JP7378106B2 - ゲノム的に再コードした生物におけるセレノ-生物製剤の製造 - Google Patents
ゲノム的に再コードした生物におけるセレノ-生物製剤の製造 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7378106B2 JP7378106B2 JP2022184852A JP2022184852A JP7378106B2 JP 7378106 B2 JP7378106 B2 JP 7378106B2 JP 2022184852 A JP2022184852 A JP 2022184852A JP 2022184852 A JP2022184852 A JP 2022184852A JP 7378106 B2 JP7378106 B2 JP 7378106B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protein
- item
- selenocysteine
- sequence
- chain
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 13
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 title description 21
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 161
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 157
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 154
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 79
- 125000001554 selenocysteine group Chemical group [H][Se]C([H])([H])C(N([H])[H])C(=O)O* 0.000 claims description 78
- 108020004566 Transfer RNA Proteins 0.000 claims description 65
- 235000016491 selenocysteine Nutrition 0.000 claims description 55
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 claims description 54
- FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N D-Selenocysteine Natural products [Se]C[C@@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N 0.000 claims description 52
- ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N selenocysteine Natural products [SeH]CC(N)C(O)=O ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 52
- 229940055619 selenocysteine Drugs 0.000 claims description 52
- FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N (2r)-2-azaniumyl-3-$l^{1}-selanylpropanoate Chemical compound [Se]C[C@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 49
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 claims description 37
- 108020004485 Nonsense Codon Proteins 0.000 claims description 37
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 37
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical class N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 108020005098 Anticodon Proteins 0.000 claims description 17
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 17
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 9
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 4
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 claims description 3
- 108091005573 modified proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 102000035118 modified proteins Human genes 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims description 2
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 42
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 40
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 35
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 28
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 24
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 21
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 19
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 17
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 16
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 15
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 15
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 14
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 14
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 12
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 12
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 12
- 108700028939 Amino Acyl-tRNA Synthetases Proteins 0.000 description 11
- 102000052866 Amino Acyl-tRNA Synthetases Human genes 0.000 description 11
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 11
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 10
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 10
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 10
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 150000002019 disulfides Chemical class 0.000 description 8
- 230000006870 function Effects 0.000 description 8
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 7
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 7
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 102000008096 B7-H1 Antigen Human genes 0.000 description 6
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- XIMIGUBYDJDCKI-UHFFFAOYSA-N diselenium Chemical compound [Se]=[Se] XIMIGUBYDJDCKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 5
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 5
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical class C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 5
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000003130 L-selenocysteinyl group Chemical group O=C([*])[C@@](N([H])[H])([H])C([H])([H])[Se][H] 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 150000003959 diselenides Chemical class 0.000 description 4
- 229940022353 herceptin Drugs 0.000 description 4
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 4
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 4
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 4
- JULROCUWKLNBSN-UHFFFAOYSA-N seleno-DL-cystine Natural products OC(=O)C(N)C[Se][Se]CC(N)C(O)=O JULROCUWKLNBSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000003345 selenocysteines Chemical class 0.000 description 4
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 4
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 3
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 3
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 3
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N Pyrrolidine Chemical compound C1CCNC1 RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 3
- XPOORPQJSFUEGJ-UHFFFAOYSA-N bis(selanylidene)-lambda4-sulfane Chemical compound [Se]S[Se] XPOORPQJSFUEGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 3
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 3
- 125000002228 disulfide group Chemical group 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 3
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- -1 selenocysteine amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 3
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 3
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100021935 C-C motif chemokine 26 Human genes 0.000 description 2
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 2
- 101000897493 Homo sapiens C-C motif chemokine 26 Proteins 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010074686 Selenoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000008114 Selenoproteins Human genes 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 2
- FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N carbenicillin Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)C(C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N 0.000 description 2
- 229960003669 carbenicillin Drugs 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 2
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 2
- 150000001945 cysteines Chemical group 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011669 selenium Substances 0.000 description 2
- 229940091258 selenium supplement Drugs 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- OFVLGDICTFRJMM-WESIUVDSSA-N tetracycline Chemical compound C1=CC=C2[C@](O)(C)[C@H]3C[C@H]4[C@H](N(C)C)C(O)=C(C(N)=O)C(=O)[C@@]4(O)C(O)=C3C(=O)C2=C1O OFVLGDICTFRJMM-WESIUVDSSA-N 0.000 description 2
- 238000002849 thermal shift Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OJHZNMVJJKMFGX-RNWHKREASA-N (4r,4ar,7ar,12bs)-9-methoxy-3-methyl-1,2,4,4a,5,6,7a,13-octahydro-4,12-methanobenzofuro[3,2-e]isoquinoline-7-one;2,3-dihydroxybutanedioic acid Chemical compound OC(=O)C(O)C(O)C(O)=O.O=C([C@@H]1O2)CC[C@H]3[C@]4([H])N(C)CC[C@]13C1=C2C(OC)=CC=C1C4 OJHZNMVJJKMFGX-RNWHKREASA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 208000031295 Animal disease Diseases 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- 101100028791 Caenorhabditis elegans pbs-5 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710167800 Capsid assembly scaffolding protein Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 108010090613 Human Regular Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102000013266 Human Regular Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 108010089308 Insulin Detemir Proteins 0.000 description 1
- 108010057186 Insulin Glargine Proteins 0.000 description 1
- 108010065920 Insulin Lispro Proteins 0.000 description 1
- FYZPCMFQCNBYCY-WIWKJPBBSA-N Insulin degludec Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@@H]2NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](Cc3c[nH]cn3)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)Cc3ccccc3)C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc3c[nH]cn3)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](Cc3ccc(O)cc3)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](Cc3ccc(O)cc3)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](Cc3ccc(O)cc3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](Cc2ccccc2)C(=O)N[C@@H](Cc2ccccc2)C(=O)N[C@@H](Cc2ccc(O)cc2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N2CCC[C@H]2C(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)CC[C@H](NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O)C(O)=O)C(O)=O)NC1=O)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC FYZPCMFQCNBYCY-WIWKJPBBSA-N 0.000 description 1
- COCFEDIXXNGUNL-RFKWWTKHSA-N Insulin glargine Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(=O)NCC(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 COCFEDIXXNGUNL-RFKWWTKHSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229940113231 Neuronal nicotinic receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 108010049977 Peptide Elongation Factor Tu Proteins 0.000 description 1
- 102000002508 Peptide Elongation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010068204 Peptide Elongation Factors Proteins 0.000 description 1
- 101710130420 Probable capsid assembly scaffolding protein Proteins 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108010039491 Ricin Proteins 0.000 description 1
- 101710204410 Scaffold protein Proteins 0.000 description 1
- 108010030161 Serine-tRNA ligase Proteins 0.000 description 1
- 102100040597 Serine-tRNA ligase, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 101710137500 T7 RNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 102100036407 Thioredoxin Human genes 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 229940050528 albumin Drugs 0.000 description 1
- DLRVVLDZNNYCBX-CAPXFGMSSA-N allolactose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1OC[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-CAPXFGMSSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001064 anti-interferon Effects 0.000 description 1
- 229940112930 apidra Drugs 0.000 description 1
- RCHHVVGSTHAVPF-ZPHPLDECSA-N apidra Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3N=CNC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CNC=N1 RCHHVVGSTHAVPF-ZPHPLDECSA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003491 array Methods 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000004671 cell-free system Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000001427 coherent effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 150000001944 cysteine derivatives Chemical group 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L disodium selenite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Se]([O-])=O BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000000132 electrospray ionisation Methods 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 102000035175 foldases Human genes 0.000 description 1
- 108091005749 foldases Proteins 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- WNRQPCUGRUFHED-DETKDSODSA-N humalog Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1.C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 WNRQPCUGRUFHED-DETKDSODSA-N 0.000 description 1
- 229940038661 humalog Drugs 0.000 description 1
- 229940103471 humulin Drugs 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 108700039926 insulin glulisine Proteins 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 230000000155 isotopic effect Effects 0.000 description 1
- 229940060975 lantus Drugs 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 229940102988 levemir Drugs 0.000 description 1
- UGOZVNFCFYTPAZ-IOXYNQHNSA-N levemir Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=2N=CNC=2)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=2N=CNC=2)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=2C=CC=CC=2)C(C)C)CSSC[C@@H]2NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)C(C)C)CSSC[C@H](NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H](CSSC1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 UGOZVNFCFYTPAZ-IOXYNQHNSA-N 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- VOMXSOIBEJBQNF-UTTRGDHVSA-N novorapid Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1.C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 VOMXSOIBEJBQNF-UTTRGDHVSA-N 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000003094 perturbing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 238000006303 photolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000019525 primary metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 230000012846 protein folding Effects 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 101150029855 selB gene Proteins 0.000 description 1
- 230000014425 selenocysteine incorporation Effects 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229960001471 sodium selenite Drugs 0.000 description 1
- 239000011781 sodium selenite Substances 0.000 description 1
- 235000015921 sodium selenite Nutrition 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 108700020534 tetracycline resistance-encoding transposon repressor Proteins 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 229940126622 therapeutic monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 108060008226 thioredoxin Proteins 0.000 description 1
- 229940094937 thioredoxin Drugs 0.000 description 1
- 229940026454 tresiba Drugs 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/28—Insulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/61—Growth hormone [GH], i.e. somatotropin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/16—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from plants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/243—Colony Stimulating Factors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/249—Interferons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
- C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Botany (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Oncology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
本出願は、2016年8月30日に出願された米国仮特許出願第62/381,316号、及び、2017年7月28日に出願された同第62/537,986号の利益を主張するものであり、それら出願の全内容を、本明細書の一部を構成するものとして援用する。
ファイル名称「UTFB_P1174WO.txt」で格納され、(マイクロソフトウィンドウズ(登録商標)で測定した)3305KBであり、かつ、2017年8月30日に作成をした配列表を、本明細書と共に電子的に提出をするものであり、そして、その内容を、本明細書の一部を構成するものとして援用する。
本発明は、Office of Naval Researchが付与した認可番号第FA9550-10-1-0169号、及び、the Space and Naval
Warfare Systems Center,Pacificが付与した認可番号第N66001-14-2-4051号で特定される政府支援の下で完成をした。わが国の政府は、本発明において、一定の権利を有する。
Warfare Systems Center,Pacificが付与した認可番号第N66001-14-2-4051号で特定される政府支援の下で完成をした。わが国の政府は、本発明において、一定の権利を有する。
本発明は、タンパク質生物製剤の分野に関する。特に、本発明は、有益な特性を有するタンパク質生物製剤を製造する方法に関する。
モノクローナル抗体、タンパク質治療薬、及び、ワクチンを含むタンパク質生物製剤は、がん、感染症、ならびに、免疫疾患、及び、その他の疾患に対する有効な治療法であり、数10億ドル規模の市場を形成している。しかし、ほとんどの生物製剤は、微生物細胞では形成できない化学結合、すなわち、ジスルフィド類によって安定化されているため、大部分が高価な哺乳類細胞系で製造しなければならない。さらに、ジスルフィド結合は、化学的な還元を受けやすいため、血清や細胞内などの環境では切断される可能性があるので、多くの生物製剤の半減期を短くする。
大多数の生物製剤、すなわち、98%の治療用モノクローナル抗体は、チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞などの哺乳動物系で製造される。CHO細胞は、ヒト様グリコシル化を生じるという利点を有しており、また、ジスルフィドを担持したタンパク質を高収率で製造するために必要な折り畳みシャペロンと酸化還元機構とを有している。しかしながら、CHO細胞は、微生物施設よりも多額の設備投資を実質的に必要としており、製造期間の長期化(数日に対して数週間~数ヶ月)を招き、消耗品(例えば、培地)の費用が何倍にも高騰し、さらには、内因性レトロウイルス様粒子を除去するための追加の精製工程を必要とする。
細菌においてジスルフィドを担持した生物製剤を製造する2つの既存のアプローチがある。第1は、細胞内の化学的環境を変化させて、酸化させ、ジスルフィド形成を許容させることであるが、この変化は、中枢代謝に劇的な影響を及ぼすものであり、また、タンパク質の生産だけでなく発酵性能をも損ない得る。第2のアプローチは、ペリプラズムと呼ばれる小さな酸化コンパートメントに対して新生の生物製剤を分泌することである。このアプローチでは、分泌過程でのエネルギー損失が故に収率が低くなり、また、凝集によって、産物の損失にも影響が非常に及びやすくなる。これらの不都合が故に、いずれのアプローチも、ジスルフィドを担持した生物製剤の大規模生産に一般的に使われることはなく、高価な哺乳類バイオプロセスが幅をきかせている。重要なことに、いずれのアプローチも、ジスルフィド結合が、細胞質または血液などの環境における還元剤に対して敏感である、という本質的な問題は解決していない。
当該技術分野において、費用対効果の高い方法でタンパク質生物製剤を製造する方法が依然として待望されている。当該技術分野において、血液及び細胞質での安定なタンパク質生物製剤の製造方法が依然として待望されている。
本発明のある態様では、少なくとも2つのセレノシステイン残基を含むタンパク質であって、少なくとも2つの当該セレノシステイン残基の間に少なくとも1つのジセレニド結合を有するタンパク質を提供する。当該タンパク質は、配列番号1~1631、及び、当該配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される配列を含む。当該タンパク質は、配列番号1~1630、及び、当該配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される配列を含み得る。当該タンパク質は、配列番号1631の配列と、当該配列と少なくとも80%が同一である配列とを含み得る。
本発明の別の態様では、(i)配列番号472~801、及び、当該配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される重鎖配列、ならびに、(ii)配列番号812~1131、及び、当該配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される軽鎖配列を含む抗体分子を提供する。当該抗体分子での0~十五対のセレノシステイン残基が、0~十五対のシステイン残基と置換される。当該抗体は、当該重鎖と当該軽鎖との間に少なくとも1つのジセレニド結合を含み得る。当該抗体は、当該重鎖内、及び/または、当該軽鎖内に少なくとも1つの鎖内ジセレニド結合を含み得る。
本発明のさらに別の態様では、修飾インスリンタンパク質を提供する。同タンパク質は、(i)配列番号1142、1144、1146、1148、1150、1152、及び、1154、ならびに、当該配列と少なくとも80%が同一である配列から選択される配列を有するA鎖、ならびに、(ii)配列番号1143、1145、1147、1149、1151、1153、及び、1155、ならびに、当該配列と少なくとも80%が同一である配列から選択される配列を有するB鎖を含む。当該タンパク質は、当該A鎖と当該B鎖との間に少なくとも1つのジセレニド結合を含む。
本発明の1つの態様では、割り当てがされていないコドンが、対応するアンチコドンを有するセレノシステインtRNAによって認識されるように、ゲノム的に再コード化した細菌宿主を提供する。当該細菌宿主は、一対のシステインコドンが、割り当てがされていない当該コドンで置き換えられているタンパク質の変異型をコードする構築されたDNA配列を含む。当該変異型は、配列番号1~1631、及び、当該配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される配列を含む。当該変異型は、配列番号1~1630、及び、当該配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される配列を含み得る。当該変異型は、配列番号1631の配列、及び、当該配列と少なくとも80%同一の配列を含み得る。
本発明の別の態様では、細菌宿主を提供する。当該細菌宿主は、割り当てがされていないコドンが、対応するアンチコドンを有するセレノシステインtRNAによって認識されるように、ゲノム的に再コードしている。当該細菌宿主は、一対のシステインコドンが、割り当てがされていないコドンで置換されているモノクローナル抗体の変異型をコードする構築されたDNA配列を含む。当該モノクローナル抗体は、VL鎖を含んでおり、そして、当該VL鎖の第23位と第88位は、セレノシステイン残基で置換されている。当該モノクローナル抗体は、VH鎖を含んでおり、そして、当該VH鎖の第22位と第92位は、セレノシステイン残基で置換されている。
本発明のさらに別の態様では、タンパク質の変異型を製造する方法を提供する。当該タンパク質は、システイン残基同士の間にジスルフィド結合を有しており、また、当該変異型は、セレノシステイン残基同士の間にジセレニド結合を有する。割り当てがされていないコドンが、対応するアンチコドンを有するセレノシステインtRNAによって認識されるようにゲノム的に再コードしている細菌宿主を培養する。当該細菌宿主は、一対のシステインコドンが、割り当てがされていない当該コドンで置換されているタンパク質の変異型をコードする構築されたDNA配列を含む。当該培養は、当該タンパク質の当該変異型を発現する条件下で行う。当該変異型は、配列番号1~1631、及び、当該配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される配列を含む。当該変異型は、配列番号1~1630、及び、当該配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される配列を含み得る。当該変異型は、配列番号1631の配列と、当該配列と少なくとも80%同一の配列とを含み得る。
本発明の1つの態様では、モノクローナル抗体の変異型を製造する方法を提供する。当該モノクローナル抗体は、システイン残基同士の間にジスルフィド結合を有しており、そして、当該変異型は、セレノシステイン残基同士の間にジセレニド結合を有する。割り当てがされていないコドンが、対応するアンチコドンを有するセレノシステインtRNAによって認識されるようにゲノム的に再コードしている細菌宿主を培養する。当該細菌宿主は、一対のシステインコドンが、割り当てがされていないコドンで置換されている当該モノクローナル抗体の当該変異型をコードする構築されたDNA配列を含む。当該培養は、当該モノクローナル抗体の当該変異型を発現する条件下で行う。当該モノクローナル抗体は、VL鎖を含んでおり、そして、VL鎖の第23位と第88位は、セレノシステイン残基で置換されている。当該モノクローナル抗体は、VH鎖を含んでおり、そして、当該VH鎖の第22位と第92位は、セレノシステイン残基で置換されている。
本発明の別の態様では、タンパク質の変異型で哺乳動物を処置する方法を提供する。当該タンパク質の当該変異型を、当該哺乳動物に投与する。当該タンパク質は、システイン残基同士の間にジスルフィド結合を有する。当該変異型は、システイン残基同士の間のジスルフィド結合の代わりに、セレノシステイン残基同士の間にジセレニド結合を有する。当該変異型は、配列番号1~1631、及び、当該配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される配列を含む。当該変異型は、配列番号1~1630、及び、当該配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される配列を含み得る。当該変異型は、配列番号1631の配列と、当該配列と少なくとも80%が同一である配列を含み得る。
本発明のさらに別の態様では、モノクローナル抗体の変異型で哺乳動物を治療する方法を提供する。当該モノクローナル抗体の当該変異型を、当該哺乳動物に投与する。当該モノクローナル抗体は、システイン残基同士の間にジスルフィド結合を有しており、そして、当該変異型は、システイン残基間のジスルフィド結合の代わりにセレノシステイン残基同士の間にジセレニド結合を有する。当該モノクローナル抗体は、VL鎖を含んでおり、そして、当該VL鎖の第23位と第88位は、セレノシステイン残基で置換されている。当該モノクローナル抗体は、VH鎖を含んでおり、そして、当該VH鎖の第22位と第92位は、セレノシステイン残基で置換されている。
本発明の1つの態様では、構築された核酸分子とtRNA分子とを含むインビトロ翻訳系を提供する。当該構築された核酸分子は、一対のシステイン残基が、一対のセレノシステイン残基と置換されているタンパク質の変異型をコードする。当該変異型は、配列番号1~1631、及び、当該配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される配列を含む。当該変異型は、配列番号1~1630、及び、当該配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される配列を含み得る。当該変異型は、配列番号1631の配列と、当該配列と少なくとも80%同一の配列とを含み得る。当該核酸分子は、割り当てがされていないコドンを含むか、または、同族コドン抑制を利用して、セレノシステイン(複数可)を成長しているポリペプチドに取り込む。当該tRNA分子は、割り当てがされていない当該コドンに対応するアンチコドンを有するセレノシステインtRNAである。
本発明の他の態様では、構築された核酸分子、及び、tRNA分子を含むインビトロ翻訳系を提供する。当該構築された核酸分子は、VL鎖を含むモノクローナル抗体の変異型をコードする。当該VL鎖の第23位と第88位は、セレノシステイン残基で置換されている。当該モノクローナル抗体は、VH鎖を含んでおり、当該VH鎖の第22位と第92位は、セレノシステイン残基で置換されている。当該構築された核酸分子は、当該核酸において割り当てがされていないコドンと置換している少なくとも一対のシステインコドンを含む。当該tRNA分子は、割り当てがされていない当該コドンに相補的なアンチコドンを有するセレノシステインtRNAである。
本発明のさらに別の態様では、タンパク質の変異型を製造するための方法を提供する。当該タンパク質は、システイン残基同士の間にジスルフィド結合を有しており、当該変異型は、セレノシステイン残基同士の間にジセレニド結合を有する。当該タンパク質の当該変異型をコードする構築された核酸配列を翻訳する。当該構築された核酸配列は、割り当てがされていないコドンと置換している一対のシステインコドンを含む。当該変異型は、配列番号1~1631、及び、当該配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される配列を含む。当該変異型は、配列番号1~1630、及び、当該配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される配列を含み得る。当該変異型は、配列番号1631の配列と、当該配列と少なくとも80%が同一である配列とを含み得る。当該翻訳の工程は、割り当てがされていない当該コドンに対応するアンチコドンを有するセレノシステインtRNAを使用する。
本発明の1つの態様では、試料を試験する方法を提供する。試料を、タンパク質の変異型と接触させて、反応混合物を形成する。当該タンパク質は、システイン残基同士の間にジスルフィド結合を有する。当該変異型は、システイン残基同士の間のジスルフィド結合の代わりに、セレノシステイン残基同士の間にジセレニド結合を有する。当該変異型は、配列番号1~1631、及び、当該配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される配列を含む。当該変異型は、配列番号1~1630、及び、当該配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される配列を含み得る。当該変異型は、配列番号1631の配列と、当該配列と少なくとも80%が同一である配列とを含み得る。当該反応混合物を試験して、当該タンパク質の当該変異型に結合した特異的結合パートナーを検出する。
本発明の別の態様では、試料を試験するための方法を提供する。試料を、モノクローナル抗体の変異型と接触させて、反応混合物を形成する。当該モノクローナル抗体は、システイン残基同士の間にジスルフィド結合を有する。当該変異型は、システイン残基同士の間のジスルフィド結合の代わりに、セレノシステイン残基同士の間にジセレニド結合を有する。当該モノクローナル抗体は、VL鎖を含んでおり、そして、当該VL鎖の第23位と第88位は、セレノシステイン残基で置換されている。当該モノクローナル抗体は、VH鎖を含んでおり、そして、当該VH鎖の第22位と第92位は、セレノシステイン残基で置換されている。当該反応混合物を試験して、当該タンパク質の当該変異型に結合した特異的結合パートナーを検出する。
本発明のさらに別の態様では、修飾抗体を提供する。同修飾抗体は、少なくとも1つのジセレニド結合を含む。
本発明の1つの態様では、修飾インスリンタンパク質を提供する。同修飾インスリンタンパク質は、セレノシステインに置換する少なくとも1つのシステインを有する配列番号1630の残基90~110を有するA鎖、セレノシステインに置換する少なくとも1つのシステインを有する配列番号1630の残基25~54を有するB鎖、及び、当該A鎖と当該B鎖との間の少なくとも1つのジセレニド架橋を含む。
本発明の別の態様は、天然のヒトインスリンタンパク質にある2つのシステイン残基を置換する少なくとも2つのセレノシステイン残基を含む修飾ヒトインスリンタンパク質である。同タンパク質は、少なくとも2つの当該セレノシステイン残基の間に少なくとも1つのジセレニド結合を有する。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される:
(項目1)
少なくとも2つのセレノシステイン残基を含むタンパク質であって、少なくとも2つの前記セレノシステイン残基の間に少なくとも1つのジセレニド結合を有しており、前記タンパク質が、配列番号1~1630、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される配列を含む前記タンパク質。
(項目2)
少なくとも2つのセレノシステイン残基を含むタンパク質であって、少なくとも2つの前記セレノシステイン残基の間に少なくとも1つのジセレニド結合を有しており、前記タンパク質が、配列番号1631の配列、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列を含む、項目1に記載のタンパク質。
(項目3)
配列番号472~801、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される重鎖配列と、配列番号812~1131、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される軽鎖配列とを含む抗体分子であって、前記抗体分子でのセレノシステイン残基の0~十五対が、0~十五対のシステイン残基で置換されており、かつ、前記抗体が、前記重鎖と前記軽鎖との間に少なくとも1つのジセレニド結合を含む、前記抗体分子。
(項目4)
配列番号1142、1144、1146、1148、1150、1152、及び、1154から選択される配列、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列を有するA鎖、配列番号1143、1145、1147、1149、1151、1153、及び、1155から選択される配列、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列を有するB鎖を含む修飾インスリンタンパク質であって、前記タンパク質が、前記A鎖と前記B鎖との間に少なくとも1つのジセレニド結合を含む、前記修飾インスリンタンパク質。
(項目5)
割り当てがされていないコドンが、対応するアンチコドンを有するセレノシステインtRNAによって認識されるようにゲノム的に再コードした細菌宿主であって、前記細菌宿主は、一対のシステインコドンが、割り当てがされていない前記コドンで置換されたタンパク質の変異型をコードする構築されたDNA配列を含み、前記変異型は、配列番号1~1630、及び、前記前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される配列を含む、前記細菌宿主。
(項目6)
割り当てがされていないコドンが、対応するアンチコドンを有するセレノシステインtRNAによって認識されるようにゲノム的に再コードした細菌宿主であって、前記細菌宿主は、一対のシステインコドンが、割り当てがされていない前記コドンで置換されたタンパク質の変異型をコードする構築されたDNA配列を含み、前記変異型は、配列番号1631の配列、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列を含む、項目5に記載の前記細菌宿主。
(項目7)
前記変異型が、モノクローナル抗体である、項目5または6に記載の細菌宿主。
(項目8)
前記モノクローナル抗体が、配列番号472~801、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される重鎖配列を含む、項目7に記載の細菌宿主。
(項目9)
前記モノクローナル抗体が、配列番号812~1131、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される軽鎖配列を含む、項目7に記載の細菌宿主。
(項目10)
前記モノクローナル抗体が、配列番号16~243、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される重鎖可変領域配列を含む、項目7に記載の細菌宿主。
(項目11)
前記モノクローナル抗体が、配列番号244~471、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される軽鎖可変領域配列を含む、項目7に記載の細菌宿主。
(項目12)
前記モノクローナル抗体が、配列番号1~15、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される定常鎖配列をさらに含む、項目10または11に記載の細菌宿主。
(項目13)
前記変異型が、治療用タンパク質である、項目5または6に記載の細菌宿主。
(項目14)
前記変異型が、予防用タンパク質である、項目5または6に記載の細菌宿主。
(項目15)
割り当てがされていない前記コドンが、UAGである、項目5または6に記載の細菌宿主。
(項目16)
割り当てがされていないコドンが、対応するアンチコドンを有するセレノシステインtRNAによって認識されるようにゲノム的に再コードした細菌宿主であって、前記細菌宿主は、一対のシステインコドンが、割り当てがされていない前記コドンで置換されたモノクローナル抗体の変異型をコードする構築されたDNA配列を含み、前記モノクローナル抗体は、VL鎖を含んでおり、かつ、前記VL鎖の第23位と第88位が、セレノシステイン残基で置換されており、及び、前記モノクローナル抗体は、VH鎖を含んでおり、かつ、前記VH鎖の第22位と第92位が、セレノシステイン残基で置換されている、前記細菌宿主。
(項目17)
割り当てがされていない前記コドンが、UAGである、項目16に記載の細菌宿主。
(項目18)
タンパク質の変異型を製造する方法であって、前記タンパク質が、システイン残基同士の間にジスルフィド結合を有しており、前記変異型が、セレノシステイン残基同士の間にジセレニド結合を有しており、前記方法は、
割り当てがされていないコドンが、対応するアンチコドンを有するセレノシステインtRNAによって認識されるように、ゲノム的に再コードした細菌宿主を培養することを含み、前記細菌宿主は、一対のシステインコドンが、割り当てがされていない前記コドンで置換されている前記タンパク質の変異型をコードする構築されたDNA配列を含み、前記培養は、前記タンパク質の変異型が発現される条件下であり、前記変異型は、配列番号1~1630、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される配列を含む、前記方法。
(項目19)
タンパク質の変異型を製造する項目18に記載の方法であって、前記タンパク質が、システイン残基同士の間にジスルフィド結合を有しており、前記変異型が、セレノシステイン残基同士の間にジセレニド結合を有しており、前記方法は、
割り当てがされていないコドンが、対応するアンチコドンを有するセレノシステインtRNAによって認識されるように、ゲノム的に再コードした細菌宿主を培養することを含み、前記細菌宿主は、一対のシステインコドンが、割り当てがされていない前記コドンで置換されている前記タンパク質の変異型をコードする構築されたDNA配列を含み、前記培養は、前記タンパク質の変異型が発現される条件下であり、前記変異型は、配列番号1631、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列を含む、項目18に記載
の方法。
(項目20)
培地または前記細菌宿主の細胞に由来する前記タンパク質の前記変異型を回収する工程をさらに含む、項目18または19に記載の方法。
(項目21)
前記変異型が、モノクローナル抗体である、項目18または19に記載の方法。
(項目22)
前記モノクローナル抗体が、配列番号472~801、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される重鎖配列を含む、項目21に記載の方法。
(項目23)
前記モノクローナル抗体が、配列番号812~1131、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される軽鎖配列を含む、項目21に記載の方法。
(項目24)
前記モノクローナル抗体が、配列番号16~243、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される重鎖可変領域配列を含む、項目21に記載の方法。
(項目25)
前記モノクローナル抗体が、配列番号244~471、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される軽鎖可変領域配列を含む、項目21に記載の方法。
(項目26)
前記モノクローナル抗体が、配列番号1~15、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される定常鎖配列をさらに含む、項目24または25に記載の方法。
(項目27)
前記変異型が、治療用タンパク質である、項目18または19に記載の方法。
(項目28)
前記変異型が、予防用タンパク質である、項目18または19に記載の方法。
(項目29)
割り当てがされていない前記コドンが、UAGである、項目18または19に記載の方法。
(項目30)
モノクローナル抗体の変異型を製造する方法であって、前記モノクローナル抗体が、システイン残基同士の間にジスルフィド結合を有しており、前記変異型が、セレノシステイン残基同士の間にジセレニド結合を有しており、前記方法は、
割り当てがされていないコドンが、対応するアンチコドンを有するセレノシステインtRNAによって認識されるように、ゲノム的に再コードした細菌宿主を培養することを含み、前記細菌宿主は、一対のシステインコドンが、割り当てがされていない前記コドンで置換されている前記モノクローナル抗体の変異型をコードする構築されたDNA配列を含み、前記培養は、前記モノクローナル抗体の変異型が発現される条件下であり、前記モノクローナル抗体は、VL鎖を含んでおり、かつ、前記VL鎖の第23位と第88位が、セレノシステイン残基で置換されており、及び、前記モノクローナル抗体は、VH鎖を含んでおり、かつ、前記VH鎖の第22位と第92位が、セレノシステイン残基で置換されている、前記方法。
(項目31)
割り当てがされていない前記コドンが、UAGである、項目30に記載の方法。
(項目32)
タンパク質の変異型で哺乳動物を処置する方法であって、
前記タンパク質の前記変異型を前記哺乳動物に投与する工程を含み、前記タンパク質は、システイン残基同士の間にジスルフィド結合を有しており、前記変異型は、システイン残基同士の間の前記ジスルフィド結合の代わりにセレノシステイン残基同士の間にジセレニド結合を有しており、前記変異型は、配列番号1~1630、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群より選択される配列を含む、前記方法。
(項目33)
タンパク質の変異型で哺乳動物を処置する項目32に記載の方法であって、
前記タンパク質の前記変異型を前記哺乳動物に投与する工程を含み、前記タンパク質は、システイン残基同士の間にジスルフィド結合を有しており、前記変異型は、システイン残基同士の間の前記ジスルフィド結合の代わりにセレノシステイン残基同士の間にジセレニド結合を有しており、前記変異型は、配列番号1631、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列を含む、項目32に記載の方法。
(項目34)
前記投与が、静脈内投与である、項目32または33に記載の方法。
(項目35)
前記タンパク質が、モノクローナル抗体である、項目32または33に記載の方法。
(項目36)
前記タンパク質が、治療用タンパク質である、項目32または33に記載の方法。
(項目37)
前記タンパク質が、予防用タンパク質である、項目32または33に記載の方法。
(項目38)
モノクローナル抗体の変異型で哺乳動物を処置する方法であって、
前記モノクローナル抗体の前記変異型を前記哺乳動物に投与する工程を含み、前記モノクローナル抗体は、システイン残基同士の間にジスルフィド結合を有しており、前記変異型は、システイン残基同士の間の前記ジスルフィド結合の代わりにセレノシステイン残基同士の間にジセレニド結合を有しており、前記モノクローナル抗体は、VL鎖を含んでおり、かつ、前記VL鎖の第23位と第88位が、セレノシステイン残基で置換されており、及び、前記モノクローナル抗体は、VH鎖を含んでおり、かつ、前記VH鎖の第22位と第92位が、セレノシステイン残基で置換されている、前記方法。
(項目39)
前記抗体分子での少なくとも一対のセレノシステイン残基が、一対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体。
(項目40)
前記抗体分子での一対のセレノシステイン残基が、一対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体分子。
(項目41)
前記抗体分子での二対のセレノシステイン残基が、二対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体分子。
(項目42)
前記抗体分子での三対のセレノシステイン残基が、三対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体分子。
(項目43)
前記抗体分子での四対のセレノシステイン残基が、四対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体分子。
(項目44)
前記抗体分子での五対のセレノシステイン残基が、五対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体分子。
(項目45)
前記抗体分子での六対のセレノシステイン残基が、六対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体分子。
(項目46)
前記抗体分子での七対のセレノシステイン残基が、七対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体分子。
(項目47)
前記抗体分子での八対のセレノシステイン残基が、八対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体分子。
(項目48)
前記抗体分子での九対のセレノシステイン残基が、九対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体分子。
(項目49)
前記抗体分子での十対のセレノシステイン残基が、十対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体分子。
(項目50)
前記抗体分子での十一対のセレノシステイン残基が、十一対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体分子。
(項目51)
前記抗体分子での十二対のセレノシステイン残基が、十二対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体分子。
(項目52)
前記抗体分子での十三対のセレノシステイン残基が、十三対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体分子。
(項目53)
前記抗体分子での十四対のセレノシステイン残基が、十四対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体分子。
(項目54)
前記抗体分子での十五対のセレノシステイン残基が、十五対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体分子。
(項目55)
構築された核酸分子とtRNA分子とを含むインビトロ翻訳系またはインビトロ転写及び翻訳系であって、構築された前記核酸分子が、一対のシステイン残基が一対のシステイン残基で置換されたタンパク質の変異型をコードし、前記変異型が、配列番号1~1631、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される配列を含み、前記核酸分子が、割り当てがされていないコドンドンを含み、あるいは、同族コドン抑制を利用して、セレノシステイン残基を取り込み、前記tRNA分子は、割り当てがされていない前記コドンに対応するアンチコドンを有するセレノシステインtRNAである、前記インビトロ翻訳系またはインビトロ転写及び翻訳系。
(項目56)
前記変異型が、モノクローナル抗体である、項目55に記載のインビトロ翻訳系またはインビトロ転写及び翻訳系。
(項目57)
前記モノクローナル抗体が、配列番号472~801、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される重鎖配列を含む、項目55に記載のインビトロ翻訳系またはインビトロ転写及び翻訳系。
(項目58)
前記モノクローナル抗体が、配列番号812~1131、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される軽鎖配列を含む、項目55に記載のインビトロ翻訳系またはインビトロ転写及び翻訳系。
(項目59)
前記モノクローナル抗体が、配列番号16~243、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される重鎖可変領域配列を含む、項目55に記
載のインビトロ翻訳系またはインビトロ転写及び翻訳系。
(項目60)
前記モノクローナル抗体が、配列番号244~471、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される軽鎖可変領域配列を含む、項目55に記載のインビトロ翻訳系またはインビトロ転写及び翻訳系。
(項目61)
前記モノクローナル抗体が、配列番号1~15、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される定常鎖配列をさらに含む、項目55に記載のインビトロ翻訳系またはインビトロ転写及び翻訳系。
(項目62)
前記変異型が、治療用タンパク質である、項目55に記載のインビトロ翻訳系またはインビトロ転写及び翻訳系。
(項目63)
前記変異型が、予防用タンパク質である、項目55に記載のインビトロ翻訳系またはインビトロ転写及び翻訳系。
(項目64)
割り当てがされていない前記コドンが、UAGである、項目55に記載のインビトロ翻訳系またはインビトロ転写及び翻訳系。
(項目65)
構築された核酸分子とtRNA分子とを含むインビトロ翻訳系またはインビトロ転写及び翻訳系であって、前記構築された核酸分子が、モノクローナル抗体の変異型をコードするものであって、同モノクローナル抗体は、VL鎖を含んでおり、かつ、前記VL鎖の第23位と第88位はセレノシステイン残基で置換されており、そして、前記モノクローナル抗体はVH鎖を含んでおり、かつ、前記VH鎖の第22位と第92位はセレノシステイン残基で置換されており、前記構築された核酸分子は、前記核酸分子において割り当てがされていないコドンと置換された少なくとも一対のシステインコドンを含み、前記tRNA分子は、割り当てがされていない前記コドンに相補的なアンチコドンを有するセレノシステインtRNAである、前記インビトロ翻訳系またはインビトロ転写及び翻訳系。
(項目66)
割り当てがされていない前記コドンが、UAGである、項目65に記載のインビトロ翻訳系またはインビトロ転写及び翻訳系。
(項目67)
タンパク質の変異型を製造する方法であって、前記タンパク質が、システイン残基同士の間にジスルフィド結合を有しており、前記変異型が、セレノシステイン残基同士の間にジセレニド結合を有しており、前記方法は、
前記タンパク質の前記変異型をコードする構築された核酸配列をインビトロで翻訳することを含み、前記構築された核酸配列において、一対のシステインコドンが、割り当てがされていないコドンで置換されており、前記変異型は、配列番号1~1630、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される配列を含み、前記翻訳の工程が、割り当てがされていない前記コドンに対応するアンチコドンを有するセレノシステインtRNAを使用する、前記方法。
(項目68)
タンパク質の変異型を製造する項目67に記載の方法であって、前記タンパク質が、システイン残基同士の間にジスルフィド結合を有しており、前記変異型が、セレノシステイン残基同士の間にジセレニド結合を有しており、前記方法は、
前記タンパク質の前記変異型をコードする構築された核酸配列をインビトロで翻訳することを含み、前記構築された核酸配列において、一対のシステインコドンが、割り当てがされていないコドンで置換されており、前記変異型は、配列番号1631、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される配列を含み、前記翻訳の工程が、割り当てがされていない前記コドンに対応するアンチコドンを有するセレノシステインtRNAを使用する、項目67に記載の方法。
(項目69)
前記変異型が、モノクローナル抗体である、項目67または68に記載の方法。
(項目70)
前記モノクローナル抗体が、配列番号472~801、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される重鎖配列を含む、項目69に記載の方法。
(項目71)
前記モノクローナル抗体が、配列番号812~1131、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される軽鎖配列を含む、項目69に記載の方法。
(項目72)
前記モノクローナル抗体が、配列番号16~243、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される重鎖可変領域配列を含む、項目69に記載の方法。
(項目73)
前記モノクローナル抗体が、配列番号244~471、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される軽鎖可変領域配列を含む、項目69に記載の方法。
(項目74)
前記モノクローナル抗体が、配列番号1~15、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される定常鎖配列をさらに含む、項目72または73に記載の方法。
(項目75)
前記変異型が、治療用タンパク質である、項目67または68に記載の方法。
(項目76)
前記変異型が、予防用タンパク質である、項目67または68に記載の方法。
(項目77)
割り当てがされていない前記コドンが、UAGである、項目67または68に記載の方法。
(項目78)
試料を試験する方法であって、
試料を、タンパク質の変異型と接触させて反応混合物を形成する工程であって、前記タンパク質が、システイン残基同士の間にジスルフィド結合を有しており、前記変異型が、システイン残基同士の間の前記ジスルフィド結合の代わりに、セレノシステイン残基同士の間にジセレニド結合を有しており、前記変異型は、配列番号1~1630、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される配列を含む、前記工程、及び
前記反応混合物を試験して、前記タンパク質の前記変異型に結合した特異的結合パートナーを検出する工程、
を含む前記方法。
(項目79)
試料を試験する項目78に記載の方法が、
試料を、タンパク質の変異型と接触させて反応混合物を形成する工程であって、前記タンパク質が、システイン残基同士の間にジスルフィド結合を有しており、前記変異型が、システイン残基同士の間の前記ジスルフィド結合の代わりに、セレノシステイン残基同士の間にジセレニド結合を有しており、前記変異型は、配列番号1631、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列を含む、前記工程、及び
前記反応混合物を試験して、前記タンパク質の前記変異型に結合した特異的結合パートナーを検出する工程、
を含む項目78に記載の方法。
(項目80)
試料を試験する方法であって、
試料を、モノクローナル抗体の変異型と接触させて反応混合物を形成する工程であって、前記モノクローナル抗体が、システイン残基同士の間にジスルフィド結合を有しており、前記変異型が、システイン残基同士の間の前記ジスルフィド結合の代わりに、セレノシステイン残基同士の間にジセレニド結合を有しており、前記モノクローナル抗体は、VL鎖を含んでおり、かつ、前記VL鎖の第23位と第88位はセレノシステイン残基で置換されており、そして、前記モノクローナル抗体はVH鎖を含んでおり、かつ、前記VH鎖の第22位と第92位はセレノシステイン残基で置換されている、前記工程、及び
前記反応混合物を試験して、前記タンパク質の前記変異型に結合した特異的結合パートナーを検出する工程、
を含む前記方法。
(項目81)
少なくとも1つのジセレニド結合を含む修飾抗体。
(項目82)
前記ジセレニド結合が、存在する特異性が同じ抗体でのジスルフィド結合の位置にある、項目81に記載の修飾抗体。
(項目83)
前記ジセレニド結合が、分子間である、項目81に記載の修飾抗体。
(項目84)
IgA、IgD、IgE、IgG、及び、IgMからなる群から選択されるアイソタイプから選択される、項目81に記載の修飾抗体。
(項目85)
セレノシステインに置換する少なくとも1つのシステインを有する配列番号1630の残基90~110を有するA鎖、セレノシステインに置換する少なくとも1つのシステインを有する配列番号1630の残基25~54を有するB鎖、及び、前記A鎖と前記B鎖との間にある少なくとも1つのジセレニド結合を含む、修飾インスリンタンパク質。
(項目86)
天然のヒトインスリンタンパク質にある2つのシステイン残基を置換する少なくとも2つのセレノシステイン残基を含み、少なくとも2つの前記セレノシステイン残基の間に少なくとも1つのジセレニド結合を有する、修飾ヒトインスリンタンパク質。
(項目87)
組換え細菌において製造される、項目86に記載の修飾ヒトインスリンタンパク質。
(項目88)
セレノシステインtRNAが、前記細菌のアンバーコドンを認識するように前記組換え細菌が再コードされる、項目87に記載の修飾ヒトインスリンタンパク質。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される:
(項目1)
少なくとも2つのセレノシステイン残基を含むタンパク質であって、少なくとも2つの前記セレノシステイン残基の間に少なくとも1つのジセレニド結合を有しており、前記タンパク質が、配列番号1~1630、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される配列を含む前記タンパク質。
(項目2)
少なくとも2つのセレノシステイン残基を含むタンパク質であって、少なくとも2つの前記セレノシステイン残基の間に少なくとも1つのジセレニド結合を有しており、前記タンパク質が、配列番号1631の配列、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列を含む、項目1に記載のタンパク質。
(項目3)
配列番号472~801、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される重鎖配列と、配列番号812~1131、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される軽鎖配列とを含む抗体分子であって、前記抗体分子でのセレノシステイン残基の0~十五対が、0~十五対のシステイン残基で置換されており、かつ、前記抗体が、前記重鎖と前記軽鎖との間に少なくとも1つのジセレニド結合を含む、前記抗体分子。
(項目4)
配列番号1142、1144、1146、1148、1150、1152、及び、1154から選択される配列、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列を有するA鎖、配列番号1143、1145、1147、1149、1151、1153、及び、1155から選択される配列、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列を有するB鎖を含む修飾インスリンタンパク質であって、前記タンパク質が、前記A鎖と前記B鎖との間に少なくとも1つのジセレニド結合を含む、前記修飾インスリンタンパク質。
(項目5)
割り当てがされていないコドンが、対応するアンチコドンを有するセレノシステインtRNAによって認識されるようにゲノム的に再コードした細菌宿主であって、前記細菌宿主は、一対のシステインコドンが、割り当てがされていない前記コドンで置換されたタンパク質の変異型をコードする構築されたDNA配列を含み、前記変異型は、配列番号1~1630、及び、前記前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される配列を含む、前記細菌宿主。
(項目6)
割り当てがされていないコドンが、対応するアンチコドンを有するセレノシステインtRNAによって認識されるようにゲノム的に再コードした細菌宿主であって、前記細菌宿主は、一対のシステインコドンが、割り当てがされていない前記コドンで置換されたタンパク質の変異型をコードする構築されたDNA配列を含み、前記変異型は、配列番号1631の配列、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列を含む、項目5に記載の前記細菌宿主。
(項目7)
前記変異型が、モノクローナル抗体である、項目5または6に記載の細菌宿主。
(項目8)
前記モノクローナル抗体が、配列番号472~801、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される重鎖配列を含む、項目7に記載の細菌宿主。
(項目9)
前記モノクローナル抗体が、配列番号812~1131、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される軽鎖配列を含む、項目7に記載の細菌宿主。
(項目10)
前記モノクローナル抗体が、配列番号16~243、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される重鎖可変領域配列を含む、項目7に記載の細菌宿主。
(項目11)
前記モノクローナル抗体が、配列番号244~471、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される軽鎖可変領域配列を含む、項目7に記載の細菌宿主。
(項目12)
前記モノクローナル抗体が、配列番号1~15、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される定常鎖配列をさらに含む、項目10または11に記載の細菌宿主。
(項目13)
前記変異型が、治療用タンパク質である、項目5または6に記載の細菌宿主。
(項目14)
前記変異型が、予防用タンパク質である、項目5または6に記載の細菌宿主。
(項目15)
割り当てがされていない前記コドンが、UAGである、項目5または6に記載の細菌宿主。
(項目16)
割り当てがされていないコドンが、対応するアンチコドンを有するセレノシステインtRNAによって認識されるようにゲノム的に再コードした細菌宿主であって、前記細菌宿主は、一対のシステインコドンが、割り当てがされていない前記コドンで置換されたモノクローナル抗体の変異型をコードする構築されたDNA配列を含み、前記モノクローナル抗体は、VL鎖を含んでおり、かつ、前記VL鎖の第23位と第88位が、セレノシステイン残基で置換されており、及び、前記モノクローナル抗体は、VH鎖を含んでおり、かつ、前記VH鎖の第22位と第92位が、セレノシステイン残基で置換されている、前記細菌宿主。
(項目17)
割り当てがされていない前記コドンが、UAGである、項目16に記載の細菌宿主。
(項目18)
タンパク質の変異型を製造する方法であって、前記タンパク質が、システイン残基同士の間にジスルフィド結合を有しており、前記変異型が、セレノシステイン残基同士の間にジセレニド結合を有しており、前記方法は、
割り当てがされていないコドンが、対応するアンチコドンを有するセレノシステインtRNAによって認識されるように、ゲノム的に再コードした細菌宿主を培養することを含み、前記細菌宿主は、一対のシステインコドンが、割り当てがされていない前記コドンで置換されている前記タンパク質の変異型をコードする構築されたDNA配列を含み、前記培養は、前記タンパク質の変異型が発現される条件下であり、前記変異型は、配列番号1~1630、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される配列を含む、前記方法。
(項目19)
タンパク質の変異型を製造する項目18に記載の方法であって、前記タンパク質が、システイン残基同士の間にジスルフィド結合を有しており、前記変異型が、セレノシステイン残基同士の間にジセレニド結合を有しており、前記方法は、
割り当てがされていないコドンが、対応するアンチコドンを有するセレノシステインtRNAによって認識されるように、ゲノム的に再コードした細菌宿主を培養することを含み、前記細菌宿主は、一対のシステインコドンが、割り当てがされていない前記コドンで置換されている前記タンパク質の変異型をコードする構築されたDNA配列を含み、前記培養は、前記タンパク質の変異型が発現される条件下であり、前記変異型は、配列番号1631、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列を含む、項目18に記載
の方法。
(項目20)
培地または前記細菌宿主の細胞に由来する前記タンパク質の前記変異型を回収する工程をさらに含む、項目18または19に記載の方法。
(項目21)
前記変異型が、モノクローナル抗体である、項目18または19に記載の方法。
(項目22)
前記モノクローナル抗体が、配列番号472~801、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される重鎖配列を含む、項目21に記載の方法。
(項目23)
前記モノクローナル抗体が、配列番号812~1131、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される軽鎖配列を含む、項目21に記載の方法。
(項目24)
前記モノクローナル抗体が、配列番号16~243、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される重鎖可変領域配列を含む、項目21に記載の方法。
(項目25)
前記モノクローナル抗体が、配列番号244~471、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される軽鎖可変領域配列を含む、項目21に記載の方法。
(項目26)
前記モノクローナル抗体が、配列番号1~15、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される定常鎖配列をさらに含む、項目24または25に記載の方法。
(項目27)
前記変異型が、治療用タンパク質である、項目18または19に記載の方法。
(項目28)
前記変異型が、予防用タンパク質である、項目18または19に記載の方法。
(項目29)
割り当てがされていない前記コドンが、UAGである、項目18または19に記載の方法。
(項目30)
モノクローナル抗体の変異型を製造する方法であって、前記モノクローナル抗体が、システイン残基同士の間にジスルフィド結合を有しており、前記変異型が、セレノシステイン残基同士の間にジセレニド結合を有しており、前記方法は、
割り当てがされていないコドンが、対応するアンチコドンを有するセレノシステインtRNAによって認識されるように、ゲノム的に再コードした細菌宿主を培養することを含み、前記細菌宿主は、一対のシステインコドンが、割り当てがされていない前記コドンで置換されている前記モノクローナル抗体の変異型をコードする構築されたDNA配列を含み、前記培養は、前記モノクローナル抗体の変異型が発現される条件下であり、前記モノクローナル抗体は、VL鎖を含んでおり、かつ、前記VL鎖の第23位と第88位が、セレノシステイン残基で置換されており、及び、前記モノクローナル抗体は、VH鎖を含んでおり、かつ、前記VH鎖の第22位と第92位が、セレノシステイン残基で置換されている、前記方法。
(項目31)
割り当てがされていない前記コドンが、UAGである、項目30に記載の方法。
(項目32)
タンパク質の変異型で哺乳動物を処置する方法であって、
前記タンパク質の前記変異型を前記哺乳動物に投与する工程を含み、前記タンパク質は、システイン残基同士の間にジスルフィド結合を有しており、前記変異型は、システイン残基同士の間の前記ジスルフィド結合の代わりにセレノシステイン残基同士の間にジセレニド結合を有しており、前記変異型は、配列番号1~1630、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群より選択される配列を含む、前記方法。
(項目33)
タンパク質の変異型で哺乳動物を処置する項目32に記載の方法であって、
前記タンパク質の前記変異型を前記哺乳動物に投与する工程を含み、前記タンパク質は、システイン残基同士の間にジスルフィド結合を有しており、前記変異型は、システイン残基同士の間の前記ジスルフィド結合の代わりにセレノシステイン残基同士の間にジセレニド結合を有しており、前記変異型は、配列番号1631、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列を含む、項目32に記載の方法。
(項目34)
前記投与が、静脈内投与である、項目32または33に記載の方法。
(項目35)
前記タンパク質が、モノクローナル抗体である、項目32または33に記載の方法。
(項目36)
前記タンパク質が、治療用タンパク質である、項目32または33に記載の方法。
(項目37)
前記タンパク質が、予防用タンパク質である、項目32または33に記載の方法。
(項目38)
モノクローナル抗体の変異型で哺乳動物を処置する方法であって、
前記モノクローナル抗体の前記変異型を前記哺乳動物に投与する工程を含み、前記モノクローナル抗体は、システイン残基同士の間にジスルフィド結合を有しており、前記変異型は、システイン残基同士の間の前記ジスルフィド結合の代わりにセレノシステイン残基同士の間にジセレニド結合を有しており、前記モノクローナル抗体は、VL鎖を含んでおり、かつ、前記VL鎖の第23位と第88位が、セレノシステイン残基で置換されており、及び、前記モノクローナル抗体は、VH鎖を含んでおり、かつ、前記VH鎖の第22位と第92位が、セレノシステイン残基で置換されている、前記方法。
(項目39)
前記抗体分子での少なくとも一対のセレノシステイン残基が、一対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体。
(項目40)
前記抗体分子での一対のセレノシステイン残基が、一対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体分子。
(項目41)
前記抗体分子での二対のセレノシステイン残基が、二対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体分子。
(項目42)
前記抗体分子での三対のセレノシステイン残基が、三対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体分子。
(項目43)
前記抗体分子での四対のセレノシステイン残基が、四対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体分子。
(項目44)
前記抗体分子での五対のセレノシステイン残基が、五対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体分子。
(項目45)
前記抗体分子での六対のセレノシステイン残基が、六対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体分子。
(項目46)
前記抗体分子での七対のセレノシステイン残基が、七対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体分子。
(項目47)
前記抗体分子での八対のセレノシステイン残基が、八対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体分子。
(項目48)
前記抗体分子での九対のセレノシステイン残基が、九対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体分子。
(項目49)
前記抗体分子での十対のセレノシステイン残基が、十対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体分子。
(項目50)
前記抗体分子での十一対のセレノシステイン残基が、十一対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体分子。
(項目51)
前記抗体分子での十二対のセレノシステイン残基が、十二対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体分子。
(項目52)
前記抗体分子での十三対のセレノシステイン残基が、十三対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体分子。
(項目53)
前記抗体分子での十四対のセレノシステイン残基が、十四対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体分子。
(項目54)
前記抗体分子での十五対のセレノシステイン残基が、十五対のシステイン残基で置換されている、項目3に記載の抗体分子。
(項目55)
構築された核酸分子とtRNA分子とを含むインビトロ翻訳系またはインビトロ転写及び翻訳系であって、構築された前記核酸分子が、一対のシステイン残基が一対のシステイン残基で置換されたタンパク質の変異型をコードし、前記変異型が、配列番号1~1631、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される配列を含み、前記核酸分子が、割り当てがされていないコドンドンを含み、あるいは、同族コドン抑制を利用して、セレノシステイン残基を取り込み、前記tRNA分子は、割り当てがされていない前記コドンに対応するアンチコドンを有するセレノシステインtRNAである、前記インビトロ翻訳系またはインビトロ転写及び翻訳系。
(項目56)
前記変異型が、モノクローナル抗体である、項目55に記載のインビトロ翻訳系またはインビトロ転写及び翻訳系。
(項目57)
前記モノクローナル抗体が、配列番号472~801、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される重鎖配列を含む、項目55に記載のインビトロ翻訳系またはインビトロ転写及び翻訳系。
(項目58)
前記モノクローナル抗体が、配列番号812~1131、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される軽鎖配列を含む、項目55に記載のインビトロ翻訳系またはインビトロ転写及び翻訳系。
(項目59)
前記モノクローナル抗体が、配列番号16~243、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される重鎖可変領域配列を含む、項目55に記
載のインビトロ翻訳系またはインビトロ転写及び翻訳系。
(項目60)
前記モノクローナル抗体が、配列番号244~471、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される軽鎖可変領域配列を含む、項目55に記載のインビトロ翻訳系またはインビトロ転写及び翻訳系。
(項目61)
前記モノクローナル抗体が、配列番号1~15、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される定常鎖配列をさらに含む、項目55に記載のインビトロ翻訳系またはインビトロ転写及び翻訳系。
(項目62)
前記変異型が、治療用タンパク質である、項目55に記載のインビトロ翻訳系またはインビトロ転写及び翻訳系。
(項目63)
前記変異型が、予防用タンパク質である、項目55に記載のインビトロ翻訳系またはインビトロ転写及び翻訳系。
(項目64)
割り当てがされていない前記コドンが、UAGである、項目55に記載のインビトロ翻訳系またはインビトロ転写及び翻訳系。
(項目65)
構築された核酸分子とtRNA分子とを含むインビトロ翻訳系またはインビトロ転写及び翻訳系であって、前記構築された核酸分子が、モノクローナル抗体の変異型をコードするものであって、同モノクローナル抗体は、VL鎖を含んでおり、かつ、前記VL鎖の第23位と第88位はセレノシステイン残基で置換されており、そして、前記モノクローナル抗体はVH鎖を含んでおり、かつ、前記VH鎖の第22位と第92位はセレノシステイン残基で置換されており、前記構築された核酸分子は、前記核酸分子において割り当てがされていないコドンと置換された少なくとも一対のシステインコドンを含み、前記tRNA分子は、割り当てがされていない前記コドンに相補的なアンチコドンを有するセレノシステインtRNAである、前記インビトロ翻訳系またはインビトロ転写及び翻訳系。
(項目66)
割り当てがされていない前記コドンが、UAGである、項目65に記載のインビトロ翻訳系またはインビトロ転写及び翻訳系。
(項目67)
タンパク質の変異型を製造する方法であって、前記タンパク質が、システイン残基同士の間にジスルフィド結合を有しており、前記変異型が、セレノシステイン残基同士の間にジセレニド結合を有しており、前記方法は、
前記タンパク質の前記変異型をコードする構築された核酸配列をインビトロで翻訳することを含み、前記構築された核酸配列において、一対のシステインコドンが、割り当てがされていないコドンで置換されており、前記変異型は、配列番号1~1630、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される配列を含み、前記翻訳の工程が、割り当てがされていない前記コドンに対応するアンチコドンを有するセレノシステインtRNAを使用する、前記方法。
(項目68)
タンパク質の変異型を製造する項目67に記載の方法であって、前記タンパク質が、システイン残基同士の間にジスルフィド結合を有しており、前記変異型が、セレノシステイン残基同士の間にジセレニド結合を有しており、前記方法は、
前記タンパク質の前記変異型をコードする構築された核酸配列をインビトロで翻訳することを含み、前記構築された核酸配列において、一対のシステインコドンが、割り当てがされていないコドンで置換されており、前記変異型は、配列番号1631、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される配列を含み、前記翻訳の工程が、割り当てがされていない前記コドンに対応するアンチコドンを有するセレノシステインtRNAを使用する、項目67に記載の方法。
(項目69)
前記変異型が、モノクローナル抗体である、項目67または68に記載の方法。
(項目70)
前記モノクローナル抗体が、配列番号472~801、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される重鎖配列を含む、項目69に記載の方法。
(項目71)
前記モノクローナル抗体が、配列番号812~1131、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される軽鎖配列を含む、項目69に記載の方法。
(項目72)
前記モノクローナル抗体が、配列番号16~243、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される重鎖可変領域配列を含む、項目69に記載の方法。
(項目73)
前記モノクローナル抗体が、配列番号244~471、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される軽鎖可変領域配列を含む、項目69に記載の方法。
(項目74)
前記モノクローナル抗体が、配列番号1~15、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される定常鎖配列をさらに含む、項目72または73に記載の方法。
(項目75)
前記変異型が、治療用タンパク質である、項目67または68に記載の方法。
(項目76)
前記変異型が、予防用タンパク質である、項目67または68に記載の方法。
(項目77)
割り当てがされていない前記コドンが、UAGである、項目67または68に記載の方法。
(項目78)
試料を試験する方法であって、
試料を、タンパク質の変異型と接触させて反応混合物を形成する工程であって、前記タンパク質が、システイン残基同士の間にジスルフィド結合を有しており、前記変異型が、システイン残基同士の間の前記ジスルフィド結合の代わりに、セレノシステイン残基同士の間にジセレニド結合を有しており、前記変異型は、配列番号1~1630、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列からなる群から選択される配列を含む、前記工程、及び
前記反応混合物を試験して、前記タンパク質の前記変異型に結合した特異的結合パートナーを検出する工程、
を含む前記方法。
(項目79)
試料を試験する項目78に記載の方法が、
試料を、タンパク質の変異型と接触させて反応混合物を形成する工程であって、前記タンパク質が、システイン残基同士の間にジスルフィド結合を有しており、前記変異型が、システイン残基同士の間の前記ジスルフィド結合の代わりに、セレノシステイン残基同士の間にジセレニド結合を有しており、前記変異型は、配列番号1631、及び、前記配列と少なくとも80%が同一である配列を含む、前記工程、及び
前記反応混合物を試験して、前記タンパク質の前記変異型に結合した特異的結合パートナーを検出する工程、
を含む項目78に記載の方法。
(項目80)
試料を試験する方法であって、
試料を、モノクローナル抗体の変異型と接触させて反応混合物を形成する工程であって、前記モノクローナル抗体が、システイン残基同士の間にジスルフィド結合を有しており、前記変異型が、システイン残基同士の間の前記ジスルフィド結合の代わりに、セレノシステイン残基同士の間にジセレニド結合を有しており、前記モノクローナル抗体は、VL鎖を含んでおり、かつ、前記VL鎖の第23位と第88位はセレノシステイン残基で置換されており、そして、前記モノクローナル抗体はVH鎖を含んでおり、かつ、前記VH鎖の第22位と第92位はセレノシステイン残基で置換されている、前記工程、及び
前記反応混合物を試験して、前記タンパク質の前記変異型に結合した特異的結合パートナーを検出する工程、
を含む前記方法。
(項目81)
少なくとも1つのジセレニド結合を含む修飾抗体。
(項目82)
前記ジセレニド結合が、存在する特異性が同じ抗体でのジスルフィド結合の位置にある、項目81に記載の修飾抗体。
(項目83)
前記ジセレニド結合が、分子間である、項目81に記載の修飾抗体。
(項目84)
IgA、IgD、IgE、IgG、及び、IgMからなる群から選択されるアイソタイプから選択される、項目81に記載の修飾抗体。
(項目85)
セレノシステインに置換する少なくとも1つのシステインを有する配列番号1630の残基90~110を有するA鎖、セレノシステインに置換する少なくとも1つのシステインを有する配列番号1630の残基25~54を有するB鎖、及び、前記A鎖と前記B鎖との間にある少なくとも1つのジセレニド結合を含む、修飾インスリンタンパク質。
(項目86)
天然のヒトインスリンタンパク質にある2つのシステイン残基を置換する少なくとも2つのセレノシステイン残基を含み、少なくとも2つの前記セレノシステイン残基の間に少なくとも1つのジセレニド結合を有する、修飾ヒトインスリンタンパク質。
(項目87)
組換え細菌において製造される、項目86に記載の修飾ヒトインスリンタンパク質。
(項目88)
セレノシステインtRNAが、前記細菌のアンバーコドンを認識するように前記組換え細菌が再コードされる、項目87に記載の修飾ヒトインスリンタンパク質。
本明細書に接した当業者には自明であろうこれらの態様、及び、その他の態様は、ヒト及び動物の疾患の処置のための、ならびに、治療薬、診断薬、検査薬、及び、予防薬を製造及び使用するための方法及び産物を、当該技術分野に提供をする。
配列表は、本出願の開示の一部を形成しており、そして、本開示の一部を構成するものとして援用する。
本発明者らは、ポリペプチド類、及び、セレノシステインアミノ酸同士の間のジセレニド結合によって安定化される生物製剤に折り畳まれるゲノム的に再コードした生物(GRO)において、ポリペプチド類を製造するための方法を開発した。システインアミノ酸同士の間のジスルフィド結合は、約-220mVの酸化還元電位を有するのに対して、ジセレニド結合は、約-380mVの酸化還元電位を有する。細菌性サイトゾルは、一般的には、約-280~-300mVの酸化還元電位を有するので、ジスルフィド類ではなく、ジセレニド類は還元を回避して、当該サイトゾルで形成され、そして、存続する。ジセレニド類は、ジスルフィド類と同じ幾何学的結合角及びねじれ、ならびに、非常に類似した結合長を有するので、それらは、ポリペプチドの三次元構造を攪乱せずにポリペプチド類に置換され得る(図1)。さらに、血液などの意図したインビボ環境は、グルタチオン、アルブミン、及び、チオレドキシンなどの還元剤を含有するので、ポリペプチド類でのジスルフィド類を還元することができ、当該ポリペプチドの展開を招くこととなり、また、ジスルフィド類が複数ある場合には、間違ったシステインが互いに結合するように、当該ジスルフィド類を「処理する」のである。これらのいずれもが、当該ポリペプチドの意図した生物製剤的活性を無効にする。ジセレニド類の酸化還元電位が低いため、血清または精製した血清の還元成分に曝露した場合、それらは、還元に対して抵抗性を持つようになり(図2)、ジスルフィドを担持した対応物よりも長い血清半減期を得ることとなる(Muttenhaler et al.)。
ジセレニドを形成するセレノシステインを担持したペプチド類は、固相ペプチド合成によってインビトロで製造し得る(Armishaw et al.,Safavi-Hemami et al.,)が、この工程は、治療適用、特に、タンパク質のために必要な収量に見合った規模にはできない。しかしながら、組換えセレノタンパク質のインビボでの生産は、セレノシステインがタンパク質中に出現し得る場所について、厳密な配列要件によって制限される。特に、セレノシステイン挿入配列(SECIS)エレメントは、特殊酵素(selA、selD)、tRNA(selC)、及び、伸長因子(selB)からなる内在性セレノシステイン翻訳機構を動員するために、セレノシステイン組込み部位でコードDNA配列に出現しなければならない。代わりに、本発明者らは、アンバーストップコドンなどの割り当てがされていないコドンを有する再コードしたE.coli株を、対応するDNAコード配列にアンバー停止コドンを導入して、セレノシステインのポリペプチド類への標的配置を許容する、抗-アンバーアンチコドンを有する改変したセレノシステインtRNAと一緒に用いる。一般的には、再コードは、すべての天然に存在する割り当てがされていないコドンをゲノムからの除去、ならびに、割り当てがされていないコドンに関連する翻訳機構を除去または不活性化(例えば、アンバー、放出因子1を除去または不活性化)を伴う。修飾tRNAは、内因性伸長因子EF-Tuと相互作用する。当該技術分野で周知の通り、その他のコドン、一般的には稀なコドンを再コードすることができる。Ostrov et al., Science,353:819-822,2016を参照されたい。mRNAでのコドン、及び、tRNAでのアンチコドンは、一般的には、相補的塩基配列のトリプレットである。
再コードしたタンパク質は、E. coli細胞などの細菌で、または、インビトロで、翻訳系、または、連鎖転写-翻訳系で合成し得る。そのような再コードしたタンパク質をコードする遺伝子またはmRNAは、天然には存在しておらず、かつ、天然に存在するコード配列の変異体である。
関連する配列表に示すタンパク質の多くは、ジスルフィド結合に関与するすべてのシステイン残基を、セレノシステイン残基で置換したものであるが、当該置換の利点を得るためにすべてのシステイン残基を置換する必要はない。1つのジセレニド結合でも、タンパク質の安定性を向上し得る。あらゆる数のジセレニド結合(セレノシステイン対)は、タンパク質のジスルフィド結合で置換され得る。タンパク質がN個のジスルフィド結合を有する場合、当該タンパク質は、N、N-1、N-2、N-3、N-4、....、1までの範囲で結合を有し得る。ジセレニド結合とジスルフィド類との組み合わせが異なるタンパク質は、配列番号1220~1631に示される。システインとセレノシステイン残基との間の結合、別名、セレニルスルフィドを形成することも可能である。この結合は、ジスルフィド(-220mV)よりも低い酸化還元電位(-270mV)を有するが、細菌細胞質(-280mV)よりは低くない。当該セレニルスルフィド結合は、特定の酸化還元環境における還元に対する耐性を高めるために使用され得る。単一のジスルフィドで結合されたシステインの代わりにセレノシステインを用いることで、あるいは、単一のジセレニドで結合されたセレノシステインの代わりにシステインを用いることで、本明細書に記載の方法を使用して、セレニルスルフィドは、ジセレニドの代わりに使用され得る。
置換したセレノシステインを有するジスルフィド安定化生物製剤の配列は、標準的な実験室用振とうフラスコで、mg/Lのスケールで、本発明者らの方法を用いて、E. coliのサイトゾルで製造され、そして、微生物発酵槽において、g/L生産までスケール化され得る。これらの配列は、治療用タンパク質、ワクチン、及び、モノクローナル抗体、抗体断片、抗体コンジュゲート、及び、そ
の他の免疫グロブリン様分子を含む。Fvドメインは、あらゆるヒトFcドメインと組み合わせられ得る。さらに、可変軽鎖でのKabat番号付与法で第23位と第88位のシステインをセレノシステインで置換し、及び/または、可変重鎖でのKabat番号付与法で第22位と第92位のシステインをセレノシステインで置換することで、あらゆるFvドメインが製造され得る。免疫グロブリンクラスIgG、IgA、IgM、IgD、及び、IgE(IgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3、及び、IgG4サブクラスを含む)は、代表的なクラスとして、これらの方法で製造され得るものであり、それらは、当業者に公知のIgκまたはλの定常軽鎖変異体のいずれかと組み合わせたあらゆる定常変異体を有する。開示した配列でのいずれのセレノシステインも、システインの存在が、当該ポリペプチドの発現、折り畳み、または、意図した機能を妨げない限りは、システインとして維持され得る。本発明者らは、抗体一本鎖可変断片(scFv、図3、6)、ヒト成長ホルモン(hGH、図6)、PD-L1(図4)、ヒトFcの変異体(図4)、及び、ヒトFcの変異体に対するPD-L1及びhGHの融合(図4及び5)について意図したジセレニド結合に関与するセレノシステインの製造及び検証の方法を以下に開示するが、これらの方法は、モノクローナル抗体全体、その他の抗体断片、抗体コンジュゲート、その他の治療用タンパク質、及び、ワクチンにも適用する。
の他の免疫グロブリン様分子を含む。Fvドメインは、あらゆるヒトFcドメインと組み合わせられ得る。さらに、可変軽鎖でのKabat番号付与法で第23位と第88位のシステインをセレノシステインで置換し、及び/または、可変重鎖でのKabat番号付与法で第22位と第92位のシステインをセレノシステインで置換することで、あらゆるFvドメインが製造され得る。免疫グロブリンクラスIgG、IgA、IgM、IgD、及び、IgE(IgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3、及び、IgG4サブクラスを含む)は、代表的なクラスとして、これらの方法で製造され得るものであり、それらは、当業者に公知のIgκまたはλの定常軽鎖変異体のいずれかと組み合わせたあらゆる定常変異体を有する。開示した配列でのいずれのセレノシステインも、システインの存在が、当該ポリペプチドの発現、折り畳み、または、意図した機能を妨げない限りは、システインとして維持され得る。本発明者らは、抗体一本鎖可変断片(scFv、図3、6)、ヒト成長ホルモン(hGH、図6)、PD-L1(図4)、ヒトFcの変異体(図4)、及び、ヒトFcの変異体に対するPD-L1及びhGHの融合(図4及び5)について意図したジセレニド結合に関与するセレノシステインの製造及び検証の方法を以下に開示するが、これらの方法は、モノクローナル抗体全体、その他の抗体断片、抗体コンジュゲート、その他の治療用タンパク質、及び、ワクチンにも適用する。
治療、診断、バイオセンシング、及び、予防のための生物製剤は、2つのセレノシステイン残基の間にジセレニド結合を有する本発明にしたがって作製及び使用され得る。この技術及び改変は、あらゆるタンパク質生物製剤に有用であり得、ホルモン(例えば、ヒト成長ホルモン、図8)、抗体及び抗体断片(図7及び8)、サイトカイン、成長因子、構造タンパク質などが挙げられるが、これらに限定されない。Lantus(商標)、Novorapid(商標)、Humalog(商標)、Humulin(商標)、Levemir(商標)、Apidra(商標)、及び、Tresiba(商標)などのインスリン産物は、配列番号1142~1155に示すように、そのような修飾と共に有用であり得る。これらのインスリン産物のA鎖は、配列番号1142、1144、1146、1148、1150、1152、及び、1154に示されるように修飾され得る。これらのインスリン産物のB鎖は、配列番号1143、1145、1147、1149、1151、1153、及び、1155に示されるように修飾され得る。これらのジセレニド結合は、分子内または分子間であり得る。そのような修飾に適した追加のタンパク質は、プログラム死-リガンド1(PD-L1)、抗体ドメイン(複数可)に対するPD-L1融合タンパク質、PD-L1の一部、例えば、抗体ドメイン(複数可)に対して融合した、または、融合していない結合ドメイン、抗体ドメイン(複数可)に対して融合した、または、融合していないヒト成長ホルモン、及び、ハーセプチン(図4~8)がある。これは、かように修飾が可能なタンパク質の完全なリストになることを意図するものではない。
特定の例示的なタンパク質は、本開示の一部を形成する配列表において特定の配列を用いて示されているが、これらの配列は、使用され、そして、完全に忠実に再現される必要はない。当該技術分野で公知の通り、対立遺伝子変異及び多型を含むタンパク質に対するわずかな修飾は、それらの使用及び機能にとって有害ではないタンパク質の部分において起こり得る。したがって、本発明の有用なタンパク質は、配列表に示される正確な配列を有していてもよく、あるいは、わずかに相違し得る。例えば、有用なタンパク質は、少なくとも99パーセント、少なくとも98パーセント、少なくとも97パーセント、少なくとも96パーセント、少なくとも95パーセント、少なくとも94パーセント、少なくとも93パーセント、少なくとも92パーセント、少なくとも91パーセント、少なくとも90パーセント、少なくとも89パーセント、少なくとも88パーセント、少なくとも87パーセント、少なくとも86パーセント、少なくとも85パーセント、少なくとも84パーセント、少なくとも83パーセント、少なくとも82パーセント、81パーセント、または、少なくとも80パーセントを同一とし得る。
本発明にしたがって製造することができるタンパク質は、目的が制限されていない。同タンパク質は、治療用タンパク質、予防用タンパク質(ワクチンなど)、酵素タンパク質、内分泌タンパク質、シグナル伝達タンパク質、足場タンパク質、診断用タンパク質、分析用タンパク質などであり得る。一般的に、ジセレニド結合は、還元剤の存在下で当該タンパク質をさらに安定化させる。
当該タンパク質は、宿主細胞内で、または、インビトロで、無細胞合成系で作製され得る。宿主細胞は、確実に再コード可能なあらゆるものとし得る。これらは、開発が十分に進んだ遺伝系を有する細菌細胞であり得、例えば、E.coliがある。また、その他の細菌種も、使用され得る。当該タンパク質を製造するための無細胞系は、共役転写/翻訳系、または、翻訳系のみであり得る。本発明の方法の重要な態様は、化学合成手段よりもむしろ、生物製剤合成の使用である。
再コードした細胞を構築された核酸配列を用いて培養することは、当該技術分野で公知のあらゆる手段で行われ得る。この培養は、振盪フラスコまたは発酵槽において、バッチ式または連続式であり得、あるいは、より大きな容器に収容した小さな粒子の固体表面などに固定化され得る。一般的には、当該培地は、Na2SeO3などのセレン供給源を用いて補充される。当該技術分野で公知の通り、当該所望のタンパク質変異体の製造は、誘導物質または抑制物質の制御下であり得る。当該技術分野で公知のあらゆるかような系は、構築及びタンパク質生産の便宜のために選択され得る。
かような処置を必要とする対象への治療用、診断用、または、予防用タンパク質の投与は、当該技術分野において公知であり、かつ、タンパク質に適したあらゆる手段によるものであり得る。それらとしては、静脈内、筋肉内、皮下、髄腔内、経口、冠状動脈内、及び、頭蓋内送達があるが、これらに限定されない。安定性と標的とが故に、ある種のタンパク質は、ある種の送達に適している。治療用タンパク質の投与は、例えば、液体または固体である充填剤、希釈剤、賦形剤、緩衝剤、安定剤、または、封入材料などの1つ以上の医薬として許容される担体を含むことができる。
上記した開示は、本発明を概説するものである。本明細書で開示した参考文献のすべてを援用する、ことをここに明示する。専ら例示目的で本明細書に記載がされ、かつ、本発明の範囲の限定を意図していない以下の特定の例を参照することで、より確かな理解が得られる。
例1
scFvの発現及び精製
システインコドンの代わりにセレノシステインの取り込みを指示するUAGコドンを有する抗-アルファMS2 scFv抗体をコードする遺伝子を担持するプラスミドpACYC-PcaU-aMS2で形質転換したRTΔA 2X310K細胞を、1000μg/mLのカルベニシリン、12.5μg/mLのテトラサイクリン、及び、25μM Na2SeO3を補充した1Lのテリフィック培地で、1/250に希釈し、そして、対数増殖期の中期に、3,4-ジヒドロキシ安息香酸(1mM)で誘導し、続いて、37℃で、一晩、増殖させた。細胞を、8000×gで、10分間、遠心分離して回収し、そして、プロテアーゼ阻害剤カクテル(コンプリート、ミニEDTA不含、Roche)、及び、リゾチーム(0.5mg.mL-1)を含む25mLの洗浄緩衝液(50mM K2HPO4、300mM NaCl、20mM イミダゾール、及び、10% グリセロール、pH8.0)で再懸濁した。穏やかに攪拌しながら、4℃で、20分間インキュベートした後に、細胞を、超音波処理(Model 500、Fisher Scientific)して溶解し、35000×gで、30分間、遠心分離を3度行って浄化した。溶解物を、0.2μmの膜を通して濾過し、Ni-NTA樹脂及び重力流カラムを用いるIMACで、タンパク質を回収した。溶出液を、3mLに濃縮し、そして、pH7.5のTBSに対して透析を行い、続いて、サイズ排除FPLCで、見かけが均一になるまで精製した。有意な割合の試料が透析の際に沈殿し、そして、新たな割合の試料が、安定性の低い/可溶性の二量体の形態で存在した。可溶性aMS2セレノ-scFvモノマーの最終収量は、3mg/Lであった。
scFvの発現及び精製
システインコドンの代わりにセレノシステインの取り込みを指示するUAGコドンを有する抗-アルファMS2 scFv抗体をコードする遺伝子を担持するプラスミドpACYC-PcaU-aMS2で形質転換したRTΔA 2X310K細胞を、1000μg/mLのカルベニシリン、12.5μg/mLのテトラサイクリン、及び、25μM Na2SeO3を補充した1Lのテリフィック培地で、1/250に希釈し、そして、対数増殖期の中期に、3,4-ジヒドロキシ安息香酸(1mM)で誘導し、続いて、37℃で、一晩、増殖させた。細胞を、8000×gで、10分間、遠心分離して回収し、そして、プロテアーゼ阻害剤カクテル(コンプリート、ミニEDTA不含、Roche)、及び、リゾチーム(0.5mg.mL-1)を含む25mLの洗浄緩衝液(50mM K2HPO4、300mM NaCl、20mM イミダゾール、及び、10% グリセロール、pH8.0)で再懸濁した。穏やかに攪拌しながら、4℃で、20分間インキュベートした後に、細胞を、超音波処理(Model 500、Fisher Scientific)して溶解し、35000×gで、30分間、遠心分離を3度行って浄化した。溶解物を、0.2μmの膜を通して濾過し、Ni-NTA樹脂及び重力流カラムを用いるIMACで、タンパク質を回収した。溶出液を、3mLに濃縮し、そして、pH7.5のTBSに対して透析を行い、続いて、サイズ排除FPLCで、見かけが均一になるまで精製した。有意な割合の試料が透析の際に沈殿し、そして、新たな割合の試料が、安定性の低い/可溶性の二量体の形態で存在した。可溶性aMS2セレノ-scFvモノマーの最終収量は、3mg/Lであった。
すべてのシステインコドンの代わりにセレノシステインの取り込みを指示するUAGコドンを有する抗-TNF(腫瘍壊死因子)scFv抗体をコードする遺伝子を担持するプラスミドpACYC-TetO-aTNFで形質転換したRTΔA 2X310K-T7細胞を、1000μg/mLのカルベニシリン、33μg/mLのクロラムフェニコール、及び、25μM Na2SeO3を補充した1Lのテリフィック培地で、1/250に希釈し、そして、対数増殖期の中期に、200ng/mLのアンヒドロテトラサイクリンで誘導し、続いて、30℃で、一晩、増殖させた。細胞を回収し、前述のようにして、IMACで精製した。沈殿を減らすために、試料を大量(>6mL)に透析した。タンパク質試料を、サイズ排除FPLC、あるいは、アニオン交換クロマトグラフィー(HiTrap Q HPカラム)のいずれかで、均質になるまで精製した。抗-RCA、抗-GM-CSF、及び、抗-インターフェロンガンマセレノscFvを、同じ手順で精製した。可溶性セレノ-scFvモノマーの最終収量は、0.5~1mg/Lの範囲であった。
例2
質量分析
インタクトなタンパク質試料を、前述の方法を用いて分析した。セレノタンパク質試料を、10kDaの分子量カットオフフィルターを用いて、LC-MSグレードの水に緩衝液交換した。一旦、緩衝液交換が完了次第に、それらの試料を、メタノール/水/ギ酸(50/49/1)溶液で、20μMに希釈した。希釈した後に、タンパク質溶液を、エレクトロスプレーイオン化を介して、Orbitrap Elite質量分析計(Thermo Fisher Scientific Instruments,Bremen,Germany)に、3μL.分-1の速度で注入した。セレノシステインの取り込みを確認するために、インタクトなタンパク質質量分析を、240kの解像度で行い、そして、20回のスキャンを平均した。当該タンパク質配列の特徴決定を、前述のように、Orbitrap質量分析計に接続された193nmエキシマレーザー(Coherent、Inc.)を使用する紫外光解離(UVPD)で行った。各々のUVPDスペクトルについて、2.5mJの2つのレーザーパルスを使用し、そして、250回のスキャンを平均した。Xtractノイズ除去アルゴリズム(Thermo Fisher Scientific)を使用して、MS1スペクトルのノイズを除去した。また、Xtractを使用して、UVPDマススペクトルのノイズを除去した後に、ProsightPC 3.0を使用して分析をした。4つの組み込み部位(ジセレニド結合の形成が故に、1個の水素原子の控除分を含む)で61.9146ダルトンの修飾をセリン残基に付加して、セレノシステインを含有するタンパク質を検索した。組込み効率は、修飾したタンパク質ピークの面積を、修飾されていないタンパク質ピークと修飾したタンパク質ピークとの合計面積で割って算出した。各々のタンパク質に使用したピーク面積は、各同位体クラスターに由来する5つの最も豊富なピークの積分面積の合計であった。
質量分析
インタクトなタンパク質試料を、前述の方法を用いて分析した。セレノタンパク質試料を、10kDaの分子量カットオフフィルターを用いて、LC-MSグレードの水に緩衝液交換した。一旦、緩衝液交換が完了次第に、それらの試料を、メタノール/水/ギ酸(50/49/1)溶液で、20μMに希釈した。希釈した後に、タンパク質溶液を、エレクトロスプレーイオン化を介して、Orbitrap Elite質量分析計(Thermo Fisher Scientific Instruments,Bremen,Germany)に、3μL.分-1の速度で注入した。セレノシステインの取り込みを確認するために、インタクトなタンパク質質量分析を、240kの解像度で行い、そして、20回のスキャンを平均した。当該タンパク質配列の特徴決定を、前述のように、Orbitrap質量分析計に接続された193nmエキシマレーザー(Coherent、Inc.)を使用する紫外光解離(UVPD)で行った。各々のUVPDスペクトルについて、2.5mJの2つのレーザーパルスを使用し、そして、250回のスキャンを平均した。Xtractノイズ除去アルゴリズム(Thermo Fisher Scientific)を使用して、MS1スペクトルのノイズを除去した。また、Xtractを使用して、UVPDマススペクトルのノイズを除去した後に、ProsightPC 3.0を使用して分析をした。4つの組み込み部位(ジセレニド結合の形成が故に、1個の水素原子の控除分を含む)で61.9146ダルトンの修飾をセリン残基に付加して、セレノシステインを含有するタンパク質を検索した。組込み効率は、修飾したタンパク質ピークの面積を、修飾されていないタンパク質ピークと修飾したタンパク質ピークとの合計面積で割って算出した。各々のタンパク質に使用したピーク面積は、各同位体クラスターに由来する5つの最も豊富なピークの積分面積の合計であった。
例3
非標準アミノ酸を有するポリペプチドの発現に適したUAGゲノム的に再コードした生物
UAGコドン翻訳機能が完全に除去されているゲノム的に再コードした生物(GRO)を使用して、UAGに非標準アミノ酸(NSAA)を明確に組み込む。本明細書の一部を構成するものとしてその全内容を援用する、Lajoie,M.J. et al., Genomically recoded organisms expand biological functions. Science 342,357-360,doi:10.1126/science. 1241459(2013)を参照されたい。ゲノム的に再コードした生物は、改めて割り当てをした1つ以上のトリプレットコドンを含んでおり、セレノシステインなどの非標準アミノ酸(NSAAa)の組み込みを容易にし得る。当業者に公知の方法を使用して、トリプレットコドンを改めて割り当てて、セレノシステインなどの非標準アミノ酸を組み込むことができる。本明細書の一部を構成するものとしてその全内容を援用する、Lajoie,M.J. et al., Probing the limits of genetic recoding in essential genes. Science 342,361-363,doi:10.1126/science. 1241460(2013)を参照されたい。また、本明細書の一部を構成するものとしてその全内容を援用する、Thyer,R.et al., Evolving tRNASec for Efficient Canonical Incorporation of Selenocysteine,JACS 137(1),46-49,(2015)も参照されたい。また、Ostrov,et al., Design, synthesis, and testing toward a 57-codon genome,Science 353,819-822,2016も参照されたい。あるいは、当業者に公知の方法を使用して、クワドラプレットコドンを用いて、非標準アミノ酸を組み込むことができる。本明細書の一部を構成するものとしてそれらの各々の全内容を援用する、Anderson,J.C.et al. An expanded genetic code with a functional quadruplet codon. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 101, 7566-7571, doi:10.1073/pnas.0401517101(2004), Neumann,H.,Wang,K.,Davis,L.,Garcia-Alai,M.& Chin,J.W.Encoding multiple unnatural amino acids
via evolution of a quadruplet-decoding ribosome.Nature 464,441-444,(2010)、及び、Chatterjee,A.,Lajoie,M.J.,Xiao,H.,Church,G.M.& Schultz,P.G.A Bacterial Strain with
a Unique Quadruplet Codon Specifying Non-Native Amino Acids.Chembiochem,n/a-n/a,doi:10.1002/cbic.201402104(2014)を参照されたい。非機能的なUAGトリプレットに基づいて、クワドラプレットUAGAコドンを特異的かつ効率的にデコードする直交アミノアシル-tRNAシンテターゼ(aaRS)/tRNA対が開発されており、大きなタンパク質収率をもたらすUAGAコドンに、セレノシステインなどの非標準アミノ酸が着実に組み込まれている。かようなクワドラプレットコドンは、本方法で使用し得る。
非標準アミノ酸を有するポリペプチドの発現に適したUAGゲノム的に再コードした生物
UAGコドン翻訳機能が完全に除去されているゲノム的に再コードした生物(GRO)を使用して、UAGに非標準アミノ酸(NSAA)を明確に組み込む。本明細書の一部を構成するものとしてその全内容を援用する、Lajoie,M.J. et al., Genomically recoded organisms expand biological functions. Science 342,357-360,doi:10.1126/science. 1241459(2013)を参照されたい。ゲノム的に再コードした生物は、改めて割り当てをした1つ以上のトリプレットコドンを含んでおり、セレノシステインなどの非標準アミノ酸(NSAAa)の組み込みを容易にし得る。当業者に公知の方法を使用して、トリプレットコドンを改めて割り当てて、セレノシステインなどの非標準アミノ酸を組み込むことができる。本明細書の一部を構成するものとしてその全内容を援用する、Lajoie,M.J. et al., Probing the limits of genetic recoding in essential genes. Science 342,361-363,doi:10.1126/science. 1241460(2013)を参照されたい。また、本明細書の一部を構成するものとしてその全内容を援用する、Thyer,R.et al., Evolving tRNASec for Efficient Canonical Incorporation of Selenocysteine,JACS 137(1),46-49,(2015)も参照されたい。また、Ostrov,et al., Design, synthesis, and testing toward a 57-codon genome,Science 353,819-822,2016も参照されたい。あるいは、当業者に公知の方法を使用して、クワドラプレットコドンを用いて、非標準アミノ酸を組み込むことができる。本明細書の一部を構成するものとしてそれらの各々の全内容を援用する、Anderson,J.C.et al. An expanded genetic code with a functional quadruplet codon. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 101, 7566-7571, doi:10.1073/pnas.0401517101(2004), Neumann,H.,Wang,K.,Davis,L.,Garcia-Alai,M.& Chin,J.W.Encoding multiple unnatural amino acids
via evolution of a quadruplet-decoding ribosome.Nature 464,441-444,(2010)、及び、Chatterjee,A.,Lajoie,M.J.,Xiao,H.,Church,G.M.& Schultz,P.G.A Bacterial Strain with
a Unique Quadruplet Codon Specifying Non-Native Amino Acids.Chembiochem,n/a-n/a,doi:10.1002/cbic.201402104(2014)を参照されたい。非機能的なUAGトリプレットに基づいて、クワドラプレットUAGAコドンを特異的かつ効率的にデコードする直交アミノアシル-tRNAシンテターゼ(aaRS)/tRNA対が開発されており、大きなタンパク質収率をもたらすUAGAコドンに、セレノシステインなどの非標準アミノ酸が着実に組み込まれている。かようなクワドラプレットコドンは、本方法で使用し得る。
進化した直交アミノアシル-tRNAシンテターゼ(aaRS)/tRNA対を使用して、多様な化学的性質を有する100を超えるNSAAが合成されており、そして、共翻訳的にタンパク質に組み込まれている。本明細書の一部を構成するものとしてその全内容を援用する、Liu,C.C.& Schultz,P.G.Adding new chemistries to the genetic code. An. Rev.
Biochem.79,413-444,doi:10.1146/annurev.biochem.052308.105824(2010)を参照されたい。非標準アミノ酸は、チロシンまたはピロリジンに基づいてデザインされている。aaRS/tRNAは、プラスミド、または、ゲノム的に再コードした生物のゲノムに提供され得る。直交aaRS/tRNA対は、タンパク質にNSAAを生体直交的に組み込むために使用される。ベクターに基づいた過剰発現系を使用して、天然コドン機能を、再割り当てしたその機能と競合させ得る。本明細書の一部を構成するものとしてそれらの各々の全内容を援用する、Wang,L.,Brock,A.,Herberich,B.& Schultz,P.G.Expanding the genetic code of Escherichia coli. Science 292,498-500(2001),Young,T.S.,Ahmad,I.,Yin,J.A.& Schultz,P.G.An enhanced system for unnatural amino acid mutagenesis in E.coli. Journal of Molecular Biology 395,361-374(2009)、及び、Chatterjee,A.,Sun,S.B.、Furman,J.L.,Xiao,H.& Schultz,P.G. A Versatile Platform for Single- and Multiple-Unnatural Amino Acid Mutagenesis in Escherichia coli.Biochemistry 52,1828-1837,doi:10.1021/bi4000244(2013)を参照されたい。天然のUAG翻訳機能を完全に無くしてしまえば、極めて小さなaaRS/tRNA機能で、効率的なNSAA取り込みが十分に達成され得る。GROベースのNSAA取り込みは、ベクターベース、及び/または、ゲノムベースのaaRS/tRNA対を使用することができる。ゲノムベースのaaRS/tRNA対が、利用可能なNSAAの不在下での標準アミノ酸の取り込みの誤りを減らすために使用されている(本明細書の一部を構成するものとして援用するMandell and Lajoie et al., Nature.2015 Feb5;518(7537):55-60.doi:10.1038/nature 14121)。
Biochem.79,413-444,doi:10.1146/annurev.biochem.052308.105824(2010)を参照されたい。非標準アミノ酸は、チロシンまたはピロリジンに基づいてデザインされている。aaRS/tRNAは、プラスミド、または、ゲノム的に再コードした生物のゲノムに提供され得る。直交aaRS/tRNA対は、タンパク質にNSAAを生体直交的に組み込むために使用される。ベクターに基づいた過剰発現系を使用して、天然コドン機能を、再割り当てしたその機能と競合させ得る。本明細書の一部を構成するものとしてそれらの各々の全内容を援用する、Wang,L.,Brock,A.,Herberich,B.& Schultz,P.G.Expanding the genetic code of Escherichia coli. Science 292,498-500(2001),Young,T.S.,Ahmad,I.,Yin,J.A.& Schultz,P.G.An enhanced system for unnatural amino acid mutagenesis in E.coli. Journal of Molecular Biology 395,361-374(2009)、及び、Chatterjee,A.,Sun,S.B.、Furman,J.L.,Xiao,H.& Schultz,P.G. A Versatile Platform for Single- and Multiple-Unnatural Amino Acid Mutagenesis in Escherichia coli.Biochemistry 52,1828-1837,doi:10.1021/bi4000244(2013)を参照されたい。天然のUAG翻訳機能を完全に無くしてしまえば、極めて小さなaaRS/tRNA機能で、効率的なNSAA取り込みが十分に達成され得る。GROベースのNSAA取り込みは、ベクターベース、及び/または、ゲノムベースのaaRS/tRNA対を使用することができる。ゲノムベースのaaRS/tRNA対が、利用可能なNSAAの不在下での標準アミノ酸の取り込みの誤りを減らすために使用されている(本明細書の一部を構成するものとして援用するMandell and Lajoie et al., Nature.2015 Feb5;518(7537):55-60.doi:10.1038/nature 14121)。
UAGコドン機能は、ゲノム的に再コードした生物において完全に再割り当てがされているので、セレノシステインのようなNSAAは、表現型に影響を及ぼさずに、ゲノム的に再コードした生物に組み込まれ得る。ゲノム的に再コードした生物へのNSAAの取り込みは、セレノシステインなどの非標準アミノ酸、及び、aaRSのための誘導物質の増殖培地への補充に関与し得る。あるいは、当該aaRSは、構造的に発現し得る。あるいは、本開示の通りに、当該内在性セリル-tRNAシンテターゼを用いて、セレノシステインtRNAをセリル化し、当該tRNAに、selA及びselDを含む酵素が作用して、tRNAsec(セレノシステイン荷電tRNA)を製造し得る。培地に亜セレン酸ナトリウムなどのセレン供給源を補充して、tRNAsecの製造を改善し得る。所望のタンパク質は、あらゆる所望のタンパク質の過剰発現システム(例えば、T7-RNAP、構造的取り込み、または、IPTG/アロラクトース、アンヒドロテトラサイクリン、アラビノース、ラムノース、または、その他の誘導性システムに基づいた誘導性発現)を用いて過剰発現することができる。タンパク質の架橋(ジセレニド結合)は、タンパク質の折り畳みでの近接性及び配向性に基づいて自発的に形成され得るものであり、そして、当該タンパク質は、その他のあらゆる過剰発現産物として取り扱うことができる。
例4
方法
関心のある遺伝子をコードする配列を、Tet-リプレッサーで制御するT7プロモーターを用いて、クロラムフェニコール耐性ベクターにクローニングした。tetオペロンで制御する組み込みをしたT7 RNAポリメラーゼを用いて、ベクターを、2×310k細胞に形質転換した。細胞を、ODが約0.6になるまで増殖させ、室温で、一晩、100ng/mLのaTcで誘導した。誘導した細胞をペレット化し、そして、20mM Tris pH 7.4、100mM NaCl、20mM イミダゾール、及び、0.01% Triton(登録商標) X-100で再懸濁し、続いて、超音波処理をして溶解した。それら溶解物を、遠心分離して分離し、そして、ペレット化した。溶解時と同じ緩衝液で、上清を、Ni-親和性ビーズに対して流した。関心のあるタンパク質に、300mM イミダゾールを添加して、PBS pH 7.4に溶出した。精製した画分を、SDS pageゲルに流した。10個の異なるセレノ生物製剤についての結果を、図4~6に示す。
参考文献
本明細書の一部を構成するものとして引用した参考文献の各々の開示を援用する、ことをここに明示する。
1. Anderson, J. C. et al. An expanded g
enetic code with a functional quadruplet
codon. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 101, 7566-7571, doi:10.1073/pnas.0401517101 (2004),
2. Armishaw, C.J., Daly, N.L., Nevin, S
.T., Adams, D.J., Craik, D.J. & Alewood,
P.F. Alpha-selenoconotoxins, a new class of potent alpha7 neuronal nicotinic receptor antagonists. J Biol Chem 281, 14136-43 (2006).
3. Chatterjee, A., Lajoie, M. J., Xiao,
H., Church, G. M. & Schultz, P. G. A Bacterial Strain with a Unique Quadruplet Codon Specifying Non-native Amino Acids.
Chembiochem, n/a-n/a, doi:10.1002/cbic.201402104 (2014)
4. Chatterjee, A., Sun, S. B., Furman,
J. L., Xiao, H. & Schultz, P. G. A Versatile Platform for Single- and Multiple-Unnatural Amino Acid Mutagenesis in Escherichia coli. Biochemistry 52, 1828-1837,
doi:10.1021/bi4000244 (2013)5. Lajoie, M. J. et al. Genomically rec
oded organisms expand biological functions. Science 342, 357-360, doi:10.1126/science.1241459 (2013)
6. Lajoie, M. J. et al. Probing the lim
its of genetic recoding in essential genes. Science 342, 361-363, doi:10.1126/science.1241460 (2013)
7. Liu, C. C. & Schultz, P. G. Adding n
ew chemistries to the genetic code. An. Rev. Biochem. 79, 413-444, doi:10.1146/annurev.biochem.052308.105824 (2010)
8. Mandell and Lajoie et al., Nature. 2
015 Feb 5;518(7537):55-60. doi: 10.1038/nature14121,
9. Muttenthaler, M., Andersson, A., de
Araujo, A.D., Dekan, Z., Lewis, R.J. & Alewood, P.F. Modulating oxytocin activity and plasma stability by disulfide bond
engineering. J Med Chem 53, 8585-96 (2010).
10. Neumann, H., Wang, K., Davis, L., Ga
rcia-Alai, M. & Chin, J. W. Encoding multiple unnatural amino acids via evolution of a quadruplet-decoding ribosome. Nature 464, 441-444, (2010)
11. Ostrov, et al. Design, synthesis, a
nd testing toward a 57-codon genome, Science 353, 819-822, 2016
12. Safavi-Hemami, H., Gajewiak, J., Kar
anth, S., Robinson, S.D., Ueberheide, B., Douglass, A.D., Schlegel, A., Imperial, J.S., Watkins, M., Bandyopadhyay, P.K., Yandell, M., Li, Q., Purcell, A.W., Norton, R.S., Ellgaard, L. & Olivera, B.M.
Specialized insulin is used for chemical warfare by fish-hunting cone snails. Proc Natl Acad Sci U S A 112, 1743-8 (2015).
13. Thyer, R. et al. Evolving tRNASec fo
r Efficient Canonical Incorporation of Selenocysteine. JACS 137(1), 46-49, (2015)
14. Wang, L., Brock, A., Herberich, B. &
Schultz, P. G. Expanding the genetic code of Escherichia coli. Science 292, 498-500 (2001)
15. Young, T. S., Ahmad, I., Yin, J. A.
& Schultz, P. G. An enhanced system for unnatural amino acid mutagenesis in E. coli. Journal of Molecular Biology 395, 361-374 (2009),
方法
関心のある遺伝子をコードする配列を、Tet-リプレッサーで制御するT7プロモーターを用いて、クロラムフェニコール耐性ベクターにクローニングした。tetオペロンで制御する組み込みをしたT7 RNAポリメラーゼを用いて、ベクターを、2×310k細胞に形質転換した。細胞を、ODが約0.6になるまで増殖させ、室温で、一晩、100ng/mLのaTcで誘導した。誘導した細胞をペレット化し、そして、20mM Tris pH 7.4、100mM NaCl、20mM イミダゾール、及び、0.01% Triton(登録商標) X-100で再懸濁し、続いて、超音波処理をして溶解した。それら溶解物を、遠心分離して分離し、そして、ペレット化した。溶解時と同じ緩衝液で、上清を、Ni-親和性ビーズに対して流した。関心のあるタンパク質に、300mM イミダゾールを添加して、PBS pH 7.4に溶出した。精製した画分を、SDS pageゲルに流した。10個の異なるセレノ生物製剤についての結果を、図4~6に示す。
参考文献
本明細書の一部を構成するものとして引用した参考文献の各々の開示を援用する、ことをここに明示する。
1. Anderson, J. C. et al. An expanded g
enetic code with a functional quadruplet
codon. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 101, 7566-7571, doi:10.1073/pnas.0401517101 (2004),
2. Armishaw, C.J., Daly, N.L., Nevin, S
.T., Adams, D.J., Craik, D.J. & Alewood,
P.F. Alpha-selenoconotoxins, a new class of potent alpha7 neuronal nicotinic receptor antagonists. J Biol Chem 281, 14136-43 (2006).
3. Chatterjee, A., Lajoie, M. J., Xiao,
H., Church, G. M. & Schultz, P. G. A Bacterial Strain with a Unique Quadruplet Codon Specifying Non-native Amino Acids.
Chembiochem, n/a-n/a, doi:10.1002/cbic.201402104 (2014)
4. Chatterjee, A., Sun, S. B., Furman,
J. L., Xiao, H. & Schultz, P. G. A Versatile Platform for Single- and Multiple-Unnatural Amino Acid Mutagenesis in Escherichia coli. Biochemistry 52, 1828-1837,
doi:10.1021/bi4000244 (2013)5. Lajoie, M. J. et al. Genomically rec
oded organisms expand biological functions. Science 342, 357-360, doi:10.1126/science.1241459 (2013)
6. Lajoie, M. J. et al. Probing the lim
its of genetic recoding in essential genes. Science 342, 361-363, doi:10.1126/science.1241460 (2013)
7. Liu, C. C. & Schultz, P. G. Adding n
ew chemistries to the genetic code. An. Rev. Biochem. 79, 413-444, doi:10.1146/annurev.biochem.052308.105824 (2010)
8. Mandell and Lajoie et al., Nature. 2
015 Feb 5;518(7537):55-60. doi: 10.1038/nature14121,
9. Muttenthaler, M., Andersson, A., de
Araujo, A.D., Dekan, Z., Lewis, R.J. & Alewood, P.F. Modulating oxytocin activity and plasma stability by disulfide bond
engineering. J Med Chem 53, 8585-96 (2010).
10. Neumann, H., Wang, K., Davis, L., Ga
rcia-Alai, M. & Chin, J. W. Encoding multiple unnatural amino acids via evolution of a quadruplet-decoding ribosome. Nature 464, 441-444, (2010)
11. Ostrov, et al. Design, synthesis, a
nd testing toward a 57-codon genome, Science 353, 819-822, 2016
12. Safavi-Hemami, H., Gajewiak, J., Kar
anth, S., Robinson, S.D., Ueberheide, B., Douglass, A.D., Schlegel, A., Imperial, J.S., Watkins, M., Bandyopadhyay, P.K., Yandell, M., Li, Q., Purcell, A.W., Norton, R.S., Ellgaard, L. & Olivera, B.M.
Specialized insulin is used for chemical warfare by fish-hunting cone snails. Proc Natl Acad Sci U S A 112, 1743-8 (2015).
13. Thyer, R. et al. Evolving tRNASec fo
r Efficient Canonical Incorporation of Selenocysteine. JACS 137(1), 46-49, (2015)
14. Wang, L., Brock, A., Herberich, B. &
Schultz, P. G. Expanding the genetic code of Escherichia coli. Science 292, 498-500 (2001)
15. Young, T. S., Ahmad, I., Yin, J. A.
& Schultz, P. G. An enhanced system for unnatural amino acid mutagenesis in E. coli. Journal of Molecular Biology 395, 361-374 (2009),
Claims (8)
- 天然のヒトインスリンタンパク質にある、ジスルフィド結合を形成する2つのシステイン残基を置換する少なくとも2つのセレノシステイン残基を有する修飾インスリンタンパク質を製造する方法であって、ここで前記少なくとも2つのセレノシステイン残基がジセレニド結合を形成し、前記方法が
割り当てがされていないコドンが、対応するアンチコドンを有するセレノシステインtRNAによって認識されるように、ゲノム的に再コードした細菌宿主を培養することを含み、前記細菌宿主は、一対のシステインコドンが、割り当てがされていない前記コドンで置換されている前記修飾インスリンタンパク質をコードする構築されたDNA配列を含み、前記培養は、前記修飾タンパク質が発現される条件下であり、
ここで、前記修飾インスリンは、配列番号1630の残基90~110の配列または前記配列と少なくとも90%同一である配列を有するA鎖と、配列番号1630の残基25~54の配列または前記配列と少なくとも90%同一である配列を有するB鎖とを含む、方法。 - 前記修飾インスリンタンパク質が、少なくとも2つのセレノシステイン残基を含むA鎖を有し、ここで前記少なくとも2つのセレノシステイン残基間に少なくとも1つのジセレニド結合が形成される、請求項1に記載の方法。
- 前記修飾インスリンタンパク質が、少なくとも1つの追加のセレノシステイン残基を含むA鎖、および少なくとも1つのセレノシステイン残基を含むB鎖を有し、ここで前記タンパク質が、前記A鎖と前記B鎖との間に少なくとも1つのジセレニド結合をさらに含む、請求項2に記載の方法。
- 前記修飾インスリンタンパク質が、少なくとも1つのセレノシステイン残基を含むA鎖および少なくとも1つのセレノシステイン残基を含むB鎖を有し、それにより、前記A鎖と前記B鎖との間に少なくとも1つのジセレニド結合を形成する、請求項1に記載の方法。
- 請求項1~4のいずれか一項に記載の方法によって作製された修飾インスリンタンパク質を含む、組成物。
- 医薬として許容される担体をさらに含む、請求項5に記載の組成物。
- 前記組成物が皮下投与用に処方される、請求項5または6に記載の組成物。
- 対象の処置に使用するための、請求項5~7のいずれか一項に記載の組成物。
Applications Claiming Priority (6)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201662381316P | 2016-08-30 | 2016-08-30 | |
US62/381,316 | 2016-08-30 | ||
US201762537986P | 2017-07-28 | 2017-07-28 | |
US62/537,986 | 2017-07-28 | ||
JP2019531589A JP7186400B2 (ja) | 2016-08-30 | 2017-08-30 | ゲノム的に再コードした生物におけるセレノ-生物製剤の製造 |
PCT/US2017/049354 WO2018045018A1 (en) | 2016-08-30 | 2017-08-30 | Production of seleno-biologics in genomically recoded organisms |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019531589A Division JP7186400B2 (ja) | 2016-08-30 | 2017-08-30 | ゲノム的に再コードした生物におけるセレノ-生物製剤の製造 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2023015347A JP2023015347A (ja) | 2023-01-31 |
JP7378106B2 true JP7378106B2 (ja) | 2023-11-13 |
Family
ID=61301655
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019531589A Active JP7186400B2 (ja) | 2016-08-30 | 2017-08-30 | ゲノム的に再コードした生物におけるセレノ-生物製剤の製造 |
JP2022184852A Active JP7378106B2 (ja) | 2016-08-30 | 2022-11-18 | ゲノム的に再コードした生物におけるセレノ-生物製剤の製造 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019531589A Active JP7186400B2 (ja) | 2016-08-30 | 2017-08-30 | ゲノム的に再コードした生物におけるセレノ-生物製剤の製造 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11492650B2 (ja) |
EP (1) | EP3506945A4 (ja) |
JP (2) | JP7186400B2 (ja) |
CN (1) | CN109803679A (ja) |
CA (1) | CA3034701A1 (ja) |
WO (1) | WO2018045018A1 (ja) |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9840553B2 (en) | 2014-06-28 | 2017-12-12 | Kodiak Sciences Inc. | Dual PDGF/VEGF antagonists |
AU2016381964B2 (en) | 2015-12-30 | 2024-02-15 | Kodiak Sciences Inc. | Antibodies and conjugates thereof |
US11542332B2 (en) | 2016-03-26 | 2023-01-03 | Bioatla, Inc. | Anti-CTLA4 antibodies, antibody fragments, their immunoconjugates and uses thereof |
CN109844105A (zh) | 2016-07-11 | 2019-06-04 | 得克萨斯州大学***董事会 | 包含硒代半胱氨酸的重组多肽及其产生方法 |
JP7384906B2 (ja) * | 2018-07-09 | 2023-11-21 | ジーアールオー・バイオサイエンシズ・インコーポレイテッド | 非標準アミノ酸含有組成物とその使用 |
CN114144426A (zh) * | 2019-04-19 | 2022-03-04 | 印地安纳大学理事会 | 餐时或基础胰岛素类似物通过内部二硒桥的稳定化 |
JP2022553640A (ja) | 2019-10-10 | 2022-12-26 | コディアック サイエンシーズ インコーポレイテッド | 眼障害を処置する方法 |
EP4106819A1 (en) | 2020-02-21 | 2022-12-28 | Silverback Therapeutics, Inc. | Nectin-4 antibody conjugates and uses thereof |
CN113512116B (zh) * | 2020-04-10 | 2022-09-20 | 苏州普乐康医药科技有限公司 | 一种抗igf-1r抗体及其应用 |
CN118076644A (zh) * | 2021-09-30 | 2024-05-24 | 正大天晴药业集团股份有限公司 | 针对免疫检查点的双特异性抗体 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2011504187A (ja) | 2007-11-20 | 2011-02-03 | アンブルックス,インコーポレイテッド | 修飾されたインスリンポリペプチドおよびそれらの使用 |
WO2013009868A1 (en) | 2011-07-11 | 2013-01-17 | Yale University | Compositions and methods for making selenocysteine containing polypeptides |
Family Cites Families (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6849417B1 (en) | 1998-04-06 | 2005-02-01 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Mammalian selenoprotein differentially expressed in tumor cells |
WO2001012657A2 (en) | 1999-08-16 | 2001-02-22 | Karolinska Innovations Ab | Methods and means for selenoprotein expression |
WO2007075438A2 (en) | 2005-12-15 | 2007-07-05 | Codon Devices, Inc. | Polypeptides comprising unnatural amino acids, methods for their production and uses therefor |
WO2009043051A2 (en) | 2007-09-27 | 2009-04-02 | Biogen Idec Ma Inc. | Cd23 binding molecules and methods of use thereof |
AU2012216723B2 (en) * | 2007-11-20 | 2014-08-28 | Ambrx, Inc. | Modified insulin polypeptides and their uses |
JP5572972B2 (ja) * | 2009-03-16 | 2014-08-20 | Jnc株式会社 | インスリン分泌促進剤などの薬物のスクリーニング方法 |
US20140024592A1 (en) * | 2010-09-08 | 2014-01-23 | Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine | Modified Relaxin Polypeptides |
SG194472A1 (en) * | 2011-01-28 | 2013-12-30 | Ca Nat Research Council | Engineering of immunoglobulin domains |
PL2717898T3 (pl) | 2011-06-10 | 2019-06-28 | Bioverativ Therapeutics Inc. | Związki o działaniu prokoagulacyjnym i sposoby ich stosowania |
US10240158B2 (en) | 2011-07-11 | 2019-03-26 | Yale University | Compositions and methods for making selenocysteine containing polypeptides |
US10876142B2 (en) | 2011-07-11 | 2020-12-29 | Yale University | Compositions and methods for making selenocysteine containing polypeptides |
US10351626B2 (en) | 2013-03-14 | 2019-07-16 | The Scripps Research Institute | Targeting agent antibody conjugates and uses thereof |
US20150050682A1 (en) | 2013-08-15 | 2015-02-19 | University Of Vermont And State Agricultural College | Direct assay of thioredoxin reductase activity |
WO2015066543A1 (en) | 2013-11-01 | 2015-05-07 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Targeting her2 and her3 with bispecific antibodies in cancerous cells |
US10118950B2 (en) | 2014-08-30 | 2018-11-06 | Northwestern University | Platforms for cell-free protein synthesis comprising extracts from genomically recoded E. coli strains having genetic knock-out mutations in release factor 1 (RF-1) and endA |
WO2016172269A2 (en) | 2015-04-20 | 2016-10-27 | University Of Utah Research Foundation | Insulin analogs having shortened b chain peptides and associated methods |
CN105111304B (zh) * | 2015-09-30 | 2018-12-14 | 山东阿华生物药业有限公司 | 重组人胰岛素前体的纯化和酶切转换方法 |
US10557160B2 (en) | 2015-12-15 | 2020-02-11 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Transgenic bacteria with expanded amino acid usage and nucleic acid molecules for use in the same |
CN109844105A (zh) | 2016-07-11 | 2019-06-04 | 得克萨斯州大学***董事会 | 包含硒代半胱氨酸的重组多肽及其产生方法 |
CA3030930A1 (en) | 2016-07-22 | 2018-01-25 | University Of Utah Research Foundation | Insulin analogs |
RU2769476C2 (ru) * | 2016-07-22 | 2022-04-01 | Университи Оф Юта Ресёч Фаудэтион | Аналоги инсулина |
CN114144426A (zh) | 2019-04-19 | 2022-03-04 | 印地安纳大学理事会 | 餐时或基础胰岛素类似物通过内部二硒桥的稳定化 |
-
2017
- 2017-08-30 JP JP2019531589A patent/JP7186400B2/ja active Active
- 2017-08-30 US US16/329,761 patent/US11492650B2/en active Active
- 2017-08-30 EP EP17847457.3A patent/EP3506945A4/en active Pending
- 2017-08-30 CN CN201780053385.XA patent/CN109803679A/zh active Pending
- 2017-08-30 CA CA3034701A patent/CA3034701A1/en active Pending
- 2017-08-30 WO PCT/US2017/049354 patent/WO2018045018A1/en unknown
-
2022
- 2022-11-18 JP JP2022184852A patent/JP7378106B2/ja active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2011504187A (ja) | 2007-11-20 | 2011-02-03 | アンブルックス,インコーポレイテッド | 修飾されたインスリンポリペプチドおよびそれらの使用 |
WO2013009868A1 (en) | 2011-07-11 | 2013-01-17 | Yale University | Compositions and methods for making selenocysteine containing polypeptides |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
52nd Japanese Peptide Symposium 第52回ペプチド討論会 講演要旨集,2015年,Vol.52,P.78, No.P-021 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US11492650B2 (en) | 2022-11-08 |
JP2020502104A (ja) | 2020-01-23 |
US20190194713A1 (en) | 2019-06-27 |
EP3506945A1 (en) | 2019-07-10 |
WO2018045018A8 (en) | 2018-05-11 |
EP3506945A4 (en) | 2020-07-15 |
JP2023015347A (ja) | 2023-01-31 |
WO2018045018A1 (en) | 2018-03-08 |
CN109803679A (zh) | 2019-05-24 |
CA3034701A1 (en) | 2018-03-08 |
JP7186400B2 (ja) | 2022-12-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7378106B2 (ja) | ゲノム的に再コードした生物におけるセレノ-生物製剤の製造 | |
US20220213500A1 (en) | Expression Process | |
JP6740244B2 (ja) | ヘテロ多量体タンパク質複合体のアセンブリおよび産生を最適化する方法 | |
KR20150138273A (ko) | 단백질의 피로글루타민산 형성을 증가시키기 위한 방법 | |
US20210108213A1 (en) | A method for optimizing antibody expression | |
JPWO2002052029A1 (ja) | 組み換え蛋白質の生産方法及び融合蛋白質 | |
Vyas et al. | Clinical manufacturing of recombinant human interleukin 15. I. Production cell line development and protein expression in E. coli with stop codon optimization | |
Malekian et al. | High-yield production of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor in E. coli BL21 (DE3) by an auto-induction strategy | |
de Araujo et al. | Strategies for over-expression and purification of recombinant full length STAT5B in Escherichia coli | |
AU2004234282B2 (en) | Chaperonine-target protein complex, method of producing the same, method of stabilizing target protein, method of immobilizing target protein, method of analyzing the structure of target protein, sustained-release preparation and method of producing antibody against target protein | |
Mokhonov et al. | SlyD-deficient Escherichia coli strains: A highway to contaminant-free protein extraction | |
Yurkova et al. | Production of a toxic polypeptide as a fusion inside GroEL cavity | |
AU2004234283A1 (en) | Method of producing target protein, fused protein and gene thereof, partial sequence protein of intein and gene thereof, expression vector and transformant | |
JP2004081199A (ja) | 組換え抗体の製造方法 | |
JPWO2004031243A1 (ja) | タンパク質ポリマー及びその製造方法 | |
Blake-Hedges et al. | Production of antibodies and antibody fragments containing non-natural amino acids in Escherichia coli | |
Oosting | to Therapeutic Protein | |
JP5733693B2 (ja) | 組換え型ポリペプチドの製造方法 | |
KR20210148288A (ko) | 생체내 리폴딩된 항체 단편의 클로닝 및 발현 | |
Murakaeva et al. | A simple, rapid method for the production of soluble recombinant proteins from the duplicated growth hormone genes of the tetraploid common carp | |
JP2001294599A (ja) | 組み換えb型肝炎ウィルス表面抗原 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20221118 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20231003 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20231023 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7378106 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |