JP7153669B2

JP7153669B2 - 瘢痕性眼炎症障害の治療のためのコバーシン

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Publication number: JP7153669B2
Application number: JP2019556909A
Authority: JP
Inventors: エイチ．ウェストン－デービス，ウィン
Original assignee: ヴォリューションイミュノファーマシューティカルズエスエイ
Priority date: 2017-04-21
Filing date: 2018-04-20
Publication date: 2022-10-14
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Description

本発明は、シェーグレン症候群、粘膜類天疱瘡およびアトピー性角結膜炎のような瘢痕性眼炎症障害を治療または予防する方法に関する。

本文中に言及され、本明細書の最後に記載される全ての文献は、参照により本明細書に組み込まれている。

補体
補体系は、外敵の侵入に対抗する身体の自然防御メカニズムの欠くことのできない一部であり、炎症過程にも関与する。血清中および細胞表面の３０種を超えるタンパク質が補体系の機能発揮および調節に関与している。近年、有益な過程および病的過程の両方に関連しうる補体系の約３５の公知の成分だけでなく、補体系自体が、血管新生、血小板活性化、グルコース代謝および***形成のように多様な機能を有する少なくとも８５の生物学的経路と相互作用することが明らかになった。

補体系は、外来抗原の存在によって活性化される。（１）ＩｇＭおよびＩｇＧ複合体によって、または糖質の認識によって活性化される古典的経路；（２）非自己表面（特異的調節分子を欠如する）および細菌エンドトキシンによって活性化される第二経路；ならびに（３）病原体表面のマンノース残基へのマンナン結合性レクチン（ＭＢＬ）の結合によって活性化されるレクチン経路という３つの活性化経路が存在する。これら３つの経路は、細胞表面の類似のＣ３^１コンバターゼおよびＣ５コンバターゼの形成による補体活性化を招く、平行する連鎖的なイベントを含み、その結果、急性期炎症メディエーター（Ｃ３ａおよびＣ５ａ）の放出および膜侵襲複合体（ＭＡＣ）の形成を生じる。古典的経路および第二経路に関与する、平行する連鎖を図１に示す。（^１補体経路の成分を文字「Ｃ」に続く「３」などの数字で表し、それにより「Ｃ３」が補体系の第三成分を表すようにすることが慣例である。これらの成分の一部は、補体系の活性化時に切断され、切断産物は数字の後に小文字で示される。したがって、Ｃ５は、慣例的にＣ５ａおよびＣ５ｂと呼ばれる断片に切断される。補体タンパク質は、必ずしも数字の順番で作用するわけでないので、数字は、必ずしも作用の順番を示すわけではない。この呼称の慣例が、本出願に使用される。）

古典的補体経路、第二補体経路およびレクチン補体経路は、本明細書においてまとめて補体経路と呼ばれる。Ｃ５ｂは、補体活性化の「後期」イベントを開始する。これらは、最終補体成分が相互作用してＭＡＣを形成する一連の重合反応を含み、ＭＡＣは、一部の病原体の細胞膜に孔を開け、そのことが病原体の死に繋がる可能性がある。最終補体成分には、Ｃ５ｂ（膜侵襲複合体の集合を開始する）、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８およびＣ９が含まれる。

シェーグレン症候群
シェーグレン症候群は、自己免疫障害である。身体の免疫系が、涙腺および唾液腺などの液体を分泌する腺を攻撃する。シェーグレン症候群の影響は、広範囲に及ぶおそれがある。ある特定の腺が炎症を起こし、炎症が、涙液および唾液の産生を減少させ、ドライアイおよび口内乾燥であるシェーグレン症候群の主な徴候を引き起こす。女性（最もよく罹患する）では、膣の湿りを保つ腺も罹患し、腟乾燥をもたらすおそれがある。

口内乾燥は、う歯、歯肉疾患、乾性咳嗽、嚥下および咀嚼困難、嗄声、発語困難、唾液腺（顎と耳との間に位置する）の腫脹、徴候として舌苔または白舌を含みうる、繰り返す口内真菌感染症（鵞口瘡）などの他の随伴徴候に至る可能性がある。

ドライアイは、眼の灼熱感またはチクチク感、眼の痒み、眼のざらつき感、眼瞼の刺激および腫脹、光敏感性（羞明）、眼の疲れおよび粘液性眼脂をもたらすおそれがある。これらの徴候は、風の強いまたは煙の多い環境、空調された建物内、または飛行機で移動中に悪化するおそれがある。

シェーグレン症候群のより重症な例では、免疫系は、身体の他の部分を攻撃し、乾燥肌、疲れおよび疲労などの徴候（ｓｙｍｐｔｏｍｓ）および症状（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ）を引き起こすおそれがあり、これらは一般的であり、完全な疲労困憊、筋肉痛、関節痛、凝りおよび腫脹、血管炎（血管の炎症）ならびに集中、想起および推論の困難に至るおそれがある。

シェーグレン症候群は、身体を感染または病気から防御する代わりに、免疫系が異常に反応して健康な細胞および組織を攻撃し始める自己免疫症状である。シェーグレン症候群では、免疫系は、涙腺、唾液腺および体中の他の分泌腺（外分泌腺）を攻撃する。自己免疫反応は、外分泌腺を損傷させ、そのため外分泌腺は、もはや正常に機能することができない。免疫系がこれらの腺を制御する神経も損傷し、そのことが腺の効果をさらに減少させるという、ある程度の証拠がある。免疫系は、筋肉、関節、血管、神経および、頻度は低いが器官などの、身体の他の部分を損傷し続けるおそれがある。この理由は、分からないままであるが、研究により、これが遺伝因子、環境因子、および場合によってはホルモン因子の組合せによって誘起されることが示唆されている。

一部の人々は、生まれたときからこの症候群に対してより脆弱であり、感染などのある特定の事象が免疫系の問題を誘起し得ると考えられている。

大部分の研究者は、原発性シェーグレン症候群が遺伝因子と環境因子との組合せによって誘起されると考えている。ある特定の人々は、欠陥がある免疫系に対して自己をより脆弱にする特定の遺伝子をもって生まれる。それから何年も経って、環境因子、ことによるとよく見られるウイルスが、免疫系を誘起して、正しく働くことを止めさせる。女性ホルモンであるエストロゲンも役割を果たすように見える。シェーグレン症候群は、主として女性に発生し、徴候は、通常、エストロゲンレベルが減少し始める閉経期あたりに始まる。エストロゲンレベルの減少は、乾燥の原因になるおそれがあり、この乾燥が、症状をより顕著にする可能性がある。

シェーグレン症候群は、関節リウマチまたはループスなどの他の自己免疫症状を合併するおそれがある。これは、二次性シェーグレン症候群として知られている。

唾液腺および涙腺は、口腔および眼を保護することに極めて重要な役割を果たし、このことは、シェーグレン症候群の徴候がなぜ広範囲にわたり、厄介であり得るかの理由である。涙液は、通常、泣いたときにだけ気付かれるが、眼は常に涙液膜として知られる涙液の薄層で覆われている。涙液は、水、タンパク質、脂肪、粘液および感染と戦う細胞の混合物でできている。涙液は、いくつかの重要な機能を果たす。涙液は、眼を潤滑にし、眼を清潔に、ほこりがないよう保ち、眼を感染から守り、視覚の安定化を助ける。

唾液も、口腔および咽頭を自然に潤滑に保つこと、食物を湿らせることによって消化を助けること、ある特定のデンプンを分解できる酵素を提供すること、および天然の消毒薬として作用すること（唾液は、いくつかの一般的な細菌感染症および真菌感染症から守る抗体、酵素およびタンパク質を含有する）を含む、いくつかの重要な機能を果たす。

シェーグレン症候群は、時に、合併症につながるおそれがある。シェーグレン症候群は、リンパ節のがんである非ホジキンリンパ腫が発生するリスクを増加させる。シェーグレン症候群の女性は、子供に一時的な「ループス」紅斑または心異常がある危険が増加している。いかなる妊娠も、潜在的問題について厳密に監視しなければならない。特に、涙液の産生減少が治療されなければ、視力が永久に損なわれるおそれがある。そのうえ、シェーグレン症候群がドライアイを引き起こす場合では、好中球および他の免疫細胞を眼の患部、特に結膜および角膜に遊走させ、慢性線維性炎症を引き起こす細胞介在性免疫反応があり、これは、眼を永久に損傷するおそれがある。

シェーグレン症候群は、最も一般的には４０～６０歳の人々を冒し、女性が症例の約９０％を占める。ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｅｓｅａｒｃｈＵＫは、英国内で最大５０万人がシェーグレン症候群であり得ると推定している。

シェーグレン症候群は、他の症状と類似の徴候を有し、シェーグレン症候群に関する検査が１つもないので、診断が困難な場合がある。

現在のところ、シェーグレン症候群の治癒法はないが、治療が徴候の管理を助けることができる。ドライアイおよび口内乾燥は、通常、人工涙液および唾液によって改善し得る。感染を発生する危険がより高いので、眼および口内を良好な衛生状態に保つことが重要である。眼および口内をケアすることは、角膜潰瘍およびう歯などの問題の予防を助けることができる。このような治療は、通常、症候群の徴候だけを治療し、症候群の根底にある原因に影響しない。現在のところ、眼の細胞介在性炎症を予防または減少させる有効な局所治療はない。

したがって、シェーグレン症候群によって起こる眼への細胞介在性損傷を治療または予防する方法を提供する必要がある。

瘢痕性眼炎症障害
瘢痕化が、眼に対する細胞介在性損傷によって起こり、特に結膜および角膜を冒す、眼の慢性瘢痕化を引き起こすおそれがあるいくつかの他の障害がある。詳しい障害は、粘膜類天疱瘡およびアトピー性角結膜炎（例えばステロイド耐性アトピー性角結膜炎）である。これらには、移植片対宿主症候群性ドライアイ、乾性角結膜炎、春季カタル、眼瞼角結膜炎、通年性角結膜炎、眼性エリテマトーデス、眼型酒さ、トラコーマ、細菌性、ウイルス性または真菌性角膜炎、眼単純ヘルペスまたは帯状疱疹、遺伝性および外傷性円錐角膜、網膜色素変性症、未熟児網膜炎、ダウン症候群、骨形成不全症、アジソン病、レーバー先天黒内障、エーラス－ダンロス症候群を含むが、それに限定されない円錐角膜、地図状斑点状指紋角膜変性症、フックス角膜変性症、格子状角膜変性症、光線角膜炎、前部ぶどう膜炎、および翼状片が含まれるが、それに限定されない。これらの障害のための有効な局所治療もない。

シェーグレン症候群、粘膜類天疱瘡およびアトピー性角結膜炎を含む上記障害ならびに好中球および／または他の免疫系細胞などの細胞が、眼、特に結膜および角膜に遊走し、眼に瘢痕化損傷を引き起こす任意の他の障害は、本明細書において「瘢痕性眼炎症障害」と呼ばれる。

補体阻害剤
ＷＯ２００４／１０６３６９（ＥｖｏｌｕｔｅｃＬｉｍｉｔｅｄ）は、補体阻害剤に関する。開示される補体阻害剤の特定のサブセットは、Ｃ５に方向づけられ、補体活性化経路のいずれかによりＣ５がＣ５ａおよびＣ５ｂに開裂されるのを防止する。このようなＣ５開裂阻害剤の特定の例は、Ｏｒｎｉｔｈｄｏｒｏｓｍｏｕｂａｔａ種のマダニによって産生されるタンパク質であり、このタンパク質は、ＷＯ２００４／１０６３６９の図４に示されるアミノ酸配列のアミノ酸１９～１６８からなるタンパク質である。（参照を容易にするために、ＷＯ２００４／１０６３６９の図４を本出願の図２として複写する。）ＷＯ２００４／１０６３６９では、このタンパク質は、名称「ＥＶ５７６」および「ＯｍＣＩタンパク質」で知られており、より最近には、「コバーシン（Ｃｏｖｅｒｓｉｎ）」として知られている（例えば、２０１６年３月２８日にオンラインで公表された、Ｊｏｒｅら、ＮａｔｕｒｅＳｔｒｕｃｔｕｒａｌ＆ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ、ＳｔｒｕｃｔｕｒａｌｂａｓｉｓｆｏｒｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔＣ５－ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｓｍｂ．３１９６を参照されたい）。このタンパク質は、本明細書において「コバーシン」と称される。

マダニにおいて、コバーシンは、成熟コバーシンタンパク質のＮ末端に、ＷＯ２００４／１０６３６９の図４に示されるアミノ酸配列のアミノ酸１～１８を含むリーダー配列を有するプレタンパク質として発現する。リーダー配列は、発現後に開裂除去される。

コバーシンは、また、ロイコトリエンＢ４（ＬＴＢ－４）活性を阻害する能力を有する。ＬＴＢ－４と結合する能力は、当技術分野において公知の標準的なｉｎｖｉｔｒｏアッセイによって、例えば、標識ＬＴＢ－４への結合を競合するコバーシンと抗ＬＴＢ－４抗体との間の競合ＥＬＩＳＡによって、等温滴定熱量測定によって、または蛍光滴定によって、実証され得る。

ＷＯ２００７／０２８９６８、ＷＯ２００８／０２９１６７、ＷＯ２００８／０２９１６９、ＷＯ２０１１／０８３３１７およびＷＯ２０１６／１９８１３３などの、様々な適用におけるコバーシンまたはその機能的等価物の使用に関するいくつかのさらなる特許出願がある。ＷＯ２０１５／１８５７６０は、コバーシンおよびその構造等価物が、Ｃ５多型の開裂を防止するのに有効であることを開示している。これらの出願のいずれにも、任意の眼症状の治療におけるコバーシンまたはその任意の機能的等価物の使用は、開示されていない。関係する全ての開示は、補体系の活性化を伴うと疑われる症状または疾患である。

ＡｋａｒｉＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓのウェブサイト（ｈｔｔｐ：／／ａｋａｒｉｔｘ．ｃｏｍ／ｓｊｏｇｒｅｎ／）は、
「コバーシンは、６０日の局所眼毒性試験を好結果で完了し、コバーシンが、眼の表面炎症に対して活性を有するという証拠がある。コバーシンの小さい分子サイズによって可能になった局所眼経路による送達は、必要な合計薬物量を減少させること、および非常に小さい局所用量が、全身補体阻害の影響を事実上打ち消すおかげで、髄膜炎感染の危険または潜在的ナイセリア感染症の予防の必要性を減少させることの両方に、相当な利点を有する。
コバーシンの特別な物理的特徴は、コバーシンをシェーグレン症候群の治療のための魅力的な候補薬にしている。シェーグレン症候群は、全身補体阻害を必要とするエクリズマブのような抗体または遺伝子療法にこの経路でアクセスできない。ＰＮＨおよびａＨＵＳなどの全身疾患と比べて、眼用薬の開発は、潜在的に迅速であり、新薬は、典型的には対応する全身用薬よりもずっと素早く製造販売承認を獲得する」
と示している。

この開示は、眼の表面炎症を治療することに活性があり得ることを示しているだけであることが分かるであろう。しかし、このような表面炎症が影響されるメカニズムは、示されていない。シェーグレン症候群への言及は、コバーシンがこの症候群に有効であると筆者らがなぜ考えるかに関して示しておらず、この主張を裏付ける何らかのデータがあることは示していない。コバーシンは、Ｃ５開裂の阻害剤であることが公知であるので、眼の炎症は補体系の活性化が原因であり得ると筆者らが考えたと想定されるが、重ねて、このことは、データによって全く裏付けられていない。このウェブサイトが言及している活性は、ドライアイの即時徴候に対する活性であると思われる。コバーシンが任意の他の効果を有するという開示も示唆も全くされていない。したがって、依然として、シェーグレン症候群および他の瘢痕性眼炎症障害、特に、粘膜類天疱瘡またはアトピー性角結膜炎によって起こる眼への細胞介在性損傷を治療または予防する方法の必要性がある。

コバーシンは、瘢痕性眼炎症障害のマウスモデルにおいて徴候を軽減することが示された。コバーシンの投与は、スコア付け（以下により詳細に記載する）によって評価される、マウスモデルにおける徴候または所見（ｓｉｇｎｓ）の重症度に減少をもたらす。

本発明の第１の態様によると、瘢痕性眼炎症障害、特にシェーグレン症候群、粘膜類天疱瘡またはアトピー性角結膜炎を治療または予防する方法であって、前記瘢痕性眼炎症障害を患う、またはその危険がある患者に、ＷＯ２００４／１０６３６９の図４（本出願の図２、配列番号２）に示されるアミノ酸配列のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはその機能的等価物を含有する組成物を適用することを含む方法が、提供される。

好ましくは、組成物は、眼科的に許容される組成物であり、組成物は、患者の眼に局所適用される。

本発明の第２の態様により、瘢痕性眼炎症障害、特にシェーグレン症候群、粘膜類天疱瘡またはアトピー性角結膜炎を患う患者またはその危険がある患者に組成物を適用することによって、前記瘢痕性眼炎症障害を治療または予防する方法における使用のための、ＷＯ２００４／１０６３６９の図４（本出願の図２、配列番号２）に示されるアミノ酸配列のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはその機能的等価物を含有する組成物が、提供される。

好ましくは、組成物は、眼科的に許容される組成物であり、組成物は、患者の眼に局所適用するためのものである。

以下において、「コバーシン型タンパク質」という用語は、「ＷＯ２００４／１０６３６９の図４に示されるアミノ酸配列のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはその機能的等価物」についての略記として使用される。

「眼科的に許容される組成物」という用語は、眼に損傷を引き起こさずに眼に適用することができる組成物を示す。このような組成物は、当業者に公知であり、それらには、例えば、コンタクトレンズ使用者によって使用される人工涙液および湿潤性溶液が含まれる。このような組成物は、水、生理食塩水またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）のように単純であり得るが、また、１または２以上の添加剤を含有する任意の他の緩衝溶液であり得る。眼は、乳剤、軟膏、クリーム剤、エアロゾル噴霧剤、ゲル剤もしくは治療用物質の送達用のナノ粒子で、またはイオン泳動により治療され得ることも公知である。これらの組成物のいずれかが、本発明の全ての態様で使用され得る。このような眼科的に許容される組成物は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ、第２２版、２０１２に記載されている。

コバーシン型タンパク質は、好ましくは、瘢痕性眼炎症障害の徴候の出現から３日以内に最初に患者に投与され、次に、徴候が出現した後、患者に少なくとも１日１回、最大で１０日間またはより長く投与される。したがって、コバーシン型タンパク質は、１～５、１～６、１～７、１～８、１～９または１～１０日目またはより長く、あるいは２～５、２～６、２～７、２～８、２～９または２～１０日目またはより長く、あるいは３～５、３～６、３～７、３～８、３～９または３～１０日目またはより長く投与されてもよく、その際、１日目は、徴候が出現した日である。しかし、シェーグレン症候群などの遺伝性障害を患う患者について、治療は、長い期間、場合によっては生涯継続される必要があり得る。

あるいは、コバーシン型タンパク質は、瘢痕性眼炎症障害の徴候が出現した後の任意の時間に患者に投与され得る。治療は、最大でまたは少なくとも１、２、３、４、５、６週間または最大でまたは少なくとも１、２、３、４、５、６ヶ月継続し得る。

有利には、コバーシン型タンパク質は、患者に少なくとも１回、または少なくとも１日２回、好ましくは少なくとも１日３回投与される。

好ましくは、コバーシン型タンパク質の局所用量は、１回５から５０μｇの間、より好ましくは１回１０から４０μｇの間、最も好ましくは１回２０から３０μｇの間である。あるいは、用量は、１回５０～２００μｇ、例えば１回６０～１５０、７０～１２５μｇまたは１回約１２５μｇであり得る。

組成物を局所適用する際、ある特定の滴数またはある特定の長さの軟膏剤が眼に適用されることが通常指示される。眼科的に許容される組成物中のコバーシン型タンパク質の濃度を調整して、適用の指導に従った場合に正確な１日量が投与されることを保証することは、当業者に日常的な事項である。例えば、１滴は、通常、約４０μｌであり、したがって、０．０６３％ｗ／ｖを含有する溶液１滴は、コバーシンを２５．２μｇ含有する。

あるいは、組成物は、そのコバーシン型タンパク質濃度により定義される。例えば、組成物は、０．０６３％ｗ／ｖ、０．１２５％ｗ／ｖもしくは０．２５％ｗ／ｖのコバーシン型タンパク質、または０．０６３％ｗ／ｖ～０．２５％ｗ／ｖのコバーシン型タンパク質を含み得る。組成物は、０．０１２５％ｗ／ｖ～０．５％ｗ／ｖのコバーシン型タンパク質、例えば０．０２５％ｗ／ｖ～０．４％ｗ／ｖ、０．０５％ｗ／ｖ～０．３％ｗ／ｖ、０．１％ｗ／ｖ～０．２５％ｗ／ｖのコバーシン型タンパク質を含み得る。

眼への細胞介在性損傷を予防または治療することにおけるコバーシン型タンパク質の効果が、治療の比較的後期段階に見られることが、驚くことに見出された。実験モデルでは、コバーシン型タンパク質の初回の適用が徴候に顕著な効果を有さないが、コバーシン型タンパク質の最初の投与から一般的に１～７日、より頻繁には３～５日遅れた後で、徴候に顕著な軽減があり、好中球および他の潜在炎症性または損傷性細胞の眼への遊走が阻害されることが観察された。以下によって縛られることを全く望まないものの、この効果は、Ｃ５の開裂の阻害によって起こると考えられる。しかし、結果は、ＭＡＣなどの補体系活性成分による眼への即時損傷が少ないということではない。むしろ、Ｃ５の開裂の阻害は、さもなければ好中球および他の潜在炎症性または損傷性細胞を眼に動員するシグナル伝達化合物の産生を防止する。

顆粒球動員に関連する炎症、特に、眼表面炎症での炎症促進メディエーターＬＴＢ４の役割について増え続ける証拠もある（Ｍａｓｏｕｄｉら、ＤｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｉｎＴｅａｒＦｉｌｍＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｏｆＳｙｍｐｔｏｍａｔｉｃａｎｄＡｓｙｍｐｔｏｍａｔｉｃＬｅｎｓＷｅａｒｅｒｓ、ＯｐｔｏｍＶｉｓＳｃｉ．２０１７Ｓｅｐ；９４（９）：９１４～９１８；Ｌｅｏｎａｒｄｉ、Ａｌｌｅｒｇｙａｎｄａｌｌｅｒｇｉｃｍｅｄｉａｔｏｒｓｉｎｔｅａｒｓ、ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＥｙｅＲｅｓｅａｒｃｈ１１７（２０１３）１０６～１１７およびＳａｄｉｋら、Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓｃａｓｃａｄｉｎｇｔｈｅｉｒｗａｙｔｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ、ＴｒｅｎｄｓＩｍｍｕｎｏｌ．２０１１Ｏｃｔｏｂｅｒ；３２（１０）：４５２～４６０を参照されたい）。したがって、ＬＴＢ４の活性を阻害する、本発明における使用のための薬剤（コバーシン、コバーシン型タンパク質、または改変コバーシンポリペプチドなど）は、ＬＴＢ４媒介炎症に関連する所見および徴候に対してプラスの効果を有し得る。

対象は、治療の結果として、徴候の発生率の減少、徴候の軽減、徴候の発生もしくは再発生の阻害もしくは遅延、またはその組合せを有し得る。好ましくは、治療は、典型的な疾患症状の徴候の減少を生じる。例えば、これは、発赤、結膜浮腫および流涙の減少として現れ得る。これは、追加的または代替的に、眼に対する細胞媒介損傷の減少、および／または眼への好中球および／または他の損傷性細胞の遊走の減少として現れ得る。

徴候は、Ａｋｐｅｋ（ＡｋｐｅｋＥＫ、ＤａｒｔＪＫ、ＷａｔｓｏｎＳ、ＣｈｒｉｓｔｅｎＷ、ＤｕｒｓｕｎＤ、ＹｏｏＳ、Ｏ’ＢｒｉｅｎＴＰ、ＳｃｈｅｉｎＯＤ、ＧｏｔｔｓｃｈＪＤ．Ａｒａｎｄｏｍｉｚｅｄｔｒｉａｌｏｆｔｏｐｉｃａｌｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎ０．０５％ｉｎｔｏｐｉｃａｌｓｔｅｒｏｉｄ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔａｔｏｐｉｃｋｅｒａｔｏｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖｉｔｉｓ、Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ、２００４；１１１：４７６～８２）によって記載される方法を使用する臨床スコア付けにより評価され得る。

例えば、患者の来院の度に最もひどく罹患していると判断された方の眼だけ（または両眼の罹患が等しいと患者が判断した場合は右眼）をスコア付けする、５つの徴候および６つの所見の複合スコアを使用することができる。スコア付けは、０～３の等級であり得る（０は非罹患、１は軽度罹患、２は中等度罹患、３は重度罹患）。このスコア付けシステムを使用する、徴候および所見を合わせたものについての最大可能スコアは、３３である。

以下の徴候をスコア付けすることができる：
１．痒み
２．流涙
３．不快感（灼熱感、チクチク感または異物感）
４．眼脂
５．羞明

以下の所見をスコア付けすることができる：
１．眼球結膜充血
２．眼瞼結膜乳頭増殖
３．点状角膜炎
４．角膜血管新生
５．瘢痕性結膜炎
６．眼瞼炎

好ましくは、治療は、上記表に示される１または２以上の徴候および所見のスコアに減少を生じる。好ましくは、治療は、痒み、流涙、不快感（灼熱感、チクチク感または異物感）、眼脂、羞明、眼球結膜充血、眼瞼結膜の乳頭増殖、点状角膜炎、角膜血管新生、瘢痕性結膜炎および眼瞼炎のうち任意の１または２以上（例えば２、３、４、５、６、７、８、９、１０または１１）のスコアに減少を生じる。

一実施形態では、治療は、痒みのスコアに減少を生じる。一実施形態では、治療は、流涙のスコアに減少を生じる。一実施形態では、治療は、不快感（灼熱感、チクチク感または異物感）のスコアに減少を生じる。一実施形態では、治療は、眼脂のスコアに減少を生じる。一実施形態では、治療は、羞明のスコアに減少を生じる。一実施形態では、治療は、眼球結膜充血のスコアに減少を生じる。一実施形態では、治療は、眼瞼結膜の乳頭増殖のスコアに減少を生じる。一実施形態では、治療は、点状角膜炎のスコアに減少を生じる。一実施形態では、治療は、角膜血管新生のスコアに減少を生じる。一実施形態では、治療は、瘢痕性結膜炎のスコアに減少を生じる。一実施形態では、治療は、眼瞼炎のスコアに減少を生じる。

一部の対象は、徴候の完全消散を有し、さらなる再発を有さない。

一部の実施形態では、効果は、好中球の関与の減少または防止によって媒介され得る。

治療は、また、疾患の１または２以上のステージの開始前、または疾患ステージの進行の間の潜在期間の増加を招き得る。一部の実施形態では、水疱形成が予防され得る。

治療は、また、必要とされる第２の治療の量または期間の減少を招き得る。

したがって、さらなる実施形態では、本発明は、瘢痕性眼炎症障害、特にシェーグレン症候群、粘膜類天疱瘡またはアトピー性角結膜炎を有する患者における眼への細胞媒介損傷を減少させる方法であって、前記瘢痕性眼炎症障害を患うまたはその危険がある患者に、ＷＯ２００４／１０６３６９の図４（本出願の図２、配列番号２）に示されるアミノ酸配列のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはその機能的等価物を含有する組成物を適用することを含む方法を提供する。

代替的に述べると、ＷＯ２００４／１０６３６９の図４（本出願の図２、配列番号２）に示されるアミノ酸配列のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはその機能的等価物を含有する組成物であって、瘢痕性眼炎症障害、特にシェーグレン症候群、粘膜類天疱瘡またはアトピー性角結膜炎を患うまたはその危険がある患者に組成物を適用することによって、前記瘢痕性眼炎症障害を有する患者における眼への細胞媒介損傷を減少させる方法における使用のための組成物が、提供される。治療が、第２の治療の量、または第２の治療による治療期間に減少を生じる場合、減少は、本発明の薬剤の非存在下で使用される第２の治療の量と比較して、最大でまたは少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０％であり得る。疾患パラメーターにおける任意の減少または増加への任意の参照は、処置の非存在下で前記対象と比較される。好ましくは、パラメーターは、定量でき、この場合、増加または減少は、好ましくは統計的に有意である。例えば増加または減少は、治療の非存在下（例えば、前記治療が開始される前）のパラメーターと比較して、少なくとも３、５、１０、１５、２０、３０、４０、５０％であり得る。

驚くことに、より高い用量よりもより低い用量の方が、治療の有効性が大きいことも見出された。治療レジメンについて、通常は、望まれない副作用を誘導せずに患者に可能な限り多くの活性物質が与えられるので、これは、珍しいことである。コバーシンは、一般的に低い副作用を有するので、より高い用量で全身使用できることが公知である。しかし、シェーグレン症候群、粘膜類天疱瘡およびアトピー性角結膜炎などの瘢痕性眼炎症障害の徴候は、より高い用量を使用するよりも、より低い用量のコバーシンを使用する方が大きく軽減することが見出されている。したがって、特に、上述のように長期間にわたる使用と組み合わせて、より低い用量のコバーシン型タンパク質を使用することが好ましい。以下により、いかなる点でも縛られることを望むわけではないが、コバーシン型タンパク質が一般名でタンパク質であるのでこの効果が見られると考えられ、タンパク質は、眼に局所適用されると炎症を引き起こすおそれがあることが見出されている。したがって、より低い用量のコバーシン型タンパク質を使用することは、細胞遊走の所望の阻害と、眼の炎症における望まれない増大との均衡を保ち得る。

コバーシン型タンパク質は、ＷＯ２００４／１０６３６９の図４（本出願の図２、配列番号２）におけるアミノ酸配列のアミノ酸１９～１６８からなるタンパク質であるコバーシン自体、またはこのタンパク質の機能的等価物のいずれかである。

コバーシンは、マダニＯｒｎｉｔｈｏｄｏｒｏｓｍｏｕｂａｔａの唾液腺から単離された。コバーシンは、リポカリンファミリーの遠いメンバーであり、補体活性化を阻害することが示された最初のリポカリンファミリーのメンバーである。コバーシンは、Ｃ５に結合し、Ｃ５コンバターゼによるＣ５のＣ５ａおよびＣ５ｂへの開裂を防止することによって、古典的補体経路、第二補体経路、およびレクチン補体経路を阻害することで、活性ペプチドであるＣ５ａの産生およびＭＡＣの形成の両方を阻害する。コバーシンは、ラット、マウスおよびヒト血清中でＣ５に結合し、Ｃ５コンバターゼによるＣ５の開裂を約０．０２ｍｇ／ｍｌのＩＣ_５０で防止することが実証されている。

コバーシン型タンパク質は、ＷＯ２００４／１０６３６９の図４におけるアミノ酸配列のアミノ酸１～１６８を含むか、またはそれからなってもよい。その図４に示されるタンパク質配列の最初の１８アミノ酸は、Ｃ５結合活性またはＬＴＢ－４結合活性に必要とされないシグナル配列を形成するので、これは、例えば、組換えタンパク質の産生効率に不必要な場合がある（その結果、成熟タンパク質または成熟タンパク質のアミノ酸配列を含むタンパク質が使用される）。

コバーシンタンパク質は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して決定された１ｎＭのＫｄでＣ５に結合することが実証されている［Ｒｏｖｅｒｓｉ、Ｐら、ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ２０１３、２８８（２６）１８７８９～１８８０２］。コバーシンタンパク質の機能的等価物は、好ましくは、好適には３６０ｎＭ未満、より好適には３００ｎＭ未満、最も好適には２５０ｎＭ未満、好ましくは２００ｎＭ未満、より好ましくは１５０ｎＭ未満、最も好ましくは１００ｎＭ未満、さらにより好ましくは５０、４０、３０、２０、または１０ｎＭ未満、有利には５ｎＭ未満のＫｄでＣ５と結合する能力を保持し、その際、前記Ｋｄは、好ましくは［Ｒｏｖｅｒｓｉ、Ｐら、ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ２０１３、２８８（２６）１８７８９～１８８０２］に記載された方法により、表面プラズモン共鳴を使用して決定される。

コバーシンは、古典的補体経路、第二補体経路およびレクチン補体経路を阻害する。好ましくは、コバーシン型タンパク質は、Ｃ５の全体的コンフォメーションを安定化するが、Ｃ５コンバターゼ開裂部位を遮断しないように、Ｃ５に結合する。Ｃ５へのコバーシンの結合は、Ｃ５の全体的コンフォメーションの安定化を招くが、３つの活性化経路Ｃ５コンバターゼによって標的化されるＣ５開裂部位を直接的には遮断しない。コバーシンの機能的等価物も、好ましくはこれらの特性を共有する。

コバーシンは、ＬＴＢ－４と結合することも実証されている。コバーシンの機能的等価物は、好ましくは、コバーシンと類似の親和性でＬＴＢ－４と結合する能力も保持する。しかし、コバーシン型タンパク質がＣ５結合能を保持する場合、これは必須ではないので、このようなコバーシン型タンパク質は、ＬＴＢ－４に顕著にまたは全く結合する必要がない。Ｃ５結合能を保持するが、ＬＴＢ－４結合活性を保持しないコバーシン型タンパク質は、例えば、その全内容が参照により本明細書に組み込まれているＷＯ２０１０／１００３９６に開示されている。減少したＬＴＢ－４結合能を有する、またはＬＴＢ－４結合能を有さないこのようなコバーシン型タンパク質は、本発明の全ての態様に使用され得る。

コバーシンは、また、ＬＴＢ－４と結合することが実証されている。コバーシンの機能的等価物は、また、コバーシンと類似の親和性でＬＴＢ－４と結合する能力を保持し得る。コバーシン型タンパク質がＣ５結合能を保持しない場合、このようなコバーシン型タンパク質は、顕著なＬＴＢ－４結合能を保持するはずである。Ｃ５結合能を保持しないが、ＬＴＢ－４結合活性を保持するコバーシン型タンパク質は、例えば、２０１７年４月２１日に出願された同時係属のＵＫ特許出願ＧＢ１７０６４０６．４（出願者参照番号Ｐ０７０４７５ＧＢ）および本出願が出願されたのと同じ日に出願された国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１８／××××××（出願者参照番号Ｐ０７０４７５ＷＯ）に開示されており、これらの全内容は、参照により本明細書に組み込まれている。減少したＣ５結合活性を有する、またはＣ５結合活性を有さないが、ＬＴＢ－４結合能を保持するこのようなコバーシン型タンパク質は、本発明の全ての態様に使用され得る。

このようなコバーシン型タンパク質は、以下の配列を含むか、またはそれからなっていてもよい。
配列番号３４（ＧＢ１７０６４０６．４の配列番号５）は、配列番号４が、Ｍｅｔ１１４をＧｌｎに、Ｍｅｔ１１６をＧｌｎに、Ｌｅｕ１１７をＳｅｒに、Ａｓｐ１１８をＡｓｎに、Ａｌａ１１９をＧｌｙに、Ｇｌｙ１２０をＳｅｒに、Ｇｌｙ１２１をＡｌａに、Ｌｅｕ１２２をＡｓｐに、Ｇｌｕ１２３をＡｓｐにおよびＶａｌ１２４をＬｙｓに変更するように改変された改変コバーシンのアミノ酸配列である。（コバーシンバリアント１）
配列番号３５（ＧＢ１７０６４０６．４の配列番号６）は、配列番号４が、Ａｌａ４４をＡｓｎに、Ｍｅｔ１１６をＧｌｎに、Ｌｅｕ１１７をＳｅｒに、Ｇｌｙ１２１をＡｌａに、Ｌｅｕ１２２をＡｓｐに、Ｇｌｕ１２３をＡｌａにおよびＡｓｐ１４９をＧｌｙに変更するように改変された改変コバーシンのアミノ酸配列である。（コバーシンバリアント２）
配列番号３６（ＧＢ１７０６４０６．４の配列番号７）は、配列番号４が、Ａｌａ４４をＡｓｎに、Ｍｅｔ１１６をＧｌｎに、Ｌｅｕ１２２をＡｓｐにおよびＡｓｐ１４９をＧｌｙに変更するように改変された改変コバーシンのアミノ酸配列である。（コバーシンバリアント３）
配列番号３７（ＧＢ１７０６４０６．４の配列番号８）は、配列番号４が、Ａｌａ４４をＡｓｎに変更するように改変された改変コバーシンのアミノ酸配列である。（コバーシンバリアント４）
配列番号３８（ＧＢ１７０６４０６．４の配列番号９）は、配列番号４のアミノ酸位置１１４～１２４（配列番号２のアミノ酸位置１３２～１４２）のベータＨとアルファ２との間のループのアミノ酸配列である。
配列番号３９（ＧＢ１７０６４０６．４の配列番号１０）は、コバーシンバリアント１における配列番号４（配列番号３４）のアミノ酸位置１１４～１２４のベータＨとアルファ２との間のループのアミノ酸配列である。
配列番号４０（ＧＢ１７０６４０６．４の配列番号１１）は、コバーシンバリアント２における配列番号４（配列番号３５）のアミノ酸位置１１４～１２４のベータＨとアルファ２との間のループのアミノ酸配列である。
配列番号４１（ＧＢ１７０６４０６．４の配列番号１２）は、コバーシンバリアント３における配列番号４（配列番号３６）のアミノ酸位置１１４～１２４のベータＨとアルファ２との間のループのアミノ酸配列である。

コバーシン型ポリペプチドは、改変コバーシンポリペプチド（例えば、ロイコトリエンまたはヒドロキシエイコサノイド結合活性を示し、減少したＣ５結合性を示すか、またはＣ５結合性を示さない）として記載され得る。「改変コバーシンポリペプチド」への言及は、配列番号２または配列番号４のいずれかの改変バージョン、すなわち、配列番号２のＮ末端に見られる１８アミノ酸のシグナル配列を有するまたは有さないコバーシンポリペプチドへの言及として理解されたい。

このようなポリペプチドは、ロイコトリエンまたはヒドロキシエイコサノイド結合活性を示し、減少したＣ５結合性を示すか、またはＣ５結合性を示さなくてもよく、１～３０のアミノ酸置換がなされた配列番号４、ここで
（ｉ）配列番号４の１１４～１２４位に、以下の置換（ａ）～（ｊ）：
ａ．Ｍｅｔ１１４が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されている；
ｂ．Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されている；
ｃ．Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、またはＰｒｏで置換されている；
ｄ．Ａｓｐ１１８が、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されている；
ｅ．Ａｌａ１１９が、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されている；
ｆ．Ｇｌｙ１２０が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されている；
ｇ．Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されている；
ｈ．Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されている；
ｉ．Ｇｌｕ１２３が、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されている；
ｊ．Ｖａｌ１２４が、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されている
のうち１または２以上がなされており；または／および
（ｉｉ）配列番号４中のＡｌａ４４が、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されている；
または改変コバーシンポリペプチドのＮ末端から最大５つのアミノ酸が欠失されているその断片を含むことができる。

本明細書に使用されるＬＫ／Ｅ結合活性は、ＬＴＢ４、Ｂ４イソロイコトリエンおよびその任意のヒドロキシル化誘導体、ＨＥＴＥ、ＨＰＥＴＥならびにＥＥＴを含むが、それに限定されないロイコトリエンおよびヒドロキシエイコサノイドに結合する能力を表す。ＬＴＢ４結合性が、特に関心対象である。

改変コバーシンポリペプチドは、以下の説明により改変された、配列番号２もしくは４からなるか、または以下の説明により改変された配列番号２もしくは４を含んでいてもよい。

配列番号２および配列番号４における未改変コバーシンポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸位置１１４～１２４（配列番号２のアミノ酸位置１３２～１４２）のベータＨとアルファ２との間のループを特徴とする。このループは、以下に示される配列を有する：
－Ｍｅｔ－Ｔｒｐ－Ｍｅｔ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｖａｌ－（配列番号３８）
最初のＭｅｔは、配列番号４の１１４位および配列番号２の１３２位にある。

改変コバーシンポリペプチドにおいて、配列番号２または配列番号４のコバーシンポリペプチドは、配列番号４の１１４～１２４位に以下の置換（ａ）～（ｊ）：
ａ．Ｍｅｔ１１４が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＧｌｎまたはＡｌａで置換されている；
ｂ．Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＧｌｎまたはＡｌａで置換されている；
ｃ．Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、またはＰｒｏ、好ましくはＳｅｒまたはＡｌａで置換されている；
ｄ．Ａｓｐ１１８が、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、ＭｅｔＰｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＡｓｎで置換されている；
ｅ．Ａｌａ１１９が、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＧｌｙまたはＡｓｎで置換されている；
ｆ．Ｇｌｙ１２０が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＳｅｒまたはＡｓｎで置換されている；
ｇ．Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｌａまたはＡｓｎで置換されている；
ｈ．Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｓｐまたはＡｌａで置換されている；
ｉ．Ｇｌｕ１２３が、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＡｓｐ、Ａｌａ、ＧｌｎまたはＡｓｎで置換されている；
ｊ．Ｖａｌ１２４が、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＬｙｓまたはＡｌａで置換されている
のうち１または２以上がなされるように改変されている。

改変コバーシンポリペプチドにおいて、配列番号２または配列番号４におけるコバーシンポリペプチドは、配列番号４の１１４～１２４位に以下の置換（ａ）～（ｊ）：
ａ．Ｍｅｔ１１４が、Ｇｌｎで置換されている；
ｂ．Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎで置換されている；
ｃ．Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒで置換されている；
ｄ．Ａｓｐ１１８が、Ａｓｎで置換されている；
ｅ．Ａｌａ１１９が、Ｇｌｙで置換されている；
ｆ．Ｇｌｙ１２０が、Ｓｅｒで置換されている；
ｇ．Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａで置換されている；
ｈ．Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐで置換されている；
ｉ．Ｇｌｕ１２３が、Ａｓｐ、またはＡｌａで置換されている；
ｊ．Ｖａｌ１２４が、Ｌｙｓで置換されている
のうち１または２以上がなされるように改変することができる。

改変コバーシンポリペプチドにおいて、置換（ａ）～（ｊ）のうち２、３、４、５、６、７、８、９、または１０が存在する。好ましくは、置換（ａ）～（ｊ）のうち２つ以上、５つ以上または８つ以上が存在する。

改変コバーシンポリペプチドにおいて、配列番号２または配列番号４におけるコバーシンポリペプチドは、配列番号４の１１４～１２４位に以下の置換：
ａ．Ｍｅｔ１１４が、Ｇｌｎで置換されている；
ｂ．Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎで置換されている；
ｃ．Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒで置換されている；
ｄ．Ａｓｐ１１８が、Ａｓｎで置換されている；
ｅ．Ａｌａ１１９が、Ｇｌｙで置換されている；
ｆ．Ｇｌｙ１２０が、Ｓｅｒで置換されている；
ｇ．Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａで置換されている；
ｈ．Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐで置換されている；
ｉ．Ｇｌｕ１２３が、Ａｓｐで置換されている；
ｊ．Ｖａｌ１２４が、Ｌｙｓで置換されている
が存在するように改変することができる。

必要に応じて、上述の改変コバーシンポリペプチドにおいて、Ｔｒｐ１１５は置換されていない。好ましい改変コバーシンポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸位置１１４～１２４のベータＨとアルファ２との間に、配列Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ｇｌｎ－Ｓｅｒ－Ａｓｎ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ａｓｐ－Ａｓｐ－Ｌｙｓ（配列番号３９）を有するループを有する。

改変コバーシンポリペプチドにおいて、コバーシンポリペプチドは、配列番号４の１１４～１２４位に以下の置換：
ａ．Ｍｅｔ１１４が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＧｌｎで置換されている；
ｂ．Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、またはＰｒｏ、好ましくはＳｅｒで置換されている；
ｃ．Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｌａで置換されている；
ｄ．Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｓｐで置換されている；
ｅ．Ｇｌｕ１２３が、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＡｓｐで置換されている
が存在するように改変することができる。

より詳細な実施形態では；
ａ．Ｍｅｔ１１６は、Ｇｌｎで置換されている；
ｂ．Ｌｅｕ１１７は、Ｓｅｒで置換されている；
ｃ．Ｇｌｙ１２１は、Ａｌａで置換されている；
ｄ．Ｌｅｕ１２２は、Ａｓｐで置換されている；
ｅ．Ｇｌｕ１２３は、Ａｌａで置換されている。

必要に応じて、上述のこの改変コバーシンポリペプチドでは、Ｔｒｐ１１５は置換されていない。必要に応じて、この実施形態では、Ｍｅｔ１１４、Ｔｒｐ１１５、Ａｓｐ１１８、Ａｌａ１１９、Ｇｌｙ１２０およびＶａｌ１２４は、置換されていない、または本明細書の他で言及されたように保存的置換で置換されている。好ましい改変コバーシンポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸位置１１４～１２４のベータＨとアルファ２との間に、配列Ｍｅｔ－Ｔｒｐ－Ｇｌｎ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ａｓｐ－Ａｌａ－Ｖａｌ（配列番号４０）を有するループを有する。

改変コバーシンポリペプチドにおいて、コバーシンポリペプチドは、配列番号４の１１４～１２４位で以下の置換：
ａ．Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＧｌｎで置換されている；
ｂ．Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｓｐで置換されている；
が存在するように改変することができる。

より詳細な実施形態では；
ａ．Ｍｅｔ１１６は、Ｇｌｎで置換されている；
ｂ．Ｌｅｕ１２２は、Ａｓｐで置換されている。

必要に応じて、上述のこの改変コバーシンポリペプチドにおいて、Ｔｒｐ１１５は、置換されていない。必要に応じて、この実施形態では、Ｍｅｔ１１４、Ｔｒｐ１１５、Ｌｅｕ１１７、Ａｓｐ１１８、Ａｌａ１１９、Ｇｌｙ１２０、Ｇｌｙ１２１、Ｇｌｕ１２３およびＶａｌ１２４は、置換されていない。好ましい改変コバーシンポリペプチドは、配列Ｍｅｔ－Ｔｒｐ－Ｇｌｎ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ－Ｖａｌを有する配列番号４のアミノ酸位置１１４～１２４（配列番号４１）のベータＨとアルファ２との間にループを有する。

改変コバーシンポリペプチドにおいて、コバーシンポリペプチドは、配列番号４中のＡｌａ４４（配列番号２中のＡｌａ６２）がＡｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓで置換されるように改変することができる。

好ましい実施形態では、配列番号４中のＡｌａ４４は、Ａｓｎで置換されている。

配列番号４の４４位（または配列番号２の６２位）でのこの置換は、本明細書に記載される他の置換のいずれかと組み合わせてなされ得る。

別の改変コバーシンポリペプチドにおいて、コバーシンポリペプチドは、配列番号４の１１４～１２４位に以下の置換（ａ）～（ｊ）：
ａ．Ｍｅｔ１１４が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＧｌｎまたはＡｌａ、例えばＧｌｎで置換されている；
ｂ．Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＧｌｎまたはＡｌａ、例えばＧｌｎで置換されている；
ｃ．Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、またはＰｒｏ、好ましくはＳｅｒまたはＡｌａ、例えばＳｅｒで置換されている；
ｄ．Ａｓｐ１１８が、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、ＭｅｔＰｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＡｓｎで置換されている；
ｅ．Ａｌａ１１９が、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＧｌｙまたはＡｓｎ、例えばＧｌｙで置換されている；
ｆ．Ｇｌｙ１２０が、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＳｅｒまたはＡｓｎ、例えばＳｅｒで置換されている；
ｇ．Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｌａまたはＡｓｎ、例えばＡｌａで置換されている；
ｈ．Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｓｐまたはＡｌａ、例えばＡｓｐで置換されている；
ｉ．Ｇｌｕ１２３が、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＡｓｐ、Ａｌａ、ＧｌｎまたはＡｓｎ、例えばＡｓｐまたはＡｌａで置換されている；
ｊ．Ｖａｌ１２４が、Ｌｙｓ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒ、好ましくはＬｙｓまたはＡｌａ、例えばＬｙｓで置換されている
のうち１または２以上が存在し、かつ追加的に、配列番号４中のＡｌａ４４（配列番号２中のＡｌａ６２）が、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｉｓ、好ましくはＡｓｎで置換されるように改変することができる。

一部の改変コバーシンポリペプチドにおいて、コバーシンポリペプチドは、配列番号４の１１４～１２４位に以下の置換：
ａ．Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎで置換されている；
ｂ．Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒで置換されている；
ｃ．Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａで置換されている；
ｄ．Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐで置換されている；
ｅ．Ｇｌｕ１２３が、Ａｌａで置換されている
が存在し、かつ配列番号４中のＡｌａ４４が、Ａｓｎで置換されるように改変することができる。

本実施形態の好ましい態様では、配列番号４の１１４～１２４位に対応するアミノ酸残基は、配列番号４０に示される通りである。

一部の改変コバーシンポリペプチドにおいて、コバーシンポリペプチドは、配列番号４の１１４～１２４位に以下の置換：
ａ．Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎで置換されている；
ｂ．Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐで置換されている
が存在し、かつ配列番号４中のＡｌａ４４がＡｓｎで置換されるように改変されている。

本実施形態の好ましい態様では、配列番号４の１１４～１２４位に対応するアミノ酸残基は、配列番号４１に示される通りである。

一部の改変コバーシンポリペプチドにおいて、コバーシンポリペプチドは、配列番号４中のＡｓｐ１４９が、Ｇｌｙ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｍｅｔ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、またはＴｈｒで置換されるように改変することができる。一部の実施形態では、コバーシンポリペプチドは、配列番号４のＡｓｐ１４９がＧｌｙで置換されるように改変される。配列番号４の１４９位（配列番号２の１６７位）でのこの置換は、本明細書に記載される他の置換のうちいずれかと組み合わせてなされ得る。

一部の改変コバーシンポリペプチドにおいて、コバーシンポリペプチドは、配列番号４の１１４～１２４位に以下の置換：
ａ．Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎで置換されている；
ｂ．Ｌｅｕ１１７が、Ｓｅｒで置換されている；
ｃ．Ｇｌｙ１２１が、Ａｌａで置換されている；
ｄ．Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐで置換されている；
ｅ．Ｇｌｕ１２３が、Ａｌａで置換されている
が存在し、配列番号４中のＡｌａ４４が、Ａｓｎで置換され、配列番号４のＡｓｐ１４９が、Ｇｌｙ１４９で置換されるように改変することができる。

一部の改変コバーシンポリペプチドにおいて、コバーシンポリペプチドは、配列番号４の１１４～１２４位で以下の置換：
ａ．Ｍｅｔ１１６が、Ｇｌｎで置換されている；
ｂ．Ｌｅｕ１２２が、Ａｓｐで置換されている
が存在し、
配列番号４中のＡｌａ４４が、Ａｓｎで置換され、配列番号４のＡｓｐ１４９が、Ｇｌｙ１４９で置換されるように改変することができる。

本開示の様々な態様および実施形態では、改変コバーシンポリペプチドは、配列番号２および配列番号４における未改変コバーシンポリペプチドと１～３０のアミノ酸が異なる。配列番号２および配列番号４におけるコバーシンポリペプチドに任意の修復が行われ得るが、但し、結果として生じる改変コバーシンポリペプチドが、未改変コバーシンポリペプチドと比較してＬＫ／Ｅ結合活性を示し、減少したＣ５結合性を示す、またはＣ５結合性を示さない。

一部の実施形態では、配列番号４の６、３８、１００、１２８、１２９、１５０位にある６つのシステインアミノ酸は、本発明の改変コバーシンポリペプチドに保持されている。

一部の改変コバーシンポリペプチドにおいて、配列番号４中のＡｓｎ６０およびＡｓｎ８４は、それぞれＧｌｎで置換されている。この改変は、ポリペプチドを酵母において発現させた場合に、Ｎ結合型高グリコシル化を防止するために部位特異的変異誘発により実施することができる。

一部の改変コバーシンポリペプチドにおいて、配列番号４中の以下のアミノ酸：Ｐｈｅ１８、Ｔｙｒ２５、Ａｒｇ３６、Ｌｅｕ３９、Ｇｌｙ４１、Ｐｒｏ４３、Ｌｅｕ５２、Ｖａｌ５４、Ｍｅｔ５６、Ｐｈｅ５８、Ｔｈｒ６７、Ｔｒｐ６９、Ｐｈｅ７１、Ｇｌｎ８７、Ａｒｇ８９、Ｈｉｓ９９、Ｈｉｓ１０１、Ａｓｐ１０３、およびＴｒｐ１１５のうち１または２以上が、ＬＴＢ４との結合に関与すると考えられ、したがって、未改変形態で保持され得る。一部の改変コバーシンポリペプチドにおいて、これらのアミノ酸のうち少なくとも５、１０もしくは１５、または全てが、本発明の改変コバーシンポリペプチドにおいて未改変形態で保持されている。一部の改変コバーシンポリペプチドにおいて、これらのアミノ酸のうち１または２以上が、保存的に置換され得る。一部の改変コバーシンポリペプチドにおいて、これらのアミノ酸のうち最大で５、１０もしくは１５、または全てが、本発明の改変コバーシンポリペプチドにおいて保存的に置換されている。

配列番号４中の以下の位置：５、６、１１、１３～１５、２０～２１、２４～２７、２９～３２、３５～４１、４５、４７～４８、５０、５２～６０、６４、６６、６９～８１、８３、８４、８６、９０～９４、９７～１０４、１１２～１１３、１１５、１２５～１２９、１３２～１３９、１４５、１４８、および１５０のアミノ酸は、コバーシンとＴＳＧＰ２およびＴＳＧＰ３との間で高度に保存されている。

配列番号４中の以下の位置：５、６、１１、１３～１５、１８、２０～２１、２４～２７、２９～３２、３５～４１、４３、４５、４７～４８、５０、５２～６０、６４、６６、６７、６９～８１、８３、８４、８６、８７、８９、９０～９４、９７～１０４、１１２～１１３、１１５、１２５～１２９、１３２～１３９、１４５、１４８、および１５０のアミノ酸は、ＬＴＢ４への結合に関与すると考えられ、および／またはコバーシンとＴＳＧＰ２およびＴＳＧＰ３との間で高度に保存されている。

配列番号４中の以下の位置：５、６、１１、１３～１５、１８、２０～２１、２４～２５、２７、３０～３２、３５～４１、４３、４７～４８、５０、５２～６０、６４、６６、６７、６９～８１、８３、８４、８６、８７、８９、９０～９４、９８、１００、１０２～１０４、１１２～１１３、１１５、１２６、１２８～１２９、１３２～１３９、１４５、１４８、および１５０のアミノ酸は、ＬＴＢ４への結合に関与すると考えられ、および／またはコバーシンとＴＳＧＰ２およびＴＳＧＰ３との間で高度に保存されている。

したがって、一部の改変コバーシンポリペプチドにおいて、上記アミノ酸は、未改変形態で保持されている。一部の実施形態では、これらのアミノ酸のうち少なくとも５、１０もしくは１５、または全てが、本発明の改変コバーシンポリペプチドにおいて未改変形態で保持されている。一部の実施形態では、これらのアミノ酸のうち１または２以上が、保存的に置換され得る。一部の実施形態では、これらのアミノ酸のうち最大で５、１０もしくは１５、２０、２５、３０、４０、５０または全てが、本発明の改変コバーシンポリペプチドにおいて保存的に置換されている。

本明細書に記載される改変コバーシンポリペプチドは、典型的には、配列番号２または配列番号４と１～３０、好ましくは２～２５、より好ましくは３～２０、さらにより好ましくは４～１５のアミノ酸が異なる。典型的には、差異は、５～１２、または６～１０のアミノ酸変化である。例えば、１～３０、または２～２５、３～３０、４～１５、５～１２、または６～１０のアミノ酸置換が、配列番号２または配列番号４になされ得る。

配列番号４のアミノ酸位置１１４～１２４（配列番号２のアミノ酸位置１３２～１４２）のベータＨとアルファ２との間に配列番号３９に示されるようなループを有する改変コバーシンポリペプチドは、このループが存在する結果として配列番号４と比較して１０のアミノ酸置換を有する。したがって、一部の実施形態では、本明細書に記載される改変コバーシンポリペプチドは、好ましくは、配列番号３４に示される置換以外に配列番号４と比較して（例えば配列番号３９のループ中に）１～１５、２～１０、３～５、または最大で２、３、４もしくは５の追加的な置換を有する。

配列番号４０に示されるような、配列番号４のアミノ酸位置１１４～１２４（配列番号２のアミノ酸位置１３２～１４２）のベータＨとアルファ２との間にループを有する改変コバーシンポリペプチドは、このループが存在する結果として配列番号４と比較して５のアミノ酸置換を有する。したがって、一部の実施形態では、本明細書に記載される改変コバーシンポリペプチドは、好ましくは、配列番号３５に示される置換以外に配列番号４と比較して（例えば、配列番号４０のループ中に）１～２０、２～１５、３～１０、または最大で２、３、４、５、６、７、８、９、１０の追加的な置換を有する。追加的な置換には、好ましくは、本明細書の他の箇所に示されるような４４位および１４９位の置換が含まれる。

配列番号４１に示されるように配列番号４のアミノ酸位置１１４～１２４（配列番号２のアミノ酸位置１３２～１４２）のベータＨとアルファ２との間にループを有する改変コバーシンポリペプチドは、このループが存在する結果として配列番号４と比較して２つのアミノ酸置換を有する。したがって、一部の実施形態では、改変コバーシンポリペプチドは、好ましくは、配列番号３６に示される置換以外に配列番号４と比較して１～２５、２～１２、３～１５、または最大で２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５の追加的な置換（例えば、配列番号４１のループ中の置換）を有する。追加的な置換には、好ましくは、本明細書の他の箇所に示されるような４４位および１４９位の置換が含まれる。

本明細書の他の箇所に示されるように配列番号４の４４位に置換を有する改変コバーシンポリペプチドは、好ましくは、配列番号４と比較して、１～２５、２～１２、３～１５、または最大で２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５の追加的な置換を有する。

上で明確に述べられる置換以外の置換は、好ましくは、例えば次の表による保存的置換である。第２列の同じブロック内にあり、好ましくは第３列の同じ行にあるアミノ酸は、相互に置換され得る。

好ましい改変コバーシンポリペプチドは、配列番号３４、３５、３６、３７のうち１つに示されるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなっていてもよい。

本発明は、また、上述の改変コバーシンポリペプチドの断片であって、改変コバーシンポリペプチドのＮ末端から最大で５つのアミノ酸が欠失されている断片の使用を包含する。断片は、改変コバーシンポリペプチドのＮ末端からの１、２、３、４または５つの欠失に対応し得る。配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列における他の位置からの欠失は、また、結果として生じるポリペプチドが改変コバーシンのＬＫ／Ｅ結合活性を保持し、減少した補体阻害剤活性を有する、または補体阻害剤活性を有さないならば、本発明の一部を形成すると考えられる。

ＲａＣＩタンパク質もＣ５に結合し、このような結合によってＣ５のＣ５ａおよびＣ５ｂへの変換を阻害し得ることが実証されている。ＲａＣＩタンパク質は、上で引用されるその全内容が参照により本明細書に組み込まれているＪｏｒｅの論文に記載されている。このようなタンパク質は、その全内容が参照により本明細書に組み込まれているＷＯ２０１５／１８５９４５に、より詳細に記載されている。

ＷＯ２０１５／１８５９４５に示されるように、第１の態様では、ＷＯ２０１５／１８５９４５の発明は、
（ａ）配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２のうち任意の１つのアミノ酸配列；
（ｂ）（ａ）と少なくとも６０％の配列同一性を有するバリアントアミノ酸配列；
（ｃ）（ａ）と少なくとも７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列；または
（ｄ）少なくとも４０、５０、６０、６５、７０または７５アミノ酸長である、（ａ）、（ｂ）または（ｃ）の活性断片
を含むか、またはそれからなる単離ポリペプチドを提供し、その際、配列同一性の数および配列同一性の決定は、ＷＯ２０１５／１８５９４５に開示される通りである。これらのポリペプチドのうち任意のものが、本発明の全態様に使用され得る。

参照を容易にするために、ＷＯ２０１５／１８５９４５で参照された配列を本出願において下記の配列番号で示す。

Ｃ５に結合し、その開裂を阻害するモノクローナル抗体および小分子は、様々な疾患、特にＰＮＨ、乾癬、関節リウマチ、全身性エリテマトーデスおよび移植片拒絶を治療するために開発済みおよび開発中である（ＲｉｃｋｌｉｎＤ＆ＬａｍｂｒｉｓＪ、ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２５：１２６５～１２７５（２００７））。これらのモノクローナル抗体および小分子のいずれかは、また、本発明の全態様に使用され得る。しかし、これらのモノクローナル抗体の一部は、ある特定のＣ５多型を有する対象からのＣ５に結合せず、したがって、これらの対象には無効である（Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ、Ｊら、ＮｅｗＥｎｇｌＪ．Ｍｅｄ．、３０；７：６３２～６３９（２０１４））。好ましくは、コバーシン型タンパク質は、抗体ではなく、野生型Ｃ５だけでなく、Ｃ５多型（例えば、エクリズマブによる治療を無効にする、またはエクリズマブによる治療の効力を減少させるＣ５多型）を有する対象からのＣ５にも結合し、その開裂を阻害するタンパク質である。「Ｃ５多型」という用語は、野生型Ｃ５と比較して、どれも１または２以上であり得る挿入、欠失、アミノ酸置換、フレームシフト、短縮化、またはこれらの変化の１または２以上の組合せによって変化された任意のバージョンのＣ５を含む。ヒト対象において、野生型Ｃ５は、受託番号ＮＰ＿００１７２６．２；バージョンＧＩ：３８０１６９４７のＣ５タンパク質である。Ｃ５多型の例には、モノクローナル抗体エクリズマブの有効性を減少させる、８８５位での多型、例えば、Ａｒｇ８８５Ｃｙｓ（ｃ．２６５３Ｃ＞Ｔによりコードされる）、ｐ．Ａｒｇ８８５Ｈｉｓ（ｃ．２６５４Ｇ＞Ａによってコードされる）およびＡｒｇ８８５Ｓｅｒが含まれる［Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ、Ｊら、ＮｅｗＥｎｇｌＪ．Ｍｅｄ．、３０；７：６３２～６３９（２０１４）。

コバーシン型タンパク質が、Ｃ５多型を有する対象からのＣ５を含むＣ５と結合する能力は、当技術分野において公知の標準的なｉｎｖｉｔｒｏアッセイにより、例えば表面プラズモン共鳴により、または標識Ｃ５を有するゲル上でのタンパク質のインキュベーション後のウエスタンブロットにより、決定され得る。

Ｃ５多型、例えば、エクリズマブによる治療を無効にする、またはエクリズマブによる治療の有効性を減少させるＣ５多型を有する対象からのＣ５を含むＣ５と結合する薬剤の能力は、当技術分野において公知の標準的なｉｎｖｉｔｒｏアッセイ、例えば、表面プラズモン共鳴、またはタンパク質をゲル上で標識Ｃ５と共にインキュベーションした後のウエスタンブロットにより決定され得る。好ましくは、コバーシン型タンパク質は、野生型Ｃ５および／またはＣ５多型、例えば、エクリズマブによる治療を無効にする、もしくはエクリズマブによる治療の有効性を減少させるＣ５多型を有する対象からのＣ５のいずれかのＣ５と、３６０ｎＭ未満、より好適には３００ｎＭ未満、最も好適には２５０ｎＭ未満、好ましくは２００ｎＭ未満、より好ましくは１５０ｎＭ未満、最も好ましくは１００ｎＭ未満、さらにより好ましくは５０、４０、３０、２０、または１０ｎＭ未満、有利には５ｎＭ未満のＫｄで結合し、その際、前記Ｋｄは、表面プラズモン共鳴を使用して、好ましくは［Ｒｏｖｅｒｓｉら、上記］に記載される方法により、決定される。

これは、野生型Ｃ５およびＣ５多型、例えばエクリズマブによる治療を無効にする、またはエクリズマブによる治療の有効性を減少させるＣ５多型を有する対象からのＣ５に対して、より高い、より低いまたは同じ親和性を示し得る。

コバーシン型タンパク質が補体活性化を阻害する能力は、それが血清中の補体活性化を阻害する能力を測定することによって決定され得る。例えば、血清中の補体の活性は、当技術分野において公知または本明細書に記載される任意の手段によって測定することができる。

減少したＣ５結合活性を有する、またはＣ５結合活性を有さないが、ＬＴＢ－４結合能を保持する改変コバーシンポリペプチドが使用される場合、Ｃ５結合性は、例えば、配列番号２または４における未改変コバーシンポリペプチドによって示される結合性と比べて少なくとも２分の１、５分の１、１０分の１、１５分の１、２０分の１、５０分の１、１００分の１に減少または消失し得る。Ｃ５結合性は、例えば、配列番号２または４における未改変コバーシンポリペプチドと比べて少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または９５％減少し得る。改変コバーシンポリペプチドは、Ｒｏｖｅｒｓｉら（２０１３）ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．２８８、１８７８９～１８８０２に記載される、またはＧＢ１７０６４０６．４の実施例２に示される方法に従って表面プラズマ共鳴（ＳｕｒｆａｃｅＰｌａｓｍａＲｅｓｏｎａｎｃｅ）によって決定されるとき、１マイクロモル濃度よりも大きいＫＤでＣ５と結合し得る。

コバーシン型タンパク質は、また、エイコサノイド活性を阻害する機能を有し得る。

コバーシン型タンパク質は、ＬＴＢ－４活性を阻害し得る、これは必要なわけではない。特に、コバーシン型タンパク質は、ＬＴＢ－４に結合し得る。コバーシン型タンパク質がＬＴＢ－４に結合する能力は、当技術分野において公知の標準的なｉｎｖｉｔｒｏアッセイ、例えば、標識ＬＴＢ－４への結合を競合するコバーシンと抗ＬＴＢ－４抗体との間の競合ＥＬＩＳＡ、等温滴定熱量測定または蛍光滴定によって決定され得る。

蛍光滴定を使用して得られるデータは、コバーシンがＬＴＢ４に、２００から３００ｐＭの間のＫｄで結合することを示している。例えば、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中のＬＴＢ４（ＣａｙｍｅｎＣｈｅｍｉｃａｌｓ、ＡｎｎＡｒｂｏｒ、ＭＩ、ＵＳＡ）に対する結合活性は、分光蛍光計、例えば、ＬＳ５０Ｂ分光蛍光計（Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ、Ｎｏｒｗａｌｋ、ＣＴ、ＵＳＡ）で定量することができる。これは、以下のように実施され得る。

ＰＢＳ２ｍＬ中の１００ｎＭ精製コバーシン溶液を、磁器スターラーを備える石英キュベット（１０ｍｍ経路長；Ｈｅｌｌｍａ、Ｍｕｈｌｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）中に加えた。温度を２０℃に調整し、平衡に達した後、タンパク質のＴｙｒ／Ｔｒｐの蛍光を２８０ｎｍで励起させた（スリット幅：１５ｎｍ）。最大発光に対応する蛍光発光を３４０ｎｍで測定した（スリット幅：１６ｎｍ）。ＰＢＳ中の３０μＭＬＴＢ４リガンド溶液を、最大体積２０μＬ（全試料体積の１％）まで段階的に添加し、３０秒インキュベーション後に定常状態の蛍光を測定した。ＫＤ値の計算のために、初期蛍光強度１００％に対してデータを規準化し、３μＭＮ－アセチル－トリプトファンアミド溶液の滴定を使用してインナーフィルター効果を補正し、対応するリガンド濃度に対してデータをプロットした。次に、二分子複合体の形成に関する質量作用の法則に基づく非線形最小二乗回帰を使用して、公表された式（Ｂｒｅｕｓｔｅｄｔら、２００６：Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｌｉｇａｎｄ－ｂｉｎｄｉｎｇａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｅｎｈｕｍａｎｌｉｐｏｃａｌｉｎｓ．ＢｉｏｃｈｉｍＢｉｏｐｈｙｓＡｃｔａ１７６４（２）：１６１～１７３）を用いてＯｒｉｇｉｎソフトウェアバージョン８．５（ＯｒｉｇｉｎＬａｂ、Ｎｏｒｔｈａｍｐｔｏｎ、ＭＡ、ＵＳＡ）によりデータをフィットした。

コバーシンは、１ｎＭ未満、より好適には０．９ｎＭ未満、最も好適には０．８ｎＭ未満、好ましくは０．７ｎＭ未満、より好ましくは０．６ｎＭ未満、最も好ましくは０．５ｎＭ未満、さらにより好ましくは０．４ｎＭ未満、有利には０．３ｎＭ未満のＫｄでＬＴＢ４と結合してもよく、その際、前記Ｋｄは、蛍光滴定を使用して、好ましくは上記方法により決定される。コバーシン型タンパク質は、好ましくはこれらの特性を共有する。ある特定の実施形態では、コバーシン型タンパク質は、野生型Ｃ５と、Ｃ５多型、例えば、エクリズマブによる治療を無効にするか、またはエクリズマブによる治療の有効性を減少させるＣ５多型を有する対象からのＣ５との両方およびＬＴＢ－４に結合する。他の実施形態では、コバーシン型タンパク質は、例えば本明細書に記載のように、減少したＣ５結合性を有する、またはＣ５結合性を有さないが、ＬＴＢ４に結合する、上記の改変コバーシンポリペプチドである。

コバーシン型タンパク質（例えば、減少したＣ５結合活性を有する、またはＣ５結合活性を有さないが、ＬＴＢ－４結合能を保持する改変コバーシンポリペプチド）は、例えば、５ｎＭ未満、２ｎＭ未満または１ｎＭ未満、より好適には０．９ｎＭ未満、最も好適には０．８ｎＭ未満、好ましくは０．７ｎＭ未満、より好ましくは０．６ｎＭ未満、最も好ましくは０．５ｎＭ未満、さらにより好ましくは０．４ｎＭ未満、有利には０．３ｎＭ未満のＫｄでＬＴＢ４と結合してもよく、その際、前記Ｋｄは、蛍光滴定を使用して、好ましくは上記方法により決定される。

したがって、コバーシン型タンパク質は、Ｃ５コンバターゼによるＣ５の補体Ｃ５ａおよび補体Ｃ５ｂへの開裂を防止し、ならびにＬＴＢ－４活性も阻害するように作用し得るか、あるいは、例えば本明細書に記載のように、減少したＣ５結合性を有するか、またはＣ５結合性を有さないが、ＬＴＢ４に結合する、上記の改変コバーシンポリペプチドであり得る。

Ｃ５およびＬＴＢ－４の両方に結合するコバーシン型タンパク質を使用することが特に有利である。以下に提示したデータに基づき、本発明者らは、この考慮事項に縛られることなく、Ｃ５およびエイコサノイド経路が、両方とも、瘢痕性眼炎症障害、特にシェーグレン症候群、粘膜類天疱瘡およびアトピー性角結膜炎における観察された病状の原因になると考える。したがって、補体介在性疾患および障害の炎症作用に関与する複数の経路を阻害する単一のコバーシン型タンパク質を使用することによって、補体介在性疾患および障害の炎症作用に関与する単一経路だけを阻害する薬剤を使用することと比較して増強した効果を達成することができる。そのうえ、単一の分子を投与することに関連する実用上の利点がある。

好ましくは、コバーシン型タンパク質は、吸血性節足動物に由来する。「吸血性節足動物」という用語は、適切な宿主から餌として血を吸う、昆虫、マダニ、シラミ、ノミおよびダニなどの全ての節足動物を含む。好ましくは、コバーシン型タンパク質は、マダニ、好ましくは、マダニＯｒｎｉｔｈｏｄｏｒｏｓｍｏｕｂａｔａに由来する。

コバーシンの機能的等価物は、それが野生型Ｃ５、またはＣ５多型、例えば、エクリズマブによる治療を無効にするか、またはエクリズマブによる治療の有効性を減少させるＣ５多型を有する対象からのＣ５のいずれかのＣ５に結合する能力、ならびにＣ５コンバターゼによるＣ５のＣ５ａおよびＣ５ｂへの開裂を防止する能力を保持する、コバーシンの相同体または断片であり得る。相同体または断片は、ＬＴＢ－４と結合する能力も保持し得る。これは、ＬＴＢ－４と結合する能力を保持するが、Ｃ５に結合する能力を保持しなくてもよい。

コバーシンの機能的等価物は、特に、野生型Ｃ５またはＣ５多型を有する対象からのＣ５のいずれかであるＣ５、および／またはＬＴＢ－４に結合するコバーシンの１もしくは２以上の活性部位の環境において、コバーシンと構造的に類似であるか、または類似もしくは同一の三次構造を含有する、合成分子などの分子でもあり得る。Ｃ５およびＬＴＢ－４への結合に必要とされるコバーシン中の正確なアミノ酸残基は、上で示されるＪｏｒｅらの参考文献に示されている。

相同体は、例えば、Ｒｈｉｐｉｃｅｐｈａｌｕｓａｐｐｅｎｄｉｃｕｌａｔｕｓ、Ｒ．ｓａｎｇｕｉｎｅｕｓ、Ｒ．ｂｕｒｓａ、Ａ．ａｍｅｒｉｃａｎｕｍ、Ａ．ｃａｊｅｎｎｅｎｓｅ、Ａ．ｈｅｂｒａｅｕｍ、Ｂｏｏｐｈｉｌｕｓｍｉｃｒｏｐｌｕｓ、Ｂ．ａｎｎｕｌａｔｕｓ、Ｂ．ｄｅｃｏｌｏｒａｔｕｓ、Ｄｅｒｍａｃｅｎｔｏｒｒｅｔｉｃｕｌａｔｕｓ、Ｄ．ａｎｄｅｒｓｏｎｉ、Ｄ．ｍａｒｇｉｎａｔｕｓ、Ｄ．ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ、Ｈａｅｍａｐｈｙｓａｌｉｓｉｎｅｒｍｉｓ、Ｈａ．ｌｅａｃｈｉｉ、Ｈａ．ｐｕｎｃｔａｔａ、Ｈｙａｌｏｍｍａａｎａｔｏｌｉｃｕｍａｎａｔｏｌｉｃｕｍ、Ｈｙ．ｄｒｏｍｅｄａｒｉｉ、Ｈｙ．ｍａｒｇｉｎａｔｕｍｍａｒｇｉｎａｔｕｍ、Ｉｘｏｄｅｓｒｉｃｉｎｕｓ、Ｉ．ｐｅｒｓｕｌｃａｔｕｓ、Ｉ．ｓｃａｐｕｌａｒｉｓ、Ｉ．ｈｅｘａｇｏｎｕｓ、Ａｒｇａｓｐｅｒｓｉｃｕｓ、Ａ．ｒｅｆｌｅｘｕｓ、Ｏｒｎｉｔｈｏｄｏｒｏｓｅｒｒａｔｉｃｕｓ、Ｏ．ｍｏｕｂａｔａｍｏｕｂａｔａ、Ｏ．ｍ．ｐｏｒｃｉｎｕｓ、およびＯ．ｓａｖｉｇｎｙｉを含む他のマダニ種からのコバーシンタンパク質を含む、ＷＯ２００４／１０６３６９の図４に明白に特定されるコバーシンのパラログおよびオルソログを含む。

相同体は、また、イエカ属（Ｃｕｌｅｘ）、ハマダラカ属（Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ）およびヤブカ属（Ａｅｄｅｓ）の種、特にＣｕｌｅｘｑｕｉｎｑｕｅｆａｓｃｉａｔｕｓ、ＡｅｄｅｓａｅｇｙｐｔｉおよびＡｎｏｐｈｅｌｅｓｇａｍｂｉａｅを含むカ種；ノミ種、例えばＣｔｅｎｏｃｅｐｈａｌｉｄｅｓｆｅｌｉｓ（ネコノミ）、アブ、スナバエ、ブユ、ツェツェバエ、シラミ、ダニ、ヒルおよび扁虫からの、コバーシンと等価の機能を有するタンパク質を含む。相同体は、また、Ｏ．ｍｏｕｂａｔａに存在する約１８ｋＤａの３つの他の形態のコバーシンを含む。

コバーシンの相同体を同定する方法は、当業者に明らかであろう。例えば、相同体は、公的および非公的の両方の配列データベースの相同性検索によって同定され得る。好適には、公的に入手可能なデータベースが使用される。とはいえ、非公的または商業的に利用可能なデータベースは、特に、それらが公的データベースに表されていないデータを含むならば、等しく有用である。一次データベースは、一次ヌクレオチド配列または一次アミノ酸配列データの寄託サイトであり、公的または商業的に利用可能であり得る。公的に利用可能な一次データベースの例には、ＧｅｎＢａｎｋデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）、ＥＭＢＬデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／）、ＤＤＢＪデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｄｄｂｊ．ｎｉｇ．ａｃ．ｊｐ／）、ＳＷＩＳＳ－ＰＲＯＴタンパク質データベース（ｈｔｔｐ：／／ｅｘｐａｓｙ．ｈｃｕｇｅ．ｃｈ／）、ＰＩＲデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｐｉｒ．ｇｅｏｒｇｅｔｏｗｎ．ｅｄｕ／）、ＴｒＥＭＢＬデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／）、ＴＩＧＲデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｔｉｇｒ．ｏｒｇ／ｔｄｂ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ参照）、ＮＲＬ－３Ｄデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｂｒｆａ．ｇｅｏｒｇｅｔｏｗｎ．ｅｄｕ）、ＰｒｏｔｅｉｎＤａｔａＢａｓｅ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｒｃｓｂ．ｏｒｇ／ｐｄｂ）、ＮＲＤＢデータベース（ｆｔｐ：／／ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｕｂ／ｎｒｄｂ／ＲＥＡＤＭＥ）、およびＯＷＬデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｃｈｅｍ．ｕｃｌ．ａｃ．ｕｋ／ｂｓｍ／ｄｂｂｒｏｗｓｅｒ／ＯＷＬ／）が含まれる。公的に利用可能な二次データベースの例は、ＰＲＯＳＩＴＥデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｅｘｐａｓｙ．ｈｃｕｇｅ．ｃｈ／ｓｐｒｏｔ／ｐｒｏｓｉｔｅ．ｈｔｍｌ）、ＰＲＩＮＴＳデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｉｕｐａｂ．ｌｅｅｄｓ．ａｃ．ｕｋ／ｂｍｂ５ｄｐ／ｐｒｉｎｔｓ．ｈｔｍｌ）、Ｐｒｏｆｉｌｅｓデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｕｌｒｅｃ３．ｕｎｉｌ．ｃｈ／ｓｏｆｔｗａｒｅ／ＰＦＳＣＡＮ＿ｆｏｒｍ．ｈｔｍｌ）、Ｐｆａｍデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／ｓｏｆｔｗａｒｅ／ｐｆａｍ）、Ｉｄｅｎｔｉｆｙデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｄｎａ．ｓｔａｎｆｏｒｄ．ｅｄｕ／ｉｄｅｎｔｉｆｙ／）およびＢｌｏｃｋｓデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｌｏｃｋｓ．ｆｈｃｒｃ．ｏｒｇ）である。商業的に利用可能なデータベースまたは非公的データベースの例には、ＰａｔｏＧｅｎｏｍｅ（ＧｅｎｏｍｅＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓＩｎｃ．）およびＰａｔｈｏＳｅｑ（以前はＩｎｃｙｔｅＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓＩｎｃ．のもの）が含まれる。

典型的には、２つのポリペプチドの間の（好ましくは、活性部位などの特定領域にわたる）３０％よりも大きい同一性は、機能的等価性の指標、したがって、２つのタンパク質が相同である指標であると考えられる。好ましくは、相同体であるタンパク質は、コバーシンと６０％よりも大きい配列同一度を有する。より好ましい相同体は、コバーシンと７０％、８０％、９０％、９５％、９８％または９９％よりも大きい同一度を有する。本明細書において言及される同一性パーセンテージは、ＢＬＡＳＴバージョン２．１．３を使用して、ＮＣＢＩ（ｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）によって明示されるデフォルトパラメーター［Ｂｌｏｓｕｍ６２行列；ギャップ開始ペナルティー＝１１およびギャップ伸長ペナルティー＝１］を使用して決定されるものである。％同一性は、関連参照配列（例えば、ＷＯ２００４／１０６３６９の図４（本出願の図２、配列番号２のアミノ酸１９～１６８）またはＷＯ２００４／１０６３６９の図４（本出願の図２、配列番号２）のアミノ酸１～１６８の完全長にわたり得る。

したがって、コバーシン型タンパク質は、参照配列、例えばＷＯ２００４／１０６３６９の図４（本出願の図２、配列番号２）のアミノ酸１９～１６８またはＷＯ２００４／１０６３６９の図４（本出願の図２、配列番号２）のアミノ酸１～１６８に対するある特定のアミノ酸配列同一性％への参照により、例えば、ＷＯ２００４／１０６３６９の図４（本出願の図２、配列番号２）のアミノ酸１９～１６８またはＷＯ２００４／１０６３６９の図４（本出願の図２、配列番号２）のアミノ酸１～１６８と少なくとも６０％，７０％、８０％、９０％、９５％、９８％または９９％の同一性を有する配列を含むまたはそれからなるタンパク質として記載することができる。コバーシン型タンパク質が前記配列を含む場合、コバーシン型タンパク質は、融合タンパク質（例えば別のタンパク質、例えば異種タンパク質との）であり得る。適切な第２のタンパク質を以下に述べる。

コバーシンのいくつかの機能的等価物を図２ａに示され、このような変異体が、野生型Ｃ５および／またはＣ５多型（例えば、エクリズマブによる治療を無効にするか、またはエクリズマブによる治療の有効性を減少させるＣ５多型）を有する対象からのＣ５および／またはＬＴＢ－４と結合する能力を保持する限り、野生型配列と比べて、例えば、１、２、３、４、５、７、１０もしくはそれ以上のアミノ酸のアミノ酸置換、挿入または欠失（例えば、ＮまたはＣ末端からの欠失）を含む変異体を包含する。これは、関連する参照配列（すなわち、ＷＯ２００４／１０６３６９の図４（本出願の図２）のアミノ酸１９～１６８または前記図４（本出願の図２）のアミノ酸１～１６８）と比較したものである。変異体は、タンパク質の機能または活性に不利に影響しない保存的アミノ酸置換を含むタンパク質を含み得る。コバーシンの機能的等価物は、また、天然生物学的バリアント（例えば、コバーシンが由来する種内の対立遺伝子バリアントまたは地理的変異）を含む。野生型Ｃ５および／またはＣ５多型（例えば、エクリズマブによる治療を無効にするか、またはエクリズマブによる治療の有効性を減少させるＣ５多型）を有する対象からのＣ５および／またはＬＴＢ－４と結合する改善された能力を有する変異体は、また、コバーシン配列中の特定の残基の系統的または定方向変異により設計され得る。

コバーシンの機能的等価物には、このような断片が、野生型Ｃ５および／またはＣ５多型（例えば、エクリズマブによる治療を無効にするか、またはエクリズマブによる治療の有効性を減少させるＣ５多型）を有する対象からのＣ５および／またはＬＴＢ－４と結合する能力を保持する限り、コバーシンタンパク質の断片および相同体が含まれる。断片は、例えば、１５０アミノ酸未満、１４５、１４０、１３５、１３０、１２５、１００、７５、５０、もしくはさらに２５アミノ酸未満、またはそれ以下、コバーシンまたはコバーシン相同体由来のポリペプチドを含み得るが、但し、これらの断片は、野生型Ｃ５および／またはＣ５多型（例えば、エクリズマブによる治療を無効にする、またはエクリズマブによる治療の有効性を減少させるＣ５多型）を有する対象からのＣ５および／またはＬＴＢ－４と結合する能力を保持する。断片には、例えば、少なくとも１５０アミノ酸、少なくとも１４５アミノ酸であるコバーシンタンパク質配列（または相同体）に由来するポリペプチドが含まれ得るが、但し、これらの断片は、補体野生型Ｃ５および／またはＣ５多型（例えば、エクリズマブによる治療を無効にするか、またはエクリズマブによる治療の有効性を減少させるＣ５多型）を有する対象からのＣ５および／またはＬＴＢ４と結合する能力を保持する。

コバーシンの任意の機能的等価物は、好ましくは、コバーシン中に見出されるシステイン残基のパターンを保持する。例えば、前記機能的等価物は、好ましくはＷＯ２００４／１０６３６９の図４（本出願の図２、配列番号２）に示される配列のアミノ末端からカルボキシル末端に配列したときに３２アミノ酸離れた、６２アミノ酸離れた、２８アミノ酸離れた、１アミノ酸離れたおよび２１アミノ酸離れた距離で相互に間隔が空いた６つのシステイン残基を含む。コバーシンタンパク質の例示的な断片は、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４に開示されている。対応する断片をコードするＤＮＡは、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３に開示されている。

コバーシンの機能的等価物には、本明細書においてＷＯ２００４／１０６３６９の図４（本出願の図２、配列番号２）に明示的に特定されるＯ．ｍｏｕｂａｔａコバーシンの断片だけでなく、上記のようなこのタンパク質の相同体の断片も含まれる。相同体のこのような断片は、典型的には、コバーシンの断片と６０％よりも大きい同一性を有するが、相同体のより好ましい断片は、ＷＯ２００４／１０６３６９の図４（本出願の図２、配列番号２）のコバーシンの断片と７０％、８０％、９０％、９５％、９８％または９９％よりも大きい同一性を示す。好ましくは、このような断片は、上述のシステイン間隔を保持する。改善された特性を有する断片は、もちろん、野生型配列の系統的変異または断片化に続く適切な活性アッセイにより合理的に設計され得る。断片は、コバーシンとしてＣ５の野生型もしくは多型バリアントの一方または両方のＣ５、および／またはＬＴＢ－４に対して類似またはより大きい親和性を示し得る。これらの断片は、コバーシンの断片について上記されたサイズであり得る。

機能的等価物は、また、例えば異種タンパク質配列についてのコード配列のフレーム内に、コバーシンまたはその機能的等価物をコードするポリヌクレオチドをクローニングすることによって得られる融合タンパク質であり得る。本明細書に使用される「異種」という用語は、コバーシンタンパク質またはその機能的等価物以外の任意のポリペプチドを表すことが意図される。可溶性融合タンパク質のＮ末端またはＣ末端のいずれかに含まれ得る異種配列の例は、以下の通りである：膜結合タンパク質の細胞外ドメイン、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ領域）、ＰＡＳもしくはＸＴＥＮもしくは類似の構造不定のポリペプチド、多量体化ドメイン、細胞外タンパク質のドメイン、シグナル配列、搬出配列、またはアフィニティークロマトグラフィーによる精製を可能にする配列。これらの異種配列の多くは、発現プラスミドに挿入して市販されており、それは、これらの配列と融合されたタンパク質の特異的生物学的活性を顕著に損なうことなく追加的な特性を提供するために、これらの配列が一般的に融合タンパク質に含まれるからである（ＴｅｒｐｅＫ、ＡｐｐｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、６０：５２３～３３、２００３）。このような追加的な特性の例は、体液中により長く持続する半減期、組織標的化、細胞外局在、またはヒスチジン、ＧＳＴ、ＦＬＡＧ、アビジンもしくはＨＡタグなどのタグによって可能になるような、より簡単な精製である。融合タンパク質は、追加的に、リンカー配列（例えば１～５０アミノ酸長）を含有してもよく、それにより、構成成分がこのリンカーによって分離される。しかし、本発明のいずれの態様にも、融合タンパク質を使用しないことが好ましい。

このように、融合タンパク質は、コバーシン様タンパク質を含むタンパク質の例であり、これらには、具体例としてＰＡＳ配列およびコバーシン型タンパク質配列を含むタンパク質が含まれる。ＰＡＳ配列は、例えば、ＳｃｈｌａｐｓｃｈｙＭら、ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇＤｅｓＳｅｌ．２０１３Ａｕｇ；２６（８）：４８９～５０１、およびＥＰ０８７７３５６７．６に記載されており、ＰＡＳ化コバーシン分子は、Ｋｕｈｎら、ＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅＣｈｅｍ．、２０１６、２７（１０）、２３５９～２３７１ページに記載されている。ＰＡＳ化は、タンパク質と、アミノ酸Ｐｒｏ、Ａｌａ、および／またはＳｅｒから構成されるコンフォメーション的に無秩序なポリペプチド配列との遺伝的融合を説明している。これは、ＸＬＰｒｏｔｅｉｎ（ｈｔｔｐ：／／ｘｌ－ｐｒｏｔｅｉｎ．ｃｏｍ／）によって開発された技法であり、溶媒和したランダム鎖を大きな流体力学的体積で、それと融合されるタンパク質に結合させる簡単な方法を提供する。ポリペプチド配列は、かさ高いランダムコイル構造をとる。したがって、結果として生じる融合タンパク質のサイズは、それが融合されるタンパク質よりもずっと大きい。これは、生体システム中のクリアランスを減少させることが示されている。適切なＰＡＳ配列は、ＥＰ０８７７３５６７．６および上記のＳｃｈｌａｐｓｃｈｙの参考文献に記載されている。任意の適切なＰＡＳ配列が、融合タンパク質に使用され得る。例えば、ランダムコイルコンフォメーションを形成し、アラニン、セリンおよびプロリン残基からなる（またはプロリンおよびアラニン残基からなる）少なくとも約１００のアミノ酸残基からなるアミノ酸配列が含まれる。これは、複数のアミノ酸リピートを含んでいてもよく、その際、前記リピートは、Ａｌａ、Ｓｅｒ、およびＰｒｏ残基（またはプロリンおよびアラニン残基）からなり、同一アミノ酸残基の連続は、６つ以下である。プロリン残基は、配列のアミノ酸の４％よりも大きく４０％未満を構成し得る。配列は、
ＡＳＰＡＡＰＡＰＡＳＰＡＡＰＡＰＳＡＰＡ（配列番号１５）、
ＡＡＰＡＳＰＡＰＡＡＰＳＡＰＡＰＡＡＰＳ（配列番号１６）、
ＡＰＳＳＰＳＰＳＡＰＳＳＰＳＰＡＳＰＳＳ（配列番号１７）、
ＳＡＰＳＳＰＳＰＳＡＰＳＳＰＳＰＡＳＰＳ（配列番号１８）、
ＳＳＰＳＡＰＳＰＳＳＰＡＳＰＳＰＳＳＰＡ（配列番号１９）、
ＡＡＳＰＡＡＰＳＡＰＰＡＡＡＳＰＡＡＰＳＡＰＰＡ（配列番号２０）および
ＡＳＡＡＡＰＡＡＡＳＡＡＡＳＡＰＳＡＡＡ（配列番号２１）
または、これらの配列の全体もしくは部分としてのこれらの配列の環状並び替えバージョンもしくは多量体から選択されるアミノ酸配列を含み得る。例えば、ＰＡＳ配列中に存在するリピートのうち１つの５～４０、１０～３０、１５～２５、１８～２０、好ましくは、２０～３０または３０コピー、すなわち配列番号１５～２１のうち１つ、好ましくは１５が存在し得る。好ましくは、ＰＡＳ配列は、配列番号１５の３０コピーを含むか、またはそれからなる。好ましくは、ＰＡＳ配列は、コバーシン型タンパク質のＮ末端と（直接またはリンカー配列を介して）融合され、ある特定の好ましい実施形態では、コバーシン型タンパク質は、配列番号２のアミノ酸１９～１６８または配列番号３４もしくは配列番号３５を含むか、またはそれからなっていてもよい。例えば、融合タンパク質は、（ａ）配列番号１５の３０コピーを含むか、またはそれからなるＰＡＳ配列および（ｂ）（ｉ）配列番号２のアミノ酸１９～１６８、（ｉｉ）配列番号３４、または（ｉｉｉ）配列番号３５を含み、その際、（ａ）は、（ｂ）のＮ末端に直接またはリンカー配列を介して融合されている）。

融合タンパク質は、追加的にリンカー配列（例えば１～５０、２～３０、３～２０、５～１０アミノ酸長）を含んでいてもよく、それにより、構成成分は、このリンカーによって分離される。一実施形態では、リンカー配列は、単一のアラニン残基であり得る。

ＰＡＳ配列を含む融合タンパク質の組成物は、同タンパク質の非ＰＡＳ化バージョンを含む組成物と比較して増加した粘性を有し得る。状況によっては、この増加した粘性は、不利であり得る。しかし、本発明による眼治療（例えば局所眼治療）においては、増加した粘性は、利点を提供し得る。

コバーシンおよびその機能的等価物は、宿主細胞における発現により組換え形態として調製され得る。このような発現方法は、当業者に公知であり、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（２０００）およびＦｅｒｎａｎｄｅｚ＆Ｈｏｅｆｆｌｅｒ（１９９８）によって詳細に記載されている。コバーシンおよびその機能的等価物の組換え形態は、好ましくは、グリコシル化されていない。好ましくは、宿主細胞は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）である。

コバーシン型タンパク質は、好ましくは、例えば、それを発現させた宿主細胞および／または細胞増殖培地の少なくとも１つの成分から分離された、単離形態である。一部の実施形態では、コバーシン型タンパク質は、例えば、電気泳動またはクロマトグラフィーによって決定される、少なくとも９０％、９５％、または９９％の純度に精製される。コバーシン型タンパク質は、また、タンパク質化学の通例の技法を使用して調製することができる。例えば、タンパク質断片は、化学合成によって調製され得る。融合タンパク質を生成する方法は、当技術分野において標準的であり、熟練の読者に公知である。例えば、大部分の一般分子生物学、微生物学、組換えＤＮＡ技法および免疫学的技法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（２０００）またはＡｕｓｕｂｅｌら（１９９１）に見出すことができる。

好ましくは、コバーシン型タンパク質は、抗体でも融合タンパク質でもない。

コバーシン型タンパク質が、あらゆる多型形態のＣ５と、ＬＴＢ－４との両方に結合できることが、さらに好ましい。

コバーシン型タンパク質は、抗ヒスタミン薬、例えばレボカバスチン（ｌｅｖｏｃａｂｌａｓｔｉｎｅ）、ケトチフェンまたはロドキサミドなどの、眼の障害の治療に有用な他の医薬品と組み合わせて使用され得る。したがって、コバーシン型タンパク質が１または２以上の他の治療と組み合わせて使用される場合、これは、第２の治療を併用して、瘢痕性眼炎症障害、特にシェーグレン症候群、粘膜類天疱瘡またはアトピー性角結膜炎を治療または予防する方法における使用のためのコバーシン型タンパク質（例えば、図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質）またはこのタンパク質の機能的等価物とともに、あるいは、第２の治療としての、瘢痕性眼炎症障害、特にシェーグレン症候群、粘膜類天疱瘡またはアトピー性角結膜炎を治療または予防する方法における使用のためのコバーシン型タンパク質（例えば図２におけるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質）またはこのタンパク質の機能的等価物として記載することができる。

本発明の全ての態様において、治療または予防を必要とする対象は、主としてヒト対象であると考えられる。しかし、本発明の全ての態様は、哺乳動物対象、特に家畜哺乳動物または農用哺乳動物などの、他の対象に関連して使用することができる。

薬剤は、治療または予防有効量で投与され得る。「治療有効量」という用語は、瘢痕性眼炎症障害を治療するために必要な薬剤の量を表す。これに関連して、「治療すること」は、障害の重症度を減少させることを含む。

本明細書に使用される「予防有効量」という用語は、瘢痕性眼炎症障害を予防するために必要な薬剤の量を表す。これに関連して、「予防すること」は、例えば、薬剤の投与が開始される前には障害の存在が検出されない場合に、障害の重症度を減少させることを含む。

減少または改善は、投与を行わず、本明細書に記載の薬剤もない場合の結果に対するものである。結果は、このような患者を評価するために使用される標準的な基準により評価される。これを定量できる範囲で、上記の相対スコア付け基準における少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００％の減少または改善がある。

古典的補体経路および第二補体経路を示す。コバーシンについての配列（配列番号１は、ヌクレオチド配列であり、配列番号２は、アミノ酸配列である）を示す。いくつかのコバーシン変異体（配列番号４、６、８、１０、１２、１４、対応する断片をコードするＤＮＡ配列は、それぞれ配列番号３、５、７、９、１１および１３である）を示す。全ての眼からの合計としてスコア付けした、卵白アルブミンおよび多様な他の薬剤で処置されたマウスについてのＥＩＣスコア付けを示す。全ての眼からの合計としてスコア付けした、卵白アルブミンおよび多様な他の薬剤で処置されたマウスについてのＥＩＣスコア付けを示す。任意の所与の動物での両眼の平均としてスコア付けした、卵白アルブミンおよび多様な他の薬剤で処置されたマウスについてのＥＩＣスコア付けを示す。任意の所与の動物での両眼の平均としてスコア付けした、卵白アルブミンおよび多様な他の薬剤で処置されたマウスについてのＥＩＣスコア付けを示す。減少したＣ５結合活性を有する、またはＣ５結合活性を有さないが、ＬＴＢ－４結合能を保持する、ある特定の改変コバーシンポリペプチドの配列を示す図である。

本出願に参照される配列は、以下の通りである：
配列番号１は、図２Ａに示されるヌクレオチド配列である。配列番号２は、成熟タンパク質にはない１８アミノ酸のシグナル配列を含む、図２Ａに示されるコバーシンのアミノ酸配列である。
配列番号３は、配列番号４をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号４は、成熟コバーシンアミノ酸配列（配列番号２のアミノ酸１９～１６８）である。
配列番号５は、配列番号６をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号６は、成熟コバーシンアミノ酸配列の１４９アミノ酸の断片（配列番号２のアミノ酸２０～１６８）である。
配列番号７は、配列番号８をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号８は、成熟コバーシンアミノ酸配列の１４８アミノ酸の断片（配列番号２のアミノ酸２１～１６８）である。
配列番号９は、配列番号１０をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１０は、成熟コバーシンアミノ酸配列の１４７アミノ酸の断片（配列番号２のアミノ酸２２～１６８）である。
配列番号１１は、配列番号１２をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１２は、成熟コバーシンアミノ酸配列の１４６アミノ酸の断片（配列番号２のアミノ酸２３～１６８）である。
配列番号１３は、配列番号１２をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１４は、成熟コバーシンアミノ酸配列の１４５アミノ酸の断片（配列番号２のアミノ酸２４～１６８）である。
配列番号１５～２１は、ＰＡＳ配列である。
配列番号２２～３３は、ＷＯ２０１５／１８５９４５の配列番号１～１２である。
配列番号３４～４１は、ある特定の改変コバーシンポリペプチドを定義するために使用される配列である。

以下に、あくまで例として、本発明をより詳細に説明する。

マウス研究は、ＡｈａｄｏｍｅＳ．Ｄ．らによって、ＪＣＩＩｎｓｉｇｈｔ、２０１６Ａｕｇ４；１（１２）．ｐｉｉ：ｅ８７０１２に記載されたプロトコールにより行った。このプロトコールでは、マウスに最初に卵白アルブミンを１４日間全身注射し、次に、１５日目以降は、マウスの眼に局所的に卵白アルブミンを投与する。１８日目以降は、様々な量のコバーシン型タンパク質または対照を含有する眼科的に許容される溶液でマウスの眼を処置する。

マウスを７群に分けた。群１（ＥＩＣ＋ＰＢＳ）の各々の眼にＰＢＳも投与した。群２（ＥＩＣ＋０．０６３％コバーシン）には、０．０６３％（ｗ／ｖ）コバーシンを含有するＰＢＳも投与した。これは、各々の眼への適用についてはコバーシン２５．２μｇに対応する。群３（ＥＩＣ＋０．１２５％コバーシン）には、０．１２５％（ｗ／ｖ）コバーシンを含有するＰＢＳも投与した。これは、各々の眼への適用についてはコバーシン５０．４μｇに対応する。群４（ＥＩＣ＋０．２５％コバーシン）には、０．２５％（ｗ／ｖ）コバーシンを含有するＰＢＳも投与した。これは、各々の眼への適用についてはコバーシン１００．８μｇに対応する。また、群５（ＥＩＣ＋０．５％コバーシン）には、０．５％（ｗ／ｖ）コバーシンを含有するＰＢＳも投与した。これは、各々の眼への適用についてはコバーシン２０１．６μｇに対応する。群６（ＥＩＣ＋ＥＶ１３１）には、ＥＶ１３１を含有するＰＢＳも投与した。群７（ＥＩＣ＝ＥＶ１３１＋コバーシン０．２５％）には、ＥＶ１３１および０．２５％（ｗ／ｖ）コバーシンを含有するＰＢＳも投与した。

全てのマウスを熟練の観察者が検査し、観察者は、各マウスの各々の眼の症状の重症度を等級付けし、眼を０～１０のスケールにスコア付けした（０が無徴候を表し、１０が最も重度の徴候を表す）。

研究の結果を図３および４にグラフとして示す。図３では、各々の眼のスコアを記録した。図４では、各マウスの左眼および右眼の組合せについての平均スコアを記録した。コバーシンがマウスのスコアを減少させ、最良の減少がより低い用量で長期治療後に見られたことが分かる（０．０６３％～０．２５％コバーシン、６日目）。

このことは、コバーシン型タンパク質を用いた瘢痕性眼炎症障害、特にシェーグレン症候群、粘膜類天疱瘡およびアトピー性角結膜炎の罹患対象における眼の局所治療が、徴候を成功裏に軽減させるであろうことを明らかに示している。

例としてのみ、本発明を上記で説明したが、本発明は、上述の特定の研究に限定されない。むしろ、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲により定義される。

Claims

患者におけるアトピー性角結膜炎を治療または予防するための組成物であって、前記組成物が、図２に示されるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質またはその機能的等価物を含有し、
前記機能的等価物が、配列番号２のアミノ酸１９～１６８の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含むタンパク質であり、
前記機能的等価物が、Ｃ５と結合して、コンバターゼによる補体Ｃ５の補体Ｃ５ａおよび補体Ｃ５ｂへの開裂を防止する、およびＬＴＢ４と結合する、前記組成物。
眼科的に許容される組成物であり、患者の眼に局所適用するためのものである、請求項１に記載の組成物。
従来の抗ヒスタミン薬と組み合わせて使用される、請求項１または２に記載の組成物。
患者が、ヒトである、請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
図２に示されるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質の機能的等価物が、配列番号２のアミノ酸１９～１６８の配列と少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含むタンパク質であり、
前記機能的等価物が、Ｃ５と結合して、コンバターゼによる補体Ｃ５の補体Ｃ５ａおよび補体Ｃ５ｂへの開裂を防止し、およびＬＴＢ４と結合する、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物。
図２に示されるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質の機能的等価物が、配列番号２のアミノ酸１９～１６８の配列において、最大で１０のアミノ酸置換、挿入または欠失がなされた当該配列を含むタンパク質であり、
前記機能的等価物が、Ｃ５と結合して、コンバターゼによる補体Ｃ５の補体Ｃ５ａおよび補体Ｃ５ｂへの開裂を防止し、およびＬＴＢ４と結合する、請求項１から５のいずれか一項に記載の組成物。
図２に示されるアミノ酸配列（配列番号２）のアミノ酸１９～１６８を含むタンパク質の機能的等価物が、（ａ）配列番号２のアミノ酸１９～１６８の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する配列、および（ｂ）第２の配列を含む融合タンパク質であり、
前記機能的等価物が、Ｃ５と結合して、コンバターゼによる補体Ｃ５の補体Ｃ５ａおよび補体Ｃ５ｂへの開裂を防止し、およびＬＴＢ４と結合する、請求項１から６のいずれか一項に記載の組成物。
前記第２の配列が、ＰＡＳ配列である、請求項７に記載の組成物。