９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＤＳＶＧＳＧＴＳＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号２０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＦＰＧＳＦＥＨ（配列番号２１）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＴＧＳＳＳＮＩＧＳＧＹＶＧ（配列番号２２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＹＮＳＤＲＰＳ（配列番号２３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＶＹＤＲＴＦＮＡＶ（配列番号２４）、
４）抗体ＺＩＬ９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＤＭＴ（配列番号２５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＤＶＮＳＧＧＴＧＴＡＹＡＶＡＶＫＧ（配列番号２６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＬＧＶＲＤＧＬＳＶ（配列番号２７）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＥＹＹＴＱ（配列番号２８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＲＤＴＥＲＰＳ（配列番号２９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＤＴＧＴＬＶ（配列番号３０）、
５）抗体ＺＩＬ１１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号３１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦＤＹ（配列番号３３）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＳＮＹＹＡＱ（配列番号３４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号３５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号３６）、
６）抗体ＺＩＬ６９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＡＭＫ（配列番号３７）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＴＩＮＮＤＧＴＲＴＧＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３８）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＮＡＥＳＧＣＴＧＤＨＣＰＰＹ（配列番号３９）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＫＹＹＡＱ（配列番号４０）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号４１）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＥＴＮＶ（配列番号４２）、
７）抗体ＺＩＬ９４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＦＭＳ（配列番号４３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＬＩＳＳＤＧＳＧＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号４４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＦＷＲＡＦＮＤ（配列番号４５）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＧＬＮＳＧＳＶＳＴＳＮＹＰＧ（配列番号４６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＤＴＧＳＲＰＳ（配列番号４７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＬＹＴＤＳＤＩＬＶ（配列番号４８）、
８）抗体ＺＩＬ１５４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＲＧＭＳ（配列番号４９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＹＩＲＹＤＧＳＲＴＤＹＡＤＡＶＥＧ（配列番号５０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＤＧＳＳＦＤＹ（配列番号５１）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＡＳＱＳＬＬＨＳＤＧＮＴＹＬＤ（配列番号５２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＶＳＮＲＤＰ（配列番号５３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＭＱＡＩＨＦＰＬＴ（配列番号５４）、
９）抗体ＺＩＬ１５９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＶＭＴ（配列番号５５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＮＳＥＧＳＲＴＡＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号５６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＤＩＶＡＴＧＴＳＹ（配列番号５７）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＴＬＮＲＦＹＴＱ（配列番号５８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号５９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＫＳＡＶＳＩＤＶＧＶ（配列番号６０）、
１０）抗体ＺＩＬ１７１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号６１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号６２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦＤＹ（配列番号６３）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＫＳＬＳＹＹＹＡＱ（配列番号６４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号６５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号６６）、または
１１）ＶＨまたはＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３のうちの少なくとも１つにおける１つ以上のアミノ酸残基の付加、欠失、及び／または置換によってそれぞれの親抗体１５Ｈ０５、ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、もしくはＺＩＬ１７１と相違する、１）～１０）のバリアント
のうちの少なくとも１つを含む、抗ＩＬ－３１抗体またはその抗原結合部分に結合する。
いくつかの実施形態において、本発明の診断方法で用いられるミモトープは、ネコＩＬ－３１に結合する抗ＩＬ－３１抗体またはその抗原結合部分に結合し、このとき、当該抗体は、以下：４２位のリジンからアスパラギンへの置換、４３位のバリンからイソロイシンへの置換、４６位のロイシンからバリンへの置換、４９位のリジンからアスパラギンへの置換、及びこれらの組合せから選択されるフレームワーク２（ＦＷ２）変化を含むＶＬ鎖を含み、このとき、これらの位置は配列番号１２７（ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１）のナンバリングに準拠している。
異なる種由来のＩＬ－３１間でアミノ酸配列が保存されていることを示すアラインメントである。詳細には、配列番号１５５（イヌＩＬ－３１）、配列番号１５７（ネコＩＬ－３１）、配列番号１６５（イヌＩＬ－３１）、及び配列番号１８１（ヒトＩＬ－３１）間の比較を示している。イヌ、ネコ、ウマ、及びヒトのＩＬ－３１間におけるアミノ酸配列同一性パーセントも示されている。 Ｂｉａｃｏｒｅシステム（Ｂｉａｃｏｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ），Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いて、マウス起源由来のＣＤＲを有する候補Ａｂがイヌ及びネコのＩＬ－３１に結合する親和性を詳述している。 イヌ及びネコの細胞アッセイで測定された、マウス起源由来のＣＤＲを有する候補抗体の効力（ＩＣ５０（μｇ／ｍｌ））を示す表である。詳細には、候補抗体について、イヌＤＨ－８２またはネコＦＣＷＦ４マクロファージ様細胞内でのＩＬ－３１媒介性ＳＴＡＴリン酸化を阻害する能力を評価した。 間接ＥＬＩＳＡ及びＢｉａｃｏｒｅ両方の方法を用いて、イヌ起源のＣＤＲを有する候補モノクローナル抗体の様々なタンパク質との結合において得られた結果を示している。間接ＥＬＩＳＡについては、野生型ネコＩＬ－３１への結合と、モノクローナル抗体１５Ｈ０５エピトープ領域内に変異を有するネコＩＬ－３１ １５Ｈ０５変異型への結合（ＥＬＩＳＡ ＯＤ）とを評価した。結合を確認するため、イヌ、ネコ、ウマ、ヒト、ネコ１５Ｈ０５変異型、及びネコ１１Ｅ１２変異型のＩＬ－３１タンパク質を表面として使用し、単一試験濃度の抗体を使用してｂｉａｃｏｒｅ分析を実施した。ネコＩＬ－３１ １１Ｅ１２変異型は、モノクローナル抗体１１Ｅ１２エピトープ領域内に変異を有した。 Ａは、マウス抗体１１Ｅ１２ ＶＬ配列（配列番号７３）のアラインメントを示しており、過去に開示されたＣａｎ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ＿ｃＵｎ＿１（配列番号１８２）及びＣＡＮ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ＿ｃＵｎ＿ＦＷ２（配列番号１８４）と称されるイヌ化１１Ｅ１２配列を、ＦＥＬ＿１１Ｅ１２＿ＶＨ１（配列番号１１１）及びＦＥＬ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ１＿ＦＷ２（配列番号１１７）という名称のネコ化バージョンと比較している。Ａのアラインメントの下に記されているドットはＦｅｌ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ１の関連する変化の位置を示しており、この変化はこの抗体のＩＬ－３１タンパク質に対する親和性を回復するために必要であった。Ｂは、本明細書でＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ（配列番号６９）と称されるマウス抗体１５Ｈ０５ ＶＬ配列と、本明細書でＦＥｌ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１（配列番号１２７）及びＦＥｌ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ＿ＦＷ２（配列番号１３５）と称されるネコ化１５Ｈ０５ ＶＬ配列とのアラインメントを示している。Ｂのアラインメントの下にあるドットは、ネコ化１５Ｈ０５ ＶＬ（Ｆｅｌ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１）に必要な変化を示しており、この変化は、この抗体のマウス及びキメラ形態と比較したときのイヌ及びネコのＩＬ－３１に対する親和性を回復するだけでなく改善するために必要であった。 変異型１５Ｈ０５（配列番号１６３）及び１１Ｅ１２（配列番号１６１）との野生型ネコＩＬ－３１（配列番号１５７）のアラインメントを示しており、アラニン置換が生じる位置は強調表示されている。 ネコＩＬ－３１ホモロジーモデルを示しており、抗体１１Ｅ１２（部位１）及び１５Ｈ０５（部位２）の結合に関与する２つのアミノ酸の位置が強調表示されている。 モノクローナル抗体１１Ｅ１２及び１５Ｈ０５と、野生型ネコＩＬ－３１、ならびに変異型ＩＬ－３１タンパク質１５Ｈ０５（配列番号１６３）及び１１Ｅ１２（配列番号１６１）との結合において得られた結果を示すグラフであり、野生型及びこれらの変異型はコーティング抗原として使用されている。 Ｂｉａｃｏｒｅを用いたｍＡｂ １５Ｈ０５及び１１Ｅ１２の競合結合評価を示すグラフである。図７Ａは、マウス１５Ｈ０５及び１１Ｅ１２抗体のイヌＩＬ－３１との競合結合データを示している。Ｂは、抗体１５Ｈ０５及び１１Ｅ１２のネコＩＬ－３１表面上での競合結合データを示している。 ＯＳＭＲ及びＩＬ－３１Ｒａの個々の受容体サブユニットと、野生型ネコＩＬ－３１、ならびに変異型ＩＬ－３１タンパク質１５Ｈ０５（配列番号１６３）及び１１Ｅ１２（配列番号１６１）との結合において得られた結果を示すグラフであり、野生型及びこれらの変異型はコーティング抗原として使用されている。 ネコＩＬ－３１誘導性掻痒モデルにおけるマウス：ネコ１１Ｅ１２キメラ型、マウス：ネコ１５Ｈ０５キメラ型、及びネコ化１１Ｅ１２（ネコ１１Ｅ１２ １．１）の予備的有効性を示すグラフである。 ネコ掻痒チャレンジモデルにおける、ＺＴＳ－３６１と称されるネコ化１５Ｈ０５抗ＩＬ－３１抗体の有効性のｉｎ ｖｉｖｏ評価を示すグラフである。Ａは、Ｔ０１のビヒクルプラセボ群及びＴ０２の抗体ＺＴＳ－３６１群における－７日目から２８日目まで（ゼロ日目をＴ０２群への抗体投与日とする）のベースラインチャレンジ前掻痒行動を示している。Ｂは抗体ＺＴＳ－３６１の有効性を示しており、ＩＬ－３１チャレンジ後、ビヒクルプラセボ対照と比較したときの掻痒の有意な低減が７日目（ｐ＜．０００１）、２１日目（ｐ＜０．００２７）、及び２８日目（ｐ＜０．０２３８）に実証されている。 Ａは、正常な実験用イヌと比較して、アトピー性及びアレルギー性皮膚炎を有するイヌのうちのクライアント所有動物のＩＬ－３１の血漿レベルを示すグラフである。Ｂは、米国内のいくつかの異なる地理的地域からの、アレルギー性皮膚炎（ＡＤ）の推定診断を受けたネコの血清ＩＬ－３１レベルを定量する最近の研究の結果を示すグラフである。Ｃは、１．７５μｇ／ｋｇのイヌＩＬ－３１を皮下投与した後のイヌにおけるイヌＩＬ－３１の薬物動態プロファイルを示すグラフである。 図１２で囲まれているアミノ酸を包含するイヌＩＬ－３１の完全置換スキャンの結果を示す表である。全長イヌＩＬ－３１タンパク質（配列番号１５５）において、示された各位置を他の可能な１９個のアミノ酸のうちの１個で個別に置き換え、間接ＥＬＩＳＡを用いて抗体１５Ｈ０５の結合を評価した。比較のため、ネコ（配列番号１５７）、ウマ（配列番号１６５）、及びヒトＩＬ－３１（配列番号１８１）上の対応する領域が示されている。 Ａは、様々な拘束性ペプチドの配列及び化学的リンカーを示す表である。ペプチドＺＴＳ－５６１は、配列番号１５５の１２１～１３８位に対応するアミノ酸配列Ｎ－ＴＥＩＳＶＰＡＤＴＦＥＲＫＳＦＩＬＴ－Ｃを含み、位置番号１３２におけるシステイン（Ｃ）からアルギニン（Ｒ）への置換を伴う。ペプチドＺＴＳ－５６２は、配列番号１５５の１２２～１３５位に対応するアミノ酸配列Ｎ－ＥＩＳＶＰＡＤＴＦＥＲＫＳＦ－Ｃを含み、位置番号１３２におけるシステイン（Ｃ）からアルギニン（Ｒ）への置換を伴う。ペプチドＺＴＳ－５６３は、配列番号１５７の１２１～１３８位に対応するアミノ酸配列Ｎ－ＡＫＶＳＭＰＡＤＮＦＥＲＫＮＦＩＬＴ－Ｃを含み、位置番号１３８におけるアラニン（Ａ）からスレオニン（Ｔ）への置換を伴う。ペプチドＺＴＳ－５６４は、配列番号１５５の１２１～１３８位に対応するアミノ酸配列Ｎ－ＴＥＩＳＶＰＡＤＴＦＥＲＫＳＦＩＬＴ－Ｃを含む。また、ペプチドＺＴＳ－５６１、ＺＴＳ－５６２、ＺＴＳ－５６３、及びＺＴＳ－５６４の各々は、遊離チオール基を用いた結合体化化学を促進するために、示されているようなＮ及びＣ末端側システインも含む。Ｂは、担体ポリペプチド（ＣＲＭ－１９７）と独立的に結合体化させたペプチドＺＴＳ－５６１、ＺＴＳ－５６２、ＺＴＳ－５６３、及びＺＴＳ－５６４の各々の親和性評価の結果を示している。親和性評価のため、各ペプチドを独立的にｂｉａｃｏｒｅ表面に固定化し、ネコ化抗ＩＬ－３１ １５Ｈ０５ ｍＡｂ（ＺＴＳ－９２７）に対するＫＤを定量した。 ＣＲＭ－１９７結合体化ＩＬ－３１ミモトープにおける、本明細書で開示されている抗体１５Ｈ０５及びその他の抗ＩＬ－３１抗体が結合するＩＬ－３１タンパク質上の関連領域に向けて駆動されるエピトープ特異的免疫応答を生成する能力を評価するために行う、免疫原性研究の研究デザインを示している。 ＩＬ－３１ １５Ｈ０５イヌ及びネコのミモトープならびに全長ネコＩＬ－３１タンパク質をイヌにワクチン接種した後に生成された血清力価を処置群別に示すグラフであり、血清を採取した各日の応答を示している。図１５Ａは、全長ネコＩＬ－３１タンパク質（配列番号１５９）に対する平均イヌ抗体力価を示している。 ＩＬ－３１ １５Ｈ０５イヌ及びネコのミモトープならびに全長ネコＩＬ－３１タンパク質をイヌにワクチン接種した後に生成された血清力価を処置群別に示すグラフであり、血清を採取した各日の応答を示している。図１５Ｂは、全長ネコＩＬ－３１ １５Ｈ０５変異型（配列番号１６３）に対する平均イヌ抗体力価を示している。 ＩＬ－３１ １５Ｈ０５イヌ及びネコのミモトープならびに全長ネコＩＬ－３１タンパク質をイヌにワクチン接種した後に生成された血清力価を処置群別に示すグラフであり、血清を採取した各日の応答を示している。図１５Ｃは、全長イヌＩＬ－３１（配列番号１５５）に対する平均イヌ抗体力価を示している。 ＩＬ－３１ １５Ｈ０５イヌ及びネコのミモトープならびに全長ネコＩＬ－３１タンパク質をイヌにワクチン接種した後に生成された血清力価を処置群別に示すグラフであり、血清を採取した各日の応答を示している。図１５Ｄは、全長ウマＩＬ－３１（配列番号１６５）に対する平均イヌ抗体力価を示している。 ＩＬ－３１ １５Ｈ０５イヌ及びネコのミモトープならびに全長ネコＩＬ－３１タンパク質をイヌにワクチン接種した後に生成された血清力価を処置群別に示すグラフであり、血清を採取した各日の応答を示している。図１５Ｅは、全長ヒトＩＬ－３１（配列番号１８１）に対する平均イヌ抗体力価を示している。 Ａは、実験用ビーグル犬においてＣＲＭ－１９７結合体化全長イヌＩＬ－３１タンパク質またはミモトープの免疫応答を誘発する能力を評価するために行った免疫原性試験の設計を示している。本明細書で説明されている各ミモトープは、本明細書で開示されている抗体１５Ｈ０５及びその他の抗ＩＬ－３１抗体が結合するＩＬ－３１タンパク質上の関連領域に向けて駆動されるエピトープ特異的免疫応答を生成するように設計された。様々なミモトープペプチドの配列及び化学的リンカーは、Ｔ０２～Ｔ０４群として示されている。ペプチドＺＴＳ－４２０は、配列番号１５５の１２１～１３８位に対応するアミノ酸配列Ｎ－ＴＥＩＳＶＰＡＤＴＦＥＲＫＳＦＩＬＴ－Ｃを含み、位置番号１３２におけるシステイン（Ｃ）からアルギニン（Ｒ）への置換を伴う。ペプチドＺＴＳ－４２１は、配列番号１８１の１２２～１３９位に対応するアミノ酸配列Ｎ－ＴＮＩＳＶＰＴＤＴＨＥＣＫＲＦＩＬＴ－Ｃを含む。ペプチドＺＴＳ－７６６は、配列番号１５５の８３～１１５位に対応するアミノ酸配列Ｎ－ＮＳＳＡＩＬＰＹＦＲＡＩＲＰＬＳＤＫＮＩＩＤＫＩＩＥＱＬＤＫＬＫＦ－Ｃを含む。また、ペプチドＺＴＳ－４２０、ＺＴＳ－４２１、及びＺＴＳ－７６６の各々は、遊離チオール基を用いた結合体化化学を促進するために、示されているようなＮ及びＣ末端側システインも含む。ＺＴＳ－７６６は、Ｎ末端側システインの隣にさらなる３アミノ酸のスペーサー配列（ＧＳＧ）も含む。Ｂは、イヌＢＣヘリックスミモトープ（ＺＴＳ－７６６）とネコ、ウマ、及びヒトＩＬ－３１からの対応する配列との比較が可能な相同配列を示しており、各々の配列参照番号及びアミノ酸位置を含む。 ＩＬ－３１ １５Ｈ０５イヌ及びヒトのミモトープ、イヌＢＣヘリックスミモトープ、ならびに全長ネコＩＬ－３１タンパク質をイヌにワクチン接種した後に生成された血清力価を処置群別に示すグラフであり、血清を採取した各日の応答を示している。矢印で示されている０、２８、及び５６日目にイヌに投与した。Ａは、全長イヌＩＬ－３１タンパク質（配列番号１５５）に対する平均イヌ抗体力価を示している。Ｂは、Ｔ０３群のみにおける０、４２、及び８４日目の全長ヒトＩＬ－３１（配列番号１８１）に対する平均イヌ抗体力価を示している。Ｔ０３群（ヒト１５Ｈ０５ミモトープ）のイヌには、イヌＩＬ－３１に対するＣＲＡＲが認められなかった（データは示されず）。 Ａは、実験用ネコにおいてＣＲＭ－１９７結合体化全長ネコＩＬ－３１タンパク質またはミモトープの免疫応答を誘発する能力を評価するために行った免疫原性試験の設計を示している。全ての処置群に対し、糖脂質アジュバントＢａｙ Ｒ１００５（Ｎ－（２－デオキシ－２－Ｌ－ロイシルアミノ－β－Ｄ－グルコピラノシル）－Ｎ－オクタデシルドデカノイルアミドヒドロアセテート）及びＣｐＧオリゴヌクレオチドを含むアジュバント混合物を処方した。本明細書で説明されている各ミモトープは、本明細書で開示されている抗体１５Ｈ０５及びその他の抗ＩＬ－３１抗体が結合するＩＬ－３１タンパク質上の関連領域に向けて駆動されるエピトープ特異的免疫応答を生成するように設計された。様々なミモトープペプチドの配列及び化学的リンカーは、Ｔ０２～Ｔ０５群として示されている。ペプチドＺＴＳ－５６３は、配列番号１５７の１２１～１３８位に対応するアミノ酸配列Ｎ－ＡＫＶＳＭＰＡＤＮＦＥＲＫＮＦＩＬＴ－Ｃを含み、位置番号１３８におけるアラニン（Ａ）からスレオニン（Ｔ）への置換を伴う。ペプチドＺＴＳ－４１８は、配列番号１６５の１１５～１３２位に対応するアミノ酸配列Ｎ－ＴＥＶＳＭＰＴＤＮＦＥＲＫＲＦＩＬＴ－Ｃを含む。ペプチドＺＴＳ－４２３は、配列番号１５７の８３～１１５位に対応するアミノ酸配列Ｎ－ＮＧＳＡＩＬＰＹＦＲＡＩＲＰＬＳＤＫＮＴＩＤＫＩＩＥＱＬＤＫＬＫＦ－Ｃを含む。ペプチドＺＴＳ－４２２は、配列番号１５７の１２１～１３８位に対応するアミノ酸配列Ｎ－ＡＫＶＳＭＰＡＤＮＦＥＲＫＮＦＩＬＴ－Ｃを含み、位置番号１３８におけるアラニン（Ａ）からスレオニン（Ｔ）への置換を伴う。また、ペプチドＺＴＳ－５６３、ＺＴＳ－４１８、ＺＴＳ－４２３、及びＺＴＳ－４２２の各々は、遊離チオール基を用いた結合体化化学を促進するために、示されているようなＮ及びＣ末端側システインも含む。ＺＴＳ－４２２は、２つのＮ末端側システイン間にさらなるアミノヘキサン酸リンカー（Ａｈｘ）も含む。ＺＴＳ－４２３は、Ｎ末端側システインの隣にさらなる３アミノ酸のスペーサー配列（ＧＳＧ）も含む。Ｂは、Ｔ０３以外の全ての処置群における全長ネコＩＬ－３１（配列番号１５７）に対する平均ネコ抗体力価を示している。Ｔ０３群（ウマ１５Ｈ０５ミモトープ）のネコには、ネコＩＬ－３１に対するＣＲＡＲが認められなかった（データは示されず）。 Ａは、ＷＯ２０１８／１５６３６７（Ｋｉｎｄｒｅｄ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）に従う抗イヌＩＬ－３１抗体Ｍ１４が結合する最小エピトープアミノ酸配列である。複数の種、配列参照ＩＤ、及び相対的アミノ酸位置の比較が示されている。Ｂは、このイヌＩＬ－３１上の最小アミノ酸配列を黒色の枠で強調して示している。また、この図は、タンパク質の周囲領域の配列のアラインメントや、示された配列ＩＤ内の対応するアミノ酸の相対的位置も示している。 ヘリックスＡ及び後続のランダムコイル配列の収束によって形成された、１５Ｈ０５ループの位置的及び構造的属性を共有するループからのＩＬ－３１タンパク質のフラグメントを示している。複数種からのアミノ酸配列の比較と、配列ＩＤ及びアミノ酸位置への言及とが示されている。 Ａは、３つのウマＩＬ－３１ミモトープペプチドのアミノ酸配列を示しており、これらはタンパク質のキーとなる異なるエピトープ領域を表す。ミモトープ１５Ｈ０５は、配列番号１６５の１１５～１３２位に対応するアミノ酸配列Ｎ－ＴＥＶＳＭＰＴＤＮＦＥＲＫＲＦＩＬＴ－Ｃを含む。ミモトープＢＣヘリックスは、配列番号１６５の７７～１０９位に対応するアミノ酸配列Ｎ－ＮＳＳＡＩＬＰＹＦＫＡＩＳＰＳＬＮＮＤＫＳＬＹＩＩＥＱＬＤＫＬＮＦ－Ｃを含む。ミモトープＡヘリックスは、配列番号１６５の２０～４３位に対応するアミノ酸配列Ｎ－ＧＰＩＹＱＬＱＰＫＥＩＱＡＩＩＶＥＬＱＮＬＳＫＫ－Ｃを含む。また、ミモトープ１５Ｈ０５は、遊離チオール基を用いた結合体化化学を促進するために、示されているようなＮ及びＣ末端側システインも含む。３つのミモトープは全て、Ｎビオチン基の隣に、配列内で太字及び下線付きで示されたさらなる３アミノ酸スペーサー配列（ＧＳＧ）を含む。配列番号１６５の各アミノ酸残基の対応する位置が示されている。Ｂは、バイオレイヤー干渉法を用いた結合アッセイの結果を示している。示されたミモトープをストレプトアビジンピンに吸収させ、マウス血清の複数の希釈物をプローブするために使用した。使用した血清は、ウマＩＬ－３１タンパク質（配列番号１６５）をワクチン接種したマウスからの血清、または無関係のタンパク質をワクチン接種したマウスからの対照血清であった。
定義
本発明を詳細に説明する前に、本発明の文脈で使用されるいくつかの用語について定義する。これらの用語に加えて、必要に応じて他の用語についても本明細書の別の箇所で定義する。本明細書で別段の明示的な定義がない限り、本明細書で使用される技術用語は、当技術分野で認識されている意味を有する。
本明細書及び特許請求の範囲で使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈による別段の明確な定めがない限り、複数の指示対象を含む。例えば、「（１つの）抗体」と言及するときには、複数のこのような抗体が含まれる。別の例として、「（１つの）ミモトープ」、「（１つの）ＩＬ－３１ミモトープ」などと言及するときには、複数のこのようなミモトープを含む。
本明細書で使用する場合、「含む」という用語は、組成物及び方法が挙げられた要素を含むが、他の要素を排除しないことを意味するように意図されている。
本明細書で使用する場合、「ワクチン組成物」という用語は、宿主内の免疫応答の誘導に有用である、医薬的に許容されるビヒクル中の少なくとも１つの抗原または免疫原を含む。このような組成物は、レシピエント哺乳類の年齢、性別、体重、及び状態、ならびに投与経路のような因子を考慮に入れて、医学または獣医学の技術分野の当業者に周知されている薬用量及び技法によって投与することができる。投与経路は経皮とすることができ、粘膜投与（例えば、経口、鼻、肛門、膣）または非経口経路（皮内、経皮、筋肉内、皮下、静脈内、もしくは腹腔内）を介したものとすることができる。ワクチン組成物は、単独で投与しても、他の治療または療法と共に同時投与または順次投与してもよい。ワクチンの形態としては、懸濁液、シロップ、またはエリキシル、及び非経口、皮下、皮内、筋肉内、もしくは静脈内の投与（例えば、注射投与）のための調製物、例えば、滅菌懸濁液または乳濁液を挙げることができる。ワクチン組成物は、スプレーとして投与してもよく、食品及び／または水に混合してもよく、好適な担体、希釈剤、または賦形剤（例えば、滅菌水、生理食塩水、グルコースなど）と混合して送達してもよい。組成物は、投与経路及び所望の調製物に応じて、湿潤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、アジュバント、ゲル化または粘度増強添加剤、保存料、香味剤、着色料などの補助物質を含むことができる。“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”（１９９０）のような標準的な製薬テキストを参照して、過度に実験を行うことなく好適な製剤を調製することができる。
本明細書で使用する場合、「免疫応答」という用語は、動物またはヒトにおいて誘発される応答を意味する。免疫応答は、細胞性免疫（ＣＭＩ）を意味する場合もあれば、液性免疫を意味する場合もあれば、両方を意味する場合もある。また、本発明は、免疫系の一部に限定された応答も企図している。通常、「免疫学的応答」には、限定されるものではないが、対象となる組成物またはワクチンに含まれる抗原（１つまたは複数）に特異的に向けられている、抗体、Ｂ細胞、ヘルパーＴ細胞、サプレッサーＴ細胞、及び／または細胞傷害性Ｔ細胞、及び／またはｙｄ Ｔ細胞のうちの１つ以上が含まれる。好ましくは、宿主は、治療的または保護的な免疫学的応答を示して、疾患もしくは障害に対する耐性を増強する、及び／または疾患の臨床的重症度が低減するようにする。このような保護は、罹患した宿主が通常示す症状の低減もしくは欠如、回復時間の迅速化、及び／または罹患した宿主における抗原（例えば、ＩＬ－３１）力価の低減によって示される。
本明細書で使用する場合、「保護する」という用語は、疾患もしくは障害に対する耐性が増強されるように、及び／または宿主哺乳類における疾患の臨床的重症度が低減するように、宿主哺乳類に治療的免疫学的応答を付与することを意味する。
本明細書で使用する場合、「免疫原性」という用語は、抗原（１つまたは複数）に対し宿主哺乳類の免疫応答を産生可能であることを意味する。この免疫応答は、特定の抗原に対するワクチンによって誘発される防御免疫の基礎を形成する。
本明細書で使用する場合、免疫化する、免疫化などは、典型的にはワクチンの投与により、哺乳類を疾患に対し免疫性または耐性にするプロセスのことである。ワクチンは、哺乳類自身の免疫系を刺激して、この後に生じる疾患から哺乳類を保護する。
本明細書で使用する場合、「アジュバント」とは、抗原（複数可）に対する免疫応答を増強する１つ以上の物質から構成された組成物を意味する。アジュバントがどのように機能するかの機序については完全には分かっていない。抗原をゆっくり放出することによって免疫応答を増強すると考えられているアジュバントもあれば、それ自体が強力な免疫原性を有し、相乗的に機能すると考えられているアジュバントもある。
本明細書で使用する場合、エピトープとは、抗体のＣＤＲによって認識される抗原決定基を意味する。言い換えれば、エピトープとは、抗体によって認識され、結合されることが可能な任意の分子のその部分を意味する。別段の明記がない限り、「エピトープ」という用語は、本明細書で使用する場合、抗ＩＬ－３１剤が反応するＩＬ－３１の領域を意味する。
「抗原」とは、抗体によって結合されることが可能な分子または分子の部分であり、これはさらに、抗体によって認識され、結合されることが可能である（対応する抗体の結合領域は、パラトープと称されることがある）。概して、エピトープは、分子（例えば、アミノ酸または糖側鎖）の化学活性表面グルーピングからなり、特定の３次元構造特性及び特定の荷電特性を有する。エピトープは、免疫系によって認識されるタンパク質上の抗原決定基である。エピトープを認識する免疫系の構成要素は、抗体、Ｔ細胞、及びＢ細胞である。Ｔ細胞エピトープは抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面に表示され、典型的には８～１１アミノ酸長（ＭＨＣクラスＩ）または１５アミノ酸長以上（ＭＨＣクラスＩＩ）である。Ｔ細胞の活性化には、表示されたＭＨＣ－ペプチド複合体を認識することが不可欠である。これらの機構により、細菌やウイルスのような「非自己」タンパク質に対し自己タンパク質を適切に認識することが可能になる。必ずしも隣接していない独立したアミノ酸残基は、ＡＰＣ結合溝との相互作用や、その後のＴ細胞受容体による認識に寄与する（Ｊａｎｅｗａｙ，Ｔｒａｖｅｒｓ，Ｗａｌｐｏｒｔ，Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｅ Ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｄｉｓｅａｓｅ．５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｇａｒｌａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ；２００１）。可溶性抗体及び細胞表面関連Ｂ細胞受容体によって認識されるエピトープは、長さ及び連続性の程度が非常に様々である（Ｓｉｖａｌｉｎｇａｍ ａｎｄ Ｓｈｅｐｈｅｒｄ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１２ Ｊｕｌ；５１（３－４）：３０４－３０９ ９）。線状エピトープまたは連続したタンパク質配列内に見出されるエピトープでさえも、抗体パラトープまたはＢ細胞受容体とのキーとなる接触点に相当する非連続的アミノ酸を有することが多い。抗体及びＢ細胞によって認識されるエピトープは、３次元空間でタンパク質上に共通の接触領域を構成するアミノ酸と共に立体構造をとる場合があり、タンパク質の３次及び４次構造の特徴に依存する。このような残基は、一次アミノ酸配列の空間的に異なる領域内でみられることが多い。
本明細書で使用する場合、「ミモトープ」とは、抗原のエピトープを模倣する線状または拘束性のペプチドである。ミモトープは、Ｔ細胞エフェクター応答を誘発可能な１次アミノ酸配列、及び／または動物における獲得免疫応答を成熟させるＢ細胞と結合するのに必要な３次元構造を有することができる。所与のエピトープ抗原に対する抗体は、そのエピトープを模倣するミモトープを認識する。ＩＬ－３１ミモトープは、本明細書では代替的にＩＬ－３１ペプチドミモトープと称されることがある。いくつかの実施形態において、本発明の組成物及び／または方法で使用するためのミモトープ（線状または拘束性）は、約５アミノ酸残基～約４０アミノ酸残基の長さのペプチドである、及び／またはその一部としてこのようなペプチドを含む。
抗体結合の文脈における「特異的に」という用語は、抗体と特定の抗原、すなわちポリペプチド、またはエピトープとの高いアビディティー及び／または高い親和性の結合を意味する。多くの実施形態において、特異的抗原は、抗体産生細胞を単離する動物宿主の免疫化に使用される抗原（または抗原のフラグメントもしくは細画分）である。ある抗原に対する抗体の特異的な結合は、他の抗原に対する同じ抗体の結合よりも強力である。あるポリペプチドに特異的に結合する抗体は、他のポリペプチドに対し、弱いながらも検出可能なレベル（例えば、目的ポリペプチドに対し示される結合の１０％以下）で結合可能な場合がある。このような弱い結合、すなわちバックグラウンド結合は、例えば、適切な対照を使用することにより、対象ポリペプチドに対する抗体の特異的結合と容易に識別することができる。概して、特異的抗体は、抗原に対し、１０－７Ｍ以下、例えば１０－８Ｍ以下（例えば、１０－９Ｍ以下、１０－１０以下、１０－１１以下、１０－１２以下、または１０－１３以下など）のＫＤの結合親和性で結合する。
本明細書で使用する場合、「抗体」という用語は、２つの軽鎖及び２つの重鎖を有するインタクト免疫グロブリンを意味する。したがって、単一の単離抗体またはフラグメントは、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、合成抗体、組換え型抗体、キメラ型抗体、ヘテロキメラ型抗体、イヌ化抗体、ネコ化抗体、完全イヌ抗体、完全ネコ抗体、完全ウマ抗体、または完全ヒト抗体とすることができる。「抗体」という用語は、好ましくは、モノクローナル抗体及びそのフラグメント（例えば、限定されるものではないが、抗体の抗原結合部分を含む）、ならびにＩＬ－３１タンパク質及びそのフラグメントまたは修飾フラグメントに結合することができるこれらの免疫結合等価物を意味する。このようなＩＬ－３１のフラグメント及び修飾フラグメントには、本発明の様々な実施形態で用いられるＩＬ－３１ペプチドミモトープが含まれ得る。例えば、ＩＬ－３１上の所与のエピトープに対する抗体は、そのエピトープを模倣するＩＬ－３１ペプチドミモトープを認識する。抗体という用語は、均質な分子、または複数の異なる分子実体から構成された血清産物のような混合物の両方を意味するように使用される。
「ネイティブ抗体」及び「ネイティブ免疫グロブリン」とは、通常は、約１５０，０００ダルトンのヘテロ４量体糖タンパク質であり、２つの同一の軽（Ｌ）鎖と２つの同一の重（Ｈ）鎖とから構成されている。各軽鎖は、１つのジスルフィド共有結合によって重鎖に結合しているが、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖によって変動する。また、各々の重鎖及び軽鎖は、一定の間隔が置かれた鎖間ジスルフィド架橋も有する。各重鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、それに続いて複数の定常ドメインを有する。各軽鎖は、一端（ＶＬ）に可変ドメイン、他端に定常ドメインを有し、この軽鎖の定常ドメインは重鎖の第１の定常ドメインと共に整列し、軽鎖の可変ドメインは重鎖の可変ドメインと共に整列している。特定のアミノ酸残基は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間の界面を形成すると考えられている。
「抗体フラグメント」という用語は、インタクト抗体構造に満たないものを意味し、限定されるものではないが、単離された単一の抗体鎖、Ｆｖコンストラクト、Ｆａｂコンストラクト、Ｆｃコンストラクト、軽鎖可変または相補性決定領域（ＣＤＲ）の配列などが含まれる。例えば、抗体フラグメントは、抗体の抗原結合部分を含むことができる。
「可変」領域という用語は、フレームワーク及びＣＤＲ（超可変領域の別名でも知られている）を含み、当該用語は、可変ドメインのある特定の部分が、抗体間で配列が大きく相違し、かつ各特定の抗体のその特定の抗原に対する結合及び特異性で使用されるという事実を意味する。ただし、可変性は、抗体の可変ドメイン全体にわたり均等に分布しているわけではない。可変性は、軽鎖及び重鎖両方の可変ドメイン内の超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中している。より高度に保存された可変ドメインの部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。ネイティブな重鎖及び軽鎖の可変ドメインは各々、大部分がβシート構成を採用する複数のＦＲ領域を含み、これらは３つの超可変領域によって接続され、これにより、βシート構造に接続し、場合によってはβシート構造の一部を形成するループが形成される。各鎖における超可変領域は、ＦＲによって、他方の鎖の超可変領域と近接して保持されており、抗体の抗原結合部位の形成に寄与している（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）、６４７－６６９ページを参照）。定常ドメインは、抗体を抗原に結合させることに直接は関係しないが、抗体を抗体依存性細胞毒性に関与させるなどの様々なエフェクター機能を示す。
本明細書で使用される場合、「超可変領域」という用語は、抗原結合を担う抗体のアミノ酸残基を意味する。超可変領域は、「相補性決定領域」すなわち「ＣＤＲ」（Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．（１９９１）（上記））からのアミノ酸残基及び／または「超可変ループ」からのアミノ酸残基（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）を含む。「フレームワーク」すなわち「ＦＲ」残基は、本明細書で定義される超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。
抗体のパパイン消化により、「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２つの同一の抗原結合フラグメントが産生される。各Ｆａｂは単一の抗原結合部位と残部の「Ｆｃ」フラグメントとを有し、Ｆｃという名称には容易に結晶化する能力が反映されている。ペプシン処理はＦ（ａｂ’）２フラグメントをもたらす。このフラグメントは、２つの抗原結合部位を有し、依然として抗原を架橋可能である。
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識及び抗原結合部位を含む最小の抗体フラグメントである。この領域は、１つの重鎖及び１つの軽鎖可変ドメインが緊密に非共有結合的に会合した２量体からなる。この構成において、各可変ドメインの３つの超可変領域が相互作用してＶＨ－ＶＬ２量体の表面上に抗原結合部位を画定する。まとめると、６つの超可変領域は、抗体に抗原結合特異性を付与する。ただし、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つの超可変領域のみを含むＦｖの半分）であっても、全結合部位よりは親和性が低いものの、抗原を認識し、抗原に結合する能力を有する。
また、Ｆａｂフラグメントは、軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）も含む。Ｆａｂ’フラグメントは、抗体ヒンジ領域からの１つ以上のシステイン（複数可）を含めたいくつかの残基が重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシル末端に付加されている点で、Ｆａｂフラグメントと相違する。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を有するＦａｂ’に対する本明細書における呼称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントは、元々は、間にヒンジシステインを有するＦａｂ’フラグメントの対として産生されたものである。抗体フラグメントにおけるその他の化学的結合も知られている。
任意の脊椎動物種由来の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つの明確に異なるタイプの一方に割り当てることができる。
免疫グロブリンは、その重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、異なるクラスに割り当てることができる。現在、免疫グロブリンには５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのいくつかはさらに、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、及びＩｇＡ２（マウス及びヒトの呼称による定義）に分類することができる。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、及びミューと呼ばれる。種々のクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び３次元構成は、複数の種において周知されている。これらの定常ドメインに関連する個別のアイソタイプ及び機能的活性の普及は種特異的であり、実験により定義されなければならない。
本明細書で定義される「モノクローナル抗体」とは、単一の細胞クローン（具体的には、ハイブリドーマ細胞のような単一の細胞クローン）によって産生される抗体であり、したがって単一の純粋で均質なタイプの抗体である。同じクローンから産生される全てのモノクローナル抗体は同一であり、同じ抗原特異性を有する。「モノクローナル」という用語は、単一の細胞クローン、単一の細胞、及び当該細胞の子孫に関係する。
本明細書で定義される「完全イヌ抗体」とは、細胞クローン（典型的にはＣＨＯ細胞系）によって産生されるモノクローナル抗体であり、したがって単一の純粋で均質なタイプの抗体である。イヌなどの免疫化哺乳類の単一のＢ細胞から同定された抗体は、その可変ドメイン配列の同定後に組換え型ＩｇＧタンパク質として作成される。このような可変ドメインをイヌ定常ドメイン（重鎖及び軽鎖カッパまたはラムダ定常）に移植すると、組換え型完全イヌ抗体が生成される。同じクローンから産生される全ての完全イヌモノクローナル抗体は同一であり、同じ抗原特異性を有する。「モノクローナル」という用語は、単一の細胞クローン、単一の細胞、及び当該細胞の子孫に関係する。
本明細書で定義される「完全ネコ抗体」とは、細胞クローン（典型的にはＣＨＯ細胞系）によって産生されるモノクローナル抗体であり、したがって単一の純粋で均質なタイプの抗体である。イヌなどの免疫化哺乳類の単一のＢ細胞から同定された抗体は、その可変ドメイン配列の同定後に組換え型ＩｇＧタンパク質として作成される。このような可変ドメインをネコ定常ドメイン（重鎖及び軽鎖カッパまたはラムダ定常）に移植すると、組換え型完全ネコ抗体が生成される。同じクローンから産生される全ての完全ネコモノクローナル抗体は同一であり、同じ抗原特異性を有する。「モノクローナル」という用語は、単一の細胞クローン、単一の細胞、及び当該細胞の子孫に関係する。
本明細書で定義される「完全ウマ抗体」とは、細胞クローン（典型的にはＣＨＯ細胞系）によって産生されるモノクローナル抗体であり、したがって単一の純粋で均質なタイプの抗体である。イヌなどの免疫化哺乳類の単一のＢ細胞から同定された抗体は、その可変ドメイン配列の同定後に組換え型ＩｇＧタンパク質として作成される。このような可変ドメインをウマ定常ドメイン（重鎖及び軽鎖カッパまたはラムダ定常）に移植すると、組換え型完全ウマ抗体が生成される。同じクローンから産生される全ての完全ウマモノクローナル抗体は同一であり、同じ抗原特異性を有する。「モノクローナル」という用語は、単一の細胞クローン、単一の細胞、及び当該細胞の子孫に関係する。
本明細書で定義される「完全ヒト抗体」とは、細胞クローン（典型的にはＣＨＯ細胞系）によって産生されるモノクローナル抗体であり、したがって単一の純粋で均質なタイプの抗体である。イヌなどの免疫化哺乳類の単一のＢ細胞から同定された抗体は、その可変ドメイン配列の同定後に組換え型ＩｇＧタンパク質として作成される。このような可変ドメインをヒト定常ドメイン（重鎖及び軽鎖カッパまたはラムダ定常）に移植すると、組換え型完全ヒト抗体が生成される。同じクローンから産生される全ての完全ヒトモノクローナル抗体は同一であり、同じ抗原特異性を有する。「モノクローナル」という用語は、単一の細胞クローン、単一の細胞、及び当該細胞の子孫に関係する。
本明細書におけるモノクローナル抗体には、具体的には、重鎖及び／または軽鎖の部分が、特定の種に由来する抗体内の対応する配列と同一または相同である一方で、鎖（複数可）の残部は別の種に由来する抗体内の対応する配列と同一または相同である「キメラ型」抗体（免疫グロブリン）を含み、加えて、所望の生物学的活性を示す限りでは、このような抗体のフラグメントも含む。典型的には、キメラ型抗体とは、その軽鎖及び重鎖遺伝子が、典型的には遺伝子工学により、異なる種に属する抗体可変領域及び定常領域遺伝子から構築された抗体である。例えば、マウスモノクローナル抗体からの遺伝子の可変セグメントは、イヌ定常セグメントに連結させることができる。キメラ型マウス：イヌＩｇＧの１つの実施形態において、抗原結合部位はマウスに由来し、ＦＣ部分はイヌのものである。
非イヌ（例えば、マウス）抗体の「イヌ化」形態は、非イヌ免疫グロブリン由来の最小配列を含む遺伝子操作抗体である。イヌ化抗体とは、レシピエントの超可変領域残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウスのような非イヌ種（ドナー抗体）からの超可変領域残基で置き換えられたイヌ免疫グロブリン配列（レシピエント抗体）である。いくつかの場合において、イヌ免疫グロブリン配列のフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非イヌ残基で置き換えられる。さらに、イヌ化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基を含むことができる。このような修飾は、抗体性能をさらに精緻化するために行われる。概して、イヌ化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、超可変領域の全てまたは実質的に全てが非イヌ免疫グロブリン配列の超可変領域に対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがイヌ免疫グロブリン配列のＦＲである。また、イヌ化抗体は、任意選択で、完全なまたは少なくとも一部分の免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的には、完全なまたは少なくとも一部分のイヌ免疫グロブリン配列も含む。マウスＩｇＧの種分化またはイヌ化の１つの実施形態において、マウスＣＤＲがイヌフレームワークに移植される。
非ネコ（例えば、マウス）抗体の「ネコ化」形態は、非ネコ免疫グロブリンに由来する最小配列を含む遺伝子操作抗体である。ネコ化抗体とは、レシピエントの超可変領域残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウスのような非ネコ種（ドナー抗体）からの超可変領域残基で置き換えられたネコ免疫グロブリン配列（レシピエント抗体）である。いくつかの場合において、ネコ免疫グロブリン配列のフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ネコ残基で置き換えられる。さらに、ネコ化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基を含むことができる。このような修飾は、抗体性能をさらに精緻化するために行われる。概して、ネコ化抗体は、超可変領域の全てまたは実質的に全てが非ネコ免疫グロブリン配列の超可変領域に対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがネコ免疫グロブリン配列のＦＲである少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含む。また、ネコ化抗体は、任意選択で、完全なまたは少なくとも一部分の免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的には、完全なまたは少なくとも一部分のネコ免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）も含む。
非ウマ（例えば、マウス）抗体の「ウマ化」形態は、非ウマ免疫グロブリンに由来する最小配列を含む遺伝子操作抗体である。ウマ化抗体とは、レシピエントの超可変領域残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウスのような非ウマ種（ドナー抗体）からの超可変領域残基で置き換えられたウマ免疫グロブリン配列（レシピエント抗体）である。いくつかの場合において、ウマ免疫グロブリン配列のフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ウマ残基で置き換えられる。さらに、ウマ化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基を含むことができる。このような修飾は、抗体性能をさらに精緻化するために行われる。概して、ウマ化抗体は、超可変領域の全てまたは実質的に全てが非ウマ免疫グロブリン配列の超可変領域に対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがウマ免疫グロブリン配列のＦＲである少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含む。また、ウマ化抗体は、任意選択で、完全なまたは少なくとも一部分の免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的には、完全なまたは少なくとも一部分のウマ免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）も含む。
非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含む遺伝子操作抗体である。ヒト化抗体とは、レシピエントの超可変領域残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウスのような非ヒト種（ドナー抗体）からの超可変領域残基で置き換えられたヒト免疫グロブリン配列（レシピエント抗体）である。いくつかの事例では、ヒト免疫グロブリン配列のフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基に置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基を含むことができる。このような修飾は、抗体性能をさらに精緻化するために行われる。概して、ヒト化抗体は、超可変領域の全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリン配列の超可変領域に対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のＦＲである少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含む。また、ヒト化抗体は、任意選択で、完全なまたは少なくとも一部分の免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的には、完全なまたは少なくとも一部分のヒト免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）も含む。
「完全イヌ」抗体とは、非イヌ免疫グロブリンに由来する配列を含まない遺伝子操作抗体である。完全イヌ抗体とは、超可変領域残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有する天然イヌ抗体イヌ（ドナー抗体）に由来するイヌ免疫グロブリン配列（レシピエント抗体）である。いくつかの場合において、イヌ免疫グロブリン配列のフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非イヌ残基で置き換えられる。さらに、完全イヌ抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基を含むことができ、例えば、限定されるものではないが、親和性を修飾するためのＣＤＲの変化がこれに含まれる。このような修飾は、抗体性能をさらに精緻化するために行われる。概して、完全イヌ抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、超可変領域の全てまたは実質的に全てがイヌ免疫グロブリン配列の超可変領域に対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがイヌ免疫グロブリン配列のＦＲである。また、完全イヌ抗体は、任意選択で、完全なまたは少なくとも一部分の免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的には、完全なまたは少なくとも一部分のイヌ免疫グロブリン配列も含む。
「完全ネコ」抗体とは、非ネコ免疫グロブリンに由来する配列を含まない遺伝子操作抗体である。完全ネコ抗体とは、超可変領域残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有する天然ネコ抗体イヌ（ドナー抗体）に由来するネコ免疫グロブリン配列（レシピエント抗体）である。いくつかの場合において、ネコ免疫グロブリン配列のフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ネコ残基で置き換えられる。さらに、完全ネコ抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基を含むことができ、例えば、限定されるものではないが、親和性を修飾するためのＣＤＲの変化がこれに含まれる。このような修飾は、抗体性能をさらに精緻化するために行われる。概して、完全ネコ抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、超可変領域の全てまたは実質的に全てがネコ免疫グロブリン配列の超可変領域に対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがネコ免疫グロブリン配列のＦＲである。また、完全ネコ抗体は、任意選択で、完全なまたは少なくとも一部分の免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的には、完全なまたは少なくとも一部分のネコ免疫グロブリン配列も含む。
「完全ウマ」抗体とは、非ウマ免疫グロブリンに由来する配列を含まない遺伝子操作抗体である。完全ウマ抗体とは、超可変領域残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有する天然ウマ抗体イヌ（ドナー抗体）に由来するウマ免疫グロブリン配列（レシピエント抗体）である。いくつかの場合において、ウマ免疫グロブリン配列のフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ウマ残基で置き換えられる。さらに、完全ウマ抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基を含むことができ、例えば、限定されるものではないが、親和性を修飾するためのＣＤＲの変化がこれに含まれる。このような修飾は、抗体性能をさらに精緻化するために行われる。概して、完全ウマ抗体は、超可変領域の全てまたは実質的に全てウマ免疫グロブリン配列の超可変領域に対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがウマ免疫グロブリン配列のＦＲである少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含む。また、完全ウマ抗体は、任意選択で、完全なまたは少なくとも一部分の免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的には、完全なまたは少なくとも一部分のウマ免疫グロブリン配列も含む。
「完全ヒト」抗体とは、非ヒト免疫グロブリンに由来する配列を含まない遺伝子操作抗体である。完全ヒト抗体とは、超可変領域残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有する天然ヒト抗体（ドナー抗体）に由来するヒト免疫グロブリン配列（レシピエント抗体）である。いくつかの事例では、ヒト免疫グロブリン配列のフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基に置き換えられる。さらに、完全ヒト抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基を含むことができ、例えば、限定されるものではないが、親和性を修飾するためのＣＤＲの変化がこれに含まれる。このような修飾は、抗体性能をさらに精緻化するために行われる。概して、完全ヒト抗体は、超可変領域の全てまたは実質的に全てヒト免疫グロブリン配列の超可変領域に対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のＦＲである少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含む。また、完全ヒト抗体は、任意選択で、完全なまたは少なくとも一部分の免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的には、完全なまたは少なくとも一部分のヒト免疫グロブリン配列も含む。
本明細書で定義する「ヘテロキメラ型」という用語は、抗体鎖の一方（重鎖または軽鎖）が、例えば、イヌ化、ネコ化、ウマ化、またはヒト化され、他方はキメラ型である抗体を意味する。１つの実施形態において、ネコ化可変重鎖（全てのＣＤＲがマウスであり全てのＦＲがネコである）は、キメラ型可変軽鎖（全てのＣＤＲがマウスであり全てのＦＲがマウスである）と対形成する。この実施形態では、可変重鎖及び可変軽鎖の両方をネコ定常領域と融合する。
本明細書で使用する場合、「バリアント」という用語は、１つ以上の保存的アミノ酸バリエーションまたはその他の軽微な修飾を有し、対応するペプチドまたはポリペプチドが野生型のペプチドまたはポリペプチドと比較したときに実質的に同等の機能を有するような、ペプチド、ポリペプチド、またはペプチドもしくはポリペプチドをコードする核酸配列を意味する。通常、本発明で使用するためのバリアントペプチドミモトープは、親ミモトープに対し少なくとも３０％の同一性を有し、より好ましくは親ミモトープに対し少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を有する。
本明細書において「バリアント」抗ＩＬ－３１抗体とは、親抗体配列における１つ以上のアミノ酸残基（複数可）の付加、欠失、及び／または置換によって「親」抗ＩＬ－３１抗体アミノ酸配列とアミノ酸配列が相違し、親抗ＩＬ－３１抗体における少なくとも１つの所望の活性を保持する分子を意味する。所望の活性としては、抗原に特異的に結合する能力、動物のＩＬ－３１活性を低減、阻害、または中和する能力、及び細胞ベースアッセイにおけるＩＬ－３１媒介性ｐＳＴＡＴシグナル伝達の阻害能力を挙げることができる。１つの実施形態において、バリアントは、親抗体の１つ以上の超可変及び／またはフレームワーク領域（複数可）に１つ以上のアミノ酸置換（複数可）を含む。例えば、バリアントは、親抗体の１つ以上の超可変及び／またはフレームワーク領域に少なくとも１つ、例えば、約１～約１０、好ましくは約２～約５の置換を含むことができる。通常、バリアントは、親抗体の重鎖または軽鎖可変ドメイン配列に対し少なくとも５０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも６５％、より好ましくは少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。この配列に対する同一性または相同性は、本明細書では、配列を整列し必要に応じてギャップを導入して最大のパーセント配列同一性を達成した後に親抗体残基と同一である候補配列のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。抗体配列へのＮ末端側、Ｃ末端側、または内部の伸長、欠失、または挿入はいずれも、配列の同一性または相同性に影響を及ぼすとはみなさないものとする。バリアントは、ＩＬ－３１に結合する能力を保持し、好ましくは、親抗体の活性よりも優れた所望の活性を有する。例えば、バリアントは、より強力な結合親和性を有する場合も、動物のＩＬ－３１活性を低減、阻害、もしくは中和する能力が強化される場合も、及び／または細胞ベースアッセイにおけるＩＬ－３１媒介性ｐＳＴＡＴシグナル伝達の阻害能力が強化される場合もある。
「バリアント」核酸とは、本明細書では、「親」核酸と配列が相違する分子を意味する。ポリヌクレオチド配列の相違は、１つ以上のヌクレオチドの欠失、置換、または付加のような変異による変化から生じ得る。これらの変化の各々は、所与の配列内で、単独または組合せで１回以上生じ得る。
本明細書における「親」抗体とは、バリアントの調製に使用されるアミノ酸配列によってコードされる抗体である。１つの実施形態において、親抗体は、イヌフレームワーク領域を有し、存在する場合はイヌ抗体定常領域（複数可）を有する。例えば、親抗体は、イヌ化抗体またはイヌ抗体とすることができる。別の例として、親抗体は、ネコ化抗体またはネコ抗体とすることができる。また別の例として、親抗体は、ウマ化抗体またはウマ抗体とすることができる。別の例として、親抗体は、ヒト化抗体またはヒト抗体とすることができる。さらに別の例において、親抗体は、マウスモノクローナル抗体である。
本明細書及び特許請求の範囲の全体にわたって使用される「抗原結合領域」、「抗原結合部分」などの用語は、抗原と相互作用し、抗原に対するその特異性及び親和性を抗体に付与するアミノ酸残基を含む、抗体分子の部分を意味する。抗体結合領域は、抗原結合残基の適切な立体構造を維持するために必要な「フレームワーク」アミノ酸残基を含む。代替的に、本発明に従う抗体の抗原結合部分は、本明細書では、例えば、ＩＬ－３１特異的ペプチドもしくはポリペプチド、または抗ＩＬ－３１ペプチドもしくはポリペプチドと称されることがある。
「単離された」という用語は、物質（例えば、抗体または核酸）がその自然環境の構成要素から分離及び／または回収されていることを意味する。当該物質の自然環境における混入構成要素は、当該物質の診断上または治療上の使用を妨げ得る物質であり、このような構成要素としては、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質溶質または非タンパク質溶質を挙げることができる。核酸に関しては、単離核酸は、染色体内で通常会合している５’から３’への配列から分離されたものを含むことができる。好ましい実施形態において、当該物質は、物質の９５重量％超まで、最も好ましくは９９重量％超まで精製される。単離物質は、物質の自然環境における少なくとも１つの構成要素が存在しないことから、組換え型細胞内のｉｎ ｓｉｔｕの物質を含む。ただし、通常、単離物質は少なくとも１つの精製ステップによって調製される。
「標識」という語は、本明細書で使用する場合、例えば、抗体、核酸、またはミモトープと直接的または間接的に結合体化している検出可能な化合物または組成物を意味する。標識そのものは、それ自体が検出可能であってもよく（例えば、放射性同位体標識もしくは蛍光標識）、または酵素標識の場合は、検出可能な基質化合物もしくは組成物の化学改変を触媒してもよい。
「核酸」、「ポリヌクレオチド」、「核酸分子」などの用語は本明細書では互換的に使用され得、ＤＮＡ及びＲＮＡにおける一連のヌクレオチド塩基（「ヌクレオチド」とも呼ばれる）を意味する。核酸は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、及び／またはこれらの類似体を含むことができる。「核酸」という用語は、例えば、１本鎖及び２本鎖の分子を含む。核酸は、例えば、遺伝子または遺伝子フラグメント、エクソン、イントロン、ＤＮＡ分子（例えば、ｃＤＮＡ）、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ）、組換え型核酸、プラスミド、ならびにその他のベクター、プライマー、及びプローブであり得る。５’から３’（センス）及び３’から５’（アンチセンス）両方のポリヌクレオチドが含まれる。
「対象」または「患者」とは、本発明の分子によって影響を受ける可能性がある治療を必要とする哺乳類を意味する。本発明に従って治療することができる哺乳類には脊椎動物が含まれ、イヌ、ネコ、ウマ、及びヒト哺乳類のような哺乳類が特に好ましい例である。
「治療的有効量」（または「有効量」）とは、対象または患者に投与したときに有益なまたは所望の結果をもたらすのに十分な活性成分（例えば、本発明に従う薬剤）の量を意味する。有効量は、１回以上の投与、適用、または薬用量で投与することができる。本発明に従う組成物の治療有効量は、当業者によって容易に定量することができる。本発明の文脈において、「治療有効量」とは、ＩＬ－３１媒介性障害、例えば、掻痒状態もしくはアレルギー状態、または腫瘍進行の治療に関連する１つ以上のパラメーターの客観的に測定された変化（症状の臨床的改善を含む）をもたらす量である。当然ながら、治療有効量は、治療を行う特定の対象及び状態、対象の体重及び年齢、疾患状態の重症度、選択される特定の化合物、従うべき投薬レジメン、投与のタイミング、投与方法などに応じて変動し、これらは全て当業者が容易に定量することができる。
本明細書で使用する場合、「治療的」という用語は、疾患または障害の治療の全範囲を包含する。本発明の「治療」剤は、リスクがあると同定され得る動物を標的化するように設計された手順（薬理遺伝学）を組み込むものを含めて、予防もしくは防止する方式で、または本質的に改善もしくは治癒する方式で、作用することができ、あるいは治療を行う疾患または障害の少なくとも１つの症状の進行の速度または程度を遅くするように作用することができる。
「治療」、「治療する」などは、治療処置及び予防的もしくは防止的措置のいずれも意味する。治療を必要とする動物には、既に障害を有する動物に加えて障害が防止されるべき動物が含まれる。疾患もしくは障害の「治療」またはこれらを「治療する」という用語は、疾患もしくは障害に対し防止もしくは保護すること（すなわち、臨床症状を発生させないこと）、疾患もしくは障害を阻害すること（すなわち、臨床症状の発生を阻止もしくは抑制すること）、及び／または疾患もしくは障害を緩和すること（すなわち、臨床症状を軽減すること）を含む。最終的な誘導事象（１つまたは複数）は未知または潜在的であり得るため、理解されるであろうが、疾患または障害の「防止」及び「抑制」を区別するのは必ずしも可能ではない。したがって、「予防」という用語は、「防止」及び「抑制」の両方を包含する一種の「治療」を構成するように理解されたい。したがって、「治療」という用語は「予防」を含む。
「アレルギー状態」という用語は、本明細書では、免疫システムと身体に対する異物との間の相互作用によって引き起こされる疾患または障害として定義される。この外来物質は「アレルゲン」と称される。一般的なアレルゲンとしては、空中アレルゲン、例えば、花粉、粉塵、カビ、チリダニタンパク質、虫刺されから注入された唾液などが挙げられる。アレルギー状態の例としては、限定されるものではないが、以下：アレルギー性皮膚炎、夏季湿疹、蕁麻疹、ヒーブ、炎症性気道疾患、再発性気道閉塞、気道過敏症、慢性閉塞性肺疾患、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）のような自己免疫に起因する炎症プロセスが挙げられる。
「掻痒状態」という用語は、本明細書では、皮膚をこするまたは引っ掻いて緩和を得たくなる衝動をもたらす強いかゆみ感覚を特徴とする疾患または障害として定義される。掻痒状態の例としては、限定されるものではないが、以下：アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、湿疹、乾癬、強皮症、及び掻痒が挙げられる。
本明細書で使用する場合、「細胞」、「細胞系」、及び「細胞培養物」という用語は互換的に使用され得る。これらの用語の全てはその子孫も含み、子孫はあらゆる後続の世代である。全ての子孫は、故意のまたは偶発的な変異により、同一でない場合があることを理解されたい。異種核酸配列を発現させる文脈において、「宿主細胞」とは、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏのいずれにあるかにかかわらず、原核細胞または真核細胞（例えば、細菌細胞、酵母細胞、哺乳類細胞、及び昆虫細胞）を意味する。例えば、宿主細胞は、トランジェニック動物内にあってもよい。宿主細胞は、ベクターのレシピエントとして使用することができ、ベクターを複製可能な及び／またはベクターにコードされる異種核酸を発現可能な任意の形質転換可能な生物を含むことができる。
「組成物」とは、活性薬剤と別の化合物または組成物との組合せを意味するように意図され、別の化合物または組成物は不活性（例えば、標識）であっても活性（例えば、アジュバント）であってもよい。
本明細書で使用する場合、「医薬的に許容される担体」及び「医薬的に許容されるビヒクル」という用語は相互に交換可能であり、有害作用を伴わずに宿主に注射することができるワクチン抗原を含むための流体ビヒクルを意味する。本発明での使用に適した医薬的に許容される担体は、当業者に周知されている。このような担体としては、限定されるものではないが、水、食塩水、緩衝食塩水、リン酸緩衝液、アルコール溶液／水溶液、乳濁液、または懸濁液が挙げられる。その他の従来的に用いられている希釈剤、アジュバント、及び賦形剤は、従来的な技法に従って添加することができる。このような担体としては、エタノール、ポリオール、及びこれらの好適な混合物、植物油、ならびに注射用有機エステルを挙げることができる。緩衝液及びｐＨ調整剤も用いることができる。緩衝液としては、限定されるものではないが、有機酸または塩基から調製される塩が挙げられる。代表的な緩衝液としては、限定されるものではないが、有機酸塩、例えば、クエン酸の塩（例えば、シトレート）、アスコルビン酸、グルコン酸、ヒスチジン－ＨＣｌ、炭酸、酒石酸、コハク酸、酢酸、もしくはフタル酸の塩、トリス、トリメタンミン塩酸塩（ｔｒｉｍｅｔｈａｎｍｉｎｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、またはリン酸緩衝液が挙げられる。非経口用担体としては、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロース、トレハロース、スクロース、及び塩化ナトリウム、乳酸リンゲルまたは固定油を挙げることができる。静注用担体としては、液体及び栄養補充液、電解質補充液、例えば、リンゲルデキストロースに基づくものなどを挙げることができる。防腐剤及びその他の添加物、例えば、抗微生物剤、抗酸化剤、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）、不活性ガスなども医薬担体中に提供され得る。本発明は、担体の選択によって限定されるものではない。これらの医薬的に許容される組成物を適切なｐＨ等張性、安定性、及びその他の従来的な特性を有する上記の構成要素から調製することは、当業者の技能範囲内である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ ｅｄ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，ｐｕｂｌ．，２０００及びＴｈｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，４．ｓｕｐ．ｔｈ ｅｄｉｔ．，ｅｄｓ．Ｒ．Ｃ．Ｒｏｗｅ ｅｔ ａｌ，ＡＰｈＡ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，２００３などのテキストを参照。
「保存的アミノ酸置換」という用語は、所与のアミノ酸残基の任意のアミノ酸置換を示すものであり、置換残基は所与の残基と非常に化学的に類似するため、ポリペプチド機能（例えば、酵素活性）が実質的に低下しない。保存的アミノ酸置換は、当技術分野で一般に知られており、その例は、例えば、米国特許第６，７９０，６３９号、第６，７７４，１０７号、第６，１９４，１６７号、または第５，３５０，５７６号で説明されている。好ましい実施形態において、保存的アミノ酸置換は、以下の６つの群のうちの１つの中で生じるいずれか１つである。
●１．低分子脂肪族で実質的に非極性の残基：Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、及びＴｈｒ
●２．高分子脂肪族で非極性の残基：Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、及びＶａｌ；Ｍｅｔ
●３．極性で負に帯電した残基及びそのアミド：Ａｓｐ及びＧｌｕ
●４．極性で負に帯電した残基のアミド：Ａｓｎ及びＧｌｎ；Ｈｉｓ
●５．極性で正に帯電した残基：Ａｒｇ及びＬｙｓ；Ｈｉｓ
●６．高分子芳香族残基：Ｔｒｐ及びＴｙｒ；Ｐｈｅ
好ましい実施形態において、保存的アミノ酸置換は、ネイティブ残基（保存的置換）対としてリストされる以下のうちのいずれか１つである：Ａｌａ（Ｓｅｒ）；Ａｒｇ（Ｌｙｓ）；Ａｓｎ（Ｇｌｎ；Ｈｉｓ）；Ａｓｐ（Ｇｌｕ）；Ｇｌｎ（Ａｓｎ）；Ｇｌｕ（Ａｓｐ）；Ｇｌｙ（Ｐｒｏ）；Ｈｉｓ（Ａｓｎ；Ｇｌｎ）；Ｉｌｅ（Ｌｅｕ；Ｖａｌ）；Ｌｅｕ（Ｉｌｅ；Ｖａｌ）；Ｌｙｓ（Ａｒｇ；Ｇｌｎ；Ｇｌｕ）；Ｍｅｔ（Ｌｅｕ；Ｉｌｅ）；Ｐｈｅ（Ｍｅｔ；Ｌｅｕ；Ｔｙｒ）；Ｓｅｒ（Ｔｈｒ）；Ｔｈｒ（Ｓｅｒ）；Ｔｒｐ（Ｔｙｒ）；Ｔｙｒ（Ｔｒｐ；Ｐｈｅ）；及びＶａｌ（Ｉｌｅ；Ｌｅｕ）。
ポリペプチドが保存的アミノ酸置換（複数可）を含むことができるのと同様に、ポリペプチドのポリヌクレオチドも保存的コドン置換（複数可）を含むことができる。コドン置換は、発現したときに上記のように保存的アミノ酸置換をもたらす場合には、保存的であるとみなされる。また、アミノ酸置換を生じない縮重コドン置換も、本発明に従うポリヌクレオチドでは有用である。したがって、例えば、本発明の実施形態で有用な選択されたポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、それを用いて形質転換を行う発現宿主細胞によって示されるコドン使用頻度に近づけるために、または別の方法でその発現を改善するために、縮重コドン置換によって変異させてもよい。
本発明は、本明細書で説明されている特定の方法論、プロトコル、及び試薬などに限定されず、そのため変動する可能性があることを理解されたい。本明細書で使用する用語は、特定の実施形態を説明するためのものに過ぎず、本発明の範囲を限定するようには意図されていない。本発明の範囲は特許請求の範囲によってのみ定義される。
別段の定義がない限り、本明細書で説明されているワクチン組成物及び抗体に関連して使用される科学用語及び技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。さらに、文脈による別段の要求がない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含むものとする。概して、本明細書で説明されている細胞及び組織培養、分子生物学、ならびにタンパク質及びオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチド化学及びハイブリダイゼーションに関連して利用されている命名法及びこれらの技法は、当技術分野で周知され、一般的に使用されているものである。組換え型ＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、ならびに組織培養及び形質移入（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）については、標準的な技法が使用される。
酵素反応及び精製の技法は、製造業者の仕様に従って、または当技術分野で一般的に遂行されているように、または本明細書で説明されているように実施される。上記の技法及び手順は、概して、当技術分野で周知されている従来的な方法に従って、また本明細書全体で引用され論じられている様々な全般的及びより具体的な参考文献に記載されているように、実施される。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ：ＬＡＢ．ＭＡＮＵＡＬ（３ｒｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂ．Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，２００１）及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ／Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ），１９９３を参照。本明細書で説明されている分析化学、合成有機化学、ならびに医薬品化学及び製薬化学に関連して利用されている名称、ならびにこれらの実験手順及び技法は、当技術分野で周知され一般的に使用されているものである。化学合成、化学分析、医薬の調製、製剤化、及び送達、ならびに患者の治療で標準的な技法が使用される。
作業実施例または別途指示されている場合以外では、本明細書で使用される成分または反応条件の量を表現する全ての数字は、全ての場合において「約」という用語で修飾されるものとして理解されたい。
特定された全ての特許及びその他の刊行物は、例えば、本発明と関連して使用され得るこのような刊行物で説明されている方法論を説明及び開示する目的において、参照により本明細書に明示的に援用される。これらの刊行物は、単に本出願の出願日以前に開示されたために提供するものである。
組成物
本発明は、ＩＬ－３１ミモトープ（ペプチド）及びそのバリアント、ならびに診断手順を含めた臨床的及び科学的手順におけるこれらの使用を提供する。本明細書で使用する場合、このようなＩＬ－３１ミモトープは、抗原のエピトープを模倣する線状または拘束性のペプチドである。所与のＩＬ－３１エピトープ抗原に対する抗ＩＬ－３１抗体は、そのエピトープを模倣するＩＬ－３１ミモトープを認識する。
ＩＬ－３１ミモトープ（ペプチド）は、本発明に従うワクチン組成物で用いられる。このようなワクチン組成物は、掻痒状態またはアレルギー性状態のようなＩＬ－３１媒介性障害に対し哺乳類を保護するのに有用である。いくつかの実施形態において、ＩＬ－３１媒介性の掻痒状態またはアレルギー状態は、アトピー性皮膚炎、湿疹、乾癬、強皮症、及び掻痒から選択される掻痒状態である。他の実施形態において、ＩＬ－３１媒介性の掻痒状態またはアレルギー状態は、アレルギー性皮膚炎、夏季湿疹、蕁麻疹、ヒーブ、炎症性気道疾患、再発性気道閉塞、気道過敏症、慢性閉塞性肺疾患、及び自己免疫に起因する炎症プロセスから選択されるアレルギー状態である。他の実施形態において、ＩＬ－３１媒介性障害は腫瘍進行である。いくつかの実施形態において、ＩＬ－３１媒介性障害は好酸球性疾患またはマスト細胞腫である。
１つの実施形態において、本発明に従うワクチン組成物は、担体ポリペプチドと、ネコＩＬ－３１ミモトープ、イヌＩＬ－３１ミモトープ、ウマＩＬ－３１ミモトープ、及びヒトＩＬ－３１ミモトープから選択される少なくとも１つのミモトープとの組合せ、ならびにアジュバントを含む。いくつかの実施形態において、本発明のワクチン組成物は、所与の種からの２つ以上のＩＬ－３１ミモトープを含むことができ、またはさらに異なる種からのＩＬ－３１ミモトープの組合せも含むことができる。いくつかの実施形態において、本発明の組成物及び／または方法で使用するためのミモトープ（線状または拘束性）は、約５アミノ酸残基～約４０アミノ酸残基の長さのペプチドである、及び／またはその一部としてこのようなペプチドを含む。
１つの実施形態において、本発明の組成物及び方法で用いられる少なくとも１つのミモトープは、ＩＬ－３１ １５Ｈ０５ミモトープ、ＩＬ－３１ヘリックスＢＣ領域ミモトープ、ＩＬ－３１ヘリックスＡ領域ミモトープ、ＩＬ－３１ ＡＢループ領域ミモトープ、またはこれらの任意の組合せから選択される。
１つの実施形態において、本発明の組成物及び方法で使用するための少なくとも１つのミモトープは、ＩＬ－３１の生物活性を中和する抗体を生成する。
別の実施形態において、本発明のワクチン組成物は、ＩＬ－３１上の少なくとも１つの中和エピトープに向けられ、ＩＬ－３１上の非中和エピトープには向けられない哺乳類における抗体を生成するための焦点を絞った免疫応答を誘発可能である。
１つの実施形態において、ワクチン組成物は、アミノ酸配列ＳＶＰＡＤＴＦＥＣＫＳＦ（配列番号１８６）、ＳＶＰＡＤＴＦＥＲＫＳＦ（配列番号１８７）、ＮＳＳＡＩＬＰＹＦＲＡＩＲＰＬＳＤＫＮＩＩＤＫＩＩＥＱＬＤＫＬＫＦ（配列番号１９２）、ＡＰＴＨＱＬＰＰＳＤＶＲＫＩＩＬＥＬＱＰＬＳＲＧ（配列番号１９６）、ＴＧＶＰＥＳ（配列番号２００）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む、イヌＩＬ－３１ミモトープを含む。
別の実施形態において、ワクチン組成物は、アミノ酸配列ＳＭＰＡＤＮＦＥＲＫＮＦ（配列番号１８８）、ＮＧＳＡＩＬＰＹＦＲＡＩＲＰＬＳＤＫＮＴＩＤＫＩＩＥＱＬＤＫＬＫＦ（配列番号１９３）、ＡＰＡＨＲＬＱＰＳＤＩＲＫＩＩＬＥＬＲＰＭＳＫＧ（配列番号１９７）、ＩＧＬＰＥＳ（配列番号２０１）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む、ネコＩＬ－３１ミモトープを含む。
また別の実施形態において、ワクチン組成物は、アミノ酸配列ＳＭＰＴＤＮＦＥＲＫＲＦ（配列番号１８９）、ＮＳＳＡＩＬＰＹＦＫＡＩＳＰＳＬＮＮＤＫＳＬＹＩＩＥＱＬＤＫＬＮＦ（配列番号１９４）、ＧＰＩＹＱＬＱＰＫＥＩＱＡＩＩＶＥＬＱＮＬＳ ＫＫ（配列番号１９８）、ＫＧＶＱＫＦ（配列番号２０２）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む、ウマＩＬ－３１ミモトープを含む。
なおさらなる実施形態において、ワクチン組成物は、アミノ酸配列ＳＶＰＴＤＴＨＥＣＫＲＦ（配列番号１９０）、ＳＶＰＴＤＴＨＥＲＫＲＦ（配列番号１９１）、ＨＳＰＡＩＲＡＹＬＫＴＩＲＱＬＤＮＫＳＶＩＤＥＩＩＥＨＬＤＫＬＩＦ（配列番号１９５）、ＬＰＶＲＬＬＲＰＳＤＤＶＱＫＩＶＥＥＬＱＳＬＳＫＭ（配列番号１９９）、ＫＧＶＬＶＳ（配列番号２０３）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む、ヒトＩＬ－３１ミモトープを含む。
１つの実施形態において、本発明に従うワクチン組成物で用いられるミモトープは、拘束性ミモトープである。１つの実施形態において、このような拘束性ミモトープは、化学的に連結した環状ペプチドである。
線状ＩＬ－３１ミモトープは、化学合成で産生することも組換えで産生することもできる。拘束性ＩＬ－３１ミモトープ（例えば、化学的に連結した環状ペプチド）は、化学的に合成することも、化学合成と組換え技術との組合せを用いて作製することもできる。
いくつかの実施形態において、ワクチン組成物で用いられるＩＬ－３１ミモトープは、担体ポリペプチドと化学的に結合体化している。他の実施形態において、担体ポリペプチド及びミモトープは、組換え融合タンパク質の一部である。
ＩＬ－３１ミモトープと組み合わされる担体ポリペプチドは、細菌トキソイドもしくはその誘導体、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、またはウイルス様粒子とすることができる、あるいはその一部としてこれらのいずれかを含むことができる。非限定的な例として、細菌トキソイドまたは誘導体は、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、Ｂ群Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓからの外膜タンパク質複合体、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素、またはジフテリア毒素の無毒性変異型（ＣＲＭ１９７）とすることができる。他の非限定的な例として、ウイルス様粒子は、ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ、Ｅ．ｃｏｌｉバクテリオファージＱベータ、ノーウォークウイルス、犬ジステンパーウイルス（ＣＤＶ）、またはインフルエンザＨＡとすることができる。１つの好ましい実施形態において、ＩＬ－３１ミモトープは、ＣＲＭ１９７を含むまたはそれからなる担体ポリペプチドと組み合わされる。
本発明に従うワクチン組成物は、以下でさらに詳細に説明されるように、少なくとも１つのアジュバントまたはアジュバント製剤を含む。
本発明のワクチンは、ヒト（適用可能な場合）を含めた動物のための医薬的に許容される担体（例えば、標準的な緩衝剤、安定剤、希釈剤、保存料、及び／または溶解剤）を含むように、一般に認められている慣行に従って製剤化することができ、また持続性放出を促進するように製剤化することもできる。希釈剤には、水、食塩水、デキストロース、エタノール、グリセロールなどが含まれる。等張性のための添加剤としては、特に、塩化ナトリウム、デキストロース、マンニトール、ソルビトール、及びラクトースが挙げられる。安定剤としては、特に、アルブミンが挙げられる。その他の好適なワクチンビヒクル及び添加剤は、修飾生ワクチンの製剤化に特に有用なものを含めて、当業者に知られているか、または明らかになるあろう。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１８ｔｈ ｅｄ．，１９９０，ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇを参照（当該文献は、参照により本明細書に援用される）。
本発明のワクチンはさらに、１つ以上のさらなる免疫調節性構成成分、例えば、特に、アジュバントまたはサイトカインを含むことができる。本発明の組成物における使用に適したアジュバントのタイプとしては、以下：水中油型アジュバント、ポリマー及び水アジュバント、油中水型アジュバント、水酸化アルミニウムアジュバント、ビタミンＥアジュバント、ならびにこれらの組合せが挙げられる。アジュバントのいくつかの具体的な例としては、限定されるものではないが、完全フロイントアジュバント、不完全フロイントアジュバント、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐａｒｖｕｍ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｌｍｅｔｔｅ Ｇｕｅｒｉｎ、水酸化アルミニウムゲル、グルカン、デキストラン硫酸、酸化鉄、アルギン酸ナトリウム、Ｂａｃｔｏアジュバント、ある特定の合成ポリマー、例えば、ポリアミノ酸及びアミノ酸のコポリマー、ブロックコポリマー（ＣｙｔＲｘ，Ａｔｌａｎｔａ，Ｇａ．）、ＱＳ－２１（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｍａｓｓ．）、ＳＡＦ－Ｍ（Ｃｈｉｒｏｎ，Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ Ｃａｌｉｆ．）、ＡＭＰＨＩＧＥＮ（登録商標）アジュバント、サポニン、Ｑｕｉｌ Ａ、またはその他のサポニン画分、モノホスホリルリピドＡ、ならびにＡｖｒｉｄｉｎｅ脂質－アミンアジュバント（Ｎ，Ｎ－ジオクタデシル－Ｎ’，Ｎ’－ビス（２－ヒドロキシエチル）－プロパンジアミン）、「ＲＥＧＲＥＳＳＩＮ」（Ｖｅｔｒｅｐｈａｒｍ，Ａｔｈｅｎｓ，Ｇａ．）、パラフィンオイル、ＲＩＢＩアジュバントシステム（Ｒｉｂｉ Ｉｎｃ．，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ｍｏｎｔ．）、ムラミルジペプチドなどが挙げられる。
本発明のワクチンに有用な水中油型乳濁液の非限定的な例としては、修飾ＳＥＡＭ６２及びＳＥＡＭ １／２製剤が挙げられる。修飾ＳＥＡＭ６２は、５％（ｖ／ｖ）スクアレン（Ｓｉｇｍａ）、１％（ｖ／ｖ）ＳＰＡＮ（登録商標）８５界面活性剤（ＩＣＩ Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ）、０．７％（ｖ／ｖ）ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０界面活性剤（ＩＣＩ Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ）、２．５％（ｖ／ｖ）エタノール、２００μｇ／ｍｌのＱｕｉｌ Ａ、１００μｇ／ｍｌのコレステロール、及び０．５％（ｖ／ｖ）レシチンを含む水中油型乳濁液である。修飾ＳＥＡＭ １／２は、５％（ｖ／ｖ）スクアレン、１％（ｖ／ｖ）ＳＰＡＮ（登録商標）８５界面活性剤、０．７％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ ８０界面活性剤、２．５％（ｖ／ｖ）エタノール、１００μｇ／ｍｌのＱｕｉｌ Ａ、及び５０μｇ／ｍｌのコレステロールを含む水中油型乳濁液である。
本発明の組成物に有用なアジュバントのもう１つの例は、ＳＰ油である。本明細書及び特許請求の範囲で使用される場合、「ＳＰ油」という用語は、ポリオキシエチレン－ポリオキシプロピレンブロックコポリマー、スクアラン、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン、及び緩衝塩溶液を含む油乳濁液を指す。ポリオキシエチレン－ポリオキシプロピレンブロックコポリマーは、固体及び液体の構成要素の懸濁を助ける界面活性剤である。このような界面活性剤は、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）の商品名でポリマーとして市販されている。好ましい界面活性剤は、商品名Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｌ－１２１で市販されているポロキサマー４０１である。一般的には、ＳＰ油乳濁液は、約１～３％ｖｏｌ／ｖｏｌのブロックコポリマー、約２～６％ｖｏｌ／ｖｏｌのスクアラン、より特定的には約３～６％のスクアラン、及び約０．１～０．５％ｖｏｌ／ｖｏｌのモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタンポリオキシエチレンソルビタンを含み、残部は緩衝塩溶液である、免疫刺激性アジュバント混合物である。
ワクチンに含めることができる「免疫調節剤」としては、例えば、免疫刺激性オリゴヌクレオチド、１つ以上のインターロイキン、インターフェロン、または他の既知のサイトカインが挙げられる。１つの実施形態において、アジュバントは、それぞれ米国特許第６，１６５，９９５号及び第６，６１０，３１０号に説明されているようなシクロデキストリン誘導体またはポリアニオン性ポリマーとすることができる。
１つの実施形態において、アジュバントは、サポニン、ステロール、第４級アンモニウム化合物、及びポリマーを含む製剤である。特定の実施形態において、サポニンはＱｕｉｌ Ａまたはその精製画分であり、ステロールはコレステロールであり、第４級アンモニウム化合物はジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド（ＤＤＡ）であり、ポリマーはポリアクリル酸である。
別の実施形態において、アジュバントは、１つ以上の単離免疫刺激性オリゴヌクレオチド、ステロール、及びサポニンの組合せを含む。特定の実施形態において、１つ以上の単離免疫刺激性オリゴヌクレオチドはＣｐＧを含み、ステロールはコレステロールであり、サポニンはＱｕｉｌ Ａまたはその精製画分である。本明細書で使用する場合、実施例セクションで言及されるＺＡ－０１アジュバントは、Ｑｕｉｌ Ａ（サポニン）、コレステロール、ＣｐＧ、及び希釈剤を含む。
別の実施形態において、本発明の組成物で用いられる有用なアジュバントとしては、ＣｐＧ含有免疫刺激性オリゴヌクレオチドが挙げられる。ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドは、例えば、米国特許第８，５８０，２８０号で説明されている。１つの特定の実施形態において、本発明で使用するためのアジュバントは、少なくとも１つの糖脂質アジュバント及びＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドを含む混合物である。有用なアジュバントの具体的な例は、糖脂質アジュバントＢａｙ Ｒ１００５（Ｎ－（２－デオキシ－２－Ｌ－ロイシルアミノ－β－Ｄ－グルコピラノシル）－Ｎ－オクタデシルドデカノイルアミドヒドロアセテート）及びＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む混合物である。
１つの実施形態において、アジュバントまたはアジュバント混合物は、用量当たり約１００μｇ～約１０ｍｇの量で添加される。別の実施形態において、アジュバント／アジュバント混合物は、用量当たり約２００μｇ～約５ｍｇの量で添加される。また別の実施形態において、アジュバント／アジュバント混合物は、約３００μｇ～約１ｍｇ／用量の量で添加される。
分子生物学及び組換え技術の方法の出現により、組換え手段によって上記のペプチド及びポリペプチドを産生し、それによりペプチドまたはポリペプチド構造に見られる特定のアミノ酸配列をコードする遺伝子配列を生成することが可能である。１つの実施形態において、ペプチドは、ＩＬ－３１ミモトープであるか、またはＩＬ－３１ミモトープの少なくとも一部である。別の実施形態において、ポリペプチドは、ＩＬ－３１ミモトープとの組合せで存在する担体ポリペプチドである。なおさらなる実施形態において、ポリペプチドは抗体であり、例えば、本発明のワクチン組成物または診断方法で用いられるＩＬ－３１ミモトープが結合する抗体である。このような抗体は、当該抗体のポリペプチド鎖をコードする遺伝子配列をクローンし、または当該ポリペプチド鎖を直接合成し、合成した鎖を組み立てて特定のエピトープ及び抗原決定基に対する親和性を備えた活性４量体（Ｈ２Ｌ２）構造を形成することによって産生することができる。これにより、異なる種及び供給源から中和抗体に特徴的な配列を有する抗体を容易に産生することが可能になった。
抗体の供給源、または抗体がどのように組換え構築されているか、または抗体がどのように合成されているか、ｉｎ ｖｉｔｒｏかｉｎ ｖｉｖｏか、トランスジェニック動物の使用、実験サイズもしくは商業サイズの大規模細胞培養、トランスジェニック植物の使用、または任意のプロセス段階で生物を用いない直接的化学合成によるものかにかかわらず、全ての抗体は、同様の全体的３次元構造を有する。この構造は、しばしばＨ２Ｌ２として定められ、抗体が一般的に２つのアミノ酸軽鎖（Ｌ）と２つのアミノ酸重鎖（Ｈ）とを含むという事実を意味する。両方の鎖は、構造的に相補的な抗原標的と相互作用可能な領域を有する。標的と相互作用する領域は、「可変」または「Ｖ」領域と称され、抗原特異性が異なる抗体からのアミノ酸配列の違いによって特徴付けられる。Ｈ鎖またはＬ鎖の可変領域は、抗原標的に対し特異的に結合可能なアミノ酸配列を含む。
抗体の「抗原結合領域」または「抗原結合部分」とは、抗原と相互作用し、抗原に対するその特異性及び親和性を抗体に付与するアミノ酸残基を含む、抗体分子の部分を意味する。抗体結合領域は、抗原結合残基の適切な立体構造を維持するために必要な「フレームワーク」アミノ酸残基を含む。本明細書及び特許請求の範囲で言及されている抗体の抗原結合部分は、本明細書では、例えば、ＩＬ－３１特異的ペプチドもしくはポリペプチド、または抗ＩＬ－３１ペプチドもしくはポリペプチドと称されることがある。
抗原結合領域を提供するＨ鎖またはＬ鎖の可変領域内には、特異性の異なる抗体間で極度に変動することから「超可変」と呼ばれるより小さな配列がある。このような超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」領域とも称される。これらのＣＤＲ領域は、特定の抗原決定基構造に対する抗体の基本的な特異性の根拠となる。
ＣＤＲは、可変領域内の非連続的なアミノ酸の連なりに相当するが、種に関係なく、可変重鎖及び軽鎖領域内におけるこれらの不可欠なアミノ酸配列の位置は、可変鎖のアミノ酸配列内で同様の位置を有することが分かっている。全ての抗体の可変重鎖及び軽鎖は各々３つのＣＤＲ領域を有し、各々が他のＣＤＲ領域と隣接していない。
全ての哺乳類種において、抗体ペプチドは定常（すなわち、高度に保存された）領域及び可変領域を含み、可変領域内にはＣＤＲといわゆる「フレームワーク領域」とがあり、フレームワーク領域は、重鎖または軽鎖の可変領域内のＣＤＲ以外のアミノ酸配列から構成される。
抗体のＣＤＲ領域に認識される抗原決定基に関しては、「エピトープ」とも称される。言い換えれば、エピトープとは、抗体が認識可能であり、かつ抗体が結合可能である任意の分子のその部分を意味する（対応する抗体結合領域は、パラトープと称されることがある）。
「抗原」とは、抗体が結合可能であり、さらに、その抗原のエピトープに結合可能な抗体を産生するように動物を誘導可能である分子または分子の部分である。抗原は、１つまたは複数のエピトープを有することができる。上記で言及した特異的反応は、抗体が、高度に選択的な方法で、対応する抗体に反応し、他の抗原によって誘発され得る他の多数の抗体には反応しないことを示すように意図されている。
本明細書で言及されている抗体は、インタクト免疫グロブリン分子と、その部分、フラグメント、ペプチド、及び誘導体（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｓｅ、ＣＤＲ領域、パラトープ、または抗原もしくはエピトープに結合可能な抗体の任意の部分（例えば、ポリペプチド）もしくはペプチド配列）とを含むように意図されている。抗体は、分子と特異的に反応してその分子を抗体に結合させることが可能である場合、分子に「結合可能」であるとされる。
また、本明細書で言及されている抗体は、任意の既知の技法（例えば、限定されるものではないが、酵素切断、ペプチド合成、または組換え技法）によって提供されるキメラ型抗体、ヘテロキメラ型抗体、イヌ化抗体、ネコ化抗体、またはウマ化抗体、ヒト化抗体、完全イヌ抗体、完全ネコ抗体、完全ウマ抗体、完全ヒト抗体、及びこれらのフラグメント、部分、領域、ペプチド、または誘導体も含む。本明細書で言及されているこのような抗体は、イヌＩＬ－３１、ネコＩＬ－３１、ウマＩＬ－３１、またはヒトＩＬ－３１のうちの少なくとも１つに特異的に結合可能である。抗体のフラグメントまたは部分は、インタクト抗体のＦｃフラグメントが欠如し、血液循環からより迅速に除去される可能性があり、インタクト抗体よりも低い非特異的組織結合を有する可能性がある。抗体フラグメントの例は、当技術分野で周知された方法を用いて、例えば、（Ｆａｂフラグメントを産生するための）パパインまたは（Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを産生するための）ペプシンのような酵素によるタンパク質分解切断によって、インタクト抗体から産生することができる。例えば、Ｗａｈｌ ｅｔ ａｌ．，２４ Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．３１６－２５（１９８３）を参照。抗体の部分は、上記の方法のいずれかによって作製することも、組換え型分子の部分を発現させることによって作製することもできる。例えば、組換え型抗体のＣＤＲ領域（複数可）を単離し、適切な発現ベクター内でサブクローンすることができる。例えば、米国特許第６，６８０，０５３号を参照。
クローン１５Ｈ０５、ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、及びＺＩＬ１７１のヌクレオチド及びアミノ酸配列
いくつかの実施形態において、本発明は、イヌＩＬ－３１、ネコＩＬ－３１、またはウマＩＬ－３１のうちの少なくとも１つに特異的に結合する新規のモノクローナル抗体に結合するＩＬ－３１ミモトープを提供する。このようなモノクローナル抗体は、ＩＬ－３１ミモトープと共に本発明の診断方法で用いることができる。１つの実施形態において、本明細書及び特許請求の範囲で言及されているモノクローナル抗体は、イヌＩＬ－３１、ネコＩＬ－３１、またはウマＩＬ－３１に結合し、ＩＬ－３１受容体Ａ（ＩＬ－３１Ｒａ）及びオンコスタチンＭ特異的受容体（ＯｓｍＲまたはＩＬ－３１Ｒｂ）を含む共受容体へのその結合及び活性化を防止する。このようなモノクローナル抗体の例は、本明細書では「１５Ｈ０５」、「ＺＩＬ１」、「ＺＩＬ８」、「ＺＩＬ９」、「ＺＩＬ１１」、「ＺＩＬ６９」、「ＺＩＬ９４」、「ＺＩＬ１５４」、「ＺＩＬ１５９」、及び「ＺＩＬ１７１」として同定され、これらはそのクローンに割り当てられた番号を意味する。また、本明細書では、「１５Ｈ０５」、「ＺＩＬ１」、「ＺＩＬ８」、「ＺＩＬ９」、「ＺＩＬ１１」、「ＺＩＬ６９」、「ＺＩＬ９４」、「ＺＩＬ１５４」、「ＺＩＬ１５９」、及び「ＺＩＬ１７１」は、それぞれ１５Ｈ０５、ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、及びＺＩＬ１７１抗体に結合する能力を有することから１５Ｈ０５、ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、及びＺＩＬ１７１として同定されるＩＬ－３１エピトープと特異的に結合するモノクローナル抗体の部分、ＣＤＲ、またはパラトープも意味する。本明細書で説明されている１５Ｈ０５、ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、及びＺＩＬ１７１のいくつかの組換え型、キメラ型、ヘテロキメラ型、イヌ化、ネコ化、ウマ化、完全イヌ、完全ネコ、及び／または完全ウマ形態は、同じ名称で称される場合がある。
１つの実施形態において、本発明に従うワクチン組成物は、哺乳類のＩＬ－３１タンパク質とその共受容体との相互作用に関与するＩＬ－３１タンパク質上の領域に特異的に結合する抗ＩＬ－３１抗体またはその抗原結合部分に結合するミモトープを含む。１つの実施形態において、当該抗体の当該領域との結合は、以下：ａ）配列番号１５７（ネコ＿ＩＬ３１＿野生型）によって表されるネコＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１２４から１３５の間の領域、ｂ）配列番号１５５（イヌ＿ＩＬ３１）によって表されるイヌＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１２４から１３５の間の領域、及びｃ）配列番号１６５（ウマ＿ＩＬ３１）によって表されるウマＩＬ－３１のアミノ酸残基約１１８から１２９の間の領域から選択される１５Ｈ０５エピトープ結合領域の変異によって影響を受ける。１つの実施形態において、本発明の組成物で使用するためのミモトープは、上記の１５Ｈ０５エピトープ領域に特異的に結合する抗ＩＬ－３１抗体またはその抗原結合部分に結合する。
本発明によるワクチン組成物の１つの特定の実施形態において、ミモトープは、相補性決定領域（ＣＤＲ）配列の以下の組み合わせのうちの少なくとも１つを含む抗ＩＬ－３１抗体またはその抗原結合部分に結合する。
１）抗体１５Ｈ０５：可変重鎖（ＶＨ）－ＣＤＲ１がＳＹＴＩＨ（配列番号１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＮＩＮＰＴＳＧＹＴＥＮＮＱＲＦＫＤ（配列番号２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＧＦＫＹＤＧＥＷＳＦＤＶ（配列番号３）、可変軽鎖（ＶＬ）－ＣＤＲ１がＲＡＳＱＧＩＳＩＷＬＳ（配列番号４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＡＳＮＬＨＩ（配列番号５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＬＱＳＱＴＹＰＬＴ（配列番号６）、
２）抗体ＺＩＬ１：可変重鎖（ＶＨ）－ＣＤＲ１がＳＹＧＭＳ（配列番号１３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＨＩＮＳＧＧＳＳＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号１４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＶＹＴＴＬＡＡＦＷＴＤＮＦＤＹ（配列番号１５）、可変軽鎖（ＶＬ）－ＣＤＲ１がＳＧＳＴＮＮＩＧＩＬＡＡＴ（配列番号１６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＳＤＧＮＲＰＳ（配列番号１７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＳＦＤＴＴＬＤＡＹＶ（配列番号１８）、
３）抗体ＺＩＬ８：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＹＡＭＳ（配列番号１９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＤＳＶＧＳＧＴＳＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号２０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＦＰＧＳＦＥＨ（配列番号２１）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＴＧＳＳＳＮＩＧＳＧＹＶＧ（配列番号２２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＹＮＳＤＲＰＳ（配列番号２３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＶＹＤＲＴＦＮＡＶ（配列番号２４）、
４）抗体ＺＩＬ９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＤＭＴ（配列番号２５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＤＶＮＳＧＧＴＧＴＡＹＡＶＡＶＫＧ（配列番号２６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＬＧＶＲＤＧＬＳＶ（配列番号２７）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＥＹＹＴＱ（配列番号２８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＲＤＴＥＲＰＳ（配列番号２９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＤＴＧＴＬＶ（配列番号３０）、
５）抗体ＺＩＬ１１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号３１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦＤＹ（配列番号３３）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＳＮＹＹＡＱ（配列番号３４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号３５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号３６）、
６）抗体ＺＩＬ６９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＡＭＫ（配列番号３７）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＴＩＮＮＤＧＴＲＴＧＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３８）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＮＡＥＳＧＣＴＧＤＨＣＰＰＹ（配列番号３９）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＫＹＹＡＱ（配列番号４０）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号４１）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＥＴＮＶ（配列番号４２）、
７）抗体ＺＩＬ９４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＦＭＳ（配列番号４３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＬＩＳＳＤＧＳＧＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号４４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＦＷＲＡＦＮＤ（配列番号４５）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＧＬＮＳＧＳＶＳＴＳＮＹＰＧ（配列番号４６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＤＴＧＳＲＰＳ（配列番号４７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＬＹＴＤＳＤＩＬＶ（配列番号４８）、
８）抗体ＺＩＬ１５４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＲＧＭＳ（配列番号４９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＹＩＲＹＤＧＳＲＴＤＹＡＤＡＶＥＧ（配列番号５０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＤＧＳＳＦＤＹ（配列番号５１）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＡＳＱＳＬＬＨＳＤＧＮＴＹＬＤ（配列番号５２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＶＳＮＲＤＰ（配列番号５３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＭＱＡＩＨＦＰＬＴ（配列番号５４）、
９）抗体ＺＩＬ１５９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＶＭＴ（配列番号５５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＮＳＥＧＳＲＴＡＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号５６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＤＩＶＡＴＧＴＳＹ（配列番号５７）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＴＬＮＲＦＹＴＱ（配列番号５８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号５９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＫＳＡＶＳＩＤＶＧＶ（配列番号６０）、
１０）抗体ＺＩＬ１７１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号６１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号６２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦＤＹ（配列番号６３）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＫＳＬＳＹＹＹＡＱ（配列番号６４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号６５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号６６）、または
１１）ＶＨまたはＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３のうちの少なくとも１つにおける１つ以上のアミノ酸残基の付加、欠失、及び／または置換によってそれぞれの親抗体１５Ｈ０５、ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、もしくはＺＩＬ１７１と相違する、１）～１０）のバリアント
のうちの少なくとも１つを含む、抗ＩＬ－３１抗体またはその抗原結合部分に結合する。
１つの実施形態において、ワクチン組成物で使用されるＩＬ－３１ミモトープは、ネコＩＬ－３１に特異的に結合し、このとき、抗体は、配列番号１５７（ネコ＿ＩＬ３１＿野生型）によって表されるネコＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１２５から１３４の間の領域に結合する。いくつかの実施形態において、このような抗体は、以下：４２位のリジンからアスパラギンへの置換、４３位のバリンからイソロイシンへの置換、４６位のロイシンからバリンへの置換、４９位のリジンからアスパラギンへの置換、及びこれらの組合せから選択されるフレームワーク２（ＦＷ２）変化を含むＶＬ鎖を含み、このとき、これらの位置は配列番号１２７（ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１）のナンバリングに準拠している。
いくつかの実施形態において、ミモトープは、以下を特徴とする抗体に結合する。
１）抗体ＺＩＬ１は、以下：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１＿ＶＬ：
ＱＳＶＬＴＱＰＴＳＶＳＧＳＬＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＴＮＮＩＧＩＬＡＡＴＷＹＱＱＬＰＧＫＡＰＫＶＬＶＹＳＤＧＮＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＮＳＡＴＬＴＩＴＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＦＤＴＴＬＤＡＹＶＦＧＳＧＴＱＬＴＶＬ（配列番号７７）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１＿ＶＨ：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＡＨＩＮＳＧＧＳＳＴＹＹＡＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＥＶＹＴＴＬＡＡＦＷＴＤＮＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７５）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
２）抗体ＺＩＬ８は、以下：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ８＿ＶＬ：
ＱＳＶＬＴＱＰＡＳＶＳＧＳＬＧＱＫＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＳＧＹＶＧＷＹＱＱＬＰＧＴＧＰＲＴＬＩＹＹＮＳＤＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＲＳＧＴＴＡＴＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＳＶＹＤＲＴＦＮＡＶＦＧＧＧＴ（配列番号８１）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ８＿ＶＨ：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＡＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＤＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＲＧＬＱＷＶＡＧＩＤＳＶＧＳＧＴＳＹＡＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＡＫＮＴＬＹＬＱＭＦＮＬＲＡＥＤＴＡＩＹＹＣＡＳＧＦＰＧＳＦＥＨＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７９）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
３）抗体ＺＩＬ９は、以下：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ９＿ＶＬ：ＳＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＬＧＱＴＡＴＩＳＣＳＧＥＳＬＮＥＹＹＴＱＷＦＱＱＫＡＧＱＡＰＶＬＶＩＹＲＤＴＥＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＳＧＮＴＨＴＬＴＩＳＧＡＲＡＥＤＥＡＤＹＹＣＥＳＡＶＤＴＧＴＬＶＦＧＧＧＴＨＬＡＶＬ（配列番号８５）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ９＿ＶＨ：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＰＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＳＹＤＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＡＤＶＮＳＧＧＴＧＴＡＹＡＶＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＫＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＬＧＶＲＤＧＬＳＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８３）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
４）抗体ＺＩＬ１１は、以下：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１１＿ＶＬ：ＳＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＬＧＱＴＡＴＩＳＣＳＧＥＳＬＳＮＹＹＡＱＷＦＱＱＫＡＧＱＡＰＶＬＶＩＹＫＤＴＥＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＳＧＮＴＨＴＬＴＩＳＧＡＲＡＥＤＥＡＤＹＹＣＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶＦＧＧＧＴ（配列番号８９）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１１＿ＶＨ：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＡＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＲＴＹＶＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＡＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧＲＦＴＶＳＲＤＮＡＱＮＳＬＦＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＶＶＳＭＶＧＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８７）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
５）抗体ＺＩＬ６９は、以下：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ６９＿ＶＬ：ＳＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＬＧＱＴＡＴＩＳＣＳＧＥＳＬＮＫＹＹＡＱＷＦＱＱＫＡＧＱＡＰＶＬＶＩＹＫＤＴＥＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＡＧＮＴＨＴＬＴＩＳＧＡＲＡＥＤＥＡＤＹＹＣＥＳＡＶＳＳＥＴＮＶＦＧＳＧＴＱＬＴＶＬ（配列番号９３）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ６９＿ＶＨ：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＡＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＫＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＡＴＩＮＮＤＧＴＲＴＧＹＡＤＡＶＲＧＲＦＴＩＳＫＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＤＳＬＲＡＤＤＴＡＶＹＹＣＴＫＧＮＡＥＳＧＣＴＧＤＨＣＰＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９１）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
６）抗体ＺＩＬ９４は、以下：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ９４＿ＶＬ：ＱＴＶＶＩＱＥＰＳＬＳＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＧＬＮＳＧＳＶＳＴＳＮＹＰＧＷＹＱＱＴＲＧＲＴＰＲＴＩＩＹＤＴＧＳＲＰＳＧＶＰＮＲＦＳＧＳＩＳＧＮＫＡＡＬＴＩＴＧＡＱＰＥＤＥＡＤＹＹＣＳＬＹＴＤＳＤＩＬＶＦＧＧＧＴＨＬＴＶＬ（配列番号９７）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ９４＿ＶＨ：ＥＶＱＬＶＤＳＧＧＤＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＴＹＦＭＳＷＶＲＱＡＰＧＲＧＬＱＷＶＡＬＩＳＳＤＧＳＧＴＹＹＡＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＩＦＷＲＡＦＮＤＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９５）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
７）抗体ＺＩＬ１５４は、以下：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１５４＿ＶＬ：ＤＩＶＶＴＱＴＰＬＳＬＳＶＳＰＧＥＴＡＳＦＳＣＫＡＳＱＳＬＬＨＳＤＧＮＴＹＬＤＷＦＲＱＫＰＧＱＳＰＱＲＬＩＹＫＶＳＮＲＤＰＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＲＩＳＧＶＥＡＤＤＡＧＬＹＹＣＭＱＡＩＨＦＰＬＴＦＧＡＧＴＫＶＥＬＫ（配列番号１０１）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１５４＿ＶＨ：ＥＶＨＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＷＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＤＲＧＭＳＷＶＲＱＳＰＧＫＧＬＱＷＶＡＹＩＲＹＤＧＳＲＴＤＹＡＤＡＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＷＤＧＳＳＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９９）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
８）抗体ＺＩＬ１５９は、以下：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１５９＿ＶＬ：ＳＮＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＬＧＱＴＡＴＩＳＣＳＧＥＴＬＮＲＦＹＴＱＷＦＱＱＫＡＧＱＡＰＶＬＶＩＹＫＤＴＥＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＳＧＮＩＨＴＬＴＩＳＧＡＲＡＥＤＥＡＡＹＹＣＫＳＡＶＳＩＤＶＧＶＦＧＧＧＴＨＬＴＶＦ（配列番号１０５）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１５９＿ＶＨ：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＡＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＳＹＶＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＡＧＩＮＳＥＧＳＲＴＡＹＡＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＩＤＳＬＲＡＥＤＴＡＩＹＹＣＡＴＧＤＩＶＡＴＧＴＳＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１０３）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
９）抗体ＺＩＬ１７１は、以下：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１７１＿ＶＬ：ＳＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＬＧＱＴＡＴＩＳＣＳＧＫＳＬＳＹＹＹＡＱＷＦＱＱＫＡＧＱＡＰＶＬＶＩＹＫＤＴＥＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＳＧＮＴＨＴＬＴＩＳＧＡＲＡＥＤＥＡＤＹＹＣＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶＦＧＧＧＴＨＬＴＶＬ（配列番号１０９）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１７１＿ＶＨ：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＡＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＲＴＹＶＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＡＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧＲＦＴＶＳＲＤＮＡＱＮＳＬＦＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＩＹＦＣＶＶＳＭＶＧＰＦＤＹＷＧＨＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１０７）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含む。
宿主細胞を使用して、上記の抗体を産生することができる。このような抗体は、本発明の一部として説明されている診断手順で使用することができる。ただし、診断手順がこれらの特定の抗体に限定されるわけではない。
抗ＩＬ－３１抗体の軽鎖及び重鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列を用いて、本明細書で説明されている抗ＩＬ－３１抗体を作製することができる。このようなヌクレオチド配列には、限定されるものではないが、１５Ｈ０５、ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、もしくはＺＩＬ１７１、またはこれらのＩＬ－３１特異的ポリペプチドもしくはペプチドのアミノ酸配列をコードする任意のヌクレオチド配列が含まれる。加えて、１つの実施形態において、ＩＬ－３１ミモトープをコードするヌクレオチド配列を使用して、単独で、または担体ポリペプチドと共に融合タンパク質の一部として、ミモトープを組換え産生することができる。代替的に、または追加として、ミモトープは化学的に合成することができる。
いくつかの実施形態において、単離核酸を用いて有用な抗体を作製することができ、このとき、核酸は、以下の可変重鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列の組合せ：
１） １５Ｈ０５：可変重鎖（ＶＨ）－ＣＤＲ１がＳＹＴＩＨ（配列番号１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＮＩＮＰＴＳＧＹＴＥＮＮＱＲＦＫＤ（配列番号２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＧＦＫＹＤＧＥＷＳＦＤＶ（配列番号３）、
２） ＺＩＬ１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＧＭＳ（配列番号１３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＨＩＮＳＧＧＳＳＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号１４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＶＹＴＴＬＡＡＦＷＴＤＮＦＤＹ（配列番号１５）、
３） ＺＩＬ８：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＹＡＭＳ（配列番号１９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＤＳＶＧＳＧＴＳＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号２０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＦＰＧＳＦＥＨ（配列番号２１）、
４） ＺＩＬ９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＤＭＴ（配列番号２５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＤＶＮＳＧＧＴＧＴＡＹＡＶＡＶＫＧ（配列番号２６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＬＧＶＲＤＧＬＳＶ（配列番号２７）、
５） ＺＩＬ１１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号３１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦＤＹ（配列番号３３）、
６） ＺＩＬ６９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＡＭＫ（配列番号３７）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＴＩＮＮＤＧＴＲＴＧＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３８）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＮＡＥＳＧＣＴＧＤＨＣＰＰＹ（配列番号３９）、
７） ＺＩＬ９４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＦＭＳ（配列番号４３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＬＩＳＳＤＧＳＧＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号４４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＦＷＲＡＦＮＤ（配列番号４５）、
８） ＺＩＬ１５４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＲＧＭＳ（配列番号４９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＹＩＲＹＤＧＳＲＴＤＹＡＤＡＶＥＧ（配列番号５０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＤＧＳＳＦＤＹ（配列番号５１）、
９） ＺＩＬ１５９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＶＭＴ（配列番号５５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＮＳＥＧＳＲＴＡＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号５６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＤＩＶＡＴＧＴＳＹ（配列番号５７）、
１０） ＺＩＬ１７１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号６１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号６２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦＤＹ（配列番号６３）、または
１１） ＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３のうちの少なくとも１つにおける１つ以上のアミノ酸残基の付加、欠失、及び／または置換によってそれぞれの親抗体１５Ｈ０５、ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、もしくはＺＩＬ１７１のＣＤＲと相違する、１）～１０）のバリアント
のうちの少なくとも１つをコードする。
別の実施形態において、単離核酸は、以下の可変軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列の組合せ：
１）１５Ｈ０５：可変軽鎖（ＶＬ）－ＣＤＲ１がＲＡＳＱＧＩＳＩＷＬＳ（配列番号４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＡＳＮＬＨＩ（配列番号５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＬＱＳＱＴＹＰＬＴ（配列番号６）、
２）ＺＩＬ１：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＳＴＮＮＩＧＩＬＡＡＴ（配列番号１６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＳＤＧＮＲＰＳ（配列番号１７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＳＦＤＴＴＬＤＡＹＶ（配列番号１８）、
３）ＺＩＬ８：ＶＬ－ＣＤＲ１がＴＧＳＳＳＮＩＧＳＧＹＶＧ（配列番号２２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＹＮＳＤＲＰＳ（配列番号２３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＶＹＤＲＴＦＮＡＶ（配列番号２４）、
４）ＺＩＬ９：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＥＹＹＴＱ（配列番号２８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＲＤＴＥＲＰＳ（配列番号２９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＤＴＧＴＬＶ（配列番号３０）、
５）ＺＩＬ１１：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＳＮＹＹＡＱ（配列番号３４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号３５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号３６）、
６）ＺＩＬ６９：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＫＹＹＡＱ（配列番号４０）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号４１）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＥＴＮＶ（配列番号４２）、
７）ＺＩＬ９４：ＶＬ－ＣＤＲ１がＧＬＮＳＧＳＶＳＴＳＮＹＰＧ（配列番号４６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＤＴＧＳＲＰＳ（配列番号４７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＬＹＴＤＳＤＩＬＶ（配列番号４８）、
８）ＺＩＬ１５４：ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＡＳＱＳＬＬＨＳＤＧＮＴＹＬＤ（配列番号５２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＶＳＮＲＤＰ（配列番号５３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＭＱＡＩＨＦＰＬＴ（配列番号５４）、
９）ＺＩＬ１５９：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＴＬＮＲＦＹＴＱ（配列番号５８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号５９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＫＳＡＶＳＩＤＶＧＶ（配列番号６０）、
１０）ＺＩＬ１７１：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＫＳＬＳＹＹＹＡＱ（配列番号６４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号６５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号６６）、または
１１）ＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３のうちの少なくとも１つにおける１つ以上のアミノ酸残基の付加、欠失、及び／または置換によってそれぞれの親抗体１５Ｈ０５、ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、もしくはＺＩＬ１７１のＣＤＲと相違する、１）～１０）のバリアント
のうちの少なくとも１つをコードする核酸配列を含む。
また別の実施形態において、本明細書で説明されている抗体の製造で使用される単離核酸は、それぞれの親抗体１５Ｈ０５、ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、もしくはＺＩＬ１７１、またはこれらのバリアントの上記の可変軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）配列と、上記の可変重鎖ＣＤＲ配列とをコードする核酸配列を含む。
上記の核酸のうちの少なくとも１つを含むベクターは、これらの抗体の製造に使用することができる。以下でさらに詳細に説明するように、上記の可変重鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列の組合せのうちの少なくとも１つをコードする核酸配列は、上記の可変軽鎖のＣＤＲ配列の組合せのうちの少なくとも１つをコードする核酸配列と共に、同じベクターに含まれてもよい。代替的に、上記の可変軽鎖のＣＤＲ配列の組合せのうちの少なくとも１つをコードする核酸配列及び上記の可変重鎖のＣＤＲ配列の組合せのうちの少なくとも１つをコードする核酸配列は各々、別々のベクターに含まれてもよい。
遺伝暗号は縮重しているため、特定のアミノ酸をコードするのに２つ以上のコドンを使用することができる。遺伝暗号を用いて、各々がそのアミノ酸をコード可能と考えられる１つ以上の異なるヌクレオチド配列を同定することができる。特定のオリゴヌクレオチドが実際に実際のＸＸＸコード配列を構成する可能性は、抗ＩＬ－３１抗体またはそのＩＬ－３１特異的部分を発現する真核細胞または原核細胞における異常な塩基対の関係と、特定のコドンが実際に（特定のアミノ酸をコードするのに）使用される頻度とを考慮することによって推定することができる。このような「コドン使用頻度ルール」は、Ｌａｔｈｅ，ｅｔ ａｌ．，１８３ Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．１－１２（１９８５）によって開示されている。Ｌａｔｈｅの「コドン使用頻度ルール」を用いて、抗ＩＬ－３１配列をコード可能な理論上「最も可能性の高い」ヌクレオチド配列を含む単一のヌクレオチド配列またはヌクレオチド配列のセットを同定することができる。また、抗体コード領域は、本明細書に記載の抗体及びペプチドのバリアント（アゴニスト）をもたらす標準的な分子生物学的手法を用いて既存の抗体遺伝子を改変することによって提供され得ることも意図されている。このようなバリアントとしては、限定されるものではないが、抗ＩＬ－３１抗体またはＩＬ－３１特異的ポリペプチドもしくはペプチド（例えば、抗体部分もしくはフラグメント）のアミノ酸配列の欠失、付加、及び置換が挙げられる。また、本明細書で説明されているペプチドミモトープのバリアントは、親ペプチドミモトープをコードするヌクレオチド配列を改変することによって作製することができる。
例えば、置換における１つのクラスが保存的アミノ酸置換である。このような置換は、抗ＩＬ－３１抗体、またはＩＬ－３１特異的ポリペプチドもしくはペプチド内の所与のアミノ酸を、同様の特性を有する別のアミノ酸で置換するものである。同様に、このような抗体またはその抗原結合部分に結合するＩＬ－３１ミモトープは、保存的置換または他のタイプのアミノ酸置換を含むことができる。典型的に保存的置換として見られるものとしては、脂肪族アミノ酸Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、及びＩｌｅの間での一方から別のものへの置換、ヒドロキシル残基Ｓｅｒ及びＴｈｒの交換、酸性残基Ａｓｐ及びＧｌｕの交換、アミド残基Ａｓｎ及びＧｌｎ間の置換、塩基性残基Ｌｙｓ及びＡｒｇの交換、芳香族残基Ｐｈｅ、Ｔｙｒなどの間での置換がある。どのアミノ酸変化が表現型的にサイレントであり得るかについての指針は、Ｂｏｗｉｅ ｅｔ ａｌ．，２４７ Ｓｃｉｅｎｃｅ １３０６－１０（１９９０）に見出される。
バリアントまたはアゴニストの抗ＩＬ－３１抗体またはＩＬ－３１特異的ポリペプチドもしくはペプチドは、完全に機能する場合もあれば、１つ以上の活性において機能が欠如する場合もある。バリアントまたはアゴニストのＩＬ－３１ミモトープも同様に、完全に機能する場合もあれば、１つ以上の活性において機能が欠如する場合もある。完全に機能するバリアントは、典型的には、保存的バリエーションのみを含むか、または不可欠でない残基もしくは不可欠でない領域のバリエーションを含む。また、機能するバリアントは、機能に変化をもたらさないかまたは重要でない変化をもたらす類似のアミノ酸の置換を含む場合もある。代替的に、このような置換は、機能にある程度の正または負の影響を及ぼす場合がある。機能しないバリアントは、典型的には、１つ以上の非保存的なアミノ酸の置換、欠失、挿入、逆位、もしくは切断、または不可欠な残基もしくは不可欠な領域の置換、挿入、逆位、もしくは欠失を含む。
機能に必須となるアミノ酸は、部位特異的変異誘発またはアラニンスキャニング変異誘発のような当技術分野で公知の方法によって同定することができる。Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ｅｔ ａｌ．，２４４ Ｓｃｉｅｎｃｅ １０８１－８５（１９８９）。後者の手順では、分子内の全ての残基に単一のアラニン変異が導入される。得られた変異分子に対し、次に、エピトープ結合またはｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣ活性のような生物学的活性を試験する。リガンド－受容体結合に不可欠な部位は、結晶学、核磁気共鳴、または光親和性標識のような構造分析によって決定することもできる。Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，２２４ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．８９９－９０４（１９９２）；ｄｅ Ｖｏｓ ｅｔ ａｌ．，２５５ Ｓｃｉｅｎｃｅ ３０６－１２（１９９２）。
さらに、ポリペプチドは、しばしば２０種の「天然」アミノ酸以外のアミノ酸を含む。さらに、末端側アミノ酸を含めた多くのアミノ酸は、プロセッシング及びその他の翻訳後修飾のような自然のプロセスによって、または当技術分野で周知されている化学修飾技術によって修飾することができる。既知の修飾としては、限定されるものではないが、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ－リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスホチジルイノシトールの共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタミン酸の形成、ホルミル化、ガンマカルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解プロセッシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、タンパク質に対するアミノ酸のトランスファーＲＮＡ媒介性付加（例えば、アルギニル化）、及びユビキチン化が挙げられる。
このような修飾は当技術分野で周知されており、科学文献で非常に詳細に説明されている。いくつかの特に一般的な修飾、例えば、グリコシル化、脂質結合、硫酸化、グルタミン酸残基のガンマ－カルボキシル化、ヒドロキシル化、及びＡＤＰリボシル化は、最も基本的なテキスト、例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ－－Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ（２ｎｄ ｅｄ．，Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．，ＮＹ，１９９３）で説明されている。この主題については、Ｗｏｌｄ，Ｐｏｓｔｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｖａｌｅｎｔ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ，１－１２（Ｊｏｈｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，１９８３）、Ｓｅｉｆｔｅｒ ｅｔ ａｌ．１８２ Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．６２６－４６（１９９０）、及びＲａｔｔａｎ ｅｔ ａｌ．６６３ Ａｎｎ．ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．４８－６２（１９９２）などによる多くの詳細な概説が利用可能である。
したがって、本明細書で説明されているＩＬ－３１特異的抗体、ポリペプチド、及びペプチド、ならびに本明細書で説明されているＩＬ－３１ペプチドミモトープは、置換されたアミノ酸残基が遺伝暗号によってコードされていない誘導体または類似体も包含する。
同様に、アミノ酸配列の付加及び置換、ならびに今説明したバリエーション及び修飾は、ＩＬ－３１抗原及び／またはそのエピトープまたはペプチドのアミノ酸配列にも等しく適用可能であり得、したがって、これらも本発明に包含される。
抗体及びミモトープの誘導体
抗体及びミモトープの誘導体は、本発明の範囲内に含まれる。抗体またはミモトープの「誘導体」は、通常はタンパク質またはペプチドの一部ではない追加的な化学的部分を含む。タンパク質またはペプチドの共有結合修飾は、本発明の範囲内に含まれる。このような修飾は、抗体またはミモトープの標的アミノ酸残基を、選択された側鎖または末端側残基と反応可能な有機誘導体化剤と反応させることにより、分子に導入することができる。例えば、当技術分野で周知されている二官能性剤による誘導体化は、抗体もしくはフラグメントまたはミモトープを水不溶性支持マトリックスまたは他の巨大分子担体と架橋させるのに有用である。
誘導体には、放射性標識モノクローナル抗体またはミモトープも含まれる。例えば、放射性ヨウ素（１２５Ｉ、１３１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、インジウム（１１１Ｉｎ）、トリチウム（３Ｈ）など；モノクローナル抗体とビオチンまたはアビジン、酵素、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータ－Ｄ－ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、グルコアミラーゼ、カルボン酸アンヒドラーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、リゾチーム、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、またはグルコース６－リン酸デヒドロゲナーゼとの結合体；さらに、モノクローナル抗体と生物発光剤（例えば、ルシフェラーゼ）、化学発光剤（例えば、アクリジンエステル）、または蛍光剤（例えば、フィコビリンタンパク質）との結合体。同様に、ミモトープは、いくつかの実施形態では標識することができる。
別の誘導体二官能性抗体は、２つの異なる抗原基を認識する２つの別々の抗体の一部を組み合わせることにより生成される、二重特異性抗体である。これは、架橋または組換え技法によって達成することができる。
加えて、本明細書で説明されている抗体もしくはその一部またはＩＬ－３１ミモトープに成分を加えて、（例えば、血流からのクリアランスまでの時間を長くすることによって）ｉｎ ｖｉｖｏでの半減期を増加させることができる。このような技法としては、例えば、ＰＥＧ成分の付加（ＰＥＧ化とも呼ばれる）が挙げられ、当技術分野で周知されている。米国特許出願公開第２００３００３１６７１号を参照。
抗体、ミモトープ、及び担体ポリペプチドの組換え発現
いくつかの実施形態において、主題モノクローナル抗体またはミモトープ及び担体ポリペプチドの両方を含む融合タンパク質をコードする核酸は、宿主細胞に直接導入され、細胞は、コードされる抗体または融合タンパク質の発現を誘発するのに十分な条件下でインキュベートされる。細胞は、主題核酸を導入された後、抗体またはペプチドミモトープ及び担体ポリペプチドを保有する融合タンパク質の発現を可能にするため、典型的には、通常３７℃で、場合により選択下で、約１～２４時間の期間インキュベートされる。１つの実施形態において、抗体または融合タンパク質は、細胞が成長している培地の上清に分泌される。
従来、モノクローナル抗体は、マウスハイブリドーマ系のネイティブ分子として産生された。その技術に加えて、本発明は、モノクローナル抗体の組換え型ＤＮＡ発現を提供する。これによって、イヌ化、ネコ化、ウマ化、ヒト化、完全イヌ、完全ネコ、完全ウマ抗体、及び完全ヒト抗体、ならびに選択した宿主種における抗体誘導体及び融合タンパク質のスペクトルの産生が可能になる。
少なくとも１つの抗ＩＬ－３１抗体、部分、もしくはそのＩＬ－３１特異的ポリペプチド、またはその一部としての、このような抗体もしくはその部分に結合する少なくとも１つのＩＬ－３１ペプチドミモトープをコードする核酸配列は、ライゲーション用の平滑末端またはねじれ末端、制限酵素消化を含めた従来の技法に従って、ベクターＤＮＡを用いて組み換えて、適切な末端、必要に応じた付着末端の充填、望ましくない連結を回避するためのアルカリホスファターゼ処置、及び適切なリガーゼを用いたライゲーションを提供することができる。このような操作のための技法は、例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓ ｅｔ ａｌ．，ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ，ＬＡＢ．ＭＡＮＵＡＬ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂ．Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，１９８２及び１９８９）によって開示されており、またＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．１９９３（上記）を使用して、モノクローナル抗体分子もしくはその抗原結合領域、またはＩＬ－３１ペプチドミモトープをコードする核酸配列を構築することができる。
ＤＮＡのような核酸分子は、転写及び翻訳の制御情報を含むヌクレオチド配列を含み、かつこのような配列が、あるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と「作用可能に結合」している場合、そのポリペプチドを「発現可能」であるものとされる。作用可能な結合とは、調節ＤＮＡ配列と、発現が求められるＤＮＡ配列とが、回収可能な量の抗ＩＬ－３１ペプチドもしくは抗体部分として、またはＩＬ－３１ミモトープを保有する融合タンパク質としての遺伝子発現を可能にするような方法で接続している結合である。遺伝子発現に必要な制御領域の詳細な性質は、類似技術分野で周知されているように生物によって異なり得る。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，２００１（前掲）、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９９３（前掲）を参照。
したがって、本発明は、原核細胞または真核細胞のいずれかにおける、抗ＩＬ－３１抗体、またはＩＬ－３１特異的ポリペプチドもしくはペプチド、またはＩＬ－３１ミモトープを含む融合タンパク質の発現を包含する。好適な宿主としては、ｉｎ ｖｉｖｏもしくはｉｎ ｓｉｔｕいずれかの細菌、酵母、昆虫、菌類、鳥類、及び哺乳類細胞を含めた細菌もしくは真核生物の宿主、または哺乳類、昆虫、鳥類、もしくは酵母を起源とする宿主細胞が挙げられる。哺乳類の細胞または組織は、ヒト、霊長類、ハムスター、ウサギ、げっ歯類、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマ、ヤギ、イヌ、またはネコ起源とすることができるが、他の任意の哺乳類細胞が使用されてもよい。
１つの実施形態において、導入されたヌクレオチド配列は、レシピエント宿主内で自律複製可能なプラスミドまたはウイルスベクターに組み込まれる。この目的のために、多種多様なベクターのいずれかを使用することができる。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９９３（前掲）を参照。特定のプラスミドまたはウイルスベクターを選択する上で重要な因子としては、ベクターを含まないレシピエント細胞から、ベクターを含むレシピエント細胞を容易に認識及び選択することができること、特定の宿主に所望されるベクターのコピー数、ならびに異なる種の宿主細胞間でベクターを「シャッフル」できることが望ましいかどうかが挙げられる。
当技術分野で知られている原核生物ベクターの例としては、プラスミド、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ内での複製が可能なプラスミド（例えば、ｐＢＲ３２２、ＣｏｌＥ１、ｐＳＣ１０１、ｐＡＣＹＣ １８４、ｐｉ．ＶＸ）が挙げられる。このようなプラスミドは、例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓ ｅｔ ａｌ．，１９８９（前掲）、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ，１９９３（前掲）によって開示されている。Ｂａｃｉｌｌｕｓプラスミドとしては、ｐＣ１９４、ｐＣ２２１、ｐＴ１２７などが挙げられる。このようなプラスミドは、Ｇｒｙｃｚａｎ（ＴＨＥ ＭＯＬＥＣ．ＢＩＯ．ＯＦ ＴＨＥ ＢＡＣＩＬＬＩ ３０７－３２９（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，１９８２））によって開示されている。好適なＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属プラスミドとしては、ｐＩＪ１０１（Ｋｅｎｄａｌｌ ｅｔ ａｌ．，１６９ Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．４１７７－８３（１９８７））、及びｐｈｉ．Ｃ３１のようなＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属バクテリオファージ（Ｃｈａｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（ＳＩＸＴＨ ＩＮＴ’Ｌ ＳＹＭＰＯＳＩＵＭ ＯＮ ＡＣＴＩＮＯＭＹＣＥＴＡＬＥＳ ＢＩＯ．４５－５４（Ａｋａｄｅｍｉａｉ Ｋａｉｄｏ，Ｂｕｄａｐｅｓｔ，Ｈｕｎｇａｒｙ １９８６））が挙げられる。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属プラスミドは、Ｊｏｈｎ ｅｔ ａｌ．，８ Ｒｅｖ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．６９３－７０４（１９８６）、Ｉｚａｋｉ，３３ Ｊｐｎ．Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．７２９－４２（１９７８）、及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９９３（前掲）で概説されている。
代替的に、本明細書で説明されている抗ＩＬ－３１抗体もしくはペプチド、または融合タンパク質をコードするｃＤＮＡの発現に有用な遺伝子発現エレメントとしては、限定されるものではないが、（ａ）ウイルス転写プロモーター及びそのエンハンサーエレメント、例えば、ＳＶ４０初期プロモーター（Ｏｋａｙａｍａ ｅｔ ａｌ．，３ Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２８０（１９８３））、ラウス肉腫ウイルスＬＴＲ（Ｇｏｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，７９ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ ６７７７（１９８２））、及びモロニーマウス白血病ウイルスＬＴＲ（Ｇｒｏｓｓｃｈｅｄｌ ｅｔ ａｌ．，４１ Ｃｅｌｌ ８８５（１９８５））、（ｂ）スプライス領域及びポリアデニル化部位、例えば、ＳＶ４０後期領域（Ｏｋａｙａｒｅａ ｅｔ ａｌ．，ＭＣＢ，３：２８０（１９８３）、ならびに（ｃ）ポリアデニル化部位、例えば、ＳＶ４０内の部位（Ｏｋａｙａｍａ ｅｔ ａｌ．，１９８３（前掲））が挙げられる。
免疫グロブリンｃＤＮＡ遺伝子は、Ｗｅｉｄｌｅ ｅｔ ａｌ．，５１（１）Ｇｅｎｅ ２１－２９（１９８７）によって説明されているように、発現エレメントとして、ＳＶ４０初期プロモーター及びそのエンハンサー、マウス免疫グロブリンＨ鎖プロモーターエンハンサー、ＳＶ４０後期領域ｍＲＮＡスプライシング、ウサギＳ－グロビン介在配列、免疫グロブリン及びウサギＳ－グロビンポリアデニル化部位、ならびにＳＶ４０ポリアデニル化エレメントを用いて発現させることができる。
ｃＤＮＡの一部、ゲノムＤＮＡの一部から構成された免疫グロブリン遺伝子（Ｗｈｉｔｔｌｅ ｅｔ ａｌ．，１ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎ．４９９－５０５（１９８７））については、転写プロモーターはヒトサイトメガロウイルスとすることができ、プロモーターエンハンサーは、サイトメガロウイルス及びマウス／ヒト免疫グロブリンとすることができ、ｍＲＮＡスプライシング及びポリアデニル化領域は、ネイティブ染色体免疫グロブリン配列とすることができる。
１つの実施形態において、げっ歯類細胞内のｃＤＮＡ遺伝子の発現については、転写プロモーターはウイルスＬＴＲ配列であり、転写プロモーターエンハンサーは、マウス免疫グロブリン重鎖エンハンサー及びウイルスＬＴＲエンハンサーのいずれかまたは両方であり、スプライス領域は、３１ｂｐ超のイントロンを含み、ポリアデニル化領域及び転写終結領域は、合成されている免疫グロブリン鎖に対応するネイティブ染色体配列に由来する。他の実施形態において、他のタンパク質をコードするｃＤＮＡ配列は、哺乳類細胞内でのタンパク質の発現を達成するために上記の発現エレメントと組み合わせる。
各々の融合遺伝子は、発現ベクター内で組み立てるか、または発現ベクターに挿入することができる。次に、キメラ型免疫グロブリン鎖遺伝子産物を発現可能なレシピエント細胞を、抗ＩＬ－３１ペプチドまたはキメラ型Ｈもしくはキメラ型Ｌ鎖をコードする遺伝子で単独で形質移入するか、またはキメラ型Ｈ及びキメラ型Ｌ鎖遺伝子で同時形質移入する。形質移入したレシピエント細胞は、組み込まれた遺伝子の発現を許容する条件下で培養し、発現した免疫グロブリン鎖またはインタクト抗体もしくはフラグメントを培養物から回収する。
１つの実施形態において、抗ＩＬ－３１ペプチドもしくはキメラ型Ｈ鎖及びＬ鎖をコードする融合遺伝子、またはこれらの部分を別々の発現ベクター内で組み立て、次にこれらのベクターをレシピエント細胞の同時形質移入に使用する。代替的に、キメラ型Ｈ鎖及びＬ鎖をコードする融合遺伝子を同じ発現ベクター上で組み立ててもよい。
発現ベクターの形質移入及びキメラ型抗体の産生については、レシピエント細胞系は骨髄腫細胞であってもよい。骨髄腫細胞は、形質移入した免疫グロブリン遺伝子によってコードされる免疫グロブリンを合成し、組み立て、分泌することができ、その免疫グロブリンのグリコシル化の機構を有する。骨髄腫細胞は、培養物中またはマウスの腹腔内で成長させることができ、腹腔内の場合、分泌された免疫グロブリンは腹水から得ることができる。その他の好適なレシピエント細胞としては、リンパ球様細胞、例えば、ヒトもしくは非ヒト起源のＢリンパ球、ヒトもしくは非ヒト起源のハイブリドーマ細胞、または種間ヘテロハイブリドーマ細胞が挙げられる。
キメラ型、イヌ化、ネコ化、ウマ化、ヒト化、完全イヌ、完全ネコ、完全ウマ、または完全ヒトの抗ＩＬ－３１抗体コンストラクトまたはＩＬ－３１特異的ポリペプチドもしくはペプチド（例えば、本明細書で説明されている抗体の抗原結合部分）をコードするヌクレオチド配列を保有する発現ベクター、あるいは本明細書で説明されている融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を保有する発現ベクターは、形質転換、形質移入、結合体化、プロトプラスト融合、リン酸カルシウム沈殿法のような生化学的手段、ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）デキストランのようなポリカチオンを用いた適用、ならびにエレクトロポレーション、直接マイクロインジェクション、及び微粒子銃のような機械的手段を含めた、様々な好適な手段のいずれかによって、適切な宿主細胞に導入することができる。Ｊｏｈｎｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，２４０ Ｓｃｉｅｎｃｅ １５３８－１５４１（１９８８）。
酵母は、免疫グロブリンのＨ鎖及びＬ鎖の産生において、細菌を上回る相当な利点をもたらし得る。酵母は、グリコシル化を含めた翻訳後ペプチド修飾を行う。現在、複数の組換え型ＤＮＡ戦略が存在し、これらの戦略は、酵母内での所望タンパク質の産生に使用することができる強力なプロモーター配列及び高コピー数のプラスミドを利用している。酵母は、クローン化哺乳類遺伝子産物のリーダー配列を認識し、リーダー配列を有するペプチド（すなわち、プレペプチド）を分泌する。Ｈｉｔｚｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１１ｔｈ Ｉｎｔ’ｌ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ Ｙｅａｓｔ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ＆ Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．（Ｍｏｎｔｐｅｌｉｅｒ，Ｆｒａｎｃｅ，１９８２）。
酵母遺伝子発現システムは、抗ＩＬ－３１ペプチド、抗体、ならびに組み立てられたマウス及びキメラ型、ヘテロキメラ型、イヌ化、ネコ化、ウマ化、ヒト化、完全イヌ、完全ネコ、完全ウマ、または完全ヒト抗体、これらのフラグメント及び領域の産生、分泌、及び安定性のレベルを通例的に評価することができる。酵母がグルコースに富む培地中で成長するときに大量に産生される解糖酵素をコードする活発に発現した遺伝子からのプロモーター及び終結エレメントを組み込む、任意の一連の酵母遺伝子発現システムを利用することができる。また、既知の解糖遺伝子も非常に効率的な転写調節シグナルを提供することができる。例えば、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）遺伝子のプロモーター及び終結シグナルを利用することができる。酵母内でのクローン化免疫グロブリンｃＤＮＡの発現に最適な発現プラスミドを評価するために、複数のアプローチがとられ得る。Ｖｏｌ．ＩＩ ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ，４５－６６（Ｇｌｏｖｅｒ，ｅｄ．，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ １９８５）を参照。
また、細菌株も、本発明によって説明される抗体分子もしくはペプチド、または融合タンパク質の産生のための宿主として利用することができる。このような細菌宿主と共に、宿主細胞に適合性の種に由来するレプリコン及び調節配列を含むプラスミドベクターが使用される。このベクターは、複製部位に加えて、形質転換細胞の表現型選択を提供可能な特異的遺伝子を保有する。細菌内のクローン化免疫グロブリンｃＤＮＡによってコードされたマウス、キメラ型、ヘテロキメラ型、イヌ化、ネコ化、ウマ化、ヒト化、完全イヌ、完全ネコ、完全ウマ、もしくは完全ヒト抗体、フラグメント及び領域、または抗体鎖を産生するための発現プラスミドを評価するために、複数のアプローチがとられ得る（Ｇｌｏｖｅｒ，１９８５（前掲）；Ａｕｓｕｂｅｌ，１９９３（前掲）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，２００１（前掲）；Ｃｏｌｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ，ＮＹ（１９９４－２００１）；Ｃｏｌｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ，ＮＹ（１９９７－２００１）を参照）。
宿主哺乳類細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ またはｉｎ ｖｉｖｏで成長させることができる。哺乳類細胞は免疫グロブリンタンパク質分子に対し、リーダーペプチドの除去、Ｈ鎖及びＬ鎖のフォールディング及び組み立て、抗体分子のグリコシル化、ならびに機能的抗体タンパク質の分泌を含めた翻訳後修飾をもたらす。
抗体タンパク質を産生するための宿主として有用であり得る哺乳類細胞としては、上記のリンパ系起源の細胞に加えて、線維芽細胞起源の細胞、例えば、ベロ細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ８１）またはＣＨＯ－Ｋ１細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ６１）が挙げられる。
哺乳類細胞内でクローン化抗ＩＬ－３１ペプチドＨ鎖及びＬ鎖遺伝子を発現させるには多くのベクターシステムが利用可能である（Ｇｌｏｖｅｒ，１９８５（前掲）を参照）。種々のアプローチに従って、完全なＨ２Ｌ２抗体を得ることができる。同じ細胞内でＨ鎖及びＬ鎖を同時発現させて、Ｈ鎖及びＬ鎖の細胞内会合及び結合を達成し、完全な４量体Ｈ２Ｌ２抗体及び／または抗ＩＬ－３１ペプチドにすることが可能である。同時発現は、同じ宿主内で同じまたは異なるプラスミドを使用することによって生じ得る。Ｈ鎖及びＬ鎖両方の遺伝子及び／または抗ＩＬ－３１ペプチドを同じプラスミドに入れ、次にこのプラスミドを細胞に形質移入して、両方の鎖を発現する細胞を直接選択することができる。代替的に、まず細胞に１つの鎖、例えばＬ鎖をコードするプラスミドを形質移入し、次に得られた細胞系に、第２の選択マーカーを含むＨ鎖プラスミドを形質移入することができる。いずれかの経路によって抗ＩＬ－３１ペプチド及び／またはＨ２Ｌ２分子を産生する細胞系に対し、追加的な選択マーカーと共にペプチド、Ｈ、Ｌ、またはＨ及びＬ鎖の追加的なコピーをコードするプラスミドを形質移入して、性質の強化（例えば、組み立てられたＨ２Ｌ２抗体分子の生産量向上または形質移入細胞系の安定性強化）を伴った細胞系を生成することができる。
組換え型抗体を長期にわたり高収率で産生するために、安定した発現を使用することができる。例えば、抗体分子を安定して発現させる細胞系を操作することができる。ウイルスの複製起点を含む発現ベクターを使用する代わりに、免疫グロブリン発現カセット及び選択マーカーを用いて宿主細胞を形質転換してもよい。外来ＤＮＡの導入後、操作した細胞は、濃縮培地で１～２日間成長させることができ、次に選択培地に切り替える。組換え型プラスミド内の選択マーカーは、選択に対する耐性を付与し、細胞が安定的にプラスミドを染色体に統合し、成長して増殖巣を形成し、これがクローン化し拡大して細胞系になることを可能にする。このような操作細胞系は、抗体分子と直接的または間接的に相互作用する化合物／構成要素のスクリーニング及び評価をする上で特に有用であり得る。
抗体が産生されたら、この抗体を、当技術分野で知られている免疫グロブリン分子を精製する任意の方法により、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性、特にプロテインＡの後の特異的抗原に対する親和性、及びサイジングカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、溶解度の差によって、またはタンパク質精製における他の任意の標準的技法によって精製することができる。多くの実施形態において、抗体は細胞から培養培地に分泌され、培養培地から採取される。
医薬用途
本発明のワクチン組成物は、イヌ、ネコ、ウマ、及びヒトのような哺乳類におけるＩＬ－３１媒介性障害、例えば、掻痒状態及び／またはアレルギー状態の治療及び／またはそれに対する保護で使用することができる。本発明の医薬組成物は、非経口投与、例えば、皮下、筋肉内、または静脈内投与に有用である。その他の適切な投与様式も本明細書で説明されている。
本発明のワクチンは、個別の治療剤として、または他の治療剤と組み合わせて、投与することができる。これらは単独で投与することができるが、概して、選択された投与経路及び標準的なやり方に基づいて選択した医薬担体と共に投与される。
本明細書で開示されているワクチン組成物の投与は、非経口注射（例えば、腹腔内、皮下、または筋肉内注射）、経口投与、または気道表面へのワクチンの局所投与を含めた任意の適切な手段によって行うことができる。気道表面への局所投与は、鼻腔内投与によって（例えば、ドロッパー、スワブ、または吸入器の使用によって）行うことができる。また、気道表面へのワクチンの局所投与は、吸入投与によって、例えば、ワクチンを含んだ吸込可能な医薬製剤粒子（固体及び液体両方の粒子を含む）をエアロゾル懸濁液として作成し、次いで対象に吸込可能な粒子を吸入させることによって行ってもよい。吸込可能な医薬製剤粒子を投与するための方法及び装置は周知されており、任意の従来的技法を用いることができる。経口投与は、例えば、経口摂取可能な液体または固体製剤の形態をとることができる。
いくつかの望ましい実施形態において、ワクチンは非経口注射によって投与される。非経口投与の場合、ワクチンは、医薬的に許容される非経口ビヒクルと共に、溶液、懸濁液、乳濁液、または凍結乾燥粉末として製剤化することができる。例えば、ビヒクルは、水性担体のような許容される担体に溶解したミモトープ及び担体ポリペプチドの組合せ（例えば、ミモトープ結合体）の溶液またはそのカクテルの溶液とすることができ、このようなビヒクルは、水、食塩水、リンゲル液、ブドウ糖液、トレハロースもしくはスクロースの溶液、または５％血清アルブミン、０．４％食塩水、０．３％グリシンなどである。また、リポソーム及び非水性ビヒクル（例えば、不揮発性油）も使用することができる。このような溶液は無菌であり、概して粒子状物質を含まない。このような組成物は、従来の周知されている滅菌技法によって滅菌することができる。組成物は、必要に応じて生理的条件に近づけるための医薬的に許容される補助物質、例えば、ｐＨ調整剤及び緩衝剤など、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなどを含んでもよい。また、本明細書で説明されているように、本発明のワクチン組成物は、アジュバントまたはアジュバント製剤を含む。このようなワクチン組成物中のミモトープ結合体の濃度は、例えば、約０．５重量％未満から、通常は約１重量％以上最大１５重量％または２０重量％まで幅広く変動する可能性があり、選択された特定の投与様式に従って、主に液体の体積、粘度などに基づいて選択される。ビヒクルまたは凍結乾燥粉末は、等張性を維持する添加物（例えば、塩化ナトリウム、マンニトール）及び化学的安定性を維持する添加物（例えば、緩衝液及び防腐剤）を維持する添加物を含むことができる。製剤は、一般的に使用されている技法によって滅菌される。
非経口投与可能な組成物を調製するための実際の方法は、当業者に公知または明らかであり、例えば、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡ．ＳＣＩ．（１５ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８０）でより詳細に説明されている。
本発明のワクチンは、保存のために凍結乾燥し、使用前に好適な担体で再構成することができる。任意の好適な凍結乾燥及び再構成技法を用いることができる。凍結乾燥及び再構成によって様々な程度の活性損失に至る可能性があり、補うために使用レベルを調整しなければならない場合があることは、当業者に理解されよう。
本発明のＩＬ－３１ミモトープ（例えば、ＩＬ－３１ミモトープ結合体）またはそのカクテルを含む組成物は、既存の疾患の再発防止及び／または治療処置のために投与することができる。好適な医薬担体については、当技術分野の標準的参考文献であるＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳの最新版で説明されている。
治療用途において、組成物は、既に疾患を患っている患者に対し、疾患及びその合併症を治癒するか、または少なくとも部分的に抑止もしくは軽減するのに十分な量を投与することができる。これを達成するのに十分な量は、「治療有効用量」または「治療有効量」として定義される。この用途に効果的な量は、疾患の重症度、及び対象自身の免疫系の一般的な状態に依存する。本発明に従うワクチン組成物の治療有効量は、当業者によって容易に定量することができる。
投与する薬用量は、当然ながら、特定の薬剤の薬力学特性、その投与様式及び投与経路、レシピエントの年齢、健康状態、及び体重、症状の性質及び程度、併用治療の種類、治療の頻度、ならびに所望の効果などの既知の因子に応じて変動する。
非限定的な例として、イヌ、ネコ、ウマ、またはヒトのＩＬ－３１関連病態の治療は、上記の薬用量範囲内における本発明のワクチンの隔週または毎月の薬用量として提供することができる。
ワクチン組成物の単回または複数回投与は、治療する獣医師または医師が選択する用量レベル及びパターンを用いて実施することができる。いずれにしても、医薬製剤は、対象を有効に治療するのに十分な量の本発明のワクチン組成物を提供すべきである。
診断用途
また、本発明は、哺乳類試料（限定されるものではないが、掻痒状態及び／またはアレルギー状態であることが知られているかまたはそれを有する疑いのある哺乳類からの試料を含む）中のＩＬ－３１または抗ＩＬ－３１抗体を検出するための診断方法で使用するためのＩＬ－３１ミモトープ及び抗ＩＬ－３１抗体も提供する。
例えば、本発明は、試料中の抗ＩＬ－３１抗体の同一性及び／または量を定量する方法を提供する。この方法は、少なくとも１つのＩＬ－３１ミモトープ（例えば、ネコＩＬ－３１ミモトープ、イヌＩＬ－３１ミモトープ、ウマＩＬ－３１ミモトープ、またはヒトＩＬ－３１ミモトープ）と共に抗ＩＬ－３１抗体を含む試料をインキュベートすることと、試料中の抗ＩＬ－３１同一性及び／または量を定量することとを含む。
１つの実施形態において、試料中の抗ＩＬ－３１抗体の同一性及び／または量を定量するための方法で用いられるイヌＩＬ－３１ミモトープは、アミノ酸配列ＳＶＰＡＤＴＦＥＣＫＳＦ（配列番号１８６）、ＳＶＰＡＤＴＦＥＲＫＳＦ（配列番号１８７）、ＮＳＳＡＩＬＰＹＦＲＡＩＲＰＬＳＤＫＮＩＩＤＫＩＩＥＱＬＤＫＬＫＦ（配列番号１９２）、ＡＰＴＨＱＬＰＰＳＤＶＲＫＩＩＬＥＬＱＰＬＳＲＧ（配列番号１９６）、ＴＧＶＰＥＳ（配列番号２００）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む。
別の実施形態において、このような方法で用いられるネコＩＬ－３１ミモトープは、アミノ酸配列ＳＭＰＡＤＮＦＥＲＫＮＦ（配列番号１８８）、ＮＧＳＡＩＬＰＹＦＲＡＩＲＰＬＳＤＫＮＴＩＤＫＩＩＥＱＬＤＫＬＫＦ（配列番号１９３）、ＡＰＡＨＲＬＱＰＳＤＩＲＫＩＩＬＥＬＲＰＭ ＳＫＧ（配列番号１９７）、ＩＧＬＰＥＳ（配列番号２０１）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む。
さらなる実施形態において、このような方法で用いられるウマＩＬ－３１ミモトープは、アミノ酸配列ＳＭＰＴＤＮＦＥＲＫＲＦ（配列番号１８９）、ＮＳＳＡＩＬＰＹＦＫＡＩＳＰＳＬＮＮＤＫＳＬＹＩＩＥＱＬＤＫＬＮＦ（配列番号１９４）、ＧＰＩＹＱＬＱＰＫＥＩＱＡＩＩＶＥＬＱＮＬＳ ＫＫ（配列番号１９８）、ＫＧＶＱＫＦ（配列番号２０２）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む。
またさらに、このような方法で用いられるヒトＩＬ－３１ミモトープは、アミノ酸配列ＳＶＰＴＤＴＨＥＣＫＲＦ（配列番号１９０）、ＳＶＰＴＤＴＨＥＲＫＲＦ（配列番号１９１）、ＨＳＰＡＩＲＡＹＬＫＴＩＲＱＬＤＮＫＳＶＩＤＥＩＩＥＨＬＤＫＬＩＦ（配列番号１９５）、ＬＰＶＲＬＬＲＰＳＤＤＶＱＫＩＶＥＥＬＱＳＬＳＫＭ（配列番号１９９）、ＫＧＶＬＶＳ（配列番号２０３）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む。
上記の診断方法の１つの実施形態において、ミモトープは、固体表面に結合した捕捉試薬である。１つの実施形態において、試料中の抗体の量を定量化するために、試料がミモトープ捕捉試薬に添加され、次に二次検出試薬が添加される。
また、本発明は、哺乳類からの試料中のＩＬ－３１の量を定量する方法も提供する。このような方法は、複数の種からのＩＬ－３１を検出するのに有用である。このような方法は、固体表面に繋留した標識抗ＩＬ－３１抗体：ＩＬ－３１ミモトープ複合体と共にＩＬ－３１を含む哺乳類試料をインキュベートすることであって、複合体中のミモトープが、ネコＩＬ－３１ミモトープ、イヌＩＬ－３１ミモトープ、ウマＩＬ－３１ミモトープ、及びヒトＩＬ－３１ミモトープからなる群より選択される、インキュベートすることと、試料中のＩＬ－３１のレベルを定量することであって、複合体中のミモトープに対する複合体中の標識抗ＩＬ－３１抗体の親和性が、試料中のＩＬ－３１に対するその親和性よりも低い、定量することとを含む。この方法の１つの実施形態において、定量するステップは、試料中のＩＬ－３１が複合体の標識抗ＩＬ－３１抗体に結合したときに固体表面から解放される標識抗体から来るシグナルを測定することを含み、試料中のＩＬ－３１のレベルは、シグナルに対し反比例する。
１つの実施形態において、試料中のＩＬ－３１の量を定量する方法で用いられるイヌＩＬ－３１ミモトープは、アミノ酸配列ＳＶＰＡＤＴＦＥＣＫＳＦ（配列番号１８６）、ＳＶＰＡＤＴＦＥＲＫＳＦ（配列番号１８７）、ＮＳＳＡＩＬＰＹＦＲＡＩＲＰＬＳＤＫＮＩＩＤＫＩＩＥＱＬＤＫＬＫＦ（配列番号１９２）、ＡＰＴＨＱＬＰＰＳＤＶＲＫＩＩＬＥＬＱＰＬＳＲＧ（配列番号１９６）、ＴＧＶＰＥＳ（配列番号２００）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む。
別の実施形態において、このような方法で用いられるネコＩＬ－３１ミモトープは、アミノ酸配列ＳＭＰＡＤＮＦＥＲＫＮＦ（配列番号１８８）、ＮＧＳＡＩＬＰＹＦＲＡＩＲＰＬＳＤＫＮＴＩＤＫＩＩＥＱＬＤＫＬＫＦ（配列番号１９３）、ＡＰＡＨＲＬＱＰＳＤＩＲＫＩＩＬＥＬＲＰＭ ＳＫＧ（配列番号１９７）、ＩＧＬＰＥＳ（配列番号２０１）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む。
また別の実施形態において、このような方法で用いられるウマＩＬ－３１ミモトープは、アミノ酸配列ＳＭＰＴＤＮＦＥＲＫＲＦ（配列番号１８９）、ＮＳＳＡＩＬＰＹＦＫＡＩＳＰＳＬＮＮＤＫＳＬＹＩＩＥＱＬＤＫＬＮＦ（配列番号１９４）、ＧＰＩＹＱＬＱＰＫＥＩＱＡＩＩＶＥＬＱＮＬＳ ＫＫ（配列番号１９８）、ＫＧＶＱＫＦ（配列番号２０２）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む。
なおさらなる実施形態において、このような方法で用いられるヒトＩＬ－３１ミモトープは、アミノ酸配列ＳＶＰＴＤＴＨＥＣＫＲＦ（配列番号１９０）、ＳＶＰＴＤＴＨＥＲＫＲＦ（配列番号１９１）、ＨＳＰＡＩＲＡＹＬＫＴＩＲＱＬＤＮＫＳＶＩＤＥＩＩＥＨＬＤＫＬＩＦ（配列番号１９５）、ＬＰＶＲＬＬＲＰＳＤＤＶＱＫＩＶＥＥＬＱＳＬＳＫＭ（配列番号１９９）、ＫＧＶＬＶＳ（配列番号２０３）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む。
本発明の診断方法のいずれかにおけるいくつかの実施形態において、ミモトープは、哺乳類のＩＬ－３１タンパク質とその共受容体との相互作用に関与するＩＬ－３１タンパク質上の領域に特異的に結合する抗ＩＬ－３１抗体またはその抗原結合部分に結合する。本発明の診断方法の１つの実施形態において、当該抗体の当該領域への結合は、以下：
ａ）配列番号１５７（ネコ＿ＩＬ３１＿野生型）によって表されるネコＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１２４から１３５の間の領域、
ｂ）配列番号１５５（イヌ＿ＩＬ３１）によって表されるイヌＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１２４から１３５の間の領域、及び
ｃ）配列番号１６５（ウマ＿ＩＬ３１）によって表されるウマＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１１８から１２９の間の領域
からなる群より選択される１５Ｈ０５エピトープ結合領域の変異によって影響を受ける。
本発明の診断方法の１つの実施形態において、ミモトープは、抗上記の１５Ｈ０５エピトープ領域に特異的に結合するＩＬ－３１抗体またはその抗原結合部分に結合する。本発明の診断方法のいずれかにおける１つの特定の実施形態において、ミモトープは、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列の組合せ：
１）抗体１５Ｈ０５：可変重鎖（ＶＨ）－ＣＤＲ１がＳＹＴＩＨ（配列番号１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＮＩＮＰＴＳＧＹＴＥＮＮＱＲＦＫＤ（配列番号２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＧＦＫＹＤＧＥＷＳＦＤＶ（配列番号３）、可変軽鎖（ＶＬ）－ＣＤＲ１がＲＡＳＱＧＩＳＩＷＬＳ（配列番号４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＡＳＮＬＨＩ（配列番号５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＬＱＳＱＴＹＰＬＴ（配列番号６）、
２）抗体ＺＩＬ１：可変重鎖（ＶＨ）－ＣＤＲ１がＳＹＧＭＳ（配列番号１３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＨＩＮＳＧＧＳＳＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号１４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＶＹＴＴＬＡＡＦＷＴＤＮＦＤＹ（配列番号１５）、可変軽鎖（ＶＬ）－ＣＤＲ１がＳＧＳＴＮＮＩＧＩＬＡＡＴ（配列番号１６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＳＤＧＮＲＰＳ（配列番号１７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＳＦＤＴＴＬＤＡＹＶ（配列番号１８）、
３）抗体ＺＩＬ８：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＹＡＭＳ（配列番号１９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＤＳＶＧＳＧＴＳＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号２０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＦＰＧＳＦＥＨ（配列番号２１）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＴＧＳＳＳＮＩＧＳＧＹＶＧ（配列番号２２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＹＮＳＤＲＰＳ（配列番号２３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＶＹＤＲＴＦＮＡＶ（配列番号２４）、
４）抗体ＺＩＬ９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＤＭＴ（配列番号２５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＤＶＮＳＧＧＴＧＴＡＹＡＶＡＶＫＧ（配列番号２６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＬＧＶＲＤＧＬＳＶ（配列番号２７）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＥＹＹＴＱ（配列番号２８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＲＤＴＥＲＰＳ（配列番号２９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＤＴＧＴＬＶ（配列番号３０）、
５）抗体ＺＩＬ１１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号３１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦＤＹ（配列番号３３）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＳＮＹＹＡＱ（配列番号３４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号３５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号３６）、
６）抗体ＺＩＬ６９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＡＭＫ（配列番号３７）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＴＩＮＮＤＧＴＲＴＧＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３８）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＮＡＥＳＧＣＴＧＤＨＣＰＰＹ（配列番号３９）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＫＹＹＡＱ（配列番号４０）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号４１）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＥＴＮＶ（配列番号４２）、
７）抗体ＺＩＬ９４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＦＭＳ（配列番号４３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＬＩＳＳＤＧＳＧＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号４４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＦＷＲＡＦＮＤ（配列番号４５）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＧＬＮＳＧＳＶＳＴＳＮＹＰＧ（配列番号４６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＤＴＧＳＲＰＳ（配列番号４７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＬＹＴＤＳＤＩＬＶ（配列番号４８）、
８）抗体ＺＩＬ１５４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＲＧＭＳ（配列番号４９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＹＩＲＹＤＧＳＲＴＤＹＡＤＡＶＥＧ（配列番号５０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＤＧＳＳＦＤＹ（配列番号５１）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＡＳＱＳＬＬＨＳＤＧＮＴＹＬＤ（配列番号５２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＶＳＮＲＤＰ（配列番号５３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＭＱＡＩＨＦＰＬＴ（配列番号５４）、
９）抗体ＺＩＬ１５９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＶＭＴ（配列番号５５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＮＳＥＧＳＲＴＡＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号５６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＤＩＶＡＴＧＴＳＹ（配列番号５７）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＴＬＮＲＦＹＴＱ（配列番号５８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号５９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＫＳＡＶＳＩＤＶＧＶ（配列番号６０）、
１０）抗体ＺＩＬ１７１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号６１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号６２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦＤＹ（配列番号６３）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＫＳＬＳＹＹＹＡＱ（配列番号６４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号６５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号６６）、または
１１）ＶＨまたはＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３のうちの少なくとも１つにおける１つ以上のアミノ酸残基の付加、欠失、及び／または置換によってそれぞれの親抗体１５Ｈ０５、ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、もしくはＺＩＬ１７１と相違する、１）～１０）のバリアント
のうちの少なくとも１つを含む、抗ＩＬ－３１抗体またはその抗原結合部分に結合する。
いくつかの実施形態において、本発明の診断方法で用いられるミモトープは、ネコＩＬ－３１に結合する抗ＩＬ－３１抗体またはその抗原結合部分に結合し、このとき、当該抗体は、以下：４２位のリジンからアスパラギンへの置換、４３位のバリンからイソロイシンへの置換、４６位のロイシンからバリンへの置換、４９位のリジンからアスパラギンへの置換、及びこれらの組合せから選択されるフレームワーク２（ＦＷ２）変化を含むＶＬ鎖を含み、このとき、これらの位置は配列番号１２７（ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１）のナンバリングに準拠している。
本発明の抗ＩＬ－３１抗体、ポリペプチド、及び／またはペプチド、ならびにＩＬ－３１ペプチドミモトープは、試料中のＩＬ－３１または抗ＩＬ－３１抗体を検出または定量化するイムノアッセイに有用である。ＩＬ－３１のイムノアッセイは、典型的には、選択的にＩＬ－３１に結合可能である本発明の検出可能に標識された高親和性（または高アビディティー）の抗ＩＬ－３１抗体、ポリペプチド、またはペプチドの存在下で臨床試料または生体試料をインキュベートすることと、試料中で結合している標識されたポリペプチド、ペプチド、または抗体を検出することとを含む。好ましい実施形態において、ＩＬ－３１ミモトープは、固体表面に結合しており、標識抗ＩＬ－３１抗体の捕捉に使用され、その結果、標識抗ＩＬ－３１抗体：ＩＬ－３１ミモトープ複合体が固体表面に繋留される。複合体中の標識ＩＬ－３１抗体が有する複合体中のミモトープに対する親和性は、試料中のＩＬ－３１に対する親和性よりも低い。そのため、試料中のＩＬ－３１のレベルは、試料中のＩＬ－３１が抗ＩＬ－３１抗体：ＩＬ－３１ミモトープ複合体の標識抗ＩＬ－３１抗体に結合したときに、固体表面から解放される標識抗体から来るシグナルを測定することによって、定量することができる。この場合、試料中のＩＬ－３１のレベルは、シグナルに対し反比例する。様々な臨床アッセイ手順が当技術分野で周知されている。例えば、ＩＭＭＵＮＯＡＳＳＡＹＳ ＦＯＲ ＴＨＥ ８０’Ｓ（Ｖｏｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｕｎｉｖ．Ｐａｒｋ，１９８１）を参照。このような試料には、動物対象から収集され、以下に説明するＥＬＩＳＡ分析に供される組織生検、血液、血清、糞便試料、または液体が含まれる。
いくつかの実施形態において、抗原の抗体との結合は、固体支持体を使用せずに検出される。例えば、抗原の抗体との結合は、液体形式で検出することができる。
他の実施形態において、ＩＬ－３１ペプチドミモトープ、または抗ＩＬ－３１抗体、ポリペプチド、もしくはペプチドは、例えば、ニトロセルロースに固定するか、または細胞、細胞粒子、もしくは可溶性タンパク質を固定化可能な別の固体支持体に固定することができる。次いで支持体を好適な緩衝液で洗浄してから、検出可能に標識されたＩＬ－３１特異的なポリペプチド、ペプチド、または抗体で処置することができる。次いで固相支持体を緩衝液でもう一度洗浄して、結合していないポリペプチド、ペプチド、または抗体を除去することができる。次いで、固体支持体上の結合した標識の量を、既知の方法ステップによって検出することができる。
「固相支持体」または「担体」とは、ポリペプチド、ペプチド、抗原、または抗体を結合可能な任意の支持体を意味する。周知されている支持体または担体としては、ガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリビニリデンフルオリド（ＰＶＤＦ）、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、天然及び変性セルロース類（例えば、ニトロセルロース）、ポリアクリルアミド、アガロース、ならびに磁鉄鉱が挙げられる。担体の性質は、本発明の目的においてある程度可溶性であるか、または不溶性であり得る。支持体物質は、結合分子が、ＩＬ－３１ペプチドミモトープ、ＩＬ－３１、または抗ＩＬ－３１抗体に結合可能である限り、考えられるほぼ全ての構造的構成を有することができる。所望に応じて、支持体に結合したＩＬ－３１ミモトープ自体が担体ポリペプチドと結合体化し得ることが想定されている。したがって、支持体の構成は、ビーズのように球形であっても、試験管の内側面または棒の外側面のように円柱状であってもよい。代替的に、表面は、シート、培養皿、試験片などのように平坦であってもよい。例えば、支持体は、ポリスチレンビーズを含んでもよい。当業者は、抗体、ポリペプチド、ペプチド、もしくは抗原を結合するための多くの他の好適な担体を知っており、または日常的な実験によって好適な担体を確認することができる。
周知されている方法ステップは、所与のロットのミモトープ、あるいは抗ＩＬ－３１ポリペプチド、ペプチド、及び／または抗体の結合活性を決定することができる。当業者は、日常的な実験によって、効果的かつ最適なアッセイ条件を決定することができる。
ＩＬ－３１特異的なポリペプチド、ペプチド、及び／または抗体の検出可能な標識ならびにＩＬ－３１ペプチドミモトープ（またはその結合体）の標識は、いくつかの異なる方法によって遂行することができ、このような方法には、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）または酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）で使用するための酵素に結合することが含まれる。結合した酵素は、露出した基質と反応して、例えば、分光光度的、蛍光光度的、または視覚的な手段により、検出され得る化学成分を生成する。本明細書で説明されているＩＬ－３１特異的抗体またはミモトープの検出可能な標識に使用することができる酵素としては、限定されるものではないが、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、デルタ－５－ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、アルファ－グリセロリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース－６－リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼ、及びアセチルコリンエステラーゼが挙げられる。
ＩＬ－３１特異的抗体またはミモトープを放射能標識することにより、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）を使用してＩＬ－３１を検出することが可能である。Ｗｏｒｋ ｅｔ ａｌ．，ＬＡＢ．ＴＥＣＨＮＩＱＵＥＳ ＆ ＢＩＯＣＨＥＭ．１Ｎ ＭＯＬＥＣ．Ｂｉｏ．（Ｎｏ．Ｈｏｌｌａｎｄ Ｐｕｂ．Ｃｏ．，ＮＹ，１９７８）を参照。放射性同位体は、ガンマカウンターもしくはシンチレーションカウンターを使用するなどの手段により、またはオートラジオグラフィーにより、検出することができる。本発明の目的において特に有用な同位体としては、３Ｈ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、及び１２５Ｉが挙げられる。
ＩＬ－３１特異的抗体またはミモトープを蛍光化合物で標識することも可能である。蛍光標識抗体を適切な波長の光に曝露すると、その存在を蛍光によって検出することができる。最も一般的に使用される蛍光標識化合物に含まれるものとして、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ－フタルアルデヒド、フルオレスカミンがある。
また、ＩＬ－３１特異的抗体またはミモトープは、蛍光発光金属、例えば、１２５Ｅｕまたはランタニド系列の他の金属を用いても、検出可能に標識することができる。これらの金属は、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）またはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のような金属キレート基を用いて、ＩＬ－３１特異的抗体またはミモトープに結合させることができる。
また、ＩＬ－３１特異的抗体は、化学発光化合物との結合によっても検出可能に標識することができる。この場合、化学発光で標識された抗体またはミモトープの存在は、化学反応の途中で生じる発光の存在を検出することによって決定される。有用な化学発光標識化合物の例は、ルミノール、イソルミノール、セロマティック（ｔｈｅｒｏｍａｔｉｃ）アクリジニウムエステル、イミダゾール、アクリジニウム塩、及びシュウ酸エステルである。
同様に、生物発光化合物を使用して、ミモトープ、またはＩＬ－３１特異的な抗体、部分、フラグメント、ポリペプチド、もしくはその誘導体を標識することができる。生物発光は、生体系で見られる化学発光の一種であり、触媒タンパク質が化学発光反応の効率を高めている。生物発光タンパク質の存在は、発光の存在を検出することによって決定される。標識の目的において重要な生物発光化合物は、ルシフェリン、ルシフェラーゼ、及びエクオリンである。
ミモトープ、ＩＬ－３１特異的な抗体、部分、フラグメント、ポリペプチド、または誘導体の検出は、例えば、検出可能な標識が放射性ガンマエミッターである場合はシンチレーションカウンターにより、または、例えば、標識が蛍光物質の場合は蛍光系により、遂行することができる。酵素標識の場合には、検出は、酵素の基質を用いる比色法によって遂行することができる。また、検出は、同様に調製された標準物質に対し、基質の酵素反応の程度の視覚的比較によっても遂行することができる。
本発明の目的において、上記のアッセイによって検出されるＩＬ－３１は、生体試料中に存在する可能性がある。ＩＬ－３１を含む任意の試料を使用することができる。例えば、試料は、生体液であり、例えば、血液、血清、リンパ液、尿、糞便、炎症滲出液、脳脊髄液、羊水、組織抽出物またはホモジネートなどである。本発明は、これらの試料のみを使用するアッセイに限定されるものではないが、当業者は、本明細書に照らして、他の試料の使用が可能になる好適な条件を決定することが可能である。
ｉｎ ｓｉｔｕ検出は、動物対象から組織学的試験片を取り出し、このような試験片に標識抗体（単独で、または本明細書で説明されているＩＬ－３１ミモトープとの複合体で）を加えることによって遂行することができる。また、複合体中の抗体は、抗体の部分のみを含み得ることも想定されている。抗体（またはその部分）は、標識抗体（または部分）を生体試料に適用するか、または上に重ねることによって提供することができる。このような手順を使用することにより、ＩＬ－３１の存在だけでなく、検査組織中のＩＬ－３１の分布も決定することが可能である。当業者は、本発明を使用すれば、このようなｉｎ ｓｉｔｕ検出を達成するために任意の多種多様な組織学的方法（例えば、染色手順）を変更することができることを容易に理解するであろう。
本発明のミモトープ、抗体、フラグメント、または誘導体は、「２部位」または「サンドイッチ」アッセイとしても知られるイムノメトリックアッセイでの利用に適合させることができる。典型的なイムノメトリックアッセイでは、ある量の非標識抗体（または抗体のフラグメント）は、試験を行う液体中で不溶性の固体支持体と結合させ、検出可能に標識された可溶性の抗体を加えて、固相抗体、抗原、及び標識抗体の間で形成された三元複合体の検出及び／または定量化を可能にする。
抗体または抗体：ミモトープ複合体は、試料中のＩＬ－３１を定量的または定性的に検出するため、またはＩＬ－３１を発現する細胞の存在を検出するために使用することができる。これは、蛍光顕微鏡、フローサイトメトリー、または蛍光定量的検出を伴う蛍光標識抗体または抗体：ミモトープ複合体（下記参照）を用いた免疫蛍光技法により、遂行することができる。診断目的においては、抗体は標識されていても標識されていなくてもよい。非標識抗体は、抗体に反応する他の標識抗体（二次抗体）（例えば、イヌまたはネコ免疫グロブリン定常領域に対し特異的な抗体）と組み合わせて使用することができる。代替的に、抗体を直接標識することもできる。多種多様な標識、例えば、放射性核種、蛍光物質、酵素、酵素基質、酵素補因子、酵素阻害剤、リガンド（詳細にはハプテン）などを用いることができる。これまでに論じたアッセイのような多数のタイプのイムノアッセイが利用可能であり、当業者に周知されている。
１つの実施形態において、ＩＬ－３１を検出するための診断方法は、ラテラルフローイムノアッセイ試験である。これは、イムノクロマトグラフィックアッセイ、ラピッドイムノマイグレーション（Ｒａｐｉｄ ＩｍｍｕｎｏＭｉｇｒａｔｉｏｎ）（ＲＩＭ（登録商標））またはストリップテストとしても知られている。ラテラルフローイムノアッセイは、本質的には、テストストリップ形式に合わせるための単一の軸に沿って動作するように適合させたイムノアッセイである。この技術の複数のバリエーションが開発されて商用製品となっているが、これらは全て同じ基本原理に従って動作する。典型的なテストストリップは、以下の構成要素：（１）試料パッド（試験試料を適用する吸収パッド）、（２）結合体または試薬パッド（これは、着色粒子（通常はコロイド金粒子、またはラテックスミクロスフェア）と結合体化した標的アナライトに特異的な抗体を含む）と、（３）反応メンブレン（典型的には、疎水性のニトロセルロースまたは酢酸セルロースのメンブレンであり、その上に抗標的アナライト抗体が捕捉ゾーンまたは試験ラインとしてメンブレンを横断するライン内に固定化されている（結合体抗体に特異的な抗体を含む対照ゾーンが存在してもよい））と、（４）吸取りまたは廃棄物リザーバー（毛細管作用によって反応メンブレンを横断して試料を引き出し収集するように設計されたさらなる吸収パッド）とからなる。ストリップの構成要素は通常、不活性のバッキング材に固定されており、シンプルなディップスティック形式で提供されるか、または捕捉ゾーン及び対照ゾーンを示す試料ポート及び反応ウィンドウを備えたプラスチックケース入りで提供される。
微生物学的試験で使用されるラテラルフローイムノアッセイには、２つの主要なタイプ：二重抗体サンドイッチアッセイ及び競合アッセイが存在する。二重抗体サンドイッチ形式では、試料は試料パッドから結合体パッドを通って移動し、存在する標的アナライトは結合体に結合する。次に、試料は捕捉ゾーンに到達するまでメンブレンを横断して移動を継続し、捕捉ゾーンに到達したところで標的／結合体複合体は固定化された抗体に結合し、メンブレン上のラインが可視化される。次に、試料は対照ゾーンに到達するまでストリップに沿ってさらに移動し、対照ゾーンに到達したところで過剰な結合体が結合し、メンブレン上の第２のラインが可視化される。この対照ラインは、試料が意図通りにメンブレンを横断して移動したことを示す。メンブレン上に２つの明確なラインがあれば、結果は陽性である。対照ゾーンに１つのラインがあれば、結果は陰性である。競合アッセイは、結合体パッドが標的アナライトまたはその類似体に既に結合した抗体を含んでいるという点で、二重抗体サンドイッチ形式とは相違する。そのため、標的アナライトが試料中に存在する場合、標的アナライトは結合体に結合せず、非標識のまま保たれる。試料がメンブレンに沿って移動し捕捉ゾーンに到達すると、過剰な非標識アナライトは固定化された抗体に結合し、結合体の捕捉を遮断するため、ラインは可視化されない。次に、結合していない結合体が対照ゾーンの抗体に結合し、対照ラインが可視化される。メンブレン上に１つの対照ラインがあれば、結果は陽性である。捕捉ゾーン及び対照ゾーンに２つのラインが見えれば、結果は陰性である。ただし、過剰な非標識標的アナライトが存在しない場合は捕捉ゾーンに薄いラインが生成されることがあり、これは決定的ではない結果を示す。ラテラルフロー技術には複数のバリエーションが存在する。メンブレン上の捕捉ゾーンは、標的アナライトに応じて、抗体ではなく固定化された抗原または酵素を含んでもよい。また、複数の捕捉ゾーンを適用して多重化試験を作成することも可能である。例えば、同じ試料中のＥＨＥＣ志賀毒素ＳＴ１及びＳＴ２の両方を別々に検出することができる市販のテストストリップが開発された。
重要なことに、本明細書で説明されているミモトープ及び抗体は、イヌ、ネコ、またはウマの掻痒状態またはアレルギー状態の診断に有用であり得る。より具体的には、抗体：ミモトープ複合体中の抗体は、試料中のＩＬ－３１に結合し、伴侶動物を含めた哺乳類のＩＬ－３１過剰発現を同定する一助となり得る。したがって、本明細書で説明されている抗体は、ミモトープと共に使用することができ、重要な免疫組織化学ツールを提供することができる。１つの実施形態において、ＩＬ－３１ミモトープ（ペプチド）を使用して、アッセイで検出するために標識された本発明の抗体を捕捉するというアッセイ設計がここでは考えられる。この捕捉された抗体は、結合したミモトープに対し、宿主種のネイティブ循環ＩＬ－３１の親和性よりも低い親和性を有すると考えられる。この実施形態において、宿主種に由来する液のインキュベートは、固体表面に繋留した標識抗体：ミモトープ複合体と共にインキュベートされる。宿主種に由来する試験液中にＩＬ－３１が存在すれば抗体に対する親和性がより高いため、標識抗体は固体表面から遊離し、洗浄ステップ中に除去され得る。したがって、試験液中のＩＬ－３１レベルは、ミモトープ結合表面に現れるシグナルの欠如と相関する可能性がある。このようなアッセイは、診断試験としての使用のための研究または臨床設定でＩＬ－３１を測定するのに有用であると考えられている。
本明細書で説明されている抗体及びミモトープはアレイ上で使用することができ、これは遺伝子発現プロファイルを測定する上で非常に好適である。
キット
主題の治療方法及び診断方法を実施するためのキットも、本発明の範囲内に含まれる。１つの実施形態において、本発明に従うキットは、少なくとも本発明のワクチン組成物を含む。１つの実施形態において、本発明のワクチンは、通常、容器に入った凍結乾燥形態で提供することができる。別の実施形態において、本発明に従うキットは、本発明の診断方法を行うために必要な構成要素を含むことができる。例えば、本発明のキットは、その構成要素の１つとして、本明細書で説明されているＩＬ－３１ミモトープ、例えば、ネコＩＬ－３１ミモトープ、イヌＩＬ－３１ミモトープ、ウマＩＬ－３１ミモトープ、またはヒトＩＬ－３１ミモトープを含むことができる。このようなミモトープは、既に固体表面に結合していてもよい。また、本発明に従うキットは、抗体も含むことができる。標識または毒素と結合体化してもよく結合体化していなくてもよい抗体が、典型的には、緩衝液（例えば、トリス、リン酸、炭酸など）、安定化剤、殺生物剤、不活性タンパク質（例えば、血清アルブミン）などと共にキットに含まれる。概して、これらの材料は、活性抗体の量に基づいて５ｗｔ％未満で存在し、通常は、再び抗体濃度に基づいて少なくとも約０．００１ｗｔ％の総量で存在する。多くの場合、活性成分を希釈するために不活性の増量剤または賦形剤を含むことが望ましく、このとき賦形剤は、組成物全体の約１ｗｔ％～９９ｗｔ％で存在することができる。一次抗体に結合可能な二次抗体がアッセイで用いられる場合、これは通常別々のバイアルに存在する。二次抗体は、典型的には、標識と結合体化し上記の抗体製剤と類似の方法で製剤化される。また、キットは概して使用説明書一式も含む。
１つの実施形態において、本発明に従うキットは、試料中のＩＬ－３１、例えば、イヌ、ネコ、ウマ、またはヒトのＩＬ－３１タンパク質を検出するのに有用なテストストリップキット（ラテラルフローイムノアッセイキット）である。このようなテストストリップは、典型的には、試験試料を適用する試料パッドと、イヌ、ネコ、ウマ、またはヒトＩＬ－３１に特異的であり着色粒子（通常はコロイド金粒子）と結合体化している抗体または抗体：ミモトープ複合体を含む、結合体または試薬パッドと、反応メンブレンであって、その上に抗ＩＬ－３１抗体または抗体：ミモトープ複合体が捕捉ゾーンまたは試験ラインとしてメンブレンを横断するライン内に固定化されている、反応メンブレン（結合体抗体に特異的な抗体または抗体：ミモトープ複合体を含む対照ゾーンが存在してもよい）と、毛細管作用によって反応メンブレンを横断して試料を引き出し収集するように設計されたさらなる吸収パッドとを含む。概して、テストストリップキットは使用説明書も含む。
国際出願時の請求の範囲は以下のとおりである。
〔出願時請求項１〕 ＩＬ－３１媒介性障害に対し哺乳類を免疫化及び／または保護するためのワクチン組成物であって、担体ポリペプチドと、ネコＩＬ－３１ミモトープ、イヌＩＬ－３１ミモトープ、ウマＩＬ－３１ミモトープ、及びヒトＩＬ－３１ミモトープからなる群より選択される少なくとも１つのミモトープとの組合せ、ならびにアジュバントを含む、前記ワクチン組成物。
〔出願時請求項２〕 前記イヌＩＬ－３１ミモトープが、アミノ酸配列ＳＶＰＡＤＴＦＥＣＫＳＦ（配列番号１８６）、ＳＶＰＡＤＴＦＥＲＫＳＦ（配列番号１８７）、ＮＳＳＡＩＬＰＹＦＲＡＩＲＰＬＳＤＫＮＩＩＤＫＩＩＥＱＬＤＫＬＫＦ（配列番号１９２）、ＡＰＴＨＱＬＰＰＳＤＶＲＫＩＩＬＥＬＱＰＬＳＲＧ（配列番号１９６）、ＴＧＶＰＥＳ（配列番号２００）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む、請求項１に記載のワクチン組成物。
〔出願時請求項３〕 前記ネコＩＬ－３１ミモトープが、アミノ酸配列ＳＭＰＡＤＮＦＥＲＫＮＦ（配列番号１８８）、ＮＧＳＡＩＬＰＹＦＲＡＩＲＰＬＳＤＫＮＴＩＤＫＩＩＥＱＬＤＫＬＫＦ（配列番号１９３）、ＡＰＡＨＲＬＱＰＳＤＩＲＫＩＩＬＥＬＲＰＭＳＫＧ（配列番号１９７）、ＩＧＬＰＥＳ（配列番号２０１）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む、請求項１に記載のワクチン組成物。
〔出願時請求項４〕 前記ウマＩＬ－３１ミモトープが、アミノ酸配列ＳＭＰＴＤＮＦＥＲＫＲＦ（配列番号１８９）、ＮＳＳＡＩＬＰＹＦＫＡＩＳＰＳＬＮＮＤＫＳＬＹＩＩＥＱＬＤＫＬＮＦ（配列番号１９４）、ＧＰＩＹＱＬＱＰＫＥＩＱＡＩＩＶＥＬＱＮＬＳ ＫＫ（配列番号１９８）、ＫＧＶＱＫＦ（配列番号２０２）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む、請求項１に記載のワクチン組成物。
〔出願時請求項５〕 前記ヒトＩＬ－３１ミモトープが、アミノ酸配列ＳＶＰＴＤＴＨＥＣＫＲＦ（配列番号１９０）、ＳＶＰＴＤＴＨＥＲＫＲＦ（配列番号１９１）、ＨＳＰＡＩＲＡＹＬＫＴＩＲＱＬＤＮＫＳＶＩＤＥＩＩＥＨＬＤＫＬＩＦ（配列番号１９５）、ＬＰＶＲＬＬＲＰＳＤＤＶＱＫＩＶＥＥＬＱＳＬＳＫＭ（配列番号１９９）、ＫＧＶＬＶＳ（配列番号２０３）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む、請求項１に記載のワクチン組成物。
〔出願時請求項６〕 前記ミモトープが、哺乳類のＩＬ－３１タンパク質とその共受容体との相互作用に関与する前記ＩＬ－３１タンパク質上の領域に特異的に結合する抗ＩＬ－３１抗体またはその抗原結合部分に結合する、請求項１～５のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
〔出願時請求項７〕 前記抗体の前記領域への前記結合が、以下：
ａ）配列番号１５７（ネコ＿ＩＬ３１＿野生型）によって表されるネコＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１２４から１３５の間の領域、
ｂ）配列番号１５５（イヌ＿ＩＬ３１）によって表されるイヌＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１２４から１３５の間の領域、及び
ｃ）配列番号１６５（ウマ＿ＩＬ３１）によって表されるウマＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１１８から１２９の間の領域
からなる群より選択される１５Ｈ０５エピトープ結合領域の変異によって影響を受ける、請求項６に記載のワクチン組成物。
〔出願時請求項８〕 前記ミモトープが、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列の組合せ：
１）抗体１５Ｈ０５：可変重鎖（ＶＨ）－ＣＤＲ１がＳＹＴＩＨ（配列番号１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＮＩＮＰＴＳＧＹＴＥＮＮＱＲＦＫＤ（配列番号２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＧＦＫＹＤＧＥＷＳＦＤＶ（配列番号３）、可変軽鎖（ＶＬ）－ＣＤＲ１がＲＡＳＱＧＩＳＩＷＬＳ（配列番号４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＡＳＮＬＨＩ（配列番号５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＬＱＳＱＴＹＰＬＴ（配列番号６）、
２）抗体ＺＩＬ１：可変重鎖（ＶＨ）－ＣＤＲ１がＳＹＧＭＳ（配列番号１３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＨＩＮＳＧＧＳＳＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号１４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＶＹＴＴＬＡＡＦＷＴＤＮＦＤＹ（配列番号１５）、可変軽鎖（ＶＬ）－ＣＤＲ１がＳＧＳＴＮＮＩＧＩＬＡＡＴ（配列番号１６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＳＤＧＮＲＰＳ（配列番号１７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＳＦＤＴＴＬＤＡＹＶ（配列番号１８）、
３）抗体ＺＩＬ８：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＹＡＭＳ（配列番号１９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＤＳＶＧＳＧＴＳＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号２０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＦＰＧＳＦＥＨ（配列番号２１）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＴＧＳＳＳＮＩＧＳＧＹＶＧ（配列番号２２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＹＮＳＤＲＰＳ（配列番号２３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＶＹＤＲＴＦＮＡＶ（配列番号２４）、
４）抗体ＺＩＬ９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＤＭＴ（配列番号２５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＤＶＮＳＧＧＴＧＴＡＹＡＶＡＶＫＧ（配列番号２６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＬＧＶＲＤＧＬＳＶ（配列番号２７）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＥＹＹＴＱ（配列番号２８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＲＤＴＥＲＰＳ（配列番号２９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＤＴＧＴＬＶ（配列番号３０）、
５）抗体ＺＩＬ１１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号３１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦＤＹ（配列番号３３）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＳＮＹＹＡＱ（配列番号３４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号３５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号３６）、
６）抗体ＺＩＬ６９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＡＭＫ（配列番号３７）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＴＩＮＮＤＧＴＲＴＧＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３８）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＮＡＥＳＧＣＴＧＤＨＣＰＰＹ（配列番号３９）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＫＹＹＡＱ（配列番号４０）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号４１）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＥＴＮＶ（配列番号４２）、
７）抗体ＺＩＬ９４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＦＭＳ（配列番号４３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＬＩＳＳＤＧＳＧＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号４４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＦＷＲＡＦＮＤ（配列番号４５）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＧＬＮＳＧＳＶＳＴＳＮＹＰＧ（配列番号４６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＤＴＧＳＲＰＳ（配列番号４７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＬＹＴＤＳＤＩＬＶ（配列番号４８）、
８）抗体ＺＩＬ１５４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＲＧＭＳ（配列番号４９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＹＩＲＹＤＧＳＲＴＤＹＡＤＡＶＥＧ（配列番号５０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＤＧＳＳＦＤＹ（配列番号５１）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＡＳＱＳＬＬＨＳＤＧＮＴＹＬＤ（配列番号５２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＶＳＮＲＤＰ（配列番号５３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＭＱＡＩＨＦＰＬＴ（配列番号５４）、
９）抗体ＺＩＬ１５９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＶＭＴ（配列番号５５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＮＳＥＧＳＲＴＡＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号５６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＤＩＶＡＴＧＴＳＹ（配列番号５７）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＴＬＮＲＦＹＴＱ（配列番号５８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号５９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＫＳＡＶＳＩＤＶＧＶ（配列番号６０）、
１０）抗体ＺＩＬ１７１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号６１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号６２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦＤＹ（配列番号６３）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＫＳＬＳＹＹＹＡＱ（配列番号６４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号６５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号６６）、または
１１）ＶＨまたはＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３のうちの少なくとも１つにおける１つ以上のアミノ酸残基の付加、欠失、及び／または置換によってそれぞれの親抗体１５Ｈ０５、ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、もしくはＺＩＬ１７１と相違する、１）～１０）のバリアント
のうちの少なくとも１つを含む、抗ＩＬ－３１抗体またはその抗原結合部分に結合する、請求項６に記載のワクチン組成物。
〔出願時請求項９〕 前記ミモトープが拘束性ミモトープである、請求項１～８のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
〔出願時請求項１０〕 前記拘束性ミモトープが化学的に連結した環状ペプチドである、請求項９に記載のワクチン組成物。
〔出願時請求項１１〕 前記ミモトープが前記担体ポリペプチドと化学的に結合している、請求項１～１０のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
〔出願時請求項１２〕 前記担体ポリペプチド及び前記ミモトープが組換え融合タンパク質の一部である、請求項１～１０のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
〔出願時請求項１３〕 前記担体ポリペプチドが、細菌トキソイドもしくはその誘導体、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、またはウイルス様粒子を含む、請求項１～１２のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
〔出願時請求項１４〕 前記細菌トキソイドまたは誘導体が、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、Ｂ群Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓからの外膜タンパク質複合体、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素、またはジフテリア毒素の無毒性変異型（ＣＲＭ１９７）である、請求項１３に記載のワクチン組成物。
〔出願時請求項１５〕 前記ウイルス様粒子が、ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ、Ｅ．ｃｏｌｉバクテリオファージＱベータ、ノーウォークウイルス、犬ジステンパーウイルス（ＣＤＶ）、またはインフルエンザＨＡである、請求項１３に記載のワクチン組成物。
〔出願時請求項１６〕 前記担体ポリペプチドが、ＣＲＭ１９７を含むまたはそれからなる、請求項１４に記載のワクチン組成物。
〔出願時請求項１７〕 前記アジュバントが、水中油型アジュバント、ポリマー及び水アジュバント、油中水型アジュバント、水酸化アルミニウムアジュバント、ビタミンＥアジュバント、ならびにこれらの組合せからなる群より選択される、請求項１～１６のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
〔出願時請求項１８〕 前記アジュバントが、サポニン、ステロール、第４級アンモニウム化合物、及びポリマーを含む製剤である、請求項１～１７のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
〔出願時請求項１９〕 前記サポニンがＱｕｉｌ Ａまたはその精製画分であり、前記ステロールがコレステロールであり、前記第４級アンモニウム化合物がジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド（ＤＤＡ）であり、前記ポリマーがポリアクリル酸である、請求項１８に記載のワクチン組成物。
〔出願時請求項２０〕 前記アジュバントが、１つ以上の単離免疫刺激性オリゴヌクレオチド、ステロール、及びサポニンの組合せを含む、請求項１～１７のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
〔出願時請求項２１〕 前記１つ以上の単離免疫刺激性オリゴヌクレオチドがＣｐＧを含み、前記ステロールがコレステロールであり、前記サポニンがＱｕｉｌ Ａまたはその精製画分である、請求項２０に記載のワクチン組成物。
〔出願時請求項２２〕 ＩＬ－３１媒介性障害に対し哺乳類を保護する方法であって、請求項１～２１のいずれか１項に記載のワクチン組成物を前記哺乳類に投与することを含む、前記方法。
〔出願時請求項２３〕 前記哺乳類が、イヌ、ネコ、ウマ、及びヒトからなる群より選択される、請求項２２に記載の方法。
〔出願時請求項２４〕 前記ワクチン組成物に含まれる前記ＩＬ－３１ミモトープが、用量当たり約１０μｇ～約１００μｇで前記哺乳類に投与される、請求項２２に記載の方法。
〔出願時請求項２５〕 試料中の抗ＩＬ－３１抗体の同一性及び／または量を定量する方法であって、抗ＩＬ－３１抗体を含む試料を、ネコＩＬ－３１ミモトープ、イヌＩＬ－３１ミモトープ、ウマＩＬ－３１ミモトープ、及びヒトＩＬ－３１ミモトープからなる群より選択される少なくとも１つのミモトープと共にインキュベートすることと、前記試料中の前記抗ＩＬ－３１の同一性及び／または量を定量することとを含む、前記方法。
〔出願時請求項２６〕 前記イヌＩＬ－３１ミモトープが、アミノ酸配列ＳＶＰＡＤＴＦＥＣＫＳＦ（配列番号１８６）、ＳＶＰＡＤＴＦＥＲＫＳＦ（配列番号１８７）、ＮＳＳＡＩＬＰＹＦＲＡＩＲＰＬＳＤＫＮＩＩＤＫＩＩＥＱＬＤＫＬＫＦ（配列番号１９２）、ＡＰＴＨＱＬＰＰＳＤＶＲＫＩＩＬＥＬＱＰＬＳＲＧ（配列番号１９６）、ＴＧＶＰＥＳ（配列番号２００）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む、請求項２５に記載の方法。
〔出願時請求項２７〕 前記ネコＩＬ－３１ミモトープが、アミノ酸配列ＳＭＰＡＤＮＦＥＲＫＮＦ（配列番号１８８）、ＮＧＳＡＩＬＰＹＦＲＡＩＲＰＬＳＤＫＮＴＩＤＫＩＩＥＱＬＤＫＬＫＦ（配列番号１９３）、ＡＰＡＨＲＬＱＰＳＤＩＲＫＩＩＬＥＬＲＰＭＳＫＧ（配列番号１９７）、ＩＧＬＰＥＳ（配列番号２０１）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む、請求項２５に記載の方法。
〔出願時請求項２８〕 前記ウマＩＬ－３１ミモトープが、アミノ酸配列ＳＭＰＴＤＮＦＥＲＫＲＦ（配列番号１８９）、ＮＳＳＡＩＬＰＹＦＫＡＩＳＰＳＬＮＮＤＫＳＬＹＩＩＥＱＬＤＫＬＮＦ（配列番号１９４）、ＧＰＩＹＱＬＱＰＫＥＩＱＡＩＩＶＥＬＱＮＬＳ ＫＫ（配列番号１９８）、ＫＧＶＱＫＦ（配列番号２０２）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む、請求項２５に記載の方法。
〔出願時請求項２９〕 前記ヒトＩＬ－３１ミモトープが、アミノ酸配列ＳＶＰＴＤＴＨＥＣＫＲＦ（配列番号１９０）、ＳＶＰＴＤＴＨＥＲＫＲＦ（配列番号１９１）、ＨＳＰＡＩＲＡＹＬＫＴＩＲＱＬＤＮＫＳＶＩＤＥＩＩＥＨＬＤＫＬＩＦ（配列番号１９５）、ＬＰＶＲＬＬＲＰＳＤＤＶＱＫＩＶＥＥＬＱＳＬＳＫＭ（配列番号１９９）、ＫＧＶＬＶＳ（配列番号２０３）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む、請求項２５に記載の方法。
〔出願時請求項３０〕 前記ミモトープが、固体表面に結合した捕捉試薬である、請求項２５～２９のいずれか１項に記載の方法。
〔出願時請求項３１〕 前記試料中の前記抗体の量を定量化するために、前記試料がミモトープ捕捉試薬に添加され、次に二次検出試薬が添加される、請求項３０に記載の方法。
〔出願時請求項３２〕 哺乳類からの試料中のＩＬ－３１の量を定量する方法であって、
ＩＬ－３１を含む哺乳類試料を、固体表面に繋留した標識抗ＩＬ－３１抗体：ＩＬ－３１ミモトープ複合体と共にインキュベートすることであって、前記複合体中の前記ミモトープが、ネコＩＬ－３１ミモトープ、イヌＩＬ－３１ミモトープ、ウマＩＬ－３１ミモトープ、及びヒトＩＬ－３１ミモトープからなる群より選択される、前記インキュベートすることと、
前記試料中の前記ＩＬ－３１のレベルを定量することであって、前記複合体中の前記標識ＩＬ－３１抗体が有する前記複合体中の前記ミモトープに対する親和性が、前記試料中の前記ＩＬ－３１に対する親和性よりも低い、前記定量することとを含む、前記方法。
〔出願時請求項３３〕 前記定量するステップが、前記試料中の前記ＩＬ－３１が前記複合体の前記標識抗ＩＬ－３１抗体に結合したときに前記固体表面から解放される標識抗体から来るシグナルを測定することを含み、前記試料中のＩＬ－３１のレベルが、前記シグナルに対し反比例する、請求項３２に記載の方法。
〔出願時請求項３４〕 前記イヌＩＬ－３１ミモトープが、アミノ酸配列ＳＶＰＡＤＴＦＥＣＫＳＦ（配列番号１８６）、ＳＶＰＡＤＴＦＥＲＫＳＦ（配列番号１８７）、ＮＳＳＡＩＬＰＹＦＲＡＩＲＰＬＳＤＫＮＩＩＤＫＩＩＥＱＬＤＫＬＫＦ（配列番号１９２）、ＡＰＴＨＱＬＰＰＳＤＶＲＫＩＩＬＥＬＱＰＬＳＲＧ（配列番号１９６）、ＴＧＶＰＥＳ（配列番号２００）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む、請求項３２または請求項３３に記載の方法。
〔出願時請求項３５〕 前記ネコＩＬ－３１ミモトープが、アミノ酸配列ＳＭＰＡＤＮＦＥＲＫＮＦ（配列番号１８８）、ＮＧＳＡＩＬＰＹＦＲＡＩＲＰＬＳＤＫＮＴＩＤＫＩＩＥＱＬＤＫＬＫＦ（配列番号１９３）、ＡＰＡＨＲＬＱＰＳＤＩＲＫＩＩＬＥＬＲＰＭＳＫＧ（配列番号１９７）、ＩＧＬＰＥＳ（配列番号２０１）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む、請求項３２または請求項３３に記載の方法。
〔出願時請求項３６〕 前記ウマＩＬ－３１ミモトープが、アミノ酸配列ＳＭＰＴＤＮＦＥＲＫＲＦ（配列番号１８９）、ＮＳＳＡＩＬＰＹＦＫＡＩＳＰＳＬＮＮＤＫＳＬＹＩＩＥＱＬＤＫＬＮＦ（配列番号１９４）、ＧＰＩＹＱＬＱＰＫＥＩＱＡＩＩＶＥＬＱＮＬＳ ＫＫ（配列番号１９８）、ＫＧＶＱＫＦ（配列番号２０２）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む、請求項３２または請求項３３に記載の方法。
〔出願時請求項３７〕 前記ヒトＩＬ－３１ミモトープが、アミノ酸配列ＳＶＰＴＤＴＨＥＣＫＲＦ（配列番号１９０）、ＳＶＰＴＤＴＨＥＲＫＲＦ（配列番号１９１）、ＨＳＰＡＩＲＡＹＬＫＴＩＲＱＬＤＮＫＳＶＩＤＥＩＩＥＨＬＤＫＬＩＦ（配列番号１９５）、ＬＰＶＲＬＬＲＰＳＤＤＶＱＫＩＶＥＥＬＱＳＬＳＫＭ（配列番号１９９）、ＫＧＶＬＶＳ（配列番号２０３）、もしくは抗ＩＬ－３１結合を保持するこれらのバリアントである、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む、請求項３２または請求項３３に記載の方法。
〔出願時請求項３８〕 前記ミモトープが、哺乳類のＩＬ－３１タンパク質とその共受容体との相互作用に関与する前記ＩＬ－３１タンパク質上の領域に特異的に結合する抗ＩＬ－３１抗体またはその抗原結合部分に結合する、請求項２５～３７のいずれか１項に記載の方法。
〔出願時請求項３９〕 前記抗体の前記領域への前記結合が、以下：
ａ）配列番号１５７（ネコ＿ＩＬ３１＿野生型）によって表されるネコＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１２４から１３５の間の領域、
ｂ）配列番号１５５（イヌ＿ＩＬ３１）によって表されるイヌＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１２４から１３５の間の領域、及び
ｃ）配列番号１６５（ウマ＿ＩＬ３１）によって表されるウマＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１１８から１２９の間の領域
からなる群より選択される１５Ｈ０５エピトープ結合領域の変異によって影響を受ける、請求項３８に記載の方法。
〔出願時請求項４０〕 前記ミモトープが、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列の組合せ：
１）抗体１５Ｈ０５：可変重鎖（ＶＨ）－ＣＤＲ１がＳＹＴＩＨ（配列番号１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＮＩＮＰＴＳＧＹＴＥＮＮＱＲＦＫＤ（配列番号２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＧＦＫＹＤＧＥＷＳＦＤＶ（配列番号３）、可変軽鎖（ＶＬ）－ＣＤＲ１がＲＡＳＱＧＩＳＩＷＬＳ（配列番号４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＡＳＮＬＨＩ（配列番号５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＬＱＳＱＴＹＰＬＴ（配列番号６）、
２）抗体ＺＩＬ１：可変重鎖（ＶＨ）－ＣＤＲ１がＳＹＧＭＳ（配列番号１３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＨＩＮＳＧＧＳＳＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号１４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＶＹＴＴＬＡＡＦＷＴＤＮＦＤＹ（配列番号１５）、可変軽鎖（ＶＬ）－ＣＤＲ１がＳＧＳＴＮＮＩＧＩＬＡＡＴ（配列番号１６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＳＤＧＮＲＰＳ（配列番号１７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＳＦＤＴＴＬＤＡＹＶ（配列番号１８）、
３）抗体ＺＩＬ８：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＹＡＭＳ（配列番号１９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＤＳＶＧＳＧＴＳＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号２０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＦＰＧＳＦＥＨ（配列番号２１）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＴＧＳＳＳＮＩＧＳＧＹＶＧ（配列番号２２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＹＮＳＤＲＰＳ（配列番号２３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＶＹＤＲＴＦＮＡＶ（配列番号２４）、
４）抗体ＺＩＬ９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＤＭＴ（配列番号２５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＤＶＮＳＧＧＴＧＴＡＹＡＶＡＶＫＧ（配列番号２６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＬＧＶＲＤＧＬＳＶ（配列番号２７）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＥＹＹＴＱ（配列番号２８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＲＤＴＥＲＰＳ（配列番号２９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＤＴＧＴＬＶ（配列番号３０）、
５）抗体ＺＩＬ１１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号３１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦＤＹ（配列番号３３）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＳＮＹＹＡＱ（配列番号３４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号３５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号３６）、
６）抗体ＺＩＬ６９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＡＭＫ（配列番号３７）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＴＩＮＮＤＧＴＲＴＧＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３８）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＮＡＥＳＧＣＴＧＤＨＣＰＰＹ（配列番号３９）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＫＹＹＡＱ（配列番号４０）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号４１）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＥＴＮＶ（配列番号４２）、
７）抗体ＺＩＬ９４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＦＭＳ（配列番号４３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＬＩＳＳＤＧＳＧＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号４４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＦＷＲＡＦＮＤ（配列番号４５）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＧＬＮＳＧＳＶＳＴＳＮＹＰＧ（配列番号４６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＤＴＧＳＲＰＳ（配列番号４７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＬＹＴＤＳＤＩＬＶ（配列番号４８）、
８）抗体ＺＩＬ１５４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＲＧＭＳ（配列番号４９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＹＩＲＹＤＧＳＲＴＤＹＡＤＡＶＥＧ（配列番号５０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＤＧＳＳＦＤＹ（配列番号５１）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＡＳＱＳＬＬＨＳＤＧＮＴＹＬＤ（配列番号５２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＶＳＮＲＤＰ（配列番号５３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＭＱＡＩＨＦＰＬＴ（配列番号５４）、
９）抗体ＺＩＬ１５９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＶＭＴ（配列番号５５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＮＳＥＧＳＲＴＡＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号５６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＤＩＶＡＴＧＴＳＹ（配列番号５７）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＴＬＮＲＦＹＴＱ（配列番号５８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号５９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＫＳＡＶＳＩＤＶＧＶ（配列番号６０）、
１０）抗体ＺＩＬ１７１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号６１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号６２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦＤＹ（配列番号６３）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＫＳＬＳＹＹＹＡＱ（配列番号６４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号６５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号６６）、または
１１）ＶＨまたはＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３のうちの少なくとも１つにおける１つ以上のアミノ酸残基の付加、欠失、及び／または置換によってそれぞれの親抗体１５Ｈ０５、ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、もしくはＺＩＬ１７１と相違する、１）～１０）のバリアント
のうちの少なくとも１つを含む、抗ＩＬ－３１抗体またはその抗原結合部分に結合する、請求項３８に記載のワクチン組成物。

次に、本発明を以下の非限定的な実施例によってさらに説明する。以下の実施例セクション及び図面において、名称に「１１Ｅ１２」を含む抗体について示される任意のデータは、本発明の抗体との比較を目的としている。
１．実施例１
１．１．チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞からのイヌインターロイキン３１（ｃＩＬ－３１）の産生
インターロイキン３１タンパク質は、相同種間でアミノ酸配列の保存が異なる（図１）が、Ｉ型サイトカインファミリーの他のメンバーと共通の構造アーキテクチャーを有すると考えられている（Ｂｏｕｌａｙ ｅｔ ａｌ．２００３，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ａｕｇ；１９（２）：１５９－６３２００３；Ｄｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．２００４ Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｊｕｌ；５（７）：７５２－６０）。このアップダウンバンドルトポロジーは、これらのサイトカインが共有する受容体認識の様式に重要である（Ｄｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．（前掲），Ｃｏｒｎｅｌｉｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ．２０１２ Ｅｕｒ Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．Ｊｕｎ－Ｊｕｌ；９１（６－７）：５５２－６６）。異なる種間でＩＬ－３１タンパク質配列同一性が変動するため、ある種に対し産生した抗体が、他の異なるエピトープ性質及び局所的アミノ酸組成を仮定した他の種と交差反応するか予測することは不可能である。結果的に、この課題については複数の種及び発現系に相当するＩＬ－３１タンパク質の複数形態が検討された。イヌＩＬ－３１タンパク質（ｃＩＬ－３１）を産生して、抗体ヒットの親和性及び効力を試験するための免疫原及び試薬として使用した。ＣＨＲＯＭＯＳ ＡＣＥ（人工染色体発現）（Ｃｈｒｏｍｏｓ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｕｒｎａｂｙ，Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｃｏｌｕｍｂｉａ）を用いてシステムＣＨＯ細胞内で組換え型ｃＩＬ－３１を作成し、（配列番号１５５；イヌ＿ＩＬ３１）の配列（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１５６；イヌ＿ＩＬ３１）である）を有する分泌イヌＩＬ－３１タンパク質を生成した。条件培地は４００ｍｌの細胞培養物（ＣＨＯ細胞系）から取得し、１０体積のＱＡ緩衝液（２０ｍＭトリスｐＨ ８．０、２０ｍＭ ＮａＣｌ）ｎに対し４．５時間透析した。透析した培地を０．２μｍで濾過し、ＱＡ緩衝液で予め平衡化したＳＯＵＲＣＥ（商標）Ｑカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）に１ｍｌ／分で装填した。マルチステップ直線勾配を用いてタンパク質を溶出した。ｃＩＬ－３１の大部分はフロースルー（ＦＴ）画分に残存し、少量のｃＩＬ－３１が勾配の初期に溶出した。タンパク質の同定は、ウェスタンイムノブロッティング及びトリプシン消化物の質量分析（ＭＳ）によって予め確認した。ＦＴ画分中のタンパク質を４～５倍濃縮し、４℃のリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）に対し終夜透析した。ＰＢＳへの透析後にタンパク質の安定性を調べた。４℃で数日おいた後、沈殿は観察されず、タンパク質分解も観察されなかった。Ｎ－グリコシダーゼＦを用いた脱グリコシル化実験の結果、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上で約１５ｋＤａのシングルバンドまでタンパク質が凝縮された。タンパク質濃度は、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を標準物質として用いたビシンコニン酸アッセイ（ＢＣＡアッセイ）を使用して決定した（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）。タンパク質溶液をアリコートに分割し、スナップ凍結し（液体Ｎ２）、－８０℃で保存した。
１．２．ＣＨＯ細胞からの野生型及び変異型ネコインターロイキン３１（ｆＩＬ－３１）の一過性発現
適切なエピトープ結合特性を備えた抗体の同定を補助するため、哺乳類発現系で野生型及び変異型ネコＩＬ－３１タンパク質を発現させて、親和性及び細胞ベースのアッセイで産生、精製、及び評価を行った。ＩＬ－３１上の抗体１１Ｅ１２の結合部位については過去に説明されている（Ｂａｍｍｅｒｔ，ｅｔ ａｌ．に対する米国特許第８，７９０，６５１号）。抗体１５Ｈ０５が認識するＩＬ－３１上の新規結合部位のキャラクタリゼーションについては、本明細書で説明されている。野生型の名称は全長ネコＩＬ－３１タンパク質であり、ネイティブアミノ酸残基に変化はない。変異型タンパク質は対応する抗体名（１１Ｅ１２及び１５Ｈ０５）により命名されており、（改変された場合に）各それぞれの抗体との結合に影響を及ぼすＩＬ－３１タンパク質のアミノ酸の変異を意味する。ネコＩＬ－３１ １５Ｈ０５タンパク質に必要な適切な変異の同定については、セクション１．１０で説明されている。目的は、ＩＬ－３１エピトープのアミノ酸を変更し、各それぞれの抗体に対する結合表現型の喪失を観察することであった。次に、スクリーニング中に比較を行って、新しい候補抗体が野生型タンパク質に結合し変異型に結合しないかを確認することができる。次に、新たな抗体ヒットを、抗体１１Ｅ１２または１５Ｈ０５と同じまたは類似のエピトープとの結合に応じてビニングすることができる。
発現コンストラクトを、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞内での発現用にコドン最適化し合成した。合成した遺伝子を一過性発現用にｐＤ２５２９（ＡＴＵＭベクター）内でクローンした。野生型ネコＩＬ－３１タンパク質は（配列番号１５７；ネコ＿ＩＬ３１＿野生型）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１５８；ネコ＿ＩＬ３１＿野生型）である）によって表される。変異型ネコＩＬ－３１ １１Ｅ１２タンパク質は（配列番号１６１；ネコ＿ＩＬ３１＿１１Ｅ１２＿変異型）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１６２；ネコ＿ＩＬ３１＿１１Ｅ１２＿変異型）である）によって表される。変異型ネコＩＬ－３１ １５Ｈ０５タンパク質は（配列番号１６３；ネコ＿ＩＬ３１＿１５Ｈ０５＿変異型）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１６４；ネコ＿ＩＬ３１＿１５Ｈ０５＿変異型）である）によって表される。製造業者による一過性ＣＨＯ発現用の最大力価プロトコルに従うことにより、ＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ（商標）細胞（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）内で組換え型ネコＩＬ－３１タンパク質を発現させた。形質移入から１２日後、細胞を遠心分離及び濾過して、条件培地中の分泌タンパク質を捕捉した。各コンストラクト（野生型及び変異型）に対し、１２０ｍＬの条件培地（ＣＨＯ細胞培養物から０．２μｍで濾過）を、ＮａＣｌ、５ｍＭイミダゾール、及びｐＨ７．４を加えることにより３０ｍＳ／ｃｍに調整した。各培地試料を、５ｍＭイミダゾール、２０ｍＭリン酸ナトリウム、３００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．４で平衡化した５ｍＬのＨｉｓＰｕｒコバルト樹脂（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）と合わせた。各試料及び樹脂を４℃で終夜混合した。ＢｉｏＲａｄエコノカラム（Ｅｃｏｎｃｏｌｕｍｎ）（Ｂｉｏ－Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を介して注ぐことにより、樹脂を収集（及び結合していない画分から分離）した。樹脂を５×５ｍＬの緩衝液（上記と同じ）で洗浄し、次いで同じ緩衝液中の５×５ｍＬの５００ｍＭイミダゾールで溶出した。画分をＳＤＳ－ＰＡＧＥによって評価した。濃度は、標準的な方法を用いてＢＣＡタンパク質アッセイによって測定した。
１．３．Ｅ．ｃｏｌｉからのネコインターロイキン３１（ｆＩＬ－３１）の産生
アッセイ試薬として、及びネコの掻痒応答を誘導するｉｎ ｖｉｖｏチャレンジ研究に使用するため、Ｅ．ｃｏｌｉ発現宿主内で組換えネコＩＬ－３１タンパク質を生成した。Ｅ．ｃｏｌｉ内での最適な発現用にネコＩＬ－３１に相当する遺伝子を合成した。検出及び精製用にＮ末端側６－Ｈｉｓタグを含む全長ネコＩＬ－３１遺伝子を有する発現コンストラクトを作成した。このネコＩＬ－３１タンパク質は（配列番号１５９；ネコ＿ＩＬ－３１＿Ｅ＿ｃｏｌｉ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１６０；ネコ＿ＩＬ－３１＿Ｅ＿ｃｏｌｉ）である）によって表される。配列確認済みプラスミドを使用してＥ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１ ＤＥ３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を形質転換し、次にタンパク質を発現させた。
Ｅ．ｃｏｌｉからの細胞ペースト（２６２．３ｇ）を以下のようにして溶解した：細胞ペーストを５００ｍＬの５０ｍＭトリスｐＨ８に再懸濁させ、ステンレスメッシュフィルターで濾過して粒子を除去し、次にマイクロフルイダイザーに１３００ｐｓｉで２回通過させることによって溶解した。ライセート（約１２００ｍＬの体積）を４つのボトルに分割し、１０℃で２０分間、１２，０００ｇで遠心分離した。上清をデカントし廃棄した。各ペレットを、３００ｍＬの５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．５％トリトンＸ－１００、ｐＨ９．０に懸濁させることにより洗浄し、次いで１０℃で５０分間、１２，０００ｇで遠心分離した。上清をデカントし廃棄した。洗浄したペレットは、フォールディング及び単離を行うまで－２０℃で保存した。
単離の前に、ペレットの１つを水で洗浄して残留洗剤を除去し、次いで４℃で２０分間、１０，０００ｇで遠心分離した。再び上清をデカントした。最後に、洗浄したペレットを６０ｍＬの５０ｍＭリン酸ナトリウム、３００ｍＭ ＮａＣｌ、６Ｍグアニジン－ＨＣｌ、５ｍＭイミダゾール、ｐＨ７．４に溶解した。ペレットを室温でおよそ２５分間混合した後、再び４℃で２０分間、１０，０００ｇで遠心分離した。このときは上清をデカントし、これをさらなる処理のために保管した。ペレット（水に再懸濁させ元の体積にしたもの）をＳＤＳ－ＰＡＧＥ専用に確保した。粗製ＩＭＡＣ（固定化金属親和性クロマトグラフィー）を実施して、フォールディングの前に純度を高めた。この場合において、１５ｍＬのＮｉ－ＮＴＡ Ｓｕｐｅｒｆｌｏｗ（Ｑｉａｇｅｎ Ｉｎｃ，Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ，ＭＤ（カタログ番号３０４５０、同じ緩衝液中で予め平衡化したもの））を清澄化した上清に添加し、室温でおよそ９０分間混合した。結合していない画分をデカントし、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ用に確保した。ＩＭＡＣ樹脂を５ｍＭイミダゾール、５０ｍＭリン酸ナトリウム、３００ｍＭ ＮａＣｌ、６Ｍグアニジン－ＨＣｌ、ｐＨ７．４（溶解バッファーと同じもの）で洗浄した。樹脂を２００ｍＭイミダゾール、５０ｍＭリン酸ナトリウム、３００ｍＭ ＮａＣｌ、６Ｍグアニジン－ＨＣｌ、ｐＨ７．４で溶出した（最初は７．５ｍＬ、次いで１５ｍＬの倍数で行い、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイによりタンパク質溶出をモニターした）。タンパク質を含む溶出画分（Ｂｒａｄｆｏｒｄに従う）をさらなる処理用にプールした（１２５ｍＬ）。
ＩＬ－３１タンパク質を以下のようにしてフォールディングした。ジチオトレイトールを添加することによりＩＬ－３１を最終的に１０ｍＭまで還元し、室温で２時間混合した。次いで希釈した試料を、２５００ｍＬ（２０倍体積）のＰＢＳ＋１Ｍ ＮａＣｌに滴下して迅速に撹拌しながら希釈した。この時点では、尿素の理論的濃度は約０．４Ｍであったと考えられる。残りの尿素は、３回交換したＰＢＳ（各４Ｌ）に対する透析により、４℃で終夜にわたりゆっくり除去した。透析後、試料を０．２μｍで濾過して、任意のフォールディングしていない／沈殿したタンパク質を除去した。
第２ラウンドのＩＭＡＣにより、今回は直線勾配溶出を用いて、試料をさらに精製した。１５ｍＬのＮｉ－ＮＴＡ Ｓｕｐｅｒｆｌｏｗ樹脂を試料に添加し、４℃で終夜（懸濁撹拌棒で）撹拌することにより、バッチ式で結合した。再度、結合していない画分をデカントし、これを確保した。Ｎｉ－ＮＴＡ Ｓｕｐｅｒｆｌｏｗ樹脂をＸＫ１６カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｒｌｂｏｒｏｕｇｈ，ＭＡ）に充填し、ＡＫＴＡブランドのクロマトグラフィーシステム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｒｌｂｏｒｏｕｇｈ，ＭＡ）に接続した。次いでカラムを５０ｍＭトリス、３００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ８．２で洗浄し、０～５００ｍＭイミダゾールの１５０ｍＬ直線勾配により、各々を洗浄緩衝液中で溶出した。画分をＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分析した。十分な純度のＩＬ－３１を有する画分をプールし、４℃で終夜にわたり、３回交換したＰＢＳ（各２Ｌ）に対する透析によって緩衝液を再度交換した。最後に、フォールディング及び精製した試料を透析から収集し、滅菌濾過し、濃度を測定し、分取し、ドライアイス／イソプロパノール浴中でスナップ凍結し、－８０℃で保存した。
１．４．表面プラズモン共鳴を用いて抗ＩＬ－３１抗体のＩＬ－３１に対する親和性を決定する方法
候補ｍＡｂがイヌ及びネコのＩＬ－３１に結合する親和性を、Ｂｉａｃｏｒｅシステム（Ｂｉｏｃｏｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ），Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いて決定した。抗体を表面に固定化する際に生じ得る異なる表面調製に関連する親和性の差を回避するため、ＩＬ－３１を表面に直接結合体化させる戦略が採用された。固定化は、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）／１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）化学を用いて５μｇ／ｍＬのＩＬ－３１をアミンカップリングすることによって得た。チップをエタノールアミンでクエンチし、固定化されたＩＬ－３１に結合した全ての候補ｍＡｂとの親和性を評価した。全ての曲線を１：１モデルに適合させた。１×１０－１１Ｍ（１Ｅ－１１Ｍ）未満の親和性定数（ＫＤ）を装置による検出の定量下限未満とする。親和性測定の結果を本明細書に記載する。
１．５．イヌ及びネコのマクロファージ細胞のイヌ及びネコＩＬ－３１誘導性ｐＳＴＡＴ３シグナル伝達の阻害によって評価される抗ＩＬ－３１抗体の効力を定量する方法
阻害活性を有する候補を同定するため、イヌまたはネコいずれかの細胞ベースアッセイで、抗体のＩＬ－３１媒介性ＳＴＡＴ３リン酸化に影響を及ぼす能力を評価した。イヌＤＨ－８２（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－１０３８９（商標））またはネコＦＣＷＦ４マクロファージ様細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－２７８７）でＳＴＡＴ３リン酸化を定量したＤＨ８２及びＦＣＷＦ４細胞を、それぞれ１０ｎｇ／ｍＬのイヌインターフェロンガンマ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）で２４時間、または１２５ｎｇ／ｍＬのネコインターフェロンガンマ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）で９６時間プライミングして、受容体発現を増加させた。いずれの細胞タイプも、ＩＬ－３１及びｍＡｂ処置の前の２時間、血清飢餓状態にした。２つの独立した方法を用いて、全ての候補ｍＡｂについて、１μｇ／ｍＬイヌまたは０．２μｇ／ｍＬネコにおけるＩＬ－３１誘導性ＳＴＡＴ３リン酸化の阻害能力を評価した。またアッセイは、イヌ及びネコのサイトカインの交差反応性と、抗体における両方の種のシグナル伝達の阻害能力の交差機能性とを実証するためにも行った。複合体形成を確実に行うため、細胞を刺激する前にｍＡｂ及びＩＬ－３１サイトカインの１時間の共インキュベートを完了させた。ＩＬ－３１細胞刺激を５分間行った。ＳＴＡＴ３リン酸化は、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ ＳｕｒｅＦｉｒｅ ＵＬＴＲＡ（商標）技術（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を用いて測定した。抗体の濃度及び純度が不明の場合は、ハイブリドーマ上清を１ｍｇ／ｍｌのイヌＩＬ－３１または０．２ｍｇ／ｍｌのネコＩＬ－３１と共に１時間共インキュベートした後、ハイブリドーマ上清のＳＴＡＴ３リン酸化阻害能力を定性的に測定した。これらのアッセイにおける個々のモノクローナル抗体のＩＬ－３１媒介性ＳＴＡＴ３リン酸化阻害能力によって定義されるモノクローナル抗体の効力は、抗体選択をさらに進める上でのキーとなる選択基準とみなされた。効力という用語は、これらのアッセイから計算されたＩＣ５０値を意味し、ＩＬ－３１によって誘導されるシグナル伝達が最大値の半分まで減少する抗体の濃度である。本明細書で説明されている効力の増加は、ＩＣ５０値の低下と相関する。
１．６．イヌ及びネコのインターロイキン３１を認識するマウス及びイヌのモノクローナル抗体の同定
抗体を同定する目的で、マウス及びイヌを組換え型イヌＩＬ－３１（配列番号１５５）で免疫化した。酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いて免疫動物の血清抗体価を定量した。イヌまたはネコのＩＬ－３１（５０ｎｇ／ウェル）をポリスチレンマイクロプレートに固定化し、捕捉抗原として使用した。免疫動物からの血清を０．０５％ ｔｗｅｅｎ－２０（ＰＢＳＴ）を含むリン酸緩衝食塩水で希釈した。抗ＩＬ－３１抗体の存在を、適切なＨＲＰ標識二次抗体で検出した。発色基質（ＳｕｒｅＢｌｕｅ Ｒｅｓｅｒｖｅ ＴＭＢ １－Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ Ｍｉｃｒｏｗｅｌｌ Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（ＫＰＬ，Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ））を添加し、室温（ＲＴ）で１０分間インキュベートした後、１００μＬの０．１Ｎ ＨＣｌを添加して反応を停止した。各ウェルの吸光度を４５０ｎｍの光学密度（ＯＤ）で定量した。ＥＬＩＳＡを用いて、イヌ及びネコのＩＬ－３１への結合能力によって抗体を選択した。場合によっては、ネコＩＬ－３１タンパク質の変異型形態を捕捉抗原として用いたＥＬＩＳＡを使用して、選択時にさらなるキャラクタリゼーションを実施した。ＩｇＧの可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）に相当するＲＮＡ転写物の配列分析のために、所望の結合及び阻害特性を備えた抗体を産生する細胞を選択した。
マウス抗体の場合、単一応答性ＣＦ－１マウスからのドナー脾細胞を融合に使用し、ＥＬＩＳＡにより、ハイブリドーマ上清においてイヌまたはネコのＩＬ－３１タンパク質のいずれかに結合する抗体をスクリーニングした。これにより、両方の種のＩＬ－３１に対しナノモル以下の親和性を有する単一のマウス抗体Ｍｕ－１５Ｈ０５が同定された（図２Ａ）。マウス抗ＩＬ－３１ １５Ｈ０５をさらにサブクローニングして均質な抗体を産生するハイブリドーマを生成し、可変重鎖及び軽鎖をシークエンシングした。抗体１５Ｈ０５について決定したマウス抗ＩＬ－３１可変配列は以下の通りであり、１５Ｈ０５可変重鎖（配列番号６７；ＭＵ－１５Ｈ０５－ＶＨ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号６８；ＭＵ－１５Ｈ０５－ＶＨ）である）、及び１５Ｈ０５可変軽鎖（配列番号６９；ＭＵ－１５Ｈ０５－ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列（配列番号７０；ＭＵ－１５Ｈ０５－ＶＬ）である）である。
マウス抗体１５Ｈ０５に加えて、さらに、過去にＢａｍｍｅｒｔ，ｅｔ ａｌ．に対する米国特許第８，７９０，６５１号で説明されているさマウス由来抗体１１Ｅ１２について検討した。本明細書では、抗体１１Ｅ１２がイヌ及びネコ両方のＩＬ－３１タンパク質に高親和性で結合する能力を示すデータを記載する。１１Ｅ１２はネコＩＬ－３１に結合することができるため、この抗体はネコ化とネコにおける治療使用の潜在可能性とにおいて好適な候補となった。抗体１１Ｅ１２について以前に決定したマウス抗ＩＬ－３１可変配列は以下の通りであり、１１Ｅ１２可変重鎖（配列番号７１；ＭＵ－１１Ｅ１２－ＶＨ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号７２；ＭＵ－１１Ｅ１２－ＶＨ）である）、及び１１Ｅ１２可変軽鎖（配列番号７３；ＭＵ－１１Ｅ１２－ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号７４；ＭＵ－１１Ｅ１２－ＶＬ）である）である。
ワクチン接種後に抗ＩＬ－３１力価が上昇したイヌを、所望の表現型を備えた抗体を産生するＢ細胞集団の分析用に選択した。Ｂ細胞は、さらなる分析のためにＰＢＭＣ、骨髄、脾臓、またはリンパ節から誘導した。単一のＢ細胞を個々のウェルに分離し、ＵＳ２０１２／０００９６７１ Ａ１、ＵＳ２０１６／０２５２４９５ Ａ１、ＵＳ９，１８８，５９３、ＷＯ２０１５／１７６１６２ Ａ９、及びＷＯ２０１６／１２３６９２ Ａ１で説明されている方法を用いて、イヌＩＬ－３１（ＡｂＣｅｌｌｅｒａ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＢＣ）の野生型、１１Ｅ１２変異型、及び１５Ｈ０５変異型形態に結合可能な分泌ＩｇＧが存在するかアッセイした。
このスクリーニング戦略は、ＩＬ－３１タンパク質の共受容体複合体を介した結合及びシグナル伝達に不可欠となるＩＬ－３１タンパク質の既知の領域に基づくものである。スクリーニング用のこれらの変異型タンパク質の選択については、本出願のセクション１．２で説明されている。ＩｇＧの可変重鎖及び軽鎖ドメインのシークエンシングは、個々の候補Ｂ細胞からのＲＴ－ＰＣＲ反応後に行った。これらのスクリーニングによって９つのイヌ抗体が同定され、これらをさらなる評価用に選択した。これらのイヌ抗ＩＬ－３１可変配列は、以下の通りであり、ＺＩＬ１可変重鎖（配列番号７５；ＣＡＮ－ＺＩＬ１＿ＶＨ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号７６；ＣＡＮ－ＺＩＬ１＿ＶＨ）である）、ＺＩＬ１可変軽鎖（配列番号７７；ＣＡＮ－ＺＩＬ１＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号７８；ＣＡＮ－ＺＩＬ１＿ＶＬ）である）；ＺＩＬ８可変重鎖（配列番号７９；ＣＡＮ－ＺＩＬ８＿ＶＨ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号８０；ＣＡＮ－ＺＩＬ８＿ＶＨ）である）、ＺＩＬ８可変軽鎖（配列番号８１；ＣＡＮ－ＺＩＬ８＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号８２；ＣＡＮ－ＺＩＬ８＿ＶＬ）である）；ＺＩＬ９可変重鎖（配列番号８３；ＣＡＮ－ＺＩＬ９＿ＶＨ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号８４；ＣＡＮ－ＺＩＬ９＿ＶＨ）である）、ＺＩＬ９可変軽鎖（配列番号８５；ＣＡＮ－ＺＩＬ９＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号８６；ＣＡＮ－ＺＩＬ９＿ＶＬ）である）；ＺＩＬ１１可変重鎖（配列番号８７；ＣＡＮ－ＺＩＬ１１＿ＶＨ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号８８；ＣＡＮ－ＺＩＬ１１＿ＶＨ）である）、ＺＩＬ１１可変軽鎖（配列番号８９；ＣＡＮ－ＺＩＬ１１＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号９０；ＣＡＮ－ＺＩＬ１１＿ＶＬ）である）；ＺＩＬ６９可変重鎖（配列番号９１；ＣＡＮ－ＺＩＬ６９＿ＶＨ）（これに対応するはヌクレオチド配列（配列番号９２；ＣＡＮ－ＺＩＬ６９＿ＶＨ）である）、ＺＩＬ６９可変軽鎖（配列番号９３；ＣＡＮ－ＺＩＬ６９＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号９４；ＣＡＮ－ＺＩＬ６９＿ＶＬ）である）；ＺＩＬ９４可変重鎖（配列番号９５；ＣＡＮ－ＺＩＬ９４＿ＶＨ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号９６；ＣＡＮ－ＺＩＬ９４＿ＶＨ）である）、ＺＩＬ９４可変軽鎖（配列番号９７；ＣＡＮ－ＺＩＬ９４＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号９８；ＣＡＮ－ＺＩＬ９４＿ＶＬ）である）；ＺＩＬ１５４可変重鎖（配列番号９９；ＣＡＮ－ＺＩＬ１５４＿ＶＨ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１００；ＣＡＮ－ＺＩＬ１５４＿ＶＨ）である）、ＺＩＬ１５４可変軽鎖（配列番号１０１；ＣＡＮ－ＺＩＬ１５４＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１０２；ＣＡＮ－ＺＩＬ１５４＿ＶＬ）である）；ＺＩＬ１５９可変重鎖（配列番号１０３；ＣＡＮ－ＺＩＬ１５９＿ＶＨ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１０４；ＣＡＮ－ＺＩＬ１５９＿ＶＨ）である）、ＺＩＬ１５９可変軽鎖（配列番号１０５；ＣＡＮ－ＺＩＬ１５９＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１０６；ＣＡＮ－ＺＩＬ１５９＿ＶＬ）である）；ＺＩＬ１７１可変重鎖（配列番号１０７；ＣＡＮ－ＺＩＬ１７１＿ＶＨ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１０８；ＣＡＮ－ＺＩＬ１７１＿ＶＨ）である）、ＺＩＬ１７１可変軽鎖（配列番号１０９；ＣＡＮ－ＺＩＬ１７１＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１１０；ＣＡＮ－ＺＩＬ１７１＿ＶＬ）である）である。
さらなるキャラクタリゼーション用に選択した上記の９つのモノクローナル抗体は、本明細書の他の箇所、図面、または特許請求の範囲でＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ８、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、及びＺＩＬ１７１と称されることがある。
１．７．組換え型のキメラ型抗体及び完全イヌ抗体の構築
抗体可変ドメインは、抗原結合を担当する。完全可変ドメインをそれぞれの定常領域に移植した場合、抗体のＩＬ－３１免疫原への結合能力はほとんどまたは全く影響を受けないことが予想される。重鎖及び軽鎖可変領域の正しい配列が同定されたことを同時に確認し、均質な材料を生成するため、発現ベクターを、哺乳類発現系で組換え型のキメラ型抗体または完全イヌ抗体を生成するように設計した。ここで説明するキメラ型抗体は、ネコまたはイヌのＩｇＧ分子のそれぞれの重鎖及び軽鎖の定常領域に移植された宿主種抗体からの可変配列（ＣＤＲ及びフレームワークの両方）からなる（例えば、マウス可変配列：イヌ定常領域はマウス：イヌキメラ型と称される）。ここで説明する完全イヌ抗体は、イヌＩｇＧ分子のそれぞれの重鎖及び軽鎖の定常領域に移植された宿主種抗体（イヌ）からの可変配列（ＣＤＲとフレームワークの両方）からなる。選択した抗体の可変重鎖（ＶＨ）配列及び可変軽鎖（ＶＬ）配列のために合成ＤＮＡ配列を構築した。これらの配列は、ユニークな制限エンドヌクレアーゼ部位と、Ｋｏｚａｋコンセンサス配列と、哺乳類細胞系からの組換え型抗体の発現及び分泌を促進するためのＮ末端側分泌リーダーとを含む。
マウス：ネコキメラ型については、各それぞれの可変領域を、ネコＩｇＧ重鎖定常領域（配列番号１７３；ネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１７４；ネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿１）である）、または軽鎖定常領域（配列番号１７５；ネコ＿ＬＣ＿カッパ＿Ｇ＿マイナス）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１７６；ネコ＿ＬＣ＿カッパ＿Ｇ＿マイナス）である）のいずれかを含む哺乳類発現プラスミド内でクローンした。マウス：イヌキメラ型抗体または完全イヌ抗体については、各々のマウスまたはイヌの可変領域を、イヌＩｇＧ重鎖定常領域（配列番号１７７：イヌ＿ＨＣ＿６５＿１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１７８；イヌ＿ＨＣ＿６５＿１）である）または軽鎖定常領域（配列番号１７９；イヌ＿ＬＣ＿カッパ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１８０；イヌ＿ＬＣ＿カッパ）である）のいずれかを含む哺乳類発現プラスミド内でクローンした。標準的な方法を用いて、ＣＭＶプロモーターの制御下で各々の重鎖及び軽鎖をコードするプラスミドをＨＥＫ２９３細胞に同時形質移入した。発現から６日後、タンパク質精製の標準的方法に従ってＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕｒｅプロテインＡ樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を用いて、５０ｍｌの一過的に形質移入したＨＥＫ２９３ＦＳ細胞上清からキメラ型ｍＡｂを精製した。溶出画分をプールし、１０，０００名目ＭＷカットオフＮａｎｏｓｅｐ Ｏｍｅｇａ遠心デバイス（Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐ．，Ｐｏｒｔ Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＮＹ）を用いて約５００μｌまでのウシュク氏、１×ＰＢＳ、ｐＨ７．２中４℃で終夜透析し、さらなる使用のために４℃で保存した。以下、選択組換え型抗体の親和性及び細胞ベース効力について説明する。
図２は、ｂｉａｃｏｒｅを用いてマウス起源由来のＣＤＲを有する抗体の親和性を詳述している。図２ａは、マウス抗ＩＬ－３１抗体１１Ｅ１２及び１５Ｈ０５の親和性、ならびにネコ及びイヌ両方のＩＬ－３１表面に対するネコ及びイヌのキメラ型形態の対応する親和性を示している。これらの観察結果から、両方のマウス抗体の正しい配列が確認され、そしてキメラ型への変換により、マウス親抗体と比較して同等またはそれ以上の親和性を備えた抗体が得られることが示される。ただし、マウス：ネコ１５Ｈ０５キメラ型は例外で、キメラ型形態に変換した結果、両方のＩＬ－３１種に対するいくらかの親和性が喪失した。
抗体１１Ｅ１２及び１５Ｈ０５の完全マウス及びキメラ型形態についても、セクション１．５で説明されているイヌ及びネコの細胞アッセイにおける活性を試験した。図３は、これらのアッセイの結果を示している。マウス抗体１１Ｅ１２及び１５Ｈ０５について、シグナル伝達を刺激するためにイヌ及びネコ両方のＩＬ－３１を用いてイヌ及びネコの細胞タイプに対する活性を試験した。両方のマウス抗体の効力は、ネコサイトカインを用いたイヌ及びネコ両方の細胞に対し同等であったが、ネコＦＣＷＦ４細胞におけるネコＩＬ－３１に対する１５Ｈ０５は例外で、ＩＣ５０のわずかな増加を示している。マウス１５Ｈ０５はネコ及びイヌ両方の細胞でイヌＩＬ－３１シグナル伝達を遮断可能であり、イヌアッセイでの効力がわずかに高かった。これらの結果は、これらの抗体が認識するそれぞれのエピトープが、イヌ及びネコ両方のＩＬ－３１に存在することと、これらの抗体の結合が、両方の種からの関連細胞系における受容体媒介性細胞シグナル伝達を中和可能であることとを示している。
図３は、両方の細胞アッセイでの選択キメラの効力についても記載している。ネコ効力アッセイにおいて、ネコ抗体からネコ及びイヌのキメラ型への変換がネコＩＬ－３１に対する効力に及ぼす影響は最小限であった（ＩＣ５０範囲１．１５～３．４５μｇ／ｍｌ）。これらのキメラ型をイヌＤＨ８２細胞系でネコＩＬ－３１シグナル伝達に対し試験したときにも同様の結果が観察され、１５Ｈ０５マウス：イヌキメラ型においてわずかな効力の増加（ＩＣ５０＝０．７１μｇ／ｍｌ）が観察された。概して、イヌ及びネコ両方の細胞タイプにおいてイヌＩＬ－３１に対するＩＣ５０値が増加した。マウス：ネコ１５Ｈ０５キメラ型は、このアッセイ形式ではマウス：イヌ形態と比較してわずかに効力が弱かった（ＩＣ５０ １２．４９μｇ／ｍｌに対し２８．６１μｇ／ｍｌ）。マウス抗体での観察結果と整合して、イヌ及びネコのキメラ型形態への変換による効力の変化は最小限であった。
上記の免疫化したイヌの単一のＢ細胞から同定した抗体を、これらの可変ドメイン配列を同定した後に組換え型ＩｇＧタンパク質として構築した。これらの可変ドメインをイヌ重鎖Ｆｃ（６５＿１アイソタイプ）に移植した結果、組換え型の完全イヌ抗体が生成された。関心対象となったのは、野生型ネコＩＬ－３１に結合する追加的なイヌ抗体を同定し、どのイヌ抗体のネコＩＬ－３１ １５Ｈ０５変異型との結合が減少するかを同定することであった（すなわち、１５Ｈ０５エピトープを対象とする）。この代替供給源（イヌｖｓマウス）から得られたこれらの抗体は、１５Ｈ０５エピトープを認識し、そのため選択対象となる異なる物理的特性を備えた抗体の多様性を高める追加的なパラトープ（ＩＬ－３１タンパク質を認識する抗体の部分、ＣＤＲを含む）を提供する。
図４は、ＥＬＩＳＡ及びＢｉａｃｏｒｅ両方の方法を用いて、これらの組換え型イヌ抗体の様々なタンパク質との結合において得られた結果を示している。間接ＥＬＩＳＡ法では、野生型及びネコＩＬ－３１ １５Ｈ０５変異型タンパク質に対する抗体結合を評価した。９つのイヌモノクローナル抗体（ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ８、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、及びＺＩＬ１７１）全てが野生型ネコＩＬ－３１に結合可能であり、結合はｍＡｂ １５Ｈ０５エピトープ領域の変異による影響を受けており、これらの同定に使用した最初のスクリーニング中に決定した結合表現型が正しいことが確認された。一方、１１Ｅ１２抗体は野生型ネコＩＬ－３１に結合し、その結合は、図４のデータで裏付けられているように１５Ｈ０５エピトープ領域の変異による影響を受けなかった。結合を確認するため、イヌ、ネコ、ウマ、ヒト、ネコ１５Ｈ０５変異型、及びネコ１１Ｅ１２変異型のＩＬ－３１タンパク質を表面として用い、そして抗体の単一試験濃度を用いてｂｉａｃｏｒｅ分析を実施した。ＥＬＩＳＡでの観察結果と同様に、全ての試験抗体は野生型ネコＩＬ－３１に結合した。このセクションで先に説明したデータと一致して、マウス抗体１１Ｅ１２及び１５Ｈ０５の両方がイヌ及びネコのＩＬ－３１表面に結合した。３つの追加的な抗体、ＺＩＬ６９（部分的イヌ結合）、ＺＩＬ９４、及びＺＩＬ１５９が、この二重結合特性を有することが示された。この９つの完全イヌ抗体の群からは、ＺＩＬ１及びＺＩＬ９のみがウマＩＬ－３１と交差反応した。注目すべきことに、抗体１５Ｈ０５は、本明細書でアッセイした全ての抗体の中でイヌ、ネコ、及びウマのＩＬ－３１に結合した唯一の抗体であり、３種にまたがるいくらかのレベルのエピトープ保存を示している。これに対し、本明細書で説明されている抗体でヒトＩＬ－３１に結合したものはない。追加的なｂｉａｃｏｒｅ表面を使用して、諸抗体において野生型ネコＩＬ－３１ならびに１５Ｈ０５エピトープの変異（１５Ｈ０５変異型）または１１Ｅ１２エピトープの変異（１１Ｅ１２変異型）を伴った２つのタンパク質との結合に差があることを示すＥＬＩＳＡの観察結果を検証した。予想された通り、対照マウス抗体１１Ｅ１２は、１５Ｈ０５ ＩＬ－３１変異型には結合したが、エピトープの変異により、１１Ｅ１２ ＩＬ－３１変異型には結合しなかった。同様に、マウス１５Ｈ０５は、１５Ｈ０５変異型には結合しなかったが、１１Ｅ１２ ＩＬ－３１変異型との結合は保持しており、これら２つの抗体が認識する別々の結合エピトープをさらに区別した。ＥＬＩＳＡの結果と一致して、（部分的に影響を受けた）ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、及びＺＩＬ１７１を除き、全ての完全イヌ抗体は１５Ｈ０５変異による影響を受けた。結果の相違は、２つのアッセイの方法論の違いに起因するものと考えられる。加えて、３つの抗体の結合は、１１Ｅ１２変異型による影響も受けることが示された（ＺＩＬ１（部分的な効果）、ＺＩＬ８、及びＺＩＬ１５９）。これらの結果は、これらの抗体が認識するエピトープが、ＩＬ－３１タンパク質の両方の領域の変化によって影響を受けることを示すものである。まとめると、これらの結果は、抗体１５Ｈ０５が認識するネコＩＬ－３１タンパク質上の領域との結合を共有するイヌＢ細胞由来の９つの抗体のキャラクタリゼーションを支持するものである。
１．８．マウス１１Ｅ１２及び１５Ｈ０５抗体のネコ化ならびに結合親和性の最適化
抗薬物抗体（ＡＤＡ）の生成は、モノクローナル抗体を含めた任意の生物治療用タンパク質の有効性の喪失と関連する可能性がある。網羅的な文献評価により、モノクローナル抗体の種分化はｍＡｂが免疫原性になる傾向を低減し得ることが示されているが、免疫原性の完全ヒトｍＡｂ及び非免疫原性のキメラｍＡｂの例も見出され得る。本明細書で提供する抗ＩＬ－３１モノクローナル抗体のＡＤＡ形成に関連するリスクを軽減する一助とするため、ネコ化戦略が採用された。このネコ化戦略は、ＣＤＲ移植に最も適切なネコ生殖系列抗体配列を同定することに基づく。可変重鎖及び軽鎖両方において全ての利用可能なネコ生殖系列配列を詳細に分析した後に、マウスｍＡｂに対する相同性に基づいて生殖系列候補を選択し、マウスｍＡｂ前駆細胞からのＣＤＲを使用してネイティブネコＣＤＲを置き換えた。目的は、ネコ抗体フレームワークを用いて高い親和性及び細胞ベース活性を保持して、ｉｎ ｖｉｖｏでの免疫原性の潜在可能性を最小限に抑えることであった。ネコ化ｍＡｂを発現させ、細胞ベースアッセイでネコ化ｍＡｂのネコＩＬ－３１に対する親和性と効力とをキャラクタリゼーションした。ネコ化抗体がＩＬ－３１への結合能力を喪失した場合、系統的な精査を行って、１）機能喪失の原因となる鎖と、２）機能喪失の原因となるフレームワークと、３）機能喪失の原因となるアミノ酸（複数可）とを同定した。
ｍＡｂ １１Ｅ１２及び１５Ｈ０５のネコ化可変重鎖及び軽鎖に相当する合成ヌクレオチドコンストラクトを作製した。各々の可変鎖をそれぞれのネコ重鎖またはカッパ定常領域を含むプラスミド内でサブクローンした後、抗体を発現させるため、プラスミドをＨＥＫ２９３細胞に同時形質移入した。抗体１１Ｅ１２のネコ化における最初の試みは、ＶＬフレームワーク（配列番号１１３；ＦＥＬ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１１４；ＦＥＬ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ１）である）及び（配列番号１１５；ＦＥＬ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ２）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１１６；ＦＥＬ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ２）である）と別個に対形成した単一のネコＶＨフレームワーク（配列番号１１１；ＦＥＬ＿１１Ｅ１２＿ＶＨ１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１１２；ＦＥＬ＿１１Ｅ１２＿ＶＨ１）である）の利用に焦点を絞って、それぞれネコ１１Ｅ１２ １．１及びネコ１１Ｅ１２ １．２を形成することであった。この種分化の試みにより、マウス形態の抗体と比較すると、ネコ及びイヌ両方のＩＬ－３１タンパク質に対するネコ１１Ｅ１２ １．１の親和性が喪失し、ネコ１１Ｅ１２ １．２ ｍＡｂの結合は完全に喪失した（図２ｂ）。これらの種分化抗体の効力を、ネコＩＬ－３１サイトカインを用いたイヌＤＨ８２及びネコＦＣＷＦ４細胞アッセイで試験した。ネコ化１１Ｅ１２ １．１のネコＩＬ－３１に対する効力は、ネコＦＣＷＦアッセイにおいて、マウスバージョンの抗体と比較するとおよそ２倍減少した。ネコ化１１Ｅ１２ １．２における親和性喪失と一致して、この抗体における細胞効力の完全な喪失が観察された（図３）。ｍＡｂ １１Ｅ１２オーソログのイヌ化中における過去の経験に基づき、同様の戦略をとってネコ化に対する親和性喪失の回復を試みた（Ｂａｍｍｅｒｔ， ｅｔ ａｌ．に対する米国特許第８，７９０，６５１号）。ネコ１１Ｅ１２ ＶＬ１のネコ化フレームワーク２（ＦＷ２）領域を（配列番号７３；Ｍｕ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号７４；Ｍｕ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ）である）からのマウスＦＷ２で置き換えて、ネコ１１Ｅ１２ ＶＬ１ ＦＷ２を生成した。加えて、ネコＶＬの４６位における単一置換（Ｋ４６Ｑ）を実施して、（配列番号１１９；ＦＥＬ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ１＿Ｋ４６Ｑ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２０；ＦＥＬ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ１＿Ｋ４６Ｑ）である）を生成した。上記のＶＬとＦｅｌ＿１１Ｅ１２＿ＶＨ１との対形成により、それぞれネコ１１Ｅ１２ １．１ ＦＷ２及びネコ１１Ｅ１２ １．１ Ｋ４６Ｑが得られた。ＦＷ２の変更によってネコＩＬ－３１タンパク質に対するネコ１１Ｅ１２ １．１ ＦＷ２の親和性が回復し、その結果、マウス及びキメラ型形態と同等のＫＤが得られた（図２Ａ及び２Ｂ）。ただし、これらの変更により、イヌＩＬ－３１タンパク質に対するネコ１１Ｅ１２ １．１ ＦＷ２の親和性に有害な影響がもたらされた。このことは、抗体１１Ｅ１２におけるネコ及びイヌのサイトカイン上のこのエピトープへの結合能力の性質に明確な違いがあることを示している。ネコ１１Ｅ１２ １．１ Ｋ４６Ｑの単一アミノ酸置換は、この抗体の親和性に影響を及ぼすことができなかった。抗体１１Ｅ１２ １．１ ＦＷ２のネコＩＬ－３１タンパク質に対する親和性が増加したことにより、イヌＤＨ８２アッセイでネコサイトカインに対する効力が増加した（図３）。
マウス抗体１５Ｈ０５に対するネコ化の試みは、合計９つのネコ化ｍＡｂにおける３つのネコＶＨフレームワークと３つのネコＶＬフレームワークとの組合せに焦点を絞った。ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１（配列番号１２１；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２２；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）である）を、（配列番号１２７；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２８；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１）である）、（配列番号１２９；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ２）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１３０；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ２）である）、及び（配列番号１３１；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ３）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１３２；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ３）である）と組み合わせて、それぞれネコ１５Ｈ０５ １．１、ネコ１５Ｈ０５ １．２、及びネコ１５Ｈ０５ １．３を作成した。ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ２（配列番号１２３；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ２）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２４；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ２）である）を、（配列番号１２７；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２８；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１）である）、（配列番号１２９；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ２）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１３０；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ２）である）、及び（配列番号１３１；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ３）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１３２；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ３）である）と組み合わせて、それぞれネコ１５Ｈ０５ ２．１、ネコ１５Ｈ０５ ２．２、及びネコ１５Ｈ０５ ２．３を作成した。ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ３（配列番号１２５；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ３）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２６；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ３）である）を、（配列番号１２７；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２８；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１）である）、（配列番号１２９；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ２）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１３０；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ２）である）、及び（配列番号１３１；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ３）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１３２；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ３）である）と組み合わせて、それぞれネコ１５Ｈ０５ ３．１、ネコ１５Ｈ０５ ３．２、及びネコ１５Ｈ０５ ３．３を作成した。抗体１１Ｅ１２における観察結果と同様に、抗体１５Ｈ０５のネコ化の最初の試みにより、マウス１５Ｈ０５と比較するとネコＩＬ－３１タンパク質に対する親和性が喪失し、１５Ｈ０５マウスネコキメラ型と比較すると中立的影響がもたらされた（図２Ａ及び２Ｃ）。ネコ化抗体１１Ｅ１２のイヌＩＬ－３１との結合における観察結果と同様に、ネコ１５Ｈ０５のある特定のＶＨフレームワークとＶＬフレームワークとの組合せは、イヌＩＬ－３１に対する親和性に中立的～肯定的な影響を及ぼした（図２Ｃ：ネコ１５Ｈ０５ １．１、２．２、及び３．２を参照）。
ネコ化抗体１５Ｈ０５の親和性を回復する試みにおいて、各ネコ化１５Ｈ０５ ＶＨをマウス１５Ｈ０５ ＶＬと対形成してヘテロキメラ型抗体を生成した。ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１（配列番号１２１；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２２；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）である）をＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ（配列番号６９；ＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号７０；ＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ）である）と組み合わせてネコ１５Ｈ０５ ＶＨ１マウスＶＬを生成した。ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ２（配列番号１２３；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ２）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２４；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ２）である）をＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ（配列番号６９；ＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号７０；ＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ）である）と組み合わせてネコ１５Ｈ０５ ＶＨ２マウスＶＬを生成した。ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ３（配列番号１２５；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ３）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２６；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ３）である）をＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ（配列番号６９；ＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号７０；ＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ）である）と組み合わせてネコ１５Ｈ０５ ＶＨ３マウスＶＬを生成した。これらのネコ化ＶＨマウスＶＬヘテロキメラ型について、イヌ及びネコのＩＬ－３１に対する親和性を分析した。ネコ化１５Ｈ０５ ＶＨ１及びＶＨ３をマウス１５Ｈ０５ ＶＬと対形成することにより、ネコＩＬ－３１に対する親和性がマウス及びキメラ形態と同等以上に回復した。この親和性改善傾向は、イヌＩＬ－３１タンパク質に対しても観察された（図２Ａ及び２Ｃ）。
親和性喪失の原因となる１５Ｈ０５フレームワークの位置をさらに精査するため、１５Ｈ０５の単一ネコ化ＶＨ（ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）を使用して、マウス１５Ｈ０５ ＶＬからの個々のフレームワーク置換と対形成した。ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１（配列番号１２２；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２３；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）である）を、ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ１（配列番号１３３；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１３４；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ１）である）、ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２（配列番号１３５；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１３６；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２）である）、及びＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ３（配列番号１３７；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ３）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１３８；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ３）である）と別個に組み合わせて、それぞれネコ１５Ｈ０５ １．１ ＦＷ１、ネコ１５Ｈ０５ １．１ ＦＷ２、及びネコ１５Ｈ０５ １．１ ＦＷ３を作成した。ネコ１５Ｈ０５ １．１に対するマウス１５Ｈ０５ ＦＷ１の置換は、ネコ及びイヌ両方のＩＬ－３１に対する親和性に有害であったが、ネコ１５Ｈ０５ １．１に対しマウスＦＷ２またはＦＷ３を置換した場合は、イヌ及びネコのＩＬ－３１に対する秀逸な親和性が達成され、両方の種においてＦＷ２がより優れていた（図２Ｃ）。追加的な対によるフレームワーク置換を実施して、このアプローチによる親和性調節の程度を定量した。ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１（配列番号１２１；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２２；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）である）を、ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ１＿２（配列番号１３９；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ１＿ＦＷ２）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１４０；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ１＿ＦＷ２）である）、ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿３（配列番号１４３；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿ＦＷ３）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１４４；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿ＦＷ３）である）、及びＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ１＿３（配列番号１４１；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ１＿ＦＷ３）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１４２；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ１＿ＦＷ３）である）と別個に組み合わせて、それぞれネコ１５Ｈ０５ １．１ ＦＷ１＿２、ネコ１５Ｈ０５ １．１ ＦＷ２＿３、及びネコ１５Ｈ０５ １．１ ＦＷ１＿３を得た。興味深いことに、マウスＦＷ１単独の置換は親和性に有害であったが、ＦＷ１とＦＷ２またはＦＷ３との組合せは、ネコ及びイヌ両方のＩＬ－３１に良好な親和性をもたらした（図２Ｃ）。
最後に、ネコフレームワークの復帰変異の数を最小限に抑える試みを、最も有望なネコ化ＶＨ及びＶＬ配列の組合せから行った。このために、ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１（配列番号１２１；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２２；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）である）を、ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｋ４２Ｎ（配列番号１４５；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｋ４２Ｎ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１４６；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｋ４２Ｎ）である）、ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｖ４３Ｉ（配列番号１４７；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｖ４３Ｉ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１４８；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｖ４３Ｉ）である）、ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｌ４６Ｖ（配列番号１４９；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｌ４６Ｖ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１５０；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｌ４６Ｖ）である）、ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｙ４９Ｎ（配列番号１５１；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｙ４９Ｎ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１５２；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｙ４９Ｎ）である）、及びＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｋ４２Ｎ＿Ｖ４３Ｉ（配列番号１５３；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｋ４２Ｎ＿Ｖ４３Ｉ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１５４；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｋ４２Ｎ＿Ｖ４３Ｉ）である）と別個に組み合わせて、それぞれネコ１５Ｈ０５ １．１ Ｋ４２Ｎ、ネコ１５Ｈ０５ １．１ Ｖ４３Ｉ、ネコ１５Ｈ０５ １．１ Ｌ４６Ｖ、ネコ１５Ｈ０５ １．１ Ｙ４９Ｎ、及びネコ１５Ｈ０５ １．１ Ｋ４２Ｎ＿Ｖ４３Ｉを作成した。ネコ化１５Ｈ０５ ＶＬ１に対しマウスＦＷ２フレームワーク全体を置換したところ、イヌ及びネコのＩＬ－３１に対する秀逸な親和性を備えた抗体が得られた（図２Ｃ、ネコ１５Ｈ０５ １．１ ＦＷ２）が、ＦＷ２アミノ酸残基の個別の復帰変異は中立的または有害な影響を及ぼした。このことから、ＩＬ－３１エピトープにＣＤＲを配置するための最適な３次構造を維持するには、４つ全ての置換が必要であることが示される。ネコ化１５Ｈ０５ １．１ ＦＷ２がネコ及びイヌのＩＬ－３１に対する親和性を増加させたことにより、この抗体をさらなる課題向けに選択する。
図５Ａはマウス抗体１１Ｅ１２ ＶＬ配列のアラインメントを示し、先に言及したイヌ化１１Ｅ１２配列をネコ化バージョンと比較している。アラインメントの下に記されているドットはＦｅｌ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ１の関連する変化の位置を示しており、この変化はこの抗体のＩＬ－３１タンパク質に対する親和性を回復するために必要であった。同様に、図５Ｂは、ネコ化１５Ｈ０５ ＶＬ（Ｆｅｌ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１）に必要な変化を示しており、この変化は、この抗体のマウス及びキメラ形態と比較したときのイヌ及びネコのＩＬ－３１に対する親和性を回復するだけでなく改善するために必要であった。
１．９．グルタミンシンターゼ（ＧＳ）プラスミドからネコ化抗ＩＬ－３１抗体を発現させる細胞系の生成
ネコ化１５Ｈ０５ １．１ ＦＷ２を、さらなるキャラクタリゼーション用の抗体を均質に供給する安定した細胞系を生成するための候補として選択した。細胞系産生のためのネコ化重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子を、それぞれＧＳプラスミドｐＥＥ ６．４及びｐＥＥ １２．４（Ｌｏｎｚａ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）内でクローンした。得られたプラスミドを製造業者のプロトコルに従って消化させ、共にライゲーションして単一の哺乳類発現プラスミドを形成した。ＺＴＳ－９２７において、重鎖は、（配列番号１２１；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２２；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）である）とネコＩｇＧ重鎖定常領域（配列番号１７１；ネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿ｗｔ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１７２；ネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿ｗｔ）である）との組合せである。ＺＴＳ－９２７において、軽鎖は、（配列番号１３５；ＦＥＬ－１５Ｈ０５－ＶＬ１＿ＦＷ２）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１３６；ＦＥＬ－１５Ｈ０５－ＶＬ１＿ＦＷ２）である）とネコＩｇＧ軽鎖定常領域（配列番号１７５；ネコ＿ＬＣ＿カッパ＿Ｇ＿マイナス）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１７６；ネコ＿ＬＣ＿カッパ＿Ｇ＿マイナス）である）との組合せである。ＺＴＳ－３６１において、重鎖は、（配列番号１２１；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２２；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）である）とネコＩｇＧ重鎖定常領域（配列番号１７３；ネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１７４；ネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿１）である）との組合せである。ＺＴＳ－３６１において、軽鎖は、（配列番号１３５；ＦＥＬ－１５Ｈ０５－ＶＬ１＿ＦＷ２）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１３６；ＦＥＬ－１５Ｈ０５－ＶＬ１＿ＦＷ２）である）とネコＩｇＧ軽鎖定常領域（配列番号１７５；ネコ＿ＬＣ＿カッパ＿Ｇ＿マイナス）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１７６；ネコ＿ＬＣ＿カッパ＿Ｇ＿マイナス）である）との組合せである。
抗体の一過性産生を実証するため、各プラスミドをＨＥＫ２９３細胞の形質移入に使用し、発現を様々なサイズの培養物で行った。標準的なタンパク質精製法に従い、プロテインＡ親和性クロマトグラフィーを用いて条件ＨＥＫ培地からタンパク質を単離した。培地をクロマトグラフィー樹脂に装填し、ｐＨシフトによって溶出した。溶出したタンパク質は、使用前にｐＨ調整、透析、滅菌濾過を行った。次に、ＺＴＳ－３６１をネコ掻痒モデルの評価に使用してｉｎ ｖｉｖｏ有効性を評価した。
単一のＧＳプラスミドから産生した抗体、ＺＴＳ－９２７及びＺＴＳ－３６１の親和性及び効力を試験した。図２Ｄは、ｂｉａｃｏｒｅを用いたこれらの抗体の親和性評価の結果を示している。ネコＩＬ－３１に対するＺＴＳ－９２７及びＺＴＳ－３６１の親和性は、マウス及びキメラ型形態の前駆細胞マウスｍＡｂ １５Ｈ０５の親和性との整合性が高い。イヌ及びネコ両方の細胞アッセイを用いて、イヌ及びネコのＩＬ－３１に対するこれら２つの抗体の効力を定量した（図３）。以前の観察結果と整合して、両方の細胞タイプに対しイヌ形態のＩＬ－３１を使用した場合、ＩＣ５０値は比例して高くなった。ネコＩＬ－３１に対するＺＴＳ－９２７及びＺＴＳ－３６１のＩＣ５０値は、キメラ型及びマウス形態の抗体に由来する値との整合性も高く、このことから単一のＧＳプラスミドから産生した最終ネコ化バージョンのｍＡｂ １５Ｈ０５が細胞系開発に好適であることが示された。
候補抗体を産生する安定した細胞株を生成するため、ＧＳプラスミドを線状化してから、プラスミド骨格内の単一部位を切断する制限酵素ＰｖｕＩを形質移入した。エレクトロポレーションを介してＧＳ－ＣＨＯＫ１ＳＶ（クローン１４４Ｅ１２）細胞に線状化プラスミドＤＮＡを形質移入した。形質移入後、安定したプールを生成するため、細胞を４８ウェルプレート（４８ＷＰ）で平板培養した。４８ＷＰでプールが少なくとも５０％コンフルエントになったら、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ及びプロテインＡバイオセンサー（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ，Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ）を用いて１００μｌ上清のＩｇＧ発現を分析した。最良の発現クローンを６ウェルプレート（６ＷＰ）にスケールアップし、次いで１２５ｍＬ振とうフラスコ（ＳＦ）にスケールアップした。細胞が１２５ｍＬフラスコの懸濁培養に適応したら、各細胞系プールの２つのバイアルをＬＮ保管用にバンクした。細胞系の製造はクローン性でなければならないため、９６ウェル培養プレートでの限界希釈により上位３つの高発現プールをサブクローンした。クローン性を証明し、第２ラウンドの限界希釈を回避するため、単一細胞及びその後の成長の画像を取り込むＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｃｌｏｎｅ－Ｓｅｌｅｃｔ Ｉｍａｇｅｒ（ＣＳＩ）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ ＬＬＣ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を用いて９６ウェルプレートをイメージングした。クローンは、９６ＷＰにおける好結果のＣＳＩ画像、成長、及び産生に基づき選択した。
細胞培養の成長及び生産性を評価するため、上位発現プールを１２５ｍＬ ＳＦ中１４日間の流加バッチでさらに評価した。細胞を、プラットフォーム培地ならびにＬｉｆｅ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓのＣＤ ＣＨＯに４つのアミノ酸を加えたもの、独自フィードＣＤＦ ｖ６．２、及び１０％グルコースからなるフィードに播種した。１４日間の流加バッチ後にプールを遠心分離し、０．２０μｍポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）メンブレンを介し上清を濾過することによってＣＤ ＣＨＯで産生されたｍＡＢを単離し、それから精製を行った。
典型的な精製は、２リットルの条件培地（ＣＨＯ細胞培養からのもの、０．２μｍ濾過済み）をＭａｂＳｅｌｅｃｔ（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号１７－５１９９－０２）の２３５ｍＬカラムに装填することからなった。カラムは、予めＰＢＳで平衡化した。試料は＞２．５分の滞留時間で装填した。装填後、カラムをＰＢＳで再度洗浄し、次いで２５ｍＭ酢酸ナトリウム（ほぼ中性のｐＨ）で洗浄した。カラムを２５ｍＭ酢酸、ｐＨ３．６で溶出し、次いで２５０ｍＭ酢酸、２５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ約２．２でストリッピングした。溶出及びストリップのステップ中に画分（５０ｍＬ）を収集した。Ａ２８０におけるＵＶ吸光度を終始モニターした。ピーク画分をプールし、２０ｍＭ酢酸ナトリウムを添加することでｐＨを約５．５に調整し、３回交換した緩衝液に対し透析した。透析液を収集し、滅菌濾過し、４℃で保存した。
１．１０．抗体１５Ｈ０５が認識するＩＬ－３１のエピトープの同定
抗体が認識するＩＬ－３１のエピトープについて知ることは、抗体がサイトカインのＩＬ－３１Ｒａ：ＯＳＭＲ共受容体への結合を中和するメカニズムを理解する上で不可欠である。加えて、エピトープを知ることで、（限定されるものではないが）抗体結合親和性の最適化が可能になり、また、分析用捕捉試薬として、及び関連する焦点を絞った免疫応答を誘発するサブユニットワクチンとして非常に有用であり得るペプチドエピトープミメティック（ミモトープ）の設計が可能になる。ＣＬＩＰＳ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｌｉｎｋａｇｅ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｏｎｔｏ Ｓｃａｆｆｏｌｄｓ）技術（Ｔｉｍｍｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｍｏｌ Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．２００７；２０（５）：２８３－２９９）を用いたマルチステッププロセスを使用して、ｍＡｂ １５Ｈ０５（Ｐｅｐｓｃａｎ，Ｌｅｌｙｓｔａｄ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）のパラトープに結合可能なペプチドを同定及び最適化した。イヌ及びネコのＩＬ－３１タンパク質に対するｍＡｂ １５Ｈ０５の親和性が高い（図２、ＭＵ－１５Ｈ０５）ことから、いずれのＩＬ－３１種の一次配列もこの試みに関連すると考えられた。イヌＩＬ－３１タンパク質に相当するペプチドマイクロアレイライブラリーを作成し、間接ＥＬＩＳＡを用いたｍＡｂ １５Ｈ０５に結合可能なペプチドの同定に使用した。一次アミノ酸配列がＩＬ－３１上のｍＡｂ １５Ｈ０５の結合領域に相当するペプチドを同定した後に、焦点を絞った完全置換分析を実施して、ＩＬ－３１の一セグメントに相当するペプチドを使用し、このｍＡｂ １５Ｈ０５結合領域の１２個のアミノ酸の各々を各位置において１９個の他の可能なアミノ酸残基で置き換えた。この分析は、ｍＡｂ １５Ｈ０５結合に関与するＩＬ－３１上のキーとなるアミノ酸残基を同定するために必須であり、また抗体結合の強化につながるイヌ一次配列上の置換位置についても実証した。
抗体１１Ｅ１２が認識するイヌＩＬ－３１タンパク質上のアミノ酸については過去に説明されている（Ｂａｍｍｅｒｔ ，ｅｔ ａｌ．に対する米国特許第８，７９０，６５１号）。この文献では、アラニンに変換したときにｍＡｂ １１Ｅ１２の結合に影響を及ぼすイヌＩＬ－３１タンパク質上の位置を示すイヌＩＬ－３１タンパク質の変異分析について説明された。上記のｍＡｂ １５Ｈ０５について説明した完全置換分析及び１１Ｅ１２の結合エピトープについての過去の知見に基づき、各抗体が認識するエピトープ上の２つのキーとなる残基をアラニンに置換することにより、ネコＩＬ－３１タンパク質の変異型形態を作成した（上記のセクション１．２で説明した変異型）。各エピトープの変異は、変異の部位を認識する抗体に従って命名した（ネイティブｗｔタンパク質配列に対し変異型１１Ｅ１２及び１５Ｈ０５）。
図６Ａは、変異型１５Ｈ０５（配列番号１６３）及び１１Ｅ１２（配列番号１６１）との野生型ネコＩＬ－３１（配列番号１５７）のアラインメントを示しており、アラニン置換が生じる位置は強調表示されている。ＩＬ－３１はサイトカインのＩＬ－６ファミリーに属し、４つのヘリックスバンドルがアップダウンアーキテクチャーを有する（ＣＡＴＨ ｄａｔａｂａｓｅ，Ｄａｗｓｏｎ ｅｔ ａｌ．２０１７ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０１７ Ｊａｎ ４；４５（Ｄａｔａｂａｓｅ ｉｓｓｕｅ）：Ｄ２８９－Ｄ２９５）。ホモロジーモデルは、ヒトＩＬ－６構造１Ｐ９Ｍ（Ｂｏｕｌａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．２００３ Ｓｃｉｅｎｃｅ．Ｊｕｎ ２７；３００（５６２８）：２１０１－４）に基づき、ＭＯＥソフトウェア（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ，Ｍｏｎｔｒｅａｌ，ＱＣ，Ｃａｎａｄａ）を用いて生成した。図６ＢはネコＩＬ－３１ホモロジーモデルを示しており、抗体１１Ｅ１２（部位１）及び１５Ｈ０５（部位２）の結合に関与するアミノ酸の位置が強調表示されている。各抗体の結合部位は、ＩＬ－３１タンパク質上の別々の位置にあるように思われる。
ｍＡｂｓ １１Ｅ１２及び１５Ｈ０５におけるこれらのネコＩＬ－３１変異型形態への結合能力による影響を定量するため、イムノアッセイプレートに直接コーティングされた変異型を用いて間接ＥＬＩＳＡを実行した。図６ＣはこのＥＬＩＳＡの結果を示しており、ｍＡｂ １１Ｅ１２及び１５Ｈ０５がこのアッセイ形式において野生型ネコＩＬ－３１に結合可能であることを実証している。変異型１１Ｅ１２が捕捉タンパク質として使用される場合、ｍＡｂ １１Ｅ１２の結合は非常に弱まり、ｍＡｂ １５Ｈ０５の結合は部分的に弱まる。イヌＩＬ－３１の１１Ｅ１２エピトープに対する過去の分析（Ｂａｍｍｅｒｔ ｅｔ ａｌ．に対する米国特許第８，７９０，６５１号に記載）では、４つのアミノ酸残基がアラニンに変異するとｍＡｂの結合に影響を及ぼすことが示されたため、この場合、２つの残基の変異では、このＥＬＩＳＡ形式を用いてｍＡｂ １１Ｅ１２の高親和性結合を完全に除去するのに十分でない可能性がある。ｍＡｂ １５Ｈ０５の１１Ｅ１２変異型との結合がわずかに弱まるのは、１５Ｈ０５結合部位に影響を及ぼす２つの前面のヘリックスが移動することによる変異の翻訳効果によるものと考えられる。ｍＡｂ １５Ｈ０５の結合に影響を及ぼすように設計された変異（変異型１５Ｈ０５）は、ＥＬＩＳＡにより、ｍＡｂ １５０５のこのＩＬ－３１変異型への結合能力が完全に喪失していることを示している。１１Ｅ１２変異型とは異なり、ｍＡｂ １５Ｈ０５（変異型１５Ｈ０５）が認識するランダムコイルの変化はｍＡｂ １１Ｅ１２の結合に影響を及ぼさなかったが、これは２つのエピトープ間の相違をさらに支持するものである（図６Ｃ）。
１．１１．ｂｉａｃｏｒｅを用いたｍＡｂ １５Ｈ０５及び１１Ｅ１２の競合結合評価
ｍＡｂｓ １５Ｈ０５及び１１Ｅ１２が結合するＩＬ－３１エピトープをさらにキャラクタリゼーションするため、ｂｉａｃｏｒｅを用いて遮断実験を行い、ＩＬ－３１タンパク質を含む表面を生成してから抗体を順次加えた。図７は、１１Ｅ１２または１５Ｈ０５の捕捉後における各抗体のＩＬ－３１との相対的結合を示している。ＨＢＳ－ＥＰ（アッセイ緩衝液）と表示された列は、競合なしに単独でＩＬ－３１表面に結合する各抗体から得られた最大信号を示す。図７Ａは、マウス１５Ｈ０５及び１１Ｅ１２抗体のイヌＩＬ－３１との競合結合データを示している。これらの結果は明らかに、抗体１５Ｈ０５及び１１Ｅ１２が互いの存在下でイヌＩＬ－３１に結合可能であることを示しており、これにより、これらの抗体がタンパク質上の異なるエピトープを認識したことが示される。図７Ａに関連するセンサーグラムは、この新たに形成されたｂｉａｃｏｒｅ表面上でいずれの抗体の解離速度も非常に遅く、そのため、同じ抗体を加えても結合部位の追加的な占有が生じ得ないことを示している（データは示されず）。
図７Ｂは、抗体１５Ｈ０５及び１１Ｅ１２のネコＩＬ－３１表面上の競合結合データを示しており、ここでもまた、認識するエピトープに重複がないことが示される。同じ抗体の存在下で追加的な抗体が結合するのは、使用される表面の質が低いことによりオフ速度が増加する結果である。オフ率の増加が見られ、図２の新たに形成されたネコＩＬ－３１表面からのＫＤ値と比較することができる。
これらの結果はさらに、抗体ＭＵ－１１Ｅ１２と比較したときに、抗体ＭＵ－１５Ｈ０５に含まれるＣＤＲが異なるエピトープを認識することを示すセクション１．１０のエピトープマッピングデータを支持するものである。抗体１５Ｈ０５が認識するエピトープは、（Ｂａｍｍｅｒｔ， ｅｔ ａｌ．に対する米国特許第８，７９０，６５１号）で説明されている抗体１１Ｅ１２とは異なるものであり、複数の種においてこのサイトカイン活性を中和するためのＩＬ－３１タンパク質上の新規標的である。これらの知見は、ネコＩＬ－３１ホモロジーモデル（図６Ｂ）で説明されている結合部位の異なる空間関係を強調し、また、サイトカインのこの面が、ＩＬ－３１Ｒａ：ＯＳＭＲ受容体複合体との相互作用に不可欠であるという仮説を支持するものである。
１．１２．可溶性ネコＩＬ－３１共受容体（ＩＬ－３１ＲＡ及びＯＳＭＲ）の合成ならびにキャラクタリゼーション
ＩＬ３１Ｒａ及びＯＳＭＲサブユニットからなるヒトＩＬ－３１ヘテロマー受容体共複合体は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路のＩＬ３１媒介性細胞間活性化に必要であり、アトピー性皮膚疾患に関与していることが示された（Ｄｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．２００４ Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｊｕｌ；５（７）：７５２－６０；Ｄｒｅｕｗ ｅｔ ａｌ．２００４ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７９：３６１１２－３６１２０；及びＤｉｖｅｕ ｅｔ ａｌ．２００４ Ｅｕｒ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｎｅｔｗ．１５：２９１－３０２）。ヒトＩＬ－３１ Ｒａサブユニットはその後、ＩＬ－３１が細胞表面受容体と接触しているときに生じる最初の結合事象として説明され、この事象は、ＯＳＭＲの動員及びその後の高親和性共受容体複合体の形成にとって必須条件である（Ｌｅ Ｓａｕｘ ｅｔ ａｌ．２０１０ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．Ｊａｎ ２９；２８５（５）：３４７０－７）。本明細書では、ネコＩＬ－３１タンパク質がＯＳＭＲ及びＩＬ－３１ Ｒａの両方に独立的に結合可能であるという根拠について説明する。この観察結果は新規であり、ＩＬ－３１タンパク質がどのようにＩＬ－３１Ｒａ：ＯＳＭＲ共受容体と相互作用するかについての理解に対し、また、ＩＬ－３１が個々のサブユニットと独立的に相互作用する際のＩＬ－３１の生物学的役割に対し、重要な意義を有する。
ＩＬ－３１がその共受容体にどのように結合するか理解できるようにするため、及び同定された抗体の阻害特性をキャラクタリゼーションするため、２つの受容体形態を合成した。個々のＩＬ－３１受容体サブユニットＩＬ－３１Ｒａ（配列番号１６９；ネコ＿ＩＬ３１Ｒａ＿ＨＩｇＧ１＿Ｆｃ＿Ｘ１＿Ｆｎ３）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１７０；ネコ＿ＩＬ３１Ｒａ＿ＨＩｇＧ１＿Ｆｃ＿Ｘ１＿Ｆｎ３）である）及びＯＳＭＲ－（配列番号１６７；ネコ＿ＯＳＭＲ＿ｈＩｇＧ１＿Ｆｃ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１６８；ネコ＿ＯＳＭＲ＿ｈＩｇＧ１＿Ｆｃ）である）を、いずれもヒトＩｇＧ１ Ｆｃ融合物として構築した。ヒト相同体との相同性により、サイトカイン結合、フィブロネクチンＩＩＩ、及びＩｇ様ドメインが同定された。個々の受容体サブユニットを評価するため、ＯＳＭＲ及びＩＬ－３１Ｒａの細胞外ドメイン（及び予想されるＮ末端近位のフィブロネクチンＩＩＩドメイン）を、いずれもネイティブシグナルペプチドを用いてヒトＩｇＧ１ Ｆｃ融合物として生成した。全ての合成カセットをｐｃＤＮＡ３．１内でクローニングし、ＥｘｐｉＣＨＯ系で発現させ、上記で説明されているように精製した。
これらの受容体形態の野生型及び変異型ＩＬ－３１タンパク質への結合能力を分析するため、４Ｃの炭酸／重炭酸緩衝液（ｓｉｇｍａ Ｃ３０４１－１００ＣＡＰ）中で終夜ｉｍｍｕｌｏｎ ２ＨＢプレート（１μｇ／ｍｌ）に１００ｕｌの各それぞれのタンパク質をコーティングすることにより、間接ＥＬＩＳＡを実行した。次いで、室温で１時間、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳＴ中５％ ＮＦＤＭブロッキング緩衝液でブロックし、それから複数の濃度の各受容体コンストラクトを室温で１時間結合した。ＰＢＳＴで洗浄した後、室温で１時間、マウス抗ヒトＩｇＧ１（Ｌｉｆｅｔｅｃｈ Ａ１０６８４、１：５００希釈）を用いて、結合した受容体（Ｆｃ融合物）の存在を同定した。ウェルを再びＰＢＳＴで洗浄し、ＫＰＬ ｓｕｒｅｂｌｕｅ ３，３’，５，５’－テトラ－メチルベンジジン（ＴＭＢ）マイクロウェル基質で発色させた。図８は、野生型及び変異型形態のネコＩＬ－３１タンパク質を捕捉物質として用いた、この間接ＥＬＩＳＡの結果を示している。これらのデータは、野生型ネコＩＬ－３１がＩＬ－３１Ｒａ及びＯＳＭＲ受容体サブユニットに独立的に結合することができることを実証している。これらの観察結果は、ＩＬ－３１タンパク質が最初にＩＬ－３１Ｒａサブユニットに結合し、さらにその部位にＯＳＭＲを動員することを示した過去の報告とは対照的である。ＩＬ－３１の生物学的役割はまだ判定の途上にあるため、受容体結合の動態や、アトピー性皮膚炎などの疾患でその役割が弱まることに対する潜在的な結果を理解することは、非常に重要である。このため、これらの観察結果は、ＩＬ－３１のＩＬ－３１Ｒａ及びＯＳＭＲに対する認識能力を妨害可能なエピトープに結合する抗体をキャラクタリゼーションする際に、さらなる検討を行った。
セクション１．２では、抗体１１Ｅ１２及び１５Ｈ０５について、これらの結合部位内のキーとなるアミノ酸がアラニンに変換された変異型（それぞれ変異型１１Ｅ１２及び１５Ｈ０５）との結合が弱まることを説明している。そのため、これらの変異が個々のＩＬ－３１Ｒａ及びＯＳＭＲ受容体サブユニットへの結合能力に及ぼす影響について理解することが大きな関心対象となった。図８は、１１Ｅ１２または１５Ｈ０５いずれかの結合部位の変異がＩＬ－３１Ｒａ及びＯＳＭＲの結合能力を完全に破壊することを示しており、このことから、いずれの抗体も、ＩＬ－３１と両方の受容体サブユニットとの相互作用に必要なエピトープに結合することが示される。結合の欠如は、変異から生じるＩＬ－３１の確認の変化に起因する可能性もあるが、これらの変異型が依然として抗体に結合可能であることから、これは該当しないことが示唆される。このキーとなる知見は、サイトカインがその共受容体を通じてシグナル伝達するのを中和し、さらにこのプロセス中にサイトカインといずれかの受容体との細胞会合を遮断するＩＬ－３１上のエピトープを認識する、抗体１１Ｅ１２及び１５Ｈ０５（ならびに誘導体）両方の能力を支持するものである。これらのデータは、ＩＬ－３１を循環から除去し細胞表面または可溶性受容体形態に結合できなくすることが可能な抗体が同定されたことを支持するものである。
１．１３．ネコＩＬ－３１掻痒チャレンジモデルにおけるキメラ型抗体のｉｎ ｖｉｖｏ評価
抗体のその標的を効果的に中和する能力は、適切な親和性を備えた標的タンパク質上の関連するエピトープへの結合と、ｉｎ ｖｉｖｏ効力への外挿が可能な細胞ベースアッセイでの効力とを調べることにより、ｉｎ ｖｉｔｒｏで評価することができる。上記は、マウス前駆細胞ｍＡｂ １１Ｅ１２及び１５Ｈ０５から生成された２系列の抗体をキャラクタリゼーションするために取られたステップである。セクション１．７では、ネコ及びイヌのＩＬ－３１に対し元のマウスモノクローナル抗体と同等の親和性が得られたｍＡｂ １１Ｅ１２及び１５Ｈ０５のマウス：ネコキメラ型形態の生成について説明している（図２Ａ）。また、１１Ｅ１２及び１５Ｈ０５のマウス：ネコキメラ型形態は、イヌ及びネコのマクロファージ細胞におけるネコＩＬ－３１誘導性ｐＳＴＡＴ３シグナル伝達の阻害を示す同等のＩＣ５０値も得た（図３）。セクション１．８のネコ化プロセス中に、マウスｍＡｂ １１Ｅ１２はネコ化バージョン（ネコ１１Ｅ１２ １．１）に変換され、続いてイヌ及びネコのＩＬ－３１に対する親和性を喪失し（図３）、イヌ及びネコの細胞内でのネコＩＬ－３１シグナル伝達に対する効力を喪失した（図３）。セクション１．８で説明したネコ化１１Ｅ１２及び１５Ｈ０５抗体を最適化する前に、関心対象となったのは、ネコ曝露モデルにおいてこれらの予備的なネコ化及びキメラ型形態のネコＩＬ－３１掻痒活性を中和する能力について理解することであった。関心対象となったのは、これらの異なる抗体が掻痒の中和に及ぼす薬力学的効果、そして有効性に影響を及ぼし得る親和性、細胞効力、またはエピトープ認識との任意の相関を理解することであった。掻痒チャレンジモデルにおいてｉｎ ｖｉｖｏ有効性と相関する一連の細胞効力を先に進めることで、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを用いてさらなる必要な最適化を予測できると考えられた。
マウス：ネコ１１Ｅ１２キメラ型、マウス：ネコ１５Ｈ０５キメラ型、及びネコ化１１Ｅ１２（ネコ１１Ｅ１２ １．１）の予備的有効性を試験するため、ネコＩＬ－３１誘導性掻痒モデルを開発した。０．５μｇ／ｋｇのネコＩＬ－３１（配列番号１５９；ネコ＿ＩＬ－３１＿Ｅ＿ｃｏｌｉ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１６０；ネコ＿ＩＬ－３１＿Ｅ＿ｃｏｌｉ）である）の静脈内投与後、ネコは、（限定されるものではないが）舐める、噛む、引っ掻く、及び頭または身体を揺らす行動を含めた一過性の掻痒行動を表現する。ケージに身体を擦り付けることは掻痒活動とみなさなかった。掻痒の観察は、ＩＬ－３１タンパク質の投与前の３０分間及び投与後の１時間、訓練を受けた研究者によって行われる。この研究において、ネコＩＬ－３１によるベースラインチャレンジは、抗体を投与する１ヵ月前まで実施した。ゼロ日目に、０．５ｍｇ／ｋｇ抗体用量を０．５μｇ／ｋｇのネコＩＬ－３１と室温で６０分間合わせた後、この予め結合した複合体を各動物に注射した。対照には「ｍＡｂなし」対照を含めた。ｍＡｂの用量は、サイトカインに対する総モル過剰の抗体に相当する。掻痒活動は、０、７、及び２１日目に説明通りにモニターした。図９の結果は、プラセボ対照と比較したときに、０、７、及び２１日目のマウス：ネコ１５Ｈ０５キメラ型の掻痒スコアが有意に改善した（ｐ＜０．０５）ことを示している。マウス：ネコ１１Ｅ１２キメラ型は、ゼロ日目に初期的な有効性の傾向を示したが、ビヒクルプラセボと比較したときに、いかなる時点においても掻痒の有意な低減は達成されなかった。ネコ１１Ｅ１２ １．１はゼロ日目に掻痒を低減せず、ビヒクルプラセボと比較したときに有効性の傾向を示さなかったため、７日目及び２１日目のＩＬ－３１チャレンジは実施しなかった。
まとめると、これらの結果は、ＩＬ－３１によって誘導されるネコの掻痒行動を防止することにおける１１Ｅ１２ １．１の有効性欠如により、これらの抗体の活性間で明確な線引きがされたことを示すものである。おそらくは、ネコ１１Ｅ１２ １．１の親和性及び効力が喪失した結果、ｉｎ ｖｉｖｏでの有効性欠如が生じたと考えられる。マウス：ネコ１１Ｅ１２キメラ型及びマウス：ネコ１５Ｈ０５キメラ型の有効性の結果を比較すると、区別はより微妙となる。両ｍＡｂのキメラ型形態のＫＤ値はそれらのマウス前駆細胞と同等であり、ネコ及びイヌ両方のＩＬ－３１に対するマウス：ネコ１１Ｅ１２の親和性がわずかに優れている（図２Ａ）。ただし、ネコＦＣＷＦ４細胞内のネコＩＬ－３１誘導性ｐＳＴＡＴ３シグナル伝達に対するマウス：ネコ１５Ｈ０５キメラ型のＩＣ５０はマウス：ネコ１１Ｅ１２キメラ型のおよそ２倍高い（図３）ため、この親和性の増加は、直接的に効力の増加に変換されるわけではない。これらのデータは、抗体１５Ｈ０５ ＣＤＲがネコＩＬ－３１を認識する方法が、サイトカインのその共受容体を介したシグナル伝達能力を中和することにおいて優れており、そのためネコの掻痒の遮断においてもより有効となることを示唆している。これらの細胞アッセイで観察されたＩＣ５０の差により、ｉｎ ｖｉｖｏでの効力を予測し、一連の抗体内及び一連の抗体間のエピトープ認識の微妙な差を識別するための有望な手段がもたらされる。
１．１４．ネコ掻痒チャレンジモデルにおけるネコ化１５Ｈ０５抗ＩＬ－３１抗体の有効性のｉｎ ｖｉｖｏ評価
上記のマウス：ネコ１５Ｈ０５キメラ型を用いた肯定的な有効性の結果に基づき、ネコ化１５Ｈ０５の親和性及び効力を増加させるためのさらなる作業を行った（上記のセクション１．８で説明）。ネコ１５Ｈ０５ １．１抗体内のネコ可変軽鎖フレームワークを系統的に置換することにより、マウス１５Ｈ０５と比較してネコ及びイヌ両方のＩＬ－３１に対する親和性が増加したネコ１５Ｈ０５ １．１ ＦＷ２の同定につながる（図２）。ネコ１５Ｈ０５ １．１ ＦＷ２の重鎖及び軽鎖を単一のプラスミド内で組み合わせることにより、ＨＥＫ及びＣＨＯ発現系からの産生後にＺＴＳ－９２７及びＺＴＳ－３６１抗体が形成される。単一のプラスミドからの発現から生じた両抗体の親和性及び効力は、それぞれ図２及び３にも記載されている。
ＩＬ－３１誘導性ｉｎ ｖｉｖｏネコモデルにおいて、完全ネコ化抗ネコＩＬ－３１ ｍＡｂ ＺＴＳ－３６１の有効性を、掻痒行動に対する当該抗体の中和能力について評価した。図１０Ａは、Ｔ０１のビヒクルプラセボ群及びＴ０２の抗体ＺＴＳ－３６１群における－７日目から２８日目まで（ゼロ日目をＴ０２群への抗体投与日とする）のベースラインチャレンジ前掻痒行動を示している。このグラフに示されているように、ＩＬ－３１チャレンジ前のＴ０１群及びＴ０２群の両方でスコア化した掻痒行動の分散はほとんど変化せず、掻痒事象の回数は３０分の観察期間内に０～１０で観察された。この研究は、ネコＩＬ－３１と合わせて予め結合した複合体を生成せずに４ｍｇ／ｋｇのＺＴＳ－３６１をゼロ日目のネコに皮下投与した点において、上記のセクション１．１３で説明した予備的ネコチャレンジモデルとは異なった。抗体が循環するＩＬ－３１に結合しこれを中和するには十分な曝露を必要とする初回ＩＬ－３１チャレンジ前の７日間に抗体ＺＴＳ－３６１が血液循環するため、この研究はより厳密な有効性評価となる。
この研究では、７、２１、２８日目にＩＬ－３１タンパク質０．５μｇ／ｋｇの静脈内チャレンジ後の１時間、掻痒行動を評価した。図１０Ｂは抗体ＺＴＳ－３６１の有効性を示しており、ＩＬ－３１チャレンジ後、ビヒクルプラセボ対照と比較したときの掻痒の有意な低減が７日目（ｐ＜．０００１）、２１日目（ｐ＜０．００２７）、及び２８日目（ｐ＜０．０２３８）に実証されている。このチャレンジモデルからのデータは、マウス：ネコ１５Ｈ０５キメラ型の有効性を実証する過去の観察結果を支持し、また、１５Ｈ０５ ＣＤＲが認識するネコＩＬ－３１上のエピトープにおける細胞ベースの効力及び関連性を支持するものである。これらのデータはさらに、抗体ＺＴＳ－３６１のネコＩＬ－３１によって誘導される掻痒に対する中和能力を支持し、この抗体がネコにおけるアトピー性皮膚炎を含めたＩＬ－３１媒介性疾患の治療薬として機能し得ることを示唆している。
クライアント所有の動物におけるＩＬ－３１の血漿レベルを調べた最近のデータでは、正常な実験用ビーグル犬と比較して、アトピー性及びアレルギー性皮膚炎を有するイヌの間で循環中のサイトカイン量が増加していることが示されている（図１１Ａ）。最近の研究は、米国内のいくつかの異なる地理的地域からのアレルギー性皮膚炎（ＡＤ）の推定診断を受けたネコの血清中ＩＬ－３１レベルを定量するために実施した。図１１Ｂはこの評価からの結果を示しており、アトピー性及びアレルギー性皮膚炎を有するイヌと同様に、この推定診断によって調査したネコ７３例の平均循環ＩＬ－３１レベルは８７９９ｆｇ／ｍｌであり、これに対し同齢の対照ネコ１７例は２０５ｆｇ／ｍｌであったことが示されている。過去のモデル開発研究におけるイヌＩＬ－３１のレベルを理解するため、イヌＩＬ－３１の薬物動態プロファイルを、１．７５μｇ／ｋｇ皮下投与した後のイヌで分析した。図１１Ｃはピーク血漿レベルを示しており、最初の１時間以内に最大の約３０ｎｇ／ｍｌに達し、３時間時に約４００ｐｇ／ｍｌの維持レベルを示している。これらの知見に基づけば、このネコモデルで使用した０．５μｇ／ｋｇのネコＩＬ－３１を静脈内投与すると、イヌ及びネコの自然発生的疾患状態で観察される循環量よりもはるかに過剰な循環量になると考えるのが妥当である。
２．実施例２：ワクチン及び診断におけるＩＬ－３１ミモトープのキャラクタリゼーション及び使用
２．１． 抗体１５Ｈ０５結合に関与するイヌＩＬ－３１上のアミノ酸残基
本出願のセクション１．１０で説明されているように、図１２で囲まれているアミノ酸を包含するイヌＩＬ－３１タンパク質の完全置換スキャンを実施した。全長タンパク質において、このＩＬ－３１セクション内で説明されている各位置を他の可能な１９個のアミノ酸のうちの１個で個別に置き換え、間接ＥＬＩＳＡを用いて抗体１５Ｈ０５の結合を評価した。結合に影響を及ぼさないこれらの置換を行ったところ、ＥＬＩＳＡシグナルはＩＬ－３１タンパク質と同等（またはそれ以上）となったが、抗体結合に影響を及ぼす置換を行ったところ、アッセイのシグナルは低く（またはゼロに）なった。図１２で詳述されているように、イヌＩＬ－３１上のいくつかの位置は、示されたアミノ酸のある特定の置換（配列番号１５５；１２４、１２５、１２９、及び１３２～１３５位）を許容したが、その他の置換は許容しなかった（配列番号１５５；１２６、１２７、１２８、１３０、及び１３１位）。比較のため、ネコ（配列番号１５７）、ウマ（配列番号１６５）、及びヒトＩＬ－３１（配列番号１８１）上の対応する領域が示されている。イヌＩＬ－３１における変異の観察結果を、他の種に対し推定して相同ペプチドを設計することができる。イヌＩＬ－３１上のエピトープ領域をこのように微細に位置マッピングしたことにより、抗体１５Ｈ０５が認識するＩＬ－３１タンパク質上の結合部位を模倣する線状及び拘束性両方のペプチドの設計が可能になった。セクション１．１０で説明されているネコＩＬ－３１モデル（図６Ｂ）と併せたこれらの結果は、ｍＡｂ １５Ｈ０５が認識するエピトープが、サイトカインの第４のヘリックスドメインにつながるランダムコイルの収束を形成するアミノ酸の連続的な領域であることを示すものである。このエピトープを表現することによって、線状及び拘束性両方のペプチド表現に対するｍＡｂ １５Ｈ０５の結合が可能になり、拘束性形態に関連する親和性が高くなる。上記の変異データ（セクション１．１２）は、共受容体複合体との結合に関するＩＬ－３１タンパク質の表面上のこのエピトープ（及びＢａｍｍｅｒｔ ｅｔ ａｌ．に対する米国特許第ＵＳ８，７９０，６５１号で過去に説明されている１１Ｅ１２エピトープ）の重要な位置付けをさらに強調するものである。
２．２．抗体１５Ｈ０５が認識するＩＬ－３１上のエピトープを表現するペプチドミメティックのキャラクタリゼーション
前述のように、ペプチドエピトープミメティック（ミモトープ）の設計は、ＩＬ－３１上の中和エピトープに向けられた動物の抗体を生成するために、分析用捕捉試薬として、及び関連する焦点を絞った免疫応答を誘発するサブユニットワクチンとして、非常に有用である。この目標に向けて、イヌ及びネコのペプチドを設計し、抗体ＺＴＳ－９２７に対する親和性と、ネコＦＣＦＷ４細胞上のＩＬ－３１媒介性受容体シグナル伝達を阻害する抗体ＺＴＳ－３６１の能力を遮断する能力とについてキャラクタリゼーションを行った。抗体ＺＴＳ－９２７及びＺＴＳ－３６１（いずれもマウス抗体１５Ｈ０５からのＣＤＲを含む）の構築については、上記のセクション１．９．で説明されている。ペプチドＺＴＳ－５６１は、配列番号１５５の１２１～１３８位に対応するアミノ酸配列Ｎ－ＴＥＩＳＶＰＡＤＴＦＥＲＫＳＦＩＬＴ－Ｃを含み、位置番号１３２におけるシステイン（Ｃ）からアルギニン（Ｒ）への置換を伴う。また、ペプチドＺＴＳ－５６１は、遊離チオール基を用いた結合体化化学を促進するためにＮ及びＣ末端側システインも含む。ペプチドＺＴＳ－５６２は、配列番号１５５の１２２～１３５位に対応するアミノ酸配列Ｎ－ＥＩＳＶＰＡＤＴＦＥＲＫＳＦ－Ｃを含み、位置番号１３２におけるシステイン（Ｃ）からアルギニン（Ｒ）への置換を伴う。また、ペプチドＺＴＳ－５６２は、遊離チオール基を用いた結合体化化学を促進するためにＮ及びＣ末端側システインも含む。ペプチドＺＴＳ－５６３は、配列番号１５７の１２１～１３８位に対応するアミノ酸配列Ｎ－ＡＫＶＳＭＰＡＤＮＦＥＲＫＮＦＩＬＴ－Ｃを含み、位置番号１３８におけるアラニン（Ａ）からスレオニン（Ｔ）への置換を伴う。また、ペプチドＺＴＳ－５６３は、遊離チオール基を用いた結合体化化学を促進するためにＮ及びＣ末端側システインも含む。ペプチドＺＴＳ－５６４は、配列番号１５５の１２１～１３８位に対応するアミノ酸配列Ｎ－ＴＥＩＳＶＰＡＤＴＦＥＲＫＳＦＩＬＴ－Ｃを含む。また、ペプチドＺＴＳ－５６４は、遊離チオール基を用いた結合体化化学を促進するためにＮ及びＣ末端側システインも含む。ＣＬＩＰＳ技術（Ｔｉｍｍｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｍｏｌ Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．２００７；２０（５）：２８３－２９９）を用いたマルチステッププロセスを使用して、ｍＡｂ １５Ｈ０５（Ｐｅｐｓｃａｎ，Ｌｅｌｙｓｔａｄ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）のパラトープに結合可能なこれらの４つのペプチドを同定及び最適化した。免疫原を生成する目的で、これらの４つのペプチド（図１３Ａに示す）を、標準的な架橋化学を用いて、ジフテリア毒素（ＣＲＭ１９７）の不活性変異型（無毒性）形態である担体タンパク質と独立的に結合体化させた。親和性評価のため、各ペプチドを独立的にｂｉａｃｏｒｅ表面に固定化し、ネコ化抗ＩＬ－３１ １５Ｈ０５ ｍＡｂ（ＺＴＳ－９２７）のＫＤを定量した（図１３Ｂ）。４つのペプチド全てがナノモルの親和性でＺＴＳ－９２７に結合した。このことは、これらが全長ＩＬ－３１上の結合部位を綿密に表現していることを示すものである。各ペプチドの効力を評価するため、結合体化ペプチドまたは非結合体化ペプチドの用量滴定を、０．２μＭ（６．５μｇ／ｍｌ）のｍＡｂ ＺＴＳ－３６１と共に３７℃で１時間共インキュベートし、その後にネコＩＬ－３１をＦＣＷＦ－４（ネコマクロファージ様細胞）に添加した。ＩＣ５０値は、ペプチド濃度の増加（ｘ軸）と、ネコＦＣＷＦ－４マクロファージ内のＩＬ－３１タンパク質媒介性ＳＴＡＴ３リン酸化のｍＡｂ ＺＴＳ－３６１阻害に結合しこれを遮断するペプチドの能力として定義されるパーセント効果（ｙ軸）とを用いて計算した。ペプチドＺＴＳ－５６４は溶液中の溶解度が低減しており、そのために結合体化が非効率になり、エピトープ密度が低くなり、効力が不十分だった可能性がある。ペプチドＺＴＳ－５６１は、結合体形態では効力が不十分だったものの、非結合体化形態では良好な効力を維持した（ＩＣ６０約１．７μｇ／ｍｌ）。ＺＴＳ－５６２及びＺＴＳ－５６３はいずれも非結合体化の場合に優れた効力を示し、それぞれＩＣ５０は１．０４６μｇ／ｍｌ及び１．７４２μｇ／ｍｌであった。結合体化した後の効力はおよそ３倍減少し、ＺＴＳ－５６２及びＺＴＳ－５６３のＩＣ５０はそれぞれ３．０２４μｇ／ｍｌ及び３．３８４μｇ／ｍｌとなった（図１３Ｂ）。ｍＡｂ ＺＴＳ－３６１のＩＬ－３１タンパク質への高親和性結合を遮断するこれらのペプチドの能力は非常に有望であり、ＩＬ－３１上の関連するエピトープのエピトープミメティック（さらにＩＬ－３１ １５Ｈ０５ミモトープと称される）としての有用性を支持するさらなる証拠が得られた。これらのＩＬ－３１ １５Ｈ０５ミモトープに対し、抗ＩＬ－３１免疫応答を誘発する免疫原としての有用性をさらに調べた。
２．３．ＩＬ－３１ １５Ｈ０５イヌ及びネコのミモトープならびに全長ネコＩＬ－３１タンパク質でビーグル犬を免疫化した後のＩＬ－３１に対する血清力価を生成するための試験設計
免疫原性試験を行って、ＣＲＭ－１９７結合体化ＩＬ－３１ １５Ｈ０５ミモトープにおける、抗体１５Ｈ０５が結合し、サイトカインのＩＬ－３１Ｒａ：ＯＳＭＲ共受容体活性化能力を中和するＩＬ－３１タンパク質上の関連領域に向けて駆動されるエピトープ特異的免疫応答を生成する能力を評価した。試験設計を図１４に示す。純血種のオスビーグル犬に、ＺＡ－０１をアジュバント添加した結合体化ＩＬ－３１ １５Ｈ０５ミモトープを皮下投与した。下の図表は、群ごとの実験設計を示している。ＺＡ－０１アジュバントＣＲＭ－１９７のみ（Ｔ０１）及びＺＡ－０１中のＣＲＭ－１９７結合体化ネコＩＬ－３１（配列番号１５９；ネコ＿ＩＬ－３１＿Ｅ＿ｃｏｌｉ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１６０；ネコ＿ＩＬ－３１＿Ｅ＿ｃｏｌｉ）である）（Ｔ０２）を含むものを対照群に含めた。１０μｇ／用量の各アジュバント添加ミモトープまたは対照を、０、２８、及び５６日目に皮下投与した（２０μｇ／ｍｌ溶液中の０．５ｍｌ）。血清用の血液は、０日目（投与前）、７、１２、２８日目（投与前）、３５、４２、４９、５６日目（投与前）、６３、７０、７７、及び８４日目に採取した。加えて、３５日目及び８４日目に、各動物からおよそ４０ｍｌの血液をリチウムヘパリンチューブに収集し、標準的な方法を用いてＰＢＭＣ単離用に処理した。ＰＢＭＣを単離後、抗原特異的Ｂ細胞のさらなる評価を行うまで凍結保存した。
２．４．ＩＬ－３１ １５Ｈ０５イヌ及びネコのミモトープならびに全長ネコＩＬ－３１タンパク質をイヌにワクチン接種した後に生成された血清力価
上記のセクション２．３に示された各試験日の血清力価を各動物に対し評価した。力価は、全長ＩＬ－３１タンパク質をそれぞれのアッセイの捕捉材料として使用する間接ＥＬＩＳＡを用いて定量した。各試験群からの血清に対し、ネコ、ネコ１５Ｈ０５変異型、イヌ、ウマ、及びヒトのＩＬ－３１タンパク質への結合をアッセイした。目的は、ネコＩＬ－３１タンパク質（配列番号１５９；ネコ＿ＩＬ－３１＿Ｅ＿ｃｏｌｉ）または１５Ｈ０５ペプチドミモトープが、相互に様々なアミノ酸配列同一性を有する複数種のＩＬ－３１（図１Ａ）に対し誘発する免疫応答を理解することであった。処置群２（全長ネコＩＬ－３１ ＣＲＭ）は、タンパク質配列全体にまたがる複数のエピトープに対する適応免疫応答を表す。完全タンパク質を免疫原として使用すると、ＩＬ－３１の生体活性に対し中和性である抗体も非中和性である抗体も生成される。ＩＬ－３１シグナル伝達に対する中和抗体の同定について説明している過去のマウス研究では、このような中和抗体のパーセンテージが小さいことを示しており、そのため、全長タンパク質に対するポリクローナル応答の大部分は非中和タイプのものとなる（Ｂａｍｍｅｒｔ， ｅｔ ａｌ．に対するＵＳ８７９０６５１）。ワクチンのアプローチとしては、ＩＬ－３１に対する非中和抗体が生成されることで安全性及び有効性に悪影響が及ぶ恐れがある。非中和抗体により、抗体サイトカイン複合体が結合するために循環中の生体活性ＩＬ－３１の量が増加する可能性がある。このような複合体は、ＩＬ－３１の単量体形態または凝集形態が循環中に存在する可能性をもたらし、それにより、ＩＬ－３１の受容体結合部分がＩＬ－３１：ＯＳＭＲ共受容体と相互作用する可能性が生じ得る。循環中のＩＬ－３１の増加に起因するｐＳＴＡＴシグナル伝達の増加により、アトピー性皮膚炎のような疾患状態の掻痒活性が悪化する（Ｇｏｎｚａｌｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｖｅｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２０１３ Ｆｅｂ；２４（１）：４８－５３．ｅ１１－２）。
図１５Ａ～Ｅは、それぞれのＩＬ－３１タンパク質に対する平均力価の結果を処置群別に示しており、血清を採取した各日の応答を示している。生じ得る交差反応性抗体応答（ＣＲＡＲ）の程度を理解するため、複数種のタンパク質を用いてＩＬ－３１の血清力価を調べた。各血清試料に対し試験した最大希釈率は１：５０，０００であり、そのため力価がこの値を超えた場合は５０，０００とした。明快性のため、以下の図面の説明は、捕捉ＥＬＩＳＡに使用した各ＩＬ－３１タンパク質に対する個別の処置群の応答に従って進める。
全長ネコＩＬ－３１をワクチン接種したイヌ（Ｔ０２）の場合、相同体間の同一性パーセントが高いことを考慮して、生成したポリクローナル血清が複数の種に結合することが予想された。図１５Ａは、ネコＩＬ－３１に結合するイヌ抗体の生成された力価を示している。Ｔ０２群を分析すると、３回目の投与後に全長ネコＩＬ－３１タンパク質に対し中程度の持続的な抗体応答が生成され、８４日目の試験終了まで応答が持続したことが示される。ネコ１５Ｈ０５変異型タンパク質（配列番号１６３；ネコ＿ＩＬ３１＿１５Ｈ０５＿変異型）に対するＴ０２群の応答について検討すると、同様のプロファイルが見られ、力価が６３、７０、及び７７日目にさらに上昇している（図１５Ｂ）。図１５Ｃは、イヌＩＬ－３１に対する力価を示している。Ｔ０２群からの力価を見る際には、ワクチン接種したイヌがイヌＩＬ－３１タンパク質に対しＣＲＡＲをマウントした程度を調べる。ネコＩＬ－３１ ＣＲＭの３回目投与前には、応答は観察されなかった。５６日目の３回目投与後、６３～７７日目に一過性のＣＲＡＲが観察することができ、これは８４日目までにベースライン付近に戻っている。抗イヌ応答の大きさは抗ネコ応答に類似していたが、持続時間はより短かった。興味深いことに、ウマ及びヒトＩＬ－３１に対するＣＲＡＲはそれぞれ無視できる程度にとどまった（図１５Ｄ及びＥ、ヒトにおける６３及び８４日目）。要約すると、ネコＩＬ－３１ ＣＲＭに対するイヌの免疫応答がネコＩＬ－３１タンパク質自体に対し最もロバストかつ持続的であった。ネコ及びイヌＩＬ－３１は、互いに対する７６％のアミノ酸同一性を共有しており、これは、ＣＲＡＲがイヌタンパク質に生じる上で十分に高いレベルであるように思われる。ウマ及びヒトＩＬ－３１のネコに対する同一性はそれぞれ５７％及び４９％であり、ヒトのタンパク質力価の場合に生じるＣＲＡＲはほんのわずかである。
ＩＬ－３１ １５Ｈ０５ミモトープＺＴＳ－５６１は、抗体１５Ｈ０５が認識するイヌＩＬ－３１上の結合部位を表す。ＺＴＳ－５６１ ＣＲＭをワクチン接種したイヌからの抗体応答は、図１５Ａ～ＥでＴ０３として説明されている。ここでの目的は、サイトカインとその受容体との相互作用に関与することが知られているＩＬ－３１上のこの特定の領域に対する抗体応答を評価することであった。免疫応答を特定のエピトープに集中させることで、抗体が確実にタンパク質上の１つの領域に向けられ、その結果その生物学的活性が中和される。ＺＴＳ－５６１ ＣＲＭは拘束性の２０－ｍｅｒであり、ＶＬ（配列番号６９；ＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号７０；ＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ）である）と対形成されたマウス抗体１５Ｈ０５（配列番号６７；ＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号６８；ＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ）である）と同一のＣＤＲを有する抗体が認識するイヌＩＬ－３１タンパク質の部分を表す。ミモトープＺＴＳ－５６１は、試験全体において（図１５Ａ）（ネコＩＬ－３１ １５Ｈ０５変異型に対する試験（図１５Ｂ）を含む）、強力な抗ネコＩＬ－３１応答をもたらさなかった。これとは対照的に、イヌＩＬ－３１タンパク質に対しては、ＺＴＳ－５６１ ＣＲＭの場合のイヌの免疫応答は、２回目の注射後の３５日目から非常に強力であり、８４日目の試験終了まで持続した（図１５Ｃ）。ＺＴＳ－５６１によって誘発されたＣＲＡＲは、ウマＩＬ－３１に対しては無視できる程度であり、ヒトに対しては試験５６日目にわずかな反応しか観察されなかった（図１５Ｄ及びＥ）。興味深いことには、タンパク質のこの領域でネコ及びイヌのタンパク質が高度な同一性を共有している（図１）にもかかわらず、イヌ１５Ｈ０５ミモトープをイヌにワクチン接種した後は、イヌＩＬ－３１タンパク質に種特異的免疫応答が向けられた。
ＺＴＳ－５６２ ＣＲＭは拘束性の１６－ｍｅｒのＺＴＳ－５６１短縮バージョンであり、これもまた、ＶＬ（配列番号６９；ＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号７０；ＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ）である）と対形成されたマウス抗体１５Ｈ０５（配列番号６７；ＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号６８；ＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ）である）と同一のＣＤＲを有する抗体が認識するイヌＩＬ－３１タンパク質の部分を表す。ＺＴＳ－５６２に対するイヌの応答についてのデータは、図１５Ａ～ＥのＴ０４群として示されている。興味深いことには、この短いバージョンによって誘発されたＣＲＡＲはより顕著であり、３５～７０日目まで中程度の抗ネコ力価が得られた（図１５Ａ）。また、変異型１５Ｈ０５ ＩＬ－３１タンパク質に対しても３５～６３日目にいくらかの応答が観察された（図１５Ｂ）。このミモトープによって誘発された抗イヌＩＬ－３１応答は、２回目投与後の３５日目から試験終了の８４日目まで持続した。イヌペプチドＺＴＳ－５６１ ＣＲＭにおける他の結果と同様に、ＺＴＳ－５６２ ＣＲＭのＣＲＡＲは、ウマ及びヒトタンパク質の場合には認められなかった。
ＺＴＳ－５６３ ＣＲＭは拘束性の１８－ｍｅｒであり、ＶＬ（配列番号６９；ＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号７０；ＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ）である）と対形成されたマウス抗体１５Ｈ０５（配列番号６７；ＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号６８；ＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ）である）と同一のＣＤＲを有する抗体が認識するネコＩＬ－３１タンパク質の部分を表す唯一のミモトープである。ＺＴＳ－５６３に対するイヌの応答についてのデータは、図１５Ａ～ＥのＴ０５群として示されている。ミモトープに対する種特異的反応について先に観察された結果と同様に、ネコミモトープ（ＺＴＳ－５６３）は、イヌにおいてネコ特異的な抗ＩＬ３１応答を誘発した。図１５Ａは、ＺＴＳ－５６３のワクチン接種に対する抗ネコＩＬ－３１力価応答が、３５日目に１：５０，０００超に達して７７日目までこのレベルを維持し、８４日目に中程度に低下したことを示している。Ｔ０５（ＺＴＳ－５６３）処置群を図１５Ａと１５Ｂとの間で比較すると、ネコＩＬ－３１とネコＩＬ－３１ １５Ｈ０５変異型との間の力価の差が明確に分かる。（野生型タンパク質と比較した場合の）変異型タンパク質に対する力価の時間依存的減少は、免疫応答のかなりの部分が、ミモトープＺＴＳ－５６３によって表されるタンパク質の非常に特定的な部分に向けられていることを示すものである。注目すべきことには、抗イヌＩＬ－３１応答は中程度から低いものであった。これは、２つの種のアミノ酸配列の微妙な違いに対し、イヌ免疫系が生成する種特異的応答をさらに支持するものである。ＺＴＳ－５６３のワクチン接種は、イヌにおいてウマのＩＬ－３１タンパク質に対しＣＲＡＲを生成した唯一のミモトープである。これらの観察結果は、ミモトープ配列の微妙な変化が種特異性をもたらす可能性があり、また種間の免疫原性応答も付与する可能性があることを示している。これらの特性を理解することは、この技術を用いて単一種または複数種で使用するためのＩＬ－３１指向性ワクチンを設計する上で有益である。
最後はＺＴＳ－５６４ ＣＲＭであり、これはＺＴＳ－５６１と同一の拘束性１８－ｍｅｒであるが、ただし代替的リンカーｍＴ２ｂを利用している（図１５Ａ）。ＺＴＳ－５６４ ＣＲＭは、ＶＬ（配列番号６９；ＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号７０；ＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ）である）と対形成されたマウス抗体１５Ｈ０５（配列番号６７；ＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号６８；ＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ）である）と同一のＣＤＲを有する抗体が認識するイヌＩＬ－３１タンパク質の部分を表す。ＺＴＳ－５６４に対するイヌの応答についてのデータは、図１５Ａ～ＥのＴ０６群として示されている。他の観察結果と同様に、このミモトープによって誘発されたイヌの抗ネコＩＬ－３１応答は、ほとんどまたは全く認められなかった（図１５Ａ及び１５Ｂ）。ＺＴＳ－５６４によって生成された抗イヌＩＬ－３１応答は非常にロバストであった。図１５Ｃは、本試験における全ての処置群を示しており、Ｔ０６（ＺＴＳ－５６４）は、単回投与後にイヌＩＬ－３１に対する免疫応答を生成した唯一の群である。２回目及び３回目の投与後に生成された抗イヌＩＬ－３１力価は、３５日目から試験終了の８４日目まで最大のアッセイ応答（１：５００００超）をもたらした。ウマＩＬ－３１に対するＣＲＡＲは観察されなかったが、このミモトープでは、治療群の中で唯一、ヒトＩＬ－３１に対する一貫した応答が観察された。注目すべきことは、リンカーの化学的性質におけるこのような微妙な違いや、場合によってはｍＴ２ｂリンカーのより定義された制約によって、頻回投与の必要を軽減する可能性を秘めたより正確な指向性の抗ＩＬ－３１応答がもたらされることである。
この試験からのデータは、中和性抗ＩＬ－３１抗体１５Ｈ０５の結合部位を表すペプチドミメティックが動物における免疫応答を誘発可能であり、また、この免疫応答が抗体１５Ｈ０５のＣＤＲが認識するエピトープに対し向けられることを示している。これらのデータから、組換えＩＬ－３１共受容体を用いたこの抗血清のさらなる特性評価を使用して、このポリクローナル応答中に生成されるＩＬ－３１中和画分を定義することができると考えられる。これらの結果はさらに、アトピー性皮膚炎のようなＩＬ－３１媒介性障害に対するワクチンとしてのこのような使用アプローチの有用性を示唆する。
２．５．ＩＬ－３１ １５Ｈ０５ミモトープ免疫化ビーグル犬の形質細胞から単離した個別Ｂ細胞からのＩＬ－３１中和抗体の同定
上記のように、試験の３５及び８４日目にＰＢＭＣを分離する目的で血液を採取した。ロバストな１５Ｈ０５エピトープ指向性応答が見られた（図１５Ａ及び１５Ｂ）ことから、ＺＴＳ－５６３ ＣＲＭ（ネコミモトープ）をワクチン接種したＴ０５イヌ１頭からのＰＢＭＣを使用して、抗体陽性Ｂ細胞のさらなる評価を行った。ビーズに結合させた抗イヌＩｇＧ Ｆｃ抗体を用いて、活性化メモリーＢ細胞に対し、抗体を分泌する細胞をスクリーニングした。同時に、分泌されたＩｇＧに対し、野生型ネコＩＬ－３１に結合する能力及びネコＩＬ－３１ １５Ｈ０５変異型に結合する能力を評価した。これらの一次スクリーニングの結果によって、このＰＢＭＣ細胞集団から７つのヒットを選択する。これらの７つのヒットのうち、３つは１５Ｈ０５変異型に結合しなかった。このことは、これらのＢ細胞が、ＩＬ－３１ １５Ｈ０５ミモトープＺＴＳ－５６３で免疫化した結果として１５Ｈ０５エピトープを最も綿密に認識する抗体を作製していることを示すものである（データは示されず）。これらの７つのヒットに対する可変重鎖及び軽鎖をシークエンシングした後、本明細書で先に説明したように、組換え型完全イヌバージョンを構築し、ＨＥＫ細胞内で発現させ、精製した。これらの７つの組換え型イヌＩｇＧの再スクリーニングによって、ネコＩＬ－３１タンパク質への結合を保持した１つのヒット（ＺＩＬ１）のみが得られた（図４）。さらに、ＥＬＩＳＡ及びＢｉａｃｏｒｅ法を使用したところ、ＺＩＬ１のＩＬ－３１ １５Ｈ０５変異型への結合は減少しており、このことから、この抗体が抗体１５Ｈ０５としての共通のエピトープ領域に結合することが示される。セクション１．６及び図４（ＺＩＬ８～ＺＩＬ１７１）におけるイヌＢ細胞に直接由来するさらなるヒットは、全長ネコＩＬ－３１で免疫化したイヌからのもの、及び本明細書で先に説明されている他の組織源からのものであった。ＺＩＬ１抗体のみが、ペプチドミモトープのワクチン接種後のＰＢＭＣに由来するものであった。
これらの発見の重要な側面は、ＩＬ－３１タンパク質からのペプチドミモトープで免疫化した後に、イヌの血液循環中でｍＡｂ １５Ｈ０５エピトープ特異的抗体を分泌するＢ細胞を同定可能であることである。これらの結果から、抗体１５Ｈ０５の阻害作用の様式に関連することが知られているＩＬ－３１のエピトープ領域を模倣するペプチドを使用することの妥当性が確認される。ｍＡｂ １５Ｈ０５に由来するＣＤＲを有する抗体は、ｉｎ ｖｉｖｏでＩＬ－３１媒介性掻痒を防止可能であるため、これらの結果は、アトピー性皮膚炎のようなＩＬ－３１媒介性疾患を防止するためのワクチンアプローチとしての、エピトープに焦点を絞った免疫応答を生成するように設計されたミメティックによる免疫化の概念をさらに支持するものである。
２．６．抗体１５Ｈ０５及びその誘導体の同一性及び効力を測定するための捕捉試薬としてのＩＬ－３１ １５Ｈ０５ミモトープの使用
ＩＬ－３１ １５Ｈ０５ミモトープは、マウス前駆細胞ｍＡｂ １５Ｈ０５からのＣＤＲが認識するＩＬ－３１タンパク質上の結合部位を表す。前述のように、製造全体にわたって抗体産生プロセスをモニターするには、ＥＬＩＳＡ（またはその他の）アッセイ形式で使用するためのこのような試薬を有することが望ましい。本明細書では、説明されているこのようなミモトープの有用性は、抗ＩＬ－３１抗体の生産ロットを行う際に、生産された抗体の同一性及び量を検証するための分析アッセイでペプチドミモトープを使用するといった有用性であると考えられる。
２．７．抗体レベルを測定するための、または宿主種のＩＬ－３１レベルを定量するための診断法としてのＩＬ－３１ １５Ｈ０５ミモトープの使用
本明細書ではさらに、説明されているペプチドミモトープは、アトピー性皮膚炎のようなＩＬ－３１媒介性障害に対する治療薬で治療した後の宿主における循環抗体の量を測定するための分析アッセイ試薬として使用されることが考えられる。動物からの体液を、固体表面に結合しているミモトープに直接添加し、次いで適切な二次検出試薬を添加して、抗体のレベルを定量化する。加えて、ミモトープを使用して、アッセイで検出するために標識された抗体を捕捉するというアッセイ設計がここでは考えられる。この捕捉された抗体は、結合したミモトープに対し、宿主種のネイティブ循環ＩＬ－３１の親和性よりも低い親和性を有すると考えられる。この実施形態において、宿主種に由来する液のインキュベートは、固体表面に繋留した標識抗体：ミモトープ複合体と共にインキュベートされる。宿主種に由来する試験液中にＩＬ－３１が存在すれば抗体に対する親和性がより高いため、標識抗体は固体表面から遊離し、洗浄ステップ中に除去され得る。したがって、試験液中のＩＬ－３１レベルは、ミモトープ結合表面に現れるシグナルの欠如と相関する可能性がある。このようなアッセイは、診断試験としての使用のための研究または臨床設定でＩＬ－３１を測定するのに有用であると考えられている。
２．８．ＩＬ－３１ミモトープ及び全長イヌＩＬ－３１タンパク質でビーグル犬を免疫化した後のＩＬ－３１に対する血清力価
セクション２．３で説明されている試験設計のようにして、純血種の去勢オスビーグル犬を用いて第２の血清学試験を実施し、ただしこの試験では異なるミモトープを比較した。純血種のオスビーグル犬に、ＺＡ－０１でアジュバント添加した結合体化ＩＬ－３１ミモトープを皮下投与した。ＺＡ－０１中のＣＲＭ－１９７結合体化イヌＩＬ－３１（配列番号１５５；イヌ＿ＩＬ－３１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１５６；イヌ＿ＩＬ－３１）である）（Ｔ０１）を含むものを対照群に含めた。１０μｇ／用量の各アジュバント添加ミモトープまたは対照を、０、２８、及び５６日目に皮下投与した（２０μｇ／ｍｌ溶液中の０．５ｍｌ）。血清用の血液は、－１、０日目（投与前）、１４、２８日目（投与前）、４２、５６日目（投与前）、７０、及び８４日目に採取した。加えて、－１、３５、及び６３日目に、各動物からおよそ４０ｍｌの血液をリチウムヘパリンチューブに収集し、標準的な方法を用いてＰＢＭＣ単離用に処理した。ＰＢＭＣを単離後、抗原特異的Ｂ細胞のさらなる評価を行うまで凍結保存した。
処置群１（全長イヌＩＬ－３１ ＣＲＭ）は、全長ネコタンパク質を用いたセクション２．４で説明されている原理的説明のように、タンパク質配列全体にまたがる複数のエピトープに対する適応免疫応答を表す。図１６Ａは、試験処置群の概要を説明する表を示している。Ｔ０１に関して説明されている全長タンパク質に加えて、イヌ（Ｔ０２、ＺＴＳ－４２０）及びヒト（Ｔ０３、ＺＴＳ－４２１）上の１５Ｈ０５エピトープを表す２つのミモトープを使用した。ＺＴＳ－４２０は、ネコ血清学試験で先に説明したＺＴＳ－５６１に類似しているが、ＺＴＳ－４２０は、ＺＴＳ－５６１に見られるｍＴ２ａリンカーと比較して、ペプチドのＮ末端及びＣ末端のシステインによって形成されるジスルフィド結合によって拘束されている。ＺＴＳ－４２１は、ヒトＩＬ－３１タンパク質（配列番号１８１；ヒト＿ＩＬ－３１）上の相同領域であり、図１３Ａで説明されているｍＴ２ｂリンカーによるＮ末端及びＣ末端の連結によって拘束されている。抗体１５Ｈ０５の結合に関与するキーとなるアミノ酸配列に対する言及は、図１２で見いだすことができる。イヌにおけるＩＬ－３１媒介性ｐＳＴＡＴシグナル伝達及びＩＬ－３１媒介性掻痒を中和することが知られている（Ｂａｍｍｅｒｔ， ｅｔ ａｌ．に対するＵＳ８７９０６５１）２つの抗体を用いて、先に説明したイヌＩＬ－３１上のキーとなる抗体結合領域における免疫原性の可能性を検討するために、第４の群を含めた。ネコＩＬ－３１上のこの領域は、図６Ｂで示されているホモロジーモデルで強調表示されている。ＩＬ－３１のモデルは、ヘリックスが交互の上下トポロジーを形成する４ヘリックスドメインサイトカインとして受け入れられている。さらなる説明のため、イヌＩＬ－３１（配列番号１５５；イヌ＿ＩＬ－３１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１５６；イヌ＿ＩＬ－３１）である）上のこれらの４つのヘリックスに関するＩＬ－３１タンパク質の構造を、他の種からの相同ＩＬ－３１タンパク質の対応する位置に関連して説明する（図１）。ヘリックスＡは約アミノ酸３３～５９の配列から構成され、ヘリックスＢは約アミノ酸８３～９８の配列から構成され、ヘリックスＣは約アミノ酸１０１～１１４の配列から構成され、ヘリックスＤは約アミノ酸１２９～１５６の配列から構成されている。定義されたループ領域は、約アミノ酸９７～１０１の間に存在する。ヘリックスＡに続くループは約アミノ酸５７～６２に存在し、ヘリックスＤに先行するループは約アミノ酸１２６～１２９に存在する。予測された二次構造が欠如した任意の介在配列は、ランダムコイルと称される。処置群４（ＺＴＳ－７６６）は、イヌＩＬ－３１のヘリックスＢ及びＣを表すミモトープであり、ＣＲＭ－１９７担体タンパク質の結合を容易にするＮ末端側システイン残基を含む。ＩＬ－３１タンパク質のこの領域のペプチド配列アラインメントは図１６Ｂに示されており、対応する配列参照番号及びアミノ酸位置の注釈付きでイヌ、ネコ、ウマ、及びヒトのタンパク質を比較している。
力価は間接ＥＬＩＳＡを用いて定量し、間接ＥＬＩＳＡでは全長ＩＬ－３１タンパク質をそれぞれのアッセイの捕捉材料として使用した。各試験群からの血清に対し、イヌ及びヒトＩＬ－３１タンパク質への結合をアッセイした（それぞれ図１７Ａ及び１７Ｂ）。ＣＲＭ－１９７結合体化全長イヌＩＬ－３１タンパク質（Ｔ０１）をワクチン接種したイヌは、２８日目の２回目投与後、４２日目に中程度の力価の増加を示した。この群は、試験期間中に力価の漸減を示し、５６日目に３回目を投与した後も漸減した。ＩＬ－３１タンパク質上の全てのエピトープ（中和及び非中和の両方）に全般的に応答することと、力価が低いここととを考慮すれば、全長ＩＬ－３１タンパク質によるワクチン接種がワクチン開発の有力な候補となる可能性は低い。この試験の群２（ＺＴＳ－４２０）は、セクション２．４で説明されているＺＴＳ－５６１のようなイヌ１５Ｈ０５ミモトープであるが、ＺＴＳ－５６１におけるｍＴ２ａリンカーに対し、ＺＴＳ－４２０は、ペプチドのＮ末端及びＣ末端に付加されたシステイン間のジスルフィド結合によって拘束されている。このミモトープは、ｍＴ２ａ拘束性形態と比較してロバストな免疫応答を生成しなかった（図１７Ａを１５Ｃと比較されたい）。５６日目の３回目投与後、８４日目に中程度の力価の増加が観察される。ジスルフィド環化が不十分であるかまたはＣＲＭ－１９７の結合体化中に修飾され、その結果イヌの免疫細胞に対する免疫原の提示が最適でなかった可能性がある。イヌＩＬ－３１のヘリックスＢ及びＣを表す第４群（ＺＴＳ－７６６）が最もロバストな応答をもたらし、２８日目の２回目の投与後に力価が出現し、試験完了時の８４日目まで増加した。先に説明されているこの配列を認識する抗体のＩＬ－３１中和能力を考慮すれば、このミモトープは、ＩＬ－３１媒介性障害を防止するための有望なワクチン候補となる。処置群３（ＺＴＳ－４２１）は、ミモトープのこの領域内でヒトＩＬ－３１配列を使用する１５Ｈ０５エピトープである。興味深いことに、このミモトープをワクチン接種したイヌはいずれも、イヌＩＬ－３１タンパク質に対する応答を生じなかった（データは示されず）が、２回目及び３回目の投与後にヒトＩＬ－３１タンパク質に対する免疫応答が観察された（図１７Ｂ）。１５Ｈ０５ミモトープのコアエピトープ領域間の配列の類似性を考慮すれば、これは、イヌの抗ヒトＩＬ－３１応答における注目すべき特異性である（図１２）。
２．９．ＩＬ－３１ネコ及びウマミモトープならびに全長ＩＬ－３１ネコタンパク質で実験用ネコを免疫化した後のＩＬ－３１に対する血清力価
セクション２．３で説明されている試験設計のようにして、実験用ネコを用いて血清学試験を実施し、ただしこの試験ではネコ及びウマのミモトープを比較した。実験用ネコに、糖脂質アジュバントＢａｙ Ｒ１００５（Ｎ－（２－デオキシ－２－Ｌ－ロイシルアミノ－β－Ｄ－グルコピラノシル）－Ｎ－オクタデシルドデカノイルアミドヒドロアセテート）及びＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む混合物をアジュバント添加した結合体化ＩＬ－３１ミモトープを皮下投与した。糖脂質アジュバントＢａｙ Ｒ１００５（Ｎ－（２－デオキシ－２－Ｌ－ロイシルアミノ－β－Ｄ－グルコピラノシル）－Ｎ－オクタデシルドデカノイルアミドヒドロアセテート）及びＣｐＧオリゴヌクレオチドを含むアジュバント混合物中にＣＲＭ－１９７結合体化ネコＩＬ－３１（配列番号１５７；ネコ＿ＩＬ３１＿野生型）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１５８；ネコ＿ＩＬ－３１＿野生型）である）を含む対照群を含めた。（Ｔ０１）１０μｇ／用量の各アジュバント添加ミモトープまたは対照を０、２８、及び５６日目に皮下投与した（２０μｇ／ｍｌ溶液の０．５ｍｌ）。血清用の血液は、－１４、０日目（投与前）、２８日目（投与前）、４２、５６日目（投与前）、７０、及び８４日目に採取した。加えて、３５及び６３日目に、各動物からおよそ４０ｍｌの血液をリチウムヘパリンチューブに収集し、標準的な方法を用いてＰＢＭＣ単離用に処理した。ＰＢＭＣを単離後、抗原特異的Ｂ細胞のさらなる評価を行うまで凍結保存した。試験処置群の概要を図１８Ａに示す。ＺＴＳ－５６３（Ｔ０２）については、以前のイヌ血清学試験で使用した免疫原として本明細書のセクション２．４で説明されている。ＺＴＳ－５６３は、ＣＲＭ－１９７と結合体化したｍＴ２ａ拘束性１５Ｈ０５ミモトープである。Ｔ０３（ＺＴＳ－４１８）は、ウマの配列を有する１５Ｈ０５ミモトープである（図１６Ａにある相同のイヌバージョンＺＴＳ－４２０と比較されたい）。処置群４はＺＴＳ－４２３であり、ネコＩＬ－３１配列を有するセクション２．８で説明されているＢＣヘリックスを表すミモトープペプチドである。処置群５はＺＴＳ－４２２であり、アミノヘキサン酸（Ａｈｘ）ｍＴ２ｂリンカーを有するネコ１５Ｈ０５ミモトープである。図１８Ｂは、間接ＥＬＩＳＡを用いた－１４、４２、及び８４日目における全長ネコＩＬ－３１に対する処置群Ｔ０１、Ｔ０２、Ｔ０４、及びＴ０５の血清抗体応答の結果を示している（Ｔ０３にはネコＩＬ－３１タンパク質に対するＣＲＡＲが認められなかった（データは示されず））。ここでもまた、全長ＩＬ－３１タンパク質（Ｔ０１）の結合体形態はネコにおいて最も低い抗体応答を示し、全長ＩＬ－３１に対する力価は試験期間中１：２００００を超えなかった。Ｔ０２（ＺＴＳ－５６３）は、試験全体にわたり中程度の応答を示し、８４日目まで用量依存的に増加した。このことから、このネコ１５Ｈ０５エピトープの表現が好適なワクチンであり得ることが示される。ＺＴＳ－４２３（Ｔ０４）の３回投与後のネコにおける全長ネコＩＬ－３１タンパク質に対する平均力価は、用量依存的に増加し、２回目及び３回目の投与後に１：１００，０００超に達した。これは、関連性の高いエピトープ領域に対する著明な免疫応答を示すものである。また、ＡｈＸ ｍＴ２ｂリンカーを有する１５Ｈ０５ミモトープを表すＺＴＳ－４２２（Ｔ０５）も、ネコにおいてロバストな免疫応答を示し、力価は２回目及び３回目の投与後に１：１０００００を超えた。この形態の１５Ｈ０５エピトープは、明らかにＩＬ－３１タンパク質のこの領域の適切な表現であり、ｉｎ ｖｉｖｏのＩＬ－３１活性を中和するための有望なワクチンミモトープとなる。
２．１０．ワクチンとして使用するためのミモトープを適切に設計するための配列及び構造上の考慮事項
本明細書では、由来種のアミノ酸に対応する固有の配列を有するＩＬ－３１タンパク質（ミモトープ）上のエピトープにおけるいくつかのペプチド表現が説明されている。ワクチン設計の最終的な目的は、免疫系が認識しロバストで特異的な応答を生成するエピトープを描写することである。ワクチン設計は、限定されるものではないが、ＣＲＭ－１９７のような担体タンパク質を添加することや、アジュバントを用いた製剤化によって促進される。本明細書では、結合する抗体の特性に基づいて同定されたエピトープの例が説明されている。キーとなるエピトープは、抗体が結合したときに、さらにＩＬ－３１ＲＡ：ＯＳＭＲ受容体複合体を係合させることができず、そのため細胞培養液中でまたはｉｎ ｖｉｖｏでｐＳＴＡＴシグナル伝達を誘発することができないＩＬ－３１タンパク質上の領域である。そのため、ＩＬ－３１媒介性受容体シグナル伝達の遮断は、アトピー性皮膚炎のようなＩＬ－３１媒介性障害を防止及び／または治療予防するための１つのアプローチである。
変異技法を用いたタンパク質上の抗体結合部位のマッピングは、Ｂａｍｍｅｒｔ， ｅｔ ａｌ．に対するＵＳ８７９０６５１で過去にＩＬ－３１について説明されているように、抗体：抗原認識に関与するキーとなる残基を同定するための有効な方法である。この知見に基づくことで、イヌ及びネコにおいてロバストな抗ＩＬ－３１応答を誘発する有効な免疫原として本明細書で説明されているイヌ及びネコＢＣヘリックスミモトープの設計が可能になった。最近、抗イヌＩＬ－３１抗体Ｍ１４をマッピングするためのＧＳＴイヌＩＬ－３１融合タンパク質を用いた別の方法が説明されている（ＷＯ２０１８／１５６３６７（Ｋｉｎｄｒｅｄ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．））。この著者らは、アミノ酸ＰＳＤＸ１Ｘ２ＫＩ（配列番号１５５、アミノ酸３４～４０）（式中、Ｘは任意のアミノ酸である）から構成されたＭ１４抗体が認識する最小エピトープ配列を定義することを試みた。この配列を相同のＩＬ－３１種と比較しながら説明したものは、図１９Ａで見いだすことができる。上記の周囲の隣接配列を含めたさらなる説明は、図１９Ｂに示されている。図１９Ｂに示されている最小結合フラグメント（アミノ酸３４～４２の周りの灰色の影付き囲み）を同定した後、著者らはこのペプチドフラグメントのＧＳＴ融合を用いて各位置におけるアラニン置換を生成した。これらのデータから、上記のＭ１４最小結合フラグメントが説明された。このアプローチの根本的な欠陥は、説明されている結合フラグメントの性質が、ＧＳＴ融合タンパク質の文脈においてその構造に依存していることである。単一の理論に拘束されるわけではないが、Ｍ１４抗体が認識するアミノ酸配列は、本明細書でヘリックスＡとして説明されている秩序化されたアルファヘリックスドメインの一部であると考えられている。ペプチド及びタンパク質内のアルファヘリックスは、限定されるものではないが、カルボニルの酸素とアミン骨格基の窒素との間の水素結合パターンの協調によって存在する（Ｃｏｒｅｙ－Ｐａｕｌｉｎｇ ｒｕｌｅｓ，ａ ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００８）。Ｍ１４抗体に対し説明されている最小結合フラグメントは、ＧＳＴスキャフォールドの不在下での結合特性に対する証拠がないため、エピトープの妥当な説明となるとは考えられていない。さらに、報告されたＭ１４エピトープを含めてこれを取り囲む配列の組成は、非極性アミノ酸（Ｉ、Ｌ、Ｖ、Ｐ、Ｇ、Ａ、Ｍ）を豊富に含む（図１９Ｂ）。ペプチド内のこれらのアミノ酸の物理的特性は、介在する極性アミノ酸または荷電アミノ酸が存在しない場合、水不溶性で無秩序な二次構造をもたらす。そのため、本明細書では、ＷＯ２０１８／１５６３６７（Ｋｉｎｄｒｅｄ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）で説明されているＭ１４抗体の最小結合フラグメントは、ＧＳＴ融合産物が付与する特性に依存しており、ペプチド自体に固有のものではないと考えられている。
ＩＬ－３１エピトープにおけるいくつかのペプチド提示が本明細書で説明されており、その特性は、融合タンパク質の非存在下で独立したペプチドとして存在する。これはセクション２．２（図１３Ｂ）で例示されており、結合体化形態及び非結合体化形態の両方における１５Ｈ０５クラスのミモトープの結合特性及び阻害特性が示されている。ペプチドの二次構造的特徴に加えて、一次アミノ酸配列は、Ｔ細胞の表面上での適切な提示に必要とされる、もう１つのキーとなるワクチン設計の局面に相当する。適切なアミノ酸配列は、Ｂ及びＴ細胞エピトープを有する担体タンパク質と共に、ＩＬ－３１タンパク質上のキーとなる領域に対し、直接的に免疫応答を誘発する。ＩＬ－３１上の複数の領域が、イヌ及びネコにおける指向性免疫応答の誘発に適しているものとして本明細書で説明されている。ワクチンミモトープの成否は本明細書で説明されている因子に依存し、最終的にはｉｎ ｖｉｖｏで、応答の有効性によって判定される。ただし、本明細書で説明されているＩＬ－３１上のいくつかのエピトープ領域から学んだことに基づけば、好適なワクチンミモトープをもたらすエピトープが他にも存在し得ると考えられる。抗体１５Ｈ０５は、図６Ｂで部位２として示されているヘリックスＤに先行するループを認識する。タンパク質上の他のループは、場合によっては抗体によってアクセス可能なエピトープを表すと考えられる。一例として、ヘリックスＡ及び後続のランダムコイル配列の収束によって形成されるループは、１５Ｈ０５ループのような位置的及び構造的属性を共有する。このＡＢループについては、図２０で複数種からの一次アミノ酸配列と比較しながら説明されている。単一の例としてこれに限定されることは望まないが、他のこのようなタンパク質上の領域は免疫原性を共有し得ると考えられている。
２．１１．全長ウマＩＬ－３１タンパク質をマウスにワクチン接種した後のウマＩＬ－３１ミモトープに対する血清力価
本出願のセクション１．６で説明されている方法のようにＣＲＭ－１９７と結合体化した全長ウマＩＬ－３１（配列番号１６５；ウマ＿ＩＬ－３１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１６６；イヌ＿ＩＬ－３１）である）でマウスを免疫化した。本明細書で説明されている３つのエピトープ領域を表すビオチン結合ペプチドをバイオレイヤー干渉結合アッセイ（Ｏｃｔｅｔ，ＦｏｒｔｅＢｉｏ）用に設計した。これらのペプチドについては、図２１Ａで説明されている。各ペプチドは、Ｎ末端側ビオチンと、図面内で太字の下線付きテキストで注釈が付された３アミノ酸スペーサー配列（ＧＳＧ）とを含む。配列番号１６５からの対応するアミノ酸配列位置番号も図面に示されている。１５Ｈ０５ミモトープは、ジスルフィド結合による環化を促進するために２つの末端側システイン残基（これも太字及び下線で強調表示されている）を含む。図２１Ｂは、バイオレイヤー干渉法の結果を示しており、この方法では、図２１Ａで説明されているペプチドをストレプトアビジンコーティングピンに固定化し、次いでこれを使用して、マウス抗ウマＩＬ－３１または対照マウス血清の複数の希釈物をプローブする。対照マウス血清は、無関係のタンパク質をワクチン接種したマウスからの血清とした。応答（ここでは、抗血清会合から１２０秒後のシグナルの振幅として説明される）は、図面のｙ軸に表される。これらのデータから、完全ウマＩＬ－３１タンパク質上のエピトープ提示から生じる免疫応答を評価することができる。さらに、このような免疫応答が認識するこれらのＩＬ－３１ミモトープの能力は、結合によって評価することができる。これらのデータは、説明されている３つのミモトープペプチド（１５Ｈ０５、ＢＣヘリックス、及びＡヘリックス）の全てが、ｉｎ ｖｉｖｏでのウマＩＬ－３１タンパク質の処理及び提示から、関連する免疫原として認識されることを示すものである。Ａヘリックス以外の各ミモトープに対する対照血清の結合で最小限のシグナルが観察され、Ａヘリックスに対する結合ではいくらかの希釈依存的シグナルが示された。全長タンパク質に対する免疫応答を誘発する、本明細書で説明されているミモトープの提示と同様、この実験は、これらのエピトープの相互的検証を説明するものであり、ミモトープに対するタンパク質からの免疫応答が検証されている。

Claims (19)

  1. ＩＬ－３１媒介性障害に対し、イヌ、ネコ、またはウマである哺乳類を免疫化及び／または保護するためのワクチン組成物であって、
    担体ポリペプチドと、少なくとも１つのＩＬ－３１ペプチドミモトープとの組合せ、ならびに
    アジュバントを含み、
    前記ＩＬ－３１ペプチドミモトープは５～４０アミノ酸残基の長さであり、以下の（ｉ）～（ｉｖ）からなる群から選択される、前記ワクチン組成物：
    （ｉ）アミノ酸配列ＳＶＰＡＤＴＦＥＣＫＳＦ（配列番号１８６）、ＳＶＰＡＤＴＦＥＲＫＳＦ（配列番号１８７）、ＮＳＳＡＩＬＰＹＦＲＡＩＲＰＬＳＤＫＮＩＩＤＫＩＩＥＱＬＤＫＬＫＦ（配列番号１９２）、ＡＰＴＨＱＬＰＰＳＤＶＲＫＩＩＬＥＬＱＰＬＳＲＧ（配列番号１９６）、もしくはＴＧＶＰＥＳ（配列番号２００）である、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む、イヌＩＬ－３１ミモトープ；
    （ｉｉ）アミノ酸配列ＳＭＰＡＤＮＦＥＲＫＮＦ（配列番号１８８）、ＮＧＳＡＩＬＰＹＦＲＡＩＲＰＬＳＤＫＮＴＩＤＫＩＩＥＱＬＤＫＬＫＦ（配列番号１９３）、ＡＰＡＨＲＬＱＰＳＤＩＲＫＩＩＬＥＬＲＰＭＳＫＧ（配列番号１９７）、もしくはＩＧＬＰＥＳ（配列番号２０１）である、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む、ネコＩＬ－３１ミモトープ；
    （ｉｉｉ）アミノ酸配列ＳＭＰＴＤＮＦＥＲＫＲＦ（配列番号１８９）、ＮＳＳＡＩＬＰＹＦＫＡＩＳＰＳＬＮＮＤＫＳＬＹＩＩＥＱＬＤＫＬＮＦ（配列番号１９４）、ＧＰＩＹＱＬＱＰＫＥＩＱＡＩＩＶＥＬＱＮＬＳ ＫＫ（配列番号１９８）、もしくはＫＧＶＱＫＦ（配列番号２０２）である、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む、ウマＩＬ－３１ミモトープ；
    （ｉｖ）アミノ酸配列ＳＶＰＴＤＴＨＥＣＫＲＦ（配列番号１９０）、ＳＶＰＴＤＴＨＥＲＫＲＦ（配列番号１９１）、ＨＳＰＡＩＲＡＹＬＫＴＩＲＱＬＤＮＫＳＶＩＤＥＩＩＥＨＬＤＫＬＩＦ（配列番号１９５）、ＬＰＶＲＬＬＲＰＳＤＤＶＱＫＩＶＥＥＬＱＳＬＳＫＭ（配列番号１９９）、もしくはＫＧＶＬＶＳ（配列番号２０３）である、及び／またはその一部としてこれらの配列のいずれかを含む、ヒトＩＬ－３１ミモトープ。
  2. 前記ミモトープが、哺乳類のＩＬ－３１タンパク質とその共受容体との相互作用に関与する前記ＩＬ－３１タンパク質上の領域に特異的に結合する抗ＩＬ－３１抗体またはその抗原結合部分に結合する、請求項１に記載のワクチン組成物。
  3. 前記抗体の前記領域への前記結合が、以下：
    ａ）配列番号１５７（ネコ＿ＩＬ３１＿野生型）によって表されるネコＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１２４から１３５の間の領域、
    ｂ）配列番号１５５（イヌ＿ＩＬ３１）によって表されるイヌＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１２４から１３５の間の領域、及び
    ｃ）配列番号１６５（ウマ＿ＩＬ３１）によって表されるウマＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１１８から１２９の間の領域
    からなる群より選択される１５Ｈ０５エピトープ結合領域の変異によって影響を受ける、請求項２に記載のワクチン組成物。
  4. 前記ミモトープが、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列の組合せ：
    １）抗体１５Ｈ０５：可変重鎖（ＶＨ）－ＣＤＲ１がＳＹＴＩＨ（配列番号１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＮＩＮＰＴＳＧＹＴＥＮＮＱＲＦＫＤ（配列番号２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＧＦＫＹＤＧＥＷＳＦＤＶ（配列番号３）、可変軽鎖（ＶＬ）－ＣＤＲ１がＲＡＳＱＧＩＳＩＷＬＳ（配列番号４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＡＳＮＬＨＩ（配列番号５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＬＱＳＱＴＹＰＬＴ（配列番号６）、
    ２）抗体ＺＩＬ１：可変重鎖（ＶＨ）－ＣＤＲ１がＳＹＧＭＳ（配列番号１３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＨＩＮＳＧＧＳＳＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号１４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＶＹＴＴＬＡＡＦＷＴＤＮＦＤＹ（配列番号１５）、可変軽鎖（ＶＬ）－ＣＤＲ１がＳＧＳＴＮＮＩＧＩＬＡＡＴ（配列番号１６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＳＤＧＮＲＰＳ（配列番号１７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＳＦＤＴＴＬＤＡＹＶ（配列番号１８）、
    ３）抗体ＺＩＬ８：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＹＡＭＳ（配列番号１９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＤＳＶＧＳＧＴＳＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号２０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＦＰＧＳＦＥＨ（配列番号２１）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＴＧＳＳＳＮＩＧＳＧＹＶＧ（配列番号２２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＹＮＳＤＲＰＳ（配列番号２３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＶＹＤＲＴＦＮＡＶ（配列番号２４）、
    ４）抗体ＺＩＬ９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＤＭＴ（配列番号２５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＤＶＮＳＧＧＴＧＴＡＹＡＶＡＶＫＧ（配列番号２６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＬＧＶＲＤＧＬＳＶ（配列番号２７）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＥＹＹＴＱ（配列番号２８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＲＤＴＥＲＰＳ（配列番号２９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＤＴＧＴＬＶ（配列番号３０）、
    ５）抗体ＺＩＬ１１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号３１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦＤＹ（配列番号３３）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＳＮＹＹＡＱ（配列番号３４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号３５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号３６）、
    ６）抗体ＺＩＬ６９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＡＭＫ（配列番号３７）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＴＩＮＮＤＧＴＲＴＧＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３８）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＮＡＥＳＧＣＴＧＤＨＣＰＰＹ（配列番号３９）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＫＹＹＡＱ（配列番号４０）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号４１）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＥＴＮＶ（配列番号４２）、
    ７）抗体ＺＩＬ９４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＦＭＳ（配列番号４３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＬＩＳＳＤＧＳＧＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号４４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＦＷＲＡＦＮＤ（配列番号４５）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＧＬＮＳＧＳＶＳＴＳＮＹＰＧ（配列番号４６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＤＴＧＳＲＰＳ（配列番号４７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＬＹＴＤＳＤＩＬＶ（配列番号４８）、
    ８）抗体ＺＩＬ１５４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＲＧＭＳ（配列番号４９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＹＩＲＹＤＧＳＲＴＤＹＡＤＡＶＥＧ（配列番号５０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＤＧＳＳＦＤＹ（配列番号５１）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＡＳＱＳＬＬＨＳＤＧＮＴＹＬＤ（配列番号５２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＶＳＮＲＤＰ（配列番号５３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＭＱＡＩＨＦＰＬＴ（配列番号５４）、
    ９）抗体ＺＩＬ１５９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＶＭＴ（配列番号５５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＮＳＥＧＳＲＴＡＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号５６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＤＩＶＡＴＧＴＳＹ（配列番号５７）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＴＬＮＲＦＹＴＱ（配列番号５８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号５９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＫＳＡＶＳＩＤＶＧＶ（配列番号６０）、
    １０）抗体ＺＩＬ１７１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号６１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号６２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦＤＹ（配列番号６３）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＫＳＬＳＹＹＹＡＱ（配列番号６４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号６５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号６６）、または
    １１）ＶＨまたはＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３のうちの少なくとも１つにおける１つ以上のアミノ酸残基の付加、欠失、及び／または置換によってそれぞれの親抗体１５Ｈ０５、ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、もしくはＺＩＬ１７１と相違する、１）～１０）のバリアント
    のうちの少なくとも１つを含む、抗ＩＬ－３１抗体またはその抗原結合部分に結合する、請求項２に記載のワクチン組成物。
  5. 前記ミモトープが拘束性ミモトープである、請求項１～４のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
  6. 前記拘束性ミモトープが化学的に連結した環状ペプチドである、請求項５に記載のワクチン組成物。
  7. 前記ミモトープが前記担体ポリペプチドと化学的に結合している、請求項１～６のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
  8. 前記担体ポリペプチド及び前記ミモトープが組換え融合タンパク質の一部である、請求項１～６のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
  9. 前記担体ポリペプチドが、細菌トキソイドもしくはその誘導体、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、またはウイルス様粒子を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
  10. 前記細菌トキソイドまたは誘導体が、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、Ｂ群Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓからの外膜タンパク質複合体、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素、またはジフテリア毒素の無毒性変異型（ＣＲＭ１９７）である、請求項９に記載のワクチン組成物。
  11. 前記ウイルス様粒子が、ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ、Ｅ．ｃｏｌｉバクテリオファージＱベータ、ノーウォークウイルス、犬ジステンパーウイルス（ＣＤＶ）、またはインフルエンザＨＡである、請求項９に記載のワクチン組成物。
  12. 前記担体ポリペプチドが、ＣＲＭ１９７を含むまたはそれからなる、請求項１０に記載のワクチン組成物。
  13. 前記アジュバントが、水中油型アジュバント、ポリマー及び水アジュバント、油中水型アジュバント、水酸化アルミニウムアジュバント、ビタミンＥアジュバント、ならびにこれらの組合せからなる群より選択される、請求項１～１２のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
  14. 前記アジュバントが、サポニン、ステロール、第４級アンモニウム化合物、及びポリマーを含む製剤である、請求項１～１３のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
  15. 前記サポニンがＱｕｉｌ Ａまたはその精製画分であり、前記ステロールがコレステロールであり、前記第４級アンモニウム化合物がジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド（ＤＤＡ）であり、前記ポリマーがポリアクリル酸である、請求項１４に記載のワクチン組成物。
  16. 前記アジュバントが、１つ以上の単離免疫刺激性オリゴヌクレオチド、ステロール、及びサポニンの組合せを含む、請求項１～１３のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
  17. 前記１つ以上の単離免疫刺激性オリゴヌクレオチドがＣｐＧを含み、前記ステロールがコレステロールであり、前記サポニンがＱｕｉｌ Ａまたはその精製画分である、請求項１６に記載のワクチン組成物。
  18. ＩＬ－３１媒介性障害に対し哺乳類を保護する方法であって、請求項１～１７のいずれか１項に記載のワクチン組成物を前記哺乳類に投与することを含み、前記哺乳類はイヌ、ネコ、及びウマからなる群から選択される、前記方法。
  19. 前記ワクチン組成物に含まれる前記ＩＬ－３１ミモトープが、用量当たり約１０μｇ～約１００μｇで前記哺乳類に投与される、請求項１８に記載の方法。
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