JP7144643B2 - ポリエチレングリコール鎖を有する糖化合物、及び抗体薬物複合体の前駆体 - Google Patents

Description

本発明は、抗体薬物複合体（Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ：ＡＤＣ）の前駆体となる修飾された免疫グロブリン（Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）抗体、及びその合成原料となる官能基で修飾されたポリエチレングリコール鎖を有する糖化合物（糖オキサゾリン化合物）に関する。

がん細胞に発現している標的抗原に対して特異的に結合する抗体医薬に、細胞傷害活性を有する薬物を結合させたＡＤＣが次世代抗体医薬品として近年注目を浴びている。

しかし、ＡＤＣの合成方法としては、例えばＩｇＧ抗体の側鎖アミノ基やチオール基に対してリンカーを介して薬物を結合させる手法が一般的に用いられており、抗体上に複数箇所存在するアミノ基やチオール基にランダムに導入されるため、薬物導入の位置や数に幅広い分布を有する多様なＡＤＣ異性体群が得られる。このようなＡＤＣ異性体群は品質管理、及び薬効（循環半減期や有効性の低下）等、臨床的な問題が懸念される。

この問題点を解決する方法の１つとして、ＩｇＧ抗体のＦｃ領域のＮ結合型糖鎖を足掛かりとして、位置選択的に薬物を導入する方法が報告されている（非特許文献１、２）。これらの方法は抗体上の糖鎖部分にのみ選択的に薬物を導入することができるため、従来のランダムに薬物を導入する方法よりも高い位置選択性と薬物の導入数の制御が可能な利点を持つ。

これらの方法ではいずれも糖鎖非還元末端のＮ－アセチルノイラミン酸に対して薬物導入のための官能基を導入する必要がある。しかしＮ－アセチルノイラミン酸は血液中で糖鎖から遊離する可能性が指摘されており、薬物が標的細胞外でＡＤＣから放出されてしまう危険性が懸念される。また、これらの方法で使用されている糖鎖は鶏卵より調製されているため卵由来のアレルゲンが薬剤製造においてはＧＭＰの観点から問題となる。

Ｆ．Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１４，９５０１（２０１６） Ｍ．Ｉｗａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，ＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅＣｈｅｍ．，２９，２８２９（２０１８） Ｋ．Ｇｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ．，６１，１５１４７５（２０２０） Ａｏｙａｍａ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍａｂｓ，１１：８２６－８３６（２０１９）

本発明の目的は、薬物の位置選択的かつ導入数の制御が可能なＡＤＣの合成法、及びそのための合成中間体や合成原料を提供することである。

上記課題を解決するべく鋭意検討した結果、抗体に対して位置選択的かつ導入薬物数を制御できるＡＤＣ合成用ツールとなる糖オキサゾリン誘導体の開発に成功した。本発明の糖オキサゾリン誘導体は完全化学合成品であることから、大量合成に適しており、またアレルゲンの問題も克服できる。更に分子内にＮ－アセチルノイラミン酸を有さないことから、血中安定性の問題点も克服することができると期待される。また本糖オキサゾリン誘導体は糖加水分解酵素の中の１つであるエンド－β－Ｎ－アセチルグルコサミニダ－ゼ（ＥＮＧａｓｅ）を用いることで抗体の糖部位に位置選択的に導入できることで、薬物導入のための位置選択的修飾化された抗体の合成を行う。このようにして得られる修飾化された抗体をＡＤＣ前駆体として用いることで抗体に対する位置選択的な薬物の導入と薬物の導入数の制御が可能となると考えた。以上のような知見に基づいて本発明を完成するに至った。

従って、本発明は、
［１］下記一般式（１）で表されるポリエチレングリコール鎖を有する糖化合物。

（式（１）中、
Ｘはそれぞれ独立して、単結合、酸素原子、－ＮＨ－、－ＣＯＨＮ－、－ＣＯＯ－、又は式（５）又は（６）：

（式中、Ｒ^１は、炭素数１～６の３価の分岐炭化水素基であり、Ｒ^２及びＲ^３は、それぞれ独立して炭素数１～３のアルキレン基である）で表される基であり、Ｙ１～３はいずれか１つ以上は存在し、それぞれ独立して、ＰＥＧ鎖、置換されたＰＥＧ鎖、又は酸素原子、－ＮＨ－、－ＣＯＨＮ－、又は－ＣＯＯ－を主鎖に含むＰＥＧ鎖であり、ＰＥＧ鎖の構造は直鎖構造又は分岐構造であり、分岐構造の場合は、分岐数は２～１０であり、Ｚはそれぞれ独立して、ヒドロキシ基、メトキシ基、アジド基、場合により置換されることのあるテトラジン基、ノルボルネン基、ｔｒａｎｓ－シクロオクテン基、ジベンジルシクロオクチル基、又はビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イルメチル基、又は場合により置換されることのあるシアノベンゾチアゾール基であり、少なくとも１つ以上のＺは、ヒドロキシ基又はメトキシ基ではなく、Ｙ１～３のいずれかが存在しない場合、Ｚは水素そしてＸは酸素であり、Ｘが前記式（５）又は（６）で表される基の場合、Ｙ１～３は分岐鎖のＲ^２及びＲ^３にそれぞれ結合しており、ＰＥＧ鎖が分岐構造の場合、それぞれの分岐鎖にＺが結合している。）、
［２］下記一般式（２）で表される、［１］に記載のポリエチレングリコール鎖を有する糖化合物、

（式（２）中、ｌ及びｎは、それぞれ独立して２から１０の整数を表す。）
［３］化合物１２、下記式：

で表される化合物、化合物６６、化合物７２、化合物７８、化合物８３、及び化合物９４からなる群から選択される、［１］に記載のポリエチレングリコール鎖を有する糖化合物、
［４］［１］～［３］のいずれかに記載のポリエチレングリコール鎖を有する糖化合物から誘導される下記式（７）：

（式中、Ｘ、Ｙ１～３、及びＺは前記の通りであり、ＲはＬ－フコース又は水素原子である）で表されるポリエチレングリコール鎖を有する糖化合物基を、Ｆｃ領域のアスパラギン残基の側鎖の糖結合部位に有する、修飾された免疫グロブリン抗体、
［５］前記免疫グロブリン抗体が免疫グロブリンＧ抗体であり、Ｆｃ領域のアスパラギン残基が、Ｆｃ領域の２９７番目のアスパラギン残基である、下記一般式（３）で表される、［４］に記載の修飾された免疫グロブリン抗体

（式中、式中、Ｘ、Ｙ１～３、及びＺは前記の通りであり、ＲはＬ－フコース又は水素原子である）、及び
［６］前記ポリエチレングリコール鎖を有する糖化合物が、［２］に記載の糖化合物である、下記一般式（４）で表される［５］に記載の修飾された免疫グロブリン抗体

（式（４）中、ＲはＬ－フコース又は水素を示す。ｌとｎは２から１０の整数を表す。）、
に関する。
本明細書は、以下のとおりの糖オキサゾリン誘導体とそれから誘導化されるＡＤＣ前駆体となる修飾されたＩｇＧ抗体を開示する。
＜１＞下記一般式（１）で表される、官能基を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖が結合した糖オキサゾリン誘導体

（式（１）中、Ｘは酸素、アミド基を示す。Ｙ１～３は必ずいずれか１つ以上は存在し、ＰＥＧ鎖、もしくは官能基及び／又は有機基で誘導化されたＰＥＧ誘導体を示しＰＥＧ鎖及びＰＥＧ誘導体の構造は直鎖構造又は分岐構造であり分岐構造の場合は分岐数は２～１０であり、Ｚはアジド基、テトラジン誘導体を示す。Ｙ１～３のうちいずれかが存在しない箇所ではＺは水素を、Ｘは酸素を示す。ｌ、ｍ、ｎの数はＹ１～３が直鎖構造の場合は１で分岐構造の場合は分岐数と同じ又はそれ以下であり、Ｙ１～３のうちいずれかが存在しない箇所ではｌ、ｍ、ｎの数は１である。Ｙ１～３が分岐構造でＺがＹ１～３に複数存在する場合はＺは同一であっても同一でなくてもよい。Ｘ－Ｙ、Ｙ－Ｚ間の結合は共有結合であり、Ｘ、Ｙ、Ｚはその表示各位において同一である必要はない。）

＜２＞ＥＮＧａｓｅ存在下でＩｇＧと一般式（１）で表される糖オキサゾリン誘導体を反応させて得られる下記一般式（３）で表されるＡＤＣ前駆体である修飾化ＩｇＧ。

（式中、Ｘ、Ｙ１～３、Ｚ、ｌ、ｍ、ｎは式（１）の場合と同じ。ＲはＬ－フコース又は水素を示す。）

本発明によれば、抗体上の特定の位置に決まった数の薬物を導入でき、化学的・生化学的に安定な構造を有し、アレルゲンの問題も克服した、これまでにないＡＤＣ前駆体である修飾化抗体が調製できる。また、本発明の糖化合物を、抗体と薬物との結合に用いることにより、抗体薬物複合体に、温和な条件（ｐＨ及び温度など）で薬物を導入することができる。従って、反応時において抗体を劣化させることがない。

原料のリツキシマブのアクセプター（１３）及び化合物１２の転移反応の溶液を示すＳＤＳ－ＰＡＧＥの写真である。 リツキシマブのアクセプター（１３）への化合物１２の転移反応を示した図である。 クリックケミストリーによりアジドＰＥＧ化リツキシマブへの蛍光基が導入されたことを示すＳＤＳ－ＰＡＧＥの写真である。 実施例２の反応生成物中のアジドＰＥＧ化されたリツキシマブのモノマー部位を用いて実施例３の反応を示した図である。 実施例２の反応生成物中のアジドＰＥＧ化されたリツキシマブのモノマー部位を用いて実施例１２の反応を示した図である。 クリックケミストリーによりアジドＰＥＧ化リツキシマブへ薬物が導入されたことを示すＳＤＳ－ＰＡＧＥの写真である。 Ｒａｍｏｓ（ＲＡ １）細胞及びＪｕｒｋａｔ細胞に対する各種抗体の細胞殺傷効果を示したグラフである。 原料であるトラスツズマブに対する化合物１２の転移反応の経時的な変化を示すＳＤＳ－ＰＡＧＥ泳動像である。 ３時間転移反応を行った反応液の液体クロマトグラフィーチャートである。 実施例１４の反応で、ネイティブなトラスツズマブに対する化合物１２のワンポット転移反応を示した図である。

以下、本発明を詳細に説明する。
［１］糖化合物
本発明の糖化合物は、糖オキサゾリン誘導体であり、下記一般式（１）で表される。

式中、Ｘはそれぞれ独立して、単結合、酸素原子、－ＮＨ－、－ＣＯＨＮ－、－ＣＯＯ－、又は式（５）又は（６）：

（式中、Ｒ^１は、炭素数１～６の３価の分岐炭化水素基であり、Ｒ^２及びＲ^３は、それぞれ独立して炭素数１～３のアルキレン基である）で表される基
であり、
Ｙ１～３はいずれか１つ以上は存在し、それぞれ独立して、ＰＥＧ鎖、置換されたＰＥＧ鎖、又は酸素原子、－ＮＨ－、－ＣＯＨＮ－、又は－ＣＯＯ－を主鎖に含むＰＥＧ鎖であり、ＰＥＧ鎖の構造は直鎖構造又は分岐構造であり、分岐構造の場合は、分岐数は２～１０であり、
Ｚはそれぞれ独立して、ヒドロキシ基、メトキシ基、アジド基、場合により置換されることのあるテトラジン基、ノルボルネン基、ｔｒａｎｓ－シクロオクテン基、ジベンジルシクロオクチル基、又はビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イルメチル基、又は場合により置換されることのあるシアノベンゾチアゾール基であり、少なくとも１つ以上のＺは、ヒドロキシ基又はメトキシ基ではなく、
Ｙ１～３のいずれかが存在しない場合、Ｚは水素そしてＸは酸素であり、
Ｘが前記式（５）又は（６）で表される基の場合、Ｙ１～３は分岐鎖のＲ^２及びＲ^３にそれぞれ結合しており、
ＰＥＧ鎖が分岐構造の場合、それぞれの分岐鎖にＺが結合している。

Ｘは、糖とＰＥＧ鎖等を結合するものであり、それぞれ独立して、単結合、酸素原子、－ＮＨ－、－ＣＯＨＮ－、－ＣＯＯ－、又は式（５）又は（６）：

（式中、Ｒ^１は、炭素数１～６の３価の分岐炭化水素基であり、Ｒ^２及びＲ^３は、それぞれ独立して炭素数１～３のアルキレン基である）で表される基である。
Ｘが単結合、酸素原子、－ＮＨ－、－ＣＯＨＮ－、又は－ＣＯＯ－である場合、Ｘに結合するＰＥＧ鎖等は１つである。Ｘが式（５）又は（６）で表される基の場合、分岐にそれぞれＰＥＧ鎖等が結合する。

Ｙ１～Ｙ３は、ＰＥＧ鎖、置換されたＰＥＧ鎖、又は酸素原子、－ＮＨ－、－ＣＯＨＮ－、又は－ＣＯＯ－を主鎖に含むＰＥＧ鎖（以下、纏めてＰＥＧ鎖等と称することがある）であり、ＰＥＧ鎖等の構造は直鎖構造又は分岐構造でもよい。ＰＥＧ鎖等は無毒性かつ非免疫原性の高分子であり、ＰＥＧ鎖等により修飾されたタンパク質治療薬は免疫原性の低下、各種酵素による分解からの保護、半減期の増大などにより、生体内での安定性を高める効果を得ることができる。
ＰＥＧ鎖の繰り返し数は、特に限定されるものではないが、例えば、２～１０００であり、ある態様においては２～１００であり、ある態様においては２～５０であり、ある態様においては２～３０であり、ある態様においては２～２０であり、ある態様においては２～１０であり、ある態様においては２～５である。前記繰り返し数は、１つのＰＥＧ鎖における繰り返し数であり、分岐したＰＥＧ鎖においては、それぞれの分岐したＰＥＧ鎖における繰り返し数を意味する。まあ、後述の酸素原子、－ＮＨ－、－ＣＯＨＮ－、又は－ＣＯＯ－を主鎖に含むＰＥＧ鎖における繰り返し数は、これらの基を含む１つのＰＥＧ鎖における繰り返し数を意味する。

前記置換されたＰＥＧ鎖は、ＰＥＧ鎖の側鎖の水素原子が置換されたＰＥＧ鎖を意味する。置換基としては、本発明の効果が得られる限りにおいて、特に限定されるものではないが、アルキル基、アラルキル基、アルケニル基、アルキニル基、水酸基、アミノ基、アルデヒド基、ケトン基、カルボキシル基、アミド基、チオール基、又はエーテル基が挙げられるが、特には炭素数１～６のアルキル基が好ましい。

前記酸素原子、－ＮＨ－、－ＣＯＨＮ－、又は－ＣＯＯ－を主鎖に含むＰＥＧ鎖は、主鎖のポリエチレングリコール（ＣＨ^２ＣＨ^２Ｏ）の繰り返し単位の間に、前記酸素原子（エーテル結合）、－ＮＨ－、－ＣＯＨＮ－（アミド結合）、又は－ＣＯＯ－（エステル結合）を有するものである。又は、主鎖のポリエチレングリコール（ＣＨ^２ＣＨ^２Ｏ）の酸素原子（－Ｏ－）に置き換えて、－ＮＨ－、－ＣＯＨＮ－、又は－ＣＯＯ－を含んでもよい。

前記ＰＥＧ鎖等は、直鎖構造又は分岐構造である。分岐構造の場合は分岐数に制限はないが２～１０が好ましい。ＰＥＧ鎖の重合度についても、前記の通り特に制限はないが、重合度２から１０が特に好ましい。

一般式（１）においてＺは、Ｙ１～３が存在する箇所ではヒドロキシ基、メトキシ基、アジド基、場合により置換されることのあるテトラジン基、ノルボルネン基、ｔｒａｎｓ－シクロオクテン基、ジベンジルシクロオクチル基、又はビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イルメチル基、又は場合により置換されることのあるシアノベンゾチアゾール基である。Ｙ１～３のいずれかが存在しない箇所では水素を、Ｘは酸素を示す。また、少なくとも１つ以上のＺは、ヒドロキシ基、又はメトキシ基ではない。すなわち、少なくとも１つのＺが、アジド基、場合により置換されることのあるテトラジン基、ノルボルネン基、ｔｒａｎｓ－シクロオクテン基、ジベンジルシクロオクチル基、又はビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イルメチル基、又は場合により置換されることのあるシアノベンゾチアゾール基である。これらの基に、薬物を導入することができる。少なくとも１つのＺが、アジド基、場合により置換されることのあるテトラジン基、ノルボルネン基、ｔｒａｎｓ－シクロオクテン基、ジベンジルシクロオクチル基、又はビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イルメチル基、又は場合により置換されることのあるシアノベンゾチアゾール基であることによって、本発明の糖化合物に効率的に、薬物を導入することができる。

前記アジド基は、－Ｎ_３で表される基である。

前記テトラジン基は、１，２，４，５－テトラジン基である。置換されたテトラジン基の置換基は３位及び／又は６位の水素原子が置換されたものである。３位の置換基としては、限定されるものではないが、炭素数１～３のアルキル基、ピリジニル基、ビピリジニル基、－ＣＦ_３基（フルオロアルキル基）、－ＣＯＯＣＨ_３（エステル基）、又はフェニル基が挙げられる。また、６位の置換基としては、限定されるものではないが、アミノ基、炭素数１～３のアルキレン基（例えば、エチレン基）、フェニレン基、又はピリジニレン基が挙げられる。更に、６位の置換基であるアミノ基、炭素数１～３のアルキレン基（例えば、エチレン基）、フェニレン基、又はピリジニレン基が、アミド結合、アミノ基、を介してＹ１～３に結合してもよい。また、テトラジン基、又は置換されたテトラジン基は、前記ＰＥＧ鎖等に直接結合してもよいが、例えばエーテル結合、エステル結合、カーボネート結合、カルバメート結合、又はアミド結合などによって結合してもよい。
具体的な置換されたテトラジン基としては、限定されるものではないが、下記の式で表される基が挙げられる。

前記ノルボルネン基は、下記式（８）：

で表される基である。前記ノルボルネン基は、前記ＰＥＧ鎖等に直接結合してもよいが、例えばエーテル結合、エステル結合、カーボネート結合、カルバメート結合、又はアミド結合などによって結合してもよい。

前記ｔｒａｎｓ－シクロオクテン基は下記式（９）：

で表される基である。前記ｔｒａｎｓ－シクロオクテン基は、前記ＰＥＧ鎖等に直接結合してもよいが、例えばエーテル結合、エステル結合、カーボネート結合、カルバメート結合、又はアミド結合などによって結合してもよい。

前記ジベンジルシクロオクチル基は下記式（１０）：

で表される基である。前記ジベンジルシクロオクチル基は、前記ＰＥＧ鎖等に直接結合してもよいが、例えばエーテル結合、エステル結合、カーボネート結合、カルバメート結合、又はアミド結合などによって結合してもよい。

前記ビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イルメチル基は下記式（１１）：

で表される基である。前記ビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イルメチル基は、前記ＰＥＧ鎖等に直接結合してもよいが、例えばエーテル結合、エステル結合、カーボネート結合、カルバメート結合、又はアミド結合などによって結合してもよい。

前記シアノベンゾチアゾール基は、下記式（１２）：

で表される基である。置換されたシアノベンゾチアゾール基は、Ｙ１～３との結合が、アミド結合、エーテル結合、又はエステル結合を介して結合したものである。前記シアノベンゾチアゾール基及び置換されたシアノベンゾチアゾール基は、前記ＰＥＧ鎖等に直接結合してもよいが、例えばエーテル結合、エステル結合、又はアミド結合などによって結合してもよい。

Ｙ１～３が分岐構造でＺがＹ１～３に複数存在する場合は、Ｚは同一であっても同一でなくてもよい。

一般式（１）のＹ１～３において置換基は、特に限定されるものではなく、例えば有機基、又は官能基が挙げられる。有機基とは、炭素原子を必須とする原子の集合体であり、例えばアルキル基、アラルキル基、アルケニル基、アルキニル基が挙げられ、特にアルキル基、アルケニル基が好ましい。アルキル基、アルケニル基の構造に特に制限はなく飽和又は不飽和の鎖式炭化水素基又は脂環式炭化水素基となってもよい。アルキル基、アルケニル基の炭素数に特に制限はないが１～３０が好ましく特に１～２０が好ましい。官能基とは、有機化合物の性質を決定する原子の集合体であり、例えば水酸基、アミノ基、アルデヒド基、ケトン基、カルボキシル基、アミド基、チオール基、エーテル基が挙げられ、特に水酸基、アミノ基、カルボキシル基、アミド基、エーテル基が好ましい。

本発明の糖化合物（糖オキサゾリン誘導体）として、下記式（２）で表される糖化合物（オキサゾリン誘導体）が好ましい。

一般式（２）においてポリエチレングリコール鎖の重合度についても特に制限はないが、重合度２から１０が好ましい。

本発明の糖化合物（糖オキサゾリン誘導体）として、より具体的には、下記式で表される糖化合物（オキサゾリン誘導体）が挙げられる。

［２］修飾免疫グロブリン抗体
本発明の修飾免疫グロブリン抗体は、前記ポリエチレングリコール鎖を有する糖化合物から誘導される下記式（７）：

（式中、Ｘ、Ｙ１～３、及びＺは前記の通りであり、ＲはＬ－フコース又は水素原子である）で表されるポリエチレングリコール鎖を有する糖化合物基を、Ｆｃ領域のアスパラギン残基の側鎖の糖結合部位に有する。
抗体と一般式（１）で表される糖化合物（糖オキサゾリン誘導体）をＥＮＧａｓｅ存在下で反応させることで、前記式（７）で表される糖化合物基を有する修飾免疫グロブリン抗体が得られる。

抗体は特に限定されるものではなく、ＩｇＧ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＥ、ＩｇＤ、又はＩｇＭが挙げられる。ＩｇＧのＦｃ領域のアスパラギン残基は２９７番目である。ＩｇＡ１のＦｃ領域のアスパラギン残基は１４４番目及び３４０番目である。ＩｇＡ２のＦｃ領域のアスパラギン残基は１３１番目、２０５番目、及び３２７番目である。ＩｇＥのＦｃ領域のアスパラギン残基は１４０番目、１６８番目、２１８番目、２６５番目、３７１番目、３８３番目、及び３９４番目である。ＩｇＤのＦｃ領域のアスパラギン残基は３５４番目、４４５番目、及び４９６番目である。ＩｇＭＦｃ領域のアスパラギン残基は１７１番目、３３２番目、３９５番目、４０２番目、及び５６３番目である。

ＩｇＧの場合、例えば下記一般式（３）で表されるＡＤＣ前駆体である修飾化ＩｇＧ抗体が得られる。

（式中、Ｘ、Ｙ１～３、及びＺは前記の通りであり、ＲはＬ－フコース又は水素原子である）

一般式（３）で表されるＡＤＣ前駆体である修飾化ＩｇＧ抗体のうち、下記一般式（４）で表され修飾化ＩｇＧ抗体が本発明品としては特に好ましい。

（式（４）中、ＲはＬ－フコース又は水素を示す。ｌとｎは２から１０の整数を表す。）

［３］抗体薬物複合体
本発明の抗体薬物複合体は、前記糖化合物のＺに薬物を、例えばリンカー（抗体と薬物を連結する分子で、薬物の放出速度、放出機構、放出場所を制御する分子）を介して結合させ、糖化合物のオキサゾリン骨格に抗体のアスパラギン残基を結合させるものである。リンカーとしては、限定されるものではないが、例えばＶａｌ－Ｃｉｔ リンカー、ＭＣＣリンカー、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙリンカーが挙げられる。本発明の糖化合物（糖オキサゾリン誘導体）は、前記の通り、ＥＮＧａｓｅ存在下で抗体と反応させることによって、抗体のＦｃ部分のアスパラギン酸に本発明の糖化合物（糖オキサゾリン誘導体）が導入される。
本発明の修飾免疫グロブリン抗体は、前記Ｚの基に薬物を結合させる。前記Ｚの基（アジド基、テトラジン基の誘導体、ノルボルネン基、ｔｒａｎｓ－シクロオクテン基、ジベンジルシクロオクチル基、又はビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イルメチル基、又はシアノベンゾチアゾール基の誘導体）は、温和な条件で薬物を導入することができる。例えば、中性領域のｐＨで、室温で迅速に反応を進行させることができる。従って、抗体を高い温度にさらすことがなく、抗体の劣化が起こらない。

以下に、本発明を実施例を用いて更に詳細に説明するが、この実施例は本発明の具体例を示すもので、本発明を何ら限定するものではない。
《実施例１》

本実施例では、末端にアジド基を有するＰＥＧ鎖を有する糖化合物を作製した。
（化合物２の調製）
化合物１（２．０３ｇ，８．５２ｍｍｏｌ）をトルエン（４０ｍＬ）に溶解し、ｐ－メトキシベンジルクロリド（１．２７ｍＬ，９．３７ｍｍｏｌ）、ヨウ化カリウム（２８３ｍｇ、酸化銀（Ｉ）（２．９６ｇ，１２．８ｍｍｏｌ）を順次加え、６０℃で一晩撹拌した。固形物を濾別し、クロロホルムで洗浄後、濾液と洗液を合わせて減圧濃縮した。得られた残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 クロロホルム：メタノール＝５０：１）で精製し、黄色油状の化合物２（１．６６ｇ，５８％）を得た。

化合物２ ^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝２．６６（ｂｒｓ，１Ｈ），３．５７－３．６２（ｍ，４Ｈ），３．６３－３．６９（ｍ，１４Ｈ），３．６９－３．７４（ｍ，２Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），４．５０（ｓ，２Ｈ），６．８７（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．２７（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）．

（化合物３の調製）
化合物２（７７３ｍｇ，２．２８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１５ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（１．５７ｍＬ，１１．４ｍｍｏｌ）及びトシルクロライド（６１０ｍｇ，３．２０ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩撹拌した。反応液に水を加え、クロロホルムで２回抽出した。有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水の順で洗浄後、硫酸ナトリウムを加え乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 トルエン：酢酸エチル＝２：３）で精製し、淡黄色の化合物３（１．０８ｇ，９２％）を得た。

化合物３ ^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝２．４４（ｓ，３Ｈ），３．５５－３．７１（ｍ，１８Ｈ），３．８０（ｍ，３Ｈ），４．１５（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），４．４９（ｓ，２Ｈ），６．８７（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ）．

（化合物５の調製）
非特許文献３記載の方法で調製した化合物４（４３５ｍｇ，５２２μｍｏｌ）及び化合物３（１．０７ｇ，２．０９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２．１ｍＬ）に溶解し、水素化ナトリウム（５０．１ｍｇ，１．１５ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１０分、次いで室温で一晩撹拌した。反応液に５％クエン酸水溶液（２ｍＬ）を加え反応を停止させた後、水を加え酢酸エチルで２回抽出した。有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水の順で洗浄後、硫酸マグネシウムを加え乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 酢酸エチル）で精製し、無色油状の化合物５（６２４ｍｇ，７９％）を得た。

化合物５ ^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１．６６（ｓ，３Ｈ），３．２３－３．３０（ｍ，２Ｈ），３．４２－３．４７（ｍ，２Ｈ），３．４７－３．８７（ｍ，５２Ｈ），３．９０（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），４．０５（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），４．４５（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．４６－４．５０（ｍ，５Ｈ），４．５２－４．６０（ｍ，３Ｈ），４．６４（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．７５－４．９１（ｍ，６Ｈ），６．１１（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，４Ｈ），７．１９－７．３４（ｍ，２７Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ）．

（化合物６の調製）
化合物５（６２７ｍｇ，４１４μｍｏｌ）をジクロロメタン（６ｍＬ）に溶解し、水（０．６ｍＬ）及びＤＤＱ（２６３ｍｇ，１．１６ｍｍｏｌ）加え、０℃で１５分、次いで室温で２．５時間撹拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１８ｍＬ）及びクロロホルム（１２ｍＬ）を加え室温で１０分撹拌した後、水を加えクロロホルムで２回抽出した。有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水の順で洗浄後、硫酸ナトリウムを加え乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 酢酸エチル：メタノール＝８：１）で精製し、無色油状の化合物６（２８６ｍｇ，５４％）を得た。

化合物６ ^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１．６８（ｓ，３Ｈ），２．８３（ｂｒｓ，１Ｈ），２．９５（ｂｒｓ，１Ｈ），３．２６－３．３１（ｍ，２Ｈ），３．４２－３．８４（ｍ，４８Ｈ），３．９１（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），４．０７（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），４．４６（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．５０（ｓ，１Ｈ），４．５３－４．６１（ｍ，３Ｈ），４．６４（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．７５－４．９１（ｍ，６Ｈ），６．２６（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１８－７．３６（ｍ，２３Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ）．

（化合物７の調製）
化合物６（６６３ｍｇ，５２０μｍｏｌ）をジクロロメタン（６ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（５８２μＬ，４．１６ｍｍｏｌ）及びトシルクロライド（３９７ｍｇ，２．０８ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で一晩撹拌した。反応液に水を加え、酢酸エチルで２回抽出した。有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水の順で洗浄後、硫酸マグネシウムを加え乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 トルエン：酢酸エチル＝１：２０）で精製し、無色油状の化合物７（６５８ｍｇ，８０％）を得た。

化合物７ ^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１．６６（ｓ，３Ｈ），２．４３（ｓ，６Ｈ），３．２４－３．３０（ｍ，２Ｈ），３．４３－３．８５（ｍ，４４Ｈ），３．９１（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），４．０５（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），４．１１－４．１４（ｍ，４Ｈ），４．４４（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．４９（ｓ，１Ｈ），４．５２－４．６０（ｍ，３Ｈ），４．６３（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．７５－４．９１（ｍ，６Ｈ），６．０８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１７－７．３８（ｍ，２７Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），７．７８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，４Ｈ）．

（化合物８の調製）
化合物７（４２２ｍｇ，２７９μｍｏｌ）を１，４－ジオキサン（１６ｍＬ）に溶解し、Ｐｄ／Ｃ（２６０ｍｇ）の１，４－ジオキサン懸濁液（４ｍＬ）に加えた後、水（５ｍＬ）加え、水素雰囲気下、室温にて一晩撹拌した。固形物を濾別し、５０％１，４－ジオキサン水溶液で洗浄後、濾液と洗液を合わせて減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 クロロホルム：メタノール：水＝８５：１５：０．８）で精製し、無色油状の化合物８（２４５ｍｇ，７８％）を得た。

化合物８ ^１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ＝２１．６５，２２．７０，２３．００，５５．６５，５８．２７，５８．３６，６２．１０，６７．５８，６９．１４，６９．１７，６９．７９，６９．９０，７０．６３，７１．０３，７１．３７，７１．４７，７１．５２，７１．５５，７１．６１，７１．８２，７１．８６，７１．８８，７３．９１，７６．４９，７６．８９，８１．６２，８２．１１，８３．７８，８３．８０，９２．２５，９７．３２，１０２．０７，１０２．１５，１２９．１２，１３１．１３，１４６．５２，１７３．４６，１７４．０３

（化合物９の調製）
化合物８（２２２ｍｇ，１９６μｍｏｌ）をピリジン（２ｍＬ）に溶解し、無水酢酸（１ｍＬ）を加え、室温で一晩撹拌した。反応液にメタノール（２ｍＬ）を加え過剰な試薬を分解した後、反応液を減圧濃縮した。残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 クロロホルム：メタノール：水＝２０：１）で精製し、無色油状の化合物９（１３１ｍｇ，５０％，α／β＝７／３）を得た。

化合物９ ^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１．９３（ｓ，３Ｈ），２．０７（ｓ，３Ｈ），２．０９（ｓ，０．９Ｈ），２．１０－２．１３（ｍ，９Ｈ），２．１８（ｓ，２．１Ｈ），２．４５（ｓ，６Ｈ），３．４４－３．７７（ｍ，４０Ｈ），３．７７－３．８３（ｍ，０．３Ｈ），３．８６－３．９５（ｍ，１．７Ｈ），４・１３－４．１９（ｍ，４Ｈ），４．２２－４．４０（ｍ，３Ｈ），４．５５（ｓ，０．７Ｈ），４．５８（ｓ，０．３Ｈ），４．９１－５．０１（ｍ，１Ｈ），５．１２（ｔ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，０．３Ｈ），５．２０（ｄｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１１．０Ｈｚ，０．７Ｈ），５．４５（ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，０．３Ｈ），５．４８（ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，０．７Ｈ），５．６１（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，０．３Ｈ），５．６２（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，０．７Ｈ），５．８８（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，０．３Ｈ），６．１０（ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，０．７Ｈ），７．３５（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，４Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，４Ｈ）．

（化合物１０の調製）
化合物９（７６．２ｍｇ，５６．８μｍｏｌ）をＤＭＦ（１．５ｍＬ）に溶解し、アジ化ナトリウム（３６．９ｍｇ，５６８μｍｏｌ）を加え、５０℃で一晩撹拌した。反応液に水を加え酢酸エチルを加え２回抽出した。有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水の順で洗浄後、硫酸マグネシウムを加え乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 クロロホルム：メタノール：水＝３０：１）で精製し、無色油状の化合物１０（４８．９ｍｇ，８０％，α／β＝７５／２５）を得た。

化合物１０ ^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１．９３（ｓ，３Ｈ），２．０８（ｓ，３Ｈ），２．１０（ｓ，０．７５Ｈ），２．１１－２．１４（ｍ，９Ｈ），２．１８（ｓ，２．２５Ｈ），３．３９（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，４Ｈ），３．４４－３．７８（ｍ，４０Ｈ），３．７８－３．８３（ｍ，０．２５Ｈ），３．８７－３．９５（ｍ，１．７５Ｈ），４．２０－４．４０（ｍ，３Ｈ），４．５３（ｓ，０．７５Ｈ），４．５６（ｓ，０．２５Ｈ），４．９２－５．００（ｍ，１Ｈ），５．１１（ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，０．２５Ｈ），５．１９（ｄｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１１．０Ｈｚ，０．７５Ｈ），５．４５（ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，０．２５Ｈ），５．４８（ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，０．７５Ｈ），５．５６（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，０．７５Ｈ），５．６１（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，０．２５Ｈ），５．８１（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，０．２５Ｈ），６．１１（ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，０．７５Ｈ）．

（化合物１１の調製）
化合物１０（４１．３ｍｇ，３８．１μｍｏｌ）をメタノール（１０ｍＬ）に溶解し、触媒量の２８％ナトリウムメトキシドメタノール溶液を滴下し、室温で一晩撹拌した。反応液にＡｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲ－１２０（Ｈ^＋ ｆоｒｍ）を加えて中和後、樹脂を濾別した。濾液を減圧濃縮し、残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 クロロホルム：メタノール：水＝８５：１５：０．１）で精製し、無色油状の化合物１１（１４．６ｍｇ，４４％）を得た。

化合物１１ ^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ＝１．９３（ｓ，３Ｈ），３．３７－３．８９（ｍ，５１Ｈ），４．１８－４．２３（ｍ，１Ｈ），４．６２－４．６７（ｍ，１．４Ｈ），５．１２（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，０．６Ｈ）．

（化合物１２の調製）
化合物１１（６．６ｍｇ，７．５５μｍｏｌ）に０．７８０Ｍの２－クロロ－１，３－ジメチルイミダゾリニウムクロリド水溶液（３００μＬ，２３４μｍｏｌ）及びトリエチルアミン（８２．１μＬ，５８９μｍｏｌ）を加え、０℃で一晩撹拌した。反応液をゲルろ過クロマトグラフィー（展開溶媒 ０．０５％トリエチルアミン水溶液）で精製し、化合物１２を定量的（６．５７ｍｇ）に得た。

化合物１２ ^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）：δ＝１．９３（ｓ，３Ｈ），３．２３－３．２８（ｍ，１Ｈ），３．３０（ｄｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，９．６Ｈｚ，１Ｈ），３．３２－３．４０（ｍ，６Ｈ），３．４６－３．７８（ｍ，４１Ｈ），４．０１－４．０７（ｍ，２Ｈ），４．２２（ｓ，１Ｈ），４．５５（ｓ，１Ｈ），５．９３（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）．

《実施例２》
本実施例では、リツキシマブ（抗体）に実施例１で得られた化合物を結合させた。
（リツキシマブ糖鎖結合部位への化合物１２の転移反応）
リツキシマブのアクセプター（１３）は全薬工業社製造のリツキシマブを用いて非特許文献４に従って調製した。リツキシマブのアクセプター１３の糖鎖結合部位への化合物１２の転移反応は、調製したリツキシマブのアクセプター１３（２ｍｇ）、化合物１２（１．３８４μｍｏｌ）、並びに、大腸菌で発現及び精製した野生型酵素Ｅｎｄｏ－Ｆ３ ＷＴ（２００μｇ）を５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）中に加え、総量０．５ｍＬとして３７℃で１時間静置することで実施した。反応液の一部を取り出し９．０％ポリアクリルアミドゲルを用いたＳＤＳ－ＰＡＧＥ（クーマシーブリリアントブルー染色）で確認したところ、化合物１２の転移により高分子側にシフトした重鎖バンドが確認された（図１）。当該反応液に同緩衝液で平衡化したＡｂ－Ｃａｐｃｈｅｒ ＥｘＴｒａ（プロテノバ社）をウェットボリュームで８０μＬ加えて室温で１時間回転振盪し、ゲル担体にリツキシマブを吸着させた。ゲル担体に対して、１．８ｍＬのＮＥＴＮ緩衝液（５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、１ｍＭＥＤＴＡ及び０．１％（ｗ／ｖ）ＮＰ－４０）を用いた室温、転倒混和による洗浄作業を計３回、１．８ｍＬのＮＥＴＮ緩衝液を用いた室温、５分間の回転振盪による洗浄作業を１回、１ｍＬのＰＢＳを用いたリンスを４回行った。洗浄した担体に２００μＬの０．１Ｍグリシン塩酸緩衝液（ｐＨ２．７）を加えリツキシマブを溶出させ、溶出液に１Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ９．０）を６．６７μＬ加えて中和した。当該溶出作業を計４回行い、溶出液をまとめてアミコンウルトラ－０．５（分画分子量３０ｋＤａ、メルクミリポア社）で濃縮しながらＰＢＳに緩衝液置換した。その結果、リツキシマブの糖鎖結合部位への化合物１２の転移生成物としてＦｕｌｌｙアジドＰＥＧ化リツキシマブ体（１４）とＨｅｍｉアジドＰＥＧ化リツキシマブ体（１５）と未反応のリツキシマブアクセプター（１３）の混合物が１．４６ ｍｇ得られた（図２）。質量分析による解析の結果、重鎖の糖鎖部位への化合物１２の転移収率は４６．７％であった。

《実施例３》
本実施例では、アジド基に蛍光基を導入した。
（アジドＰＥＧ化リツキシマブへの蛍光基の導入）
実施例２で得られた反応生成物の水溶液（７．０μｇ／μＬ）を４．０μＬに１．０ＭのｐＨ８．０リン酸緩衝液２．０μＬ、水１５．３μＬ及び化合物１６の１％ＤＭＳＯ水溶液（１００μＭ）を１８．７μＬを加え、遮光して室温で２時間反応させた。
反応液の一部（３．３μＬ）を取り出し１０％ポリアクリルアミドゲルを用いたＳＤＳ－ＰＡＧＥ（クーマシーブリリアントブルー染色）で確認したところ、原料中のアジドＰＥＧ化された重鎖に相当するバンドがクリック反応により高分子側にシフトし、蛍光基が導入されたことが確認された（図３）。
質量分析による解析の結果、重鎖の２か所のアジド基に対して２箇所とも蛍光基が導入された生成物は７６％、２か所のうちどちらか１箇所にのみ蛍光基が導入された生成物は２０％、未反応物が４％であった（図４）。

《実施例４》
本実施例では、末端にテトラジン基を有するＰＥＧ鎖を有する糖化合物を作製した。
（化合物１８の調製）
市販の化合物１７（５．０１ｇ，１１．２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（６ｍＬ）に溶解し、２５％臭化水素酢酸溶液（１５ｍＬ）を加え、室温で２．５時間攪拌した。反応液に氷水を加え、クロロホルムで抽出した。有機相を水（２回）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水の順で洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。得られた残渣（４．９６ｇ）をベンジルアルコール（１４ｍＬ）に溶解し、９０℃で一晩攪拌した。反応液にアセトン（４０ｍＬ）、水（１５ｍＬ）及び塩酸（１０ｍＬ）を加え、７５℃で更に５時間攪拌した。反応液にトリエチルアミン（２０ｍＬ）を加えて反応を停止させた後、減圧濃縮した。残渣に水を加え酢酸エチル（２回）で抽出した。有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水の順で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ＝１０：１）で精製し、化合物１８（３．０５ｇ，６８％）を得た。

化合物１８ ^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．８２－７．７５（ｍ，２Ｈ），７．７３－７．６９（ｍ，２Ｈ），７．１４－７．０３（ｍ，５Ｈ），５．２５（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），４．８０（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．５３（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．３６－４．３０（ｍ，１Ｈ），４．１６（ｄｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．９７－３．８６（ｍ，２Ｈ），３．７０（ｄｔＪ＝２．７Ｈｚ，８．９Ｈｚ，１Ｈ），３．５２－３．４８（ｍ，２Ｈ），３．１７（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），２．５９（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ）．

（化合物１９の調製）
化合物１８（３．０３ｇ，７．５９ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１２５ｍＬ）に溶解し、ベンズアルデヒドジメチルアセタール（２．２７ｍＬ，１５．２ｍｍｏｌ）及びＣＳＡ（２５０ｍｇ）を順次加え、室温で一晩撹拌した。反応液にトリエチルアミン（０．５ｍＬ）加え、減圧濃縮した。残渣に水を加えて酢酸エチル（２回）で抽出した。有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水の順で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒 Ｈｅｘａｎｅ：ＥｔＯＡｃ＝２：１）で精製し、化合物１９（３．３６ｇ，９１％）を得た。

化合物１９ ^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．８６－７．７０（ｍ，４Ｈ），７．５３－７．４８（ｍ，２Ｈ），７．４１－７．３５（ｍ，３Ｈ），７．１１－７．０２（ｍ，５Ｈ），５．５８（ｓ，１Ｈ），５．２８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），４．８５（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．６９－４．６０（ｍ，１Ｈ），４．５２（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．４３（ｄｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，９．６Ｈｚ，１Ｈ），４．３０（ｄｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１０．３Ｈｚ，１Ｈ），３．８７（ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），３．６９－３．６１（ｍ，２Ｈ），２．４６（ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，１Ｈ）．

（化合物２０の調製）
化合物１９（４．３６ｇ，８．９６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（４０ｍＬ）に溶解し、ベンジルブロミド（５．３２ｍＬ，４４．８ｍｍｏｌ）及び水素化ナトリウム（５８９ｍｇ，１３．４ｍｍｏｌ）を順次加え、０℃で３０分、室温で一晩撹拌した。反応液に５％クエン酸水溶液（５ｍＬ）を加えて反応を停止させた後、水を加えて酢酸エチル（２回）で抽出した。有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水の順で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒 Ｔｏｌｕｅｎｅ：ＥｔＯＡｃ＝２０：１）で精製し、化合物２０（４．１４ｇ，８０％）を得た。

化合物２０^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．８８－７．６４（ｍ，３Ｈ），７．５４－７．４８（ｍ，３Ｈ），７．４３－７．３６（ｍ，３Ｈ），７．０７－６．９４（ｍ，７Ｈ），６．９２－６．８３（ｍ，３Ｈ），５．６３（ｓ，１Ｈ），５．１９（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），４．８０（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．７７（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．４８（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，２Ｈ），４．４５－４．３６（ｍ，２Ｈ），４．２６（ｄｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１０．３Ｈｚ，１Ｈ），３．８８（ｔ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，１Ｈ），３．８３（ｔ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），３．６７（ｍ，１Ｈ）．

（化合物２１の調製）
化合物２０（４．０５ｇ，７．０１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１２０ｍＬ）に溶解し、アルゴン雰囲気下、トリエチルシラン（３．３４ｍＬ，２１．０ｍｍｏｌ）及び三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体（２．９１ｍＬ，２３．１ｍｍｏｌ）を順次加え、－７８℃で１０分、０℃で一晩撹拌した。反応液にメタノール（１３ｍＬ）、トリエチルアミン（６．５ｍＬ）及びクロロホルム（１９．５ｍＬ）の混合溶液を加えて反応を停止させた後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えてクロロホルム（２回）で抽出した。有機相を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒 Ｈｅｘａｎｅ：ＥｔＯＡｃ＝２：１）で精製し、化合物８（２．９８ｇ，７３％）を得た。

化合物２１ ^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．８５－７．５１（ｍ，４Ｈ），７．４１－７．３５（ｍ，４Ｈ），７．３５－７．３０（ｍ，１Ｈ），７．１１－７．０１（ｍ，７Ｈ），６．９９－６．９０（ｍ，３Ｈ），５．１５（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．７８（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．７２（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．６７（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．６０（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．５１（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．４７（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．２６－４．１９（ｍ，２Ｈ），３．８９－３．７８（ｍ，３Ｈ），３．６８－３．６１（ｍ，１Ｈ），２．８９（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ）．

（化合物２３の調製）
市販の化合物２２（５．６５ｇ，１４．５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５６ｍＬ）に溶解し、５－ｔｅｒｔ－ブチル－２－メチルベンゼンチオール（５．２７ｍＬ，２８．９ｍｍｏｌ）及び三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体（３．３７ｍＬ，２８．９ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で一晩撹拌した。反応液に飽和食塩水を加えてクロロホルム（２回）で抽出した。有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒 Ｈｅｘａｎｅ：ＥｔＯＡｃ＝２：１）で精製し、化合物２３（６．７５ｇ，９１％）を得た。

化合物２３ ^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．５３（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｄｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），５．５３（ｓ，１Ｈ），５．４３（ｓ，１Ｈ），５．４１－５．３４（ｍ，２Ｈ），４．５８－４．４９（ｍ，１Ｈ），４．３５（ｄｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．０８（ｄｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１２．４Ｈｚ，１Ｈ），２．４１（ｓ，３Ｈ），２．１７（ｓ，３Ｈ），２．０８（ｓ，３Ｈ），２．０６（ｓ，３Ｈ），２．０３（ｓ，３Ｈ），１．３０（ｓ，９Ｈ）．

（化合物２４の調製）
化合物２３（８．０７ｇ，１５．８ｍｍｏｌ）をメタノール（８０ｍＬ）に溶解し、触媒量２８％のナトリウムメトキシドメタノール溶液を加え、室温で一晩撹拌した。反応液にＡｍｂｅｒｌｉｔｅＩＲ－１２０（Ｈ^＋ｆｏｒｍ）を加えて中和後、樹脂を濾別し、濾液を減圧留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒 ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ＝１０：１）で精製し、化合物２４（５．２９ｇ，９８％）を得た。

化合物２４ ^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ＝７．６０（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｄｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），５．３３（ｓ，１Ｈ），４．１１（ｔ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．０６－３．９７（ｍ，１Ｈ），３．７９－３．７３（ｍ，４Ｈ），２．３９（ｓ，３Ｈ），１．２９（ｓ，９Ｈ）．

（化合物２５の調製）
化合物２４（５．０１ｇ，１４．６ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（２５０ｍＬ）に溶解し、ベンズアルデヒドジメチルアセタール（３．２９ｍＬ，２１．９ｍｍｏｌ）及びＣＳＡ（５０７ｍｇ）を順次加え、０℃で１時間撹拌した。反応液にトリエチルアミン（１．５ｍＬ）加えて反応を停止させた後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒 Ｔｏｌｕｅｎｅ：ＥｔＯＡｃ＝３：１）で精製し、化合物２５（４．１２ｇ，６７％）を得た。

化合物２５ ^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．５８－７．４８（ｍ，３Ｈ），７．４２－７．３５（ｍ，３Ｈ），７．２５－７．２０（ｍ，１Ｈ），７．１６（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），５．５９（ｓ，１Ｈ），５．５２（ｓ，１Ｈ），４．４１－４．３３（ｍ，２Ｈ），４．２４－４．１７（ｍ，２Ｈ），４．０２（ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），３．８５（ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），２．８５（ｓ，１Ｈ），２．７７（ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，１Ｈ），２．４１（ｓ，３Ｈ），１．３０（ｓ，９Ｈ）．

（化合物２６の調製）
化合物２５（４．０８ｇ，９．４８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（４０ｍＬ）に溶解し、水素化ナトリウム（９９６ｍｇ，２２．７ｍｍｏｌ）及びベンジルブロミド（２．７０ｍＬ，２２．７ｍｍｏｌ）を順次加え、０℃で１５分、室温で一晩撹拌した。反応液にメタノール（３ｍＬ）を加えて過剰な試薬を分解させた後、水を加えて酢酸エチル（２回）で抽出した。有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水の順に洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒 Ｔｏｌｕｅｎｅ）で精製し、化合物２６（４．４６ｇ，７７％）を得た。

化合物２６ ^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．５２（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ１Ｈ），７．４３－７．２７（ｍ，１３Ｈ），７．２２（ｄｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１３（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），５．６７（ｓ，１Ｈ），５．４２（ｓ，１Ｈ），４．８４（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．７４（ｓ，２Ｈ），４．６７（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．３６－４．３０（ｍ，２Ｈ），４．２２－４．１９（ｍ，１Ｈ），４．０８（ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，１Ｈ），４．０２（ｄｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，９．６Ｈｚ，１Ｈ），３．９１（ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），２．３１（ｓ，３Ｈ），１．２９（ｓ，９Ｈ）．

（化合物２７の調製）
化合物２６（２．１７ｇ，３．５５ｍｍｏｌ）、ＢＳＰ（８１８ｍｇ，３．９１ｍｍｏｌ）及びＴＴＢＰ（１．７７ｇ，７．１１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３６ｍＬ）に溶解し、アルゴン雰囲気下、モレキュラーシーブス３Ａ（４．１１ｇ）を加え、－６０℃で１５分撹拌した。その後Ｔｆ_２Ｏ（７１７ｍＬ）を加えて５分攪拌した後、化合物２１（１．６５ｇ，２．８４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３６ｍＬ）溶液を加えた。反応液を－６０℃で１時間撹拌した後、室温まで１．５時間かけて昇温させた。反応液にトリエチルアミン（１．２ｍＬ）を加えて反応を停止させた後、固形物をシリカゲル濾過によって濾別後、酢酸エチルで洗浄した。濾液は洗液と合わせて減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒 Ｔｏｌｕｅｎｅ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１）で精製し、化合物２７（１．８３ｇ，６４％）を得た。

化合物２７ ^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．８３－７．４９（ｍ，４Ｈ），７．４９－７．４２（ｍ，４Ｈ），７．３９－７．２１（ｍ，１６Ｈ），７．１１－７．０３（ｍ，５Ｈ），６．９３－６．８９（ｍ，２Ｈ），６．８３－６．８０（ｍ，３Ｈ），５．５１（ｓ，１Ｈ），５．１１（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），４．８９－４．８２（ｍ，３Ｈ），４．８０（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．７４（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．６８（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．５８（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．５４（ｓ，１Ｈ），４．４９（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．４１（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．４０（ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２６－４．１５（ｍ，３Ｈ），４．０７（ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），４．０３（ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），３．７４（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），３．６７（ｄｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．５９－３．５５（ｍ，２Ｈ），３．４９－３．４６（ｍ，１Ｈ），３．４１（ｄｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，１０．３Ｈｚ，１Ｈ），３．１４（ｄｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，９．６Ｈｚ，１Ｈ），．

（化合物２８の調製）
化合物２７（１．７２ｇ，１．７０ｍｍｏｌ）に１．０ＭＢＨ_３のＴＨＦ溶液（１２．８ｍＬ，１２．８ｍｍｏｌ）及び１．０Ｍｎ－Ｂｕ_２ＢＯＴｆのジクロロメタン溶液（２．５６ｍＬ，２．５６ｍｍｏｌ）を順次加え、０℃で１．５時間撹拌した。反応液にトリエチルアミン（１．５ｍＬ）を加えて反応を停止させた後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒 Ｔｏｌｕｅｎｅ：ＥｔＯＡｃ＝５：１）で精製し、化合物２８（１．５３ｇ，８９％）を得た。

化合物２８δ＝７．８３－７．５２（ｍ，４Ｈ），７．４４－７．４０（ｍ，２Ｈ），７．３５－７．２３（ｍ，１８Ｈ），７．１１－７．０２（ｍ，５Ｈ），６．９０－６．８１（ｍ，５Ｈ），５．１３（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），４．９０－４．８２（ｍ，４Ｈ），４．８０（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．６７（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．５６（ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１Ｈ），４．５３－４．４５（ｍ，５Ｈ），４．４０（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．２７－４．１９（ｍ，２Ｈ），４．００（ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），３．７９－３．７０（ｍ，４Ｈ），３．６６（ｄｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．５８－３．５４（ｍ，１Ｈ），３．４７－３．４１（ｍ，１Ｈ），３．３６（ｄｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，９．６Ｈｚ，１Ｈ），３．２２－３．１８（ｍ，１Ｈ），２．１０（ｂｒｓ，１Ｈ）．

（化合物２９の調製）
化合物２８（７９０ｍｇ，７８２μｍｏｌ）を１，２－ジクロロエタン（８ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（４３７μＬ，３．１３ｍｍｏｌ）及びメシルクロリド（１２１μＬ，１．５６ｍｍｏｌ）を順次加え、６０℃で一晩撹拌した。反応液に水を加えて酢酸エチル（２回）で抽出した。有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水の順で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒 Ｔｏｌｕｅｎｅ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１）で精製し、化合物２９（７２０ｍｇ，８５％）を得た。

化合物２９ ^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．８３－７．５２（ｍ，４Ｈ），７．４１－７．２１（ｍ，２０Ｈ），７．１３－７．０８（ｍ，１Ｈ），７．０６（ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，４Ｈ），６．８４－６．７５（ｍ，５Ｈ），５．１４（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），４．９１（ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１Ｈ），４．９０（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４，８３（ｓ，２Ｈ），４．７９（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．７１（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．５８（ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１Ｈ），４．５５（ｓ，１Ｈ），４．５０（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．４９－４．４３（ｍ，３Ｈ），４．３７（ｄ，Ｊ＝１３．１Ｈｚ，２Ｈ），４．２５－４．１８（ｍ，２Ｈ），４．１４（ｄｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１０．３Ｈｚ，１Ｈ），４．０２（ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），３．７９－３．７２（ｍ，３Ｈ），３．６９（ｄｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．５８－３．５４（ｍ，１Ｈ），３．３７－３．３２（ｍ，２Ｈ），２．８６（ｓ，３Ｈ）．

（化合物３０の調製）
化合物２９（９５６ｍｇ，８７７μｍｏｌ）をＤＭＦ（９．５ｍＬ）に溶解し、アジ化ナトリウム（２８５ｍｇ，４．３８ｍｍｏｌ）を加え８０℃で一晩撹拌した。反応液に水を加えて酢酸エチル（２回）で抽出した。有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水の順で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒 Ｔｏｌｕｅｎｅ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１）で精製し、化合物３０（８６２ｍｇ，９５％）を得た。

化合物３０ ^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．８１－７．６０（ｍ，３Ｈ），７．４６－７．４３（ｍ，３Ｈ），７．３５－７．２３（ｍ，１８Ｈ），７．１０－７．０１（ｍ，５Ｈ），６．９１－６．８８（ｍ，２Ｈ），６．７７－６．７４（ｍ，３Ｈ），５．１１（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），４．９１（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，３Ｈ），４．８６（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．７８（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．６７（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．５６（ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１Ｈ），４．５６（ｓ，１Ｈ），４．５１－４．４１（ｍ，５Ｈ），４．２６－４．１９（ｍ，２Ｈ），４．０５（ｄｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，９．６Ｈｚ，１Ｈ），３．８２（ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），３．７７（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），３．７２（ｄｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．６５（ｄｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．５５－３．５１（ｍ，１Ｈ），３．４５（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．３２（ｄｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，９．６Ｈｚ，１Ｈ），３．２７－３．２４（ｍ，１Ｈ），３．２２（ｄｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１２．４Ｈｚ，１Ｈ）．

（化合物３１の調製）
化合物３０（１５６ｍｇ，１５０μｍｏｌ）をメタノール（４ｍＬ）－ＴＨＦ（１ｍＬ）の混合溶液に溶解し、エチレンジアミン（１ｍＬ）を加え一晩加熱還流した。反応液を減圧濃縮し、残渣にピリジン（１ｍＬ）及び無水酢酸（２ｍＬ）を加えて室温で一晩撹拌した。反応液にメタノール（２ｍＬ）を加えて反応を停止させた後、減圧濃縮した。残渣に水を加えて酢酸エチルで抽出した。有機相を１Ｍ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水の順で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒 Ｔｏｌｕｅｎｅ：ＥｔＯＡｃ＝５：１）で精製し、化合物３１（１３７ｍｇ，９６％）を得た。

化合物３１ ^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．３９（ｄ，Ｊ＝６，９Ｈｚ，２Ｈ），７．３５－７．２２（ｍ，２８Ｈ），５．９２（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），４．９４－４．８６（ｍ，３Ｈ），４．８５－４．７８（ｍ，３Ｈ），４．６５（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．６０－４．５０（ｍ，５Ｈ），４．４７（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．４２（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．０４（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９６（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），３．８５－３．６９（ｍ，６Ｈ），３．３８（ｄｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，９．６Ｈｚ，１Ｈ），３．３０（ｄｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．２７－３．１８（ｍ，２Ｈ），１．６５（ｓ，３Ｈ）．

（化合物３２の調製）
化合物３１（１０１ｍｇ，１０３μｍｏｌ）を１，４－ジオキサン（１０．０ｍＬ）に溶解し、水酸化パラジウム（９９．５ｍｇ）の１，４－ジオキサン（２．０ｍＬ）の懸濁液に加えた。水（３．０ｍＬ）及び１Ｎ塩酸（１５５μＬ，１５５μｍｏｌ）を加えたのち、水素雰囲気下、室温にて４時間撹拌した。固形物を濾別し、水で洗浄後、濾液は洗液を合わせて凍結乾燥し、化合物３２（４２．９ｍｇ）を得た。

化合物３２ ^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．３９（ｄ，Ｊ＝６，９Ｈｚ，２Ｈ），７．３３－７．２１（ｍ，２８Ｈ），５．８０（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．９２－４．８６（ｍ，４Ｈ），４．８４－４．７９（ｍ，２Ｈ），４．６３－４．５５（ｍ，４Ｈ），４．５３－４．４４（ｍ，４Ｈ），４．０３（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），３．８９（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），３．７９－３．７５（ｍ，２Ｈ），３．７０－３．６１（ｍ，４Ｈ），３．３８（ｄｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，８．９Ｈｚ，１Ｈ），３．０９－３．０５（ｍ，１Ｈ），２．９２（ｄｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１３．１Ｈｚ，１Ｈ），２．６１（ｄｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１３．１Ｈｚ，１Ｈ），１．６９（ｓ，３Ｈ），１．４８（ｂｒｓ，２Ｈ）．

（化合物３４の調製）
化合物３２（４２．９ｍｇ）を５０％アセトニトリル水溶液（０．８０ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（６．９６μＬ，５０．０μｍｏｌ）及び化合物３３（１５．１ｍｇ，２５．０μｍｏｌ）を順次加え、室温で２時間撹拌した。反応液に水（２．０ｍＬ）を加え凍結乾燥した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 ７．５：２．５：０．３ＣＨＣｌ_３－ＭｅＯＨ－Ｈ_２Ｏ）で精製し、化合物３４（２２．２ｍｇ，２工程９９％）を得た。

化合物３４^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）：δ＝１０．３５（ｓ，１Ｈ），８．５５（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．５８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），５．１０（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，０．８Ｈ），４．６４（ｓ，１Ｈ），４．５８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，０．２Ｈ），４．５３（ｓ，２Ｈ），３．９３－３．５６（ｍ，２８Ｈ），３．４９－３．４３（ｍ，３Ｈ），３．３１－３．２７（ｍ，１Ｈ），２．５５（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），２．４８（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），１．９８（ｓ，３Ｈ）
得られた化合物３４は既存のオキサゾリン化法を用いることでオキサゾリン体へと誘導することができる。

《実施例５》
本実施例では、実施例１とは異なる工程で化合物１２を調製した。
（化合物３６の調製）
化合物３５（４．０７ｇ，４．３５ｍｍｏｌ）に１．０ＭＢＨ_３のＴＨＦ溶液（３２．６ｍＬ，３２．６ｍｍｏｌ）及び１．０Ｍｎ－Ｂｕ_２ＢＯＴｆのジクロロメタン溶液（６．５２ｍＬ，６．５２ｍｍｏｌ）を順次加えアルゴン雰囲気下、０℃で１時間攪拌した。反応液にトリエチルアミン（１２ｍＬ）を加え反応を停止させた後、反応液を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 ｎ－ヘキサン：酢酸エチル＝３：２→１：１）で精製し、白色固体の化合物３６（４．０８ｇ，８８％）を得た。

（化合物３７の調製）
化合物３６（３．５７ｇ，３．８１ｍｍｏｌ）をメタノール（４８ｍＬ）に溶解し、エチレンジアミン（１２ｍＬ）を加え、１７時間加熱還流した。反応液を濃縮し、ＤＭＦで３回共沸した。残渣にピリジン（３０ｍＬ）及び無水酢酸（１５ｍＬ）を順次加え、室温で１８時間撹拌した。反応溶液にメタノール（１０ｍＬ）を加え反応を停止させ、減圧濃縮した。残渣に水を加え酢酸エチルで２回抽出した。有機相を１Ｍ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水の順で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。残渣をシカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 ｎ－ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）で精製し、白色固体の化合物３７（３．４５ｇ，２工程９７％）を得た。

（化合物３８の調製）
化合物３７（３．４４ｇ，３．６８ｍｍｏｌ）をメタノール（６０ｍＬ）に溶解し、触媒量の２８％ナトリウムメトキシドナトリウム溶液を加え室温で２４時間撹拌した。反応液にＡｍｂｅｒｌｉｔｅＩＲ－１２０（Ｈ^＋ｆｏｒｍ）を加えて中和後、樹脂を濾別し、濾液を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 ｎ－ヘキサン：酢酸エチル＝２：３）で精製し、白色固体の化合物３８（３．０２ｇ，９６％）を得た。

（化合物３９の調製）
化合物３８（３．００ｇ，３．５２ｍｍｏｌ）及び化合物３（７．４１ｇ，１４．５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１５ｍＬ）に溶解し、アルゴン雰囲気下、水素化ナトリウム（３２３ｍｇ，１．８４ｍｍｏｌ）を加え０℃で１時間、室温で２０時間撹拌した。反応液に５％クエン酸水溶液（９．０ｍＬ）を加え反応を停止させた後、水を加え酢酸エチルで２回抽出した。有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水の順で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。残渣をシカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 酢酸エチル）で精製し、無色油状の化合物３９（３．９８ｇ，７４％）を得た。

（化合物４０の調製）
化合物３９（３．９８ｇ，２．６０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（６０ｍＬ）に溶解し、ジクロロメタン（５４ｍＬ）－ＴＦＡ（５．７ｍＬ）－水（０．３ｍＬの混合溶媒を加え０℃で２．５時間撹拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２４０ｍＬ）を加え１時間撹拌し反応を停止させた後、水を加えクロロホルムで２回抽出した。有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水の順で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。得られた残渣（５．２７ｇ）をメタノール（４０ｍＬ）に溶解し、触媒量の２８％ナトリウムメトキシドナトリウム溶液を加え室温で２時間撹拌した。反応液にＡｍｂｅｒｌｉｔｅＩＲ－１２０（Ｈ^＋ｆｏｒｍ）を加えて中和後、樹脂を濾別し、濾液を減圧濃縮した。残渣をシカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 酢酸エチル→クロロホルム：メタノール＝２０：１）で精製し、淡黄色油状の化合物４０（３．２６ｇ，２工程９７％）を得た。

（化合物４１の調製）
化合物４０（３．２６ｇ，２．５３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３０ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（４．２４ｍＬ，３０．３ｍｍｏｌ）及びトリルクロリド（２．８９ｇ，１５．２ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で１６時間撹拌した。反応液をクロロホルムで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液を加え抽出した。有機相を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 クロロホルム：メタノール＝５０：１）で精製し、黄色油状の化合物４１（３．４８ｇ，８６％）を得た。

（化合物４２の調製）
化合物４１（３．４５ｇ，２．１６ｍｍｏｌ）を１，４－ジオキサン（５０ｍＬ）に溶解し、Ｐｄ／Ｃ（２．８６ｇ）の１，４－ジオキサン懸濁液（１０ｍＬ）に加えた後、水（１０ｍＬ）加え、水素雰囲気下、室温にて２２時間攪拌した。固形物を濾別し、５０％１，４－ジオキサン水溶液で洗浄後、濾液と洗液を合わせて減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 クロロホルム：メタノール：水＝９：１：０．０６）で精製し、無色油状の化合物４２（２．５１ｇ，９４％）を得た。

（化合物４３の調製）
化合物４２（２．４１ｇ，１．９５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２５ｍＬ）に溶解し、アジ化ナトリウム（１．２７ｇ，１９．５ｍｍｏｌ）を加え、５０℃で２０時間撹拌した。反応液を減圧濃縮した後、得られた残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 クロロホルム：メタノール：水＝９：１：０．０６）で精製し、無色油状の化合物４３（１．７６ｇ，９２％）を得た。

（化合物４４の調製）
化合物４３（１．７５ｇ，１．７９ｍｍｏｌ）をピリジン（８．０ｍＬ）に溶解し、無水酢酸（４．０ｍＬ）を加え、室温で２６時間撹拌した。反応液にメタノール（８ｍＬ）を加え過剰な試薬を分解した後、反応液を減圧濃縮した。残渣に水を加え酢酸エチルで２回抽出した。有機相を１Ｍ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水の順で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 クロロホルム：メタノール：水＝２０：１）で精製し、無色油状の化合物４４（２．０７，ｑｕａｎｔ．）を得た。

（化合物４５の調製）
化合物４４（１．５０ｇ，１．３１ｍｍｏｌ）を２５％アセトトリル水溶液（２８ｍＬ）に溶解し、ＣＡＮ（２．１５ｇ，３．９２ｍｍｏｌ）を加え、０℃で２．５時間撹拌した。反応溶液をクロロホルムで希釈し水を加え２回分液した。有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水の順で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。残渣をシカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 クロロホルム：メタノール＝４０：１→２０：１）精製し、橙色油状の化合物４５（９００ｍｇ，６６％）を得た。

（化合物４６の調製）
化合物４５（９００ｍｇ，８６４μｍоｌ）をジクロロメタン（１８ｍＬ）に溶解し、トエリエチルアミン（７２４μＬ，５．１８ｍｍоｌ）及びＤＭＣ（４３８ｍｇ，２．５９ｍｍоｌ）を順次加え、室温で１．５時間撹拌した。反応溶液をクロロホルムで希釈し飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え５回分液した。有機相を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。残渣をシカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 クロロホルム：メタノール＝６０：１（１％トリエチルアミン入り））で精製し、橙色油状の化合物４６（６６０ｍｇ，７５％）を得た。

（化合物１２の調製）
化合物４６（１６．１ｍｇ，２７．３μｍоｌ）をメタノール（３．０ｍＬ）に溶解し、触媒量の２８％ナトリウムメトキシドナトリウム溶液を加え室温で１８時間拌した。反応液を減圧濃縮し、淡黄色油状の化合物１２を得た。

《実施例６》
本実施例では、化合物１２のアジド基に薬物を導入した。
（化合物４９の調製）
化合物４７の１００ｍＭＤＭＳＯ溶液（３５８μＬ，３８．５μｍоｌ）にトリエチルアミン（１６．１μＬ，１１６μｍоｌ）及び化合物４８の１００ｍＭＤＭＳＯ溶液（４６２μＬ，４６．２μｍоｌ）を順次加え室温で４時間撹拌した。反応液をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 クロロホルム：メタノール＝１５：１）で精製した後、得られた粗生成物（６０５ｍｇ）をＬＨ－２０（展開溶媒 メタノール）で再精製した。得られた粗生成物（４５０ｍｇ）に水を加え酢酸エチルで２回抽出した。有機相をもう一度水で洗浄した後、硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去し褐色固体の化合物４９（２８．３ｍｇ，６８％）を得た。

（化合物５０の調製）
化合物４９の１０ｍＭクロロホルム－メタノール溶液（１．９４ｍＬ，１９．４μｍоｌ）に化合物１１の１０ｍＭメタノール溶液（２４２μＬ，２．４２μｍоｌ）を加え、室温で３時間撹拌した。反応液を減圧濃縮し、残差をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 クロロホルム：メタノール＝８５：１５→クロロホルム：メタノール：水＝８：２：０．１５）で精製し、褐色固体の化合物５０（４．２ｍｇ，５７％）を得た。

（化合物５１の調製）
化合物５０（３．１ｍｇ，１．０２μｍｏｌ）を重クロロホルム（０．２ｍＬ）－重メタノール（０．２ｍＬ）混合溶媒に溶解し、２－クロロ－１，３－ジメチルイミダゾリニウムクロリド（５．２ｍｇ，３０．７μｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１０．７μＬ，７６．７μｍｏｌ）を順次加え、０℃で一晩撹拌した。反応液のＭＡＬＤＩ－ＴＯＦＭＳを測定し、化合物５１の生成を確認した。
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦＭＳ．：ＣａｌｃｄｆｏｒＣ_１４８Ｈ_１８７Ｎ_１３Ｏ_５４Ｎａｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］^＋：３０３３．２，Ｆｏｕｎｄ３０３１．６．

《実施例７》
本実施例では、末端に置換されたテトラジン基を有するＰＥＧ鎖を有する糖化合物を作製した。
（化合物５３の調製）
化合物５２（２．４６ｇ，２．３６ｍｍｏｌ）に１．０ＭＢＨ_３のＴＨＦ溶液（１７．７ｍＬ，１７．７ｍｍｏｌ）及び１．０Ｍｎ－Ｂｕ_２ＢＯＴｆのジクロロメタン溶液（３．３５ｍＬ，３．３５ｍｍｏｌ）を順次加えアルゴン雰囲気下、０℃で１時間攪拌した。反応液にトリエチルアミン（５．０ｍＬ）を加え反応を停止させた後、反応液を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 トルエン：酢酸エチル＝４：１）で精製し、白色粉末の化合物５３（２．３２ｇ，９９％）を得た。

（化合物５４の調製）
化合物５３（２．２２ｇ，２．１３ｍｍｏｌ）を１，２－ジクロロエタン（２０ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（１．７８ｍＬ，１２．８ｍｍｏｌ）及びメシルクロリド（４９５μＬ，６．３９ｍｍｏｌ）を順次加え、６０℃で２４時間撹拌した。反応液に水を加えクロロホルムで２回抽出した。有機相を飽和炭酸水素ナトリウム溶液及び飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 トルエン：酢酸エチル＝７：１）で精製し、白色粉末の化合物５４（１．２７ｇ，６２％）を得た。

（化合物５５の調製）
化合物５４（１．２７ｇ，１．１３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１３ｍＬ）に溶解し、アジ化ナトリウム（３６８ｍｇ，５．６７ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で１５時間撹拌した。反応液に水を加え酢酸エチルで２回抽出した。有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水の順で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 トルエン：酢酸エチル＝８：１）で精製し、白色粉末の化合物５５（１．１１ｇ，ｑｕａｎｔ．）を得た。

（化合物５６の調製）
化合物５５（１．１６ｇ，１．０９ｍｍｏｌ）をメタノール（１２ｍＬ）－ＴＨＦ（３．０ｍＬ）混合溶媒に溶解し、エチレンジアミン（３．０ｍＬ）を加え、１８時間加熱還流した。反応液を減圧濃縮し、ＤＭＦで３回共沸した。残渣にピリジン（４．５ｍＬ）及び無水酢酸（３．０ｍＬ）を順次加え、室温で１８時間撹拌した。反応液にメタノール（４．５ｍＬ）を加え反応を停止させ、減圧濃縮した。残渣に水を加え酢酸エチルで２回抽出した。有機相を１Ｍ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水の順で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。残渣をシカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 トルエン：酢酸エチル＝３：１）で精製し、白色固体の化合物５６（１．０８ｇ，２工程９８％）を得た。

（化合物５７の調製）
化合物５６（１９５ｍｇ，１９９μｍｏｌ）を１，４－ジオキサン（１０ｍＬ）に溶解し、Ｐｄ／Ｃ（１２８ｍｇ）の１，４－ジオキサン懸濁液（２．０ｍＬ）に加えた後、水（１０ｍＬ）及び１Ｍ塩酸（）を順次加え、水素雰囲気下、室温にて２１時間攪拌した。固形物を濾別し、５０％１，４－ジオキサン水溶液で洗浄後、濾液と洗液を合わせて減圧濃縮し化合物５７（７９．０ｍｇ）を得た。

（化合物５９の調製）
１２－ヒドロキシ－４，７，１０－トリオキサドデカン酸ｔｅｒｔ－ブチル（化合物５８）（２０４ｍｇ，０．７３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（７ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（３０５μＬ，２．１９ｍｍｏｌ）、トシルクロリド（４１９ｍｇ，２．１９ｍｍｍｏｌ）を順次加え、室温で１８時間攪拌させた。反応液をクロロホルムで希釈したのち、５％クエン酸水溶液、飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。得られた残渣をＤＭＦ（７ｍＬ）に溶解し、アジ化ナトリウム（２３３ｍｇ，３．６０ｍｍｍｏｌ）を加え６５℃で１８時間攪拌した。反応液をクロロホルムで希釈した後、水、飽和食塩水の順洗浄し、無水マグネシウムで乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒 ｎ－ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）で精製し、無色油状の化合物５９（２０９ｍｇ，９６％）を得た。

（化合物６０の調製）
化合物５９（１８５ｍｇ，０．６１ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（８ｍＬ）に溶解し、パラジウム－活性炭素エチレンジアミン複合体（１６７ｍｇ）を加え、水素雰囲気下室温で１時間攪拌した。反応液をセライトろ過し、溶媒を減圧留去したところ定量的に化合物６０を得た。

（化合物６２の調製）
化合物６１（８４．０ｍｇ，０．３９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（４ｍＬ）に溶解し、ＤＩＥＡ（８２μＬ，０．４７ｍｍｏｌ）及びＰｙＢＯＰ（２４３ｍｇ，０．４７ｍｍｏｌ）を順次加え１０分間室温で攪拌した後、化合物６０（１０７ｍｇ，０．３９ｍｍｏｌ）を加え室温で１８時間攪拌した。反応液を酢酸エチルで希釈したのち、飽和炭酸ナトリウム水溶液、水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒 ｎ－ヘキサン：酢酸エチル＝１：５）で精製し、赤色固体の化合物６２（１３２ｍｇ，７１％）を得た。

（化合物６３の調製）
化合物６２（６２．２ｍｇ，１３７μｍｏｌ）をジクロロメタン（２．０ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（０．２ｍＬ）を加え、室温で４時間撹拌した。反応液を減圧濃縮した後、トルエンを加え３回共沸した。残渣をシカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 クロロホルム：メタノール：水＝９：１：０．０６）で精製し、桃色固体の化合物６３（５４．１ｍｇ，９４％）を得た。

（化合物６４の調製）
化合物６３（５２．６ｍｇ，１２５μｍｏｌ）をジクロロメタン（３．８ｍＬ）に溶解し、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（５２．９ｍｇ，２７６μｍｏｌ）及びＨＯＳｕ（１９．５ｍｇ，１６９μｍｏｌ）を順次を加え、室温で１６時間撹拌した。反応液に水を加え酢酸エチルで２回抽出した。有機相を５％クエン酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水の順で洗浄した後、硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去し、桃色固体の化合物６４（６３．３ｍｇ，８６％（ＮＭＲ収率））を得た。

（化合物６５の調製）
化合物５７（７９．０ｍｇ，１８９μｍｏｌ）を水（０．８５ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（１３．３μＬ，９４．５μｍｏｌ）及び化合物６４（２４．４ｍｇ，４７．２μｍｏｌ）のアセトニトリル溶液（０．８ｍＬ）を順次加え、室温で２時間撹拌した。反応液に水（３ｍＬ）を加え、凍結させた後、凍結乾燥した。残渣をシカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 クロロホルム；メタノール：水＝８：２：０．１５→７：３：０．３）で精製し、桃色固体の化合物６５（２８．７ｍｇ，７８％）を得た。

（化合物６６の調製）
化合物６５（３．１ｍｇ，３．９６μｍｏｌ）を重アセトニトリル（０．２０ｍＬ）－重水（０．１０ｍＬ）混合溶媒に溶解し、２－クロロ－１，３－ジメチルイミダゾリニウムクロリド（２０．０ｍｇ，１１９μｍｏｌ）及びトリエチルアミン（４１．５μＬ，２９７μｍｏｌ）を順次加え、０℃で一晩撹拌した。反応液のＭＡＬＤＩ－ＴＯＦＭＳを測定し、化合物６６の生成を確認した。
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦＭＳ．：ＣａｌｃｄｆｏｒＣ_３３Ｈ_４７Ｎ_７Ｏ_１４Ｎａｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］^＋：７８８．３，Ｆｏｕｎｄ７８８．７．

《実施例８》
本実施例では、末端にアジド基及び置換されたテトラジン基を有するＰＥＧ鎖を有する分岐状の糖化合物を作製した。
（化合物６７の調製）
化合物５９（５５７ｍｇ，１．８３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２５ｍＬ）に溶解し、氷冷下にトリフルオロ酢酸（２．６ｍＬ，３４ｍｍｏｌ）を加え、室温で３時間撹拌した。反応液にトルエンを加えて濃縮したのち、残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 ヘキサン：酢酸エチル＝１：２）で精製し、化合物６７（３７５ｍｇ，８３％）を得た。

（化合物６８の調製）
Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯｔＢｕ塩酸塩（１２２ｍｇ，０．３６ｍｍｏｌ）及び化合物６７（８９ｍｇ，０．３６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（４ｍＬ）に溶解し、ＤＩＥＡ（１３８μＬ，０．７９ｍｍｏｌ）及びＰｙＢＯＰ（２５５ｍｇ，０．４３ｍｍｏｌ）を順次加え、室温で１８時間攪拌させた。反応液を酢酸エチルで希釈し、飽和炭酸ナトリウム水溶液、水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒 ｎ－ヘキサン：酢酸エチル＝１：３）で精製し、白色固体の化合物６８（１７２ｍｇ，９０％）を得た。

（化合物６９の調製）
化合物６８（１７０ｍｇ，０．３２ｍｍｏｌ）を４Ｍ塩化水素－１，４－ジオキサン溶液（４ｍＬ）に溶解し、室温にて４時間攪拌した。反応液を減圧濃縮した後、凍結乾燥し、無色油状の化合物６９（１２８ｍｇ，９８％）を得た。

（化合物７０の調製）
化合物６９（２７０ｍｇ，０．４３ｍｍｏｌ）及び化合物６４（１８２ｍｇ，０．４４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（１７８μＬ，１．２８ｍｍｏｌ）を加え、室温にて３時間攪拌した。反応液を減圧留去し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒 クロロホルム：メタノール：水＝１０：１：０．０６）で精製し、桃色固体の化合物７０（３４７ｍｇ，９６％）を得た。

（化合物７１の調製）
化合物７０（１０．４ｍｇ，１３．３μｍｏｌ）をアセトニトリル（０．５ｍＬ）に溶解し、ＨＯＳｕ（２．２ｍｇ，１９．１μｍｏｌ）及び１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（３．８ｍｇ，１９．８μｍｏｌ）を順次加え、室温で一晩撹拌した。反応液に更にＨＯＳｕ（１．１ｍｇ，９．６μｍｏｌ）及び１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（１．９ｍｇ，９．９μｍｏｌ）を順次追加し、室温で５時間撹拌した。反応液に化合物５７（５．０ｍｇ，１３．３μｍｏｌ）の水溶液（１５０μＬ）及びトリエチルアミン（３．７μＬ，２６．６μｍｏｌ）を順次加え室温で一晩撹拌した。反応液に凍結乾燥した後、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒 クロロホルム：メタノール＝８０：２０→７０：３０）で精製し、桃色固体の化合物７１（３．１ｍｇ，２０％）を得た。

（化合物７２の調製）
化合物７１（３．１ｍｇ，２．７２μｍｏｌ）を重アセトニトリル（０．１０ｍＬ）－重水（０．１０ｍＬ）混合溶媒に溶解し、２－クロロ－１，３－ジメチルイミダゾリニウムクロリド（１３．８ｍｇ，８１．５μｍｏｌ）及びトリエチルアミン（２８．５μＬ，２０４μｍｏｌ）を順次加え、０℃で一晩撹拌した。反応液のＭＡＬＤＩ－ＴＯＦＭＳを測定し、化合物７２の生成を確認した。
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦＭＳ．：ＣａｌｃｄｆｏｒＣ_４８Ｈ_７４Ｎ_１２Ｏ_１９Ｎａｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］^＋：１１４５．５，Ｆｏｕｎｄ１１４６．３．

《実施例９》
本実施例では、末端にアジド基を有するＰＥＧ鎖を有する糖化合物を作製した。
（化合物７４の調製）
化合物７３（５５．９ｍｇ，１９２μｍｏｌ）をジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解し、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（３９．０ｍｇ，３３９μｍｏｌ）、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（６４．７ｍｇ，３３８μｍｏｌ）を順次加え、室温で一晩撹拌した。反応液に水を加え、クロロホルムで２回抽出した。有機相を水、飽和食塩水の順で洗浄後、無水硫酸マグネシウムを加え乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去し、化合物７４（７２．４ｍｇ，９７％）を得た。

（化合物７５の調製）
化合物４３（４５．２ｍｇ，４６．１μｍｏｌ）をジオキサン（１ｍＬ）に溶解し、１０％パラジウム活性炭（２９．４７ｍｇ）の１，４－ジオキサン懸濁液（３ｍＬ）を加えたのち、水（１ｍＬ）を加えた。水素雰囲気下、室温にて一晩撹拌した。固形物を濾別し、５０％１，４－ジオキサン水溶液で洗浄後、濾液と洗液を合わせて減圧濃縮した。得られた残渣に、化合物７４（７２．４ｍｇ，１８６μｍｏｌ）の５０％アセトニトリル水溶液（１．６ｍＬ）、トリエチルアミン（５４μＬ，３９０μｍｏｌ）を加えた。室温で一晩撹拌したのち、反応液に水（２．０ｍＬ）を加え凍結乾燥した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 ＣＨＣｌ_３－ＭｅＯＨ－Ｈ_２Ｏ＝９：１：０．０６）で精製した。精製物をピリジン（３ｍＬ）及び無水酢酸（１．５ｍＬ）を加えて室温で一晩撹拌した。反応液にメタノール（４ｍＬ）を加えて反応を停止させた後、減圧濃縮した。トルエン（４ｍＬ）による共沸を５回繰り返したのち、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒 ＣＨＣｌ_３－ＭｅＯＨ－Ｈ_２Ｏ＝１５：１：０．０４）で精製し、化合物７５（３０．４ｍｇ，３工程４０％）を得た。

（化合物７６の調製）
化合物７５（８．７ｍｇ，５．３μｍｏｌ）をアセトニトリル（２ｍＬ）に溶解し、０°Ｃで水（０．５ｍＬ）及び硝酸アンモニウムセリウム（ＩＶ）（１１．２ｍｇ，２１μｍｍｏｌ）加え、１．５時間、次いで室温で２時間撹拌した。更に、反応液に硝酸アンモニウムセリウム（ＩＶ）（１０．５ｍｇ，１９μｍｍｏｌ）加え、０°Ｃで１．５時間撹拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えクロロホルムで２回抽出した。有機相を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムを加え乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 ＣＨＣｌ_３－ＭｅＯＨ－Ｈ_２Ｏ＝９：１：０．０６）で精製し、化合物７６（４．６ｍｇ，５７％）を得た。

（化合物７７の調製）
化合物７６（４．６ｍｇ，３．０μｍｏｌ）をジクロロメタン（１ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（２０μＬ，１４０μｍｍｏｌ）及び２－クロロ－１，３－ジメチルイミダゾリニウムクロリドのジクロロメタン溶液（０．２Ｍ，１８０μＬ，３６μｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応液に水を加え、クロロホルムで２回抽出した。有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水の順で洗浄後、硫酸マグネシウムを加え乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去した。残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 ＣＨＣｌ_３－ＭｅＯＨ－Ｈ_２Ｏ＝２０：１：０．２）で精製し、化合物７７（４．０ｍｇ，８９％）を得た。

（化合物７８の調製）
化合物７７（４．０ｍｇ，２．６μｍｏｌ）をメタノール（１ｍＬ）に溶解し、０°Ｃでナトリウムメトキシド（０．５ｍｏｌ／Ｌメタノール溶液，２μＬ，１μｍｏｌ）加えた後、水（５ｍＬ）加え、１時間、次いで室温で１時間撹拌した。溶媒を減圧留去したのち、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦＭＳを測定し、化合物７８の存在を確認した。

化合物７８ ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦＭＳ：［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ１３７２．４（ｃａｌｃｄ１３７２．７）．

《実施例１０》
本実施例では、末端にアジド基を有するＰＥＧ鎖を有する分岐状の糖化合物を作製した。
（化合物７９の調製）
化合物６７（３０５ｍｇ，１．２３ｍｍｏｌ）にＬ－リジンメチルエステル二塩酸塩（１０８ｍｇ，４６２μｍｏｌ）及びジクロロメタン（１．６ｍＬ）を加えた。この溶液に氷冷下、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．４５ｍＬ，３．２ｍｍｏｌ）及び１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－ベンゾトリアゾリウム３－オキシドテトラフルオロボラート（３９０ｍｇ，１．２１ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩撹拌した。反応液を濃縮したのち、残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 クロロホルム：メタノール＝６０：１）で精製した。精製物をクロロホルムに溶解し、有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄後、無水硫酸マグネシウムを加え乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去し、化合物７９（２８３ｍｇ，９８％）を得た。

（化合物８０の調製）
化合物７９（１０３ｍｇ，１６７μｍｏｌ）をメタノール（３．０ｍＬ）に溶解し、氷冷下に１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（１９４μＬ）を加え、室温で５時間撹拌した。反応液を水で抽出し、ジエチルエーテルで洗浄した。水相に１Ｍ塩酸水溶液を加え、ｐＨを１にしたのち、酢酸エチル及びクロロホルムで抽出し、有機相に無水硫酸マグネシウムを加え乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去し、化合物８０（７１．７ｍｇ，７２％）を得た。

（化合物８１の調製）
化合物８０（５２ｍｇ，８６μｍｏｌ）をジクロロメタン（０．８６ｍＬ）に溶解し、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（３６．５ｍｇ，１９０μｍｏｌ）及びＮ－ヒドロキシスクシンイミド（１３．４ｍｇ，１１６μｍｏｌ）を加え、室温で一晩撹拌した。反応液に水を加え、クロロホルムで２回抽出した。有機相を飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和食塩水の順で洗浄後、無水硫酸マグネシウムを加え乾燥させた。乾燥剤を濾別後、溶媒を減圧留去し、化合物８１（５２．３ｍｇ，８７％）を得た。

（化合物８２の調製）
化合物５６（８８．０ｍｇ，９１．２μｍｏｌ）を１，４－ジオキサン（１０．８ｍＬ）に溶解し、水酸化パラジウム（８９ｍｇ）、水（２．６４ｍＬ）、１Ｍ塩酸（１３６μＬ）の順で加え、水素雰囲気下、室温にて一晩撹拌した。固形物を濾別し、５０％１，４－ジオキサン水溶液で洗浄後、濾液と洗液を合わせて減圧濃縮した。得られた残渣と、化合物８１（５２．３ｍｇ，７４．５μｍｏｌ）を５０％アセトニトリル水溶液（０．８ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（２０μＬ，１４４μｍｏｌ）を加え、室温で５時間撹拌した。反応液に水を加え、凍結乾燥したのち残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 クロロホルム：メタノール：水＝７．５：２．５：０．３）で精製し、化合物８２（２２．７ｍｇ，３８％）を得た。

（化合物８３の調製）
化合物８２（１１．４ｍｇ，１１．８μｍｏｌ）を水（０．４８２ｍＬ）に溶解し、氷冷下で０．７５７Ｍの２－クロロ－１，３－ジメチルイミダゾリニウムクロリド水溶液（０．４８２ｍＬ，３６５μｍｏｌ）及びトリエチルアミン（２３５μＬ，１．７０ｍｍｏｌ）を加え、室温で１８時間撹拌した。反応液に水を加え、凍結乾燥したのち残渣をゲルろ過クロマトグラフィー（展開溶媒 ０．０５％トリエチルアミン水溶液）で精製し、化合物ＨＭ９を含む溶出液に０．１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（１２９μＬ，１２．９μｍｏｌ）を加えた。この溶液を凍結乾燥し、化合物８３と水酸化ナトリウム、そしてトリエチルアミンの混合物を２２．０ｍｇ得た。１Ｈ－ＮＭＲスペクトルからオキサゾリンの構造を確認し、その積分値から化合物８３の量を算出し、化合物ＨＭ９（９．２ｍｇ，８３％）を得た。

化合物８３ ^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）：δ＝６．１４（ｄ，Ｊ＝６．１４Ｈｚ，１Ｈ）．

《実施例１１》
本実施例では、末端に３つのアジド基を有する糖化合物を作製した。
（化合物８４の調製）
化合物３５（７９７．４ｍｇ，８５２μｍｏｌ）をメタノール（６．８０ｍＬ）に溶解し、室温でエチレンジアミン（１．７０ｍＬ）を加えた。反応液を加熱還流下で１７時間撹拌し、反応液をジメチルホルムアミドで希釈し、溶媒を減圧留去した。ジメチルホルムアミドで３回共沸し、残渣を真空乾燥することで、粗生成物を得た。この粗生成物をメタノール（６．８２ｍＬ）と精製水（１．７０ｍＬ）に溶解し，室温で炭酸水素ナトリウム（２１８．３ｍｇ，２．６０ｍｍｏｌ）と硫酸化銅・五水和物（４５．２ｍｇ，１８１μｍｏｌ），イミダゾール－１－スルホニルアジド塩酸塩（２７１．３ｍｇ，１．２９ｍｍｏｌ），ジクロロメタン（８．５２ｍＬ）を順次加えた．反応液を室温で１時間半撹拌し、硫酸化銅・五水和物（４４．４ｍｇ，１７８μｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で１８時間撹拌し、炭酸水素ナトリウム（１５２．３ｍｇ，１．８１ｍｍｏｌ）と，イミダゾール－１－スルホニルアジド塩酸塩（３５９．３ｍｇ，１．７１ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で３時間撹拌し、反応液をクロロホルムで希釈し、１Ｍ塩酸水溶液を加え、クロロホルムで３回抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、クロロホルムで３回抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ濾別後、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 トルエン：酢酸エチル＝７：１）で精製し、無色固体の化合物８４（６４１．８ｍｇ，９１％）を得た。

化合物８４ ^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：７．４６（ｄｄ，Ｊ＝７．２，１．７Ｈｚ，２Ｈ），７．４２－７．２７（ｍ，１８Ｈ），７．０６－７．０２（ｍ，２Ｈ），６．８５－６．８１（ｍ，２Ｈ），５．４５（ｓ，１Ｈ），５．０８（ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１Ｈ），４．９３（ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１Ｈ），４．７２－４．６７（ｍ，３Ｈ），４．６６（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．６１（ｓ，１Ｈ），４．４７（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．０９（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，４．８Ｈｚ，１Ｈ），４．０６（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ），３．７６－３．７１（ｍ，２Ｈ），３．７０－３．６５（ｍ，３Ｈ），３．５７（ｔｄ，Ｊ＝９．３，３．２Ｈｚ，１Ｈ），３．４９（ｔ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，１Ｈ），３．４７－３．４４（ｍ，１Ｈ），３．４１（ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），３．１０（ｔｄ，Ｊ＝９．６，４．８Ｈｚ，１Ｈ），２．３３（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）．
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦＭＳ（ＡＸＩＭＡ－ＴＯＦ^２）ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］^＋ｃａｌｃｄｆｏｒＣ_４７Ｈ_４９Ｎ_３Ｏ_１１Ｎａ，８５４．３，ｆｏｕｎｄ８５４．２．

（化合物８５の調製）
化合物８４（４６０．１ｍｇ，５５３．４μｍｏｌ）をジクロロメタン（４．６１ｍＬ）に溶解し、室温で精製水（４６１μＬ）を加え、氷冷下でトリフルオロ酢酸（４６１μＬ）を加えた。反応液を室温で２０時間撹拌し、反応液をクロロホルムで希釈し、飽和炭酸ナトリウム水溶液を加え、クロロホルムで３回抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ濾別後、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝１：２）で精製し、無色固体の化合物８５（３７９．８ｍｇ，９２％）を得た。

化合物８５ ^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：７．３８－７．２７（ｍ，１５Ｈ），７．０６－７．０１（ｍ，２Ｈ），６．８５－６．８０（ｍ，２Ｈ），５．０６（ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１Ｈ），４．９７（ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１Ｈ），４．７１（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），４．６９（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．５７（ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１Ｈ），４．５２（ｓ，１Ｈ），４．４９（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．００（ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ），３．７６（ｄｄ，Ｊ＝１１．０，２．１Ｈｚ，１Ｈ），３．７１－３．６３（ｍ，３Ｈ），３．６１（ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，１Ｈ），３．５５－３．４９（ｍ，２Ｈ），３．４３－３．３６（ｍ，２Ｈ），３．２２（ｔｄ，Ｊ＝８．９，２．７Ｈｚ，１Ｈ），３．０５－３．０２（ｍ，１Ｈ），２．３７（ｓ，１Ｈ），２．３５（ｓ，１Ｈ），２．２５（ｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，１Ｈ）．
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦＭＳ（ＡＸＩＭＡ－ＴＯＦ^２）ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］^＋ｃａｌｃｄｆｏｒＣ_４０Ｈ_４５Ｎ_３Ｏ_１１Ｎａ，７６６．３，ｆｏｕｎｄ７６５．５．

（化合物８６の調製）
化合物８５（３７９．８ｍｇ，５１１μｍｏｌ）と化合物３（１．５７６ｇ，３．０７ｍｍｏｌ）をトルエンで３回共沸後、真空乾燥した後、ジメチルホルムアミド（５．１０ｍＬ）に溶解し、水素化ナトリウム（３７０．１ｍｇ，８．４９ｍｍｏｌ，４５％ｏｉｌｃｏｍｐｌｅｘ）を加えた。反応液を室温で２０時間半撹拌し，反応液を酢酸エチルで希釈し，１Ｍ塩酸水溶液を加え，酢酸エチルで３回抽出した．有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ濾別後、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 クロロホルム：メタノール＝５０：１）で粗精製した。得られた混合物をゲルろ過クロマトグラフィー（展開溶媒 メタノール）で精製し、無色油状の化合物８６（７７５．８ｍｇ，８６％）を得た。

化合物８６ ^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：７．４０－７．２０（ｍ，２１Ｈ），７．０４－７．０１（ｍ，２Ｈ），６．８８－６．８４（ｍ，６Ｈ），６．８２－６．７９（ｍ，２Ｈ），５．１５（ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１Ｈ），４．８４（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．７６（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．６７（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），４．６７（ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１Ｈ），４．６０（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．５０－４．４７（ｍ，７Ｈ），４．４５（ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．９７（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），３．９４－３．９０（ｍ，１Ｈ），３．８１－３．７６（ｍ，１０Ｈ），３．７３－３．５７（ｍ，５６Ｈ），３．５６－３．５２（ｍ，４Ｈ），３．５２－３．４９（ｍ，４Ｈ），３．４８－３．４２（ｍ，３Ｈ），３．４２－３．３９（ｍ，３Ｈ），３．２２（ｄｄｄ，Ｊ＝９．６，６．２，１．４Ｈｚ，１Ｈ），３．１３（ｄｄ，Ｊ＝９．６，２．７Ｈｚ，１Ｈ）．
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦＭＳ（ＡＸＩＭＡ－ＴＯＦ^２）ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］^＋ｃａｌｃｄｆｏｒＣ_９４Ｈ_１２９Ｎ_３Ｏ_２９Ｎａ，１７８６．９，ｆｏｕｎｄ１７８６．３．

（化合物８８の調製）
亜鉛粉末を水に懸濁させ，３０分超音波洗浄したのち，２％硫酸銅水溶液を加えて撹拌した．沈殿を濾取した後，風乾させてＺｎ－Ｃｕｃｏｍｐｌｅｘを調製した．化合物８６（６３５．０ｍｇ，３５９．８μｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１８．０ｍＬ）と酢酸（１８．０ｍＬ）に溶解し，Ｚｎ－Ｃｕｃｏｍｐｌｅｘ（１．１９ｇ）を添加した。反応液を室温で２時間撹拌し、トルエンで希釈し、固体を濾別後、溶媒を減圧留去し、真空乾燥することで残渣を得た。この残渣を無水酢酸（４．０ｍＬ）とピリジン（４．０ｍＬ）に溶解した。反応液を室温で１８時間撹拌した後、トルエンで希釈し、溶媒を減圧留去した。残渣をトルエンで３回共沸し、クロロホルムに溶解した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、クロロホルムで３回抽出した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ濾別後、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 クロロホルム：メタノール＝５０：１）で精製し、粗精製物８７を得た。

粗生成物８７をジクロロメタン（５．５ｍＬ）に溶解し、１，３－ジメトキシベンゼン（１０７．５μＬ，８３２μｍｏｌ）を室温で加え，氷冷下でトリフルオロメタンスルホン酸（３６．７μＬ，４１６μｍｏｌ）を加えた．反応液を室温で１時間撹拌した後，クロロホルムで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、クロロホルムで３回抽出した．有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ濾別後，溶媒を減圧留去した．残渣を真空乾燥することで粗生成物を得た。この粗生成物をジクロロメタン（２．７７ｍＬ）とメタノール（２．７７ｍＬ）に溶解し、２８％ナトリウムメトキシド－メタノール溶液（５０μＬ）を室温で加えた．反応液を室温で６時間撹拌した後，クロロホルムで希釈し、ＡｍｂｅｒｌｉｔｅＩＲ－１２０（Ｈ^＋ｆｏｒｍ）を加えて中和後，樹脂を濾別した．濾液を減圧濃縮し，残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 クロロホルム：メタノール＝２０：１）で精製し、無色油状の化合物８８（３２２．６ｍｇ，４段階６３％）を得た。

化合物８８ ^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：７．３８（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），７．３３－７．２１（ｍ，１３Ｈ），６．９７（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），６．８０（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），６．５０（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），５．３４（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），４．８６（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．７８（ｓ，１Ｈ），４．７６（ｓ，１Ｈ），４．７１（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．５０（ｓ，１Ｈ），４．４６（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．４１（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．１７（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），４．０７（ｄｄ，Ｊ＝１４．１，５．８Ｈｚ，１Ｈ），３．９８－３．９３（ｍ，２Ｈ），３．９１－３．８４（ｍ，２Ｈ），３．８３（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），３．７６（ｓ，４Ｈ），３．７４－３．４７（ｍ，５９Ｈ），３．３０－３．２４（ｍ，２Ｈ），２．８８（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），２．８０（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），１．７８（ｂｒｓ，６Ｈ）．
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦＭＳ（ＡＸＩＭＡ－ＴＯＦ^２）ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］^＋ｃａｌｃｄｆｏｒＣ_７２Ｈ_１０９ＮＯ_２７Ｎａ，１４４２．７，ｆｏｕｎｄ１４４３．３．

（化合物８９の調製）
化合物８８（３２２．６ｍｇ，２２７μｍｏｌ）をジクロロメタン（４．５４ｍＬ）に溶解し、室温でトリエチルアミン（２８６μＬ，２．０５ｍｍｏｌ）と塩化パラトルエンスルホニル（３５８．４ｍｇ，２．１０ｍｍｏｌ）を順次加えた。反応液を室温で１時間撹拌し、４－ジメチルアミノピリジン（８．４ｍｇ，６８．８μｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で１８時間撹拌した後，クロロホルムで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、クロロホルムで３回抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ濾別後、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 クロロホルム：メタノール＝５０：１）で精製し、無色油状の化合物８９（４０３．４ｍｇ，９４％）を得た。

化合物８９ ^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：７．８２－７．７６（ｍ，６Ｈ），７．４０－７．１９（ｍ，２１Ｈ），６．９７（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），６．７９（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，２Ｈ），６．３９（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），５．３３（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），４．８６（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．７９－４．７５（ｍ，２Ｈ），４．７１（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．４９（ｓ，１Ｈ），４．４６（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．４０（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．１７－４．１１（ｍ，８Ｈ），４．０７（ｄｄ，Ｊ＝１３．４，５．８Ｈｚ，１Ｈ），３．９７－３．９２（ｍ，２Ｈ），３．９０－３．８３（ｍ，２Ｈ），３．８２（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），３．７６（ｓ，３Ｈ），３．７４－３．４６（ｍ，６５Ｈ），３．２９－３．２２（ｍ，２Ｈ），１．８０（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，３Ｈ）．
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦＭＳ（ＡＸＩＭＡ－ＴＯＦ^２）ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］^＋ｃａｌｃｄｆｏｒＣ_９３Ｈ_１２７ＮＯ_３３Ｓ_３Ｎａ，１９０４．７，ｆｏｕｎｄ１９０４．９．

（化合物９０の調製）
化合物８９（４０３．４ｍｇ，２１４μｍｏｌ）を１，４－ジオキサン（１８．４ｍＬ）と精製水（３．０５ｍＬ）に溶解し，室温で１０％Ｐｄ／Ｃ（４８２．２ｍｇ，２０４μｍｏｌ）を加えた。反応液を水素雰囲気下、室温で２１時間半撹拌した後、（クロロホルム：メタノール＝１：１）混合溶液で希釈した。固形物をセライトで濾別し、（クロロホルム：メタノール＝１：１）混合溶液で洗浄した。濾液と洗液を合わせて減圧濃縮した．残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 クロロホルム：メタノール＝１０：１）で精製し、無色固体の化合物９０（２６５．９ｍｇ，７７％）を得た。

化合物９０ ^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：７．８２－７．７５（ｍ，６Ｈ），７．３７－７．３２（ｍ，６Ｈ），６．９４－６．９０（ｍ，２Ｈ），６．８０－６．７６（ｍ，２Ｈ），６．２７（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），５．１９（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），４．８０（ｓ，１Ｈ），４．５８（ｓ，１Ｈ），４．１８－４．１０（ｍ，７Ｈ），４．０６（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），３．９４（ｄｔ，Ｊ＝１１．０，４．５Ｈｚ，１Ｈ），３．９１－３．８６（ｍ，１Ｈ），３．８２－３．４３（ｍ，６３Ｈ），３．３９（ｄｄ，Ｊ＝８．２，２．７Ｈｚ，１Ｈ），２．４５（ｓ，３Ｈ），２．４４（ｓ，６Ｈ），２．０５（ｂｒｓ，３Ｈ），１．９９（ｓ，３Ｈ）．
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦＭＳ（ＡＸＩＭＡ－ＴＯＦ^２）ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］^＋ｃａｌｃｄｆｏｒＣ_７２Ｈ_１０９ＮＯ_３３Ｓ_３Ｎａ，１６３４．６，ｆｏｕｎｄ１６３４．４．

（化合物９１の調製）
化合物９０（２６５．９ｍｇ，１６５μｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（３．３０ｍＬ）に溶解し、室温でアジ化ナトリウム（１７１．４ｍｇ，２．６４ｍｍｏｌ）を加えた．反応液を５０°Ｃで２０時間撹拌した後，トルエンとメタノールで希釈し、溶媒を減圧留去した。残渣をトルエンで２回共沸し、真空乾燥した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 クロロホルム：メタノール＝１０：１）で精製し、無色固体の化合物９１（１７６．６ｍｇ，８７％）を得た。

化合物９１ ^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：６．９５－６．９１（ｍ，２Ｈ），６．８２－６．７８（ｍ，２Ｈ），６．２３（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），５．２４（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），４．７９（ｂｒｓ，１Ｈ），４．５８（ｓ，１Ｈ），４．１５－４．０８（ｍ，２Ｈ），３．９４（ｄｔ，Ｊ＝１１．０，４．８Ｈｚ，１Ｈ），３．９１－３．８７（ｍ，１Ｈ），３．８３－３．５５（ｍ，６０Ｈ），３．５０－３．４６（ｍ，２Ｈ），３．４１－３．３４（ｍ，７Ｈ），３．２９（ｓ，１Ｈ），２．２９（ｄｄ，Ｊ＝８．６，５．２Ｈｚ，１Ｈ），２．０１（ｂｒｓ，５Ｈ）．
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦＭＳ（ＡＸＩＭＡ－ＴＯＦ^２）ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］^＋ｃａｌｃｄｆｏｒＣ_５１Ｈ_８８Ｎ_１０Ｏ_２４Ｎａ，１２４７．６，ｆｏｕｎｄ１２４７．３．

（化合物９２の調製）
化合物９１（１７６．６ｍｇ，１４４μｍｏｌ）を無水酢酸（１．５０ｍＬ）とピリジン（１．５０ｍＬ）に溶解した。反応液を室温で１８時間撹拌した後、クロロホルムで希釈し，溶媒を減圧留去した。残渣をトルエンで３回共沸し、真空乾燥した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝２０：１）で精製し、無色油状の化合物９２（１９１．９ｍｇ，９９％）を得た。

化合物９２ ^１Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：６．９５－６．８９（ｍ，２Ｈ），６．８２－６．７６（ｍ，２Ｈ），５．８４（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），５．４０（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），５．２１（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），４．９５（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．４８（ｓ，１Ｈ），４．３６（ｄｄ，Ｊ＝１２．４，２．７Ｈｚ，１Ｈ），４．２８（ｄｄ，Ｊ＝１２．０，５．２Ｈｚ，１Ｈ），４．２１（ｄｄ，Ｊ＝１７．５，９．３Ｈｚ，１Ｈ），３．９７（ｄｔ，Ｊ＝１１．０，４．５Ｈｚ，１Ｈ），３．９１（ｔ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），３．８２－３．３２（ｍ，６８Ｈ），２．１３（ｓ，３Ｈ），２．１１（ｓ，３Ｈ），２．０８（ｓ，３Ｈ），１．９７（ｓ，３Ｈ）．
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦＭＳ（ＡＸＩＭＡ－ＴＯＦ^２）ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］^＋ｃａｌｃｄｆｏｒＣ_５７Ｈ_９４Ｎ_１０Ｏ_２７Ｎａ，１３７３．６，ｆｏｕｎｄ１３７３．４．

（化合物９３の調製）
化合物９２（１．２ｍｇ，０．８９μｍｏｌ）をアセトニトリル（１４２μＬ）と精製水（３５．５μＬ）に溶解し，氷冷下でヘキサニトラトセリウム（ＩＶ）酸アンモニウム（２．３ｍｇ，４．２０μｍｏｌ）を加えた、反応液を０°Ｃで１時間半撹拌した後、クロロホルムで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え，クロロホルムで３回抽出した．有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ濾別後，溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒 クロロホルム：メタノール＝２０：１）で精製し、無色油状の化合物９３（０．６ｍｇ，５４％）を得た。

化合物９３ ^１Ｈ ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：６．１０（ｓ，１Ｈ），５．９０（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），５．４０－５．３７（ｍ，２Ｈ），５．３４（ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），５．１７（ｔ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，１Ｈ），４．５５（ｓ，１Ｈ），４．３７－４．１４（ｍ，８Ｈ），４．００－３．８４（ｍ，５Ｈ），３．８３－３．３４（ｍ，５６Ｈ），２．１１（ｓ，３Ｈ），２．１０（ｓ，３Ｈ），２．０９（ｓ，３Ｈ），１．９６（ｓ，３Ｈ）．
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦＭＳ（ＡＸＩＭＡ－ＴＯＦ^２）ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］^＋ｃａｌｃｄｆｏｒＣ_５０Ｈ_８８Ｎ_１０Ｏ_２６Ｎａ，１２６７．６，ｆｏｕｎｄ１２６７．７．

（化合物９４の調製）
化合物９３（０．６ｍｇ，０．４８２μｍｏｌ）をジクロロメタン（２３１μＬ）に溶解し、室温でトリエチルアミン（０．４μＬ，２．８９μｍｏｌ）と，ジクロロメタン（１０μＬ）に溶解した２－クロロ－１，３－ジメチルイミダゾリニウムクロリド（０．２４ｍｇ，１．４５μｍｏｌ）を順次加えた。反応液を室温で１時間半撹拌した後、クロロホルムで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、クロロホルムで３回抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ濾別後、溶媒を減圧留去した。残渣をゲル濾過クロマトグラフィー（展開溶媒 クロロホルム：メタノール＝１：１、＋１％トリエチルアミン）で精製し、粗精製物を得た。粗精製物をメタノール（２４１μＬ）に溶解し、室温で２８％ナトリウムメトキシド－メタノール溶液（５．０μＬ）を加えた。反応液を室温で２４時間撹拌した後、メタノールで希釈し、反応液の質量分析を行い化合物９４の生成を確認した。

化合物９４ ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦＭＳ（ＡＸＩＭＡ－ＴＯＦ^２）ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］^＋ｃａｌｃｄｆｏｒＣ_４４Ｈ_８０Ｎ_１０Ｏ_２２Ｎａ，１１２３．５，ｆｏｕｎｄ１１２２．９．

《実施例１２》
本実施例では、薬物を結合したリツキシマブを調製した。
（薬物搭載リツキシマブの調製）
実施例２で得られた反応生成物の水溶液（７．０μｇ／μＬ）を３０．０μＬに１．０ＭのｐＨ８．０リン酸緩衝液（１５．０μＬ）、水（１６５μＬ）、ＤＭＳＯ（７６μＬ）及び化合物５２（薬物部位がモノメチルオーリスタチンＥ［ＭＭＡＥ］）のＤＭＳＯ水溶液（５ｍＭ）を１４．０μＬを加え、遮光して室温で２時間反応させた。質量分析による解析の結果、重鎖の２か所のアジド基に対して２箇所とも薬物が導入された生成物は９５％、２か所のうちどちらか１箇所にのみ薬物が導入された生成物は３％、未反応物が２％であった。反応液の一部（３．３μＬ）を取り出し１０％ポリアクリルアミドゲルを用いたＳＤＳ－ＰＡＧＥ（クーマシーブリリアントブルー染色）で確認したところ、原料中のアジドＰＥＧ化された重鎖に相当するバンドがクリック反応により高分子側にシフトし、実施例２で得られた反応生成物に薬物が導入されたことが確認された（図６）。

《実施例１３》
本実施例では、実施例１２で得られたリツキシマブの細胞障害の作用を検討した。
（薬物搭載リツキシマブの細胞殺傷効果の確認）
培養細胞としてＣＤ２０陽性のＲａｍｏｓ（ＲＡ１）細胞及びＣＤ２０陰性のＪｕｒｋａｔ細胞を終濃度１０％のＳｕｐｅｒＬｏｗＩｇＧＦＢＳ（Ｃｙｔｉｖａ社）及びＺｅｌｌＳｈｉｅｌｄ（ＭｉｎｅｒｖａＢｉｏｌａｂｓ社）含有ＲＰＭＩ－１６４０培地（富士フイルム和光純薬社）を用いて培養し準備した。９６ウェルマイクロプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ社）に対し、培地に懸濁したＲａｍｏｓ（ＲＡ１）細胞又はＪｕｒｋａｔ細胞を１ウェルあたり１．０ｘ１０^４ｃｅｌｌｓ／９０μＬ分播種した。その際、ブランクとなる培地のみのウェルも準備した。そして３７℃、５％ＣＯ_２のインキュベーター内で一晩培養した。翌日コントロールであるＰＢＳ、リツキシマブ、実施例２で得られたアジドＰＥＧ化リツキシマブ、又は実施例１２で得られたＭＭＡＥ搭載リツキシマブをそれぞれ１０μＬ分各ウェルに添加し、３７℃、５％ＣＯ_２のインキュベーター内で７２時間静置した。抗体サンプルはＰＢＳで希釈し、培養液中で終濃度が５０、５００又は５０００ｎｇ／ｍＬになるように添加した。７２時間の静置後にＣｅｌｌＣｏｕｎｔｉｎｇＫｉｔ－８（同仁化学研究所社）を１０μＬ添加し、３７℃、５％ＣＯ_２のインキュベーター内で更に２時間静置した。２時間後マイクロプレートリーダーＳＨ－１３００Ｌａｂ（コロナ電気社）を用い、波長４５０ｎｍの吸光度を測定した。各サンプルの各濃度に関してｎ＝３で測定し、ブランクの吸光度を差し引いた後の吸光度の平均値を算出した。結果は横軸を対数表示でサンプル濃度、縦軸を吸光度とした片対数グラフで示す（図７）。ＣＤ２０陽性のＲａｍｏｓ（ＲＡ１）細胞に対して、ＭＭＡＥ搭載リツキシマブでは５００及び５０００ｎｇ／ｍＬの抗体濃度において吸光度が低下しており、細胞が殺傷されていることが確認された。一方、ＣＤ２０陰性のＪｕｒｋａｔ細胞に対しては各抗体濃度において吸光度はほぼ変わらず、明確な細胞殺傷効果は見られなかった。

《実施例１４》
本実施例では、トラスツズマブに化合物１２を導入した。
（トラスツズマブ糖鎖結合部位への化合物１２の転移反応（ワンポット反応。抗体アクセプターの事前調製が不要な、実施例２の別法））
中外製薬株式会社製造のトラスツズマブ（８０μｇ）、化合物１２（５４ｎｍｏｌ）、並びに、大腸菌を宿主として発現させ精製した酵素Ｈａｌｏ－Ｅｎｄｏ－Ｓ野生型（８μｇ）を５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）中に加え、総量２０μＬとして３７℃で３時間まで静置することで実施した。０．５、１、２及び３時間で反応液の一部を取り出し１０％ポリアクリルアミドゲルを用いたＳＤＳ－ＰＡＧＥ（クーマシーブリリアントブルー染色）で確認したところ、０．５時間から化合物１２の転移により高分子側にシフトした重鎖バンドが確認された（図８）。３時間の反応でトラスツズマブの糖鎖結合部位への化合物１２の転移生成物としてＦｕｌｌｙアジドＰＥＧ化トラスツズマブとＨｅｍｉアジドＰＥＧ化トラスツズマブの７６：２４の混合物が得られた（図９）。質量分析による解析の結果、重鎖の糖鎖部位への化合物１２の転移収率は８７．４％であった。

本発明の糖化合物は、抗体薬物複合体の作成において、抗体の劣化を防ぎ、薬物を効率的に抗体に結合させることができる。

Claims (7)

1. 下記一般式（１）で表されるポリエチレングリコール鎖を有する糖化合物。
   

   

   （式（１）中、
   Ｘはそれぞれ独立して、単結合、酸素原子、－ＮＨ－、－ＣＯＨＮ－、－ＣＯＯ－、又は式（５）又は（６）：
   

   

   

   （式中、Ｒ^１は、炭素数１～６の３価の分岐炭化水素基であり、Ｒ^２及びＲ^３は、それぞれ独立して炭素数１～３のアルキレン基である）で表される基
   であり、
   Ｙ１～３はいずれか１つ以上は存在し、それぞれ独立して、ＰＥＧ鎖、置換されたＰＥＧ鎖、又は酸素原子、－ＮＨ－、－ＣＯＨＮ－、又は－ＣＯＯ－を主鎖に含むＰＥＧ鎖であり、ＰＥＧ鎖の構造は直鎖構造又は分岐構造であり、分岐構造の場合は、分岐数は２～１０であり、
   Ｚはそれぞれ独立して、ヒドロキシ基、メトキシ基、アジド基、又は場合により置換されることのあるテトラジン基であり、少なくとも１つ以上のＺは、アジド基又は場合により置換されることのあるテトラジン基であり、
   Ｙ１～３のいずれかが存在しない場合、Ｚは水素そしてＸは酸素であり、
   Ｘが前記式（５）又は（６）で表される基の場合、Ｙ１～３は分岐鎖のＲ^２及びＲ^３にそれぞれ結合しており、
   ＰＥＧ鎖が分岐構造の場合、それぞれの分岐鎖にＺが結合している。）
2. 下記一般式（２）で表される、請求項１に記載のポリエチレングリコール鎖を有する糖化合物。
   

   

   （式（２）中、ｌ及びｎは、それぞれ独立して２から１０の整数を表す。）
3. 下記式
   

   

   

   

   

   

   

   

   からなる群から選択される式で表される、請求項１に記載のポリエチレングリコール鎖を有する糖化合物。
4. 請求項１～３のいずれか一項に記載のポリエチレングリコール鎖を有する糖化合物から誘導される下記式（７）：
   

   

   （式中、Ｘ、Ｙ１～３、及びＺは前記の通りであり、ＲはＬ－フコース又は水素原子である）
   で表されるポリエチレングリコール鎖を有する糖化合物基を、Ｆｃ領域のアスパラギン残基の側鎖の糖結合部位に有する、修飾された免疫グロブリン抗体。
5. 前記免疫グロブリン抗体が免疫グロブリンＧ抗体であり、Ｆｃ領域のアスパラギン残基が、Ｆｃ領域の２９７番目のアスパラギン残基である、下記一般式（３）で表される、請求項４に記載の修飾された免疫グロブリン抗体。
   

   

   （式中、式中、Ｘ、Ｙ１～３、及びＺは前記の通りであり、ＲはＬ－フコース又は水素原子である。）
6. 前記ポリエチレングリコール鎖を有する糖化合物が、請求項２に記載の糖化合物である、下記一般式（４）で表される請求項５に記載の修飾された免疫グロブリン抗体。
   

   

   （式（４）中、ＲはＬ－フコース又は水素を示す。ｌとｎは２から１０の整数を表す。）
7. 請求項１～３に記載の糖化合物を含む、抗体と薬物との複合体を形成させる剤。

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