JP7469432B2 - 抗ｇｐｒｃ５ｄ抗体、ｇｐｒｃ５ｄとｃｄ３を結合する二重特異性抗原結合分子、及びその使用 - Google Patents

抗ｇｐｒｃ５ｄ抗体、ｇｐｒｃ５ｄとｃｄ３を結合する二重特異性抗原結合分子、及びその使用 Download PDF

Info

Publication number
JP7469432B2
JP7469432B2 JP2022173361A JP2022173361A JP7469432B2 JP 7469432 B2 JP7469432 B2 JP 7469432B2 JP 2022173361 A JP2022173361 A JP 2022173361A JP 2022173361 A JP2022173361 A JP 2022173361A JP 7469432 B2 JP7469432 B2 JP 7469432B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
antibody
seq
gprc5d
antigen
binding fragment
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
JP2022173361A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2023011774A (ja
Inventor
アター，リカルド
チン，ダイアナ
エダヴェッタル，スザンヌ
ガウデート，フランコイス
リ，インジェ
ルイストロ，レオポルド
マジェースキー，ネイサン
メンドンカ，マーク
ピラリセッティ，コンダンダラム
テプリアコフ，アレクシー
トルネッタ，マーク
Original Assignee
ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド filed Critical ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド
Publication of JP2023011774A publication Critical patent/JP2023011774A/ja
Priority to JP2024013728A priority Critical patent/JP2024054176A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP7469432B2 publication Critical patent/JP7469432B2/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/91—Cell lines ; Processes using cell lines
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Description

（関連出願の相互参照）
本出願は２０１６年７月２０日に出願された米国仮特許出願第６２／３６４，８１１号
の優先権を主張するものである。前述の出願の全内容は、その全体が参照により本明細書
に組み込まれる。
（配列表）
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出済みの配列表を含み、その配列表の
全体を参照により本明細書に援用するものである。当該ＡＳＣＩＩのコピーは、２０１７
年６月２８日に作成され、ファイル名はＰＲＤ３４２２ＵＳＮＰ＿ＳＬ．ｔｘｔであり、
そのサイズは５７，６７３バイトである。
（発明の分野）
本明細書に提供される開示は、Ｇタンパク質連結受容体クラスＣグループ５メンバーＤ
（ＧＰＲＣ５Ｄ）に特異的に結合するモノクローナル抗体、ＧＰＲＣ５Ｄ及びクラスター
決定因子３（ＣＤ３）に特異的に結合する多重特異的抗体、並びに記載された抗体の生成
方法及び使用方法に関する。
多発性骨髄腫（ＭＭ）は、２番目に多い血液系腫瘍であり、がんによる全死亡者の２％
を占める。ＭＭは、異質性疾患であり、ほとんどが特にｔ（１１；１４），ｔ（４；１４
），ｔ（８；１４），ｄｅｌ（１３），ｄｅｌ（１７）の染色体の転座によって引き起こ
される（Ｄｒａｃｈ ｅｔ ａｌ．，（１９９８）Ｂｌｏｏｄ ９２（３）：８０２～８
０９；Ｇｅｒｔｚ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｂｌｏｏｄ １０６（８）：２８３７～
２８４０；Ｆａｃｏｎ ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｂｌｏｏｄ ９７（６）：１５６６
～１５７１）。ＭＭに罹患している患者は、骨髄浸潤、骨破壊、腎不全、免疫不全、及び
がん診断の心理的負荷によって、種々の疾患関連症状になり得る。２００６の時点で、Ｍ
Ｍの５年相対生存率は約３４％であり、ＭＭは治療が難しい疾患であることは際立ってお
り、現在のところ治療選択肢は存在しない。
Ｇタンパク質連結受容体、クラスＣ、グループ５、メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）は、２
００１年に最初に同定されたオーファン、非定型、クラスＣ ＧＰＣＲである（Ｂｒａｕ
ｎｅｒ－Ｏｓｂｏｒｎｅ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ．１
５１８（３）：２３７～２４８，２００１）。ＧＰＲＣ５Ｄ及びグループ５の他のＧＰＣ
Ｒ群は、クラスＣ受容体に対する非常に短いアミノ末端ドメインを有し、それゆえクラス
Ａ受容体と立体構造が類似すると予測される。これに関し、これらは、クラスＣのＧＰＣ
Ｒに対する配列相同性を有すること、並びに構造トポロジーがクラスＡ受容体と同程度で
あると予想されることからユニークである。ＧＰＲＣ５Ｄ活性化の機能的意義については
報告されておらず、リガンドは未だ不明である。ヒトにおいては、かかる遺伝子は３つの
エキソンを有しており、染色体１２ｐ１３．３上に位置する。ＧＰＲＣ５Ｄ受容体は多様
な種間で高度に保存されており、カニクイザルＧＰＲＣ５Ｄとは９２％の同一性を共有し
ている。
ＧＰＲＣ５Ｄ ｍＲＮＡは、ほとんどがＭＭ患者由来の全ての悪性腫瘍細胞で発現して
いる（Ａｔａｍａｎｉｕｋ ＪＡ ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ
４２（９）９５３～９６０；２０１２；Ｆｒｉｇｙｅｓｉ－ｂｌｏｏｄ ａｎｄ Ｃｏｈ
ｅｎ，ｅｔ ａｌ．Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ １８（６）：３４８～３５；２０１３）。Ｇ
ＰＲＣ５Ｄ発現は患者間で様々に異なり、血漿細胞負荷及びＲｂ１欠損などの遺伝子異常
と関連している（Ａｔａｍａｎｉｕｋ ＪＡ ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎ
ｖｅｓｔ ４２（９）９５３～９６０；２０１２）。
この血漿細胞系列でのＧＰＲＣ５Ｄのみの発現が、かかる発現を抗骨髄腫抗体の理想的
な標的とする。
本明細書において、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する抗体及びその抗原結合フラグメン
トが提供される。また、提供されたＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントを
コード可能な関連するポリヌクレオチド、提供された抗体及び抗原結合フラグメントを発
現している細胞、並びに関連するベクター、並びに検出可能に標識された抗体及び抗原結
合フラグメントもまた記載されている。加えて、提供された抗体及び抗原結合フラグメン
トを使用する方法が記載されている。例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラ
グメントを使用することで、ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんの進行、退縮、又は不変性を診断若し
くはモニタすること、患者ががんを処置される必要があるかを判定すること、又は対象が
ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんに苦しんでおり、かつＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗がん治療剤、例えば、
本明細書に記載されたＧＰＲＣ５Ｄ及びＣＤ３に対する多重特異的抗体による処置に適し
ているかを判定すること、を行うことができる。
本明細書において、ＧＰＲＣ５Ｄ及びＣＤ３に免疫特異的に結合する多重特異的抗体、
並びにその多重特異的抗原結合フラグメントが更に提供される。提供されたＧＰＲＣ５Ｄ
×ＣＤ３多重特異的抗体をコード可能な関連するポリヌクレオチド、提供された抗体を発
現している細胞、並びに関連するベクター、並びに検出可能に標識された多重特異的抗体
もまた記載されている。加えて、提供された多重特異的抗体を使用する方法が記載されて
いる。例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体を使用することで、ＧＰＲＣ５Ｄ発
現がんの進行、退縮、又は不変性を診断若しくはモニタすること、患者ががんを処置され
る必要があるかを判定すること、又は対象がＧＰＲＣ５Ｄ発現がんに苦しんでおり、かつ
ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗がん治療剤、例えば、本明細書に記載されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３
多重特異的抗体による処置に適しているかを判定することができる。
ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体
本明細書において、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的な、単離された抗体及び抗原結合フラグメン
トが記載されている。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグ
メントは、ヒトＧＰＲＣ５Ｄに結合する。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体
及び抗原結合フラグメントは、ヒトＧＰＲＣ５Ｄ及びカニクイザルＧＰＲＣ５Ｄに結合す
る。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番
号２２のアミノ酸配列を有するポリペプチドの１つ又は２つ以上の残基に結合する。この
ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、インビトロにて２８ｎＭ以下のＥ
Ｃ50でＡＤＣＣを誘導し得る。
表１に、本明細書に記載された一部のＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体の例の概要を提供する。
Figure 0007469432000001
一部の実施形態では、表１に記載された抗体のうちいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２
、及びＣＤＲ３を含む重鎖を含む、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又はその抗原結合フラグメン
トが提供される。一部の実施形態では、表１に記載された抗体のうちいずれか１つのＣＤ
Ｒ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖と、表１に記載された抗体のうちいずれか１つ
のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む軽鎖と、を含む、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又
はその抗原結合フラグメントが提供される。本明細書に記載された一部の実施形態では、
ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又はその抗原結合フラグメントは、表１に記載された抗体のうち
いずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖と、表１に記載された抗体
のうちいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む軽鎖と、を含む抗体又は
抗原結合と、ＧＰＲＣ５Ｄに対する結合について競合する。
ＩｇＧクラスは、ヒトにおいて、４つのアイソタイプ：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３
、及びＩｇＧ４に分割される。これらのアイソタイプは、Ｆｃ領域のアミノ酸配列におい
て９５％超の相同性を共有するが、ヒンジ領域のアミノ酸組成及び構造において主な差異
を示す。Ｆｃ領域は、エフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び
補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を介在する。ＡＤＣＣにおいて、抗体のＦｃ領域は、免疫
エフェクター細胞、例えば、ナチュラルキラー及びマクロファージの表面上のＦｃ受容体
（ＦｃｇＲ）に結合する。同免疫エフェクター細胞は、標的細胞の貪食又は溶解をもたら
す。ＣＤＣにおいて、抗体は、標的細胞を、細胞表面における補体カスケードをトリガー
することにより殺傷する。本明細書に記載された抗体は、ＩｇＧアイソタイプのいずれか
との組み合わせで、可変ドメインの記載された特徴を有する抗体を含む。同ＩｇＧアイソ
タイプは、Ｆｃ配列が異なるエフェクター機能をもたらすために改変されている改変版を
含む。
治療用抗体の多くの応用に関し、Ｆｃ介在性エフェクターの機能は、作用機序を担わな
い。これらのＦｃ介在性エフェクター機能は、メカニズム外の毒性を引き起こすことによ
り有害であるおそれがあり、かつ安全性リスクを引き起こすおそれがある。エフェクター
機能を改変することは、Ｆｃ領域を遺伝子操作して、ＦｃｇＲ又は補体因子への結合性を
低下させることにより達成され得る。活性化（ＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩａ、ＦｃｇＲＩ
ＩＩａ、及びＦｃｇＲＩＩＩｂ）及び阻害性（ＦｃｇＲＩＩｂ）ＦｃｇＲ又は補体の第１
成分（Ｃ１ｑ）へのＩｇＧの結合性は、ヒンジ領域及びＣＨ２ドメイン中に位置する残基
により決まる。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４に変異が導入されて、Ｆｃ機能を低下
又はサイレンシングさせる。本明細書に記載された抗体は、これらの改変を含んでもよい
。
一実施形態では、抗体は、下記特性：（ａ）親Ｆｃと比較した場合、低下したエフェク
ター機能、（ｂ）ＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩａ、ＦｃｇＲＩＩｂ、ＦｃｇＲＩＩＩｂ、及
び／又はＦｃｇＲＩＩＩａに対する低下した親和性、（ｃ）ＦｃｇＲＩに対する低下した
親和性、（ｄ）ＦｃｇＲＩＩａに対する低下した親和性、（ｅ）ＦｃｇＲＩＩｂに対する
低下した親和性、（ｆ）ＦｃｇＲＩＩＩｂに対する低下した親和性、又は（ｇ）ＦｃｇＲ
ＩＩＩａに対する低下した親和性のうち１つ又は２つ以上を有するＦｃ領域を含む。
一部の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ又はその誘導体、例え
ば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４のアイソタイプである。抗体がＩｇＧ
１アイソタイプを有する一部の実施形態では、抗体は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び／
又はＫ４０９Ｒ置換を、そのＦｃ領域中に含有する。抗体がＩｇＧ４アイソタイプを有す
る一部の実施形態では、抗体は、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ置換を、その
Ｆｃ領域中に含有する。本明細書に記載された抗体は、これらの改変を含んでもよい。
記載されたＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントに加えて、記載された抗
体及び抗原結合フラグメントをコード可能なポリヌクレオチド配列もまた提供される。記
載されたポリヌクレオチドを含むベクターも提供され、同様に、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体
又は抗原結合フラグメントを発現している細胞も本明細書において提供される。また、開
示されたベクターを発現可能な細胞も記載される。これらの細胞は、哺乳類細胞（例えば
、２９３Ｆ細胞、ＣＨＯ細胞）、昆虫細胞（例えば、Ｓｆ７細胞）、酵母細胞、植物細胞
、又は細菌細胞（例えば、大腸菌）でもよい。記載された抗体はまた、ハイブリドーマ細
胞により産生できる。
ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体を使用する方法
記載されたＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又は抗原結合フラグメントを使用する方法もまた開
示されている。本節において検討されている方法で使用する特定の抗体には、表１に抗体
に対して記載された一連のＣＤＲを有するものが含まれる。例えば、これらの抗体又は抗
原結合フラグメントは、がん治療においてＧＰＲＣ５Ｄ受容体相互作用と干渉することに
より有用であり得、すなわち、抗体に毒素がコンジュゲートされると、毒物はＧＰＲＣ５
Ｄ発現がんを標的とするようになる。更に、これらの抗体又は抗原結合フラグメントは、
生体サンプル、例えば、血液又は血清中のＧＰＲＣ５Ｄの存在を検出するのに、生体サン
プル、例えば、血液又は血清中のＧＰＲＣ５Ｄの量を定量するのに、ＧＰＲＣ５Ｄ発現が
んを診断するのに、がんで苦しむ対象を処置する方法を決定するのに、又は対象における
ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんの進行をモニタするのに、有用であり得る。一部の実施形態では、
ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんは、多発性骨髄腫（ＭＭ）などのリンパ腫であり得る。記載された
方法は、対象がＧＰＲＣ５Ｄ発現がんの処置、例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ及びＣＤ３に対する
多重特異的抗体による処置を受ける前に行われてもよい。更に、記載された方法は、対象
がＧＰＲＣ５Ｄ発現がんの処置、例えば、本明細書に記載されるＧＰＲＣ５Ｄ及びＣＤ３
に対する多重特異的抗体による処置を受けた後に行われてもよい。
生体サンプル中のＧＰＲＣ５Ｄを検出する記載された方法は、生体サンプルを、本明細
書に記載されたＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又は抗原結合フラグメントのうち１つ又は２つ以
上にさらすことを含む。
また、対象におけるＧＰＲＣ５Ｄ発現がんを診断する記載された方法は、生体サンプル
を、本明細書に記載されたＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又は抗原結合フラグメントのうち１つ
又は２つ以上にさらすことを伴う。但し、この方法は、サンプル中に存在するＧＰＲＣ５
Ｄの量を定量する工程と、サンプル中に存在するＧＰＲＣ５Ｄの量を、既知の標準又は参
照サンプルと比較する工程と、対象のＧＰＲＣ５Ｄレベルががんに関連付けられるＧＰＲ
Ｃ５Ｄのレベル内に入るかどうかを判定する工程と、を含む。
本明細書において、対象中のＧＰＲＣ５Ｄ発現がんをモニタする方法もまた記載されて
いる。記載された方法は、生体サンプルを、本明細書に記載されたＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗
体又は抗原結合フラグメントのうち１つ又は２つ以上にさらす工程と、抗体又はその抗原
結合フラグメントに結合したサンプル中に存在するＧＰＲＣ５Ｄの量を定量する工程と、
サンプル中に存在するＧＰＲＣ５Ｄの量を、既知の標準若しくは参照サンプル、又は対象
から以前に得られた同様のサンプル中のＧＰＲＣ５Ｄの量のいずれかと比較する工程と、
比較されたサンプル中のＧＰＲＣ５Ｄの量における差異に基づいて、対象のＧＰＲＣ５Ｄ
レベルががんの進行、退縮、又は不変を示すかどうかを判定する工程と、を含む。
対象から得られ、又は同対象に由来するサンプルは、生体サンプル、例えば、尿、血液
、血清、血漿、唾液、腹水、循環細胞、循環している腫瘍細胞、組織会合していない細胞
、組織、外科手術的に切除された腫瘍組織、生検、微細針吸引サンプル、又は組織学的調
製物である。
記載されたＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、記載された方法又は
当業者に既知の他の方法での使用のために標識されてもよい。例えば、本明細書に記載さ
れた抗体又はその抗原結合フラグメントは、放射線標識、蛍光標識、エピトープタグ、ビ
オチン、発色団標識、ＥＣＬ標識、酵素、ルテニウム、111Ｉｎ－ＤＯＴＡ、111Ｉｎ－ジ
エチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、西洋わさびペルオキシダーゼ、アルカリホスフ
ァターゼ、及びβガラクトシダーゼ、若しくはポリヒスチジン、又は当技術分野において
既知の類似するこのような標識で標識されてもよい。
ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体キット
開示されるＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又はその抗原結合フラグメントを含むキットが本明
細書において記載されている。記載されたキットを使用して、本明細書で提供されたＧＰ
ＲＣ５Ｄ特異的抗体又は抗原結合フラグメントを使用する方法、又は当業者に既知の他の
方法を行うことができる。一部の実施形態では、記載されたキットは、本明細書に記載さ
れた抗体又は抗原結合フラグメントと、生体サンプル中のＧＰＲＣ５Ｄの存在を検出する
際に使用する試薬と、を含んでもよい。したがって、記載されたキットは、本明細書に記
載された抗体又はその抗原結合フラグメントのうち１つ又は２つ以上と、使用していない
ときに抗体又はフラグメントを収容するための容器と、抗体又はフラグメントを使用する
ための使用説明書と、本明細書に記載されたとおり、固体支持体に固定された抗体若しく
はフラグメント及び／又は検出可能に標識された形態の抗体若しくはフラグメントと、を
含んでもよい。
ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体
ＴＣＲ／ＣＤ３複合体によるＧＰＲＣ５Ｄ発現ＭＭ細胞へのＴリンパ球の再指向は、魅
力的な代替アプローチを提示する。Ｔリンパ球のＴＣＲ／ＣＤ３複合体は、ガンマ（γ）
、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ゼータ（ζ）、及びエータ（η）標識されたＣＤ３
のインバリアントなサブユニットと細胞表面で共発現した、ＴＣＲアルファ（α）／ベー
タ（β）又はＴＣＲガンマ（γ）／デルタ（δ）ヘテロ二量体のいずれかからなる。ヒト
ＣＤ３εは、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ０７７６６（ＣＤ３Ｅ＿ＨＵＭＡＮ）に記載されている
。従来技術において記載される抗ＣＤ３ε抗体は、ＳＰ３４である（Ｙａｎｇ ＳＪ，Ｔ
ｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（１９８６）１３７；１０９７～１
１００）。ＳＰ３４は霊長類及びヒトの両方のＣＤ３と反応する。ＳＰ３４はＰｈａｒｍ
ｉｎｇｅｎから入手できる。従来技術で記載される更なる抗ＣＤ３抗体は、ＵＣＨＴ－１
である（国際公開第２００００４１４７４号を参照されたい）。従来技術で記載される更
なる抗ＣＤ３抗体は、ＢＣ－３である（Ｆｒｅｄ Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎ Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ；ｕｓｅｄ ｉｎ Ｐｈａｓｅ Ｉ／ＩＩ ｔ
ｒｉａｌｓ ｏｆ ＧｖＨＤ，Ａｎａｓｅｔｔｉ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ
ａｔｉｏｎ ５４：８４４（１９９２））。ＳＰ３４とＵＣＨＴ－１及びＢＣ－３との間
の違いは、ＳＰ－３４がＣＤ３のε鎖上に単独で存在するエピトープを認識する（Ｓａｌ
ｍｅｒｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：３０４７を参照
されたい）のに対して、ＵＣＨＴ－１及びＢＣ－３はε鎖及びγ鎖の両方が寄与するエピ
トープを認識するという点である。抗体ＳＰ３４のものと同じ配列を有する抗体の配列は
、国際公開第２００８１１９５６５号、同第２００８１１９５６６号、同第２００８１１
９５６７号、同第２０１００３７８３６号、同第２０１００３７８３７号及び同第２０１
００３７８３８号に言及されている。抗体ＳＰ３４のＶＨに対して９６％の同一性を有す
る配列は、米国特許第８２３６３０８号（国際公開第２００７０４２２６１号）に言及さ
れている。
本明細書において、ＧＰＲＣ５Ｄ及びＣＤ３に結合する、単離された多重特異的抗体（
「ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体」）及びその多重特異的抗原結合フラグメントが
記載されている。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄに免疫特異的に結合する、単離され
た抗体又はその抗原結合フラグメントが提供される。
一部の実施形態では、多重特異的抗体のＧＰＲＣ５Ｄ特異的アームは、ヒトＧＰＲＣ５
Ｄ及びカニクイザルＧＰＲＣ５Ｄに結合する。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ
３多重特異的抗体又は抗原結合フラグメントのＧＰＲＣ５Ｄ特異的アームは、ヒトＧＰＲ
Ｃ５Ｄの細胞外ドメインに結合する。好ましい実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重
特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、二重特異性抗体又は抗原結合フラグメントであ
る。一部の実施形態では、ａ）第１の重鎖（ＨＣ１）と、ｂ）第２の重鎖（ＨＣ２）と、
ｃ）第１の軽鎖（ＬＣ１）と、ｄ）第２の軽鎖（ＬＣ２）と、を含み、ＨＣ１とＬＣ１と
が対を成して、ＧＰＲＣ５Ｄに免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＨＣ
２とＬＣ２とが対を成して、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成す
る、単離されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又はそのＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重
特異性結合フラグメントが提供される。別の実施形態では、抗体又は二重特異性結合フラ
グメントを発現している単離された細胞が提供される。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５
Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体のＧＰＲＣ５Ｄ結合アーム（又は「ＧＰＲＣ５Ｄ特異的アーム
」）は、本明細書に記載されたＧＰＲＣ５Ｄ抗体から（例えば、表１で列記されたＣＤＲ
配列を有する抗体から）得られる。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又は抗原結合フラグメント
のＧＰＲＣ５Ｄ特異的アームは、ＩｇＧ又はその誘導体である。一部の実施形態では、Ｇ
ＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体のＣＤ３結合アーム（又は「ＣＤ３特異的アーム」）
は、マウスモノクローナル抗体ＳＰ３４、マウスＩｇＧ３／ラムダアイソタイプに由来す
る。（Ｋ．Ｒ．Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ ａｎｄ Ａ．Ｃ．Ｍａｒｔｉｎ，２００８．Ｍｏ
ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４５，３８３２～３８３９）。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ
×ＣＤ３多重特異的抗体のＣＤ３結合アームは、表２から選択された１つのＶＨドメイン
及び１つのＶＬドメインを含む。
Figure 0007469432000002
ＩｇＧクラスは、ヒトにおいて、４つのアイソタイプ：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３
、及びＩｇＧ４に分割される。これらのアイソタイプは、Ｆｃ領域のアミノ酸配列におい
て９５％超の相同性を共有するが、ヒンジ領域のアミノ酸組成及び構造において主な差異
を示す。Ｆｃ領域は、エフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び
補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を介在する。ＡＤＣＣにおいて、抗体のＦｃ領域は、免疫
エフェクター細胞、例えば、ナチュラルキラー及びマクロファージの表面上のＦｃ受容体
（ＦｃｇＲ）に結合する。同免疫エフェクター細胞は、標的細胞の貪食又は溶解をもたら
す。ＣＤＣにおいて、抗体は、標的細胞を、細胞表面における補体カスケードをトリガー
することにより殺傷する。
多くの治療用抗体の適用に関し、Ｆｃ介在性エフェクター機能は、作用機序を担わない
。これらのＦｃ介在性エフェクター機能は、メカニズム外の毒性を引き起こすことにより
有害であるおそれがあり、かつ安全性リスクを引き起こすおそれがある。エフェクター機
能の改変は、Ｆｃ領域を遺伝子操作して、ＦｃｇＲ又は補体因子への結合性を低下させる
ことにより達成され得る。活性化（ＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩａ、ＦｃｇＲＩＩＩａ、及
びＦｃｇＲＩＩＩｂ）及び阻害性（ＦｃｇＲＩＩｂ）ＦｃｇＲ又は補体の第１成分（Ｃ１
ｑ）へのＩｇＧの結合性は、ヒンジ領域及びＣＨ２ドメイン中に位置する残基により決ま
る。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４に変異が導入されると、Ｆｃ機能が低下又はサイ
レンシングする。
一実施形態では、抗体は、下記特性：（ａ）親Ｆｃと比較した場合、低下したエフェク
ター機能、（ｂ）ＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩａ、ＦｃｇＲＩＩｂ、ＦｃｇＲＩＩＩｂ、及
び／又はＦｃｇＲＩＩＩａに対する低下した親和性、（ｃ）ＦｃｇＲＩに対する低下した
親和性、（ｄ）ＦｃｇＲＩＩａに対する低下した親和性、（ｅ）ＦｃｇＲＩＩｂに対する
低下した親和性、（ｆ）ＦｃｇＲＩＩＩｂに対する低下した親和性、又は（ｇ）ＦｃｇＲ
ＩＩＩａに対する低下した親和性のうち１つ又は２つ以上を有するＦｃ領域を含む。
一部の実施形態では、多重特異的抗体のＣＤ３特異的アームが得られるＣＤ３特異的抗
体又は抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ又はその誘導体である。一部の実施形態では、多
重特異的抗体のＣＤ３特異的アームが得られるＣＤ３特異的抗体又は抗原結合フラグメン
トは、ＩｇＧ１又はその誘導体である。一部の実施形態では、例えば、ＣＤ３結合アーム
が得られるＣＤ３特異的ＩｇＧ１抗体のＦｃ領域は、そのＦｃ領域中に、Ｌ２３４Ａ、Ｌ
２３５Ａ、及びＦ４０５Ｌ置換を含む。一部の実施形態では、多重特異的抗体のＣＤ３特
異的アームが得られるＣＤ３特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ４又はその
誘導体である。一部の実施形態では、例えば、ＣＤ３結合アームが得られるＣＤ３特異的
ＩｇＧ４抗体のＦｃ領域は、そのＦｃ領域中に、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、
Ｆ４０５Ｌ、及びＲ４０９Ｋ置換を含む。一部の実施形態では、多重特異的抗体のＣＤ３
特異的アームが得られるＣＤ３特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、初代ヒトＴ細胞
及び／又は初代カニクイザルＴ細胞上のＣＤ３εに結合する。一部の実施形態では、多重
特異的抗体のＣＤ３特異的アームが得られるＣＤ３特異的抗体又は抗原結合フラグメント
は、初代ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞及び／又は初代カニクイザルＣＤ４＋Ｔ細胞を活性化する。
記載されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体に加えて、記載されたＧＰＲＣ５Ｄ×
ＣＤ３多重特異的抗体をコード可能なポリヌクレオチド配列も提供される。一部の実施形
態では、ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメントのＨＣ１
、ＨＣ２、ＬＣ１、又はＬＣ２をコードする単離された合成ポリヌクレオチドが提供され
る。記載されたポリヌクレオチドを含むベクターも提供され、同様に、ＧＰＲＣ５Ｄ×Ｃ
Ｄ３多重特異的抗体を発現している細胞も本明細書において提供される。また、開示され
たベクターを発現可能な細胞も記載される。これらの細胞は、哺乳類細胞（例えば、２９
３Ｆ細胞、ＣＨＯ細胞）、昆虫細胞（例えば、Ｓｆ７細胞）、酵母細胞、植物細胞、又は
細菌細胞（例えば、大腸菌）でもよい。記載された抗体はまた、ハイブリドーマ細胞によ
り産生できる。一部の実施形態では、細胞を培養することにより、ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３
二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメントを生成するための方法が提供される。
本明細書において、ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又は抗原結合フラグメントと
、医薬的に許容され得る担体とを含む医薬組成物が更に提供される。
ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体を使用する方法
記載されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体及びその多重特異的抗原結合フラグメ
ントを使用する方法もまた開示される。例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体及
びその多重特異的抗原結合フラグメントは、ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんの処置を必要とする対
象における、ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんの処置に有用であり得る。一部の実施形態では、ＧＰ
ＲＣ５Ｄ発現がんは、多発性骨髄腫などのリンパ腫である。
ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんの処置を、かかる処置を必要とする対象において行う記載された
方法は、この対象に、治療的に有効な量の記載されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗
体又はその多重特異的抗原結合フラグメントを投与する工程を含む。一部の実施形態では
、対象は、哺乳類、好ましくは、ヒトである。好ましい実施形態では、治療的に有効な量
のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性抗原結合フラグメントを、処置を
必要とする患者に、がんを処置するのに十分な時間投与することにより、がんを有する対
象を処置するための方法が提供される。
がん細胞の成長又は増殖を阻害するために、治療的に有効な量のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３
二重特異性抗体又は二重特異性抗原結合フラグメントを投与することにより、がん細胞の
成長又は増殖を阻害するための方法が更に提供される。
また、本明細書において、Ｔ細胞をがんに再指向するために、治療的に有効な量のＧＰ
ＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメントを投与することにより
、Ｔ細胞をＧＰＲＣ５Ｄ発現がん細胞に再指向する方法もまた提供される。
ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３特異的抗体キット
本明細書において、開示されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体を含むキットが記
載されている。記載されたキットを使用して、本明細書で提供されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ
３多重特異的抗体を使用する方法又は当業者に既知の他の方法を行うことができる。一部
の実施形態では、記載されたキットは、本明細書に記載された抗体と、ＧＰＲＣ５Ｄ発現
がんの処置に使用するための試薬と、を含んでもよい。したがって、記載されたキットは
、本明細書に記載された多重特異的抗体又はその多重特異的抗原結合フラグメントのうち
１つ若しくは２つ以上、使用していないときに抗体又はフラグメントを収容するための容
器、並びに／又は抗体若しくはフラグメントを使用するための使用説明書、本明細書に記
載されたとおりの、固体支持体に固定された抗体若しくはフラグメント及び／若しくは検
出可能に標識された形態の抗体若しくはフラグメントと、を含んでもよい。
選択された抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｍＡｂの、ヒトＧＰＲＣ５Ｄ細胞及び遺伝子導入していないＨＥＫ２９３細胞に対する濃度依存的結合プロファイル。３種類のｍＡｂ、すなわちＧＣ５Ｂ３６、ＧＣ５Ｂ１６８、及びＧＣ５Ｂ２０５は、遺伝子導入していない（ＧＰＲＣ５Ｄ ｎｕｌｌ）ＨＥＫ２９３細胞にも結合することが観察された。 ヒトＧＰＲＣ５Ｄ ＨＥＫ２９３Ｆ細胞に対する抗ＧＰＣＲ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体の用量依存的結合。 ＦＡＣＳを使用して、二重特異性抗体のＭＭ１Ｒ細胞及びＨ９２９細胞に対する結合プロファイルを、過剰発現させたヒトＧＰＣＲ５Ｄ ＨＥＫ２９３細胞及び遺伝子導入していないＨＥＫ２９３細胞の場合と比較した。 ヒトＧＰＲＣ５Ｄ発現細胞に対する抗ＧＰＣＲ５Ｄ×ＣＤ３抗体によるＴ細胞介在性細胞傷害及びＴ細胞活性化。 ヒトＧＰＲＣ５Ｄ発現細胞に対する抗ＧＰＣＲ５Ｄ×ＣＤ３抗体によるＴ細胞介在性細胞傷害及びＴ細胞活性化。 カニクイザルＧＰＲＣ５Ｄ発現細胞に対する抗ＧＰＣＲ５Ｄ×ＣＤ３抗体によるＴ細胞介在性細胞傷害及びＴ細胞活性化。 カニクイザルＧＰＲＣ５Ｄ発現細胞に対する抗ＧＰＣＲ５Ｄ×ＣＤ３抗体によるＴ細胞介在性細胞傷害及びＴ細胞活性化。 ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３ Ａｂは、予防的（prophylactic）ＮＳＧマウスモデルにおいて、Ｈ９２９細胞を効率的に殺傷する。ＧＣＤＢ３２（６Ａ）及びＧＣＤＢ３５（６Ｂ）では、投与量１０μｇで腫瘍の成長が完全に阻害され、ＧＣＤＢ３２については、投与量１μｇでも腫瘍の成長阻害率は１００％が可能であった。 ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３ Ａｂは、予防的（prophylactic）ＮＳＧマウスモデルにおいて、Ｈ９２９細胞を効率的に殺傷する。ＧＣＤＢ３２（６Ａ）及びＧＣＤＢ３５（６Ｂ）では、投与量１０μｇで腫瘍の成長が完全に阻害され、ＧＣＤＢ３２については、投与量１μｇでも腫瘍の成長阻害率は１００％が可能であった。 Ｆｃブロックの非存在下（７Ａ）での力価の比較。 Ｆｃブロックの存在下（７Ｂ）での力価の比較。 ＧＣＤＢ３５ ＧＣＤＢ３２、ＧＣＤＢ４０及びＧＣＤＢ４３のＦｃγ受容体に対する結合。 ＧＣＤＢ３５ ＧＣＤＢ３２、ＧＣＤＢ４０及びＧＣＤＢ４３のＦｃγ受容体に対する結合。 ＧＣＤＢ３５ ＧＣＤＢ３２、ＧＣＤＢ４０及びＧＣＤＢ４３のＦｃγ受容体に対する結合。 ＧＣＤＢ３５ ＧＣＤＢ３２、ＧＣＤＢ４０及びＧＣＤＢ４３のＦｃγ受容体に対する結合。 ハイブリドーマ由来ｍＡｂの、ＦＡＣＳによる結合評価。 ハイブリドーマ由来ｍＡｂの、ＦＡＣＳによる結合評価。 Ｈ９２９細胞に対するＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体のＴ細胞介在性細胞傷害。 Ｈ９２９細胞に対するＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体のＴ細胞介在性細胞傷害。 ＧＰＲＣ５Ｄ陽性細胞株（Ｈ９２９、ＭＭ１Ｒ、ＬＰ１、ＯＰＭ２）及び陰性細胞株（ＮＡＬＭ６）に結合するＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体。 ＧＰＲＣ５Ｄ陽性細胞株（Ｈ９２９、ＭＭ１Ｒ、ＬＰ１、ＯＰＭ２）及び陰性細胞株（ＮＡＬＭ６）に結合するＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体。 ＧＰＲＣ５Ｄ陽性細胞株（Ｈ９２９、ＭＭ１Ｒ、ＬＰ１、ＯＰＭ２）及び陰性細胞株（ＮＡＬＭ６）に結合するＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体。 ＧＰＲＣ５Ｄ陽性細胞株（Ｈ９２９、ＭＭ１Ｒ、ＬＰ１、ＯＰＭ２）及び陰性細胞株（ＮＡＬＭ６）に結合するＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体。 ＧＰＲＣ５Ｄ陽性細胞株（Ｈ９２９、ＭＭ１Ｒ、ＬＰ１、ＯＰＭ２）及び陰性細胞株（ＮＡＬＭ６）に結合するＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体。 ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性Ａｂは、生体内において強力な腫瘍阻害剤である。ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性Ａｂ（図１２ＡにはＧＣＤＢ３２を示す）は、投与量１０μｇ及び１μｇで多発性骨髄腫細胞（Ｈ９２９）の腫瘍成長を完全に阻害した。 ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性Ａｂは、生体内において強力な腫瘍阻害剤である。ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性Ａｂ（図１２ＢにはＧＣＤＢ５３を示す）は、投与量１０μｇ及び１μｇで多発性骨髄腫細胞（Ｈ９２９）の腫瘍成長を完全に阻害した。 ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性Ａｂは、生体内において強力な腫瘍阻害剤である。ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性Ａｂ（図１２ＣにはＧＣＤＢ６１を示す）は、投与量１０μｇ及び１μｇで多発性骨髄腫細胞（Ｈ９２９）の腫瘍成長を完全に阻害した。 ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性Ａｂは、生体内において強力な腫瘍阻害剤である。ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性Ａｂ（図１２ＤにはＧＣＤＢ７２を示す）は、投与量１０μｇ及び１μｇで多発性骨髄腫細胞（Ｈ９２９）の腫瘍成長を完全に阻害した。ＧＣＤＢ７２を０．１μｇで投与した場合には、腫瘍の成長阻害率は８０％であるという差異が観察された。 様々な濃度のリード抗体（lead antibodies）でＧＰＲＣ５Ｄ+ＭＭ１．Ｒ細胞株を６０分間染色し、表面結合プロファイルを測定した（ｎ＝３）。フィコエリトリン標識したヒトＩｇＧ４Ｆｃ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ，ＨＰ６０２５クローン）を、シグナルを捕捉する二次抗体として使用した。結合は、ＦＡＣＳにより求められた、正規化された幾何平均蛍光強度として表される。データのグラフ化及びフィッティングは、勾配が可変の非線形回帰（４パラメータ）及び最小二乗法を使用して、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６で実施した。 様々な濃度のＦＡＢ６３００抗体及びＧＣ５Ｍ４８１抗体でＧＰＲＣ５Ｄ+細胞株を６０分間染色し、表面結合プロファイルを測定した。フィコエリトリン標識したヒトＩｇＧ４Ｆｃ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ，ＨＰ６０２５クローン）を、シグナルを捕捉する二次抗体として使用した。結合をヒストグラムとして表す。黒線はアイソタイプを示し、赤線はＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体を表す。影をつけた点線は、アイソタイプ対照を示し、実線はリード分子の結合を示す。 様々な濃度のＦＡＢ６３００抗体及びＧＣ５Ｍ４８１抗体でＧＰＲＣ５Ｄ+細胞株を６０分間染色し、表面結合プロファイルを測定した。フィコエリトリン標識したヒトＩｇＧ４Ｆｃ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ，ＨＰ６０２５クローン）を、シグナルを捕捉する二次抗体として使用した。結合をヒストグラムとして表す。黒線はアイソタイプを示し、赤線はＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体を表す。影をつけた点線は、アイソタイプ対照を示し、実線はリード分子の結合を示す。 様々な濃度のＦＡＢ６３００抗体及びＧＣ５Ｍ４８１抗体でＧＰＲＣ５Ｄ+細胞株を６０分間染色し、表面結合プロファイルを測定した。フィコエリトリン標識したヒトＩｇＧ４Ｆｃ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ，ＨＰ６０２５クローン）を、シグナルを捕捉する二次抗体として使用した。ＧＰＲＣ５Ｄ＋多発性骨髄腫細胞株に対するリード分子の結合パターンを示す。影をつけた点線は、アイソタイプ対照を示し、実線はリード分子の結合を示す。 様々な濃度のＦＡＢ６３００抗体及びＧＣ５Ｍ４８１抗体でＧＰＲＣ５Ｄ+細胞株を６０分間染色し、表面結合プロファイルを測定した。フィコエリトリン標識したヒトＩｇＧ４Ｆｃ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ，ＨＰ６０２５クローン）を、シグナルを捕捉する二次抗体として使用した。ＧＰＲＣ５Ｄ＋多発性骨髄腫細胞株に対するリード分子の結合パターンを示す。影をつけた点線は、アイソタイプ対照を示し、実線はリード分子の結合を示す。 様々な濃度のＦＡＢ６３００抗体及びＧＣ５Ｍ４８１抗体でＧＰＲＣ５Ｄ+細胞株を６０分間染色し、表面結合プロファイルを測定した。フィコエリトリン標識したヒトＩｇＧ４Ｆｃ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ，ＨＰ６０２５クローン）を、シグナルを捕捉する二次抗体として使用した。ＧＰＲＣ５Ｄ＋多発性骨髄腫細胞株に対するリード分子の結合パターンを示す。影をつけた点線は、アイソタイプ対照を示し、実線はリード分子の結合を示す。 ２名の異なるＭＭ患者由来の、凍結した骨髄由来単核細胞を使用して、ＩｇＧ４アイソタイプ対照と比較したＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体の結合、プラズマ細胞の細胞傷害（plasma cell cytotoxicity）及びＴ細胞活性化を評価した。細胞傷害アッセイのため、患者のＢＭ ＭＮＣサンプルに健常ドナー由来のＴ細胞を外部より添加し、４種類のリード分子と共に４８時間インキュベートした。ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体は、全てのドナーサンプルについて用量依存的な様式で血漿細胞に結合した。平均蛍光強度をＹ軸に記録した。ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体処理に応答する血漿生細胞（ＣＤ１３８+）の減少及び付随するＴ細胞でのＣＤ２５の上方制御に注目されたい。 ２名の異なるＭＭ患者由来の、凍結した骨髄由来単核細胞を使用して、ＩｇＧ４アイソタイプ対照と比較したＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体の結合、プラズマ細胞の細胞傷害（plasma cell cytotoxicity）及びＴ細胞活性化を評価した。細胞傷害アッセイのため、患者のＢＭ ＭＮＣサンプルに健常ドナー由来のＴ細胞を外部より添加し、４種類のリード分子と共に４８時間インキュベートした。ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体は、全てのドナーサンプルについて用量依存的な様式で血漿細胞に結合した。平均蛍光強度をＹ軸に記録した。ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体処理に応答する血漿生細胞（ＣＤ１３８+）の減少及び付随するＴ細胞でのＣＤ２５の上方制御に注目されたい。 第０日目に、ＮＳＧマウスに、ＭＭ．１Ｓヒト多発性骨髄腫細胞を皮下移植した。７日目に、ヒトＰＢＭＣを静脈内投与した。第１５、１８、２２、２４、２９、３２、及び３６日目に、ＰＢＳ、ＧＣＤＢ７２（０．１μｇ、１μｇ、１０μｇ、及び５０μｇ／個体（それぞれ０．００５、０．０５、０．５及び２．５ｍｇ／ｋｇ相当））、及びＮｕｌｌ対照抗体を静脈内投与した。週に２度皮下腫瘍を測定し、その結果を、それぞれの群における平均腫瘍体積としてｍｍ3±（ＳＥＭ）で表した。１μｇ（０．０５ｍｇ／ｋｇ）で投与した場合、ＧＣＤＢ７２抗体処理では、ＰＢＳと比較して皮下腫瘍の成長は有意に阻害された（ＴＧＩ＝６４％，ｐ＜０．０００１）。ＧＣＤＢ７２は、１０μｇ／個体（０．５ｍｇ／ｋｇ）及び５０μｇ／個体（２．５ｍｇ／ｋｇ）の投与量では、腫瘍の成長を完全に退縮させた（ｐ≦０．０００１）。Ｎｕｌｌ対照抗体は、ほとんど影響がなく、又は全く影響がなかった。テューキー多重比較検定（Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア（バージョン６）を使用）を利用した、多重比較２－ｗａｙ ＡＮＯＶＡを用いて、統計的有意性を評価した。確率値（ｐ）が＜０．０５であれば、グループ間の差分は有意であるとみなした。 第０日目に、ＮＳＧに、ＭＭ．１Ｓヒト多発性骨髄腫細胞を皮下移植した。７日目に、ヒトＰＢＭＣを静脈内投与した。第１５、１８、２２、２４、２９、３２、及び３６日目に、ＰＢＳ、ＧＣＤＢ７２（０．１μｇ、１μｇ、１０μｇ、及び５０μｇ／個体（それぞれ０．００５、０．０５、０．５及び２．５ｍｇ／ｋｇ相当））、及びＮｕｌｌ対照抗体を静脈内投与した。体重は、処置の開始時から試験終了までの体重の絶対値（absolute body weight）として表す。
定義
本明細書及び特許請求の範囲を通して本明細書の諸態様に関する様々な用語が使用され
る。別途記載のない限り、そのような用語には、当該技術分野におけるそれらの通常の意
味が与えられるものとする。その他の具体的に定義される用語は、本明細書に提供される
定義と一致する様式で解釈されるものとする。
本明細書及び添付の「特許請求の範囲」において使用されるとき、単数形「ａ」、「ａ
ｎ」及び「ｔｈｅ」は、その内容について別段の明確な指示がない限り、複数の指示対象
を包含する。したがって、例えば、「細胞（a cell）」という言及には、２つ以上の細胞
の組み合わせ、及びこれに類するものなどが含まれる。
本明細書で使用されるとき、測定値、例えば、量、持続時間等に言及する場合の「約」
という用語は、指定された値から最大±１０％の偏差を包含することを意味する。同様に
、このような偏差は、開示された方法を行うのに適している。別途記載のない限り、本明
細書及び特許請求の範囲において使用される、成分の量、並びに分子量及び反応条件等の
特性を表わす全ての数字は、全ての事例において「約」という用語により修飾されている
と理解されたい。したがって、そうではないと示されない限り、下記明細書及び添付の特
許請求の範囲で説明された数値パラメータは、本発明により得ようとする所望の特性に応
じて変動する場合がある近似値である。最低でも、特許請求の範囲の範囲に対して均等論
の適用を制限することを試みてはならず、各数値パラメータは、報告された有効桁の数字
を考慮し、通常の四捨五入の手法を適用することにより、少なくとも解釈されるべきであ
る。
本発明の広い範囲を説明する数値範囲及びパラメータは近似値であるが、特定の実施例
に記載された数値は、可能な限り正確に報告される。但し、任意の数値は、各試験測定に
おいて見出される標準偏差から必然的に生じる一定の誤差を本質的に含有する。
「単離された」とは、生物学的成分（例えば、核酸、ペプチド、又はタンパク質）が、
これらの成分が本来存在する生物の他の生物学的成分、すなわち、他の染色体及び染色体
外ＤＮＡ及びＲＮＡ、並びにタンパク質から、実質的に分離され、同他の成分とは別に生
成され、又は同他の成分から離して精製されていることを意味する。このため、「単離」
されている核酸、ペプチド、及びタンパク質は、標準的な精製法により精製された核酸及
びタンパク質を含む。「単離された」核酸、ペプチド、及びタンパク質は、組成物の一部
であることができ、このような組成物が核酸、ペプチド、又はタンパク質の本来の環境の
一部ではない場合であっても単離されている。また、この用語は、宿主細胞中での組み換
え発現により調製された核酸、ペプチド、及びタンパク質、並びに化学合成された核酸も
包含する。本明細書で使用されるとき、「単離された」抗体又は抗原結合フラグメントは
、種々の抗原特異性を有する他の抗体又は抗原結合フラグメントを実質的に含まない抗体
又は抗原結合フラグメントを意味することを意図している（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄに特異
的に結合する単離された抗体は、ＧＰＲＣ５Ｄ以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質
的に含まない）。但し、ＧＰＲＣ５Ｄのエピトープ、アイソフォーム、又は変異体に特異
的に結合する単離された抗体は、例えば、他の種に由来する他の関連する抗原（例えば、
ＧＰＲＣ５Ｄ種間ホモログ）に対する交差反応性を有してもよい。
「ポリヌクレオチド」は、同義的に「核酸分子」、「ヌクレオチド」、又は「核酸」と
呼ばれ、非修飾ＲＮＡ若しくはＤＮＡ又は修飾ＲＮＡ若しくはＤＮＡでもよい、任意のポ
リリボヌクレオチド又はポリデオキシリボヌクレオチドを指す。「ポリヌクレオチド」に
は、一本鎖及び二本鎖ＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖の領域の混合物であるＤＮＡ、一本鎖及
び二本鎖ＲＮＡ、並びに一本鎖及び二本鎖の領域の混合物であるＲＮＡ、ＤＮＡ及びＲＮ
Ａを含むハイブリッド分子（一本鎖、又はより典型的には、二本鎖、又は一本鎖及び二本
鎖の領域の混合物でもよい）が挙げられるが、これらに限定されない。加えて、「ポリヌ
クレオチド」は、ＲＮＡ若しくはＤＮＡ又はＲＮＡ及びＤＮＡの両方を含む三本鎖領域を
指す。用語、ポリヌクレオチドには、１つ又は２つ以上の修飾塩基を含有するＤＮＡ又は
ＲＮＡ、及び安定性若しくは他の理由により修飾された主鎖を有するＤＮＡ又はＲＮＡも
含まれる。「修飾」塩基は、例えば、トリチル化塩基及び異常な塩基、例えば、イノシン
を含む。各種の修飾が、ＤＮＡ及びＲＮＡになされてもよい。したがって、「ポリヌクレ
オチド」は、典型的に天然に認められるポリヌクレオチドの化学的、酵素的又は代謝的に
修飾された形態、並びにウイルス及び細胞のＤＮＡ及びＲＮＡの特徴を有する化学的形態
を包含する。「ポリヌクレオチド」はまた、比較的短い核酸鎖（多くの場合、オリゴヌク
レオチドと呼ばれる）も包含する。
「実質的に同じ」の意味は、この用語が使用される文脈に応じて異なる場合がある。重
鎖及び軽鎖並びにこれらをコードする遺伝子中には天然の配列バリエーションが存在し得
ることから、本明細書に記載されたアミノ酸配列又は抗体若しくは抗原結合フラグメント
をコードする遺伝子内には、固有の結合特性（例えば、特異的及び親和性）にはほとんど
影響しない、又は影響しない、ある程度のバリエーションが見られることが予測される。
このような予測は、部分的には、遺伝暗号の縮重及び保存的アミノ酸配列バリエーション
の進化的成功による。同バリエーションは、コードされたタンパク質の性質を、認識され
得るほどには改変させない。したがって、核酸配列の文脈において、「実質的に同じ」は
、２つ以上の配列間での少なくとも６５％の同一性を意味する。好ましくは、この用語は
、２つ以上の配列間での少なくとも７０％の同一性、より好ましくは、少なくとも７５％
の同一性、より好ましくは、少なくとも８０％の同一性、より好ましくは、少なくとも８
５％の同一性、より好ましくは、少なくとも９０％の同一性、より好ましくは、少なくと
も９１％の同一性、より好ましくは、少なくとも９２％の同一性、より好ましくは、少な
くとも９３％の同一性、より好ましくは、少なくとも９４％の同一性、より好ましくは、
少なくとも９５％の同一性、より好ましくは、少なくとも９６％の同一性、より好ましく
は、少なくとも９７％の同一性、より好ましくは、少なくとも９８％の同一性、及びより
好ましくは、少なくとも９９％以上の同一性を意味する。２つの配列間の同一性（％）は
、ギャップ数及び各ギャップの長さを考慮して、配列により共有される同一の位置の数の
関数である（すなわち、相同性の割合（％）＝同一位置数／位置の総数×１００）。同考
慮は、２つの配列の最適なアライメントを導くのに必要である。２つのヌクレオチド又は
アミノ酸配列間の同一性（％）は、例えば、Ｅ．Ｍｅｙｅｒｓ ａｎｄ Ｗ．Ｍｉｌｌｅ
ｒ，Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ ４，１１～１７（１９８８）のアルゴリズ
ムを使用して決定されてもよい。同アルゴリズムは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン
２．０）に組み込まれており、ＰＡＭ１２０重み付け残基テーブル、ギャップ長ペナルテ
ィ１２、及びギャップペナルティ４を使用する。加えて、２つのアミノ酸配列間の同一性
（％）は、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８，
４４４～４５３（１９７０）のアルゴリズムを使用して決定されてもよい。
タンパク質の機能に実質的な影響を有することなく、タンパク質のアミノ酸配列内に生
じ得るバリエーションの度合いは、核酸配列のバリエーションの度合いより非常に小さい
。これは、同じ縮重原理がアミノ酸配列には適用しないためである。したがって、抗体又
は抗原結合フラグメントの文脈において、「実質的に同じ」は、記載された抗体又は抗原
結合フラグメントに対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％
、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有する抗体又は抗原結合フラグメントを意味す
る。他の実施形態は、本明細書に記載された抗体及び抗原結合フラグメントと有意な同一
性を共有しないが、１つ又は２つ以上のＣＤＲ又は結合性を付与するのに必要とされる他
の配列を組み込む、フレームワーク、スキャフォールド、又は他の非結合領域を有し、本
明細書に記載されたこのような配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％
、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有する、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的
抗体又は抗原結合フラグメントを含む。「ベクター」とは、セグメントの複製又は発現を
もたらすように、別の核酸セグメントを操作可能に挿入できる、レプリコン、例えば、プ
ラスミド、ファージ、コスミド、又はウイルスのことである。
「クローン」は、有糸***により、単一の細胞又は共通する祖先から得られる細胞集団
である。「細胞株」は、インビトロにおいて何代にもわたって安定して成長させることが
できる初代細胞のクローンである。本明細書で提供された一部の例では、細胞は、細胞を
ＤＮＡで遺伝子導入することにより、形質転換される。
「発現する」及び「生成する」という用語は、本明細書において同義的に使用され、遺
伝子産物の生合成を意味する。これらの用語は、遺伝子のＲＮＡへの転写を包含する。ま
た、これらの用語は、ＲＮＡの１つ又は２つ以上のポリペプチドへの翻訳を包含し、全て
の天然の転写後及び翻訳後修飾を更に包含する。抗体又はその抗原結合フラグメントの発
現又は生成は、細胞の細胞質内、又は細胞外環境、例えば、細胞培養の増殖培地内でもよ
い。
「処置すること」又は「処置」という用語は、損傷、病理、又は病状の減弱又は改善に
おける、何らかの成功又は成功の兆候を指し、これには、寛解、緩解、症状の低減若しく
は病状を患者にとってより許容できるものにすること、変性又は低下速度を遅くすること
、変性による最終的な衰弱を和らげること、患者の肉体的又は精神的健康を改善すること
、あるいは生存期間を延長することなどの、何らかの客観的又は主観的パラメータを含む
。治療は、客観的又は主観的なパラメータにより評価されてもよい。同パラメータには、
身体検査、神経学的検査、又は精神医学評価の結果が挙げられる。
「有効量」又は「治療的に有効な量」は、必要とされる用量及び期間において、所望の
治療結果を達成するのに有効な量を意味する。治療的に有効な量のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３
抗体は、個体の病態、年齢、性別、及び体重、並びに個体における所望の応答を引き出す
抗体の能力等の要因に従って変動し得る。治療的に有効な量はまた、抗体又は抗体部分の
任意の毒性又は有害作用より、治療的に有益な作用が上回る量でもある。
「抗体」は、特に断らない限り、免疫グロブリンの全てのアイソタイプ（ＩｇＧ、Ｉｇ
Ａ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＹ）を指し、種々の単量体、多量体、及びキメラ
型を含む。ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、及び抗体様ポリペプチ
ド、例えば、キメラ抗体及びヒト化抗体が、「抗体」という用語に具体的に包含される。
「抗原結合フラグメント」は、特定の抗原に対して結合親和性を示し得る任意のタンパ
ク質性構造体である。抗原結合フラグメントは、任意の既知の手法、例えば、酵素開裂、
ペプチド合成、及び組み換え手法により提供されたものを含む。一部の抗原結合フラグメ
ントは、親抗体分子の抗原結合特異性を保持しているインタクトな抗体の部分から構成さ
れる。例えば、抗原結合フラグメントは、特定の抗原に結合することが既知である抗体の
、少なくとも１つの可変領域（重鎖若しくは軽鎖の可変領域のいずれか一方）、又は１つ
若しくは２つ以上のＣＤＲを含んでもよい。適切な抗原結合フラグメントの例には、ディ
アボディ（diabodies）及び一本鎖分子、並びにＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｃ、Ｆａｂ
ｃ、及びＦｖ分子、一本鎖（Ｓｃ）抗体、個々の抗体軽鎖、個々の抗体重鎖、抗体鎖若し
くはＣＤＲと他のタンパク質との間でのキメラ融合体、タンパク質スキャフォールド、重
鎖単量体若しくは二量体、軽鎖単量体若しくは二量体、１本の重鎖と１本の軽鎖とからな
る二量体、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１ドメインからなる一価フラグメント、国際公開
第２００７０５９７８２号に記載された一価抗体、ヒンジ領域においてジスルフィド結合
により連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント、Ｖ．ｓｕｂ．Ｈ及
びＣ．ｓｕｂ．Ｈ１ドメインから本質的になるＦｄフラグメント、抗体の１つのアームの
ＶＬ及びＶＨドメインから本質的になるＦｖフラグメント、ＶＨドメインから本質的にな
り、ドメイン抗体とも呼ばれる（Ｈｏｌｔ ｅｔ ａｌ；Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ
ｎｏｌ．２００３ Ｎｏｖ．；２１（１１）：４８４～９０）ｄＡｂフラグメント（Ｗａ
ｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４１，５４４～５４６（１９８９））、ラクダ科
動物のもの又はナノボディ（Ｒｅｖｅｔｓ ｅｔ ａｌ；Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｂｉ
ｏｌ Ｔｈｅｒ．２００５ Ｊａｎ．；５（１）：１１１～２４）、単離された相補性決
定領域（ＣＤＲ）などが挙げられる。全ての抗体アイソタイプが、抗原結合フラグメント
を生成するのに使用されてもよい。加えて、抗原結合フラグメントは、対象となる所与の
抗原に対する親和性を付与する方向にポリペプチドセグメントをうまく組み込み得る、抗
体以外のタンパク質性フレームワーク、例えば、タンパク質スキャフォールドを含んでも
よい。抗原結合フラグメントは、組み換えにより生成されてもよく、又はインタクトな抗
体の酵素分解若しくは化学分解により生成されてもよい。「抗体又はその抗原結合フラグ
メント」という表現は、所与の抗原結合フラグメントが、この表現内で参照された抗体の
１つ又は２つ以上のアミノ酸セグメントを組み込んでいることを示すために使用されても
よい。
「ＣＤＲ」及びその複数形「ＣＤＲｓ」という用語は、相補性決定領域（ＣＤＲ）であ
って、そのうちの３つが軽鎖可変領域（ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３）の結
合特性を構成し、３つが重鎖可変領域（ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３）の結
合特性を構成する、相補性決定領域（ＣＤＲ）を意味する。ＣＤＲは、抗体分子の機能的
活性に寄与し、スキャフォールド領域又はフレームワーク領域を含むアミノ酸配列によっ
て分離される。正確な定義上のＣＤＲの境界及び長さは、様々な分類及び番号付けシステ
ムによって異なる。したがって、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、接触
定義、又は任意の他の境界定義によって参照され得る。境界が異なるにもかかわらず、こ
れらのシステムの各々は、可変配列内のいわゆる「超可変領域」を構成する要素において
ある程度のオーバーラップを有する。したがって、これらのシステムによるＣＤＲの定義
は、隣接するフレームワーク領域についての長さ及び境界領域の点で異なることがある。
例えば、それぞれ参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａ
ｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ．ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１～
３２４２（１９９１）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，「Ｃａｎｏｎｉｃａｌ Ｓｔｒ
ｕｃｔｕｒｅｓ Ｆｏｒ ｔｈｅ Ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ Ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ
Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，」Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１（１９８
７）；並びにＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，「Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ａｎｔｉｇｅｎ
Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ：Ｃｏｎｔａｃｔ Ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ Ｂｉｎｄｉ
ｎｇ Ｓｉｔｅ Ｔｏｐｏｇｒａｐｈｙ，」Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２（１
９９６））を参照されたい。
典型的には、ＣＤＲは、カノニカル構造として分類され得るループ構造を形成する。「
カノニカル構造」という用語は、抗原結合（ＣＤＲ）ループによって採用される主鎖立体
構造を意味する。比較構造の研究から、６つの抗原結合ループのうちの５つは利用可能な
立体構造のレパートリーがごく限られていることが判明している。各カノニカル構造は、
ポリペプチド主鎖のねじれ角によって特徴付けられ得る。したがって、ループの大部分の
アミノ酸配列の可変性は高いのにもかかわらず、抗体間の対応するループは非常に類似し
た三次元構造を有している（Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，「Ｃａｎｏｎｉｃａｌ Ｓ
ｔｒｕｃｔｕｒｅｓ Ｆｏｒ ｔｈｅ Ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ Ｒｅｇｉｏｎｓ
ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，」Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１（１
９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，「Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｉｍ
ｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ Ｒｅｇｉｏｎｓ，」Ｉ ３４
２：８７７（１９８９）；Ｍａｒｔｉｎ ａｎｄ Ｔｈｏｒｎｔｏｎ，「Ｓｔｒｕｃｔｕ
ｒａｌ Ｆａｍｉｌｉｅｓ ｉｎ Ｌｏｏｐｓ ｏｆ Ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ Ｐｒｏｔ
ｅｉｎｓ：Ａｕｔｏｍａｔｉｃ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｍｏｄｅｌｌｉｎｇ
ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，」Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ
ｌ．２６３：８００（１９９６）、それぞれ参照によりその全体が本明細書に組み込まれ
る）。更に、とられるループ構造とその周囲のアミノ酸配列との間には関係がある。特定
のカノニカルクラスの立体構造は、ループの長さと、ループ内の重要な位置並びに保存さ
れたフレームワーク（すなわち、ループの外側）内にあるアミノ酸残基とによって決定さ
れる。したがって、これらの重要なアミノ酸残基の存在に基づいて、特定のカノニカルク
ラスへの割り当てを行うことができる。
「ポリペプチド」という用語は、「タンパク質」という用語と互換的に使用され、その
最も広い意味において、２つ又はそれ以上のサブユニットアミノ酸、アミノ酸類似体、又
はペプチド模倣体の化合物を指す。サブユニットは、ペプチド結合によって連結されてい
てもよい。別の実施形態では、サブユニットは、他の結合、例えば、エステル、エーテル
などによって連結されてもよい。本明細書で使用されるとき、「アミノ酸」という用語は
、グリシン並びにＤ及びＬ光学異性体の両方と、アミノ酸類似体と、ペプチド模倣体とを
含む、天然及び／若しくは非天然アミノ酸又は合成アミノ酸のいずれかを指す。３つ又は
それ以上のアミノ酸のペプチドは、ペプチド鎖が短い場合、一般にオリゴペプチドと称さ
れる。ペプチド鎖が長い場合、ペプチドは、一般にポリペプチド又はタンパク質と称され
る。
抗体又は抗体フラグメントの文脈において使用されるとき、「特異的に結合（Specific
ally binds）」若しくは「特異的に結合（binds specifically）」又はそれらの派生語は
、免疫グロブリン遺伝子又は免疫グロブリン遺伝子のフラグメントによりコードされたド
メインを介し、混合された様々な分子を含有するサンプル中で他の分子に優先的に結合す
ることなく対象となるタンパク質の１つ又は２つ以上のエピトープに結合することを表わ
す。典型的には、抗体は、表面プラズモン共鳴アッセイ又は細胞結合アッセイにより測定
された場合、約１×１０-8Ｍ未満のＫdで、同種の抗原に結合する。「［抗原］特異的」
抗体（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体）等の表現は、列挙された抗体が列挙された抗原
に特異的に結合することを伝える意味である。
「ポリヌクレオチド」は、同義的に「核酸分子」、「ヌクレオチド」、又は「核酸」と
呼ばれ、非修飾ＲＮＡ若しくはＤＮＡ又は修飾ＲＮＡ若しくはＤＮＡでもよい、任意のポ
リリボヌクレオチド又はポリデオキシリボヌクレオチドを指す。「ポリヌクレオチド」に
は、一本鎖及び二本鎖ＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖の領域の混合物であるＤＮＡ、一本鎖及
び二本鎖ＲＮＡ、並びに一本鎖及び二本鎖の領域の混合物であるＲＮＡ、ＤＮＡ及びＲＮ
Ａを含むハイブリッド分子（一本鎖、又はより典型的には、二本鎖、又は一本鎖及び二本
鎖の領域の混合物でもよい）が挙げられるが、これらに限定されない。加えて、「ポリヌ
クレオチド」は、ＲＮＡ若しくはＤＮＡ又はＲＮＡ及びＤＮＡの両方を含む三本鎖領域を
指す。用語、ポリヌクレオチドには、１つ又は２つ以上の修飾塩基を含有するＤＮＡ又は
ＲＮＡ、及び安定性若しくは他の理由により修飾された主鎖を有するＤＮＡ又はＲＮＡも
含まれる。「修飾」塩基は、例えば、トリチル化塩基及び異常な塩基、例えば、イノシン
を含む。各種の修飾が、ＤＮＡ及びＲＮＡになされてもよい。したがって、「ポリヌクレ
オチド」は、典型的に天然に認められるポリヌクレオチドの、化学反応、酵素反応又は代
謝反応により修飾された形態、並びにウイルス及び細胞のＤＮＡ及びＲＮＡの特徴を有す
る化学的形態を包含する。「ポリヌクレオチド」はまた、比較的短い核酸鎖（多くの場合
、オリゴヌクレオチドと呼ばれる）も包含する。
「ベクター」とは、セグメントの複製又は発現をもたらすように、別の核酸セグメント
を操作可能に挿入できるレプリコン、例えば、プラスミド、ファージ、コスミド、又はウ
イルスのことである。
本明細書で使用されるとき、「宿主細胞」という用語は、例えば、初代細胞、培養中の
細胞、又は細胞株由来の細胞といった任意のタイプの細胞であってよい。特定の実施形態
では、「宿主細胞」という用語は、核酸分子を遺伝子導入された細胞、及びそのような細
胞の子孫又は潜在的子孫を指す。このような細胞の子孫は、核酸分子で遺伝子導入された
親細胞とは、例えば、宿主細胞ゲノムへの核酸分子の後続の生成又は集積において生じ得
る、変異又は環境からの影響により、同一ではないことがある。「発現」及び「生成」と
いう用語は、本明細書において同義的に使用され、遺伝子産物の生合成を意味する。これ
らの用語は、遺伝子のＲＮＡへの転写を包含する。また、これらの用語は、ＲＮＡの１つ
又は２つ以上のポリペプチドへの翻訳を包含し、全ての天然の転写後及び翻訳後修飾を更
に包含する。抗体又はその抗原結合フラグメントの発現又は生成は、細胞の細胞質内、又
は細胞外環境、例えば、細胞培養用の増殖培地内でもよい。「実質的に同じ」の意味は、
この用語が使用される文脈に応じて異なる場合がある。重鎖及び軽鎖並びにこれらをコー
ドする遺伝子中には天然の配列バリエーションが存在し得ることから、本明細書に記載さ
れたアミノ酸配列又は抗体若しくは抗原結合フラグメントをコードする遺伝子内には、固
有の結合特性（例えば、特異的及び親和性）にはほとんど影響しない、又は影響しない、
ある程度のバリエーションが見られることが予測される。このような予測は、部分的には
、遺伝暗号の縮重及び保存的アミノ酸配列バリエーションの進化的成功による。同バリエ
ーションは、コードされたタンパク質の性質を認識され得るほどには改変させない。した
がって、核酸配列の文脈において、「実質的に同じ」は、２つ以上の配列間での少なくと
も６５％の同一性を意味する。好ましくは、この用語は、２つ以上の配列間での少なくと
も７０％の同一性、より好ましくは、少なくとも７５％の同一性、より好ましくは、少な
くとも８０％の同一性、より好ましくは、少なくとも８５％の同一性、より好ましくは、
少なくとも９０％の同一性、より好ましくは、少なくとも９１％の同一性、より好ましく
は、少なくとも９２％の同一性、より好ましくは、少なくとも９３％の同一性、より好ま
しくは、少なくとも９４％の同一性、より好ましくは、少なくとも９５％の同一性、より
好ましくは、少なくとも９６％の同一性、より好ましくは、少なくとも９７％の同一性、
より好ましくは、少なくとも９８％の同一性、及びより好ましくは、少なくとも９９％以
上の同一性を意味する。２つの配列間の同一性（％）は、ギャップ数及び各ギャップの長
さを考慮して、配列により共有される同一の位置の数の関数である（すなわち、相同性の
割合（％）＝同一位置数／位置の総数×１００）。同考慮は、２つの配列の最適なアライ
メントを導くのに必要である。２つのヌクレオチド又はアミノ酸配列間の同一性パーセン
トは、例えば、Ｅ．Ｍｅｙｅｒｓ ａｎｄ Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ，Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ
．Ｂｉｏｓｃｉ ４，１１～１７（１９８８）のアルゴリズムを使用して決定されてもよ
い。同アルゴリズムは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれており
、ＰＡＭ１２０重み付け残基テーブル、ギャップ長ペナルティ１２、及びギャップペナル
ティ４を使用する。加えて、２つのアミノ酸配列間の同一性（％）は、Ｎｅｅｄｌｅｍａ
ｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８，４４４～４５３（１９７０）
のアルゴリズムを使用して決定されてもよい。
タンパク質の機能に実質的な影響を有することなく、タンパク質のアミノ酸配列内に生
じ得るバリエーションの度合いは、核酸配列のバリエーションの度合いより非常に小さい
。これは、同じ縮重原理がアミノ酸配列には当てはまらないためである。したがって、抗
体又は抗原結合フラグメントの文脈において、「実質的に同じ」は、記載された抗体又は
抗原結合フラグメントに対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９
６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有する抗体又は抗原結合フラグメントを意
味する。他の実施形態は、本明細書に記載された抗体及び抗原結合フラグメントと有意な
同一性を共有しないが、１つ又は２つ以上のＣＤＲ又は結合性を付与するのに必要とされ
る他の配列を組み込む、フレームワーク、スキャフォールド、又は他の非結合領域を有し
、本明細書に記載されたこのような配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９
４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有する、ＧＰＲＣ５Ｄ特
異的抗体又は抗原結合フラグメントを含む。
「対象」という用語は、ヒト及び非ヒト動物を意味し、全ての脊椎動物、例えば、哺乳
類及び非哺乳類、例えば、非ヒト霊長類、マウス、ウサギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、
ウシ、ニワトリ、両生類、及び爬虫類を意味する。記載された方法の多くの実施形態では
、対象はヒトである。
本明細書で使用されるとき、「再指向」又は「再指向する」という用語は、ＧＰＲＣ５
Ｄ×ＣＤ３抗体が、Ｔ細胞の活性を、かかる細胞がもともと備えている同種に特異的なも
のから、ＧＰＲＣ５Ｄ発現細胞に対し反応性があるものへと効果的に変換する能力を指す
。
本明細書で使用されるとき、「サンプル」という用語は、対象から単離された、類似す
る流体、細胞、又は組織（例えば、外科手術により切除された腫瘍組織、微細針吸引を含
む生検）の収集物、並びに対象内に存在する流体、細胞、又は組織を意味する。一部の実
施形態では、サンプルは、体液である。体液は、典型的には、生理学的温度において液体
であり、対象又は生物学的資源中に存在し、これらから採取され、これらから外に出され
、あるいは抽出された天然に生じる流体を含んでもよい。特定の組織、臓器、又は局所的
な領域から得られたある種の体液及びその他のある種の体液は、対象又は生物学的資源に
おいて、より全体的に又は全身的に適していてもよい。体液の例としては、血液、血清及
び漿膜液、血漿、リンパ、尿、唾液、嚢胞液、涙、糞、痰、分泌組織及び臓器の粘膜分泌
物、膣分泌物、腹水液、例えば、非固体腫瘍に関連するもの、胸膜、心膜、腹膜、腹部及
び他の体腔の液体、気管支洗浄により収集された液体等が挙げられる。体液はまた、対象
又は生体資源と接触した溶液、例えば、細胞又は臓器馴化培地を含む細胞及び臓器培養培
地、洗浄液等を含んでもよい。本明細書で使用されるとき、「サンプル」という用語は、
対象から取り出された材料又は対象中に存在する材料を包含する。
「既知の標準」は、既知の量又は濃度のＧＰＲＣ５Ｄを有する溶液でもよい。この場合
、この溶液は、自然発生する溶液、例えば、初期、中期、後期、進行性、又は静的がんを
有することが判明している患者由来のサンプルでもよく、又はこの溶液は、希釈された既
知の量のＧＰＲＣ５Ｄを含む緩衝水溶液等の合成溶液でもよい。本明細書に記載された既
知の標準は、対象から単離されたＧＰＲＣ５Ｄ、組み換え若しくは精製されたＧＰＲＣ５
Ｄタンパク質、又は病態に関連するＧＰＲＣ５Ｄ濃度の値を含んでもよい。
本明細書で使用するとき、用語「Ｇタンパク質連結受容体ファミリーＣグループ５メン
バーＤ」及び「ＧＰＲＣ５Ｄ」は、特に、例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｂ
Ｃ０６９３４１、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿０６１１２４．１及びＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／
Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ９ＮＺＤ１に記載のとおりのヒトＧＰＲＣ５
Ｄタンパク質を包含する（Ｂｒａｕｎｅｒ－Ｏｓｂｏｒｎｅ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．２００１
，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １５１８，２３７～２４８も参照のこと
）。
「ＣＤ３」という用語は、ヒトＣＤ３タンパク質マルチサブユニット複合体を意味する
。ＣＤ３タンパク質マルチサブユニット複合体は、６つの区別できるポリペプチド鎖から
構成される。これらは、ＣＤ３γ鎖（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ Ｐ０９６９３）、ＣＤ３δ鎖
（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ Ｐ０４２３４）、２つのＣＤ３ε鎖（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ Ｐ０
７７６６）、及び１つのＣＤ３ζ鎖ホモ二量体（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ２０９６３）を含
み、Ｔ細胞受容体α及びβ鎖と会合する。「ＣＤ３」という用語は、特に断りのない限り
、細胞（Ｔ細胞を含む）により本来発現されているか、又はそれらのポリペプチドをコー
ドする遺伝子若しくはｃＤＮＡにより遺伝子導入された細胞上に発現され得る任意のＣＤ
３変異体、アイソフォーム、及び種間ホモログを含む。
「ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３抗体」は、多重特異的抗体、場合により、二重特異性抗体であ
り、同二重特異性抗体は、２種類の異なる抗原結合領域を含み、一方の抗原結合領域は、
抗原ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合し、もう一方の抗原結合領域は、ＣＤ３に特異的に結合
する。多重特異的抗体は、二重特異性抗体、ディアボディ（diabody）、又は類似する分
子であり得る（ディアボディの説明については、例えば、ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９０（１４
），６４４４～８（１９９３）を参照のこと）。本明細書で提供された二重特異性抗体、
ディアボディ等は、ＧＰＲＣ５Ｄの一部分に加えて、任意の適切な標的に結合してもよい
。「二重特異性抗体」という用語は、異なる抗体配列により定義された、２種類の異なる
抗原結合領域を有する抗体と理解されたい。これは、異なる標的結合と理解され得るが、
１つの標的中の異なるエピトープに同様に結合することを含む。
「参照サンプル」は、別のサンプル、例えば、試験サンプルと比較することで、比較さ
れるサンプルの特性を評価できるサンプルである。参照サンプルは、試験サンプルとの比
較の際に基準として機能する、特性評価済みの何らかの特性を有する。例えば、参照サン
プルは、がんを有する対象を示すＧＰＲＣ５Ｄレベルについてのベンチマークとして使用
することができる。参照サンプルは、必ずしも試験サンプルと平行して分析されなくても
よい。そのため一部の例では、参照サンプルは、所与の状態を特性評価するために予め設
定された数値又は範囲、例えば、対象におけるがんの指標となるＧＰＲＣ５Ｄレベルでも
よい。この用語はまた、生理学的状態又は病態、例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんに関連す
ることが既知であるが、含まれるＧＰＲＣ５量が不明である、比較目的で使用されるサン
プルを含む。
ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんの進行の文脈において使用されるとき、「進行」という用語は、
より重篤でない状態からより重篤な状態へのがんの変化を含む。これは、腫瘍の数又は重
症度、転移の程度、がんが成長又は拡散する速度等の増大を含むことができる。例えば、
「結腸がんの進行」には、このようながんの、より重篤でない状態からより重篤な状態へ
の進行、例えば、ステージＩからステージＩＩへ、ステージＩＩからステージＩＩＩへ等
の進行が挙げられる。
ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんの退縮の文脈において使用されるとき、「退縮」という用語は、
より重篤な状態からより重篤でない状態へのがんの変化を含む。これは、腫瘍の数又は重
症度、転移の程度、がんが成長又は拡散する速度等の低減を含むことができると考えられ
る。例えば、「結腸がんの退縮」には、このようながんの、より重篤な状態からより重篤
でない状態への退縮、例えば、ステージＩＩＩからステージＩＩへ、ステージＩＩからス
テージＩへ等の回復（progression）が挙げられる。
不変のＧＰＲＣ５Ｄ発現がんの文脈において使用されるとき、「不変の」という用語は
、臨床的に関連する期間にわたって、がんが進行している又は退縮しているとみなすのに
有意に十分な程度の変化が生じていない、又は変化していなかったと病態を説明すること
を意図している。
本明細書に記載された実施形態は、特定の方法、試薬、化合物、組成物、又は生物系に
限定されるものではなく、当然、様々に変更され得る。
ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメント
本明細書において、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する、単離されたモノクローナル抗体
又は抗原結合フラグメントが記載されている。抗体分子の全体的な構造は、抗原結合ドメ
インを含む。同ドメインは、重鎖及び軽鎖並びにＦｃドメインを含み、補体固定及び抗体
の結合受容体（binding antibody receptors）を含む各種の機能を果たす。
記載されたＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、全てのアイソタイプ
である、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ、並びに４本鎖免疫グロブリン構
造の合成多量体を含む。記載された抗体又は抗原結合フラグメントはまた、雌鳥又はシチ
メンチョウの血清及び雌鳥又はシチメンチョウの卵黄中に一般的に見出されるＩｇＹアイ
ソタイプも含む。
ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、組み換え手法により任意の種か
ら得ることができる。例えば、抗体又は抗原結合フラグメントは、マウス、ラット、ヤギ
、ウマ、ブタ、ウシ、ニワトリ、ウサギ、ラクダ、ロバ、ヒト、又はそれらのキメラ版で
もよい。ヒトへの投与に使用するために、非ヒト由来の抗体又は抗原結合フラグメントは
、ヒト患者への投与時に、抗原性がより低くなるよう遺伝的に又は構造的に改変されても
よい。
一部の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントはキメラである。本明細書で使用
されるとき、「キメラ」という用語は、抗体又はその抗原結合フラグメントであって、非
ヒト哺乳類、げっ歯類、又は爬虫類の抗体アミノ酸配列に由来する少なくとも１つの可変
ドメインの少なくともいくらかの部分を有するものの、それらの残りの部分はヒトに由来
するものである、抗体又はその抗原結合フラグメントを指す。
一部の実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。ヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリ
ンに由来する最少配列を含有する、キメラ免疫グロブリン、その免疫グロブリン鎖、又は
フラグメント（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又は抗体の他の抗原
結合部分配列）であってもよい。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性
決定領域（ＣＤＲ）からの残基が所望の特異性、親和性、及び能力を有する非ヒト種、例
えば、マウス、ラット、又はウサギのＣＤＲからの残基（ドナー抗体）により置き換えら
れているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。一般的には、ヒト化抗体は、
少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むこととなる。同可
変ドメイン中、全て又は実質的に全てのＣＤＲ領域は、非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領
域に対応し、全て又は実質的に全てのフレームワーク領域は、ヒト免疫グロブリン配列の
フレームワーク領域である。ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的に
は、ヒト免疫グロブリンのＦｃのうち少なくとも一部分を含んでもよい。
本明細書に記載された抗体又は抗原結合フラグメントは、各種の形態で存在し得るが、
表１に示された抗体ＣＤＲのうち１つ又は２つ以上を含むこととなる。
本明細書において、ＧＰＲＣ５Ｄに免疫特異的に結合する、単離された抗体及び抗原結
合フラグメントが記載されている。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又は抗
原結合フラグメントは、ヒトＩｇＧ又はその誘導体である。本明細書で例示されたＧＰＲ
Ｃ５Ｄ特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトのものであるが、例示された抗体又
は抗原結合フラグメントは、キメラ化されてもよい。
一部の実施形態では、表１に記載された抗体のうちいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２
、及びＣＤＲ３を含む重鎖を含む、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又はその抗原結合フラグメン
トが提供される。一部の実施形態では、表１に記載された抗体のうちいずれか１つのＣＤ
Ｒ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖と、表１に記載された抗体のうちいずれか１つ
のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む軽鎖と、を含む、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又
はその抗原結合フラグメントが提供される。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号
１を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号５を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９を含む重鎖ＣＤ
Ｒ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは
、配列番号１を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号５を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号９を含む重
鎖ＣＤＲ３、配列番号１３を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１６を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び
配列番号１９を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又は抗原結合フラ
グメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５
Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号５２と実質的に同じ又は同一の重鎖
可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグ
メントは、配列番号５２と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号５６と
実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の
重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＧＰＲＣ５Ｄアームである
、二重特異性構築物への包含に適している。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号
２を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号６を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０を含む重鎖Ｃ
ＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメント
は、配列番号２を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号６を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号１０を含
む重鎖ＣＤＲ３、配列番号１３を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１６を含む軽鎖ＣＤＲ２、
及び配列番号１９を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又は抗原結合
フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。一部の実施形態では、ＧＰＲ
Ｃ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号５３と実質的に同じ又は同一の
重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フ
ラグメントは、配列番号５３と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号５
６と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗
体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＧＰＲＣ５Ｄアームで
ある、二重特異性構築物への包含に適している。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号
３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号７を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１を含む重鎖Ｃ
ＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメント
は、配列番号３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号７を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号１１を含
む重鎖ＣＤＲ３、配列番号１４を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１７を含む軽鎖ＣＤＲ２、
及び配列番号２０を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又は抗原結合
フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。一部の実施形態では、ＧＰＲ
Ｃ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号５４と実質的に同じ又は同一の
重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フ
ラグメントは、配列番号５４と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号５
７と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗
体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＧＰＲＣ５Ｄアームで
ある、二重特異性構築物への包含に適している。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号
４を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号８を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１２を含む重鎖Ｃ
ＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメント
は、配列番号４を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号８を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号１２を含
む重鎖ＣＤＲ３、配列番号１５を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１８を含む軽鎖ＣＤＲ２、
及び配列番号２１を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又は抗原結合
フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。一部の実施形態では、ＧＰＲ
Ｃ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号５５と実質的に同じ又は同一の
重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フ
ラグメントは、配列番号５５と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号５
８と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗
体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＧＰＲＣ５Ｄアームで
ある、二重特異性構築物への包含に適している。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号
６１を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号６７を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７２を含む重
鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメ
ントは、配列番号６１を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号６７を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号
７２を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号１３を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７８を含む軽鎖Ｃ
ＤＲ２、及び配列番号８０を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又は
抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。一部の実施形態では
、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号８２と実質的に同じ又
は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗
原結合フラグメントは、配列番号８２と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配
列番号９２と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討
された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＧＰＲＣ５Ｄ
アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号
２を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２８を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３０を含む重鎖
ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメン
トは、配列番号２を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２８を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号３０
を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号１３を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１６を含む軽鎖ＣＤＲ
２、及び配列番号１９を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又は抗原
結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。一部の実施形態では、Ｇ
ＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号８３と実質的に同じ又は同
一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結
合フラグメントは、配列番号８３と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番
号５６と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討され
た抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＧＰＲＣ５Ｄアー
ムである、二重特異性構築物への包含に適している。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号
２７を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２９を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７３を含む重
鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメ
ントは、配列番号２７を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２９を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号
７３を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号１４を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１７を含む軽鎖Ｃ
ＤＲ２、及び配列番号２０を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又は
抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。一部の実施形態では
、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号８４と実質的に同じ又
は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗
原結合フラグメントは、配列番号８４と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配
列番号５７と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討
された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＧＰＲＣ５Ｄ
アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号
２７を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２９を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１を含む重
鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメ
ントは、配列番号２７を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２９を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号
１１を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号１４を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１７を含む軽鎖Ｃ
ＤＲ２、及び配列番号２０を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又は
抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。一部の実施形態では
、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号８５と実質的に同じ又
は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗
原結合フラグメントは、配列番号８５と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配
列番号５７と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討
された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＧＰＲＣ５Ｄ
アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号
６２を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号６８を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７４を含む重
鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメ
ントは、配列番号６２を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号６８を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号
７４を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号１４を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１７を含む軽鎖Ｃ
ＤＲ２、及び配列番号２０を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又は
抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。一部の実施形態では
、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号８６と実質的に同じ又
は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗
原結合フラグメントは、配列番号８６と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配
列番号５７と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討
された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＧＰＲＣ５Ｄ
アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号
６３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号６９を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７５を含む重
鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメ
ントは、配列番号６３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号６９を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号
７５を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号１３を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７８を含む軽鎖Ｃ
ＤＲ２、及び配列番号８０を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又は
抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。一部の実施形態では
、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号８７と実質的に同じ又
は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗
原結合フラグメントは、配列番号８７と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配
列番号９２と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討
された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＧＰＲＣ５Ｄ
アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号
６４を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号７０を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１２を含む重
鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメ
ントは、配列番号６４を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号７０を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号
１２を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号１５を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１８を含む軽鎖Ｃ
ＤＲ２、及び配列番号２１を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又は
抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。一部の実施形態では
、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号８８と実質的に同じ又
は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗
原結合フラグメントは、配列番号８８と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配
列番号５８と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討
された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＧＰＲＣ５Ｄ
アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号
６５を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号６８を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７６を含む重
鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメ
ントは、配列番号６５を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号６８を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号
７６を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号９５を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７９を含む軽鎖Ｃ
ＤＲ２、及び配列番号８１を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又は
抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。一部の実施形態では
、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号８９と実質的に同じ又
は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗
原結合フラグメントは、配列番号８９と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配
列番号９３と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討
された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＧＰＲＣ５Ｄ
アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号
６６を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号７１を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７７を含む重
鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメ
ントは、配列番号６６を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号７１を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号
７７を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号１５を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１８を含む軽鎖Ｃ
ＤＲ２、及び配列番号２１を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。このＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又は
抗原結合フラグメントは、ヒトフレームワーク配列を含んでもよい。一部の実施形態では
、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号９１と実質的に同じ又
は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗
原結合フラグメントは、配列番号９１と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配
列番号９４と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討
された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＧＰＲＣ５Ｄ
アームである、二重特異性構築物への包含に適している。
一部の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ又はその誘導体、例え
ば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４のアイソタイプである。抗体がＩｇＧ
１アイソタイプである一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１のＦｃ領域（配列番号６０
）を含む。
配列番号６０
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳ
ＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴ
ＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ
ＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷ
ＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫ
ＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥ
ＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶ
ＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴ
ＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
抗体がＩｇＧ４アイソタイプである一部の実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域（配列番号
５９）中にＳ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ置換を含有する。
配列番号５９
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳ
ＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴ
ＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶ
ＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤ
ＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫ
ＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫ
ＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳ
ＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳ
ＬＳＬＳＬＧＫ
上記段落において検討された、ＣＤＲ及び／又は可変ドメイン配列により定義された特
異的抗体は、これらの変形例を含んでもよい。
ＧＰＲＣ５Ｄに免疫特異的に結合する抗体又は抗原結合フラグメントをコードする単離
されたポリヌクレオチドもまた開示される。本明細書で提供された可変ドメインセグメン
トをコード可能な単離されたポリヌクレオチドは、抗体又は抗原結合フラグメントを生成
する同一の又は異なるベクターに含まれてもよい。ＧＰＲＣ５Ｄ抗体をコードする例示的
なポリヌクレオチド配列を以下に示す抗体をコード：
重鎖配列（配列番号：９６）：
ａｔｇｇｃｃｔｇｇｇｔｃｔｇｇａｃｃｃｔｇｃｔｇｔｔｃｃｔｇａｔｇｇｃｃｇｃｔｇ
ｃｃｃａｇａｇｃａｔｃｃａｇｇｃｃｃａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｃａｇａｇｃｇｇ
ｃｇｃｃｇａｇｇｔｇａａｇａａｇｃｃｃｇｇｃｇｃｃａｇｃｇｔｇａａｇｇｔｇａｇｃ
ｔｇｃａａｇｇｃｃａｇｃｇｇｃｔａｃａｇｃｔｔｃａｃｃｇｇｃｔａｃａｃｃａｔｇａ
ａｃｔｇｇｇｔｇｃｇｇｃａｇｇｃｃｃｃｃｇｇｃｃａｇｇｇｃｃｔｇｇａｇｔｇｇａｔ
ｇｇｇｃｃｔｇａｔｃａａｃｃｃｃｔａｃａａｃａｇｃｇａｃａｃｃａａｃｔａｃｇｃｃ
ｃａｇａａｇｃｔｇｃａｇｇｇｃｃｇｇｇｔｇａｃｃａｔｇａｃｃａｃｃｇａｃａｃｃａ
ｇｃａｃｃａｇｃａｃｃｇｃｃｔａｃａｔｇｇａｇｃｔｇｃｇｇａｇｃｃｔｇｃｇｇａｇ
ｃｇａｃｇａｃａｃｃｇｃｃｇｔｇｔａｃｔａｃｔｇｃｇｃｃｃｇｇｇｔｇｇｃｃｃｔｇ
ｃｇｇｇｔｇｇｃｃｃｔｇｇａｃｔａｃｔｇｇｇｇｃｃａｇｇｇｃａｃｃｃｔｇｇｔｇａ
ｃｃｇｔｇａｇｃａｇｃｇｃｃｔｃｃａｃｃａａｇｇｇｃｃｃａｔｃｃｇｔｃｔｔｃｃｃ
ｃｃｔｇｇｃｇｃｃｃｔｇｃｔｃｃａｇｇａｇｃａｃｃｔｃｃｇａｇａｇｃａｃａｇｃｃ
ｇｃｃｃｔｇｇｇｃｔｇｃｃｔｇｇｔｃａａｇｇａｃｔａｃｔｔｃｃｃｃｇａａｃｃｇｇ
ｔｇａｃｇｇｔｇｔｃｇｔｇｇａａｃｔｃａｇｇｃｇｃｃｃｔｇａｃｃａｇｃｇｇｃｇｔ
ｇｃａｃａｃｃｔｔｃｃｃｇｇｃｔｇｔｃｃｔａｃａｇｔｃｃｔｃａｇｇａｃｔｃｔａｃ
ｔｃｃｃｔｃａｇｃａｇｃｇｔｇｇｔｇａｃｃｇｔｇｃｃｃｔｃｃａｇｃａｇｃｔｔｇｇ
ｇｃａｃｇａａａａｃｃｔａｃａｃｃｔｇｃａａｃｇｔａｇａｔｃａｃａａｇｃｃｃａｇ
ｃａａｃａｃｃａａｇｇｔｇｇａｃａａｇａｇａｇｔｔｇａｇｔｃｃａａａｔａｔｇｇｔ
ｃｃｃｃｃａｔｇｃｃｃａｃｃａｔｇｃｃｃａｇｃａｃｃｔｇａｇｇｃｃｇｃｃｇｇｇｇ
ｇａｃｃａｔｃａｇｔｃｔｔｃｃｔｇｔｔｃｃｃｃｃｃａａａａｃｃｃａａｇｇａｃａｃ
ｔｃｔｃａｔｇａｔｃｔｃｃｃｇｇａｃｃｃｃｔｇａｇｇｔｃａｃｇｔｇｃｇｔｇｇｔｇ
ｇｔｇｇａｃｇｔｇａｇｃｃａｇｇａａｇａｃｃｃｃｇａｇｇｔｃｃａｇｔｔｃａａｃｔ
ｇｇｔａｃｇｔｇｇａｔｇｇｃｇｔｇｇａｇｇｔｇｃａｔａａｔｇｃｃａａｇａｃａａａ
ｇｃｃｇｃｇｇｇａｇｇａｇｃａｇｔｔｃａａｃａｇｃａｃｇｔａｃｃｇｔｇｔｇｇｔｃ
ａｇｃｇｔｃｃｔｃａｃｃｇｔｃｃｔｇｃａｃｃａｇｇａｃｔｇｇｃｔｇａａｃｇｇｃａ
ａｇｇａｇｔａｃａａｇｔｇｃａａｇｇｔｃｔｃｃａａｃａａａｇｇｃｃｔｃｃｃｇｔｃ
ｃｔｃｃａｔｃｇａｇａａａａｃｃａｔｃｔｃｃａａａｇｃｃａａａｇｇｇｃａｇｃｃｃ
ｃｇａｇａｇｃｃａｃａｇｇｔｇｔａｃａｃｃｃｔｇｃｃｃｃｃａｔｃｃｃａｇｇａｇｇ
ａｇａｔｇａｃｃａａｇａａｃｃａｇｇｔｃａｇｃｃｔｇａｃｃｔｇｃｃｔｇｇｔｃａａ
ａｇｇｃｔｔｃｔａｃｃｃｃａｇｃｇａｃａｔｃｇｃｃｇｔｇｇａｇｔｇｇｇａｇａｇｃ
ａａｔｇｇｇｃａｇｃｃｇｇａｇａａｃａａｃｔａｃａａｇａｃｃａｃｇｃｃｔｃｃｃｇ
ｔｇｃｔｇｇａｃｔｃｃｇａｃｇｇｃｔｃｃｔｔｃｔｔｃｃｔｃｔａｃａｇｃａｇｇｃｔ
ａａｃｃｇｔｇｇａｃａａｇａｇｃａｇｇｔｇｇｃａｇｇａｇｇｇｇａａｔｇｔｃｔｔｃ
ｔｃａｔｇｃｔｃｃｇｔｇａｔｇｃａｔｇａｇｇｃｔｃｔｇｃａｃａａｃｃａｃｔａｃａ
ｃａｃａｇａａｇａｇｃｃｔｃｔｃｃｃｔｇｔｃｔｃｔｇｇｇｔａａａｔｇａ
軽鎖配列（配列番号：９０）：
ａｔｇｃｇｇｇｔｇｃｔｇｇｃｃｃａｇｃｔｇｃｔｇｇｇａｃｔｇｃｔｇｃｔｇｃｔｇｔ
ｇｃｔｔｃｃｃｔｇｇｃｇｃｃａｇａｔｇｃｇａｃａｔｃｃａｇａｔｇａｃｃｃａｇａｇ
ｃｃｃｃａｇｃａｇｃｃｔｇａｇｃｇｃｃａｇｃｇｔｇｇｇｃｇａｃｃｇｇｇｔｇａｃｃ
ａｔｃａｃｃｔｇｃａａｇｇｃｃａｇｃｃａｇａａｃｇｔｇｇｃｃａｃｃｃａｃｇｔｇｇ
ｇｃｔｇｇｔａｃｃａｇｃａｇａａｇｃｃｃｇｇｃａａｇｇｃｃｃｃｃａａｇｃｇｇｃｔ
ｇａｔｃｔａｃａｇｃｇｃｃａｇｃｔａｃｃｇｇｔａｃａｇｃｇｇｃｇｔｇｃｃｃａｇｃ
ｃｇｇｔｔｃａｇｃｇｇｃａｇｃｇｇｃａｇｃｇｇｃａｃｃｇａｇｔｔｃａｃｃｃｔｇａ
ｃｃａｔｃａｇｃａａｃｃｔｇｃａｇｃｃｃｇａｇｇａｃｔｔｃｇｃｃａｃｃｔａｃｔａ
ｃｔｇｃｃａｇｃａｇｔａｃａａｃｃｇｇｔａｃｃｃｃｔａｃａｃｃｔｔｃｇｇｃｃａｇ
ｇｇｃａｃｃａａｇｃｔｇｇａｇａｔｃａａｇｃｇｔａｃｇｇｔｇｇｃｔｇｃａｃｃａｔ
ｃｔｇｔｃｔｔｃａｔｃｔｔｃｃｃｇｃｃａｔｃｔｇａｔｇａｇｃａｇｔｔｇａａａｔｃ
ｔｇｇａａｃｔｇｃｃｔｃｔｇｔｔｇｔｇｔｇｃｃｔｇｃｔｇａａｔａａｃｔｔｃｔａｔ
ｃｃｃａｇａｇａｇｇｃｃａａａｇｔａｃａｇｔｇｇａａｇｇｔｇｇａｔａａｃｇｃｃｃ
ｔｃｃａａｔｃｇｇｇｔａａｃｔｃｃｃａｇｇａｇａｇｔｇｔｃａｃａｇａｇｃａｇｇａ
ｃａｇｃａａｇｇａｃａｇｃａｃｃｔａｃａｇｃｃｔｃａｇｃａｇｃａｃｃｃｔｇａｃｇ
ｃｔｇａｇｃａａａｇｃａｇａｃｔａｃｇａｇａａａｃａｃａａａｇｔｃｔａｃｇｃｃｔ
ｇｃｇａａｇｔｃａｃｃｃａｔｃａｇｇｇｃｃｔｇａｇｃｔｃｇｃｃｃｇｔｃａｃａａａ
ｇａｇｃｔｔｃａａｃａｇｇｇｇａｇａｇｔｇｔｔｇａ
組み換え抗原結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドもまた、本開示の範囲内で
ある。一部の実施形態では、記載されたポリヌクレオチド（及びこのポリヌクレオチドが
コードするペプチド）は、リーダー配列を含む。当技術分野において既知の任意のリーダ
ー配列を利用することができる。リーダー配列は、制限部位又は翻訳開始部位を含み得る
がこれらに限定されない。
本明細書に記載されたＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、記載され
たＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又は抗原結合フラグメントの生物学的特性（例えば、結合親和
性又は免疫エフェクター活性）を保持している、１つ又は複数のアミノ酸置換、欠失、又
は付加を有する多様体を含む。本発明の文脈において、下記注釈は、別途記載のない限り
、変異を説明するのに使用される。ｉ）所与の位置におけるアミノ酸の置換は、例えば、
Ｓ２２８Ｐと記載される。Ｓ２２８Ｐは、２２８位におけるセリンのプロリンによる置換
を意味する。ｉｉ）特定の多様体について、特定の三文字又は一文字コードは、コードＸ
ａａ及びＸを含めて、アミノ酸残基を示すのに使用される。このため、２２８位における
アルギニンについてのセリンの置換は、Ｓ２２８Ｐと表記され、又は２２８位におけるセ
リンについての任意のアミノ酸残基の置換は、Ｓ２２８Ｐと表記される。２２８位におけ
るセリンの欠失の場合には、この欠失は、Ｓ２２８*により示される。当業者であれば、
１つ又は複数のアミノ酸置換、欠失、又は付加を有する多様体を生成することができる。
これらの多様体としては、（ａ）１つ又は２つ以上のアミノ酸残基が保存的又は非保存
的アミノ酸により置換されている多様体、（ｂ）１つ又は２つ以上のアミノ酸がポリペプ
チドに付加され、又は同ポリペプチドから欠失している多様体、（ｃ）１つ又は２つ以上
のアミノ酸が置換基を含む多様体、及び（ｄ）ポリペプチドが別のペプチド又はポリペプ
チド、例えば、融合パートナー、タンパク質タグ、又は他の化学部分と融合した多様体、
を挙げることができる。これらは、ポリペプチドに有用な特性、例えば、抗体に対するエ
ピトープ、ポリヒスチジン配列、ビオチン部分等を付与してもよい。本明細書に記載され
た抗体又は抗原結合フラグメントは、保存的又は非保存的位置のいずれかにおいてある種
からのアミノ酸残基が別の種における対応する残基に置換されている多様体を含んでもよ
い。他の実施形態では、非保存的位置におけるアミノ酸残基は、保存的又は非保存的残基
により置換される。これらの多様体を得るための手法は、遺伝的（欠失、変異等）、化学
的、及び酵素的手法を含めて、当業者に既知である。
本明細書に記載されたＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、いくつか
の抗体アイソタイプ、例えば、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＥを具現化す
ることができる。一部の実施形態では、抗体アイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、Ｉｇ
Ｇ３、又はＩｇＧ４のアイソタイプ、好ましくは、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４のアイソタイプ
である。抗体又はその抗原結合フラグメントの特異性は、ＣＤＲのアミノ酸配列及び配置
により主に決定される。したがって、あるアイソタイプのＣＤＲは、抗原特異性を変化さ
せることなく、別のアイソタイプに変更することができる。あるいは、抗原特異性を変化
させることなく、ハイブリドーマに、ある抗体アイソタイプを別のものにスイッチさせる
技術（アイソタイプスイッチング）が確立されてきた。したがって、このような抗体アイ
ソタイプは、記載された抗体又は抗原結合フラグメントの範囲内にある。
本明細書に記載されたポリヌクレオチドを含むベクターもまた提供される。ベクターは
、発現ベクターであり得る。このため、対象となるポリペプチドをコードする配列を含有
する組み換え発現ベクターは、本開示の範囲内であると想到される。発現ベクターは、１
つ又は２つ以上の追加配列を含有してもよい。同追加配列には、例えば、制御配列（例え
ば、プロモータ、エンハンサー）、選択マーカー、及びポリアデニル化シグナルが挙げら
れるが、これらに限定されない。広い各種の宿主細胞を形質転換するためのベクターは公
知であり、プラスミド、ファージミド、コスミド、バキュロウイルス、バクミド、細菌人
工染色体（ＢＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、並びに、他の細菌、酵母、及びウイル
スのベクターが挙げられるが、これらに限定されない。
本説明の範囲内にある組み換え発現ベクターは、適切な調節エレメントに操作可能に連
結することができる少なくとも１つの組み換えタンパク質をコードする、合成、ゲノム、
又はｃＤＮＡ由来の核酸フラグメントを含む。このような調節エレメントには、転写プロ
モータ、適切なｍＲＮＡリボソーム結合部位をコードする配列、並びに転写及び翻訳の終
了を制御する配列を挙げることができる。発現ベクター、特に、哺乳類の発現ベクターは
また、１つ又は２つ以上の非転写エレメント、例えば、複製の起点、発現される遺伝子に
連結された適切なプロモータ及びエンハンサー、他の５’又は３’フランキング非転写配
列、５’又は３’非翻訳配列（例えば、必須リボソーム結合部位）、ポリアデニル化部位
、スプライスドナー及びアクセプター部位、又は転写終了配列を含んでもよい。宿主にお
いて複製する能力を付与する複製の起点もまた包含されてもよい。
脊椎動物細胞を形質転換するのに使用される発現ベクター中の転写及び翻訳制御配列は
、ウイルス資源により提供することができる。例示的なベクターは、Ｏｋａｙａｍａ ａ
ｎｄ Ｂｅｒｇ，３ Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２８０（１９８３）に記載されたよ
うに構築されてもよい。
一部の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントのコード配列は、強力な構成的プ
ロモータ、例えば、下記遺伝子：ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｈ
ＰＲＴ）、アデノシンデアミナーゼ、ピルビン酸キナーゼ、ベータアクチン、ヒトミオシ
ン、ヒトヘモグロビン、ヒト筋クレアチン等のためのプロモータの制御下に置かれる。加
えて、多くのウイルスプロモータが、真核細胞中で恒常的に機能し、記載された実施形態
での使用に適している。このようなウイルスプロモータには、サイトメガロウイルス（Ｃ
ＭＶ）中間初期プロモータ、ＳＶ４０の初期及び後期プロモータ、マウス乳がんウイルス
（ＭＭＴＶ）プロモータ、モロニー白血病ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、
エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）、及び他のレトロ
ウイルスの長端末反復配列（ＬＴＲ）、並びに単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼ
プロモータが挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異
的抗体又はその抗原結合フラグメントのコード配列は、誘導性プロモータ、例えば、メタ
ロチオネインプロモータ、テトラサイクリン誘導性プロモータ、ドキシサイクリン誘導性
プロモータ、１つ又は２つ以上のインターフェロン刺激応答エレメント（ＩＳＲＥ）、例
えば、プロテインキナーゼＲ ２’，５’－オリゴアデニレート合成酵素、ＭＸ遺伝子、
ＡＤＡＲ１等を含有するプロモータの制御下に置かれる。
本明細書に記載されたベクターは、１つ又は２つ以上の配列内リボソーム進入部位（Ｉ
ＲＥＳ）を含有してもよい。ＩＲＥＳ配列の融合ベクター内への包含は、一部のタンパク
質の発現を増強させるのに有益であり得る。一部の実施形態では、ベクター系は、１つ又
は２つ以上のポリアデニル化部位（例えば、ＳＶ４０）を含むこととなる。同部位は、前
述の核酸配列のうちいずれかの上流又は下流にあってもよい。ベクターの成分は、近接し
て連結されてもよく、又は遺伝子産物を発現させるのに最適な間隔を提供するように（す
なわち、ＯＲＦ間に「スペーサー」ヌクレオチドを導入することにより）配置されてもよ
く、若しくは別の方法で位置付けられてもよい。調節エレメント、例えば、ＩＲＥＳモチ
ーフはまた、発現に最適な間隔を提供するように配置されてもよい。
ベクターは、当技術分野において既知の選択マーカーを含んでもよい。選択マーカーに
は、陽性及び陰性選択マーカー、例えば、抗生物質耐性遺伝子（例えば、ネオマイシン耐
性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子、カナマイシン耐性遺伝子、テトラサイクリン耐
性遺伝子、ペニシリン耐性遺伝子、ピューロマイシン耐性遺伝子、ブラストサイジン耐性
遺伝子）、グルタミン酸合成酵素遺伝子、ガンシクロビル選択用のＨＳＶ－ＴＫ、ＨＳＶ
－ＴＫ誘導体、又は６－メチルプリン選択用の細菌のプリンヌクレオシドホスホリラーゼ
遺伝子（Ｇａｄｉ ｅｔ ａｌ．，７ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１７３８～１７４３（２０
００））が挙げられる。選択マーカーをコードする核酸配列又はクローニング部位は、対
象となるポリペプチドをコードする核酸配列又はクローニング部位の上流又は下流にあっ
てもよい。
本明細書に記載されたベクターを使用して、記載された抗体又は抗原結合フラグメント
をコードする遺伝子により種々の細胞を形質転換することができる。例えば、ベクターを
使用して、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又は抗原結合フラグメントの生成細胞を生じさせるこ
とができる。このため、別の態様は、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する抗体又はその抗原
結合フラグメント、例えば、本明細書に記載され、例示された抗体又は抗原結合フラグメ
ントをコードする核酸配列を含むベクターで形質転換された宿主細胞を特徴とする。
外来遺伝子を細胞内に導入するための数多くの手法が、当技術分野において既知であり
、本明細書に記載され、例示された種々の実施形態に従って、記載された方法を行う目的
で組み換え細胞を作成するのに使用することができる。使用される手法は、異種遺伝子配
列が細胞の子孫により遺伝及び発現可能であり、かつレシピエント細胞に必須の成育及び
生理学的機能を損なうことのないよう、異種遺伝子配列を宿主細胞に安定して導入するも
のでなければならない。使用することができる手法としては、染色体導入法（例えば、細
胞融合、染色体介在性遺伝子導入、マイクロ細胞介在性遺伝子導入）、物理的方法（例え
ば、トランスフェクション、スフェロプラスト融合、マイクロインジェクション、エレク
トロポレーション、リポソーム担体）、ウイルスベクター導入（例えば、組み換えＤＮＡ
ウイルス、組み換えＲＮＡウイルス）等が挙げられる（Ｃｌｉｎｅ，２９ Ｐｈａｒｍａ
ｃ．Ｔｈｅｒ．６９～９２（１９８５）に記載）が、これらに限定されない。哺乳類細胞
による細菌プロトプラストのリン酸カルシウム沈殿及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ
）誘導融合を使用しても、細胞を形質転換することができる。
本明細書に記載されたＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又は抗原結合フラグメントの発現に使用
するのに適した細胞は、好ましくは、真核細胞、より好ましくは、植物、げっ歯類、又は
ヒト起源の細胞である。これらの細胞には、例えば、ＮＳＯ、ＣＨＯ、ＣＨＯＫ１、ｐｅ
ｒＣ．６、Ｔｋ－ｔｓ１３、ＢＨＫ、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＯＳ－７、Ｔ９８Ｇ、ＣＶ－
１／ＥＢＮＡ、Ｌ細胞、Ｃ１２７、３Ｔ３、ＨｅＬａ、ＮＳ１、Ｓｐ２／０骨髄腫細胞、
とりわけＢＨＫ細胞株等が挙げられるが、これらに限定されない。加えて、抗体の発現は
、ハイブリドーマ細胞を使用して達成されてもよい。ハイブリドーマを生成するための方
法は、当該技術分野において十分確立されている。
本明細書に記載された発現ベクターにより形質転換された細胞は、本明細書に記載され
た抗体又は抗原結合フラグメントの組み換え発現について選択され、又はスクリーニング
されてもよい。組み換え陽性細胞は、タンパク質改変又は変化させた翻訳後修飾により、
所望の表現型、例えば、高レベルの発現、向上した増殖特性、又は所望の生化学的特性を
有するタンパク質を生成する能力を示すサブクローンについて、増殖され、スクリーニン
グされる。これらの表現型は、所与のサブクローンの本来の特性又は変異によるものであ
り得る。変異は、化学薬品、ＵＶ波長光、照射、ウイルス、挿入変異源、ＤＮＡミスマッ
チ修復の阻害、又はこのような方法の組み合わせにより生じ得る。
処置のためにＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体を使用する方法
本明細書において、治療に使用するための、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又はその抗原結合
フラグメントが提供される。特に、これらの抗体又は抗原結合フラグメントは、がん、例
えば、ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんを処置するのに有用であり得る。したがって、本発明は、本
明細書に記載されたとおりの抗体、例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又は抗原結合フラグ
メントを投与することを含む、がんを処置する方法を提供する。例えば、使用は、ＧＰＲ
Ｃ５Ｄ受容体相互作用と干渉することによるものであってよく、すなわち、かかる抗体に
毒素がコンジュゲートされると、毒素はＧＰＲＣ５Ｄ発現がんを標的とするようになる。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ発現には多発性骨髄腫（ＭＭ）などのリンパ腫を含む
。これらの方法において使用する抗体には、本明細書に前述したもの、例えば、表１及び
これらの抗体の更なる検討において列記された特徴、例えば、ＣＤＲ又は可変ドメイン配
列を有するＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又は抗原結合フラグメントが含まれる。
本明細書に記載された一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体の免疫エフェクタ
ー特性は、当業者に既知の技術によるＦｃ改変によって増強又はサイレンシングさせるこ
とができる。例えば、Ｆｃエフェクター機能、例えば、Ｃｌｑ結合、補体依存性細胞傷害
（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞介在性貪食（
ＡＤＣＰ）、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体、ＢＣＲ）のダウンレギュレーショ
ンなどのＦｃエフェクター機能は、これらの活性に関与するＦｃの残基を修飾することに
よって提供及び／又は調節され得る。
「抗体依存性細胞介在性細胞傷害」又は「ＡＤＣＣ」は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現
している非特異的細胞傷害細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及び
マクロファージ）が標的細胞上に結合した抗体を認識し、続けて、標的細胞の溶解を引き
起こす、細胞介在性反応を指す。
ＡＤＣＣを誘導するモノクローナル抗体の能力は、そのオリゴ糖成分を操作することに
より増強され得る。ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３は、Ａｓｎ２９７においてＮ－グリコシル
化される。ここで、グリカンの大部分は、公知の二分岐Ｇ０、Ｇ０Ｆ、Ｇ１、Ｇ１Ｆ、Ｇ
２、又はＧ２Ｆの形態である。遺伝子操作されていないＣＨＯ細胞により生成される抗体
は、典型的には、少なくとも約８５％のグリカンフコース含量を有する。Ｆｃ領域に付着
した二分岐の複雑なタイプのオリゴ糖からコアフコースを除去すると、抗原結合性又はＣ
ＤＣ活性を変化させることなく改善されたＦｃ．γ．ＲＩＩＩａ結合により、抗体のＡＤ
ＣＣが向上される。このようなｍＡｂは、二分岐の複雑なタイプのＦｃオリゴ糖を有する
、比較的高い脱フコシル化抗体の成功した発現をもたらすことが報告された種々の方法、
例えば、培養浸透圧の制御（Ｋｏｎｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
６４：２４９～６５，２０１２）、宿主細胞株としての変異体ＣＨＯ株Ｌｅｃ１３の適
用（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７７：２６７３３～２
６７４０，２００２）、宿主細胞株としての変異体ＣＨＯ株ＥＢ６６の適用（Ｏｌｉｖｉ
ｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ；２（４），２０１０、Ｅｐｕｂ ａｈｅａｄ ｏｆ ｐ
ｒｉｎｔ、ＰＭＩＤ：２０５６２５８２）、宿主細胞株としてのラットハイブリドーマ細
胞株ＹＢ２／０の適用（Ｓｈｉｎｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２
７８：３４６６～３４７３，２００３）、アルファ．１，６－フコシルトランスフェラー
ゼ（ＦＵＴ８）遺伝子に対して特異的な低分子干渉ＲＮＡの導入（Ｍｏｒｉ ｅｔ ａｌ
．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ ８８：９０１～９０８，２００４）、又はベ
ータ－１，４－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩとゴルジアルファ
－マンノシダーゼＩＩとの共発現又は強力なアルファ－マンノシダーゼＩ阻害剤であるキ
フネンシン（Ｆｅｒｒａｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８１：５０３
２～５０３６；２００６、Ｆｅｒｒａｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉ
ｏｅｎｇ ９３：８５１～８６１，２００６；Ｘｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈ
ｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ ９９：６５２～６５，２００８）を使用して達成され得る。
本明細書において記載された一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ抗体により引き起こさ
れたＡＤＣＣはまた、抗体Ｆｃ中の特定の置換によって増強され得る。例示的な置換は、
例えば、米国特許第６，７３７，０５６号に記載されたように、アミノ酸位置２５６、２
９０、２９８、３１２、３５６、３３０、３３３、３３４、３６０、３７８、又は４３０
（ＥＵインデックスに従った残基番号付け）における置換である。
ＧＰＲＣ５Ｄを検出する方法
本明細書において、サンプルを、本明細書に記載された抗体又はその抗原結合フラグメ
ントと接触させることにより、生体サンプル中のＧＰＲＣ５Ｄを検出するための方法が提
供される。本明細書に記載されたように、サンプルは、尿、血液、血清、血漿、唾液、腹
水、循環細胞、循環腫瘍細胞、組織会合していない細胞（すなわち、遊離細胞）、組織（
例えば、外科手術的に切除された腫瘍組織、微細針吸引を含む生検）、組織学的調製物等
から得ることができる。一部の実施形態では、記載された方法は、サンプルを、本明細書
に記載されたＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又はその抗原結合フラグメントのいずれかと接触さ
せることにより、生体サンプル中のＧＰＲＣ５Ｄを検出することを含む。
一部の実施形態では、サンプルを、本明細書に記載されたＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又は
抗原結合フラグメントの２つ以上と接触させてもよい。例えば、サンプルを、第１のＧＰ
ＲＣ５Ｄ特異的抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させ、次いで、第２のＧＰＲＣ
５Ｄ特異的抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させてもよく、この場合、第１の抗
体又は抗原結合フラグメントと第２の抗体又は抗原結合フラグメントとは、同じ抗体又は
抗原結合フラグメントではない。一部の実施形態では、第１の抗体又はその抗原結合フラ
グメントは、サンプルと接触させる前に、表面、例えば、マルチウェルプレート、チップ
、又は類似する基材に固定されてもよい。他の実施形態では、第１の抗体又はその抗原結
合フラグメントは、サンプルと接触させる前に、何にも固定されず又は付着されなくても
よい。
記載されたＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、検出可能に標識され
てもよい。一部の実施形態では、標識された抗体及び抗原結合フラグメントは、本明細書
に記載された方法により、ＧＰＲＣ５Ｄの検出を容易にし得る。多くのこのような標識が
、当業者に容易に既知である。例えば、適切な標識としては、放射線標識、蛍光標識、エ
ピトープタグ、ビオチン、発色団標識、ＥＣＬ標識、又は酵素が挙げられるが、これらに
限定されると考えられるべきではない。より詳細には、記載された標識には、ルテニウム
、111Ｉｎ－ＤＯＴＡ、111Ｉｎ－ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、西洋わさび
ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、及びベータガラクトシダーゼ、ポリヒスチ
ジン（ＨＩＳタグ）、アクリジン染料、シアニン染料、フルオロン染料、オキサジン染料
、フェナントリジン染料、ローダミン染料、Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ（登録商標）染料など
が挙げられる。
記載されたＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、生体サンプル中のＧ
ＰＲＣ５Ｄを検出するための各種のアッセイに使用されてもよい。一部の適切なアッセイ
には、ウェスタンブロット分析、ラジオイムノアッセイ、表面プラズモン共鳴、免疫蛍光
測定法、免疫沈澱法、平衡透析法、免疫拡散法、電気化学発光（ＥＣＬ）イムノアッセイ
、免疫組織化学法、蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）又はＥＬＩＳＡアッセイが挙げられる
が、これらに限定されると考えられるべきではない。
本明細書に記載された一部の実施形態では、対象におけるＧＰＲＣ５Ｄ発現がん細胞の
検出を用い、対象がＧＰＲＣ５Ｄを目標とする治療剤により処置され得るかを判定するこ
とができる。
ＧＰＲＣ５Ｄは、血液及び血清サンプル中に、検出可能なレベルで存在する。このため
、本明細書において、サンプルを、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する抗体又はその抗原結
合フラグメントと接触させることにより、血液から得られたサンプル、例えば、血清サン
プル中のＧＰＲＣ５Ｄを検出するための方法が提供される。血液サンプル又はその派生物
は、希釈され、画分され、又は他の方法で処理されて、記載の方法が実施され得るサンプ
ルを生成することができる。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄは、当該技術分野におい
て既知の任意の回数のアッセイにより、血液サンプル又はその派生物中で検出することが
できる。例えば、同アッセイには、ウェスタンブロット分析、ラジオイムノアッセイ、表
面プラズモン共鳴、免疫蛍光測定法、免疫沈澱法、平衡透析法、免疫拡散法、電気化学発
光（ＥＣＬ）免疫アッセイ、免疫組織化学法、蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）又はＥＬＩ
ＳＡアッセイが挙げられるが、これらに限定されない。
がんを診断するための方法
本明細書において、対象におけるＧＰＲＣ５Ｄ発現がんを診断するための方法が提供さ
れる。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんには多発性骨髄腫（ＭＭ）などのリン
パ腫を含む。一部の実施形態では、上記されたように、生体サンプル、例えば、血液サン
プル又は血清サンプル中のＧＰＲＣ５Ｄを検出することは、サンプルが得られた対象にお
けるがんを診断する能力を提供する。あるいは、一部の実施形態では、他のサンプル、例
えば、組織学的サンプル、微細針吸引サンプル、切除された腫瘍組織、循環細胞、循環腫
瘍細胞等もまた、サンプルが得られた対象ががんを有するかどうかを評価するのに使用さ
れてもよい。一部の実施形態では、サンプルが得られた対象ががんを有することが既に判
明していてもよいが、対象を苦しめているがんの種類は、診断されていなくてもよく、又
は予備的診断では不明であってもよく、そのため、対象から得られた生体サンプル中のＧ
ＰＲＣ５Ｄを検出することにより、がんの診断を可能にし、又は明確にすることができる
。例えば、対象ががんを有することが判明していてもよいが、不明であってもよく、又は
対象のがんがＧＰＲＣ５Ｄを発現しているかどうかが不明確であってもよい。
一部の実施形態では、記載された方法は、対象から得られた生体サンプル中に存在する
ＧＰＲＣ５Ｄの量を決定し、観察されたＧＰＲＣ５Ｄの量を対照又は参照サンプル中のＧ
ＰＲＣ５Ｄの量と比較することにより、対象がＧＰＲＣ５Ｄ発現がんに苦しんでいるどう
かを評価することを含む。この場合、対象から得られたサンプル中のＧＰＲＣ５Ｄの量と
対照又は参照サンプル中のＧＰＲＣ５Ｄの量との間の差が、対象がＧＰＲＣ５Ｄ発現がん
に苦しんでいることの指標となる。別の実施形態では、対象から得られた生体サンプル中
に観察されたＧＰＲＣ５Ｄの量を、特定の形態又はステージのがんに関連することが既知
のＧＰＲＣ５Ｄのレベルと比較して、対象のがんの形態又はステージを求めることができ
る。一部の実施形態では、対象から得られたサンプル中のＧＰＲＣ５Ｄの量は、サンプル
を、ＧＰＲＣ５Ｄに免疫特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメント、例えば、
本明細書に記載されたＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体と接触させることにより評価される。ＧＰ
ＲＣ５Ｄの存在について評価されるサンプルは、尿、血液、血清、血漿、唾液、腹水、循
環細胞、循環腫瘍細胞、組織会合していない細胞（すなわち、遊離細胞）、組織（例えば
、外科手術的に切除された腫瘍組織、微細針吸引を含む生検）、組織学的調製物等から得
られてもよい。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんは、多発性骨髄腫（ＭＭ）な
どの血液系のがんを含む。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんを診断する方法は、対象の生体サンプルを
、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、表１で提供された抗
体及びフラグメントから得られたもの）と接触させること、抗体又はその抗原結合フラグ
メントが結合したサンプル中に存在するＧＰＲＣ５Ｄの量を定量すること、サンプル中に
存在するＧＰＲＣ５Ｄの量を既知の標準又は参照サンプルと比較すること、及び対象のＧ
ＰＲＣ５Ｄレベルががんに関連するＧＰＲＣ５Ｄのレベル内に入るかどうかを判定するこ
とを含む。更なる実施形態では、診断方法は、がん特異的治療剤を投与又は処方する更な
る工程が続き得る。別の実施形態では、診断方法は、がんの処置を容易にするために、判
定の結果を伝達する更なる工程が続き得る。一部の実施形態では、がん特異的処置は、本
明細書に記載されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体などのＧＰＲＣ５Ｄ発現がんを
目標としてもよい。
一部の実施形態では、記載された方法は、対象から得られた血液又は血清サンプル中に
存在するＧＰＲＣ５Ｄの量を決定することと、観察されたＧＰＲＣ５Ｄの量を対照又は参
照サンプル中のＧＰＲＣ５Ｄの量と比較することと、により、対象がＧＰＲＣ５Ｄ発現が
んに苦しんでいるかどうかを評価することを含む。この場合、対象から得られたサンプル
中のＧＰＲＣ５Ｄの量と対照又は参照サンプル中のＧＰＲＣ５Ｄの量との間の差は、対象
がＧＰＲＣ５Ｄ発現がんに苦しんでいることの指標である。
一部の実施形態では、対照又は参照サンプルは、ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんに苦しんでいな
い対象から得られてもよい。一部の実施形態では、対照又は参照サンプルは、ＧＰＲＣ５
Ｄ発現がんに苦しんでいる対象から得られてもよい。対照又は参照サンプルがＧＰＲＣ５
Ｄ発現がんに苦しんでいない対象から得られる一部の実施形態では、対照又は参照サンプ
ルについて観察されたＧＰＲＣ５Ｄの量に対して、試験サンプル中に存在するＧＰＲＣ５
Ｄの量において観察された増大は、評価される対象がＧＰＲＣ５Ｄ発現がんに苦しんでい
ることの指標である。対照サンプルがＧＰＲＣ５Ｄ発現がんに苦しんでいない対象から得
られる一部の実施形態では、対照又は参照サンプルについて観察されたＧＰＲＣ５Ｄの量
に対して、試験サンプル中に存在するＧＰＲＣ５Ｄの量において観察される減少又は類似
性は、評価される対象がＧＰＲＣ５Ｄ発現がんに苦しんでいないことの指標である。対照
又は参照サンプルがＧＰＲＣ５Ｄ発現がんに苦しんでいる対象から得られる一部の実施形
態では、対照又は参照サンプルについて観察されたＧＰＲＣ５Ｄの量に対して、試験サン
プル中に存在するＧＰＲＣ５Ｄの量において観察された類似性は、評価されている対象が
ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんに苦しんでいることの指標である。対照又は参照サンプルがＧＰＲ
Ｃ５Ｄ発現がんに苦しんでいる対象から得られる一部の実施形態では、対照又は参照サン
プルについて観察されたＧＰＲＣ５Ｄの量に対して、試験サンプル中に存在するＧＰＲＣ
５Ｄの量において観察された減少は、評価される対象がＧＰＲＣ５Ｄ発現がんに苦しんで
いないことの指標である。
一部の実施形態では、対象から得られたサンプル中のＧＰＲＣ５Ｄの量は、サンプルを
、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメント、例えば、本明細
書に記載された抗体と接触させることにより評価される。ＧＰＲＣ５Ｄの存在について評
価されるサンプルは、血液サンプル、血清サンプル、循環細胞、循環腫瘍細胞、組織会合
していない細胞（すなわち、遊離細胞）、組織（例えば、外科手術的に切除された腫瘍組
織、微細針吸引を含む生検）、組織学的調製物等から得られてもよい。
種々の態様において、ＧＰＲＣ５Ｄの量は、サンプルを、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合
する抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させることにより求められる。一部の実施
形態では、サンプルを、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する２つ以上の種類の抗体又はその
抗原結合フラグメントと接触させてもよい。一部の実施形態では、サンプルを、ＧＰＲＣ
５Ｄに特異的に結合する第１の抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させ、次いでＧ
ＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する第２の抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させても
よい。本明細書に記載されたものなどのＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又は抗原結合フラグメン
トを、この能力範囲において使用してもよい。
ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体及び抗原結合フラグメントの種々の組み合わせを使用して、記
載された診断方法を実施するための「第１」及び「第２」の抗体又は抗原結合フラグメン
トを提供することができる。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんは、多発性骨髄
腫（ＭＭ）などのリンパ腫を含む。
特定の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄの量は、ウェスタンブロット分析、ラジオイムノア
ッセイ、免疫蛍光測定法、免疫沈降法、平衡透析法、免疫拡散法、電気化学発光（ＥＣＬ
）免疫アッセイ、免疫組織化学法、蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）又はＥＬＩＳＡアッセ
イにより決定される。
記載された診断方法の種々の実施形態では、対照又は参照サンプルが使用される。この
サンプルは、使用されるアッセイが適切に機能していることを保証する陽性又は陰性のア
ッセイ対照でもよい。例えば、この性質のアッセイ対照は、免疫組織化学アッセイに一般
的に使用されてもよい。あるいは、サンプルは、健康な対象からの生体サンプル中のＧＰ
ＲＣ５Ｄの量について標準化された参照であってもよい。一部の実施形態では、試験され
た対象の観察されたＧＰＲＣ５Ｄレベルは、ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんを有することが判明し
ている対象由来のサンプル中に観察されたＧＰＲＣ５Ｄレベルと比較されてもよい。一部
の実施形態では、対照群の対象は、標的となる特定のがんに苦しんでいてもよい。一部の
実施形態では、対照群の対象は、初期ステージのがんを有することが判明しており、かか
るがんは、ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんであってもよく、又はＧＰＲＣ５Ｄ発現がんでなくても
よい。一部の実施形態では、対照群の対象は、中間ステージのがんを有することが判明し
ており、かかるがんは、ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんであってもよく、又はＧＰＲＣ５Ｄ発現が
んでなくてもよい。一部の実施形態では、対照群の対象は、後期ステージになっているこ
とが判明しており、かかるがんは、ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんであってもよく、又はＧＰＲＣ
５Ｄ発現がんでなくてもよい。
がんをモニタするための方法
本明細書において、対象におけるＧＰＲＣ５Ｄ発現がんをモニタするための方法が提供
される。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんは、多発性骨髄腫（ＭＭ）などのリ
ンパ腫を含む。一部の実施形態では、記載された方法は、対象から得られた試験サンプル
中に存在するＧＰＲＣ５Ｄの量を決定することと、観察されたＧＰＲＣ５Ｄの量をより早
い時点で対象から同様にして得られた生体サンプル中のＧＰＲＣ５Ｄの量と比較すること
と、により、ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんが進行性、退縮性、又は不変なままであるかどうかを
評価することを含む。この場合、試験サンプル中のＧＰＲＣ５Ｄの量とより早期のサンプ
ル中のＧＰＲＣ５Ｄの量との間の差は、がんが、進行性、退縮性、又は不変なままである
かどうかの指標を提供する。これに関して、より早期のサンプルについて観察された量と
比較して増大した量のＧＰＲＣ５Ｄを含む試験サンプルは、ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんの進行
を示すことができる。逆に、より早期のサンプルで観察された量と比較して減少した量の
ＧＰＲＣ５Ｄを含む試験サンプルは、ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんの退縮を示すことができる。
したがって、より早期のサンプルについて観察された量と比較してＧＰＲＣ５Ｄの量に
おけるわずかな差しか有さない試験サンプルは、ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんについて不変の病
態を示すことができる。一部の実施形態では、対象から得られた生体サンプル中のＧＰＲ
Ｃ５Ｄの量は、サンプルを、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラ
グメント、例えば、本明細書に記載された抗体と接触させることにより評価される。ＧＰ
ＲＣ５Ｄの存在について評価されるサンプルは、尿、血液、血清、血漿、唾液、腹水、循
環細胞、循環腫瘍細胞、組織会合していない細胞（すなわち、遊離細胞）、組織（例えば
、外科手術的に切除された腫瘍組織、微細針吸引を含む生検）、組織学的調製物等から得
られてもよい。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんをモニタする方法は、対象の生体サンプル
を、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、表１で提供された
抗体及びフラグメントから得られたもの）と接触させることと、サンプル中に存在するＧ
ＰＲＣ５Ｄの量を定量することと、サンプル中に存在するＧＰＲＣ５Ｄの量をより早い時
点において同じ対象から同様にして得られた生体サンプル中に存在することが決定されて
いるＧＰＲＣ５Ｄの量と比較することと、対象のＧＰＲＣ５Ｄレベルが経時的に変化して
いたかどうかを判定することと、を含む。より早期のサンプルについて観察された量と比
較して増大した量のＧＰＲＣ５Ｄを含む試験サンプルは、がんの進行を示すことができる
。逆に、より早期のサンプルについて観察された量と比較して減少した量のＧＰＲＣ５Ｄ
を含む試験サンプルは、ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんの退縮を示すことができる。したがって、
より早期のサンプルについて観察された量と比較してＧＰＲＣ５Ｄの量においてわずかな
差しか有さない試験サンプルは、ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんについて不変の病態を示すことが
できる。一部の実施形態では、サンプルのＧＰＲＣ５Ｄレベルは、単独で、又はより早い
時点において評価されたサンプルについて観察されたＧＰＲＣ５Ｄレベルに加えて、既知
の標準又は参照サンプルと比較されてもよい。更なる実施形態では、診断方法は、がん特
異的処置を行う更なる工程が続き得る。一部の実施形態では、がん特異的処置は、ＧＰＲ
Ｃ５Ｄ発現がんを目標としてもよい。
種々の態様において、ＧＰＲＣ５Ｄの量は、サンプルを、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合
する抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させることにより決定される。一部の実施
形態では、サンプルを、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する２つ以上の種類の抗体又はその
抗原結合フラグメントと接触させてもよい。一部の実施形態では、サンプルを、ＧＰＲＣ
５Ｄに特異的に結合する第１の抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させ、次いで、
ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する第２の抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させて
もよい。本明細書に記載されたもの等の抗体を、この能力において使用されてもよい。
表１で記載された抗体及び抗原結合フラグメントの種々の組み合わせを使用して、記載
されたモニタ方法を行うための「第１」及び「第２」の抗体又は抗原結合フラグメントを
提供することができる。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんは、多発性骨髄腫（
ＭＭ）などの血液系のがんを含む。
特定の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄの量は、ウェスタンブロット分析、ラジオイムノア
ッセイ、免疫蛍光測定法、免疫沈降法、平衡透析法、免疫拡散法、電気化学発光（ＥＣＬ
）免疫アッセイ、免疫組織化学法、蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）又はＥＬＩＳＡアッセ
イにより決定される。
ＧＰＲＣ５Ｄを検出するためのキット
本明細書において、生体サンプル中のＧＰＲＣ５Ｄを検出するためのキットが提供され
る。これらのキットは、本明細書に記載されたＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又はその抗原結合
フラグメントのうち１つ又は２つ以上と、このキットを使用するための使用説明書とを含
む。
提供されたＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、溶液であってもよく
、凍結乾燥されていてもよく、基材、担体、又はプレートに固定されていてもよく、又は
検出可能に標識化されていてもよい。
記載されたキットはまた、本明細書に記載された方法を行うのに有用な更なる構成要素
を含んでもよい。例として、キットは、対象からサンプルを得るための手段、対照若しく
は参照サンプル、例えば、ゆっくり進行するがんを有する対象及び／又はがんを有さない
対象からのサンプル、１つ若しくは２つ以上のサンプル区画、及び／又は本発明の方法の
実施について説明する指示材料、並びに組織特異的な対照若しくは基準物質を含んでもよ
い。
ＧＰＲＣ５Ｄのレベルを決定するための手段は、例えば、ＧＰＲＣ５Ｄのレベルを決定
するためのアッセイに使用するための緩衝液又は他の試薬を更に含み得る。使用説明書は
、例えば、アッセイを行うための印刷された使用説明書及び／又はＧＰＲＣ５Ｄの発現レ
ベルを評価するための使用説明書であり得る。
記載されたキットはまた、対象からサンプルを単離するための手段を含んでもよい。こ
れらの手段は、対象から流体又は組織を得るのに使用され得る機器又は試薬のうち１つ又
は２つ以上の品目を含み得る。対象からサンプルを得るための手段はまた、血液サンプル
から血液成分、例えば、血清を単離するための手段を含んでもよい。好ましくは、キット
は、ヒト対象で使用するために設計されている。
多重特異的抗体
本明細書に記載された抗ＧＰＲＣ５Ｄ抗体の結合ドメインは、その表面上にＧＰＲＣ５
Ｄを発現している細胞を認識する。上記したように、ＧＰＲＣ５Ｄの発現は、がん細胞を
示し得る。特定の細胞分画に対するより特異的な標的化は、二重特異性分子、例えば、Ｇ
ＰＲＣ５Ｄ及び別の標的（ＣＤ３及びＢＣＭＡなど）に結合する抗体又は抗体フラグメン
トを作製することにより達成され得る。これは、ＧＰＲＣ５Ｄに結合する第１の領域及び
他の標的抗原に結合する第２の結合領域を含む分子を作製することにより達成される。抗
原結合領域は、標的の特異的な認識を可能にする任意の形態を取ることができ、例えば、
結合領域は、重鎖可変ドメイン、Ｆｖ（重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインの組み合わ
せ）、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメインに基づいた結合ドメイン（Ｊａｎｓｓｅｎ Ｂ
ｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．のＣｅｎｔｙｒｉｎ分子など、フィブロネクチン由来、若しくは
フィブロネクチン由来のＩＩＩ型ドメインのコンセンサスに基づいたもの、又はテネイシ
ン由来、若しくはテネイシン由来のＩＩＩ型ドメインのコンセンサスに基づいたもの、例
えば、国際公開第２０１０／０５１２７４号及び同第２０１０／０９３６２７号を参照さ
れたい）であっても、これらを含んでいてもよい。したがって、ＧＰＲＣ５Ｄ及び別の抗
原にそれぞれに結合する２種類の異なる抗原結合領域を含む二重特異性分子が提供される
。
本明細書に記載された一部の多重特異的抗体は、ＧＰＲＣ５Ｄ及びＣＤ３にそれぞれ結
合する２種類の異なる抗原結合領域を含む。好ましい実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ及びＣ
Ｄ３に結合する多重特異的抗体（ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体）及びその多重特
異的抗原結合フラグメントが提供される。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多
重特異的抗体は、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する第１の抗原結合部位を対を成して形成
する第１の重鎖（ＨＣ１）及び第１の軽鎖（ＬＣ１）と、ＣＤ３に特異的に結合する第２
の抗原結合部位を対を成して形成する第２の重鎖（ＨＣ２）及び第２の軽鎖（ＬＣ２）と
、を含む。好ましい実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体は、ＣＤ３に特
異的に結合する第１の抗原結合部位を対を成して形成する第１の重鎖（ＨＣ１）及び第１
の軽鎖（ＬＣ１）を含むＧＰＲＣ５Ｄ特異的アームと、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する
第２の抗原結合部位を対を成して形成する第２の重鎖（ＨＣ２）及び第２の軽鎖（ＬＣ２
）を含むＣＤ３特異的アームと、を含む二重特異性抗体である。一部の実施形態では、本
発明の二重特異性抗体は、完全長の抗体構造を有する抗体を含む。本明細書で使用される
とき、「完全長の抗体」は、２本の完全長の抗体重鎖と２本の完全長の抗体軽鎖とを有す
る抗体を意味する。完全長の抗体重鎖（ＨＣ）は、重鎖可変ドメイン及び定常ドメイン、
ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む。完全長の抗体軽鎖（ＬＣ）は、軽鎖可変ドメ
イン及び定常ドメイン、ＶＬ及びＣＬを含む。完全長の抗体は、一方又は両方の重鎖のい
ずれかにおいて、Ｃ末端リジン（Ｋ）を欠いていてもよい。「Ｆａｂアーム」又は「半分
子」という用語は、抗原に特異的に結合する一対の重鎖－軽鎖を意味する。一部の実施形
態では、抗原結合ドメインのうちの１つは、非抗体ベースの結合ドメイン、例えば、Ｃｅ
ｎｔｙｒｉｎなど、フィブロネクチン３型ドメインに基づいた結合ドメインである。
本明細書で提供された多重特異的抗体のＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、上記のＧＰＲＣ５
Ｄ特異的抗体のいずれから得られてもよい。このようなＧＰＲＣ５Ｄ結合アームの一部の
例示的な実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄに結合する第１の抗原結合領域は、表１に記載され
たとおり抗体クローンから得られた重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。この
ようなＧＰＲＣ５Ｄ結合アームの一部の例示的な実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄに結合する
第１の抗原結合領域は、表１に記載されたとおり抗体クローンから得られた、重鎖ＣＤＲ
１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３とを含む。この
ようなＧＰＲＣ５Ｄ結合アームの一部の例示的な実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄに結合する
第１の抗原結合領域は、以下のクローンの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む
：ＧＣ５Ｂ８１、ＧＣ５Ｂ４６５、ＧＳ５Ｂ４８３、ＧＣ５Ｂ５９６、ＧＣ５Ｂ３８２、
ＧＣ５Ｂ３７９、ＧＣ５Ｂ３７３、ＧＣ５Ｂ３７６、ＧＣ５Ｂ３８５、ＧＣ５Ｂ３７０、
ＧＣ５Ｂ６０２、ＧＣ５Ｂ６０３、ＧＣ５Ｂ５９９、ＧＣ５Ｂ６０１、ＧＣ５Ｂ５９８、
又はＧＣ５Ｂ５９７。
このようなＧＰＲＣ５Ｄ結合アームの一部の例示的な実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄに結
合する第１の抗原結合領域は、以下のクローンの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３
と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、を含む：ＧＣ５Ｂ８１、ＧＣ５Ｂ４６５
、ＧＳ５Ｂ４８３、又はＧＣ５Ｂ５９６。このようなＧＰＲＣ５Ｄ結合アームの一部の例
示的な実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄに結合する第１の抗原結合領域は、表１に記載された
とおり抗体クローンから得られた重鎖可変ドメインを含む。このようなＧＰＲＣ５Ｄ結合
アームの一部の例示的な実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄに結合する第１の抗原結合領域は、
表１に記載されたとおり抗体クローンから得られた重鎖可変ドメインと、軽鎖可変ドメイ
ンとを含む。このようなＧＰＲＣ５Ｄ結合アームの一部の例示的な実施形態では、ＧＰＲ
Ｃ５Ｄに結合する第１の抗原結合領域は、クローンＧＣ５Ｂ８１、ＧＣ５Ｂ４６５、ＧＳ
５Ｂ４８３、又はＧＣ５Ｂ５９６の重鎖可変ドメインを含む。このようなＧＰＲＣ５Ｄ結
合アームの一部の例示的な実施形態ではＧＰＲＣ５Ｄに結合する第１の抗原結合領域は、
以下のクローンの重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含む：ＧＣ５Ｂ８１、ＧＣ５
Ｂ４６５、ＧＳ５Ｂ４８３、ＧＣ５Ｂ５９６、ＧＣ５Ｂ３８２、ＧＣ５Ｂ３７９、ＧＣ５
Ｂ３７３、ＧＣ５Ｂ３７６、ＧＣ５Ｂ３８５、ＧＣ５Ｂ３７０、ＧＣ５Ｂ６０２、ＧＣ５
Ｂ６０３、ＧＣ５Ｂ５９９、ＧＣ５Ｂ６０１、ＧＣ５Ｂ５９８、又はＧＣ５Ｂ５９７。
表３は、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的な、ある重鎖及び軽鎖対と、ＣＤ３に特異的な、別の重
鎖及び軽鎖対と、を有する、ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体の一覧を提供する。表
中には、記載の実施形態を作成するのに使用される抗原特異的抗体アームを示すため、具
体的な抗体ＩＤを掲載する。
Figure 0007469432000003
二重特異性抗体の一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、カニクイザルＧＰ
ＲＣ５Ｄ、好ましくは、その細胞外ドメインにも結合する。
一部の実施形態では、多重特異的抗体のＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、ＩｇＧ又はその誘
導体、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４のアイソタイプである。Ｇ
ＰＲＣ５Ｄ結合アームがＩｇＧ４アイソタイプを有する一部の実施形態では、結合アーム
は、Ｆｃ領域中にＳ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ置換を含有する。
二重特異性抗体の一部の実施形態では、第２の抗原結合アームは、ヒトＣＤ３に結合す
る。一部の好ましい実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体のＣＤ３特異的
アームは、ヒト初代Ｔ細胞及び／又はカニクイザル初代Ｔ細胞に結合し、これらを活性化
するＣＤ３特異的抗体から得られる。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、ＣＤ３
εのＮ末端において、エピトープに結合する。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは
、ＣＤ３εの６つのＮ末端アミノ酸を含むエピトープと接触する。一部の実施形態では、
二重特異性抗体のＣＤ３特異的結合アームは、マウスモノクローナル抗体ＳＰ３４、マウ
スＩｇＧ３／λアイソタイプから得られる。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、
抗体ＳＰ３４のＣＤＲを含む。このようなＣＤ３結合アームは、５×１０-7Ｍ以下、例え
ば、１×１０-7Ｍ以下、５×１０-8Ｍ以下、１×１０-8Ｍ以下、５×１０-9Ｍ以下、又は
１×１０-9Ｍ以下の親和性で、ＣＤ３に結合し得る。ＣＤ３特異的結合アームは、マウス
モノクローナル抗体ＳＰ３４のヒト化版のアームでもよい。ヒトフレームワークを用いる
適合（ＨＦＡ）を使用して、ＣＤ３特異的アームが得られる抗ＣＤ３抗体をヒト化しても
よい。二重特異性抗体の一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、表２から選択される
重鎖及び軽鎖の対を含む。
一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、ＩｇＧ又はその誘導体である。一部の実施
形態では、ＣＤ３結合アームは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４である。
ＣＤ３結合アームがＩｇＧ４アイソタイプを有する一部の実施形態では、結合アームは、
Ｆｃ領域中にＳ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｆ４０５Ｌ、及びＲ４０９Ｋ置換を
含有する。一部の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、初代ヒトＴ細胞上の
ＣＤ３εに結合する。一部の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、初代カニ
クイザルＴ細胞上のＣＤ３εに結合する。一部の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグ
メントは、初代ヒト及びカニクイザルＴ細胞上のＣＤ３εに結合する。一部の実施形態で
は、抗体又は抗原結合フラグメントは、初代ヒトＣＤ３＋Ｔ細胞を活性化する。一部の実
施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、初代カニクイザルＣＤ４＋Ｔ細胞を活性
化する。
一部の実施形態では、抗体クローン：ＧＣ５Ｂ８１、ＧＣ５Ｂ４６５、ＧＳ５Ｂ４８３
、ＧＣ５Ｂ５９６、ＧＣ５Ｂ３８２、ＧＣ５Ｂ３７９、ＧＣ５Ｂ３７３、ＧＣ５Ｂ３７６
、ＧＣ５Ｂ３８５、ＧＣ５Ｂ３７０、ＧＣ５Ｂ６０２、ＧＣ５Ｂ６０３、ＧＣ５Ｂ５９９
、ＧＣ５Ｂ６０１、ＧＣ５Ｂ５９８、又はＧＣ５Ｂ５９７の重鎖を含むＧＰＲＣ５Ｄ結合
アームを有する、ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体が提供される。一部の実施形態で
は、抗体クローン：ＧＣ５Ｂ８１、ＧＣ５Ｂ４６５、ＧＳ５Ｂ４８３、ＧＣ５Ｂ５９６、
ＧＣ５Ｂ３８２、ＧＣ５Ｂ３７９、ＧＣ５Ｂ３７３、ＧＣ５Ｂ３７６、ＧＣ５Ｂ３８５、
ＧＣ５Ｂ３７０、ＧＣ５Ｂ６０２、ＧＣ５Ｂ６０３、ＧＣ５Ｂ５９９、ＧＣ５Ｂ６０１、
ＧＣ５Ｂ５９８、又はＧＣ５Ｂ５９７の重鎖及び軽鎖を含むＧＰＲＣ５Ｄ結合アームを有
する、ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体が提供される。一部の実施形態では、抗体ク
ローンＣＤ３Ｂ２１９の重鎖を含むＣＤ３結合アームを有するＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重
特異性抗体が提供される。一部の実施形態では、抗体クローンＣＤ３Ｂ２１９の重鎖及び
軽鎖を含むＣＤ３結合アームを有するＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体が提供される
。一部の実施形態では、抗体クローン：ＧＣ５Ｂ８１、ＧＣ５Ｂ４６５、ＧＳ５Ｂ４８３
、ＧＣ５Ｂ５９６、ＧＣ５Ｂ３８２、ＧＣ５Ｂ３７９、ＧＣ５Ｂ３７３、ＧＣ５Ｂ３７６
、ＧＣ５Ｂ３８５、ＧＣ５Ｂ３７０、ＧＣ５Ｂ６０２、ＧＣ５Ｂ６０３、ＧＣ５Ｂ５９９
、ＧＣ５Ｂ６０１、ＧＣ５Ｂ５９８、又はＧＣ５Ｂ５９７の重鎖を含むＧＰＲＣ５Ｄ結合
アームと、抗体クローンＣＤ３Ｂ２１９の重鎖を含むＣＤ３結合アームと、を有する、Ｇ
ＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体が提供される。一部の実施形態では、抗体クローン：
ＧＣ５Ｂ８１、ＧＣ５Ｂ４６５、ＧＳ５Ｂ４８３、ＧＣ５Ｂ５９６、ＧＣ５Ｂ３８２、Ｇ
Ｃ５Ｂ３７９、ＧＣ５Ｂ３７３、ＧＣ５Ｂ３７６、ＧＣ５Ｂ３８５、ＧＣ５Ｂ３７０、Ｇ
Ｃ５Ｂ６０２、ＧＣ５Ｂ６０３、ＧＣ５Ｂ５９９、ＧＣ５Ｂ６０１、ＧＣ５Ｂ５９８、又
はＧＣ５Ｂ５９７の重鎖及び軽鎖を含むＧＰＲＣ５Ｄ結合アームと、抗体クローンＣＤ３
Ｂ２１９の重鎖及び軽鎖を含むＣＤ３結合アームと、を有する、ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二
重特異性抗体が提供される。
例示的なＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体が、表２３に提供される。
これまでに種々のフォーマットの二重特異性抗体が記載されており、近年ではＣｈａｍ
ｅｓ ａｎｄ Ｂａｔｙ（２００９）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃ Ｄｅｖ
１２：２７６によりレビューされている。
一部の実施形態では、本発明の二重特異性抗体は、本発明において記載されたもの等の
制御されたＦａｂアーム交換により得られたディアボディ、クロスボディ、又は二重特異
性抗体である。
一部の実施形態では、二重特異性抗体としては、ヘテロ二量体形成する相補性ＣＨ３ド
メインを有するＩｇＧ様分子、組み換えＩｇＧ様デュアル（dual）標的分子（この分子の
２つの側面は各々少なくとも２種類の異なる抗体のＦａｂフラグメント又はＦａｂフラグ
メントの一部を含有する）、ＩｇＧ融合分子（完全長ＩｇＧ抗体がエクストラＦａｂフラ
グメント又はＦａｂフラグメントの一部に融合されている）、Ｆｃ融合分子（一本鎖Ｆｖ
分子又は安定化ディアボディが重鎖定常ドメイン、Ｆｃ領域又はその一部に融合されてい
る）、Ｆａｂ融合分子（異なるＦａｂフラグメントが互いに融合されている）、ＳｃＦｖ
－及びディアボディ－ベース及び重鎖抗体（例えば、ドメイン抗体、ナノボディ）（異な
る一本鎖Ｆｖ分子又は異なるディアボディ若しくは異なる重鎖抗体（例えば、ドメイン抗
体、ナノボディ）が互いに又は別のタンパク質若しくは担体分子に融合されている）が挙
げられる。
一部の実施形態では、相補性ＣＨ３ドメイン分子を有するＩｇＧ様分子には、Ｔｒｉｏ
ｍａｂ／Ｑｕａｄｒｏｍａ（Ｔｒｉｏｎ Ｐｈａｒｍａ／Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｂｉｏｔ
ｅｃｈ）、Ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－Ｈｏｌｅｓ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＣｒｏｓｓＭＡ
ｂｓ（Ｒｏｃｈｅ）及び静電的に調整された抗体（Ａｍｇｅｎ）、ＬＵＺ－Ｙ（Ｇｅｎｅ
ｎｔｅｃｈ）、ストランドを交換し操作したドメインボディ（ＳＥＥＤｂｏｄｙ）（ＥＭ
Ｄ Ｓｅｒｏｎｏ）、Ｂｉｃｌｏｎｉｃ（Ｍｅｒｕｓ）、並びにＤｕｏＢｏｄｙ（Ｇｅｎ
ｍａｂ Ａ／Ｓ）が挙げられる。
一部の実施形態では、組み換えＩｇＧ様デュアル標的分子には、Ｄｕａｌ Ｔａｒｇｅ
ｔｉｎｇ（ＤＴ）－Ｉｇ（ＧＳＫ／Ｄｏｍａｎｔｉｓ）、Ｔｗｏ－ｉｎ－ｏｎｅ Ａｎｔ
ｉｂｏｄｙ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｅｄ Ｍａｂｓ（Ｋａｒｍａ
ｎｏｓ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ）、ｍＡｂ２（Ｆ－Ｓｔａｒ）、及びＣｏｖＸ－ｂ
ｏｄｙ（ＣｏｖＸ／Ｐｆｉｚｅｒ）が挙げられる。
一部の実施形態では、ＩｇＧ融合分子には、Ｄｕａｌ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉ
ｎ（ＤＶＤ）－Ｉｇ（Ａｂｂｏｔｔ）、ＩｇＧ－ｌｉｋｅ Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ（Ｉｎ
ｎＣｌｏｎｅ／Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、Ｔｓ２Ａｂ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡＺ）、及び
ＢｓＡｂ（Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ＨＥＲＣＵＬＥＳ（Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）
、並びにＴｖＡｂ（Ｒｏｃｈｅ）が挙げられる。
一部の実施形態では、Ｆｃ融合分子には、ＳｃＦｖ／Ｆｃ Ｆｕｓｉｏｎｓ（Ａｃａｄ
ｅｍｉｃ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）、ＳＣＯＲＰＩＯＮ（Ｅｍｅｒｇｅｎｔ ＢｉｏＳ
ｏｌｕｔｉｏｎｓ／Ｔｒｕｂｉｏｎ，Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ／ＢＭＳ）、Ｄｕａｌ
Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｆｃ－ＤＡＲＴ）
（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）、及びＤｕａｌ（ＳｃＦｖ）．ｓｕｂ．２－Ｆａｂ（Ｎａｔ
ｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｅｄｉｃ
ｉｎｅ－－Ｃｈｉｎａ）が挙げられる。
一部の実施形態では、Ｆａｂ融合二重特異性抗体には、Ｆ（ａｂ）２（Ｍｅｄａｒｅｘ
／ＡＭＧＥＮ）、Ｄｕａｌ－Ａｃｔｉｏｎ ｏｒ Ｂｉｓ－Ｆａｂ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ
）、Ｄｏｃｋ－ａｎｄ－Ｌｏｃｋ（ＤＮＬ）（ＩｍｍｕｎｏＭｅｄｉｃｓ）、Ｂｉｖａｌ
ｅｎｔ Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ（Ｂｉｏｔｅｃｎｏｌ）、及びＦａｂ－Ｆｖ（ＵＣＢ－Ｃ
ｅｌｌｔｅｃｈ）が挙げられる。ＳｃＦｖ－、ディアボディ－ベース及びドメイン抗体に
は、Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｅｎｇａｇｅｒ（ＢＩＴＥ）（Ｍｉｃｒｏｍ
ｅｔ）、Ｔａｎｄｅｍ Ｄｉａｂｏｄｙ（Ｔａｎｄａｂ）（Ａｆｆｉｍｅｄ）、Ｄｕａｌ
Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＤＡＲＴ）（Ｍ
ａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）、Ｓｉｎｇｌｅ－ｃｈａｉｎ Ｄｉａｂｏｄｙ（Ａｃａｄｅｍｉ
ｃ）、ＴＣＲ－ｌｉｋｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（ＡＩＴ，ＲｅｃｅｐｔｏｒＬｏｇｉｃ
ｓ）、Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｕｍ Ａｌｂｕｍｉｎ ＳｃＦｖ Ｆｕｓｉｏｎ（Ｍｅｒｒｉ
ｍａｃｋ）、及びＣＯＭＢＯＤＹ（Ｅｐｉｇｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、二重標的指向性ナ
ノボディ（dual targeting nanobody）（Ａｂｌｙｎｘ）、二重標的指向性の重鎖のみの
ドメイン抗体（dual targeting heavy chain only domain antibody）が挙げられるが、
これらに限定されない。
本発明の完全長の二重特異性抗体は、例えば、２つの単一特異的二価抗体間でのＦａｂ
アーム交換（又は半分子交換）を用い、インビトロにおいて、無細胞環境下又は共発現使
用下のいずれかで、別個の特異性を有する２つの抗体半分子を好ましくヘテロ二量体形成
させるべく各半分子における重鎖ＣＨ３界面に置換を導入することにより生成されてもよ
い。Ｆａｂアーム交換反応は、ジスルフィド結合異性化反応及びＣＨ３ドメインの解離－
会合の結果である。単一特異的親抗体のヒンジ領域における重鎖ジスルフィド結合は減少
する。単一特異的親抗体のうち１つについて生じる遊離システインは、第２の単一特異的
親抗体分子のシステイン残基と重鎖内ジスルフィド結合を形成し、同時に、親抗体のＣＨ
３ドメインは、解離－会合により開放及び再形成する。ＦａｂアームのＣＨ３ドメインは
、ホモ二量体形成より好ましいヘテロ二量体形成をするよう操作されてもよい。得られた
生成物は、各々別個のエピトープ、すなわち、ＧＰＲＣ５Ｄ上のエピトープ及びＣＤ３上
のエピトープに結合する、２つのＦａｂアーム又は半分子を有する二重特異性抗体である
。
本明細書で使用されるとき、「ホモ二量体形成」は、同一のＣＨ３アミノ酸配列を有す
る２本の重鎖の相互作用を意味する。本明細書で使用されるとき、「ホモ二量体」は、同
一のＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖を有する抗体を意味する。
本明細書で使用されるとき、「ヘテロ二量体形成」は、同一でないＣＨ３アミノ酸配列
を有する２本の重鎖の相互作用を意味する。本明細書で使用されるとき、「ヘテロ二量体
」は、同一でないＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖を有する抗体を意味する。
「ノブインホール（knob-in-hole）」戦略（例えば、国際公開第２００６／０２８９３
６号を参照のこと）を使用して、完全長の二重特異性抗体を生成することもできる。簡潔
に、ヒトＩｇＧにおけるＣＨ３ドメインの界面を形成する選択されたアミノ酸は、ヘテロ
二量体形成を促進するために、ＣＨ３ドメイン相互作用に影響を及ぼす位置において変異
され得る。小さな側鎖を有するアミノ酸（ホール）が、第１の抗原に特異的に結合する抗
体の重鎖内に導入され、大きな側鎖を有するアミノ酸（ノブ）が、第２の抗原に特異的に
結合する抗体の重鎖内に導入される。２つの抗体の共発現後に、ヘテロ二量体が、「ホー
ル」を有する重鎖と「ノブ」を有する重鎖との優先的な相互作用の結果として形成される
。ノブ及びホールを形成する例示的なＣＨ３置換の対は、Ｔ３６６Ｙ／Ｆ４０５Ａ、Ｔ３
６６Ｗ／Ｆ４０５Ｗ、Ｆ４０５Ｗ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３９４Ｗ／Ｙ４０７Ｔ、Ｔ３９４Ｓ／
Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、Ｆ４０５Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、及びＴ３６６Ｗ／Ｔ３
６６Ｓ＿Ｌ３６８Ａ＿Ｙ４０７Ｖである（第１の重鎖の第１のＣＨ３ドメインにおける改
変位置／第２の重鎖の第２のＣＨ３ドメインにおける改変位置として表現）。
他の戦略、例えば、第１のＣＨ３表面における正に荷電した残基及び第２のＣＨ３表面
における負に荷電した残基を置換することによる静電的相互作用を用いる重鎖ヘテロ二量
体形成の促進が、米国特許公開第２０１０／００１５１３３号、米国特許公開第２００９
／０１８２１２７号、米国特許公開第２０１０／０２８６３７号、又は米国特許公開第２
０１１／０１２３５３２号に記載されるように使用されてもよい。他の戦略では、ヘテロ
二量体形成は、米国特許公開第２０１２／０１４９８７６号又は米国特許公開第２０１３
／０１９５８４９号に記載されるように、下記置換：Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ Ｙ４０７
Ｖ／Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３６６Ｉ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３
６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／
Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ｖ Ｋ４０９Ｆ Ｙ４０７
Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、又はＴ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ Ｙ４０７Ｖ／
Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ（第１の重鎖の第１のＣＨ３ドメイン
における改変位置／第２の重鎖の第２のＣＨ３ドメインにおける改変位置として表現）に
より促進されてもよい。
上記された方法に加えて、本発明の二重特異性抗体は、国際公開第２０１１／１３１７
４６号に記載された方法に従って、インビトロにおいて、無細胞環境下で、２つの単一特
異的ホモ二量体抗体のＣＨ３領域中に非対称な変異を導入し、ジスルフィド結合を異性化
させる還元条件下において、２つの単一特異的ホモ二量体親抗体から二重特異性ヘテロ二
量体抗体を形成することにより生成されてもよい。この方法において、第１の単一特異的
二価抗体（例えば、抗ＧＰＲＣ５Ｄ抗体）及び第２の単一特異的二価抗体（例えば、抗Ｃ
Ｄ３抗体）は、ヘテロ二量体の安定性を促進するＣＨ３ドメインにおける特定の置換を有
するように操作される。これらの抗体は、ヒンジ領域におけるシステインがジスルフィド
結合を異性化させるのに十分な還元条件下において共にインキュベートされ、それにより
、Ｆａｂアーム交換により二重特異性抗体が生成される。インキュベート条件は、最適に
は、非還元条件に戻されてもよい。使用され得る例示的な還元剤は、２－メルカプトエチ
ルアミン（２－ＭＥＡ）、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、ジチオエリスリトール（ＤＴ
Ｅ）、グルタチオン、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、Ｌ－シ
ステイン、及びβ－メルカプトエタノールであり、好ましくは、２－メルカプトエチルア
ミン、ジチオスレイトール、及びトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンからなる群
から選択される還元剤である。例えば、少なくとも２０℃の温度において、少なくとも２
５ｍＭの２－ＭＥＡの存在下又は少なくとも０．５ｍＭのジチオスレイトールの存在下で
、ｐＨ５～８、例えば、ｐＨ７．０又はｐＨ７．４において、少なくとも９０分のインキ
ュベートが使用されてもよい。
記載されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体に加えて、記載されたＧＰＲＣ５Ｄ×
ＣＤ３多重特異的抗体をコード可能なポリヌクレオチド配列も提供される。記載されたポ
リヌクレオチドを含むベクターも提供され、同様に、ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗
体を発現している細胞も本明細書において提供される。また、開示されたベクターを発現
可能な細胞も記載される。これらの細胞は、哺乳類細胞（例えば、２９３Ｆ細胞、ＣＨＯ
細胞）、昆虫細胞（例えば、Ｓｆ７細胞）、酵母細胞、植物細胞、又は細菌細胞（例えば
、大腸菌）でもよい。記載された抗体はまた、ハイブリドーマ細胞により生成することが
できる。
多重特異的抗体及びその多重特異的抗原結合フラグメントを使用する治療組成物及び処
置方法
上記で検討されたＧＰＲＣ５Ｄ二重特異性抗体、例えば、上記で検討されたＧＰＲＣ５
Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体は、治療に有用である。特に、ＧＰＲＣ５Ｄ二重特異性抗体は
、がんを処置するのに有用である。また、本明細書において、治療的に有効な量の、本明
細書に記載された多重特異的抗体又は多重特異的抗原結合フラグメントと、医薬的に許容
され得る担体とを含む、哺乳類における過剰増殖性障害を処置するための治療組成物が提
供される。好ましい実施形態では、多重特異的抗体は、本明細書に記載されるようなＧＰ
ＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又はその多重特異的抗原結合フラグメントであり、より
好ましくは、本明細書に記載されるようなＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又はその
ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗原結合フラグメントである。一実施形態では、医薬組
成物は、下記：多発性骨髄腫（ＭＭ）などのＧＰＲＣ５Ｄ発現Ｂ細胞がん、並びにＧＰＲ
Ｃ５Ｄを発現しているかの判定がまだなされていないその他のがんを含む（が、これらに
限定されない）、ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんの処置のためのものである。がん、例えば、上記
で検討された特定のがんを含む血液がんを処置するのに使用されてもよい特定の二重特異
性抗体としては、抗体ＧＣ５Ｂ８１、ＧＣ５Ｂ４６５、ＧＳ５Ｂ４８３、又はＧＣ５Ｂ５
９６が挙げられる。
本明細書で提供された医薬組成物は、ａ）有効量の本発明の多重特異的抗体又は抗体フ
ラグメントと、ｂ）不活性でも又は生理学的に活性でもよい医薬的に許容され得る担体と
を含む。好ましい実施形態では、多重特異的抗体は、本明細書に記載されるようなＧＰＲ
Ｃ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又はその多重特異的抗原結合フラグメントであり、より好
ましくは、本明細書に記載されるようなＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又はそのＧ
ＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗原結合フラグメントである。本明細書で使用されるとき
、「医薬的に許容され得る担体」という用語は、生理学的に適合性である、任意かつ全て
の溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤、及び抗真菌剤等を含む。適切な担体、希釈剤
、及び／又は賦形剤の例としては、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロ
ース、グリセロール、エタノール等のうち１種又は２種以上、並びにそれらの任意の組み
合わせが挙げられる。多くの場合、等張性剤、例えば、糖、ポリアルコール、又は塩化ナ
トリウムを組成物中に含めるのが好ましい。特に、適切な担体の関連する例には、（１）
ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ約７．４、約１ｍｇ／ｍＬ～２５ｍｇ／ｍＬのヒ
ト血清アルブミンを含有又は非含有、（２）０．９％の生理食塩水（０．９％ｗ／ｖの塩
化ナトリウム（ＮａＣｌ））、及び（３）５％（ｗ／ｖ）のデキストロース、が挙げられ
、抗酸化剤、例えば、トリプタミン、及び安定化剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ２０（登録商標
）をも含有してもよい。
本明細書における組成物はまた、処置される特定の疾患にとって必要な場合には、更な
る治療剤を含有してもよい。好ましくは、多重特異的抗体又は抗体フラグメントと補助的
な活性化合物とは、互いに有害に影響を及ぼさない補完的な活性を有することとなる。好
ましい実施形態では、更なる治療剤は、シタラビン、アントラサイクリン、ヒスタミン二
塩酸塩、又はインターロイキン２である。好ましい実施形態では、更なる治療剤は、化学
療法剤である。
本発明の組成物は、様々な形態であってよい。このような形態としては、例えば、液体
、半固体、及び固体の剤形が挙げられるが、好ましい形態は、意図された投与方式及び治
療用途により決まる。典型的に好ましい組成物は、注射可能な溶液又は注入可能な溶液の
形態である。好ましい投与方式は、非経口（例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下）で
ある。好ましい実施形態では、本発明の組成物は、ボーラス又は一定期間にわたる連続的
な注入により静脈投与される。別の好ましい実施形態では、本組成物は、局所及び全身性
の治療効果を発揮するために、筋肉内、皮下、関節内、関節滑液嚢内、腫瘍内、腫瘍周囲
、病巣内、又は病巣周囲の経路により投与される。
非経口投与用の無菌組成物が、本発明の抗体、抗体フラグメント、又は抗体コンジュゲ
ートを、必要とされる量で適切な溶媒に包含させ、続けて、マイクロフィルター法により
滅菌することにより調製され得る。溶媒又は賦形剤として、水、生理食塩水、リン酸緩衝
生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノール等、並びにこれらの組み合わせ
を使用することができる。多くの場合には、等張性剤、例えば、糖、ポリアルコール、又
は塩化ナトリウムを組成物中に含むのが好ましい。これらの組成物はまた、補助剤、特に
、湿潤剤、等張化剤、乳化剤、分散剤、及び安定化剤を含有してもよい。非経口投与用の
無菌組成物はまた、使用時に滅菌水又は任意の他の注射可能な無菌媒体中に溶解されても
よい、無菌の固体組成物の形態で調製されてもよい。
多重特異的抗体又は抗体フラグメントはまた、経口投与されてもよい。経口投与用の固
体組成物として、錠剤、丸剤、粉末剤（ゼラチンカプセル剤、サッシェ剤）、又は顆粒剤
が使用されてもよい。これらの組成物において、本発明による活性成分は、１つ又は２つ
以上の不活性な希釈剤、例えば、デンプン、セルロース、スクロース、ラクトース、又は
シリカと、アルゴン流下において混合される。これらの組成物はまた、希釈剤以外の物質
、例えば、１つ又は２つ以上の潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム又はタルク、
着色剤、コーティング（糖衣錠）、あるいはグレーズを含んでもよい。
経口投与用の液体組成物として、不活性な希釈剤、例えば、水、エタノール、グリセロ
ール、植物油、又はパラフィンオイルを含有する、医薬的に許容され得る液剤、懸濁剤、
乳剤、シロップ剤、及びエリキシル剤が使用されてもよい。これらの組成物は、希釈剤以
外の物質、例えば、湿潤剤、甘味料、増粘剤、着香剤、又は安定化製品を含んでもよい。
用量は、所望の効果、治療の期間、及び使用される投与経路により決まる。用量は、一
般的には、成人では１日あたり経口で５ｍｇ～１０００ｍｇであり、単位用量は、活性物
質１ｍｇ～２５０ｍｇの範囲である。一般的には、医師は、適切な用量を、処置される対
象の年齢、体重、及び同対象に固有の任意の他の因子に応じて決定する。
また、本明細書において、ＧＰＲＣ５Ｄ＋細胞を殺傷するための方法であって、かかる
細胞の殺傷を必要とする患者に、かかるＧＰＲＣ５Ｄに結合し、Ｔ細胞を補充して、かか
るＧＰＲＣ５Ｄ＋細胞を殺傷する（すなわち、Ｔ細胞を再指向する）ことが可能な多重特
異的抗体を投与することにより、ＧＰＲＣ５Ｄ＋細胞を殺傷するための方法が提供される
。本発明の多重特異的抗体又は抗体フラグメントのいずれかは、治療的に使用されてもよ
い。例えば、一実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体は、対象におけるが
んを処置するために治療的に使用され得る。
好ましい実施形態では、本発明の多重特異的抗体又は抗体フラグメントは、哺乳類にお
ける過剰増殖性障害を処置するために使用される。より好ましい実施形態では、本発明の
多重特異的抗体又は抗体フラグメントを含有する、上記で開示された医薬組成物のうち１
つは、哺乳類における過剰増殖性障害を処置するために使用される。一実施形態では、こ
の障害は、がんである。特に、かかるがんは、下記：多発性骨髄腫（ＭＭ）などのＧＰＲ
Ｃ５Ｄ発現Ｂ細胞がん、並びにＧＰＲＣ５Ｄを発現しているかの判定がまだなされていな
いその他のがんを含む（但しこれらに限定されない）ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんである。好ま
しい実施形態では、多重特異的抗体は、本明細書に記載されるようなＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ
３多重特異的抗体又はその多重特異的抗原結合フラグメントであり、より好ましくは、本
明細書に記載されるようなＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又はそのＧＰＲＣ５Ｄ×
ＣＤ３二重特異性抗原結合フラグメントである。
したがって、本発明の医薬組成物は、例えば、急性多発性骨髄腫（ＭＭ）又はＭＧＵＳ
（意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症）及びＳＭＭ（くすぶり型多発性骨髄腫）
などの前がん性骨髄腫、及びプラズマ細胞腫などの、ＧＰＲＣ５Ｄ発現Ｂ／プラズマ細胞
がんを含むＧＰＲＣ５Ｄ発現がん（但しこれらに限定されない）；並びにＧＰＲＣ５Ｄを
発現しているかの判定がまだなされていないその他のがん、を含む、様々ながんの処置又
は予防に有用である。
同様に、本明細書において、選択された細胞集団の成長を阻害するための方法であって
、ＧＰＲＣ５Ｄ発現標的細胞又はこのような標的細胞を含有する組織を、有効量の本発明
の多重特異的抗体又は抗体フラグメントと、単独で、又は他の細胞傷害剤若しくは治療剤
との組み合わせにおいてのいずれかで、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の存在下で接触させる
ことを含む、方法が更に提供される。好ましい実施形態では、多重特異的抗体は、本明細
書に記載されるようなＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又はその多重特異的抗原結合
フラグメントであり、より好ましくは、本明細書に記載されるようなＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ
３二重特異性抗体又はそのＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗原結合フラグメントである
。好ましい実施形態では、更なる治療剤は、シタラビン、アントラサイクリン、ヒスタミ
ン二塩酸塩、又はインターロイキン２である。好ましい実施形態では、更なる治療剤は、
化学療法剤である。選択された細胞集団の成長を阻害するための方法は、インビトロ、イ
ンビボ、又はエクスビボにおいて実施され得る。
インビトロでの使用例には、疾患細胞又は悪性細胞を殺傷することを目的とした、同じ
患者への移植前の自家骨髄の処理、コンピテントＴ細胞を殺傷し、移植片対宿主病（ＧＶ
ＨＤ）を防止するための移植前の骨髄の処理、標的抗原を発現していない所望の多様体を
除く全ての細胞を殺傷するため、又は不要な抗原を発現している多様体を殺傷するための
細胞培養物の処理、が挙げられる。非臨床的なインビトロでの使用条件は、当業者により
容易に決定される。
臨床的なエクスビボでの使用例は、がん処置における自家移植前に、骨髄から腫瘍細胞
を除去することである。処置は、下記のように行われ得る。骨髄を患者又は他の個体から
採取し、次いで本発明の細胞傷害剤を添加した血清含有培地中でインキュベートする。濃
度は、約３７℃で約３０分～約４８時間の間、約１０μＭ～１μＭの範囲である。インキ
ュベートの濃度及び時間の厳密な条件、すなわち、投与量は、当業者により容易に決定さ
れる。インキュベート後、骨髄細胞を、血清含有培地で洗浄し、既知の方法に従って、静
脈注射により患者に戻す。患者が他の処置、例えば、一連の骨髄破壊的化学療法又は全身
照射を受けている状況において、骨髄の収集時間と処理された細胞の再注入の時間との間
、処理された骨髄細胞は、標準的な医療機器を使用して、液体窒素中で凍結保存される。
臨床的なインビボでの使用について、治療的に有効な量の多重特異的抗体又は抗原結合
フラグメントが、かかる抗体又はフラグメントを必要とする対象に投与される。例えば、
ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体及びその多重特異的抗原結合フラグメントは、ＧＰ
ＲＣ５Ｄ発現がんの処置を必要とする対象における、ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんの処置に有用
であり得る。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ発現がんは骨髄腫（ＭＭ）などのＢ細胞
がんである。好ましい実施形態では、多重特異的抗体は、本明細書に記載されるようなＧ
ＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又はその多重特異的抗原結合フラグメントであり、よ
り好ましくは、本明細書に記載されるようなＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又はそ
のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗原結合フラグメントである。一部の実施形態では、
対象は、哺乳類、好ましくは、ヒトである。一部の実施形態では、多重特異的抗体又は抗
原結合フラグメントは、無菌試験済みの溶液として投与される。
処置及び使用についての上記方法における投与計画は、最適な所望の応答（例えば、治
療応答）を提供するように調節される。例えば、単一ボーラスを投与してもよく、いくつ
かの分割用量を、時間をかけて投与してもよく、又は治療状況の緊急性が示される蔡に、
用量を比例的に減少又は増加させてよい。非経口組成物は、投与しやすくしかつ用量を均
一にするために、用量単位の形態に製剤されてもよい。
多重特異的抗体及びフラグメントの効率的な投与及び投与計画は、処置される疾患又は
状態により決まり、当業者により決定されてもよい。本発明の化合物の治療的に有効な量
の例示的で非限定的な範囲は、約０．００１～１０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．００１～
５ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．００１～２ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．００１～１ｍｇ／
ｋｇ、例えば、約０．００１、約０．０１、約０．１、約１、又は約１０ｍｇ／ｋｇであ
る。
当該技術分野において通常の技能を有する医師又は獣医師は、必要とされる医薬組成物
の有効量を容易に決定し、処方することができる。例えば、医師又は獣医師は、医薬組成
物中に利用される多重特異的抗体又はフラグメントの用量を、所望の治療効果を達成する
のに必要されるよりも少ないレベルより開始し、かかる用量を、所望の効果が達成される
まで徐々に増大させることができる。一般的には、本発明の二重特異性抗体の適切な１日
量は、治療効果を生じさせるのに有効であるうち最も少ない用量である化合物量である。
投与は、例えば、非経口、例えば、静脈内、筋肉内、又は皮下でもよい。一実施形態では
、多重特異的抗体又はフラグメントは、ｍｇ／ｍ2で算出された毎週投与での注入により
投与されてもよい。このような用量は、例えば、下記：用量（ｍｇ／ｋｇ）×７０：１．
８に従って、上記で提供されたｍｇ／ｋｇ用量に基づくことができる。このような投与は
、例えば、１～８回、例えば、３～５回繰り返されてもよい。投与は、２～２４時間、例
えば、２～１２時間の期間にわたる連続的な注入により行われてもよい。一実施形態では
、多重特異的抗体又はフラグメントは、毒性の副作用を低減させるために、長期間、例え
ば、２４時間超にわたるゆっくりとした連続的な注入により投与されてもよい。
一実施形態では、多重特異的抗体又はフラグメントは、１週間に１回で与えられる場合
、最大８回、例えば、４～６回の固定用量として算出された毎週投与において投与されて
もよい。このような計画は、例えば、６ケ月又は１２ケ月後に、必要に応じて１回又は２
回以上繰り返されてもよい。このような固定用量は、例えば、上記で提供されたｍｇ／ｋ
ｇ用量に基づくことができる。ここで、体重は、７０ｋｇと仮定する。用量は、例えば、
生体サンプルを採取し、本発明の多重特異的抗体のＧＰＲＣ５Ｄ抗原結合領域を標的とす
る抗イディオタイプ抗体を使用することによって、本発明の二重特異性抗体の投与時の血
中量を測定することにより、決定又は調節されてもよい。
一実施形態では、多重特異的抗体又はフラグメントは、維持治療、例えば、６ケ月以上
の期間で週１回等により投与されてもよい。
多重特異的抗体又はフラグメントはまた、がんの進行リスクを低下させ、がんの進行に
おけるイベントの発生の開始を遅延させ、かつ／又はがんが緩解した際の再発リスクを低
下させるために、予防的に投与されてもよい。
本明細書に記載された多重特異的抗体及びそのフラグメントはまた、組み合わせ治療に
おいて投与されてもよく、すなわち、処置される疾患又は状態に関連する他の治療剤と組
み合わせられてもよい。したがって、一実施形態では、抗体含有医薬は、１種又は２種以
上の他の治療剤、例えば、化学療法剤と組み合わせるためのものである。一部の実施形態
では、他の治療剤は、シタラビン、アントラサイクリン、ヒスタミン二塩酸塩、又はイン
ターロイキン２である。このような組み合わせ投与は、同時、任意の順序において、別々
又は連続的でもよい。同時投与では、薬剤は、必要に応じて、１つの組成物又は別々の組
成物として投与されてもよい。
一実施形態では、対象においてＧＰＲＣ５Ｄを発現している細胞が関与する障害を処置
するための方法であって、治療的に有効な量の、本明細書に記載された多重特異的抗体又
はフラグメント、例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体と、放射線治療とを、そ
れを必要としている対象に施すことを含む、方法が提供される。一実施形態では、がんを
処置又は予防するための方法であって、治療的に有効な量の、本明細書に記載された多重
特異的抗体又はフラグメント、例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３抗体と、放射線治療とを、
それを必要としている対象に施すことを含む、方法が提供される。放射線治療としては、
提供される患者に対する、放射線又は放射性医薬の関連する投与を含んでもよい。放射線
源は、処置される患者の外側又は内側のいずれか一方であってもよい（放射線治療は、例
えば、外照射療法（ＥＢＲＴ）又は小線源治療（ＢＴ）の形態でもよい）。このような方
法を実施するのに使用することができる放射性元素には、例えば、ラジウム、セシウム－
１３７、イリジウム－１９２、アメリシウム－２４１、金－１９８、コバルト－５７、銅
－６７、テクネチウム－９９、ヨウ素－１２３、ヨウ素－１３１、及びインジウム－１１
１が挙げられる。
キット
また、本明細書において、例えば、記載された多重特異的抗体又はその抗原結合フラグ
メントと、特定の細胞種を殺傷するための抗体又はフラグメントを使用するための使用説
明書と、を含むキットも提供される。好ましい実施形態では、多重特異的抗体は、本明細
書に記載されるようなＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又はその多重特異的抗原結合
フラグメントであり、より好ましくは、本明細書に記載されるようなＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ
３二重特異性抗体又はそのＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗原結合フラグメントである
。使用説明書は、多重特異的抗体又はその抗原結合フラグメントを、インビトロ、インビ
ボ、又はエクスビボにおいて使用するための指示を含んでもよい。
典型的には、キットは、多重特異的抗体又はその抗原結合フラグメントを含有する区画
を有する。多重特異的抗体又はその抗原結合フラグメントは、凍結乾燥状態、液状、又は
キットに含ませるのに修正可能な他の形態でもよい。キットはまた、キットの使用説明書
に記載された方法を実施するのに必要とされる、更なる要素を含有してもよい。同要素は
、例えば、凍結乾燥粉末を再構成するための無菌溶液、患者への投与の前に多重特異的抗
体又はその抗原結合フラグメントと組み合わせるための更なる薬剤、及び多重特異的抗体
又はその抗原結合フラグメントを患者に投与するのを支援するツールである。
診断的使用
本明細書に記載された多重特異的抗体及びフラグメントはまた、診断目的に使用されて
もよい。このため、本明細書で定義されたような多重特異的抗体又はフラグメントを含む
診断組成物及びその使用もまた提供される。好ましい実施形態では、多重特異的抗体は、
本明細書に記載されるようなＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又はその多重特異的抗
原結合フラグメントであり、より好ましくは、本明細書に記載されるようなＧＰＲＣ５Ｄ
×ＣＤ３二重特異性抗体又はそのＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗原結合フラグメント
である。一実施形態では、本発明は、二重特異性ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３抗体と、ＧＰＲＣ
５Ｄに対する抗体の結合を検出するための１種又は２種以上の試薬と、を含む容器を含む
、がんを診断するためのキットを提供する。試薬には、例えば、蛍光タグ、酵素タグ、又
は他の検出可能なタグを挙げることができる。試薬はまた、酵素反応のための二次若しく
は三次抗体又は試薬を含んでもよい。この場合、酵素反応は、可視化することができる生
成物を生じる。例えば、本明細書に記載された多重特異的抗体又はその抗原結合フラグメ
ントは、放射線標識、蛍光標識、エピトープタグ、ビオチン、発色団標識、ＥＣＬ標識、
酵素、ルテニウム、111Ｉｎ－ＤＯＴＡ、111Ｉｎ－ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰ
Ａ）、西洋わさびペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、及びβガラクトシダーゼ
、若しくはポリヒスチジン、又は、当技術分野において公知の類似するこのような標識で
標識されてもよい。
実施形態
本明細書で提供される開示は、以下の非限定的実施形態も提供する。
実施形態１ ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する、単離された抗体又はその抗原結合フラ
グメントであって、
ａ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号
５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を有する重鎖Ｃ
ＤＲ３、
ｂ．配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を有
する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｃ．配列番号３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を有
する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を有
する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｅ．配列番号６１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号６７のアミノ酸配列
を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｆ．配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号２８のアミノ酸配列を
有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｇ．配列番号２７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号２９のアミノ酸配列
を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｈ．配列番号２７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号２９のアミノ酸配列
を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｉ．配列番号６２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号６８のアミノ酸配列
を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｊ．配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号６９のアミノ酸配列
を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｋ．配列番号６４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号７０のアミノ酸配列
を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｌ．配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号６８のアミノ酸配列
を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、又は
ｍ．配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号７１のアミノ酸配列
を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、を含む
、単離された抗体又はその抗原結合フラグメント。
実施形態２ 実施形態１に記載の単離された抗体又は抗原結合フラグメントであって、
ａ．配列番号１のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列
を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を
含む、前記抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１６の
アミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤ
Ｒ３を更に含み、
ｂ．配列番号２のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列
を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３
を含む、前記抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１６
のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有する軽鎖Ｃ
ＤＲ３を更に含み、
ｃ．配列番号３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列
を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３
を含む、前記抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１７
のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号２０のアミノ酸配列を有する軽鎖Ｃ
ＤＲ３を更に含み、
ｄ．配列番号４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列
を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１２のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３
を含む、前記抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１８
のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列を有する軽鎖Ｃ
ＤＲ３を更に含み、
ｅ．配列番号６１のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号６７のアミノ酸
配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７２のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤ
Ｒ３を含む、前記抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号
７８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８０のアミノ酸配列を有する軽
鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｆ．配列番号２のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号２８のアミノ酸配
列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３０のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ
３を含む、前記抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号６
のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有する軽鎖Ｃ
ＤＲ３を更に含み、
ｇ．配列番号２７のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号２９のアミノ酸
配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤ
Ｒ３を含む、前記抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号
１７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号２０のアミノ酸配列を有する軽
鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｈ．配列番号２７のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号２９のアミノ酸
配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤ
Ｒ３を含む、前記抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号
１７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号２０のアミノ酸配列を有する軽
鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｉ．配列番号６２のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号６８のアミノ酸
配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤ
Ｒ３を含む、前記抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号
１７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号２０のアミノ酸配列を有する軽
鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｊ．配列番号６３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号６９のアミノ酸
配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７５のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤ
Ｒ３を含む、前記抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号
７８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８０のアミノ酸配列を有する軽
鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｋ．配列番号６１のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号６７のアミノ酸
配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７２のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤ
Ｒ３を含む、前記抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号
７８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８０のアミノ酸配列を有する軽
鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｌ．配列番号６５のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号６８のアミノ酸
配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７６のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤ
Ｒ３を含む、前記抗体は、配列番号９５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号
７９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８１のアミノ酸配列を有する軽
鎖ＣＤＲ３を更に含み、又は
ｍ．配列番号６６のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号７１のアミノ酸
配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７７のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤ
Ｒ３を含む、前記抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号
１８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列を有する軽
鎖ＣＤＲ３を更に含む、単離された抗体又は抗原結合フラグメント。
実施形態３ ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合し、かつ配列番号５２、５３、５４、５５、
８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、又は９１からなる群から選択される
重鎖可変（ＶＨ）領域を含む、単離された抗体又はその抗原結合フラグメント。
実施形態４ 前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号：５６、５７、５８
、９２、９３、又は９４からなる群から選択される軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む、実施形
態３に記載の抗体。
実施形態５ 前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号：５２、５３、５４
、５５、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、又は９１からなる群から選
択されるＶＨ領域と、配列番号５６、５７、５８、９２、９３、又は９４からなる群から
選択されるＶＬ領域と、を含む、実施形態３に記載の抗体。
実施形態６ 前記ＶＨ鎖領域が、配列番号５６を含むＶＬ鎖領域と対となる配列番号５
２、５３、又は８３を含む、実施形態５に記載の抗体。
実施形態７ 前記ＶＨ鎖領域が、配列番号５７を含むＶＬ鎖領域と対となる配列番号５
４、８４、８５、８６、又は９０を含む、実施形態５に記載の抗体。
実施形態８ 前記ＶＨ鎖領域が、配列番号５８を含むＶＬ鎖領域と対となる配列番号５
５又は８８を含む、実施形態５に記載の抗体。
実施形態９ 前記ＶＨ鎖領域が、配列番号９２を含むＶＬ鎖領域と対となる配列番号８
２又は８７を含む、実施形態５に記載の抗体。
実施形態１０ 前記ＶＨ鎖領域が、配列番号９３を含むＶＬ鎖領域と対となる配列番号
８９を含む、実施形態５に記載の抗体。
実施形態１１ 前記ＶＨ鎖領域が、配列番号９４を含むＶＬ鎖領域と対となる配列番号
９１を含む、実施形態５に記載の抗体。
実施形態１２ 前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号２２のアミノ酸配
列を有するポリペプチドに結合する、実施形態１～１１のいずれか１つに記載の抗体又は
抗原結合フラグメント。
実施形態１３ 抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒト抗体又は抗原結合フラグメント
である、実施形態１～１２のいずれか１つに記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
実施形態１４ 前記抗体又は抗原結合フラグメントは、組み換え体である、実施形態１
～１３のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
実施形態１５ 抗原結合フラグメントは、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ２フラグメント
、又は一本鎖抗体である、実施形態１～１４のいずれか１つに記載の抗原結合フラグメン
ト。
実施形態１６ 抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３
、又はＩｇＧ４のアイソタイプである、実施形態１～１５のいずれか１つに記載の抗体又
は抗原結合フラグメント。
実施形態１７ ＩｇＧ１又はＩｇＧ４のアイソタイプである、実施形態１～９のいずれ
かに記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
実施形態１８ ＩｇＧ１は、Ｆｃ領域中に、Ｋ４０９Ｒ置換を有する、実施形態１７に
記載の抗体。
実施形態１９ ＩｇＧ１は、Ｆｃ領域中に、Ｆ４０５Ｌ置換を有する、実施形態１７に
記載の抗体。
実施形態２０ ＩｇＧ４は、Ｆｃ領域中に、Ｆ４０５Ｌ置換及びＲ４０９Ｋ置換を有す
る、実施形態２０に記載の抗体。
実施形態２１ Ｆｃ領域中に、Ｓ２２８Ｐ置換、Ｌ２３４Ａ置換、及びＬ２３５Ａ置換
を更に含む、実施形態１６に記載の抗体。
実施形態２２ 前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＧＰＲＣ５Ｄに特異的
に結合し、カニクイザルＧＰＲＣ５Ｄと交差反応する、実施形態１～１４のいずれか１つ
に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
実施形態２３ 前記抗体又は抗原結合フラグメントは、約２８ｎＭ未満のＥＣ50でＡＤ
ＣＣをインビトロで誘導する、実施形態１７に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
実施形態２４ 実施形態１～１１のいずれか１つに記載の抗体又は抗原結合フラグメン
トを発現している単離された細胞。
実施形態２５ 細胞は、ハイブリドーマである、実施形態２４に記載の細胞。
実施形態２６ 抗体は、組み換えにより生成される、実施形態２４に記載の細胞。
実施形態２７ 単離されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体であって、
ａ）第１の重鎖（ＨＣ１）と、
ｂ）第２の重鎖（ＨＣ２）と、
ｃ）第１の軽鎖（ＬＣ１）と、
ｄ）第２の軽鎖（ＬＣ２）と、を含み、
前記ＨＣ１及び前記ＬＣ１は、ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成す
るように対を成しており、前記ＨＣ２及び前記ＬＣ２は、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合す
る第２の抗原結合部位を形成するように対を成している、単離されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ
３二重特異性抗体、又はそのＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性結合フラグメント。
実施形態２８ ＨＣ１は、配列番号２５を含み、ＬＣ１は、配列番号２６を含む、実施
形態２７に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント
。
実施形態２９ ＨＣ２は、配列番号５２を含み、ＬＣ２は、配列番号５６を含む、実施
形態２８に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント
。
実施形態３０ ＨＣ２は、配列番号５３を含み、ＬＣ２は、配列番号５６を含む、実施
形態２８に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント
。
実施形態３１ ＨＣ２は、配列番号５４を含み、ＬＣ２は、配列番号５７を含む、実施
形態２８に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント
。
実施形態３２ ＨＣ２は、配列番号５５を含み、ＬＣ２は、配列番号５８を含む、実施
形態２８に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント
。
実施形態３３ ＨＣ２は、配列番号８２を含み、ＬＣ２は、配列番号９２を含む、実施
形態２８に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント
。
実施形態３４ ＨＣ２は、配列番号８３を含み、ＬＣ２は、配列番号５６を含む、実施
形態２８に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント
。
実施形態３５ ＨＣ２は、配列番号８４を含み、ＬＣ２は、配列番号５７を含む、実施
形態２８に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント
。
実施形態３６ ＨＣ２は、配列番号８５を含み、ＬＣ２は、配列番号５７を含む、実施
形態２８に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント
。
実施形態３７ ＨＣ２は、配列番号８６を含み、ＬＣ２は、配列番号５７を含む、実施
形態２８に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント
。
実施形態３８ ＨＣ２は、配列番号８７を含み、ＬＣ２は、配列番号９２を含む、実施
形態２８に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント
。
実施形態３９ ＨＣ２は、配列番号８８を含み、ＬＣ２は、配列番号５８を含む、実施
形態２８に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント
。
実施形態４０ ＨＣ２は、配列番号８９を含み、ＬＣ２は、配列番号９３を含む、実施
形態２８に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント
。
実施形態４１ ＨＣ２は、配列番号９１を含み、ＬＣ２は、配列番号９４を含む、実施
形態２８に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント
。
実施形態４２ ＨＣ２は、配列番号８５を含み、ＬＣ２は、配列番号５７を含む、実施
形態２８に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント
。
実施形態４３ 前記抗体又は二重特異性結合フラグメントは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、Ｉ
ｇＧ３、又はＩｇＧ４のアイソタイプである、実施形態２７～４２のいずれか１つに記載
のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
実施形態４４ 前記抗体又は二重特異性結合フラグメントは、ＩｇＧ４のアイソタイプ
である、実施形態４３に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合
フラグメント。
実施形態４５ 前記抗体又はその二重特異性結合フラグメントは、ヒト骨髄腫細胞の表
面上のＧＰＲＣ５Ｄに結合する、実施形態２７～４２に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重
特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
実施形態４６ 前記抗体又はその二重特異性結合フラグメントは、ヒトの多発性骨髄腫
細胞の表面上のＧＰＲＣ５Ｄに結合する、実施形態２７～４２に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×Ｃ
Ｄ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
実施形態４７ 前記抗体又は二重特異性結合フラグメントは、インビトロでのヒトＴ細
胞活性化を約０．２２ｎＭ未満のＥＣ50で誘導する、実施形態２７～４２に記載のＧＰＲ
Ｃ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
実施形態４８ 前記抗体又は二重特異性結合フラグメントは、インビトロでのＧＰＲＣ
５Ｄ発現細胞のＴ細胞依存性細胞傷害を約０．８９ｎＭ未満のＥＣ50で誘導する、実施形
態２７～４２に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメ
ント。
実施形態４９ 実施形態２７～４２のいずれか１つに記載の抗体又は二重特異性結合フ
ラグメントを発現している、単離された細胞。
実施形態５０ 前記細胞は、ハイブリドーマである、実施形態４９に記載の細胞。
実施形態５１ 前記抗体又は二重特異性結合フラグメントは、組み換えにより生成され
る、実施形態４９に記載の細胞。
実施形態５２ がんを有する対象を処置するための方法であって、前記方法は、
治療的に有効な量の、実施形態２７～４２のいずれか１つに記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ
３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメントを、処置を必要とする患者に、前記が
んを処置するのに十分な時間投与する工程を含む、方法。
実施形態５３ がん細胞の成長又は増殖を阻害するための方法であって、前記方法は、
がん細胞の前記成長又は増殖を阻害するために、治療的に有効な量の、実施形態２７～
４２のいずれか１つに記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フ
ラグメントを投与する工程を含む、方法。
実施形態５４ Ｔ細胞をＧＰＲＣ５Ｄ発現がん細胞に再指向する方法であって、前記方
法は、
Ｔ細胞をがんに再指向するために、治療的に有効な量の、実施形態２７～４２のいずれ
か１つに記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメントを
投与する工程を含む、方法。
実施形態５５ 前記がんは、血液がんである、請求項５２、５３、又は５４に記載の方
法。
実施形態５６ 前記血液がんは、ＧＰＲＣ５Ｄ発現Ｂ細胞がんである、実施形態５５に
記載の方法。
実施形態５７ 前記ＧＰＲＣ５Ｄ発現Ｂ細胞がんは、多発性骨髄腫である、実施形態５
６に記載の方法。
実施形態５８ 第２の治療剤を投与する工程を含む、実施形態５２に記載の方法。
実施形態５９ 前記第２の治療剤は、化学療法剤又は標的を設定した抗がん治療剤であ
る、実施形態５８に記載の方法。
実施形態６０ 前記化学療法剤は、シタラビン、アントラサイクリン、ヒスタミン二塩
酸塩、又はインターロイキン２である、実施形態５９に記載の方法。
実施形態６１ 前記第２の治療剤を、前記二重特異性抗体と同時に、連続的に、又は別
個に、前記対象に投与する、実施形態５９に記載の方法。
実施形態６２ 実施形態２７～４２のいずれか１つに記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重
特異性抗体又は二重特異性結合フラグメントと、医薬的に許容され得る担体と、を含む、
医薬組成物。
実施形態６３ 実施形態４９～５１のいずれか１つに記載の細胞を培養することにより
、実施形態２７～４２のいずれか１つに記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は
二重特異性結合フラグメントを生成するための方法。
実施形態６４ 実施形態２７～４２のいずれか１つに記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重
特異性抗体又は二重特異性結合フラグメントの、前記ＨＣ１、前記ＨＣ２、前記ＬＣ１、
又は前記ＬＣ２をコードする、単離された合成ポリヌクレオチド。
実施形態６５ 実施形態２７～４２のいずれか１つに定義されるとおりのＧＰＲＣ５Ｄ
×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント、及び／又は実施形態６３に定
義されるとおりのポリヌクレオチドと、これらのための包装と、を含む、キット。
下記実施例は、先の開示を補い、本明細書に記載された主題のより良好な理解を提供す
るために提供される。これらの実施例は、記載された主題を限定すると解釈されるべきで
ない。本明細書に記載された実施例及び実施形態は例示のみを目的とするものであり、そ
れらを考慮した種々の改変又は変更は、当業者に明らかであり、また、本発明の真の範囲
内に含まれ、かつ本発明の真の範囲から逸脱することなくなされ得ることが理解される。
実施例１：抗原
組み換えＧＰＲＣ５Ｄ抗原の産生が困難であることから、標準法を使用して、ＧＰＲＣ
５Ｄ［ヒト（配列番号：２２）、カニクイザル（配列番号：２３）、マウス（配列番号：
２４）］を示す形質転換細胞株を作成して抗体生成及び特性評価試験の際に全細胞抗原（
whole cell antigens）として使用した（表４）。
Figure 0007469432000004
実施例２：ファージディスプレイ法を用いたＧＰＲＣ５Ｄ抗体の生成
２つの別個のアプローチは、ファージ：標準的な細胞パニング（負の選択）及びＦＡＣ
Ｓによる細胞ファージパニング（競合的な選択）によるＧＰＲＣ５Ｄ抗体の生成によった
。
標準的な細胞ファージパニング（負の選択）：
インハウスの新規ファージライブラリについては詳細に記載されている（Ｓｈｉ ｅｔ
ａｌ（２０１０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３９７：３８５～３９６；国際公開第０９／
０８５４６２号）。これらのライブラリは、ＣＤＲ－Ｈ３に高い多様性を有するように設
計された３つのヒトＶＨ生殖系列遺伝子（ＩＧＨＶ１－６９、３－２３、５－５１）及び
４つのヒトＶＬ生殖系列遺伝子（Ａ２７、Ｂ３、Ｌ６、Ｏ１２）で構築されたものである
。ファージコートタンパク質ｐＩＸに対するＦａｂ多様体を示す３つの新規ファージライ
ブラリ（ＤＮＰ００００４－１６９ＨＣ／ＬＣ ｍｉｘ、ＤＮＰ００００５－３２３ＨＣ
／ＬＣ ｍｉｘ、及びＤＮＰ００００６－５５１ＨＣ／ＬＣ ｍｉｘ）を、ラウンド１、
３、５並びにラウンド２及び４でＧＰＲＣ５Ｄ発現ＨＥＫ２９３ Ｇ５安定細胞（標的細
胞）に対しパニングした。ラウンド前には増殖させたＦａｂ－ｐＩＸファージをＨＥＫ２
９３バックグラウンド細胞に適用した（負の選択）（表５を参照）。終夜増殖させるため
、標的細胞に結合したラウンド１の新規Ｆａｂ ｐＩＸファージを回収した。ラウンド１
で選択されたファージをラウンド２のためバックグラウンド細胞に適用し、負に選択され
たファージを終夜増殖させるのに備え未結合のＦａｂ－ｐＩＸファージを回収した。ラウ
ンド３及び４では、他の正及び負のセットのパニングラウンドを実施した。最終ラウンド
は、直前のラウンドで負に選択され増殖させたファージを２つのパニング群に分割して実
施した。一方の群は標的細胞のためのサンプルとし、他方の群はバックグラウンド細胞の
パニングのためのサンプルとした。
Figure 0007469432000005
標準セルファージパンニング（バックグラウンドの選択）：
前述の標準的な細胞パニング手順で実施したものと同様の環境及びインキュベート時間
にて、Ｆａｂ－ｐＩＸファージディスプレイライブラリをＨＥＫ２９３細胞に添加した（
表６）。３ラウンド後、ＨＥＫ２９３結合Ｆａｂ－ｐＩＸファージに対応するＤＮＡを使
用して、ＮＧＳのためＰＣＲ増幅産物を産生した。これらのＮＧＳの結果は、有望な標的
特異的なＦａｂ候補を識別するのを助けるソフトウェアＮＧＳ２．０での更なるダイナミ
ックなサブトラクティブ解析に使用される。
Figure 0007469432000006
ＦＡＣＳによる細胞ファージパニング（競合的な選択）
標的細胞とバックグラウンド細胞との混合物に、Ｆａｂ ｐＩＸファージを同時に適用
して３ラウンドのパニングを行った（表７）。ラウンド１及び２については、ＧＦＰシグ
ナルを使用して、Ｆａｂ－ｐＩＸファージが結合した標的細胞を選別した。選別された細
胞から、結合したＦａｂ－ｐＩＸファージを捕捉し、酸による細胞溶解を行った後で、大
腸菌を感染させた。ラウンド２で増幅させたＦａｂ ｐＩＸファージ及び細胞混合物を、
最終ラウンドでＧＦＰ標的細胞についてゲート化された集団及び非ＧＦＰバックグラウン
ド細胞についてゲート化された集団の２集団に選別した。細胞集団の両方に対するＦａｂ
－ｐＩＸファージの結合は、酸による溶解及び大腸菌の感染により捕捉した。
Figure 0007469432000007
ファージパニングの次世代シーケンシング（ＮＧＳ）
最終ラウンドのパニングサンプル６つにグルコース抑制下での終夜増殖を実施した。ｍ
ｉｎｉ－ｐｒｅｐ ＤＮＡ（Ｑｉａｇｅｎ ＱＩＡｓｐｉｎ ＤＮＡキット）を用意する
のにこれらの培養物を使用した。６つのＤＮＡサンプルをＰＣＲのテンプレートとして使
用して、ＨＣＤＲ１～ＨＣＤＲ３から測定される増幅産物を生成した。６つの増幅産物を
ゲル精製し、ｋｅｅｐｉｎｇ ｖｅｒｓｉｏｎ ２．１によりプールし、標準的な細胞パ
ニングのため３．０を分離し、ＦＡＣＳによる細胞パニングのため完全にプールした。こ
れらのプールされ、ゲル精製された増幅産物を、Ｇｅｎｅｗｉｚ ＮＧＳサービスに提出
し、ＭｉＳｅｑ １×３００法により加工した。ファイルはＧｅｎｅｗｉｚにより送付さ
れ、ローカルサーバにアップロードされた（ｎａｓ２．０）。このサーバでは、ＮＧＳ２
．０ソフトウェアアプリケーションを使用して、配列ファイルをロード、読み込み、及び
解析した。ＩｇＧの変換には、コピー数（＞５０）と、標的細胞（＋）配列のバックグラ
ウンド細胞（－）配列に対する比率（＞５：１の比率）をもとに上位８８の配列を選択し
た。重鎖可変配列のみがＮＧＳにより決定されることから、完全な重鎖コンストラクトは
電子的に適切なフレームワークへと構築する必要があった。更に、重鎖配列のみが判明し
ていることから、各候補を４つの親軽鎖（Ａ２７、Ｂ３、Ｌ６、Ｏ１２）と対形成させた
。候補の最終的な変換は、ヒトＩｇＧ４ＰＡＡとして行われる。
ＥＬＩＳＡスクリーン及び標準シーケンシング
ＮＧＳに用いたものと同一のＤＮＡプレップに、制限酵素による消化と、セルフライゲ
ーションを実施して、遺伝子ｐＩ×を切除し、可溶性Ｆａｂの発現を可能にした。３つの
パニングサンプルのそれぞれについて選別した９２のコロニーをＦａｂ発現についてＥＬ
ＩＳＡにより評価し、サンガー法により重鎖及び軽鎖の両方を配列決定した。ＬＣＤＲの
多様な配列について最終候補を哺乳動物発現プラスミドにクローン化した。
実施例４：ファージディスプレイ法により得られたＧＰＲＣ５Ｄ抗体の初期特性評価
ＧＰＲＣ５Ｄ結合：
上記のとおり、ヒトＧＰＲＣ５Ｄ細胞を抗原として使用して、全細胞ファージパニング
を完了した。ＮＧＳ分析により、各候補は重鎖配列のみが判明していた。結果として、各
重鎖を、４つの親軽鎖（Ａ２７、Ｂ３、Ｌ６、Ｏ１２）と対形成させ、ＮＧＳにより同定
された８７のＨｃ配列から３４８のｍＡｂを得た。ＦＡＣＳを使用して、これらのｍＡｂ
をカニクイザルＧＰＲＣ５Ｄに対する結合についてまずは評価した。カニクイザルＧＰＲ
Ｃ５Ｄ細胞株がヒトＧＰＲＣ５Ｄ細胞株の発現レベルよりも高い発現レベルを有したこと
から、有望な結合シグナルを最大化する初期スクリーニングを行うため、カニクイザルＧ
ＰＲＣ５Ｄ細胞株を選択した。簡潔に、タンパク質濃度を１μｇ／ｍＬに正規化してＦＡ
ＣＳスクリーニングを実施し、１ウェルあたり１００μＬのタンパク質を２００，０００
個の細胞と混合した。ｍＡｂを細胞と共に４℃で１時間インキュベートした。次に、細胞
をＰＢＳ及び０．２％のＦＢＳで３回洗浄した。次に、ＰＥを連結した抗ヒト二次ｍＡｂ
（Ｊａｃｋｓｏｎカタログ番号７０９－１１６－１４９）を検出試薬として添加した。細
胞及び二次抗体を４℃で１時間インキュベートした。次に、細胞をＰＢＳ及び０．２％の
ＦＢＳで３回洗浄した。ＰＢＳ及び０．２％のＦＢＳを用い、この細胞を再度洗浄した後
、ＦＡＣＳアレイで解析した。
カニクイザルＧＰＲＣ５Ｄに対する結合について、１５のｍＡｂでは１００，０００超
のＭＦＩ、２３のｍＡｂでは１００，０００未満１０，０００超のＭＦＩ、６３のｍＡｂ
では１０，０００未満１０００超のＭＦＩといった多数のヒットが観察された（表８）。
結合親和性が最も高かった４０のｍＡｂを、カニクイザルＧＰＣＲ５Ｄ細胞に対する反
復結合試験と、ヒトＧＰＲＣ５Ｄ発現細胞に対するＦＡＣＳによる結合評価とから構成さ
れる、更なる特性評価のために選択した（表９）。これらのデータを解析して、精製及び
ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体の生成のため１７のｍＡｂを選択した（ハイライト
を付した）。精製用ｍＡｂの選択及びＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体の生成に使用
される因子としては、ヒトＧＰＲＣ５Ｄに対する結合特異性、カニクイザルＧＰＲＣ５Ｄ
に対する交差反応性、及びＨｃ配列多様性が挙げられる。例えば、ＧＣ５Ｈ３６を３つの
別個の軽鎖と対形成させ、結合について解析した（ＧＣ５Ｂ１６２、ＧＣ５Ｂ１６３、Ｇ
Ｃ５Ｂ１６４）。ＧＣ５Ｂ１６４は、そのｍＡｂが、ヒトＧＰＲＣ５Ｄに対してＧＣ５Ｂ
１６２又はＧＣ５Ｂ１６３より高いＭＦＩを有することが観察されたので、ＧＣ５Ｂ１６
４のみで解析を進めた。
選択した各ｍＡｂの、ヒトＧＰＲＣ５Ｄ発現ＨＥＫ２９３細胞及び遺伝子導入していな
いＨＥＫ２９３細胞に対する濃度依存的結合プロファイルを、ＦＡＣＳを使用して求めた
（図１）。全てのｍＡｂについて、ヒトＧＰＲＣ５Ｄに対し用量依存的な様式で結合が観
察された。３つのｍＡｂ、ＧＣ５Ｂ３６、ＧＣ５Ｂ１６８、及びＧＣ５Ｂ２０５は、遺伝
子導入していない（ＧＰＲＣ５Ｄ ｎｕｌｌ）ＨＥＫ２９３細胞にも結合することが観察
されたため、この細胞との非特異的な相互作用を理由として優先順位を下げた。
抗ＣＤ３アームＣＤ３Ｂ２１９と、抗ＲＳＶ ｎｕｌｌアームＢ２３Ｍ４６と、を有す
る二重特異性抗体の生成には、残りの１４のｍＡｂを選択した（表１０）。
二重特異性抗体のうちＧＣＤＢ３８は、組み換えの間に沈殿し、別の抗体のＧＣＤＢ３
６は１０％超の凝集体を含有した。全ての他の二重特異性抗体は、標準的なリリース基準
に合格した。ｎｕｌｌアーム二重特異性抗体を、ヒトＧＰＲＣ５Ｄ発現ＨＥＫ２９３細胞
に対する濃度依存的結合について解析した（図２）。
全ての二重特異性抗体は、用量依存的な様式で結合することが観察された。ＧＣ５Ｂ３
２０は、二価のｍＡｂ及び一価の二重特異性抗体間の結合差を明らかにするための結合比
較分子として含めた。ＧＣＤＢ４４は、抗ＣＤ３二重特異性抗体及び抗ＲＳＶ ｎｕｌｌ
アームｍＡｂ間の結合差を明らかにするための結合比較分子として含めた。ｍＡｂのＧＣ
５Ｂ３２０を二重特異性抗体ＧＣＤＢ３０及びＧＣＤＢ４４と比較すると、見かけ上の結
合親和性に予想される低下が観察された。また、ＧＣＤＢ４４（抗ＣＤ３二重特異性Ａｂ
）は、抗ヒトＧＰＲＣ５Ｄ細胞に対する結合親和性が、ＧＣＤＢ３０（抗ＲＳＶ ｎｕｌ
ｌアーム二重特異性Ａｂ）に比べてわずかに高いことが観察され、これにより、抗ＣＤ３
アームは、この細胞株に対する結合に正の影響を与えることが実証された。
ＧＰＲＣ５Ｄを内因的に発現するＭＭ１Ｒ細胞及びＨ９２９細胞に対する結合について
、二重特異性抗体のパネルもプロファイルした（図３）。ＦＡＣＳを使用して、二重特異
性抗体のＭＭ１Ｒ及びＨ９２９細胞に対する結合プロファイルを、過剰発現させたヒトＧ
ＰＣＲ５Ｄ ＨＥＫ２９３細胞及び遺伝子導入していないＨＥＫ２９３細胞の場合と比較
した。二重特異性抗体は、ＭＭ１Ｒ細胞及びＨ９２９細胞で内因的に発現し、ある親和性
の範囲でＧＰＲＣ５Ｄに結合することが観察された。ＭＭ１Ｒ細胞又はＨ９２９細胞のい
ずれかよりも受容体密度がかなり高い、過剰発現させた安定な細胞株であるヒトＧＰＲＣ
５Ｄ ＨＥＫ細胞において最も高い結合が観察された。Ｈ９２９及びＭＭ１Ｒ細胞への結
合親和性が低いことが観察されたことから、ＧＣＤＢ３７、ＧＣＤＢ３８、ＧＣＤＢ３９
及びＧＣＤＢ４１の解析は先に進めなかった。
インビトロでのＴ細胞依存性細胞傷害
次に、Ｈ９２９及びＭＭ１Ｒ標的細胞を使用して、Ｔ細胞介在性細胞傷害アッセイによ
り、二重特異性抗体のパネルを力価について評価した（図４Ａ及びＢ、表１１）。簡潔に
、標的細胞（Ｈ９２９、ＭＭ１．Ｒ、ＯＰＭ２、ＬＰ－１及びＤａｕｄｉ又はＨＥＫ親及
びＨＥＫ＋ＧＰＲＣ５Ｄ細胞）を計数し、１０7個の細胞を１３５０ｒｐｍで３分間遠心
分離し、細胞ペレットを１ｍＬのＣＦＳＥ希釈液（ＣｅｌｌＴｒａｃｅ ＣＦＳＥ増殖染
色液を１８μＬの無菌ＤＭＳＯで再構成し、この溶液１μＬを１０ｍＬの無菌ＰＢＳに希
釈したもの）に再懸濁し、室温、暗所で８分間インキュベートした。インキュベート後、
１ｍＬのＨＩ ＦＢＳを細胞懸濁液に添加して、余剰のＣＦＳＥを反応停止させた。細胞
を、１０％のＦＢＳを添加したＲＰＭＩ－１６４０で２回洗浄した。１０ｍＬのＲＰＭＩ
で再構成した後、細胞を計数し、細胞活性をスプレッドシートで再コード化した。細胞を
２．２×１０5個／ｍＬに希釈し、使用までの間３７℃でインキュベートした。
健常なドナー由来のＰａｎ Ｔ細胞を３７℃の水浴で解凍し、次に細胞を４℃にて３分
間１３５０ｒｐｍで遠心分離した。上清を廃棄し、１．１×１０6個／ｍＬの濃度で培養
培地で再構成した。２×１０5個の標的細胞を９６ウェルＵ底プレートのウェルに添加し
た後、Ｆｃ阻害剤を添加した（最終濃度２ｍｇ／ｍＬ）。全ての細胞株を室温で１０分間
インキュベートし、Ｆｃ受容体活性をブロックした。１×１０5個のＴ細胞をウェルに添
加した（エフェクター：標的比５：１）。標的細胞及びＴ細胞を混合した後、２０μＬの
ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性Ａｂ希釈物を各ウェルに添加した。ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ
３二重特異性抗体をＰＢＳで８００μｇ／ｍＬ（１０×）に希釈した。力価測定は、９６
ウェルＵ底プレートでＰＢＳに４倍で段階希釈して準備した。最後のカラムはＰＢＳのみ
のままとした（溶媒対照）。プレートを、５％のＣＯ2下、３７℃にて４８時間インキュ
ベートした。
２日（４８時間）後、プレートを遠心分離し、サイトカイン放出アッセイのため、１０
０μＬの上清を－８０℃で保管した。細胞を２００μＬのＰＢＳで洗浄し、室温で２０分
間、５０μＬの近赤外生／死染色（１：２００希釈）及び抗ＣＤ２５ ＰＥ抗体（１：５
０希釈）でインキュベートする。次に、細胞を２００μＬのＦＡＣＳ緩衝液で１回洗浄し
、最終的に１５０μＬのＦＡＣＳ緩衝液で再構成した。ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ及びＦ
ｌｏｗＪｏ ７．６を使用して、標的細胞傷害（標的％）及びＴ細胞活性化ＣＤ２５＋（
生Ｔ細胞率％）について細胞を解析した。データのグラフ化及びフィッティングは、最小
二乗法を用い、勾配が可変の非線形回帰（４パラメータ）の関数を使用してＧｒａｐｈＰ
ａｄ Ｐｒｉｓｍ ６で実施した。
観察した力価範囲では、全ての二重特異性抗体は、Ｔ細胞介在性のＨ９２９細胞の殺傷
を活性化した（表１１）。両細胞株について同様の順位が観察された。しかしながら、Ｍ
Ｍ１Ｒ細胞で観察されたＥＣ50の方が低かった。興味深いことに、結合親和性は、Ｔ細胞
介在性細胞傷害アッセイにおいて、必ずしも力価と相関しなかった。例えば、ＧＣＤＢ４
４は、親和性結合の最も高い二重特異性抗体であったものの、細胞傷害アッセイにおいて
は力価が最も小さかった。一方ＧＣＤＢ４３では、わずかに低いものの同様にして、細胞
傷害アッセイにおいて結合親和性が最も強力であった。
次にカニクイザルＧＰＲＣ５Ｄについて機能の交差反応性を評価するため、カニクイザ
ルＧＰＲＣ５Ｄ ＨＥＫ２９３細胞を使用して、Ｔ細胞介在性細胞傷害及びＴ細胞活性化
について、二重特異性抗体を評価した（図５Ａ及びＢ）。このアッセイでは全ての二重特
異性抗体には活性があったものの、力価の範囲はカニクイザルＧＰＲＣ５Ｄ＋発現細胞に
対して観察された。
インビボ活性
次いで、ベンチマークとなるインビボ試験を実施し、これらのＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二
重特異性抗体のインビボ活性を明らかにした。ＧＣＤＢ３２及びＧＣＤＢ３５（図５Ａ及
びＢ）を選択して、Ｈ９２９予防的（prophylactic）腫瘍モデルで試験した。Ｈ９２９細
胞をＮＳＧマウスに移植して一週間後に、ヒトＰＢＭＣを注入した。この二重特異性抗体
による処置は、Ｈ９２９細胞の移植と同時に開始し、用量１０μｇ、１μｇ、及び０．１
μｇ／個体で２又は３日（ｑ２ｄ又はｑ３ｄ）おきに継続し、合計５群とした。各群１０
匹のマウスを使用し、溶媒対照としてはＰＢＳを含めた。１１日目に処置を停止し、２５
日目（図６Ａ及びＢ）又は２６日目（図１２Ａ～Ｄ）に試験を終了した。用量１μｇ／個
体で約８０％の腫瘍成長阻害を示したＧＣＤＢ３５を除き、この予防的モデルで試験した
全てのＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３抗体は、用量１０及び１μｇ／個体で１００％の腫瘍成長阻
害を示した。用量を１／１０程度（０．１μｇ／個体）に減らすと、これらの二重特異性
抗体は、１０～８０％の範囲の様々な有効度で腫瘍成長阻害活性を示した。
Ｆｃブロッカーの存在下でのインビトロＴ細胞依存性細胞傷害
ＧＰＲＣ５Ｄ標的化アームの特異性を明らかにするために、次に、Ｆｃ阻害剤の存在下
での、Ｔ細胞再指向による細胞傷害アッセイにおいて、ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性
抗体のパネルを評価した。二重特異性抗体の標的細胞は、インビトロアッセイにおいて二
重特異性抗体のＦｃ部分と相互作用し得るＦｃγ受容体を発現しているＢ細胞であること
から、この試験は特異性を明らかにするために重要であった。Ｔ細胞介在性細胞傷害アッ
セイでは、多数の二重特異性抗体について力価のシフトが観察された。最も大きなシフト
はＧＣＤＢ４０及びＧＣＤＢ３４で観察された（図７Ａ～７Ｂ）。
次に、４つの最も強力な二重特異性抗体（ＧＣＤＢ３２、ＧＣＤＢ３５、ＧＣＤＢ４０
、及びＧＣＤＢ４３）及びＦｃγ受容体間の結合相互作用の直接測定を完了した（図８Ａ
～８Ｄ）。Ｆｃγ受容体及び上記の二重特異性抗体のそれぞれについて、Ａｌｐｈａ Ｓ
ｃｒｅｅｎ解析を１ラウンド実施した。全てのサンプルは２連でアッセイした。ＦｃγＲ
Ｉでは、４つの二重特異性抗体はＢ２１Ｍ ｈＩｇＧ４ ＰＡＡ様に挙動する。すなわち
、合致するアイソタイプ対照以外に競合はない。ＦｃγＲＩＩＩａに対し、ｈＩｇＧ１野
生型対照及び４つの二重特異性抗体間でも同様の差異が観察された。ＧＣＤ４３は最もＩ
ｇＧ４ＰＡＡ様のアイソタイプ対照であり、他の二重特異性抗体は、ＦｃγＲＩＩＩａに
対しわずかに高い親和性を有した。ＦｃγＲＩＩａ及びＦｃγＲＩＩｂの両方において、
４つの二重特異性抗体が以下の順で競合する：ＧＣＤＢ４０＞ＧＣＤＢ３２＞ＧＣＤＢ４
３＞ＧＣＤＢ３５。ＧＣＤＢ４０は、最も競合的であり、すなわちＦｃγＲＩＩａ及びＦ
ｃγＲＩＩｂに対し最も高親和性で結合した。実際のところ、ＧＣＤＢ４０は、ＦｃγＲ
ＩＩａ及びＦｃγＲＩＩｂに対しｈＩｇＧ１野生型と同程度に競合し、Ｆｃ阻害剤を含め
たときにＴ細胞介在性細胞傷害アッセイにおいて観察される力価のシフトが裏付けられる
。ＦｃγＲＩＩａ及びＦｃγＲＩＩｂに予期せぬ相互作用があったことから、これ以上Ｇ
ＣＤＢ４０についての解析は行わなかった。
競合的結合アッセイ
ヒトＧＰＣＲ５Ｄ細胞に対する競合的結合について、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｍＡｂを互いに
評価した。簡潔に、５０，０００個／ウェルで５０μＬの培地に細胞を播種し、３７℃で
９０分間定着させた。次に、３％のＢＳＡを使用して室温で１時間ウェルをブロックした
。ｍＡｂをルテニウム（ＩＩ）トリス－ビピリジン、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（Ｒ
ｕ－標識）で標識し、標準の手順を踏んだ。別個の９６ウェルプレートにおいて、５μＭ
の競合的ｍＡｂを５０ｎＭのＲｕ標識ｍＡｂとインキュベートした。阻害溶液を細胞プレ
ートから除去し、２５μＬのｍＡｂ溶液を添加した。プレートを振盪しながら室温で１時
間インキュベートした。プレートをＰＢＳで３回洗浄した後、１５０μＬのＭＳＤリード
緩衝液（界面活性剤非添加）を添加し、ＭＳＤプレートリーダーを使用して、ルテニウム
標識した抗体の結合を検出した。
全てのｍＡｂは同じ競合群に属する。但し、ＧＣ５Ｂ４２０及びＧＣ５Ｂ４２１は、Ｇ
Ｃ５Ｂ８１、ＧＣ５Ｂ２８５、及び／又はＧＣ５Ｂ３３２とは完全には競合しなかった（
阻害率７０％未満）（表１２）。ｍＡｂの大きさと比べてＧＰＲＣ５Ｄの細胞外ドメイン
の大きさが小さいことから、２つのｍＡｂがＧＰＲＣ５Ｄに対して同時に結合するのは立
体的に不可能であるものと仮定される。
Figure 0007469432000014
実施例４：ハイブリドーマ法を用いたＧＰＲＣ５Ｄ抗体の生成
０、１０、及び２０日目に、完全長のヒトＧＰＲＣ５Ｄを発現しているｐＣＭＶ６－ｎ
ｅｏ（ＣＭＶプロモータ）プラスミドＤＮＡにより、３匹のＢａｌｂ／ｃマウスを尾の付
け根から経皮的に免疫した。最後に５９日目に、マウスには、完全長のヒトＧＰＲＣ５Ｄ
を過剰発現しているラット好塩基球性白血病（ＲＢＬ）細胞を腹腔及び静脈内注射し、免
疫した。６３日目にリンパ節及び脾臓を摘出し、Ｂ細胞を濃縮し、この細胞を使用して、
約３５００のｍＡｂを分泌するハイブリドーマを作成した。
実施例５：ハイブリドーマ法により得られたＧＰＲＣ５Ｄ抗体の初回特性評価
ＧＰＲＣ５Ｄ結合
ＲＢＬ及びヒトＧＰＲＣ５Ｄ発現ＲＢＬ細胞の両方に対する結合についてＦＡＣＳを使
用してハイブリドーマをスクリーニングした。各ｍＡｂに関し、バックグラウンドについ
て調整した、ＧＰＲＣ５Ｄ＿ＲＢＬ細胞に対する結合についてのＭＦＩの、遺伝子導入し
ていないＲＢＬ細胞に対する結合についてのＭＦＩに対する比を計算した。結合比３超の
全てのサンプルは有望であるものとみなした。３超の比を有していた９９のハイブリドー
マに対しｖ領域のクローニングを行った。３１のｍＡｂ配列を同定し、合成し、発現させ
、精製した。３１のｍＡｂのうち２つはＲＢＬ＿ＧＰＲＣ５Ｄ細胞に対しバックグラウン
ドを超える結合を示した（図９Ａ及び８Ｂ）。発現、精製、及び抗ＣＤ３アームＣＤ３Ｂ
２１９を有する二重特異性抗体の生成には、ＧＣＤＢ３９０及びＧＣＤＢ３９６を選択し
、それぞれ二重特異性抗体ＧＣＤＢ４６及びＧＣＤＢ４７を生成した。
Ｔ細胞依存性細胞傷害
Ｔ細胞介在性細胞傷害アッセイでＧＣＤＢ４６及びＧＣＤＢ４７を評価した（図１０Ａ
及び図１０Ｂ）。いずれの二重特異性抗体も強力であることが観察され、それぞれＥＣ50
は０．６７及び０．１ｎＭであったと報告された。これらのデータに基づいて、いずれの
ｍＡｂも３種類のファージに由来するｍＡｂによるリード最適化に進めた。
実施例６：ヒット評価、選択、及び最適化
リード最適化のため、表１３に要約した結合、機能、交差反応性、及び選択性について
のデータに基づき５つのＧＰＲＣ５Ｄ二重特異性抗体（ＧＣＤＢ３２、ＧＣＤＢ４３、Ｇ
ＣＤＢ３５、ＧＣＤＢ４６、ＧＣＤＢ４７）を選択した。
表１４に説明するとおり、リード最適化は、ＧＣＤＢ３２（ＧＣ５Ｂ８１親ｍＡｂ）、
ＧＣＤＢ４３（ＧＣ５Ｂ２８５親ｍＡｂ）及びＧＣＤＢ３５（ＧＣ５Ｂ１６４親ｍＡｂ）
に可能性のある翻訳後修飾（ＰＴＭ）配列のリスクに対処することを目的とした。
Figure 0007469432000016
ＧＣ５Ｂ８１についてアッセイした全てのＰＴＭ多様体は、結合親和性が実質的に低下
しており、この残基（ＨＣ Ｗ１０２）のパラトープに対する重要性を実証する（表１５
）。
Figure 0007469432000017
結合試験により、ヒトＧＰＲＣ５Ｄに対する結合を保持していたＧＣ５Ｂ２８５及びＧ
Ｃ５Ｂ１６４の両方について、変異の数を特定した（表１６及び１７）。
Figure 0007469432000020
Figure 0007469432000021
この結合データに基づいて、選択されたｍＡｂｓをＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗
体として生成し、Ｈ９２９細胞のＴ細胞介在性細胞傷害について評価した（表１８）。
Ｔ細胞介在性細胞傷害アッセイにおいて観察された力価の範囲は、観察された結合親和
性によって必ずしも予測されるものではなかった。例えば、同様の親和性でヒトＧＰＲＣ
５Ｄに結合したＧＣ５Ｂ４６５及びＧＣ５Ｂ４６３は、配列中２つのアミノ酸配列のみ（
表１７）が異なり、ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性Ａｂとして、力価において１２．５
倍の差を有することが観察された（表１８）。機能データに基づき、ＧＣ５Ｂ４６５及び
ＧＣ５Ｂ４８３を、ＧＣ５Ｂ２８５（ＣＤ３二重特異性なものとしてＧＣＤＢ４３）及び
ＧＣ５Ｂ１６４（ＣＤ３二重特異性なものとしてＧＣＤＢ３５）について最適化された配
列として選択した。
また、このマウスハイブリドーマ由来ＧＰＣＲ５Ｄ ｍＡｂについて、ヒトフレームワ
ークの適合も完了した（それぞれＣＤ３二重特異性なものとしてＧＣ５Ｂ３９０及びＧＣ
５Ｂ３９６、又はＧＣＤＢ４６及び４７）。結合試験により、ＧＣ５Ｂ３９６用の多数の
フレームワークと、ヒトＧＰＲＣ５Ｄに対する結合を保持したＧＣ５Ｂ３９０用のフレー
ムワークとを特定した（表１９）。
Figure 0007469432000023
結合データに基づいて、ＣＤ３二重特異性抗体としていくつかの抗ＧＰＣＲ５Ｄ ｍＡ
ｂを生成し、Ｈ９２９細胞のＴ細胞介在性細胞傷害について評価した（表１８）。機能解
析により、ＧＣＤＢ６３、ＧＣＤＢ６７、及びＧＣＤＢ６９を強力な完全ヒト化ＧＰＲＣ
５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体として同定した。これらのデータに基づいて、対応する抗Ｇ
ＰＲＣ５Ｄ ｍＡｂの、ＧＣ５Ｂ５１５、ＧＣ５Ｂ５３２、及びＧＣ５Ｂ５４０を、ＧＣ
５Ｂ３９０及びＧＣ５Ｂ３９１の完全なヒト化配列として選択する。
ＧＣ５Ｂ５１５、ＧＣ５Ｂ５３２、及びＧＣＤＢ５４０の潜在的な翻訳後修飾による配
列リスクに対処することを目的として、完全ヒト化配列の更なるリード最適化を完了した
。重鎖配列にＧ５６Ｓ変異を生じさせて、ＧＣ５Ｂ５１５に潜在的な脱アミドリスクを除
く（表２０）。
Figure 0007469432000024
ＧＣ５Ｂ５３２及びＧＣ５Ｂ５４０の重鎖は、潜在的な異性化リスク及び酸化リスクの
両方を含有する。このリスクを改善するようＭ６４Ｋ及びＧ９９Ａの変異を作成した（表
２０）。試験した多様体のうち、Ｇ９９Ａ変異を有するものは全て結合親和性が大幅に低
下していたのに対し、Ｍ６４Ｋ及びＧ５６Ａ多様体は影響を受けなかった。結合データに
基づき、ＧＣ５Ｂ５９６のみを機能評価に進め、Ｔ細胞介在性細胞傷害アッセイにおいて
、ＣＤ３二重特異性（ＧＣＤＢ７２）なものとして力価を実証した。
したがって、更なる特性評価には、４つのＧＰＲＣ５Ｄ二重特異性ｍＡｂを選択した：
ＧＣＤＢ３２、ＧＣＤＢ５３、ＧＣＤＢ６１、及びＧＣＤＢ７２。以下、表２１及び２２
には、二重特異性分子の生成に使用したＧＰＲＣ５Ｄ ｍＡｂのＣＤＲ配列と、重鎖及び
軽鎖配列とを示す。
実施例７：ＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａの二重特異性フォーマット
におけるＧＰＲＣ５Ｄ及びＣＤ３抗体の調製
４つの単一特異的ＧＰＲＣ５Ｄ抗体（表２１を参照のこと）を、Ｆｃ置換Ｓ２２８Ｐ、
Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ、又はＳ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｆ４０５Ｌ、
及びＲ４０９Ｋ（ＣＤ３アーム）（ＥＵインデックスに従ったナンバリング）を有するＩ
ｇＧ４として発現させた。配列番号２５の重鎖及び配列番号２６の軽鎖を有するＶＨ及び
ＶＬ領域と、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｆ４０５Ｌ、及びＲ４０９Ｋ置換を
有するＩｇＧ４定常領域とを含む単一特異的抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ２１９も生成した。
プロテインＡカラム（ＨｉＴｒａｐ ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅカラム）を使用す
る標準的な方法を使用して、単一特異的抗体を精製した。溶出後、プールを、Ｄ－ＰＢＳ
、ｐＨ７．２の中に透析した。
二重特異性ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３抗体を、（国際公開第２０１１／１３１７４６号に記
載されたような）インビトロでのＦａｂアーム交換において、単一特異的ＣＤ３ ｍＡｂ
と単一特異的ＧＰＲＣ５Ｄ ｍＡｂとを組み合わせることにより生成した。簡潔に、ＰＢ
Ｓ、ｐＨ７～７．４中の約１～２０ｍｇ／ｍＬの抗ＧＰＲＣ５Ｄ／抗ＣＤ３抗体（モル比
１．０８：１）と、７５ｍＭの２－メルカプトエタノールアミン（２－ＭＥＡ）とを互い
に混合し、２５～３７℃において２～６時間インキュベートし、続けて、透析、透析ろ過
、接線流ろ過、及び／又はスピン細胞ろ過により標準的な方法を使用して２－ＭＥＡを除
去した。
ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性Ａｂの重鎖及び軽鎖を以下の表２３に示す。
Figure 0007469432000027
実施例８：ＧＣＤＢ３２、ＧＣＤＢ５３、ＧＣＤＢ６１、及びＧＣＤＢ７２の機能の特
性評価
ＧＣＤＢ３２、ＧＣＤＢ５３、ＧＣＤＢ６１、及びＧＣＤＢ７２をマウスＧＰＲＣ５Ｄ
に対する結合について評価した（表２４）。観察された結合親和性の範囲では、４つの二
重特異性抗体の全てが、マウスＧＰＲＣ５Ｄに対し結合していた。
Figure 0007469432000028
ヒト及びカニクイザルＧＰＲＣ５Ｄを過剰発現させた細胞株にＴ細胞再指向による細胞
傷害アッセイを行い、カニクイザルＧＰＲＣ５Ｄとの交差反応性も評価した（表２５）。
ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒト及びカニクイザルＧＰＲＣ５Ｄ（ＧＣＤＢ
３２）に対し等しい効力を有していたのに対し、試験した他の二重特異性抗体は、カニク
イザルＧＰＲＣ５Ｄに対し誘導される細胞傷害性の効力が、ヒトＧＰＲＣ５Ｄに対する場
合よりも劣っていた。
Figure 0007469432000029
追加の特性評価は、インビトロでの結合（図１１Ａ～図１１Ｅ）と力価（表２６）とを
明らかにすることを目的とした。
Figure 0007469432000030
ＧＣＤＢ６１は結合が最も強く、ＧＣＤＢ７２及びＧＣＤＢ３２は結合が最も弱いとい
う結合親和性範囲が観察されたものの、二重特異性抗体のパネルで、インビトロでの効力
は非常に似通っていた。しかし、順位の解析に基づくと、解析した多様なＢ細胞株の中で
、ＧＣＤＢ７２の効力が最も高かった。患者から誘導されたＭＮＣを使用したエクスビボ
結合及び力価試験でもインビトロアッセイと非常に似通った結果が得られた（表２７並び
に図１５Ａ及び図１５Ｂ）。
Figure 0007469432000031
患者ＭＮＣに対する結合親和性は、ＧＣＤＢ６１が最も高かったのに対し、ＧＣＤＢ７
２及びＧＣＤＢ３２は最も弱い結合分子であった。再度、結合親和性において差が観察さ
れたものの、全ての二重特異性抗体は、Ｔ細胞の再指向による細胞傷害アッセイにおいて
、ナノモル濃度未満（sub-nanomolar）で活性を示した。分子は、インビトロ及びエクス
ビボでの力価については実質的に識別不能であった。しかしながら、インビボのデータで
は差が示された（図１２Ａ～図１２Ｄ）。
Ｈ９２９細胞をＮＳＧマウスに移植して一週間後に、ヒトＰＢＭＣを注入した。この二
重特異性抗体の処置は、Ｈ９２９細胞を移植すると同時に開始し、用量１０μｇ、１μｇ
、及び０．１μｇ／個体で２又は３日おき（ｑ２ｄ又はｑ３ｄ）に、合計５つの処置群で
継続した。各群１０匹のマウスを使用し、溶媒対照としてはＰＢＳを含めた。１１日目に
処置を停止し、２６日目に試験を終了した（図１２Ａ～Ｄ）。この予防的モデルで試験し
たＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性分子は、全て、用量１０及び１μｇ／個体で１００％
の腫瘍成長阻害を示した。最も低い用量の０．１μｇ／個体で差が観察され、ＧＣＤＢ７
２は８０％の腫瘍成長阻害率が観察されたことから、試験した他の二重特異性抗体よりも
優れていることが実証された。
実施例９：ＧＰＲＣ５Ｄ＋ＭＭ１．Ｒ細胞株に対するＧＰＲＣ５Ｄ抗体結合プロファイ
ル
ＦＡＣＳを使用して、ＧＰＲＣ５Ｄ+ヒトＭＭ細胞株（ＭＭ１．Ｒ、ＡＴＣＣ（アメリ
カ培養細胞系統保存機関）から購入）に対するＧＰＲＣ５Ｄ抗体の結合親和性を測定した
。図１３は、全てのリード抗体が、ＧＰＲＣ５Ｄを発現しているＭＭ．１Ｒ細胞に、０．
１０ｎＭ～１３５ｎｍの範囲のＥＣ50値で、用量依存的な様式で結合したことを示す。Ｇ
Ｃ５Ｂ６０２以外の抗体は全て、ＥＣ50値が１２１．７ｎＭであった市販の抗体ＦＡＢ６
３００（Ｒ＆ Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓカタログ番号ＦＡＢ６３００Ａ、クローン番号５７１
９６１）と比較して有意に値が低かった。
様々な濃度のリード抗体でＧＰＲＣ５Ｄ＋ＭＭ１．Ｒ細胞株を６０分間染色し、表面結
合プロファイルを測定した（ｎ＝３）。フィコエリトリン標識したヒトＩｇＧ４Ｆｃ（Ｓ
ｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ，ＨＰ６０２５クローン，カタログ番号９２００－０９
）を、シグナルを捕捉する二次抗体として使用した。結合は、ＦＡＣＳにより求められた
、正規化された幾何平均蛍光強度として表される。データのグラフ化及びフィッティング
は、勾配が可変の非線形回帰（４パラメータ）及び最小二乗法を使用して、ＧｒａｐｈＰ
ａｄ Ｐｒｉｓｍ ６で実施した。
更に、ＧＰＲＣ５Ｄ ｍＡｂ ＧＣ５Ｍ４８１結合プロファイルを、３種類のＧＰＲＣ
５Ｄ+多発性骨髄腫細胞株（ＪＩＭ３、ＯＰＭ－２、及びＭＭ．１Ｒ；ＡＴＣＣから購入
した細胞株）を使用して、市販の抗体と比較して評価した（図１４Ａ）。更に、カニクイ
ザルＧＰＲＣ５Ｄを発現するＤａｕｄｉ細胞を使用して、カニクイザルとの交差反応性に
ついてＧＰＲＣ５Ｄ ｍＡｂ（ＧＣ５Ｍ４８１）を評価したところ、親細胞と比較して強
い結合が示された（図１４Ａ）。また、ＧＰＲＣ５Ｄ＋（ＪＩＭ３，ＯＰＭ－２、及びＭ
Ｍ１．Ｒ）細胞株（図１４Ｂ）を使用して結合ポテンシャルについて評価したときに、５
つのＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体（ＧＣＤＢ３２、ＧＣＤＢ４８、ＧＣＤＢ５３
、ＧＣＤＢ６１、及びＧＣＤＢ７２）は、アイソタイプ対照（点線で灰色に塗られた波形
）と比較してヒストグラム（黒い実線の波形）がシフトしていることから明らかなとおり
、有意に結合を示した。
実施例１０：ＰＢＭＣヒト化ＮＳＧマウスにおけるＭＭ．１Ｓヒト多発性骨髄腫の皮下
異種移植に対するＧＣＤＢ７２の抗腫瘍活性。
ＰＢＭＣヒト化ＮＳＧマウスにおいて、確立されたＭＭ．１Ｓヒト多発性骨髄腫（ＭＭ
）異種移植に対するＧＣＤＢ７２の活性を確認するため、当該インビボ試験を実施した。
試験０日目に、体重及び齢が同様の雌性ＮＳＧマウスの背面後方右側腹部に、ＭＭ．１Ｓ
ヒトＭＭ細胞（１×１０7個／２００μＬのＰＢＳ／個体）を皮下（ｓｃ）移植した。腫
瘍細胞の移植から７日後に、側面尾静脈から１×１０7個のヒトＰＢＭＣ（２００μＬの
ＰＢＳ中）を静脈内投与した。１５日目に平均腫瘍体積が約７２～７８ｍｍ3になってい
た場合に、処置を開始した。各マウスには、０．１μｇ（０．００５ｍｇ／ｋｇ）、１μ
ｇ（０．０５ｍｇ／ｋｇ）、１０μｇ（０．５ｍｇ／ｋｇ）、及び５０μｇ（２．５ｍｇ
／ｋｇ）でＰＢＳ又はＧＣＤＢ７２ ＤｕｏＢｏｄｙ抗体を静脈内（ｉｖ）投与する。Ｎ
ｕｌｌ ＤｕｏＢｏｄｙ対照、ＣＤ３×Ｎｕｌｌ及びＮｕｌｌ×ＧＰＲＣ５Ｄをそれぞれ
１０μｇ／個体で投与した。約３日おき（ｑ３ｄ）に合計７回用量の処置剤を投与した。
２とおりの高用量（１０μｇ及び５０μｇ）のＧＣＤＢ７２で強い抗腫瘍活性が観察され
た。これらの場合、ＭＭ．１Ｓ ｓｃ腫瘍は試験終了時に１００％のマウス（１群あたり
１０／１０）で完全に消失していた（図１６）。また、個体あたり１μｇの用量では、腫
瘍の成長はＰＢＳ処置した腫瘍と比較して有意に６５％（ｐ≦０．０００１）も阻害され
たのに対し、用量０．１μｇではその効果は小さかった（ＴＧＩ＝１９．３％，ｐ＝０．
００２３）。ＣＤ３×Ｎｕｌｌの効果は有効であるとは考えられず（ＴＧＩ＝２８％，ｐ
≦０．０００１）、並びにＮｕｌｌ×ＧＰＲＣ５Ｄの有する効果は、３．１％のＴＧＩ，
ｐ＝０．９９７１という無視できるものであった。３６日目に、１群あたり少なくとも８
０％が生存個体である場合にＴＧＩを確認した。有意な体重減少及び／又は死亡は、３６
日以降にＧＶＨＤによって顕著になりはじめた（図１７）。４３日目には、生存している
マウスは各群６０％以下となっており、試験を終了した。
例１１：ＧＰＲＣ５Ｄ抗体の抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）
ＩｇＧ１ ｍＡｂ同様抗ヒトＧＰＲＣ５Ｄ ｍＡｂのパネルを作成した。更に、実施例
２に記載のとおり、新規抗ヒトＧＰＲＣ５Ｄ ｍＡｂパネルを作成した。以下、表２８及
び表２９には、新規ＧＰＲＣ５Ｄ ｍＡｂのＣＤＲ配列と、重鎖及び軽鎖可変領域の配列
とを示す。これらの新規抗体を使用して、実施例７に記載のとおり二重特異性ＣＤ３分子
を作成し、ＡＤＣＣ活性評価にもＩｇＧ１ ｍＡｂとして組み入れた。
Figure 0007469432000032
Ｈ９２９細胞に対するＡＤＣＣ活性（表３０及び表３１）簡潔に、多発性骨髄腫細胞を
カルセイン－ＡＭで室温で３０分間標識し、２回ＰＢＳで洗浄した後、０．２×１０6個
／ｍＬでＲＰＭＩ＋１０％のＨＩ ＦＢＳに再懸濁した。ＰＢＭＣを解凍し、ＰＢＳで洗
浄した後、３×１０6個／ｍＬでＲＰＭＩ増殖培地に再懸濁した。抗体の存在下で１００
００又は５００００個の標的細胞を１０００００又は２５０００００個のＰＢＭＣと混合
し、３７℃のＣＯ２インキュベーターで３時間インキュベートした。インキュベートプレ
ートを２００ｇで４分間遠心分離した後、１００μＬの上清を新しい９６ウェルプレート
に移し、４８５／５３５ｎＭで蛍光強度を測定した。ＲＦＵ値をプロットして、溶解率を
計算した。
Figure 0007469432000035
２ｐＭ～２７．７ｎＭの範囲で力価範囲を観察した。結合親和性は、ＡＤＣＣアッセイ
における活性を必ずしも予測するものではなかった。例えば、ＧＣ５Ｂ３８２及びＧＣ５
Ｂ３７９はヒトＧＰＲＣ５Ｄ細胞に対して同様の結合親和性を有していたものの、ＡＤＣ
ＣアッセイにおけるＨ９２９細胞に対する細胞傷害については１５倍の差があった。同様
に、ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体の細胞傷害誘導は、ＡＤＣＣアッセイにおいて
ＧＣ５Ｂ３７０及びＧＣ５Ｂ６０２により示される力価の予測因子とはならなかった。Ｃ
Ｄ３二重特異性なものとしてフォーマットした場合、ＧＣ５Ｂ６０２（ＧＣＤＢ６３）は
、ナノモル未満の濃度でＨ９２９細胞に対する力価を有していたのに対し、ＣＤ３二重特
異性なＧＣ５Ｂ３７０（ＧＣＤＢ４１）は本質的に不活性であった。ＩｇＧ１ ｍＡｂと
してフォーマットした場合、ＡＤＣＣアッセイにおいて、同じＶ領域により正反対の観察
結果が得られ、ＧＣ５Ｂ３７０はＧＣ５Ｂ６０２よりも強力である（約１１００倍）こと
が観察された。
Figure 0007469432000036
Figure 0007469432000037
Figure 0007469432000038
Figure 0007469432000039
Figure 0007469432000040
Figure 0007469432000041
Figure 0007469432000042

以下の態様を包含し得る。
［１］ ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントであって、
ａ．配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、配列番号５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｂ．配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｃ．配列番号３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｅ．配列番号６１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号６７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｆ．配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｇ．配列番号２７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号２９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｈ．配列番号２７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号２９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｉ．配列番号６２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号６８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｊ．配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号６９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｋ．配列番号６４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号７０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、
ｌ．配列番号６５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号６８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、又は
ｍ．配列番号６６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号７１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３、を含む、単離された組み換え抗体又はその抗原結合フラグメント。
［２］ 上記［１］に記載の単離された抗体又は抗原結合フラグメントであって、
ａ．配列番号１のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む、前記抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｂ．配列番号２のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む、前記抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｃ．配列番号３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む、前記抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号２０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｄ．配列番号４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１２のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む、前記抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｅ．配列番号６１のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号６７のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７２のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む、前記抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｆ．配列番号２のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号２８のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３０のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む、前記抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｇ．配列番号２７のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号２９のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む、前記抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号２０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｈ．配列番号２７のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号２９のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む、前記抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号２０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｉ．配列番号６２のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号６８のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７４のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む、前記抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号２０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｊ．配列番号６３のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号６９のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７５のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む、前記抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｋ．配列番号６１のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号６７のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７２のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む、前記抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、
ｌ．配列番号６５のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号６８のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７６のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む、前記抗体は、配列番号９５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７９のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含み、又は
ｍ．配列番号６６のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ１、配列番号７１のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７７のアミノ酸配列を有する前記重鎖ＣＤＲ３を含む、前記抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を更に含む、単離された抗体又は抗原結合フラグメント。
［３］ ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合し、かつ配列番号５２、５３、５４、５５、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、又は９１からなる群から選択される重鎖可変（ＶＨ）領域を含む、単離された抗体又はその抗原結合フラグメント。
［４］ 前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号：５６、５７、５８、９２、９３、又は９４からなる群から選択される軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む、上記［３］に記載の抗体。
［５］ 前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号：５２、５３、５４、５５、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、又は９１からなる群から選択されるＶＨ領域と、
配列番号５６、５７、５８、９２、９３、又は９４からなる群から選択されるＶＬ領域と、を含む、上記［３］に記載の抗体。
［６］ 前記ＶＨ鎖領域が、配列番号５６を含むＶＬ鎖領域と対となる配列番号５２、５３、又は８３を含む、上記［５］に記載の抗体。
［７］ 前記ＶＨ鎖領域が、配列番号５７を含むＶＬ鎖領域と対となる配列番号５４、８４、８５、８６、又は９０を含む、上記［５］に記載の抗体。
［８］ 前記ＶＨ鎖領域が、配列番号５８を含むＶＬ鎖領域と対となる配列番号５５又は８８を含む、上記［５］に記載の抗体。
［９］ 前記ＶＨ鎖領域が、配列番号９２を含むＶＬ鎖領域と対となる配列番号８２又は８７を含む、上記［５］に記載の抗体。
［１０］ 前記ＶＨ鎖領域が、配列番号９３を含むＶＬ鎖領域と対となる配列番号８９を含む、上記［５］に記載の抗体。
［１１］ 前記ＶＨ鎖領域が、配列番号９４を含むＶＬ鎖領域と対となる配列番号９１を含む、上記［５］に記載の抗体。
［１２］ 前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号２２のアミノ酸配列を有するポリペプチドに結合する、上記［１］～［１１］のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
［１３］ 前記抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒト抗体又は抗原結合フラグメントである、上記［１］～［１２］のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
［１４］ 前記抗体又は抗原結合フラグメントは、組み換え体である、上記［１］～［１３］のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
［１５］ 前記抗原結合フラグメントは、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ２フラグメント、又は一本鎖抗体である、上記［１］～［１４］のいずれか一項に記載の抗原結合フラグメント。
［１６］ 前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４のアイソタイプである、上記［１］～［１５］のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
［１７］ ＩｇＧ１又はＩｇＧ４のアイソタイプである、上記［１］～［９］のいずれかに記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
［１８］ 前記ＩｇＧ１は、そのＦｃ領域中に、Ｋ４０９Ｒ置換を有する、上記［１７］に記載の抗体。
［１９］ 前記ＩｇＧ１は、そのＦｃ領域中に、Ｆ４０５Ｌ置換を有する、上記［１７］に記載の抗体。
［２０］ 前記ＩｇＧ４は、そのＦｃ領域中に、Ｆ４０５Ｌ置換及びＲ４０９Ｋ置換を有する、上記［２０］に記載の抗体。
［２１］ Ｆｃ領域中に、Ｓ２２８Ｐ置換、Ｌ２３４Ａ置換、及びＬ２３５Ａ置換を更に含む、上記［１６］に記載の抗体。
［２２］ 前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合し、カニクイザルＧＰＲＣ５Ｄと交差反応する、上記［１］～［１４］のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
［２３］ 前記抗体又は抗原結合フラグメントは、約２８ｎＭ未満のＥＣ ５０ でＡＤＣＣをインビトロで誘導する、上記［１７］のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
［２４］ 上記［１］～［１１］のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメントを発現している単離された細胞。
［２５］ 前記細胞は、ハイブリドーマである、上記［２４］に記載の細胞。
［２６］ 前記抗体は、組み換えにより生成される、上記［２４］に記載の細胞。
［２７］ 単離されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体であって、
ａ）第１の重鎖（ＨＣ１）と、
ｂ）第２の重鎖（ＨＣ２）と、
ｃ）第１の軽鎖（ＬＣ１）と、
ｄ）第２の軽鎖（ＬＣ２）と、を含み、
前記ＨＣ１及び前記ＬＣ１は、対を成してＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、前記ＨＣ２及び前記ＬＣ２は、対を成してＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成する、単離されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体、又はそのＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性結合フラグメント。
［２８］ ＨＣ１は、配列番号２５を含み、ＬＣ１は、配列番号２６を含む、上記［２７］に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［２９］ ＨＣ２は、配列番号５２を含み、ＬＣ２は、配列番号５６を含む、上記［２８］に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［３０］ ＨＣ２は、配列番号５３を含み、ＬＣ２は、配列番号５６を含む、上記［２８］に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［３１］ ＨＣ２は、配列番号５４を含み、ＬＣ２は、配列番号５７を含む、上記［２８］に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［３２］ ＨＣ２は、配列番号５５を含み、ＬＣ２は、配列番号５８を含む、上記［２８］に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［３３］ ＨＣ２は、配列番号８２を含み、ＬＣ２は、配列番号９２を含む、上記［２８］に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［３４］ ＨＣ２は、配列番号８３を含み、ＬＣ２は、配列番号５６を含む、上記［２８］に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［３５］ ＨＣ２は、配列番号８４を含み、ＬＣ２は、配列番号５７を含む、上記［２８］に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［３６］ ＨＣ２は、配列番号８５を含み、ＬＣ２は、配列番号５７を含む、上記［２８］に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［３７］ ＨＣ２は、配列番号８６を含み、ＬＣ２は、配列番号５７を含む、上記［２８］に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［３８］ ＨＣ２は、配列番号８７を含み、ＬＣ２は、配列番号９２を含む、上記［２８］に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［３９］ ＨＣ２は、配列番号８８を含み、ＬＣ２は、配列番号５８を含む、上記［２８］に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［４０］ ＨＣ２は、配列番号８９を含み、ＬＣ２は、配列番号９３を含む、上記［２８］に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［４１］ ＨＣ２は、配列番号９１を含み、ＬＣ２は、配列番号９４を含む、上記［２８］に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［４２］ ＨＣ２は、配列番号８５を含み、ＬＣ２は、配列番号５７を含む、上記［２８］に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［４３］ 前記抗体又は二重特異性結合フラグメントは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４のアイソタイプである、上記［２７］～［４２］のいずれか一項に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［４４］ 前記抗体又は二重特異性結合フラグメントは、ＩｇＧ４のアイソタイプである、上記［４３］に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［４５］ 前記抗体又はその二重特異性結合フラグメントは、ヒト骨髄腫細胞の表面上のＧＰＲＣ５Ｄに結合する、上記［２７］～［４２］に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［４６］ 前記抗体又はその二重特異性結合フラグメントは、ヒトの多発性骨髄腫細胞の表面上のＧＰＲＣ５Ｄに結合する、上記［２７］～［４２］に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［４７］ 前記抗体又は二重特異性結合フラグメントは、インビトロでのヒトＴ細胞活性化を約０．２２ｎＭ未満のＥＣ ５０ で誘導する、上記［２７］～［４２］に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［４８］ 前記抗体又は二重特異性結合フラグメントは、インビトロでのＧＰＲＣ５Ｄ発現細胞のＴ細胞依存性細胞傷害を約０．８９ｎＭ未満のＥＣ ５０ で誘導する、上記［２７］～［４２］に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント。
［４９］ 上記［２７］～［４２］のいずれか一項に記載の抗体又は二重特異性結合フラグメントを発現している、単離された細胞。
［５０］ 前記細胞はハイブリドーマである、上記［４９］に記載の細胞。
［５１］ 前記抗体又は二重特異性結合フラグメントは、組み換えにより生成される、上記［４９］に記載の細胞。
［５２］ がんを有する対象を処置するための方法であって、前記方法は、
治療的に有効な量の、上記［２７］～［４２］のいずれか一項に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメントを、処置を必要とする患者に、前記がんを処置するのに十分な時間投与する工程を含む、方法。
［５３］ がん細胞の成長又は増殖を阻害するための方法であって、前記方法は、
がん細胞の前記成長又は増殖を阻害するために、治療的に有効な量の、上記［２７］～［４２］のいずれか一項に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメントを投与する工程を含む、方法。
［５４］ Ｔ細胞をＧＰＲＣ５Ｄ発現がん細胞に対し再指向する方法であって、前記方法は、
Ｔ細胞をがんに再指向するために、治療的に有効な量の、上記［２７］～［４２］のいずれか一項に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメントを投与する工程を含む、方法。
［５５］ 前記がんは、血液がんである、上記［５２］、［５３］、又は［５４］に記載の方法。
［５６］ 前記血液がんは、ＧＰＲＣ５Ｄ発現Ｂ細胞がんである、上記［５５］に記載の方法。
［５７］ 前記ＧＰＲＣ５Ｄ発現Ｂ細胞がんは、多発性骨髄腫である、上記［５６］に記載の方法。
［５８］ 第２の治療剤を投与する工程を含む、上記［５２］に記載の方法。
［５９］ 前記第２の治療剤は、化学療法剤又は標的を設定した抗がん治療剤である、上記［５８］に記載の方法。
［６０］ 前記化学療法剤は、シタラビン、アントラサイクリン、ヒスタミン二塩酸塩、又はインターロイキン２である、上記［５９］に記載の方法。
［６１］ 前記第２の治療剤を、前記二重特異性抗体と同時に、連続的に、又は別個に、前記対象に投与する、上記［５９］に記載の方法。
［６２］ 上記［２７］～［４２］のいずれか一項に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメントと、医薬的に許容され得る担体と、を含む、医薬組成物。
［６３］ 上記［４９］～［５１］のいずれか一項に記載の細胞を培養することにより、上記［２７］～［４２］のいずれか一項に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメントを生成するための方法。
［６４］ 上記［２７］～［４２］のいずれか一項に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメントの、前記ＨＣ１、前記ＨＣ２、前記ＬＣ１、又は前記ＬＣ２をコードする、単離された合成ポリヌクレオチド。
［６５］ 上記［２７］～［４２］のいずれか一項に定義されるとおりのＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性結合フラグメント、及び／又は上記［６３］に定義されるとおりのポリヌクレオチドと、これらのための包装と、を含む、キット。

Claims (43)

  1. ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントであって、重鎖および軽鎖を含み、
    前記重鎖は、配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含み、かつ、
    前記軽鎖は、配列番号１５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む、
    単離された抗体又はその抗原結合フラグメント。
  2. 前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、配列番号５５の可変重（ＶＨ）鎖領域と、
    配列番号５８の可変軽（ＶＬ）鎖領域と、を含む、請求項１に記載の単離された抗体又はその抗原結合フラグメント。
  3. 前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒト抗体又は抗原結合フラグメントである、請求項１に記載の単離された抗体又はその抗原結合フラグメント。
  4. 前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、組み換え体である、請求項１に記載の単離された抗体又はその抗原結合フラグメント。
  5. 前記抗原結合フラグメントは、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ２フラグメント、又は一本鎖抗体である、請求項１に記載の単離された抗体又はその抗原結合フラグメント。
  6. 前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４のアイソタイプのものである、請求項１に記載の単離された抗体又はその抗原結合フラグメント。
  7. 前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４のアイソタイプである、請求項１に記載の単離された抗体又はその抗原結合フラグメント。
  8. 前記ＩｇＧ１は、そのＦｃ領域中に、Ｋ４０９Ｒ置換を有する、請求項７に記載の単離された抗体又はその抗原結合フラグメント。
  9. 前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、Ｆｃ領域中に、Ｓ２２８Ｐ置換、Ｌ２３４Ａ置換、及びＬ２３５Ａ置換を更に含む、請求項８に記載の単離された抗体又はその抗原結合フラグメント。
  10. 前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合し、カニクイザルＧＰＲＣ５Ｄと交差反応する、請求項１に記載の単離された抗体又はその抗原結合フラグメント。
  11. 前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、２８ｎＭ未満のＥＣ５０でＡＤＣＣをインビトロで誘導する、請求項１に記載の単離された抗体又はその抗原結合フラグメント。
  12. 前記抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号５５のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＬと、配列番号５９のアミノ酸配列を有するＦｃドメインと、を含む、請求項１に記載の単離された抗体又はその抗原結合フラグメント。
  13. 請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメントを発現している単離された細胞。
  14. 前記抗体は、組み換えにより生成される、請求項１３に記載の単離された細胞。
  15. 単離されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体、又はそのＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性結合フラグメントであって、
    ａ）第１の重鎖（ＨＣ１）と、
    ｂ）第２の重鎖（ＨＣ２）と、
    ｃ）第１の軽鎖（ＬＣ１）と、
    ｄ）第２の軽鎖（ＬＣ２）と、を含み、
    前記ＨＣ１及び前記ＬＣ１は、対を成してＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、前記ＨＣ２及び前記ＬＣ２は、対を成してＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成し、
    ＨＣ１は、配列番号２５を含み、ＬＣ１は、配列番号２６を含み、
    ＨＣ２可変重鎖領域は、配列番号５５を含み、ＬＣ２可変軽鎖領域は、配列番号５８を含む、
    単離されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体、又はそのＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性結合フラグメント。
  16. 前記抗体又はその二重特異性結合フラグメントは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４のアイソタイプのものである、請求項１５に記載の単離されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又はそのＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性結合フラグメント。
  17. 前記抗体又はその二重特異性結合フラグメントは、ＩｇＧ４のアイソタイプである、請求項１６に記載の単離されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又はそのＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性結合フラグメント。
  18. 前記二重特異性抗体のＧＰＲＣ５Ｄ結合部分は、配列番号５５のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号５８のアミノ酸配列を有するＶＬと、配列番号５９のアミノ酸配列を有するＦｃドメインと、を含む、請求項１６に記載の単離されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又はそのＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性結合フラグメント。
  19. 前記二重特異性抗体のＣＤ３結合部分は、配列番号２５のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬと、配列番号５９のアミノ酸配列を有するＦｃドメインと、を含み、前記Ｆｃドメインが、Ｆ４０５Ｌ及びＲ４０９Ｋをさらに含む、請求項１８に記載の単離されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又はそのＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性結合フラグメント。
  20. 前記抗体又はその二重特異性結合フラグメントは、ヒト骨髄腫細胞の表面上のＧＰＲＣ５Ｄに結合する、請求項１５に記載の単離されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又はそのＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性結合フラグメント。
  21. 前記抗体又はその二重特異性結合フラグメントは、ヒトの多発性骨髄腫細胞の表面上のＧＰＲＣ５Ｄに結合する、請求項１５に記載の単離されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又はそのＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性結合フラグメント。
  22. 前記抗体又はその二重特異性結合フラグメントは、インビトロでのヒトＴ細胞活性化を０．２２ｎＭ未満のＥＣ５０で誘導する、請求項１５に記載の単離されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又はそのＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性結合フラグメント。
  23. 前記抗体又はその二重特異性結合フラグメントは、インビトロでのＧＰＲＣ５Ｄ発現細胞のＴ細胞依存性細胞傷害を０．８９ｎＭ未満のＥＣ５０で誘導する、請求項１５に記載の単離されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又はそのＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性結合フラグメント。
  24. 請求項１５～２３のいずれか一項に記載のＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又はその二重特異性結合フラグメントを発現している、単離された細胞。
  25. 前記ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又はその二重特異性結合フラグメントは、組み換えにより生成される、請求項２４に記載の単離された細胞。
  26. がんを有する対象を処置するための方法で使用するための医薬組成物であって、請求項１５～２３のいずれか一項に記載の単離されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又はその二重特異性結合フラグメントを含み、
    前記方法は、
    治療的に有効な量の、前記ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又はその二重特異性結合フラグメントを、それを必要とする対象に、前記がんを処置するのに十分な時間投与する工程を含む、医薬組成物。
  27. がん細胞の成長又は増殖を阻害するための方法で使用するための医薬組成物であって、請求項１５～２３のいずれか一項に記載の単離されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又はその二重特異性結合フラグメントを含み、
    前記方法は、
    治療的に有効な量の、前記ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又はその二重特異性結合フラグメントを、それを必要とする対象に、がん細胞の成長又は増殖を阻害するのに十分な時間投与する工程を含む、医薬組成物。
  28. Ｔ細胞をＧＰＲＣ５Ｄ発現がん細胞に対し再指向する方法で使用するための医薬組成物であって、請求項１５～２３のいずれか一項に記載の単離されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又はその二重特異性結合フラグメントを含み、
    前記方法は、
    治療的に有効な量の、前記ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又はその二重特異性結合フラグメントを、それを必要とする対象に、Ｔ細胞をＧＰＲＣ５Ｄ発現がん細胞に対し再指向するのに十分な時間投与する工程を含む、医薬組成物。
  29. 前記がん又はがん細胞は、血液がん又はがん細胞である、請求項２６～２８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  30. 前記血液がん又はがん細胞は、ＧＰＲＣ５Ｄ発現Ｂ細胞がん又はがん細胞である、請求項２９に記載の医薬組成物。
  31. 前記ＧＰＲＣ５Ｄ発現Ｂ細胞がん又はがん細胞は、多発性骨髄腫である、請求項３０に記載の医薬組成物。
  32. 前記使用は、第２の治療剤を投与する工程をさらに含む、請求項２６に記載の医薬組成物。
  33. 前記第２の治療剤は、化学療法剤又は標的を設定した抗がん治療剤である、請求項３２に記載の医薬組成物。
  34. 前記化学療法剤は、シタラビン、アントラサイクリン、ヒスタミン二塩酸塩、又はインターロイキン２である、請求項３３に記載の医薬組成物。
  35. 前記第２の治療剤を、前記二重特異性抗体と同時に、連続的に、又は別個に、前記対象に投与する、請求項３２～３４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  36. 請求項１５～２３のいずれか一項に記載の単離されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又はその二重特異性結合フラグメントと、医薬的に許容され得る担体と、を含む、医薬組成物。
  37. 請求項２４又は２５に記載の単離された細胞を培養することを含む、請求項１５～２３のいずれか一項に記載の単離されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又はその二重特異性結合フラグメントを生成するための方法。
  38. 請求項１５～２３のいずれか一項に記載の単離されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又はその二重特異性結合フラグメントをコードする、単離された合成ポリヌクレオチド。
  39. 請求項１５～２３のいずれか一項に記載の単離されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体又はその二重特異性結合フラグメント、及び／又は請求項３８に記載の単離された合成ポリヌクレオチドと、これらのための包装と、を含む、キット。
  40. ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する、単離された抗体であって、
    配列番号５５のアミノ酸配列を有する可変重（ＶＨ）鎖領域を含む重鎖と
    配列番号５８のアミノ酸配列を有する可変軽（ＶＬ）鎖領域を含む軽鎖を含み、
    前記抗体がＩｇＧ４のアイソタイプである、単離された抗体。
  41. 前記重鎖は、配列番号５９のアミノ酸配列を更に有する、請求項４０に記載の単離された抗体。
  42. 単離されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体であって、
    配列番号５５のアミノ酸配列を有する可変重（ＶＨ）鎖領域を含む重鎖と
    配列番号５８のアミノ酸配列を有する可変軽（ＶＬ）鎖領域を含む軽鎖を含む、ＧＰＲＣ５Ｄ結合部分と、
    配列番号９９を含む重鎖と配列番号１００を含む軽鎖を含む、ＣＤ３結合部分を含み、
    前記抗体がＩｇＧ４のアイソタイプである、単離されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体。
  43. 前記ＧＰＲＣ５Ｄ結合部分の重鎖は、配列番号５９のアミノ酸配列を更に有する、請求項４２に記載の単離されたＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異性抗体。
JP2022173361A 2016-07-20 2022-10-28 抗ｇｐｒｃ５ｄ抗体、ｇｐｒｃ５ｄとｃｄ３を結合する二重特異性抗原結合分子、及びその使用 Active JP7469432B2 (ja)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2024013728A JP2024054176A (ja) 2016-07-20 2024-01-31 抗ｇｐｒｃ５ｄ抗体、ｇｐｒｃ５ｄとｃｄ３を結合する二重特異性抗原結合分子、及びその使用

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662364811P 2016-07-20 2016-07-20
US62/364,811 2016-07-20
PCT/US2017/042982 WO2018017786A2 (en) 2016-07-20 2017-07-20 Anti- gprc5d antibodies, bispecific antigen binding molecules that bind gprc5d and cd3, and uses thereof
JP2019502647A JP7292200B2 (ja) 2016-07-20 2017-07-20 抗ｇｐｒｃ５ｄ抗体、ｇｐｒｃ５ｄとｃｄ３を結合する二重特異性抗原結合分子、及びその使用

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2019502647A Division JP7292200B2 (ja) 2016-07-20 2017-07-20 抗ｇｐｒｃ５ｄ抗体、ｇｐｒｃ５ｄとｃｄ３を結合する二重特異性抗原結合分子、及びその使用

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2024013728A Division JP2024054176A (ja) 2016-07-20 2024-01-31 抗ｇｐｒｃ５ｄ抗体、ｇｐｒｃ５ｄとｃｄ３を結合する二重特異性抗原結合分子、及びその使用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2023011774A JP2023011774A (ja) 2023-01-24
JP7469432B2 true JP7469432B2 (ja) 2024-04-16

Family

ID=60992891

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2019502647A Active JP7292200B2 (ja) 2016-07-20 2017-07-20 抗ｇｐｒｃ５ｄ抗体、ｇｐｒｃ５ｄとｃｄ３を結合する二重特異性抗原結合分子、及びその使用
JP2022173361A Active JP7469432B2 (ja) 2016-07-20 2022-10-28 抗ｇｐｒｃ５ｄ抗体、ｇｐｒｃ５ｄとｃｄ３を結合する二重特異性抗原結合分子、及びその使用
JP2024013728A Pending JP2024054176A (ja) 2016-07-20 2024-01-31 抗ｇｐｒｃ５ｄ抗体、ｇｐｒｃ５ｄとｃｄ３を結合する二重特異性抗原結合分子、及びその使用

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2019502647A Active JP7292200B2 (ja) 2016-07-20 2017-07-20 抗ｇｐｒｃ５ｄ抗体、ｇｐｒｃ５ｄとｃｄ３を結合する二重特異性抗原結合分子、及びその使用

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2024013728A Pending JP2024054176A (ja) 2016-07-20 2024-01-31 抗ｇｐｒｃ５ｄ抗体、ｇｐｒｃ５ｄとｃｄ３を結合する二重特異性抗原結合分子、及びその使用

Country Status (25)

Country Link
US (3) US10562968B2 (ja)
EP (1) EP3487882A2 (ja)
JP (3) JP7292200B2 (ja)
KR (2) KR102572091B1 (ja)
CN (2) CN109715667B (ja)
AR (1) AR109499A1 (ja)
AU (1) AU2017299673A1 (ja)
BR (1) BR112019001055A2 (ja)
CA (1) CA3031472A1 (ja)
CL (1) CL2019000146A1 (ja)
CO (1) CO2019001114A2 (ja)
CR (1) CR20190025A (ja)
EA (1) EA201990346A1 (ja)
EC (1) ECSP19012075A (ja)
IL (2) IL264334B1 (ja)
MA (1) MA45712A (ja)
MX (2) MX2019000825A (ja)
NI (1) NI201900005A (ja)
PE (1) PE20190392A1 (ja)
PH (1) PH12019500152A1 (ja)
SG (1) SG11201900468YA (ja)
TW (1) TWI781108B (ja)
UY (1) UY37340A (ja)
WO (1) WO2018017786A2 (ja)
ZA (1) ZA201901066B (ja)

Families Citing this family (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI796283B (zh) 2015-07-31 2023-03-21 德商安美基研究（慕尼黑）公司 Ｍｓｌｎ及ｃｄ３抗體構築體
TWI829617B (zh) 2015-07-31 2024-01-21 德商安美基研究（慕尼黑）公司 Ｆｌｔ３及ｃｄ３抗體構築體
WO2017040344A2 (en) 2015-08-28 2017-03-09 Amunix Operating Inc. Chimeric polypeptide assembly and methods of making and using the same
EA039859B1 (ru) 2016-02-03 2022-03-21 Эмджен Рисерч (Мюник) Гмбх Биспецифические конструкты антител, связывающие egfrviii и cd3
TWI781108B (zh) 2016-07-20 2022-10-21 比利時商健生藥品公司 抗ｇｐｒｃ５ｄ抗體、結合ｇｐｒｃ５ｄ與ｃｄ３之雙特異性抗原結合分子及其用途
WO2018035710A1 (en) * 2016-08-23 2018-03-01 Akeso Biopharma, Inc. Anti-ctla4 antibodies
KR20190133160A (ko) * 2017-02-07 2019-12-02 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 항-gprc5d 항체 및 항-gprc5d 항체를 포함하는 분자
TWI829667B (zh) 2018-02-09 2024-01-21 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 結合gprc5d之抗體
JP7337079B2 (ja) * 2018-02-15 2023-09-01 マクロジェニクス，インコーポレーテッド 変異型ｃｄ３結合ドメイン、及び疾患の治療のための併用療法におけるその使用
CA3100118A1 (en) * 2018-05-16 2019-11-21 Janssen Biotech, Inc. Bcma/cd3 and gprdc5d/cd3 bispecific antibodies for use in cancer therapy
CN111116753A (zh) * 2018-10-30 2020-05-08 上海泰因生物技术有限公司 一种双特异性抗体的制备方法
AU2019374103A1 (en) 2018-11-01 2021-05-20 Juno Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptors specific for G Protein-Coupled Receptor Class C Group 5 Member D (GPRC5D)
WO2020052692A2 (en) * 2018-12-04 2020-03-19 Novartis Ag Binding molecules against cd3 and uses thereof
AU2019410073A1 (en) 2018-12-21 2021-06-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Tumor-targeted agonistic CD28 antigen binding molecules
AU2020209257A1 (en) * 2019-01-18 2021-08-05 Janssen Biotech, Inc. GPRC5D chimeric antigen receptors and cells expressing the same
BR112021026832A2 (pt) 2019-07-02 2022-05-10 Hutchinson Fred Cancer Res Vetores ad35 recombinantes e aprimoramentos da terapia gênica relacionada
BR112022001460A2 (pt) * 2019-07-31 2022-03-22 Hoffmann La Roche Moléculas de ligação ao antígeno biespecíficas, um ou mais polinucleotídeos isolados, célula hospedeira, método para produzir uma molécula de ligação ao antígeno biespecífica e para tratar uma doença em um indivíduo, composição farmacêutica, uso da molécula de ligação ao antígeno biespecífica e invenção
WO2021018925A1 (en) 2019-07-31 2021-02-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to gprc5d
EP4069742A1 (en) * 2019-12-06 2022-10-12 Juno Therapeutics, Inc. Anti-idiotypic antibodies to gprc5d-targeted binding domains and related compositions and methods
CA3175577A1 (en) * 2020-03-30 2021-10-07 Mie University Bispecific antibody
IL299894A (en) * 2020-07-17 2023-03-01 Janssen Biotech Inc Anti-idiotypic antibodies against anti-GPRC5D antibodies
IL301361A (en) * 2020-09-16 2023-05-01 Janssen Biotech Inc Treatment methods for multiple myeloma
WO2022148370A1 (en) * 2021-01-05 2022-07-14 Lanova Medicines Development Co., Ltd. Anti-gprc5d monoclonal antibodies and uses thereof
AU2022201736B2 (en) 2021-01-05 2023-03-16 Lanova Medicines Development Co., Ltd. Anti-GPRC5D monoclonal antibodies and uses thereof
KR20230157315A (ko) 2021-01-28 2023-11-16 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 사이토카인 방출 증후군을 치료하기 위한 조성물 및 방법
US20220267438A1 (en) 2021-02-16 2022-08-25 Janssen Pharmaceutica Nv Trispecific antibody targeting bcma, gprc5d, and cd3
CN116897166A (zh) * 2021-02-19 2023-10-17 信达生物制药(苏州)有限公司 抗GPRC5DxBCMAxCD3三特异性抗体及其用途
BR112023019484A2 (pt) 2021-03-24 2023-12-05 Janssen Biotech Inc Anticorpo triespecífico que tem como alvo cd79b, cd20 e cd3
TW202309522A (zh) 2021-05-11 2023-03-01 美商健生生物科技公司 用於監測復發性及／或難治性多發性骨髓瘤之治療的方法及組成物
WO2022247804A1 (zh) * 2021-05-23 2022-12-01 上海祥耀生物科技有限责任公司 抗gprc5d抗体、其制备方法与用途
WO2023079494A1 (en) 2021-11-03 2023-05-11 Janssen Biotech, Inc. Corticosteriod reduction in treatment with anti-cd38 antibodies
TW202334222A (zh) * 2021-11-05 2023-09-01 大陸商正大天晴藥業集團股份有限公司 結合gprc5d的抗體及其用途
WO2023173272A1 (zh) * 2022-03-15 2023-09-21 上海驯鹿生物技术有限公司 靶向gprc5d的全人源嵌合抗原受体(car)及其应用
WO2023115347A1 (zh) * 2021-12-21 2023-06-29 上海驯鹿生物技术有限公司 靶向gprc5d的全人源抗体
WO2023116782A1 (zh) * 2021-12-21 2023-06-29 上海驯鹿生物技术有限公司 靶向gprc5d的全人源抗体和嵌合抗原受体(car)及其应用
WO2023125888A1 (zh) * 2021-12-31 2023-07-06 山东先声生物制药有限公司 一种gprc5d抗体及其应用
WO2023125728A1 (zh) * 2021-12-31 2023-07-06 康源博创生物科技(北京)有限公司 抗gprc5d抗体及其应用
CN116375868A (zh) * 2021-12-31 2023-07-04 康源博创生物科技(北京)有限公司 一种抗cd3的人源化抗体及其在制备双特异性抗体中的应用
TW202334234A (zh) * 2022-01-10 2023-09-01 大陸商南京維立志博生物科技有限公司 一種抗體及其用途
WO2023143537A1 (zh) * 2022-01-29 2023-08-03 恺兴生命科技(上海)有限公司 Gprc5d抗体及其应用
WO2023174238A1 (zh) * 2022-03-14 2023-09-21 江苏恒瑞医药股份有限公司 特异性结合gprc5d和cd3的抗原结合分子及其医药用途
WO2023201226A1 (en) 2022-04-11 2023-10-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for universal tumor cell killing
WO2023227062A1 (en) * 2022-05-27 2023-11-30 Antengene (Hangzhou) Biologics Co., Ltd. Novel anti-gprc5d antibodies, bispecific antigen binding molecules that bind gprc5d and cd3, and uses thereof
WO2023236889A1 (zh) * 2022-06-06 2023-12-14 山东先声生物制药有限公司 靶向bcma、gprc5d和t细胞的多特异性抗体及其应用
WO2024002308A1 (zh) * 2022-06-30 2024-01-04 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种新型多特异肿瘤抑制剂的开发和应用
WO2024017326A1 (zh) * 2022-07-21 2024-01-25 山东先声生物制药有限公司 抗gprc5d纳米抗体及其应用
US20240041929A1 (en) 2022-08-05 2024-02-08 Juno Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptors specific for gprc5d and bcma
CN116003598B (zh) * 2022-08-30 2024-04-26 苏州缔码生物科技有限公司 靶向人gprc5d的重组人源化单克隆抗体及其应用
WO2024050524A1 (en) 2022-09-01 2024-03-07 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Compositions and methods for directing apolipoprotein l1 to induce mammalian cell death
WO2024050797A1 (zh) * 2022-09-09 2024-03-14 北京天广实生物技术股份有限公司 结合bcma、gprc5d和cd3的多特异性抗体及其用途
WO2024079010A1 (en) 2022-10-10 2024-04-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy of a gprc5d tcb and cd38 antibodies
WO2024079009A1 (en) 2022-10-10 2024-04-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy of a gprc5d tcb and proteasome inhibitors
WO2024079015A1 (en) 2022-10-10 2024-04-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy of a gprc5d tcb and imids

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016036937A1 (en) 2014-09-05 2016-03-10 Janssen Pharmaceutica Nv Cd123 binding agents and uses thereof
WO2016090329A2 (en) 2014-12-05 2016-06-09 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Antibodies targeting g-protein coupled receptor and methods of use

Family Cites Families (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US20020142000A1 (en) 1999-01-15 2002-10-03 Digan Mary Ellen Anti-CD3 immunotoxins and therapeutic uses therefor
AU4347701A (en) 2000-03-01 2001-09-12 Corixa Corp Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
AU2002367145A1 (en) * 2001-12-27 2003-07-15 Sumitomo Pharmaceuticals Co., Ltd. Remedies for anorexia or lifestyle-related diseases and method of screening the same
WO2005086568A2 (en) * 2004-01-26 2005-09-22 Morphosys Ag Anti-icam-1 human antibodies and uses thereof
WO2006028936A2 (en) 2004-09-02 2006-03-16 Genentech, Inc. Heteromultimeric molecules
WO2006106905A1 (ja) 2005-03-31 2006-10-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha 会合制御によるポリペプチド製造方法
DE102005028778A1 (de) 2005-06-22 2006-12-28 SUNJÜT Deutschland GmbH Mehrlagige Folie mit einer Barriere- und einer antistatischen Lage
CA2625440C (en) 2005-10-11 2023-06-13 Micromet Ag Compositions comprising cross-species-specific antibodies and uses thereof
WO2007059782A1 (en) 2005-11-28 2007-05-31 Genmab A/S Recombinant monovalent antibodies and methods for production thereof
JP2009541275A (ja) 2006-06-22 2009-11-26 ノボ・ノルデイスク・エー／エス 二重特異性抗体の生産
CA2682626A1 (en) 2007-04-03 2008-10-09 Micromet Ag Cross-species-specific bispecific binders
JP2010524851A (ja) 2007-04-03 2010-07-22 マイクロメット アーゲー 種間特異的結合ドメイン
KR101589759B1 (ko) 2007-04-03 2016-01-29 암젠 리서치 (뮌헨) 게엠베하 종간 특이적 ｃｄ３―입실론 결합 도메인
WO2009085462A1 (en) 2007-12-19 2009-07-09 Centocor, Inc. Design and generation of human de novo pix phage display libraries via fusion to pix or pvii, vectors, antibodies and methods
US9212226B2 (en) * 2008-05-16 2015-12-15 Ablynx N.V. Amino acid sequences directed against CXCR4 and other GPCRs and compounds comprising the same
US9260522B2 (en) 2008-10-01 2016-02-16 Amgen Research (Munich) Gmbh Bispecific single chain antibodies with specificity for high molecular weight target antigens
US10981998B2 (en) 2008-10-01 2021-04-20 Amgen Research (Munich) Gmbh Cross-species-specific single domain bispecific single chain antibody
NZ591134A (en) 2008-10-01 2012-08-31 Micromet Ag Cross-species-specific (human and primate) bispecific single chain antibody that binds both cd3 (epsilon) epitope and prostate specific membrane antigen (pmsa)
PL2356269T3 (pl) 2008-10-31 2016-12-30 Kompozycje białek rusztowania oparte na domenie fibronektyny typu III, sposoby i zastosowania
CN102596992B (zh) 2009-02-12 2015-09-09 詹森生物科技公司 基于ⅲ型纤连蛋白结构域的支架组合物、方法及用途
JP2012525149A (ja) 2009-04-27 2012-10-22 オンコメッド ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド ヘテロ多量体分子を作製するための方法
SG184427A1 (en) 2010-04-20 2012-11-29 Genmab As Heterodimeric antibody fc-containing proteins and methods for production thereof
JP6167040B2 (ja) 2010-11-05 2017-07-19 ザイムワークス，インコーポレイテッド Ｆｃドメイン中に突然変異を有する、安定したヘテロ二量体抗体の設計
US8846042B2 (en) 2011-05-16 2014-09-30 Fabion Pharmaceuticals, Inc. Multi-specific FAB fusion proteins and methods of use
PL2773671T3 (pl) 2011-11-04 2022-01-24 Zymeworks Inc. Projekt stabilnego przeciwciała heterodimerycznego z mutacjami w domenie fc
FR2994803B1 (fr) 2012-08-30 2016-02-26 Oreal Modulation de la forme des fibres keratiniques
DK2961771T3 (da) 2013-02-26 2020-03-02 Roche Glycart Ag Bispecifikke, T-celle-aktiverende, antigenbindende molekyler, der er specifikke for CD3 og CEA
KR102497443B1 (ko) 2014-03-28 2023-02-08 젠코어 인코포레이티드 Cd38 및 cd3에 결합하는 이중특이적 항체
WO2016040294A2 (en) 2014-09-09 2016-03-17 Janssen Biotech, Inc. Combination therapies with anti-cd38 antibodies
US20180334490A1 (en) 2014-12-03 2018-11-22 Qilong H. Wu Methods for b cell preconditioning in car therapy
CA2990406A1 (en) 2015-06-22 2016-12-29 Janssen Biotech, Inc. Combination therapies for heme malignancies with anti-cd38 antibodies and survivin inhibitors
AU2016308567B2 (en) 2015-08-17 2022-10-27 Janssen Biotech, Inc. Anti-BCMA antibodies, bispecific antigen binding molecules that bind BCMA and CD3, and uses thereof
EA201891084A1 (ru) 2015-11-02 2019-10-31 Антитела к il1rap, биспецифические антигенсвязывающие молекулы, которые связываются с il1rap и cd3, и их применение
WO2017189959A1 (en) 2016-04-29 2017-11-02 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions for the treatment of disease
TWI781108B (zh) 2016-07-20 2022-10-21 比利時商健生藥品公司 抗ｇｐｒｃ５ｄ抗體、結合ｇｐｒｃ５ｄ與ｃｄ３之雙特異性抗原結合分子及其用途
KR20190133160A (ko) 2017-02-07 2019-12-02 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 항-gprc5d 항체 및 항-gprc5d 항체를 포함하는 분자
WO2019094626A1 (en) 2017-11-08 2019-05-16 Fred Hutchinson Cancer Research Center Bispecific antibody compositions and related methods for improved pretargeted radioimunotherapies
IL301361A (en) 2020-09-16 2023-05-01 Janssen Biotech Inc Treatment methods for multiple myeloma
TW202309522A (zh) 2021-05-11 2023-03-01 美商健生生物科技公司 用於監測復發性及／或難治性多發性骨髓瘤之治療的方法及組成物

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016036937A1 (en) 2014-09-05 2016-03-10 Janssen Pharmaceutica Nv Cd123 binding agents and uses thereof
WO2016090329A2 (en) 2014-12-05 2016-06-09 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Antibodies targeting g-protein coupled receptor and methods of use

Also Published As

Publication number Publication date
US20230227548A1 (en) 2023-07-20
EA201990346A1 (ru) 2019-06-28
NI201900005A (es) 2019-05-10
JP2024054176A (ja) 2024-04-16
CN116333133A (zh) 2023-06-27
CN109715667B (zh) 2022-12-30
TWI781108B (zh) 2022-10-21
BR112019001055A2 (pt) 2019-10-01
CL2019000146A1 (es) 2019-04-26
US10562968B2 (en) 2020-02-18
US20230084967A1 (en) 2023-03-16
MA45712A (fr) 2019-05-29
CA3031472A1 (en) 2018-01-25
MX2023006449A (es) 2023-06-15
JP2019527061A (ja) 2019-09-26
SG11201900468YA (en) 2019-02-27
PE20190392A1 (es) 2019-03-13
JP7292200B2 (ja) 2023-06-16
ZA201901066B (en) 2020-10-28
CN109715667A (zh) 2019-05-03
KR20190028534A (ko) 2019-03-18
US20180037651A1 (en) 2018-02-08
ECSP19012075A (es) 2019-02-28
US11884722B2 (en) 2024-01-30
TW201809005A (zh) 2018-03-16
IL264334A (en) 2019-02-28
IL264334B1 (en) 2024-01-01
KR102572091B1 (ko) 2023-08-31
US11685777B2 (en) 2023-06-27
CR20190025A (es) 2019-03-14
MX2019000825A (es) 2019-09-04
EP3487882A2 (en) 2019-05-29
CO2019001114A2 (es) 2019-02-19
UY37340A (es) 2018-01-31
AU2017299673A1 (en) 2019-02-07
AR109499A1 (es) 2018-12-19
WO2018017786A3 (en) 2018-03-01
PH12019500152A1 (en) 2019-10-14
KR20230128409A (ko) 2023-09-04
IL298277A (en) 2023-01-01
WO2018017786A2 (en) 2018-01-25
JP2023011774A (ja) 2023-01-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7469432B2 (ja) 抗ｇｐｒｃ５ｄ抗体、ｇｐｒｃ５ｄとｃｄ３を結合する二重特異性抗原結合分子、及びその使用
JP7194240B2 (ja) 抗ｂｃｍａ抗体、ｂｃｍａ及びｃｄ３に結合する二重特異性抗原結合分子、並びにそれらの使用
AU2015311931B2 (en) CD123 binding agents and uses thereof
JP2024507180A (ja) Ｂｃｍａ、ｇｐｒｃ５ｄ、及びｃｄ３を標的とする三重特異的抗体
EA044685B1 (ru) Антитела к gprc5d, биспецифические антигенсвязывающие молекулы, которые связывают gprc5d и cd3, и их применение

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20221128

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20221128

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20230912

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20231212

A711 Notification of change in applicant

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711

Effective date: 20240122

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20240131

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20240312

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20240404