TW202330608A - 吡咯并苯并二氮雜卓類衍生物及其偶聯物、其製備方法及其應用 - Google Patents

吡咯并苯并二氮雜卓類衍生物及其偶聯物、其製備方法及其應用 Download PDF

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洪敏�
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Abstract

本揭露關於吡咯并苯并二氮雜卓類衍生物及其偶聯物、其製備方法及其應用。具體而言，本揭露關於一種式(DL)的化合物及其抗體-藥物偶聯物，含有其的醫藥組成物，以及其在製備治療癌症的藥物中的用途。其中通式(DL)中的各基團如說明書中所定義。

Description

吡咯并苯并二氮雜卓類衍生物及其偶聯物、其製備方法及其應用
本揭露關於一類吡咯并苯并二氮雜卓類衍生物，其抗體-藥物偶聯物，及其醫藥用途。
吡咯并苯并二氮雜卓(PBDs)是一類序列選擇性DNA小溝結合劑，可以阻止DNA與轉錄因子的結合，引起細胞複製停滯，最終導致細胞死亡。其發揮作用不依賴細胞的複製週期，引起的DNA損傷較難修復，表現出較大的細胞毒性。PBD單體的第一個例子，天然抗腫瘤抗生素蒽黴素(Anthramycin)是在20世紀60年代被發現的。
當PBD形成二聚體結構(PBD二聚體)時可極大提高細胞毒性。它用於抗體藥物偶聯物中的報導有很多(WO2014057074，WO2014057119，WO2015052321，WO2016166307，WO2017004026，WO2019046859，WO2019065964等)。然而，更安全、更有效的PBD ADCs仍然在臨床上有著急切的需求。
本揭露提供了一種吡咯并苯并二氮雜卓類衍生物及其抗體-藥物偶聯物。
本揭露提供一種抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其如下式結構所示：
Figure 111137361-A0202-12-0002-469
其中，Pc為抗體，該抗體的糖鏈可視需要地被重構；
L為連接子；Pc藉由其胺基酸或糖鏈與L結合，
y為約1至約10的載藥量；
D如式(D)所示：
Figure 111137361-A0202-12-0002-470
其中，
R1為H、側氧基、鹵素或烷基；
R2為H、烷基或
Figure 111137361-A0202-12-0002-471
，W為H、-C(O)Rt或-C(O)NH-Rt，G為葡 萄糖醛酸苷基或半乳糖苷基；Rt為烷基或烷氧基烷基；
R3為H或烷基；
R4為H或烷基；
R5為H、鹵素或烷基；
或者R3和R4與其所連接的原子一起成環，或R4和R5與其所連接的原子一起成環；
R6為H或烷基；
R7為烷基或環烷基；或者R6和R7與其所連接的原子一起成環；
R8為烷基或環烷基；
Rx為H或羥基；
X為亞(伸)烷基或-(CH2)m-X1-(CH2)n-；
X1為氮原子、氧原子、硫原子、環烷基、雜環基、雜芳基或芳基；該環烷基、雜環基、雜芳基或芳基視需要被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自胺基、羥基、羥烷基、烷基和烷氧基；
Y為鍵、氮原子、氧原子或硫原子；
A為烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，該環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視需要被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、羥基、羥烷基、烷基、烷氧基、-C(O)R9、環烷基、環烷基烷基、鹵烷基、芳基和雜環基；
R9為H、烷基和羥烷基；
m為1、2或3；n為1、2或3；
條件是當X為亞(伸)烷基時，1)R1為側氧基，或2)Rx為H，或3)R4和R5與其所連接的原子一起成環，或4)R6和R7與其所連接的原子一起成 環，或5)R7和/或R8為環烷基；或6)A不是烷基。
在一些實施方案中，前述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其如下式結構所示：
Figure 111137361-A0202-12-0004-473
其中，Pc為抗體，該抗體的糖鏈可視需要地被重構；
L為連接子；Pc藉由其胺基酸或糖鏈與L結合，
y為約1至約10的載藥量；
D如式(D)所示：
Figure 111137361-A0202-12-0004-472
其中，
R1為H、側氧基、鹵素或烷基；
R2為H、烷基或
Figure 111137361-A0202-12-0004-474
，W為H、-C(O)Rt或-C(O)NH-Rt，G為葡 萄糖醛酸苷基或半乳糖苷基；Rt為烷基或烷氧基烷基；
R3為H或烷基；
R4為H或烷基；
R5為H、鹵素或烷基；
或者R3和R4與其所連接的原子一起成環，或R4和R5與其所連接的原子一起成環；
R6為H或烷基；
R7為烷基或環烷基；或者R6和R7與其所連接的原子一起成環；
R8為烷基或環烷基；
Rx為H或羥基；
X為亞(伸)烷基或-(CH2)m-X1-(CH2)n-；
X1為氮原子、氧原子、硫原子、環烷基、雜環基、雜芳基或芳基；該環烷基、雜環基、雜芳基或芳基視需要被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自胺基、羥基、羥烷基、烷基和烷氧基；
Y為鍵、氮原子、氧原子或硫原子；
A為烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，該環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視需要被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、羥基、羥烷基、烷基、烷氧基、-C(O)R9、環烷基、芳基和雜環基；
R9為H、烷基和羥烷基；
m為1、2或3；n為1、2或3；
條件是當X為亞(伸)烷基時，1)R1為側氧基，或2)Rx為H，或3)R4和R5與其所連接的原子一起成環，或4)R6和R7與其所連接的原子一起成環，或5)R7和/或R8為環烷基；或6)A不是烷基。
在一些實施方案中，前述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其中該R1為H或側氧基，較佳地，R1為H。
在一些實施方案中，前述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其中該R2為H或C1-6烷基，較佳地，R2為H。
在一些實施方案中，前述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其中該R2如以下結構所示：
Figure 111137361-A0202-12-0006-475
W為H或-C(O)NH-R，G為葡萄糖醛酸苷基；Rt為C1-6烷基或C1-6烷氧基C1-6烷基。
在一些實施方案中，前述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其中該Rx為羥基。
在一些實施方案中，前述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其中，
R1為H或烷基；較佳地，R1為H或C1-6烷基；更佳地，R1為H；
R3和R4與其所連接的原子一起成環；較佳地，R3和R4與其所連接的原子一起形成3員環烷基(3員碳環)；
R5為H；R6為H；
R7是烷基；較佳地，R7為C1-6烷基；更佳地，R7為甲基；
R8是烷基；較佳地，R8為C1-6烷基；更佳地，R8為甲基；
X為亞(伸)烷基；較佳地，X為C1-12亞(伸)烷基；更佳地，X為亞(伸)戊基；
Y選自鍵、氮原子、氧原子或硫原子；較佳地，Y為鍵或硫原子；更佳地，Y為鍵；
A選自環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，該環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視需要被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、羥基、羥烷基、烷基、烷氧基、-C(O)R9、環烷基、環烷基烷基、鹵烷基、芳基和雜環基；較佳地，A選自C3-6環烷基、5至6員雜環基、苯基或5至6員雜芳基，該環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視需要被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自C1-6羥烷基、C1-6烷基、C3-6環烷基C1-6烷基、鹵C1-6烷基和-C(O)R9；
R9選自H、烷基和羥烷基；較佳地，R9為C1-6烷基或C1-6羥烷基。
在一些實施方案中，前述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其中
R1為H或烷基；較佳地，R1為H或C1-6烷基；更佳地，R1為H；
R3和R4與其所連接的原子一起成環；較佳地，R3和R4與其所連接的原子一起形成3員碳環；
R5為H；R6為H；
R7是烷基；較佳地，R7為C1-6烷基；更佳地，R7為甲基；
R8是烷基；較佳地，R8為C1-6烷基；更佳地，R8為甲基；
X為亞(伸)烷基；較佳地，X為C1-12亞(伸)烷基；更佳地，X為亞(伸)戊基；
Y選自鍵、氮原子、氧原子或硫原子；較佳地，Y為鍵或硫原子；更佳地，Y為鍵；
A選自環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，該環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視需要被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、羥基、羥烷基、烷基、烷氧基、-C(O)R9、環烷基、芳基和雜環基；較佳地，A選自C3-6環烷基、5至6員雜環基、苯基或5至6員雜芳基，該環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視需要被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自C1-6羥烷基、C1-6烷基和-C(O)R9；
R9選自H、烷基和羥烷基；較佳地，R9為C1-6烷基或C1-6羥烷基。
在一些實施方案中，前述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其中
R1為H或烷基；較佳地，R1為H或C1-6烷基；更佳地，R1為H；
R3和R4與其所連接的原子一起成環；較佳地，R3和R4與其所連接的原子形成3員碳環；
R5為H；R6為H；
R7是烷基；較佳地，R7為C1-6烷基；更佳地，R7為甲基；
R8是烷基；較佳地，R8為C1-6烷基；更佳地，R8為甲基；
X為-(CH2)m-X1-(CH2)n-；
X1為氧原子、環烷基、雜芳基或芳基；該環烷基、雜芳基或芳基視需要被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自胺基、羥基、羥烷基、烷基和烷氧基；較佳地，X1為氧原子、C3-6環烷基、吡啶基或苯基；該C3-6環烷基或苯基視需要被一個或多個胺基或C1-6烷基所取代；
m選自1、2或3；n選自1、2或3。
在一些實施方案中，前述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其中
R1為H或烷基；較佳地，R1為H或C1-6烷基；更佳地，R1為H；
R3和R4與其所連接的原子一起成環；較佳地，R3和R4與其所連接的原子一起形成3員環烷基(3員碳環)；
X為亞(伸)烷基；較佳地，X為C1-6亞(伸)烷基；更佳地，X為亞(伸)戊基；
R6為H或烷基；較佳地，R6為H或C1-6烷基；
R7為烷基或環烷基；較佳地，R7為C1-6烷基或C3-6環烷基；
或者R6和R7與其所連接的原子一起成環；較佳地，R6和R7與其所連接的原子一起形成4-6員環；
R8為烷基或環烷基；較佳地，R8為C1-6烷基或C3-6環烷基；
條件是，R7和R8不同時為烷基。
在一些實施方案中，前述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其中，
R1為H或烷基；較佳地，R1為H或C1-6烷基；更佳地，R1為H；
R3為H；
R4和R5與其所連接的原子一起成環；較佳地，R4和R5與其所連接的原子一起形成3員環烷基(3員碳環)；
R6為H；
R7是烷基；較佳地，R7為C1-6烷基；更佳地，R7為甲基；
R8是烷基；較佳地，R8為C1-6烷基；更佳地，R8為甲基；
X為亞(伸)烷基；較佳地，X為C1-12亞(伸)烷基；更佳地，X為亞(伸)戊基。
在一些實施方案中，前述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其中L為-La-Lb-Lc-Ld-，
La選自：
Figure 111137361-A0202-12-0010-476
和
Figure 111137361-A0202-12-0010-477
；其中星號*表示與Lb結合，波浪線
Figure 111137361-A0202-12-0010-222
表示與Pc的重構的糖鏈結合；
Lb選自-C(O)-CH2CH2-C(O)-、-C(O)-(CH2CH2)2-C(O)-、-C(O)-CH2CH2-C(O)-NH-(CH2CH2)2-C(O)-、-C(O)-CH2CH2-C(O)-NH-(CH2CH2O)2-CH2-C(O)-、-C(O)-CH2CH2-NH-C(O)-(CH2CH2O)4-CH2CH2-C(O)-、-CH2-OC(O)-和-OC(O)-；
Lc為由2至7個胺基酸殘基構成的肽殘基，其中該胺基酸殘基是由***酸(F)、丙胺酸(A)、脯胺酸(P)、異亮胺酸(I)、甘胺酸(G)、纈胺酸(V)、賴胺酸(K)、瓜胺酸(Cit)、絲胺酸(S)、谷胺酸(E)或天冬胺酸(D)所形成的殘基，該胺基酸殘基是未被取代的或各自獨立地被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、羥基、氰基、胺基、C1-6烷基、鹵C1-6烷基、C1-6烷氧基和C3-7環烷基；
Ld為-NH-Ra-CH2O-C(O)-、-NH-CH2O-Rb-C(O)-或鍵；
Ra為苯基或5-6員雜環基，該苯基和5-6員雜環基是未被取代的或各自獨立地被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、側氧基、羥基、氰基、胺基、C1-6烷基、鹵C1-6烷基和C1-6烷氧基；
Rb為C1-6烷基或C3-7環烷基，該C1-6烷基和C3-7環烷基是未被取代的或各自獨立地被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、側氧基、羥基、氰基、胺基、C1-6烷基、C3-7環烷基、5-6員雜環基、鹵C1-6烷基和C1-6烷氧基。
在一些實施方案中，前述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其中Lb為-C(O)-CH2CH2-C(O)-。
在一些實施方案中，前述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其中Lc為-GGVA-、-VA-、-GGFG-、-GGPI-、-GGVCit-、-GGVK-和-GGPL-；較佳為-GGVA-。
在一些實施方案中，前述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其中，
Ld為-NH-Ra-CH2O-C(O)-，Ra為苯基。
在一些實施方案中，前述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，該抗體Pc為與腫瘤細胞結合且能被吞入腫瘤細胞內的抗體，較佳自抗HER2(ErbB2)抗體、抗EGFR抗體、抗B7H3抗體、抗c-Met抗體、抗HER3(ErbB3)抗體、抗HER4(ErbB4)抗體、抗CD20抗體、抗CD22抗體、抗CD30抗體、抗CD33抗體、抗CD44抗體、抗CD56抗體、抗CD70抗體、抗CD73抗體、抗CD105抗體、抗CEA抗體、抗A33抗體、抗Cripto抗體、抗EphA2抗體、抗G250抗體、抗MUCl抗體、抗Lewis Y抗體、抗VEGFR抗體、抗GPNMB抗體、抗Integrin抗體、抗PSMA抗體、抗Tenascin-C抗體、抗Claudin18.2抗體、抗ROR1抗體、抗CD19抗體、抗Trop2抗體、抗CD79b抗體、抗SLC44A4抗體和抗Mesothelin抗體。
在一些實施方案中，前述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其中該y為1-8。
在一些實施方案中，前述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其中該y為1-4，較佳自約1、約2、約3和約4，更佳自約2。y為抗體藥物平均比值，可以為小數或整數。
在一些實施方案中，前述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，該抗體從與抗體的Asn297結合的糖鏈與L結合，該糖鏈為N297糖鏈。
在一些實施方案中，前述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其為如下結構：
Pc-(N297糖鏈)-[L-D]y
該N297糖鏈為重構的糖鏈，結合於Pc重鏈第297位的Asn；抗體Pc有兩條重鏈，因此有2個第297位的Asn，該N297糖鏈可以有2個分別結合於Pc重鏈的2個N297，也可以只有1個結合於Pc重鏈的1個N297；
其中y為1-4，較佳為1-2；
Pc、L、D如前所定義。
在一些實施方案中，前述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，該糖鏈結構選自N297-(Fuc)SG1、N297-(Fuc)SG2、N297-(Fuc)SG3、N297-(Fuc)SG4和N297-(Fuc)SG5：
Figure 111137361-A0202-12-0013-478
結構簡寫如下：
Figure 111137361-A0202-12-0013-479
Figure 111137361-A0202-12-0013-480
結構簡寫如下：
Figure 111137361-A0202-12-0014-481
Figure 111137361-A0202-12-0014-482
結構簡寫如下：
Figure 111137361-A0202-12-0014-483
Figure 111137361-A0202-12-0015-484
結構簡寫如下：
Figure 111137361-A0202-12-0015-485
Figure 111137361-A0202-12-0015-486
結構簡寫如下：
Figure 111137361-A0202-12-0016-487
式中，波浪線
Figure 111137361-A0202-12-0016-233
表示與Pc重鏈第297位的Asn結合，
L(PEG)表示-(CH2CH2O)qCH2CH2-NH-，q選自0-20，較佳自1-10，右端的胺基表示與N297糖鏈的β-Man支鏈的1-3鏈側或/和1-6鏈側的非還原末端的N-乙醯基神經胺酸(NeuAc)的2位羧酸進行醯胺鍵合；
星號*表示與該連接子L結合；較佳地，星號*表示與各結構式連接子中的***環上的1位或3位的氮原子結合；
Gal代表半乳糖；GlcNAc代表N-乙醯基半乳糖；Man代表甘露糖；Fuc代表岩藻糖；NeuAc代表N-乙醯基神經胺酸。
在一些實施方案中，前述的抗體-藥物偶聯物，該糖鏈結構選自：
Figure 111137361-A0202-12-0016-488
Figure 111137361-A0202-12-0016-489
其中q選自2或3；
Gal、GlcNAc、Man、Fuc、NeuAc如前所定義。
在一些實施方案中，前述的抗體-藥物偶聯物，該糖鏈結構為：
Figure 111137361-A0202-12-0017-490
式中，波浪線
Figure 111137361-A0202-12-0017-229
表示與Pc重鏈第297位的Asn結合；
P1、P2各自獨立地選自羥基、*-(CH2CH2O)s1-和*-(CH2CH2O)s2-(CH2CH2CH2O)s3-(CH2CH2O)s4-，該*-(CH2CH2O)s1-和*-(CH2CH2O)s2-(CH2CH2CH2O)s3-(CH2CH2O)s4-是未被取代的或各自獨立地被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、C1-6烷基、C3-6環烷基和C1-6烷氧基；
s1選自1-10，較佳1-5；s2選自0-10，較佳1-5；s3選自1-10，較佳1-5；s4選自0-10，較佳1-5；
條件是，P1、P2不同時為羥基或*-(CH2CH2O)s1-；
星號*表示與該連接子L結合；較佳地，星號*表示與各結構式連接子中的***環上的1位或3位的氮原子結合。
在一些實施方案中，前述的抗體-藥物偶聯物，該N297糖鏈結構選自：
Figure 111137361-A0202-12-0018-491
Figure 111137361-A0202-12-0018-492
Figure 111137361-A0202-12-0018-493
Figure 111137361-A0202-12-0018-494
Figure 111137361-A0202-12-0018-495
Figure 111137361-A0202-12-0018-496
Figure 111137361-A0202-12-0019-497
Figure 111137361-A0202-12-0019-498
Figure 111137361-A0202-12-0019-499
Figure 111137361-A0202-12-0019-500
在一些實施方案中，前述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其選自以下的組：
組1：
Figure 111137361-A0202-12-0020-501
和/或
Figure 111137361-A0202-12-0020-502
組2：
Figure 111137361-A0202-12-0020-504
和/或
Figure 111137361-A0202-12-0020-503
組3：
Figure 111137361-A0202-12-0021-505
和/或
Figure 111137361-A0202-12-0021-508
組4：
Figure 111137361-A0202-12-0021-506
和/或
Figure 111137361-A0202-12-0021-507
組5：
Figure 111137361-A0202-12-0022-509
和/或
Figure 111137361-A0202-12-0022-510
組6：
Figure 111137361-A0202-12-0022-512
和/或
Figure 111137361-A0202-12-0022-511
組7：
Figure 111137361-A0202-12-0023-513
和/或
Figure 111137361-A0202-12-0023-514
組8：
Figure 111137361-A0202-12-0023-515
和/或
Figure 111137361-A0202-12-0023-516
組9：
Figure 111137361-A0202-12-0024-517
和/或
Figure 111137361-A0202-12-0024-518
組10：
Figure 111137361-A0202-12-0024-520
和/或
Figure 111137361-A0202-12-0024-519
組11：
Figure 111137361-A0202-12-0025-521
和/或
Figure 111137361-A0202-12-0025-522
組12：
Figure 111137361-A0202-12-0025-523
和/或
Figure 111137361-A0202-12-0025-524
組13：
Figure 111137361-A0202-12-0026-525
和/或
Figure 111137361-A0202-12-0026-526
組14：
Figure 111137361-A0202-12-0027-527
和/或
Figure 111137361-A0202-12-0027-528
組15：
Figure 111137361-A0202-12-0028-529
和/或
Figure 111137361-A0202-12-0028-530
組16：
Figure 111137361-A0202-12-0028-531
和/或
Figure 111137361-A0202-12-0028-532
組17：
Figure 111137361-A0202-12-0029-534
和/或
Figure 111137361-A0202-12-0029-533
組18：
Figure 111137361-A0202-12-0029-536
和/或
Figure 111137361-A0202-12-0029-535
其中y選自1-4，較佳1-2；
該N297糖鏈結構選自：
Figure 111137361-A0202-12-0030-537
Figure 111137361-A0202-12-0030-538
Figure 111137361-A0202-12-0030-539
Figure 111137361-A0202-12-0030-540
Figure 111137361-A0202-12-0030-541
式中，波浪線
Figure 111137361-A0202-12-0030-228
表示與Pc重鏈第297位的Asn結合，
L(PEG)表示-(CH2CH2O)qCH2CH2-NH-，q選自0-20，較佳自1-10；右端的胺基表示與N297糖鏈的β-Man支鏈的1-3鏈側或/和1-6鏈側的非還原末端的N-乙醯基神經胺酸的2位羧酸進行醯胺鍵合；
星號*表示與該連接子L結合；較佳地，星號*表示與各結構式連接子中的***環上的1位或3位的氮原子結合；
或者，該糖鏈為N297糖鏈，糖鏈結構選自：
Figure 111137361-A0202-12-0031-542
式中，波浪線
Figure 111137361-A0202-12-0031-230
表示與抗體Pc重鏈第297位的Asn結合，可以是結合兩個第297位的Asn位點，也可以是結合一個第297位的Asn位點；
P1、P2各自獨立地選自羥基、*-(CH2CH2O)s1-和*-(CH2CH2O)s2-(CH2CH2CH2O)s3-(CH2CH2O)s4-，該*-(CH2CH2O)s1-和*-(CH2CH2O)s2-(CH2CH2CH2O)s3-(CH2CH2O)s4-是未被取代的或各自獨立地被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、C1-6烷基、C3-6環烷基和C1-6烷氧基；
星號*表示與該連接子L結合；較佳地，星號*表示與各結構式連接子中的***環上的1位或3位的氮原子結合；
s1選自1-10，較佳1-5；s2選自0-10，較佳1-5；s3選自1-10，較佳1-5；s4選自0-10，較佳1-5；s1、s2、s3、s4按常規理解為整數；
條件是，P1、P2不同時為羥基或*-(CH2CH2O)s1-；
較佳地，該糖鏈為N297糖鏈，糖鏈結構選自：
Figure 111137361-A0202-12-0032-543
Figure 111137361-A0202-12-0032-544
Figure 111137361-A0202-12-0032-545
Figure 111137361-A0202-12-0032-546
Figure 111137361-A0202-12-0032-547
Figure 111137361-A0202-12-0032-548
Figure 111137361-A0202-12-0033-549
Figure 111137361-A0202-12-0033-550
Figure 111137361-A0202-12-0033-551
Figure 111137361-A0202-12-0033-552
該Pc如前所定義，較佳地，其中該抗體選自抗HER2抗體、抗HER3抗體、抗B7H3抗體、抗Claudin18.2抗體和抗CD19抗體；
更佳地，該抗HER2抗體包含序列如SEQ ID NO：1所示的輕鏈，和序列如SEQ ID NO：2所示的重鏈；該抗Claudin18.2抗體包含序列如SEQ ID NO：3所示的輕鏈，和序列如SEQ ID NO：4所示的重鏈；該抗HER3抗體包含序列如SEQ ID NO：5所示的輕鏈，和序列如SEQ ID NO：6所示的重鏈。
在一些實施方案中，前述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其選自以下的組：
組2：
Figure 111137361-A0202-12-0034-553
和/或
Figure 111137361-A0202-12-0034-554
組3：
Figure 111137361-A0202-12-0034-555
和/或
Figure 111137361-A0202-12-0034-556
組4：
Figure 111137361-A0202-12-0035-557
和/或
Figure 111137361-A0202-12-0035-558
組8：
Figure 111137361-A0202-12-0035-559
和/或
Figure 111137361-A0202-12-0035-560
組9：
Figure 111137361-A0202-12-0036-561
和/或
Figure 111137361-A0202-12-0036-562
組11：
Figure 111137361-A0202-12-0036-564
和/或
Figure 111137361-A0202-12-0036-563
該Pc如前所定義，較佳地，其中該Pc抗體選自抗HER2抗體、抗HER3抗體、抗Claudin18.2抗體和抗CD19抗體；
更佳地，該抗HER2抗體包含序列如SEQ ID NO：1所示的輕鏈，和序列如SEQ ID NO：2所示的重鏈；該抗Claudin18.2抗體包含序列如SEQ ID NO：3所示的輕鏈，和序列如SEQ ID NO：4所示的重鏈；該抗HER3抗體包含序列如SEQ ID NO：5所示的輕鏈，和序列如SEQ ID NO：6所示的重鏈；
其中y為1-2；
該N297糖鏈結構選自：
Figure 111137361-A0202-12-0037-565
Figure 111137361-A0202-12-0037-566
其中q選自2或3，
式中，波浪線
Figure 111137361-A0202-12-0037-231
表示與Pc重鏈第297位的Asn結合，可以是結合2個第297位的Asn位點，也可以是結合1個第297位的Asn位點；
右端的胺基表示與N297糖鏈的β-Man支鏈的1-3鏈側或/和1-6鏈側的非還原末端的N-乙醯基神經胺酸的2位接酸進行醯胺鍵合；
星號*表示與該連接子L結合；具體地，星號*表示與各結構式連接子中的***環上的1位或3位的氮原子結合；
或者，該N297糖鏈結構選自：
Figure 111137361-A0202-12-0037-567
Figure 111137361-A0202-12-0038-568
Figure 111137361-A0202-12-0038-569
式中，波浪線
Figure 111137361-A0202-12-0038-232
表示與Pc重鏈第297位的Asn結合，可以是結合2個第297位的Asn位點，也可以是結合1個第297位的Asn位點；星號*表示與該連接子L結合，具體地，星號*表示與各結構式連接子中的***環上的1位或3位的氮原子結合。
在另一方面，本揭露提供一種糖鏈結構，選自：
Figure 111137361-A0202-12-0038-570
式中，q選自0-20；較佳地，q選自1-10；更佳，q選自2或3；其中，Oxa代表噁唑啉環。
在另一方面，本揭露提供一種前述糖鏈的製備方法，其包含以下步驟：
Figure 111137361-A0202-12-0039-571
Figure 111137361-A0202-12-0039-572
Figure 111137361-A0202-12-0040-573
Figure 111137361-A0202-12-0040-574
Figure 111137361-A0202-12-0041-575
簡寫如下：
Figure 111137361-A0202-12-0041-576
式中，q選自0-20，較佳自1-10；
其中，
第一步，化合物A與含有疊氮官能團的化合物反應得到化合物B；該化合物B為化合物B1與B2的混合物；
第二步，化合物B經反應得到化合物C；該化合物C為化合物C1與C2的混合物。
在一些實施方案中，前述的第一步反應使用了偶聯劑，該偶聯劑選自HATU或DMTMM；該反應的pH值範圍為約4.5-約8.0；該反應溫度為約20℃-約60℃；該含有疊氮官能團的化合物選自11-疊氮基-3,6,9-三氧雜十一烷-1-胺或2-(2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基)乙-1-胺；
前述的第二步反應是在鹼性條件下和DMC或CDBMI存在的條件下進行的。
在一些實施方案中，前述的第一步反應所用的偶聯劑為HATU；該反應的pH值範圍為約7.0-約8.5；該反應的溫度為20℃-約30℃；該含有疊氮官能團的化合物為11-疊氮基-3,6,9-三氧雜十一烷-1-胺；
前述的第二步反應是在三乙胺和DMC存在的條件下進行的。
在一些實施方案中，前述的第一步反應所用的偶聯劑為DMTMM；該反應的pH值的範圍為約4.5-約6.5；該反應的溫度為45℃-約65℃；該含有疊氮官能團的化合物為2-(2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基)乙-1-胺；
前述的第二步反應是在磷酸鉀緩衝液和CDBMI存在的條件下進行的。
在另一方面，本揭露提供一種式(OLS)所示的二糖化合物：
Figure 111137361-A0202-12-0042-577
P3、P4各自獨立地選自羥基、N3-(CH2CH2O)s1-和N3-(CH2CH2O)s2-(CH2 CH2CH2O)s3-(CH2CH2O)s4-，該N3-(CH2CH2O)s1-和N3-(CH2CH2O)s2- (CH2CH2CH2O)s3-(CH2CH2O)s4-是未被取代的或各自獨立地被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、C1-6烷基、C3-6環烷基和C1-6烷氧基；
s1選自1-10，較佳1-5；s2選自0-10，較佳1-5；s3選自1-10，較佳1-5；s4選自0-10，較佳1-5；
條件是，P3、P4不同時為羥基或N3-(CH2CH2O)s1-；
較佳地，式(OLS)所示的二糖化合物選自：
Figure 111137361-A0202-12-0043-578
在另一方面，本揭露提供一種去糖基化抗體Pc-GlcNAc(Fuca1,6)，結構如下：
Figure 111137361-A0202-12-0044-579
，分子式如：
Figure 111137361-A0202-12-0044-580
；
Pc如前所定義。
在另一方面，本揭露提供一種Pc-(糖鏈N297)，結構如下：
Figure 111137361-A0202-12-0044-581
Pc如前所定義；
P3、P4各自獨立地選自羥基、N3-(CH2CH2O)s1-和N3-(CH2CH2O)s2-(CH2CH2CH2O)s3-(CH2CH2O)s4-，該N3-(CH2CH2O)s1-和N3-(CH2CH2O)s2-(CH2CH2CH2O)s3-(CH2CH2O)s4-是未被取代的或各自獨立地被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、C1-6烷基、C3-6環烷基和C1-6烷氧基；
s1選自1-10，較佳1-5；s2選自0-10，較佳1-5；s3選自1-10，較佳1-5；s4選自0-10，較佳1-5；
條件是，P3、P4不同時為羥基或N3-(CH2CH2O)s1-。
在另一方面，本揭露提供一種糖鏈重構抗體的製備方法，包括：
Pc(WT) → Pc-GlcNAc(Fuca1,6) → Pc-(糖鏈N297)
第一步，抗體Pc(WT)的去糖基化，在酸性條件下加入糖基轉移酶進行反應，得到去糖基化抗體；該去糖基化抗體為Pc-GlcNAc(Fuca1,6)；
第二步，糖鏈的重構，將Pc-GlcNAc(Fuca1,6)在酸性條件下，在糖基轉移酶的作用下，和式(OLS)所示的二糖化合物進行反應，在N297引入帶有疊氮基的二糖糖鏈，得到糖鏈重構抗體Pc-(糖鏈N297)；
較佳地，該酸性條件為pH6.5的PBS緩衝液；該糖基轉移酶為Endo S酶。
在另一方面，本揭露提供一種抗體-藥物偶聯物的製備方法，包括：
Pc(WT) → Pc-GlcNAc(Fuca1,6) → Pc-(糖鏈N297) → Pc-(N297糖鏈)-[L-D]y
第一步，抗體Pc(WT)的去糖基化，在酸性條件下加入糖基轉移酶進行反應，得到去糖基化抗體；該去糖基化抗體為Pc-GlcNAc(Fuca1,6)；較佳地，該酸性條件為pH6.5的PBS緩衝液；該糖基轉移酶為Endo S酶；
第二步，糖鏈的重構，將Pc-GlcNAc(Fuca1,6)在酸性條件下，在糖基轉移酶的作用下，和式(OLS)所示的二糖化合物進行反應，在N297引入帶有疊氮基的二糖糖鏈，得到糖鏈重構抗體Pc-(糖鏈N297)；較佳地，該酸性條件為pH6.5的PBS緩衝液；該糖基轉移酶為Endo S酶；
第三步，將上述的糖鏈重構抗體Pc-(糖鏈N297)和式(DL)所示的化合物在鹼性條件下進行反應，得到抗體藥物偶聯物Pc-(N297糖鏈)-[L-D]y；較佳地，該鹼性條件為pH7.4的PBS緩衝液。
在另一方面，本揭露提供一種式(DL)所示的化合物或其可藥用的鹽：
Figure 111137361-A0202-12-0046-584
其中，
R11為H、側氧基、鹵素或烷基；
R12為H、烷基或
Figure 111137361-A0202-12-0046-583
，W為H、-C(O)Rt1或-C(O)NH-Rt1，G選 自葡萄糖醛酸苷基或半乳糖苷基；Rt1選自烷基或烷氧基烷基；
R13為La’-Lb-Lc-Ld-：
La‘為
Figure 111137361-A0202-12-0046-582
Lb選自-C(O)-CH2CH2-C(O)-、-C(O)-(CH2CH2)2-C(O)-、-C(O)-CH2CH2-C(O)-NH-(CH2CH2)2-C(O)-、-C(O)-CH2CH2-C(O)-NH-(CH2CH2O)2-CH2-C(O)-、-C(O)-CH2CH2-NH-C(O)-(CH2CH2 O)4-CH2CH2-C(O)-、-CH2-OC(O)-和-OC(O)-；
Lc為由2至7個胺基酸殘基構成的肽殘基，其中該胺基酸殘基是由***酸、丙胺酸、脯胺酸、異亮胺酸、甘胺酸、纈胺酸、賴胺酸、瓜胺酸、絲胺酸、谷胺酸或天冬胺酸所形成的殘基，該胺基酸殘基是未被取代的或各自獨 立地被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、羥基、氰基、胺基、C1-6烷基、鹵C1-6烷基、C1-6烷氧基和C3-7環烷基；
Ld為-NH-Ra-CH2O-C(O)-、-NH-CH2O-Rb-C(O)-或鍵；
Ra為苯基或5-6員雜環基，該苯基和5-6員雜環基是未被取代的或各自獨立地被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、側氧基、羥基、氰基、胺基、C1-6烷基、鹵C1-6烷基和C1-6烷氧基；
Rb為C1-6烷基或C3-7環烷基，該C1-6烷基和C3-7環烷基是未被取代的或各自獨立地被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、側氧基、羥基、氰基、胺基、C1-6烷基、C3-7環烷基、5-6員雜環基、鹵C1-6烷基和C1-6烷氧基；
R14為H、羥基或烷氧基；
或者R13和R14與相連的原子一起形成亞胺鍵(N=C)；
R15為H或烷基；
R16為H或烷基；
R17為H、鹵素或烷基；
或者R15和R16與其所連接的原子一起成環，或R16和R17與其所連接的原子一起成環；
R18為H或烷基；
R19為烷基或環烷基；或者R18和R19與其所連接的原子一起成環；
R20為烷基或環烷基；
X’為亞(伸)烷基或-(CH2)m’-X’1-(CH2)n’-；
X’1為氮原子、氧原子、硫原子、環烷基、雜環基、雜芳基或芳基；該環烷基、雜環基、雜芳基或芳基視需要被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自胺基、羥基、羥烷基、烷基和烷氧基；
Y’為鍵、氮原子、氧原子或硫原子；
A’為烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，該環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視需要被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、羥基、羥烷基、烷基、烷氧基、-C(O)R21、環烷基、環烷基烷基、鹵烷基、芳基和雜環基；
R21為H、烷基和羥烷基；
m'為1、2或3；n’為1、2或3；
條件是當X’為亞(伸)烷基時，1)R11為側氧基，或2)R14為H，或3)R16和R17與其所連接的原子一起成環，或4)R18和R19與其所連接的原子一起成環，或5)R19和/或R20為環烷基；或6)A’不是烷基。
在一些實施方案中，前述的化合物或其可藥用的鹽，其中R13和R14與相連的原子一起形成亞胺鍵(N=C)。
在一些實施方案中，前述的化合物或其可藥用的鹽，其中
R13為La’-Lb-Lc-Ld-：
La’為
Figure 111137361-A0202-12-0048-585
Lb選自-C(O)-CH2CH2-C(O)-、-C(O)-(CH2CH2)2-C(O)-、-C(O)-CH2CH2-C(O)-NH-(CH2CH2)2-C(O)-、-C(O)-CH2CH2-C(O)-NH-(CH2CH2O)2-CH2-C(O)-、-C(O)-CH2CH2-NH-C(O)-(CH2CH2O)4-CH2CH2-C(O)-、-CH2-OC(O)-和-OC(O)-；
Lc為由2至7個胺基酸殘基構成的肽殘基，其中該胺基酸殘基是由***酸、丙胺酸、脯胺酸、異亮胺酸、甘胺酸、纈胺酸、賴胺酸、瓜胺酸、絲胺酸、谷胺酸或天冬胺酸所形成的殘基，該胺基酸殘基是未被取代的或各自獨立地被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、羥基、氰基、胺基、C1-6烷基、鹵C1-6烷基、C1-6烷氧基和C3-7環烷基；
Ld為-NH-Ra-CH2O-C(O)-、-NH-CH2O-Rb-C(O)-或鍵；
Ra為苯基或5-6員雜環基，該苯基和5-6員雜環基是未被取代的或各自獨立地被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、側氧基、羥基、氰基、胺基、C1-6烷基、鹵C1-6烷基和C1-6烷氧基；
Rb為C1-6烷基或C3-7環烷基，該C1-6烷基和C3-7環烷基是未被取代的或各自獨立地被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、側氧基、羥基、氰基、胺基、C1-6烷基、C3-7環烷基、5-6員雜環基、鹵C1-6烷基和C1-6烷氧基。
在一些實施方案中，前述的化合物或其可藥用的鹽，其中該R14為H或羥基；較佳地，R14為羥基。
在一些實施方案中，前述的化合物或其可藥用的鹽，其中該R11為H或側氧基，較佳地，R11為H。
在一些實施方案中，前述的化合物或其可藥用的鹽，其中該R12為H、側氧基或C1-6烷基，較佳地，R12為H。
在一些實施方案中，前述的化合物或其可藥用的鹽，其中該R12如以下結構所示：
Figure 111137361-A0202-12-0050-586
W為H或-C(O)NH-Rt1，G為葡萄糖醛酸苷基；Rt1為C1-6烷基或C1-6烷氧基C1-6烷基。
在一些實施方案中，前述的化合物或其可藥用的鹽，其中
R11為H或烷基；較佳地，R11為H或C1-6烷基；
R15和R16與其所連接的原子一起形成3-6員碳環；
R17為H；R18為H；
R19是烷基；較佳地，R19為C1-6烷基；
R20是烷基；較佳地，R20為C1-6烷基；
X’為亞(伸)烷基；較佳地，X’為C1-6亞(伸)烷基；更佳地，X’為亞(伸)戊基；
Y’選自鍵、氮原子、氧原子或硫原子；較佳地，Y’為鍵或硫原子；更佳地，Y’為鍵；
A’為環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，該環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視需要被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、羥基、羥烷基、烷基、烷氧基、-C(O)R21、環烷基、環烷基烷基、鹵烷基、芳基和雜環基；較佳地，A’選自C3-6環烷基、5至6員雜環基、苯基或5至6員雜芳基，該C3-6環烷基、5至6員雜環基、苯基或5至6員雜芳基視需要被一個或多個取代基所 取代，其中每個取代基獨立地選自C1-6羥烷基、C1-6烷基、C3-6環烷基C1-6烷基、鹵C1-6烷基和-C(O)R21；
R21選自H、烷基和羥烷基；較佳地，R21為C1-6烷基或C1-6羥烷基。
在一些實施方案中，前述的化合物或其可藥用的鹽，其中，
R11為H或烷基；較佳地，R11為H或C1-6烷基；
R15和R16與其所連接的原子一起形成3-6員碳環；
R17為H；R18為H；
R19是烷基；較佳地，R19為C1-6烷基；
R20是烷基；較佳地，R20為C1-6烷基；
X’為-(CH2)m’-X’1-(CH2)n’-；
X’1為氮原子、氧原子、硫原子、環烷基、雜芳基或芳基；該環烷基、雜芳基或芳基視需要被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自胺基、羥基、羥烷基、烷基和烷氧基；較佳地，X’1為氧原子、C3-6環烷基、吡啶基或苯基；該C3-6環烷基、吡啶基或苯基視需要被一個或多個胺基或C1-6烷基所取代；
Y’為氧原子；
A’為烷基；較佳地A’為C1-6烷基；
m'選自1、2或3；n’選自1、2或3。
在一些實施方案中，前述的化合物或其可藥用的鹽，其中，
R11為H或烷基；較佳地，R11為H或C1-6烷基；
R15和R16與其所連接的原子一起形成3-6員碳環；
R17為H；
R18為H或烷基；較佳地，R18為H或C1-6烷基；
R19為烷基或環烷基；較佳地，R19為C1-6烷基或C1-6羥烷基；
或者R18和R19與其所連接的原子一起成環；較佳地，R18和R19與其所連接的原子一起形成3-6員碳環；
R20為烷基或環烷基；較佳地，R20為C1-6烷基或C1-6羥烷基；
X’為亞(伸)烷基；較佳地，X’為C1-6亞(伸)烷基；更佳地，X’為亞(伸)戊基；
Y’為氧原子；
A’為烷基；較佳地A’為C1-6烷基；
條件是，R19和R20不同時為烷基。
在一些實施方案中，前述的化合物或其可藥用的鹽，其中，
R11為H或C1-6烷基；較佳地，R11為H；
R15為H；
R16和R17與其所連接的原子一起形成3-6員碳環；
R18為H；
R19是烷基；較佳地，R19為C1-6烷基；
R20是烷基；較佳地，R20為C1-6烷基；
X’為亞(伸)烷基；較佳地，X’為C1-6亞(伸)烷基；更佳地，X’為亞(伸)戊基；
Y’為氧原子；
A’為烷基；較佳地A’為C1-6烷基。
本揭露公開的典型化合物包括但不限於：
Figure 111137361-A0202-12-0053-587
Figure 111137361-A0202-12-0054-588
Figure 111137361-A0202-12-0055-589
Figure 111137361-A0202-12-0056-590
Figure 111137361-A0202-12-0057-591
Figure 111137361-A0202-12-0058-592
Figure 111137361-A0202-12-0059-593
Figure 111137361-A0202-12-0060-594
在一些實施方案中，前述的化合物或其可藥用的鹽，其選自：
Figure 111137361-A0202-12-0060-595
Figure 111137361-A0202-12-0060-596
Figure 111137361-A0202-12-0060-597
Figure 111137361-A0202-12-0060-598
Figure 111137361-A0202-12-0061-599
Figure 111137361-A0202-12-0061-600
Figure 111137361-A0202-12-0061-601
Figure 111137361-A0202-12-0061-602
Figure 111137361-A0202-12-0062-603
Figure 111137361-A0202-12-0062-604
Figure 111137361-A0202-12-0062-605
Figure 111137361-A0202-12-0062-606
Figure 111137361-A0202-12-0063-607
Figure 111137361-A0202-12-0063-608
Figure 111137361-A0202-12-0063-609
Figure 111137361-A0202-12-0064-610
Figure 111137361-A0202-12-0064-611
Figure 111137361-A0202-12-0064-612
在另一方面，本揭露提供一種抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其包含如前任一項所述的式(DL)的化合物或其可藥用的鹽。
在另一方面，本揭露提供一種醫藥組成物，其含有治療有效量的如前任一項所述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，或如前任一項所述的式(DL)所示化合物或其可藥用的鹽，以及藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
在另一方面，本揭露提供如前任一項所述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，或如前任一項所述的式(DL)所示化合物或其可藥用的鹽，或如前所述的醫藥組成物用作藥物。
在另一方面，本揭露提供如前任一項所述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，或如前任一項所述的式(DL)所示化合物或其可藥用的鹽，或如前所述的醫藥組成物，其用於治療或預防腫瘤的藥物中的用途；
較佳地，該腫瘤選自卵巢癌、肺癌、胃癌、子宮內膜癌、睾丸癌、宮頸癌、胎盤絨毛膜癌、腎癌、尿路上皮癌、大腸癌、***癌、多形性神經膠質母細胞瘤、腦腫瘤、胰腺癌、乳腺癌、黑色素瘤、肝癌、膀胱癌和食道癌。
在另一方面，本揭露提供如前任一項所述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，或如前任一項所述的式(DL)所示化合物或其可藥用的鹽，或如前所述的醫藥組成物在製備用於治療或預防腫瘤的藥物中的用途；
較佳地，該腫瘤選自卵巢癌、肺癌、胃癌、子宮內膜癌、睾丸癌、宮頸癌、胎盤絨毛膜癌、腎癌、尿路上皮癌、大腸癌、***癌、多形性神經膠質母細胞瘤、腦腫瘤、胰腺癌、乳腺癌、黑色素瘤、肝癌、膀胱癌和食道癌。
另一方面，本揭露進一步涉及一種用於治療和/或預防腫瘤或癌症的方法，該方法包括向需要其的受試者施用治療有效劑量的如前任一項所述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，或如前任一項所述的式(DL)所示化合物或其可藥用的鹽，或如前所述的醫藥組成物；
較佳地，該腫瘤或癌症選自卵巢癌、肺癌、胃癌、子宮內膜癌、睾丸癌、宮頸癌、胎盤絨毛膜癌、腎癌、尿路上皮癌、大腸癌、***癌、多形性神經膠質母細胞瘤、腦腫瘤、胰腺癌、乳腺癌、黑色素瘤、肝癌、膀胱癌和食道癌。
可將活性化合物(包括化合物或抗體藥物偶聯物)製成適合於藉由任何適當途徑給藥的形式，藉由常規方法使用一種或多種藥學上可接受的載體來配製本揭露的組成物。因此，本揭露的活性化合物可以配製成用於口服給藥、 注射(例如靜脈內、肌肉內或皮下)給藥，吸入或吹入給藥的各種劑型。本揭露的化合物也可以配製成持續釋放劑型，例如片劑、硬或軟膠囊、水性或油性混懸液、乳劑、注射液、可分散性粉末或顆粒、栓劑、錠劑或糖漿。
作為一般性指導，活性化合物較佳是以單位劑量的方式，或者是以患者可以以單劑自我給藥的方式。本揭露化合物或組成物的單位劑量的表達方式可以是片劑、膠囊、扁囊劑、瓶裝藥水、藥粉、顆粒劑、錠劑、栓劑、再生藥粉或液體製劑。合適的單位劑量可以是0.1mg~1000mg。
本揭露的醫藥組成物除活性化合物外，可含有一種或多種輔料，該輔料選自以下成分：填充劑、稀釋劑、黏合劑、潤濕劑、崩解劑或賦形劑等。根據給藥方法的不同，組成物可含有0.1至99重量%的活性化合物。
含活性成分的醫藥組成物可以是適用於口服的形式，例如片劑、糖錠劑、錠劑、水或油混懸液、可分散粉末或顆粒、乳液、硬或軟膠囊，或糖漿劑或酏劑。可按照本領域任何已知製備醫藥組成物的方法製備口服組成物，此類組成物可含有黏合劑、填充劑、潤滑劑、崩解劑或藥學上可接受的潤濕劑等，此類組成物還可以含有一種或多種選自以下的成分：甜味劑、矯味劑、著色劑和防腐劑，以提供悅目和可口的藥用製劑。
水懸浮液含有活性物質和用於混合的適宜製備水懸浮液的賦形劑。水混懸液也可以含有一種或多種防腐劑例、一種或多種著色劑、一種或多種矯味劑和一種或多種甜味劑。
油混懸液可藉由使活性成分懸浮於植物油中配製而成。油懸浮液可含有增稠劑。可加入上述的甜味劑和矯味劑，以提供可口的製劑。
醫藥組成物還可以是用於製備水混懸液的可分散粉末和顆粒提供活性成分，藉由加入水混合分散劑、濕潤劑、懸浮劑或防腐劑中的一種或多種。也可加入其他賦形劑例如甜味劑、矯味劑和著色劑。藉由加入抗氧化劑例如抗壞血酸保存這些組成物。
本揭露的醫藥組成物也可以是水包油乳劑的形式。
醫藥組成物可以是無菌注射水溶液形式。可以使用的可接受的溶媒或溶劑有水、林格氏液和等滲氯化鈉溶液。無菌注射製劑可以是其中活性成分溶於油相的無菌注射水包油微乳。例如將活性成分溶於大豆油和卵磷脂的混合物中。然後將油溶液加入水和甘油的混合物中處理形成微乳。可藉由局部大量注射，將注射液或微乳注入受試者的血流中。或者，最好按可保持本揭露化合物恆定循環濃度的方式給予溶液和微乳。為保持這種恆定濃度，可使用連續靜脈內遞藥裝置。這種裝置的實例是Deltec CADD-PLUS.TM.5400型靜脈注射泵。
醫藥組成物可以是用於肌內和皮下給藥的無菌注射水或油混懸液的形式。可按已知技術，用上述那些適宜的分散劑或濕潤劑和懸浮劑配製該混懸液。無菌注射製劑也可以是在腸胃外可接受的無毒稀釋劑或溶劑中製備的無菌注射溶液或混懸液。此外，可方便地用無菌固定油作為溶劑或懸浮介質。
可按用於直腸給藥的栓劑形式給予本揭露化合物。可藉由將藥物與在普通溫度下為固體但在直腸中為液體，因而在直腸中會溶化而釋放藥物的適宜的無刺激性賦形劑混合來製備這些醫藥組成物。此類物質包括可可脂、甘油明膠、氫化植物油、各種分子量的聚乙二醇和聚乙二醇的脂肪酸酯的混合物。
如所屬技術領域具有通常知識者所熟知的，藥物的給藥劑量依賴於多種因素，包括但並非限定於以下因素：所用具體化合物的活性、受試者的年 齡、受試者的體重、受試者的健康狀況、受試者的行為、受試者的飲食、給藥時間、給藥方式、***的速率、藥物的組合、疾病的嚴重性等；另外，最佳的治療方式如治療的模式、化合物的日用量或可藥用的鹽的種類可以根據傳統的治療方案來驗證。
本揭露涉及靶向不同癌細胞、傳染病生物體的能力改進和/或用於治療自身免疫性疾病的偶聯物，該偶聯物包含靶向(結合)部分和屬藥物的治療部分。抗體靶向部分與化合物治療部分經由增加治療效力的胞內可裂解的鍵連接。
術語
本文所用的術語只是為了描述實施方案的目的，並非旨在進行限制。除非另外定義，本文所用的全部技術術語和科學術語具有與本揭露所屬技術領域具有通常知識者通常所理解的相同意義。
除非上下文另外清楚要求，否則在整個說明書和申請專利範圍中，應將詞語“包含”、“具有”、“包括”等理解為具有包含意義，而不是排他性或窮舉性意義；也即，“包括但不僅限於”的意義。除非另有說明，“包含”包括了“由......組成”。
本揭露所述的“抗體”在本文中以最廣意義使用，並且包括不同的抗體結構，包括但不限於，單株抗體、多株抗體、鼠源抗體、嵌合抗體、人源化抗體、多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)和抗原結合片段，只要它們顯示所需的抗原結合活性和特異性即可。較佳地，本揭露所述的“抗體”，指具有與天然抗體結構基本類似的結構，包括兩條完整的輕鏈和兩條完整的重鏈。
術語抗體-藥物偶聯物(antibody drug conjugate，ADC)，指單株抗體或者抗體片段藉由連接單元與具有生物活性的毒性藥物相連。本揭露所描述的抗體或抗體片段可以藉由任何方式偶聯至效應分子。舉例來說，抗體或抗體片段可以藉由化學或重組方式附接至細胞毒性藥物。製備融合物或偶聯物的化學方式在本領域中是已知的。用於偶聯抗體或抗體片段和藥物的方法必須能夠連接抗體與細胞毒性藥物而不會干擾抗體或抗體片段結合至標靶分子的能力。
術語“藥物”是指具有生物學活性的物質，例如細胞毒性劑或免疫調節劑。細胞毒性劑是能在腫瘤細胞內具有較強破壞其正常生長的化學分子。本揭露的一些實施方案中，藥物可以表示為D。
近年來已經報導了藉由酶促反應等重構不均勻抗體的糖蛋白質並均勻引入具有官能團的糖鏈的方法(ACS Chemical Biology2012,7,110，ACS Medicinal ChemistryLetters2016,7,1005)。已經嘗試藉由使用這種糖鏈重構技術部位特異性地導入藥物，合成均勻的ADC(Bioconjugate Chemistry 2015,26,2233，Angew.Chem.Int.Ed.2016,55,2361-2367，US2016361436)。
本揭露中的糖鏈的重構首先使用水解酶切除附加到蛋白質(抗體等)中的不均勻的糖鏈而僅僅留下末端的GlcNAc，製備添加了GlcNAc的均勻蛋白質部分(以下稱為“受體”)。接著，準備另行製備的任意的糖鏈(以下稱為“供體”)，使用糖基轉移酶連結該受體和供體。由此可合成具有任意糖鏈結構的均勻的糖蛋白。
本揭露中，“糖鏈”是指兩個以上的單糖藉由糖苷鍵連接的結構單元。具體的單糖或者糖鏈有時可以縮寫形式表示，例如“GlcNAc-”、“MSG-”。 結構式中使用這些縮寫描述時，除非另有說明，否則還原末端上歸屬於與其它結構單元的糖苷鍵的氧原子或氮原子並不包含在表示該糖鏈的縮寫中。
本揭露中，除非另有說明，為方便起見，對作為糖鏈的基本單元的單糖的記載中，將其環結構中與構成環的氧原子結合且與經基(或歸屬於糖苷鍵的氧原子)直接結合的碳原子標記為1位(僅唾液酸中為2位)。實施例化合物的名稱以化學結構整體來標記，並不一定適用該規則。
本揭露中，以符號(例如GLY、SG、MSG、GlcNAc等)來表示糖鏈時，除非有特別定義，否則連還原末端的碳都包含在符號中，但歸屬於N-或O-糖苷鍵中的N或O不包含在該符號中。
本揭露中，如果沒有特別說明，胺基酸的側鏈與糖鏈連接時的部分結構用括號表示側鏈部分，例如“(SG-)Asn”這樣的表示。
抗體或其功能性片段可從其胺基酸殘基(例如半胱胺酸、賴胺酸等)的側鏈直接與L結合，或者可從抗體的糖鏈或重構的糖鏈與L結合，較佳從抗體的糖鏈或重構的糖鏈與L結合，更佳從抗體的重構的糖鏈與L結合。
本揭露的抗體的糖鏈為N連接型糖鏈或O連接型糖鏈。
N連接型糖鏈藉由N糖苷鍵與抗體的胺基酸側鏈結合，O連接型糖鏈藉由O糖苷鍵與抗體的胺基酸側鏈結合。
已知IgG在其重鏈的Fc區中的第297號天冬醯胺殘基(以下稱為“Asn297或N297”)中具有高度保守的N連接型糖鏈，有助於抗體分子的活性或動態等(Biotechnol.Prog.,2012,28,608-622,Sanglier-Cianferani,S.,Anal.Chem.,2013,85,715-736)。IgG恆定區中的胺基酸序列高度保守，在Edelman etal.,(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,Vol.63,No.1(May15,1969),pp.78-85)中，各胺基酸被Eu編號 (Eu INDEX)確定。例如，Fc區中N連接型糖鏈加成的Asn297相當於Eu編號中的297位，即使由於分子片段化或區域缺損而實際的胺基酸位置發生變化，也可藉由Eu編號表示而唯一地確定胺基酸。
本揭露的抗體-藥物偶聯物中，更佳抗體或其功能性片段從與其Asn297的側鏈結合的糖鏈(以下稱為“N297糖鏈”)與L結合，更佳抗體或其功能性片段從該N297糖鏈與L結合，該N297糖鏈為重構的糖鏈。
本揭露的具有該重構的糖鏈的抗體稱為糖鏈重構抗體。
SGP為Sialyl Glyco Peptide(唾液酸糖肽或N-乙醯基神經胺酸)的簡稱，是N連接型複合糖鏈的代表。可從雞蛋的蛋黃中根據例如WO2011/0278681所述的方法分離、精製得到SGP。或者從市售所得。
本揭露中，將僅在SG(10)的β-Man支鏈中的任意一方缺失了非還原末端的N-乙醯基神經胺酸的糖鏈結構稱為MSG(9)，將僅在支鏈的1-3糖鏈具有唾液酸的糖鏈稱為MSG1，將僅在支鏈的1-6糖鏈具有N-乙醯基神經胺酸的糖鏈稱為MSG2。
術語“接頭單元”、“連接片段”或“連接單元”是指一端與抗體或抗體片段連接而另一端與藥物相連的化學結構片段或鍵，也可以連接其他接頭後再與藥物相連。接頭單元可以包含一種或多種接頭構件。示例性的接頭構件包括6-馬來醯亞胺基己醯基、馬來醯亞胺基丙醯基、纈胺酸-瓜胺酸、纈胺酸-丙胺酸、丙胺酸-***酸、對胺基苄氧羰基、N-琥珀醯亞胺基4-(2-吡啶基硫基)戊酸酯、N-琥珀醯亞胺基4-(N-馬來醯亞胺基甲基)環己烷-1羧酸酯和N-琥珀醯亞胺基(4-碘-乙醯基)胺基苯甲酸酯。接頭可以包括延伸物、間隔物和胺基酸單員，可以藉由本領域已知方法合成，諸如US20050238649A1中所記載。接頭可以是便於在 細胞中釋放藥物的“可切割接頭”。例如，可使用酸不穩定接頭(例如腙)、蛋白酶敏感(例如肽酶敏感)接頭、光不穩定接頭、二甲基接頭、或含二硫化物接頭(Chari等，Cancer Research 52：127-131(1992)；美國專利No.5208020)。
術語“肽”是指由2個或2個以上胺基酸分子藉由肽鍵相互連接而成的分子。
術語“糖”包括單糖及雙糖類之O-糖苷、N-糖苷、S-糖苷及C-糖苷(C-糖基)碳水化合物衍生物，且可來源於天然存在之來源或可來源於合成。示例性地，「糖」包括衍生物，諸如(但不限於)葡糖醛酸、半乳糖醛酸、半乳糖及葡萄糖及其衍生物。
本揭露中的葡萄糖醛酸苷基具有如下結構：
Figure 111137361-A0202-12-0072-613
本揭露中的半乳糖苷基具有如下結構：
Figure 111137361-A0202-12-0072-614
術語“載藥量”或“平均藥物結合數”也稱為藥物抗體比例(Drug-to-Antibody Ratio，DAR)，即抗體-藥物偶聯物中每個抗體所偶聯的藥物的平均數量。本揭露的抗體-藥物偶聯物中，與1個抗體分子結合的藥物結合數是影響其有效性、安全性的重要因素。抗體-藥物偶聯物的製造是藉由規定反應的原料/試劑的使用量等反應條件以使藥物的結合數為恆定而實施的，但是與低分子化合物的化學反應不同，通常得到的是不同數目的藥物結合而成的混合物。每一分 子抗體的藥物結合數以平均值，即平均藥物結合數或載藥量(DAR：Drug to Antibody Ratio藥物與抗體比率)來確定。載藥量可在例如每個抗體偶聯約1至約10個藥物的範圍內。在一些實施方式中，載藥量在每個抗體偶聯約1至約8個藥物的範圍內，較佳在2-8、2-7、2-6、2-5、2-4、3-4、3-5、5-6、5-7、5-8和6-8的範圍內。示例性的，載藥量可以為1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。吡咯并苯并二氮雜卓類衍生物和抗體分子的結合數可控制，作為每個抗體的藥物平均結合數(DAR)可結合1~10個範圍的吡咯并苯并二氮雜卓類衍生物，較佳1~8個，更佳1~4個。在本揭露的實施方式中，載藥量可表示為y。可用常規方法如UV/可見光光譜法、質譜、ELISA試驗和RP-HPLC測定載藥量。本揭露的實施方式中，抗體藉由其N297糖鏈與連接子L結合，該N297糖鏈結合於抗體重鏈第297位的Asn。當抗體有2個重鏈時，抗體的重鏈有2個第297位的Asn結合位點，即N297位點。該N297糖鏈可以結合於抗體重鏈的2個第297位的Asn，也可以結合於抗體重鏈的1個第297位的Asn。抗體-藥物偶聯物的藉由N297糖鏈偶聯藥物的藥物平均結合數為1~4，較佳為1-3或較佳為1-2。在一些實施方案中，本揭露的N297糖鏈選自OLS-1、OLS-2、OLS-3、OLS-4、OLS-5、OLS-6和OLS-7時，DAR為1~2的範圍。在一些實施方案中，N297糖鏈選自OLS-8、OLS-9、OLS-10、OLS-11和OLS-12時，DAR為1~4的範圍(較佳1.5~3.9的範圍，更佳2.8~3.9的範圍，最佳1-2的範圍)。
本揭露中抗體重鏈的2個N297位點可以重構2個糖鏈，或1個糖鏈。本揭露中y1表示糖鏈重構至抗體重鏈N297位的平均數量，即每個抗體重構的糖鏈的平均數。y1可以為1-2，可以為約1.5、1.6、1.7、1.8、1.85、1.9、1.95、1.98和2。
載藥量可以用以下非限制性的方法控制，包括：
(1)控制連接臂藥物和單抗的莫耳比，
(2)控制反應時間和溫度，
(3)選擇不同的反應試劑。
術語“烷基”指飽和的直鏈或帶有支鏈的脂肪族烴基，其具有1至20個(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個)碳原子(即C1-20烷基)。該烷基較佳具有1至12個碳原子的烷基(即C1-12烷基)，更佳具有1至6個碳原子的烷基(即C1-6烷基)。非限制性的實例包括：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第三丁基、第二丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各種支鏈異構體等。烷基可以是取代的或非取代的，當被取代時，其可以在任何可使用的連接點被取代，取代基較佳選自D原子、鹵素、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、環烷基氧基、雜環基氧基、 羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個。
術語“亞(伸)烷基”指二價烷基，其中烷基如上所定義，其具有1至20個(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個)碳原子(即C1-20亞(伸)烷基)。該亞(伸)烷基較佳具有1至12個碳原子的亞(伸)烷基(即C1-12亞(伸)烷基)，更佳具有1至6個碳原子的亞(伸)烷基(即C1-6亞(伸)烷基)。非限制性的實例包括：-CH2-、-CH(CH3)-、-C(CH3)2-、-CH2CH2-、-CH(CH2CH3)-、-CH2CH(CH3)-、-CH2C(CH3)2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-等。亞(伸)烷基可以是取代的或非取代的，當被取代時，其可以在任何可使用的連接點被取代，取代基較佳選自D原子、鹵素、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、環烷基氧基、雜環基氧基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個。
術語“烯基”指分子中含有至少一個碳碳雙鍵的烷基，其中烷基的定義如上所述，其具有2至12個(例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個)碳原子(即C2-12烯基)。該烯基較佳具有2至6個碳原子的烯基(即C2-6烯基)。非限制性的實例包括：乙烯基、丙烯基、異丙烯基、丁烯基等。烯基可以是取代的或非取代的，當被取代時，其可以在任何可使用的連接點被取代，取代基較佳選自D原子、烷氧基、鹵素、鹵烷基、鹵烷氧基、環烷基氧基、雜環基氧基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個。
術語“炔基”指分子中含有至少一個碳碳三鍵的烷基，其中烷基的定義如上所述，其具有2至12個(例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12 個)碳原子(即C2-12炔基)。該炔基較佳具有2至6個碳原子的炔基(即C2-6炔基)。非限制性的實例包括：乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基等。炔基可以是取代的或非取代的，當被取代時，其可以在任何可使用的連接點被取代，取代基較佳選自D原子、烷氧基、鹵素、鹵烷基、鹵烷氧基、環烷基氧基、雜環基氧基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個。
術語“烷氧基”指-O-(烷基)，其中烷基的定義如上所述。非限制性的實例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基和丁氧基等。烷氧基可以是取代的或非取代的，當被取代時，其可以在任何可使用的連接點被取代，取代基較佳選自D原子、鹵素、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、環烷基氧基、雜環基氧基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個。
術語“環烷基”指飽和或部分不飽和的單環全碳環(即單環環烷基)或多環系統(即多環環烷基)，其具有3至20個(例如3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個)環原子(即3至20員環烷基)。該環烷基較佳具有3至12個環原子的環烷基(即3至12員環烷基)，更佳具有3至8個環原子的環烷基(即3至8員環烷基，例如C3-7環烷基)，最佳具有3至6個環原子的環烷基(即3至6員環烷基，例如C3-6環烷基)。
該單環環烷基，非限制性的實例包括：環丙基、環丁基、環戊基、環戊烯基、環己基、環己烯基、環己二烯基、環庚基、環庚三烯基和環辛基等。
該多環環烷基包括：螺環烷基、稠環烷基和橋環烷基。
術語“螺環烷基”指環之間共用一個碳原子(稱螺原子)的多環系統，其環內可以含有一個或多個雙鍵，或其環內可以含有一個或多個選自氮、氧 和硫的雜原子(該氮可視需要被氧化，即形成氮氧化物；該硫可視需要被氧化，即形成亞碸或碸，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-)，條件是至少含有一個全碳環且連接點在該全碳環上，其具有5至20個(例如5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個)環原子(即5至20員螺環烷基)。該螺環烷基較佳具有6至14個環原子的螺環烷基(即6至14員螺環烷基)，更佳具有7至10個環原子的螺環烷基(即7至10員螺環烷基)。該螺環烷基包括單螺環烷基和多螺環烷基(如雙螺環烷基等)，較佳單螺環烷基或雙螺環烷基，更佳3員/4員、3員/5員、3員/6員、4員/4員、4員/5員、4員/6員、5員/3員、5員/4員、5員/5員、5員/6員、5員/7員、6員/3員、6員/4員、6員/5員、6員/6員、6員/7員、7員/5員或7員/6員單螺環烷基。非限制性的實例包括：
Figure 111137361-A0202-12-0077-616
，其連接點可在任意位置；
Figure 111137361-A0202-12-0077-615
術語“稠環烷基”指環之間共享毗鄰的兩個碳原子的多環系統，其為單環環烷基與一個或多個單環環烷基稠合，或者單環環烷基與雜環基、芳基或雜芳基中的一個或多個稠合，其中連接點在單環環烷基上，其環內可以含有一個或多個雙鍵，且具有5至20個(例如5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個)環原子(即5至20員稠環烷基)。該稠環烷基較佳具有6至14個環原子的稠環烷基(即6至14員稠環烷基)，更佳具有7至10 個環原子的稠環烷基(即7至10員稠環烷基)。該稠環烷基包括雙環稠環烷基和多環稠環烷基(如三環稠環烷基、四環稠環烷基等)，較佳雙環稠環烷基或三環稠環烷基，更佳3員/4員、3員/5員、3員/6員、4員/4員、4員/5員、4員/6員、5員/3員、5員/4員、5員/5員、5員/6員、5員/7員、6員/3員、6員/4員、6員/5員、6員/6員、6員/7員、7員/5員或7員/6員雙環稠環烷基。非限制性的實例包括：
Figure 111137361-A0202-12-0078-619
，其連接點 可在任意位置；
Figure 111137361-A0202-12-0078-617
術語“橋環烷基”指環之間共用兩個不直接連接的碳原子的全碳多環系統，其環內可以含有一個或多個雙鍵，且具有5至20個(例如5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個)碳原子(即5至20員橋環烷基)。該橋環烷基較佳具有6至14個碳原子的橋環烷基(即6至14員橋環烷基)，更佳具有7至10個碳原子的橋環烷基(即7至10員橋環烷基)。該橋環烷基包括雙環橋環烷基和多環橋環烷基(如三環橋環烷基、四環橋環烷基等)，較佳雙環橋環烷基或三環橋環烷基。非限制性的實例包括：
Figure 111137361-A0202-12-0078-618
，其連接點可在任意位置。
環烷基可以是取代的或非取代的，當被取代時，其可以在任何可使用的連接點被取代，取代基較佳選自D原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、環烷基氧基、雜環基氧基、羥基、羥烷基、側氧基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個。
術語“雜環基”指飽和或部分不飽和的單環雜環(即單環雜環基)或多環雜環系統(即多環雜環基)，其環內至少含有一個(例如1、2、3或4個)選自氮、氧和硫的雜原子(該氮可視需要被氧化，即形成氮氧化物；該硫可視需要被氧化，即形成亞碸或碸，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-)，且具有3至20個(例如3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個)環原子(即3至20員雜環基)。該雜環基較佳具有3至12個環原子的雜環基(即3至12員雜環基)；進一步佳具有3至8個環原子的雜環基(即3至8員雜環基)；更佳具有3至6個環原子的雜環基(即3至6員雜環基)；最佳具有5或6個環原子的雜環基(即5或6員雜環基)。
該單環雜環基，非限制性的實例包括：吡咯烷基、四氫吡喃基、1,2,3,6-四氫吡啶基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、硫代嗎啉基和高哌嗪基等。
該多環雜環基包括螺雜環基、稠雜環基和橋雜環基。
術語“螺雜環基”指環之間共用一個原子(稱螺原子)的多環雜環系統，其環內可以含有一個或多個雙鍵，且其環內至少含有一個(例如1、2、3或4個)選自氮、氧和硫的雜原子(該氮可視需要被氧化，即形成氮氧化物；該硫可視需要被氧化，即形成亞碸或碸，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-)，條件是至少含有一個單環雜環基且連接點在該單環雜環基上，其具有5至20個(例如5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個)環原子(即 5至20員螺雜環基)。該螺雜環基較佳具有6至14個環原子的螺雜環基(即6至14員螺雜環基)，更佳具有7至10個環原子的螺雜環基(即7至10員螺雜環基)。該螺雜環基包括單螺雜環基和多螺雜環基(如雙螺雜環基等)，較佳單螺雜環基或雙螺雜環基，更佳3員/4員、3員/5員、3員/6員、4員/4員、4員/5員、4員/6員、5員/3員、5員/4員、5員/5員、5員/6員、5員/7員、6員/3員、6員/4員、6員/5員、6員/6員、6員/7員、7員/5員或7員/6員單螺雜環基。非限制性的實例包括：
Figure 111137361-A0202-12-0080-620
術語“稠雜環基”指環之間共享毗鄰的兩個原子的多環雜環系統，其環內可以含有一個或多個雙鍵，且其環內至少含有一個(例如1、2、3或4個)選自氮、氧和硫的雜原子(該氮可視需要被氧化，即形成氮氧化物；該硫可視需要被氧化，即形成亞碸或碸，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-)，其為單環雜環基與一個或多個單環雜環基稠合，或者單環雜環基與環烷基、芳基或雜芳基中的一個或多個稠合，其中連接點在單環雜環基上，且具有5至20個(例如5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個)環原子(即5至20員稠雜環基)。該稠雜環基較佳具有6至14個環原子的稠雜環基(即6至14員稠雜環基)，更佳具有7至10個環原子的稠雜環基(即7至10員稠雜環基)。該稠雜環基包括雙環和多環稠雜環基(如三環稠雜環基、四環稠雜環基等)，較佳雙環稠雜環基或三環稠雜環基，更佳3員/4員、3員/5員、3員/6員、4員/4員、4員/5員、4員/6員、5員/3員、5員/4員、5員/5員、5員/6員、5員/7員、 6員/3員、6員/4員、6員/5員、6員/6員、6員/7員、7員/5員或7員/6員雙環稠雜環基。非限制性的實例包括：
Figure 111137361-A0202-12-0081-621
術語“橋雜環基”指環之間共用兩個不直接連接的原子的多環雜環系統，其環內可以含有一個或多個雙鍵，並且其環內至少含有一個(例如1、2、3或4個)選自氮、氧和硫的雜原子(該氮可視需要被氧化，即形成氮氧化物；該硫可視需要被氧化，即形成亞碸或碸，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-)，其具有5至20個(例如5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個)環原子(即5至20員橋雜環基)。該橋雜環基較佳具有6至14個環原子的橋雜環基(即6至14員橋雜環基)，更佳具有7至10個環原子的橋雜環基(即7至10員橋雜環基)。根據組成環的數目可以分為雙環橋雜環基和多環橋雜環基(如三環橋雜環基、四環橋雜環基等)，較佳雙環橋雜環基或三環橋雜環基。非限制性的實例包括：
Figure 111137361-A0202-12-0081-622
雜環基可以是取代的或非取代的，當被取代時，其可以在任何可使用的連接點被取代，取代基較佳選自D原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、環烷基氧基、雜環基氧基、羥基、羥烷基、側氧基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個。
術語“芳基”指具有共軛的π電子體系的單環全碳芳環(即單環芳基)或多環芳環系統(即多環芳基)，其具有6至14個(例如6、7、8、9、10、11、12、13或14個)環原子(即6至14員芳基)。該芳基較佳具有6至10個環原子的芳基(即6至10員芳基)。該單環芳基，例如苯基。該多環芳基，非限制性的實例包括：萘基、蒽基、菲基等。該多環芳基還包括苯基與雜環基或環烷基中的一個或多個稠合，或萘基與雜環基或環烷基中的一個或多個稠合，其中連接點在苯基或萘基上，並且在這種情況下，環原子個數繼續表示多環芳環系統中的環原子個數，非限制性的實例包括：
Figure 111137361-A0202-12-0082-623
芳基可以是取代的或非取代的，當被取代時，其可以在任何可使用的連接點被取代，取代基較佳選自D原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、環烷基氧基、雜環基氧基、羥基、羥烷基、側氧基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個。
術語“雜芳基”指具有共軛的π電子體系的單環雜芳環(即單環雜芳基)或多環雜芳環系統(即多環雜芳基)，其環內至少含有一個(例如1、2、3或4個)選自氮、氧和硫的雜原子(該氮可視需要被氧化，即形成氮氧化物；該硫可視需要被氧化，即形成亞碸或碸，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-)， 其具有5至14個(例如5、6、7、8、9、10、11、12、13或14個)環原子(即5至14員雜芳基)。該雜芳基較佳具有5至10個環原子的雜芳基(即5至10員雜芳基)，更佳具有5或6個環原子的雜芳基(即5或6員雜芳基)。
該單環雜芳基，非限制性的實例包括：呋喃基、噻吩基、噻唑基、異噻唑基、噁唑基、異噁唑基、噁二唑基、噻二唑基、咪唑基、吡唑基、***基、四唑基、呋咱基、吡咯基、N-烷基吡咯基、吡啶基、嘧啶基、吡啶酮基、N-烷基 吡啶酮(如
Figure 111137361-A0202-12-0083-625
等)、吡嗪基、噠嗪基等。
該多環雜芳基，非限制性的實例包括：吲哚基、吲唑基、喹啉基、異喹啉基、喹喔啉基、酞嗪基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、喹唑啉基、苯并噻唑基、哢唑基等。該多環雜芳基還包括單環雜芳基與一個或多個芳基稠合，其中連接點在芳香環上，並且在這種情況下，環原子個數繼續表示多環雜芳環系統中的環原子個數。該多環雜芳基還包括單環雜芳基與環烷基或雜環基中的一個或多個稠合，其中連接點在單環雜芳環上，並且在這種情況下，環原子個數繼續表示多環雜芳環系統中的環原子個數。非限制性的實例包括：
Figure 111137361-A0202-12-0083-624
雜芳基可以是取代的或非取代的，當被取代時，其可以在任何可使用的連接點被取代，取代基較佳選自D原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、 鹵烷氧基、環烷基氧基、雜環基氧基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個。
術語“胺基保護基”是指為了使分子其它部位進行反應時胺基保持不變，在胺基上引入的易於脫去的基團。非限制性的實例包括：(三甲基矽)乙氧基甲基、四氫吡喃基、第三丁氧羰基(Boc)、苄氧羰基(Cbz)、易甲氧羰基(Fmoc)、烯丙氧羰基(Alloc)、三甲基矽乙氧羰基(Teoc)、甲氧羰基、乙氧羰基、鄰苯二甲醯基(Pht)、對甲苯磺醯基(Tos)、三氟乙醯基(Tfa)、三苯甲基(Trt)、2,4-二甲氧基苄基(DMB)、乙醯基、苄基、烯丙基、對甲氧苄基等。
術語“羥基保護基”是指在羥基上引入的易於脫去的基團，用於阻斷或保護羥基而在化合物的其它官能團上進行反應。非限制性的實例包括：三甲基矽基(TMS)、三乙基矽基(TES)、三異丙基矽基(TIPS)、第三丁基二甲基矽基(TBS)、第三丁基二苯基矽基(TBDPS)、甲基、第三丁基、烯丙基、苄基、甲氧基甲基(MOM)、乙氧基乙基、2-四氫吡喃基(THP)、甲醯基、乙醯基、苯甲醯基、對硝基苯甲醯基等。
術語“環烷基氧基”指環烷基-O-，其中環烷基如上所定義。
術語“雜環基氧基”指雜環基-O-，其中雜環基如上所定義。
術語“芳基氧基”指芳基-O-，其中芳基如上所定義。
術語“雜芳基氧基”指雜芳基-O-，其中雜芳基如上所定義。
術語“烷硫基”指烷基-S-，其中烷基如上所定義。
術語“鹵烷基”指烷基被一個或多個鹵素取代，其中烷基如上所定義。
術語“鹵烷氧基”指烷氧基被一個或多個鹵素取代，其中烷氧基如上所定義。
術語“氘代烷基”指烷基被一個或多個氘原子取代，其中烷基如上所定義。
術語“羥烷基”指烷基被一個或多個羥基取代，其中烷基如上所定義。
術語“亞甲基”指=CH2。
術語“鹵素”指氟、氯、溴或碘。
術語“羥基”指-OH。
術語“巰基”指-SH。
術語“胺基”指-NH2。
術語“氰基”指-CN。
術語“硝基”指-NO2。
術語“側氧”或“側氧基”指“=O”。
術語“羰基”指C=O。
術語“羧基”指-C(O)OH。
術語“羧酸酯基”指-C(O)O(烷基)、-C(O)O(環烷基)、(烷基)C(O)O-或(環烷基)C(O)O-，其中烷基和環烷基如上所定義。
本揭露化合物可以存在特定的立體異構體形式。術語“立體異構體”是指結構相同但原子在空間中的排列不同的異構體。其包括順式和反式(或Z和E)異構體、(-)-和(+)-異構體、(R)-和(S)-對映異構體、非對映異構體、(D)-和(L)-異構體、互變異構體、阻轉異構體、構象異構體及其混合物(如外消旋體、 非對映異構體的混合物)。本揭露化合物中的取代基可以存在另外的不對稱原子。所有這些立體異構體以及它們的混合物，均包括在本揭露的範圍內。可以藉由手性合成、手性試劑或者其他常規技術製備光學活性的(-)-和(+)-異構體、(R)-和(S)-對映異構體以及(D)-和(L)-異構體。本揭露某化合物的一種異構體，可以藉由不對稱合成或者手性助劑來製備，或者，當分子中含有鹼性官能團(如胺基)或酸性官能團(如羧基)時，與適當的光學活性的酸或鹼形成非對映異構體的鹽，然後藉由本領域所公知的常規方法進行非對映異構體拆分，得到純的異構體。此外，對映異構體和非對映異構體的分離通常是藉由色譜法完成。
本揭露所述化合物的化學結構中，鍵“
Figure 111137361-A0202-12-0086-235
”表示未指定構型，即如果化學結構中存在手性異構體，鍵“
Figure 111137361-A0202-12-0086-236
”可以為“
Figure 111137361-A0202-12-0086-218
”或“
Figure 111137361-A0202-12-0086-219
”，或者同時包含“
Figure 111137361-A0202-12-0086-220
”和“
Figure 111137361-A0202-12-0086-221
”兩種構型。對於所有的碳-碳雙鍵，即使僅命名了一個構型，Z型和E型均包括在內。
本揭露的化合物可以以不同的互變異構體形式存在，並且所有這樣的形式包含在本揭露的範圍內。術語“互變異構體”或“互變異構體形式”是指平衡存在並且容易從一種異構形式轉化為另一種異構形式的結構異構體。其包括所有可能的互變異構體，即以單一異構體的形式或以該互變異構體的任意比例的混合物的形式存在。非限制性的實例包括：酮-烯醇、亞胺-烯胺、內醯胺-內醯亞胺等。內醯胺-內醯亞胺平衡實例是在如下所示的A和B之間：
Figure 111137361-A0202-12-0086-626
如當提及吡唑基時，應理解為包括如下兩種結構中的任何一種或兩種互變異構體的混合物：
Figure 111137361-A0202-12-0087-627
所有的互變異構形式在本揭露的範圍內，且化合物的命名不排除任何互變異構體。
本揭露的化合物包括其化合物的所有合適的同位素衍生物。術語“同位素衍生物”是指至少一個原子被具有相同原子序數但原子質量不同的原子替代的化合物。可引入到本揭露化合物中的同位素的實例包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯、溴和碘等的穩定和放射性的同位素，例如分別為2H(氘，D)、3H(氚，T)、11C、13C、14C、15N、17O、18O、32p、33p、33S、34S、35S、36S、18F、36Cl、82Br、123I、124I、125I、129I和131I等，較佳氘。
相比於未氘代藥物，氘代藥物有降低毒副作用、增加藥物穩定性、增強療效、延長藥物生物半衰期等優勢。本揭露的化合物的所有同位素組成的變換，無論放射性與否，都包括在本揭露的範圍之內。與碳原子連接的各個可用的氫原子可獨立地被氘原子替換，其中氘的替換可以是部分或完全的，部分氘的替換是指至少一個氫被至少一個氘替換。
當一個位置被特別地指定為氘(D)時，該位置應理解為具有大於氘的天然豐度(其為0.015%)至少1000倍的豐度的氘(即至少15%的氘摻入)。示例中化合物的具有大於氘的天然豐度可以是至少1000倍的豐度的氘(即至少15%的氘摻入)、至少2000倍的豐度的氘(即至少30%的氘摻入)、至少3000倍的豐度的氘(即至少45%的氘摻入)、至少3340倍的豐度的氘(即至少50.1%的 氘摻入)、至少3500倍的豐度的氘(即至少52.5%的氘摻入)、至少4000倍的豐度的氘(即至少60%的氘摻入)、至少4500倍的豐度的氘(即至少67.5%的氘摻入)、至少5000倍的豐度的氘(即至少75%的氘摻入)、至少5500倍的豐度的氘(即至少82.5%的氘摻入)、至少6000倍的豐度的氘(即至少90%的氘摻入)、至少6333.3倍的豐度的氘(即至少95%的氘摻入)、至少6466.7倍的豐度的氘(即至少97%的氘摻入)、至少6600倍的豐度的氘(即至少99%的氘摻入)、至少6633.3倍的豐度的氘(即至少99.5%的氘摻入)或更高豐度的氘。
“視需要的”或“視需要”是指隨後所描述的事件或環境可以但不必然發生，其包括該事件或環境發生或不發生兩種情形。例如“視需要被鹵素或者氰基取代的C1-6烷基”包括烷基被鹵素或者氰基取代的情形和烷基不被鹵素和氰基取代的情形。
“取代”或“取代的”指基團中的一個或多個氫原子，較佳1~6個，更佳1~3個氫原子彼此獨立地被相應數目的取代基取代。所屬技術領域具有通常知識者能夠在不付出過多努力的情況下(藉由實驗或理論)確定可能或不可能的取代。例如，具有游離氫的胺基或羥基與具有不飽和鍵的碳原子(如烯)結合時可能是不穩定的。
“醫藥組成物”表示含有一種或多種本文所述化合物或其生理學上可藥用的鹽與其他化學組分的混合物，以及其他組分例如生理學可藥用的載體和賦形劑。醫藥組成物的目的是促進對生物體的給藥，利於活性成分的吸收進而發揮生物活性。
“可藥用的鹽”是指本揭露化合物的鹽，可選自無機鹽或有機鹽。這類鹽用於哺乳動物體內時具有安全性和有效性，且具有應有的生物活性。可以 在化合物的最終分離和純化過程中，或藉由使合適的基團與合適的鹼或酸反應來單獨製備。通常用於形成藥學上可接受的鹽的鹼包括無機鹼，例如氫氧化鈉和氫氧化鉀，以及有機鹼，例如胺。通常用於形成藥學上可接受的鹽的酸包括無機酸以及有機酸。
針對藥物或藥理學活性劑而言，術語“治療有效量”或“抑制有效量”是指無毒的但能達到預期效果的藥物或藥劑的足夠用量。有效量的確定因人而異，取決於受體的年齡和一般情況，也取決於具體的活性物質，個案中合適的有效量可以由所屬技術領域具有通常知識者根據常規試驗確定。
本文所用的術語“藥學上可接受的”是指這些化合物、材料、組成物和/或劑型，在合理的醫學判斷範圍內，適用於與患者組織接觸而沒有過度毒性、刺激性、過敏反應或其他問題或併發症，具有合理的獲益/風險比，並且對預期的用途是有效。
本文所使用的，單數形式的“一個”、“一種”和“該”包括複數引用，反之亦然，除非上下文另外明確指出。
當將術語“約”應用於諸如pH、濃度、溫度等的參數時，表明該參數可以變化±10%，並且有時更佳地在±5%之內。如所屬技術領域具有通常知識者將理解的，當參數不是關鍵時，通常僅出於說明目的給出數字，而不是限制。
實施例與測試例
以下結合實施例進一步描述本揭露，但這些實施例並非限制本揭露的範圍。
本揭露實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，或按照原料或商品製造廠商所建議的條件。未註明具體來源的試劑，為市場購買的常規試劑。
一、抗體實施例
以下抗體按抗體常規方法進行製備，例如可進行載體構建後，轉染真核細胞如HEK293細胞(Life Technologies Cat.No.11625019)，純化表達。
以下為抗HER2抗體Trastuzumab的序列(WO2020/063676A1的Trastuzumab)：
Ab1輕鏈
Figure 111137361-A0202-12-0090-628
SEQ ID NO：1
Ab1重鏈
Figure 111137361-A0202-12-0090-629
Figure 111137361-A0202-12-0091-630
SEQ ID NO：2
以下為抗Claudin18.2抗體的序列(WO 2021/115426 A1的抗Claudin18.2抗體h1902-5)：
Ab2輕鏈
Figure 111137361-A0202-12-0091-631
SEQ ID NO：3
Ab2重鏈
Figure 111137361-A0202-12-0091-632
SEQ ID NO：4
以下為抗HER3抗體的序列(PCT/CN2021/123733的抗HER3抗體HER3-29)：
Ab3輕鏈：
Figure 111137361-A0202-12-0092-633
SEQ ID NO：5
Ab3重鏈：
Figure 111137361-A0202-12-0092-634
SEQ ID NO：6
以下為構建Claudin18.2高表達及中表達NUGC4細胞株的claudin18.2全長質粒序列：
Figure 111137361-A0202-12-0092-635
Figure 111137361-A0202-12-0093-636
SEQ ID NO：7
二、化合物實施例
化合物的結構是藉由核磁共振(NMR)或/和質譜(MS)來確定的。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的單位給出。NMR的測定是用Bruker AVANCE-400核磁儀或Bruker AVANCE NEO 500M，測定溶劑為氘代二甲基亞碸(DMSO-d 6 )、氘代氯仿(CDCl3)、氘代甲醇(CD3OD)，內標為四甲基矽烷(TMS)。
MS的測定用Agilent 1200/1290 DAD-6110/6120 Quadrupole MS液質聯用儀(生產商：Agilent，MS型號：6110/6120 Quadrupole MS)，waters ACQuity UPLC-QD/SQD(生產商：waters，MS型號：waters ACQuity Qda Detector/waters SQ Detector)，THERMO Ultimate 3000-Q Exactive(生產商：THERMO，MS型號：THERMO Q Exactive)。
高效液相色譜法(HPLC)分析使用Agilent HPLC 1200DAD、Agilent HPLC 1200VWD和Waters HPLC e2695-2489高壓液相色譜儀。
手性HPLC分析測定使用Agilent 1260 DAD高效液相色譜儀。
高效液相製備色譜法使用Waters 2545-2767、Waters 2767-SQ Detecor2、Shimadzu LC-20AP和Gilson GX-281製備型色譜儀。
手性製備色譜法使用Shimadzu LC-20AP製備型色譜儀。
CombiFlash快速製備儀使用Combiflash Rf200(TELEDYNE ISCO)。
薄層層析矽膠板使用煙臺黃海HSGF254或青島GF254矽膠板，薄層色譜法(TLC)使用的矽膠板採用的規格是0.15mm~0.2mm，薄層層析分離純化產品採用的規格是0.4mm~0.5mm。
矽膠管柱色譜法一般使用煙臺黃海矽膠200~300目矽膠為載體。
激酶平均抑制率及IC50值的測定用NovoStar酶標儀(德國BMG公司)。
本揭露的已知的起始原料可以採用或按照本領域已知的方法來合成，或可購買自ABCR GmbH & Co.KG、Acros Organics、Aldrich Chemical Company、韶遠化學科技(Accela ChemBio Inc)、達瑞化學品等公司。
實施例中無特殊說明，反應能夠均在氬氣氛或氮氣氛下進行。
氬氣氛或氮氣氛是指反應瓶連接一個約1L容積的氬氣或氮氣氣球。
氫氣氛是指反應瓶連接一個約1L容積的氫氣氣球。
加壓氫化反應使用Parr 3916EKX型氫化儀和清藍QL-500型氫氣發生器或HC2-SS型氫化儀。
氫化反應通常抽真空，充入氫氣，重複操作3次。
微波反應使用CEM Discover-S 908860型微波反應器。
實施例中無特殊說明，溶液是指水溶液。
實施例中無特殊說明，反應的溫度為室溫，為20℃~30℃。
實施例中的反應進程的監測採用薄層色譜法(TLC)，反應所使用的展開劑，純化化合物採用的管柱層析的沖提劑的體系和薄層色譜法的展開劑體系包括：A：二氯甲烷/甲醇體系，B：正己烷/乙酸乙酯體系，溶劑的體積比根據化合物的極性不同而進行調節，也可以加入少量的三乙胺和醋酸等鹼性或酸性試劑進行調節。
實施例2-1 1
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮1
Figure 111137361-A0202-12-0095-637
第一步
(2R,11aS)-8-(苄氧基)-2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-甲氧基-1,2,3,10,11,11a-六氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-5-酮1b
將(2R,11aS)-8-(苄氧基)-2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-甲氧基-1,2,3,11a-四氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-5,11(10H)-二酮1a(8.0g，16.58mmol，採用專利申請“WO2016/149546 A1中說明書第75頁的實施例3，化合物16”公開的方法製備而得)置於三口反應瓶中，加入無水四氫呋喃(50mL)溶解，反應體系用氮氣置換3次，冰水浴冷卻至0~5℃，劇烈攪拌下滴加硼烷四氫呋喃絡合物(1M，163mL，163mmol)，加畢，撤去冰水浴，升至室溫攪拌2小時。冰水浴冷卻至0~5℃，攪拌下緩慢滴加無水甲醇(200mL)淬滅反應，加畢，撤去冰水浴，升至室溫繼續攪拌2小時。減壓濃縮除去有機溶劑，殘餘物中加入水(100mL)，用二氯甲烷萃取(60mL×3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液(80mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物1b(5.6g，產率：72.1%)。
MS m/z(ESI)：469.2[M+1]。
第二步
(2R,11aS)-2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-8-羥基-7-甲氧基-1,2,3,10,11,11a-六氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-5-酮1c
將1b(4.6g，9.81mmol)溶於無水四氫呋喃(100mL)中，加入鈀碳(920mg，含量10%，乾型)，氫氣置換三次，加熱至45℃，攪拌反應3小時。反應液過濾，濾餅用無水四氫呋喃(50mL)淋洗，濾液減壓濃縮，真空乾燥，得到粗品標題產物1c(3.6g，產率：96.9%)。產物不經純化直接用於下一步反應。
MS m/z(ESI)：379.2[M+1]。
第三步
(2R,11aS)-8-((5-溴戊基)氧基)-2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-甲氧基-1,2,3,10,11,11a-六氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-5-酮1d
將粗品1c(1.7g，4.50mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(20mL)中，加入1,5-二溴戊烷(5.2g，22.62mmol)和無水碳酸鉀(744mg，5.39mmol)，室溫攪拌5小時。向反應液中加入水(100mL)，用乙酸乙酯萃取(60mL×3)，合併有機相，依次用水(50mL×3)和飽和氯化鈉溶液(50mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物1d(1.7g，產率：71.7%)。
MS m/z(ESI)：527.2[M+1]。
第四步
(2R,11aS)-8-((5-溴戊基)氧基)-2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-甲氧基-5-側氧-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-10(5H)-羧酸烯丙酯1e
將1d(1.70g，3.23mmol)溶於無水二氯甲烷(30mL)中，冰水浴冷卻，依次加入吡啶(440mg，5.56mmol)和氯甲酸烯丙酯(1.34g，11.12mmol)，冰浴下攪拌20分鐘。向反應液中加入二氯甲烷(30mL)稀釋，再加入10%檸檬酸水溶液(20mL)，攪拌兩分鐘後靜置分層，保留有機相。有機相用飽和氯化鈉溶液(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物1e(1.89g，產率：95.8%)。
MS m/z(ESI)：611.3[M+1]。
第五步
(2R,11aS)-8-((5-溴戊基)氧基)-2-羥基-7-甲氧基-5-側氧-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-10(5H)-羧酸烯丙酯1f
將1e(1.89g，3.10mmol)溶於無水四氫呋喃(30mL)中，冰水浴冷卻，加入四丁基氟化銨的四氫呋喃溶液(1M，6.2mL，6.20mmol)，加畢，撤去冰水浴，室溫攪拌20分鐘。加入乙酸乙酯(60mL)稀釋，依次用飽和氯化銨水溶液(30mL×5)和飽和氯化鈉水溶液洗滌(30mL×2)。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化，得到標題產物1f(1.39g，產率：90.4%)。
MS m/z(ESI)：497.1[M+1]。
第六步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-2,5-二側氧-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-10(5H)-羧酸烯丙酯1g
將1f(1.39g，2.80mmol)溶於無水二氯甲烷(30mL)中，冰水浴冷卻，依次加入碳酸氫鈉(1.41g，16.78mmol)和戴斯-馬丁氧化劑(3.56g，8.39mmol)，加畢，撤去冰水浴，升至室溫攪拌4小時。加入飽和碳酸氫鈉水溶液(30mL)淬滅，用二氯甲烷萃取(30mL×3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物1g(1.14g，產率：82.4%)。
MS m/z(ESI)：495.1[M+1]。
第七步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-5-側氧-2-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)-11,11a-二氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-10(5H)-羧酸烯丙酯1h
將1g(960mg，1.94mmol)溶於無水二氯甲烷(20mL)中，用乙腈-乾冰浴冷卻至-40℃，滴加2,6-二甲基吡啶(624mg，5.83mmol)，攪拌5分鐘，再加入三氟甲磺酸酐(1.09g，3.88mmol)，加畢，在-40℃繼續攪拌1小時。加入飽和氯化銨水溶液(20mL)淬滅，用二氯甲烷萃取(30mL×3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物1h(764mg，產率：62.9%)。
MS m/z(ESI)：627.0[M+1]。
第八步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1,10,11,11a-四氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-5-酮1i
將1h(188mg，0.30mmol)溶於四氫呋喃(5mL)中，依次加入4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸(198mg，0.90mmol，韶遠)、1,1-雙(二苯基膦)二茂鐵二氯化鈀(66mg，0.09mmol，adamas)、碳酸鉀(207mg，1.50mmol)和水(0.5mL)，反應體系用氮氣置換三次，室溫攪拌12小時。加入二氯甲烷(50mL)稀釋，用無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化，得到含有標題產物1i的混合物。將所得混合物溶於無水二氯甲烷(5mL)，加入四(三苯基膦)鈀(104mg，0.09mmol)和對甲苯磺酸(155mg，0.90mmol)，氮氣置換三次，室溫攪拌12小時。反應液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化，得到標題產物1i(120mg，產率：70.3%)。
MS m/z(ESI)：569.2[M+1]。
第九步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-側氧-11,11a-二氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-10(5H)-羧酸烯丙酯1j
將1i(120mg，0.21mmol)溶於無水二氯甲烷(3mL)中，冰水浴冷卻，依次加入吡啶(50mg，0.63mmol)和氯甲酸烯丙酯(102mg，0.85mmol)，冰浴下攪拌20分鐘。加入二氯甲烷(30mL)稀釋，再加入飽和氯化銨水溶液(20mL)，攪拌兩分鐘後靜置分層，保留有機相，水相用二氯甲烷萃取(30mL×3)，合併有機相。有機相用飽和氯化鈉溶液(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化，得到標題產物1j(66mg，產率：47.9%)。
MS m/z(ESI)：653.4[M+1]。
第十步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯1l
將1j(66mg，0.10mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(3mL)中，加入(11aS)-11-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-8-羥基-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯1k(66mg，0.12mmol，採用專利申請“CN 111164208 A中說明書第223頁的實施例45”公開的方法製備而得)，再加入無水碳酸鉀(56mg，0.41mmol)，室溫攪拌12小時。向反應液中加水(20mL)，用乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合併有機相， 依次用水(20mL×3)和飽和氯化鈉溶液(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物1l(50mg，產率：46.7%)。
MS m/z(ESI)：1061.7[M+1]。
第十一步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羥基-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯1m
將1l(50mg，0.047mmol)溶於無水四氫呋喃(3mL)中，依次加入冰乙酸(17mg，0.28mmol)和四丁基氟化銨的四氫呋喃溶液(1M，0.24mL，0.24mmol)，加畢，室溫攪拌2小時。加入乙酸乙酯(30mL)稀釋，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液(20mL×2)和飽和氯化鈉水溶液(20mL×2)洗滌。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物1m(15mg，產率：33.6%)。
MS m/z(ESI)：947.9[M+1]。
第十二步
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮1
將1m(15mg，0.016mmol)溶於無水二氯甲烷(2mL)，依次加入吡咯烷(11.5mg，0.16mmol)和四(三苯基膦)鈀(1.85mg，0.0016mmol)，氮氣氛圍下攪拌30分鐘。減壓濃縮除去有機溶劑，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物1(10mg，產率：83.0%)。
MS m/z(ESI)：761.4[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ 7.92(d,1H),7.42-7.40(m,1H),7.36-7.29(m,4H),7.22-7.18(m,2H),6.94(d,2H),6.85(s,1H),6.64(d,1H),6.52(d,1H),6.32(s,1H),5.32(t,1H),4.20-4.17(m,1H),4.14-4.09(m,2H),4.04-4.00(m,1H),3.97-3.93(m,2H),3.84-3.78(m,4H),3.67(s,3H),3.58-3.48(m,5H),2.78-2.75(m,1H),2.74-2.72(m,1H),2.66-2.63(m,2H),2.38-2.36(m,2H),1.85-1.79(m,4H),1.61-1.58(m,2H),1.49-1.44(m,3H),0.88-0.84(m,4H)。
實施例2-2 2
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-嗎啉基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮2
Figure 111137361-A0202-12-0102-638
Figure 111137361-A0202-12-0103-639
第一步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-2-(4-嗎啉基苯基)-1,10,11,11a-四氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-5-酮2a
將實施例2-1 1第八步原料4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸替換為(4-嗎啉基苯基)苯硼酸，採用相同的條件，得到標題產物2a(42mg，產率：23.7%)。
MS m/z(ESI)：556.4[M+1]。
第二步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-2-(4-嗎啉基苯基)-5-側氧-11,11a-二氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-10(5H)-羧酸烯丙酯2b
將實施例2-1 1第九步原料1i替換為2a(42mg，0.075mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物2b(45mg，產率：93.1%)。
MS m/z(ESI)：640.2[M+1]。
第三步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-嗎啉基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯2c
將實施例2-1 1第十步原料1j替換為2b(45mg，0.07mmol)，採用相同的反應條件條件，不經純化得到粗品標題產物2c(89mg)，產物不經純化直接進行下一步反應。
MS m/z(ESI)：1048.4[M+1]。
第四步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-嗎啉基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羥基-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯2d
將實施例2-1 1第十一步原料1l替換為粗品2c(89mg)，採用相同的反應條件，得到標題產物2d(45mg，產率：68.4%)。
MS m/z(ESI)：934.4[M+1]。
第五步
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-嗎啉基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮2
將實施例2-1 1第十二步原料1m替換為2d(30mg，0.032mmol)採用相同的反應條件，得到標題產物2(22mg，產率：91.6%)。
MS m/z(ESI)：748.7[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 7.92(d,1H),7.41(s,1H),7.34-7.31(m,2H),7.07-7.05(m,1H),6.94-6.90(m,2H),6.86-6.83(m,1H),6.59-6.56(m,1H),6.33-6.30(m,1H),4.21-4.15(m,2H),4.14-4.09(m,1H),4.04-4.01(m,1H),3.96-3.91(m,2H),3.82(s,3H),3.75-3.73(m,4H),3.70(s,3H),3.63-3.59(m,2H),3.57-3.50(m,2H),3.27-3.23(m,2H),3.13-3.10(m,4H),2.77-2.72(m,1H),2.44-2.42(m,1H),2.03-1.98(m,2H),1.84-1.81(m,2H),1.60-1.56(m,2H),0.88-0.83(m,2H),0.69-0.64(m,2H)。
實施例2-3 3
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(環丙基硫基)苯基-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮3
Figure 111137361-A0202-12-0105-640
第一步
((4-環丙基硫基)苯基)硼酸
Figure 111137361-A0202-12-0105-641
將四氫呋喃(1mL)置於反應瓶中，反應體系用氮氣置換三次，用乾冰丙酮浴冷卻至-78℃，滴加2.5M正丁基鋰溶液(1.24mL，3.11mmol)，滴完後攪拌10分鐘。滴加(4-溴苯基)(環丙基)硫烷(437mg，1.91mmol，採用公知的方法“Bioorganic and Medicinal Chemistry,2012,20(14),2982-2991”製備而得)的2mL四氫呋喃溶液，滴完後於-78℃繼續攪拌1小時，滴加硼酸三異丙酯(488mg，2.59mmol)的2mL四氫呋喃溶液，滴完後將反應液升至室溫，繼續攪拌3小時。 向反應液中加入10mL水，攪拌30分鐘，然後加入10mL 1M鹽酸，攪拌30分鐘。反應液減壓濃縮，用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，飽和氯化鈉溶液(20mL)洗滌，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到((4-環丙基硫基)苯基)硼酸(178mg，產率：48.1%)。
MS m/z(ESI)：193.1[M-1]。
採用實施例1的合成路線，將第八步試劑4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸替換為((4-環丙基硫基)苯基)硼酸，製得標題產物3(20mg，總產率：22.5%)。
MS m/z(ESI)：735.2[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 7.91(d,1H),7.56(s,1H),7.42-7.37(m,2H),7.34-7.28(m,3H),7.05(s,1H),6.85-6.81(m,1H),6.59-6.54(m,1H),6.34-6.30(m,1H),4.24-4.08(m,2H),4.05-3.99(m,1H),3.97-3.91(m,2H),3.83-3.77(m,2H),3.72-3.63(m,4H),3.61-3.45(m,3H),3.28-3.21(m,2H),2.76(dd,1H),2.45-2.39(m,1H),2.33-2.24(m,2H),2.07-1.95(m,2H),1.86-1.76(m,3H),1.63-1.52(m,2H),1.35-1.32(m,1H),1.10-1.05(m,2H),0.87-0.81(m,1H),0.70-0.53(m,4H)。
實施例2-4 4
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(1H-吡唑-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮4
Figure 111137361-A0202-12-0106-642
Figure 111137361-A0202-12-0107-643
第一步
(S)-2-(4-(1H-吡唑-1-基)苯基)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-1,10,11,11a-四氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-5-酮4a
將實施例2-1 1第八步原料4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸替換為(4-(1H-吡唑-1-基)苯基)硼酸，採用相同的反應條件，得到標題產物4a(80mg，產率：49.8%)。
MS m/z(ESI)：537.1[M+1]。
第二步
(S)-2-(4-(1H-吡唑-1-基)苯基)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-10(5H)-羧酸烯丙酯4b
將實施例2-1 1第九步原料1i替換為4a(54mg，0.10mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物4b(50mg，產率：80%)。
MS m/z(ESI)：621.2[M+1]。
第三步
(11aS)-8-((5-(((S)-2-(4-(1H-吡唑-1-基)苯基)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯4c
將實施例2-1 1第十步原料1j替換為4b(50mg，0.08mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物4c(51mg，產率：74.6%)。
MS m/z(ESI)：1029.5[M+1]。
第四步
(11aS)-8-((5-(((S)-2-(4-(1H-吡唑-1-基)苯基)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羥基-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯4d
將實施例2-1 1第十一步原料1l替換為4c(51mg，0.05mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物4d(40mg，產率：87.5%)。
MS m/z(ESI)：915.4[M+1]。
第五步
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(1H-吡唑-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷1-5-酮4
將實施例2-1 1第十二步原料1m替換為4d(37mg，0.04mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物4(25mg，產率：85.8%)。
MS m/z(ESI)：729.3[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 8.08(d,1H),7.97(d,2H),7.92(d,1H),7.73-7.67(m,2H),7.64(d,2H),7.33-7.32(m,1H),6.86(s,1H),6.64-6.59(m,1H),6.49-6.41(m,2H),5.34(t,1H),4.28-4.24(m,2H),4.15-4.11(m,1H),4.05-4.01(m,2H),3.97-3.91(m,4H),3.82(s,3H),3.66(s,3H),3.61-3.54(m,1H),2.86-2.82(m,1H),2.66-2.64(m,1H),2.38-2.35(m,1H),2.06-1.96(m,1H),1.87-1.81(m,4H),1.63-1.59(m,2H),0.72-0.59(m,4H)。
實施例2-5 5
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-5-側氧-2-(4-(四氫-2H-吡喃-4-基)苯基)-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮5
Figure 111137361-A0202-12-0109-644
第一步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-2-(4-(四氫-2H-吡喃-4-基)苯基)-1,10,11,11a-四氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-5-酮5a
將實施例2-1 1第八步原料4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸替換為4-(4-四氫吡喃基)苯硼酸頻哪醇酯，採用相同的反應條件，得到標題產物5a(116mg，產率：70%)。
MS m/z：555.2[M+1]。
第二步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-5-側氧-2-(4-(四氫-2H-吡喃-4-基)苯基)-11,11a-二氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-10(5H)-羧酸烯丙酯5b
將實施例2-1 1第九步原料1i替換為5a，採用相同的反應條件，得到標題產物5b(58mg，產率：90.1%)。
MS m/z：639.2[M+1]。
第三步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-5-側氧-2-(4-(四氫-2H-吡喃-4-基)苯基)-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氫雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯5c
將實施例2-1 1第十步原料1j替換為5b，採用相同的反應條件，得到標題產物5c(57mg，產率：60%)。
MS m/z：1047.5[M+1]。
第四步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-5-側氧-2-(4-(四氫-2H-吡喃-4-基)苯基)-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基) 戊基)氧基)-11-羥基-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯5d
將實施例2-1 1第十一步原料1l替換為5c，採用相同的反應條件，得到標題產物5d(37mg，產率：80%)。
MS m/z：933.4[M+1]。
第五步
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-5-側氧-2-(4-(四氫-2H-吡喃-4-基)苯基)-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮5
將實施例2-1 1第十二步原料1m替換為5d，採用相同的反應條件，得到標題產物5(24mg，產率：80%)。
MS m/z：747.4[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 7.90(d,1H),7.52(s,1H),7.36(d,2H),7.32(s,1H),7.28(s,1H),7.21(d,2H),6.83(s,1H),6.31(s,1H),5.31(t,1H),4.22-4.17(m,2H),4.13-4.08(m,1H),4.03-3.99(m,2H),3.97-3.90(m,5H),3.81(s,3H),3.65(s,3H),3.56-3.46(m,4H),2.80-2.70(m,2H),2.65-2.62(m,1H),2.36-2.34(m,1H),2.07-1.93(m,5H),1.84-1.78(m,4H),1.61-1.53(m,2H),0.80-0.61(m,4H)。
實施例2-6 6
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮6
Figure 111137361-A0202-12-0112-645
第一步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-2-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-1,10,11,11a-四氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-5-酮6a
將實施例2-1 1第八步原料4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸替換為(4-(1-甲基哌啶基-4-基)苯基)硼酸，採用相同的反應條件，得到標題產物6a(51mg，產率：30%)。
MS m/z(ESI)：568.2[M+1]。
第二步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-2-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-5-側氧-11,11a-二氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-10(5H)-羧酸烯丙酯6b
將實施例2-1 1第九步原料1i替換為6a(51mg，0.09mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物6b(52mg，產率：89%)。
MS m/z(ESI)：652.2[M+1]。
第三步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯6c
將實施例2-1 1第十步原料1j替換為6b(52mg，0.08mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物6c(42mg，產率：50%)。
MS m/z(ESI)：1060.5[M+1]。
第四步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羥基-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯6d
將實施例2-1 1第十一步原料1l替換為6c(42mg，0.04mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物6d(30mg，產率：80%)。
MS m/z(ESI)：946.5[M+1]。
第五步
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮6
將實施例2-1 1第十二步原料1m替換為6d(30mg，0.032mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物6(19mg，產率：80%)。
MS m/z(ESI)：760.4[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 7.92(d,1H),7.55(s,1H),7.39(d,2H),7.34(s,1H),7.30(s,1H),7.21(d,2H),6.85(s,1H),6.33(s,1H),5.33(t,1H),4.25-4.19(m,2H),4.17-4.10(m,1H),4.05-4.01(m,2H),3.97-3.92(m,5H),3.83(s,3H),3.67(s,3H),3.62-3.48(m,4H),2.80-2.70(m,2H),2.69-2.63(m,1H),2.38-2.36(m,1H),2.03-1.97(m,8H),1.87-1.80(m,4H),1.61-1.53(m,2H),0.82-0.58(m,4H)。
實施例2-7 7
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(2H-1,2,3-***-2-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮7
Figure 111137361-A0202-12-0114-646
第一步
(S)-2-(4-(2H-1,2,3-***-2-基)苯基)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-1,10,11,11a-四氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-5-酮7a
將實施例2-1 1第八步原料4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸替換為(4-(2H-1,2,3-***-2-基)苯基)硼酸，採用相同的反應條件，得到標題產物7a(80mg，產率：49.7%)。
MS m/z(ESI)：538.1[M+1]。
第二步
(S)-2-(4-(2H-1,2,3-***-2-基)苯基)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-10(5H)-羧酸烯丙酯7b
將實施例2-1 1第九步原料1i替換為7a(54mg，0.10mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物7b(50mg，產率：80%)。
MS m/z(ESI)：622.2[M+1]。
第三步
(11aS)-8-((5-(((S)-2-(4-(2H-1,2,3-***-2-基)苯基)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯7c
將實施例2-1 1第十步原料1j替換為7b(50mg，0.08mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物7c(51mg，產率：63%)。
MS m/z(ESI)：1030.5[M+1]。
第四步
(11aS)-8-((5-(((S)-2-(4-(2H-1,2,3-***-2-基)苯基)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧 基)戊基)氧基)-11-羥基-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯7d
將實施例2-1 1第十一步原料1l替換為7c(51mg，0.05mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物7d(37mg，產率：80.8%)。
MS m/z(ESI)：916.4[M+1]。
第五步
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(2H-1,2,3-***-2-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮7
將實施例2-1 1第十二步原料1m替換為7d(37mg，0.04mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物7(25mg，產率：85.7%)。
MS m/z(ESI)：730.3[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 8.13(s,2H),7.99(d,2H),7.92(d,1H),7.70-7.69(m,1H),7.64(d,2H),7.33-7.32(m,1H),6.86(s,1H),6.64-6.59(m,1H),6.33(s,1H),5.33(t,1H),4.29-4.24(m,2H),4.15-4.12(m,1H),4.05-4.02(m,2H),3.97-3.92(m,4H),3.83(s,3H),3.68(s,3H),3.62-3.53(m,1H),2.87-2.83(m,1H),2.66-2.64(m,1H),2.37-2.35(m,1H),2.06-1.95(m,1H),1.87-1.80(m,4H),1.63-1.58(m,2H),0.71-0.55(m,4H)。
實施例2-8 8
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮8
Figure 111137361-A0202-12-0117-647
實施例2-9 9
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(1-(2-羥乙基)哌啶-4-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮9
Figure 111137361-A0202-12-0117-648
實施例2-10 10
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(1-(2-羥基乙醯基)哌啶-4-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮10
Figure 111137361-A0202-12-0117-649
第一步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-5-側氧-2-(4-(哌啶-4-基)-苯基)-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羥基-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙脂10b
採用實施例2-1 11的合成路線，將第八步試劑4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸替換為4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)苯基)哌啶-1-羧酸第三丁酯得到(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-2-(4-(1-(第三丁氧羰基)哌啶-4-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羥基-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙脂10a，將10a(25mg，0.022mmol，置於圓底燒瓶中，加入二氯甲烷(1mL)，冰浴下攪拌5分鐘後加入1N鹽酸(1mL)，室溫下反應半小時後加入飽和碳酸氫銨溶液(10mL)淬滅反應，水(10mL×2)和二氯甲烷(20mL×2)萃取，將所得有機相乾燥，旋蒸即可得到標題產物10b(20mg，98%)。
第二步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-2-(4-(1-(2-羥基乙醯基)哌啶-4-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羥基-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺環[苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯10c
將10b(20mg，0.021mmol)和羥基乙酸(1.8mg，0.023mmol)溶於四氫呋喃(1.5mL)中，加入2-(7-偶氮苯并***)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽 (16.3mg，0.042mmol)和N,N-二異丙基乙胺(8.1mg，0.062mmol)，加完後氮氣置換三次，25℃攪拌反應3小時。反應液減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系A純化，得到標題產物10c(10mg，產率：47.1%)。
MS m/z(ESI)：990.8[M+1]。
第三步
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(1-(2-羥基乙醯基)哌啶-4-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮10
將實施例2-1 1第十二步原料1m替換為10c(10mg，0.01mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物10(8mg，產率：98.5%)。
MS m/z(ESI)：804.7[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 7.91(d,1H),7.54(s,1H),7.38(d,2H),7.34(s,1H),7.30(s,1H),7.21(d,2H),6.85(s,1H),6.33(s,1H),5.33(t,1H),4.25-4.19(m,2H),4.17-4.10(m,1H),4.05-4.01(m,2H),3.98-3.92(m,2H),3.83(s,2H),3.67(s,2H),3.58-3.49(m,7H),2.77-2.68(m,4H),2.03-1.95(m,5H),1.86-1.79(m,3H),1.61-1.53(m,3H),1.50-1.44(m,3H),0.89-0.80(m,4H),0.69-0.65(m,2H)。
實施例2-11 11
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(1-乙醯基哌啶-4-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮11
Figure 111137361-A0202-12-0120-650
採用實施例2-10的合成路線，將第二步試劑羥基乙酸替換為冰乙酸，製得標題產物11(18mg，總產率：76.3%)。
MS m/z(ESI)：788.6[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 7.91(d,1H),7.53(s,1H),7.37(d,2H),7.33(s,1H),7.30(s,1H),7.21(d,2H),6.85(s,1H),6.56(d,1H),6.32(s,1H),4.52(d,1H),4.25-4.17(m,1H),4.15-4.09(m,1H),4.06-3.99(m,1H),3.99-3.86(m,4H),3.82(s,3H),3.67(s,3H),3.59-3.52(m,1H),3.49(d,1H),3.12(t,1H),2.81-2.70(m,2H),2.58(t,1H),2.06-2.02(m,4H),1.87-1.72(m,7H),1.61-1.54(m,3H),1.49-1.39(m,2H),0.89-0.81(m,2H),0.81-0.76(m,1H),0.72-0.62(m,3H)。
實施例2-12 12
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-10-甲基-2-(4-嗎啉基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮12
Figure 111137361-A0202-12-0120-651
實施例2-13 13
(S)-7-甲氧基-8-(3-(1-((((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)甲基)環丙基)丙氧基)-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮13
Figure 111137361-A0202-12-0121-652
第一步
(E)-3-(1-((((2R,11aS)-2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-甲氧基-5-側氧-2,3,5,10,11,11a-六氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)甲基)環丙基)丙烯酸乙酯13b
將1c(300mg，0.79mmol)和(E)-3-(1-(((甲基磺醯基)氧基)甲基)環丙基)丙烯酸乙酯13a(378mg，1.52mmol，採用專利申請“CN104395312 B中說明書第32頁的中間體2”公開的方法製備而得)溶於N,N-二甲基甲醯胺(4mL)中，加入碳酸鉀(548mg，3.97mmol)，加完後氮氣置換三次，升溫至90℃攪拌反應 3小時。反應液冷卻至室溫，加入水(50mL)，用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到標題產物13b(354mg，產率：84.1%)。
MS m/z(ESI)：531.2[M+1]。
第二步
3-(1-((((2R,11aS)-2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-甲氧基-5-側氧-2,3,5,10,11,11a-六氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)甲基)環丙基)丙酸乙酯13c
將13b(354mg，0.67mmol)溶於甲醇(6mL)中，加入六水合氯化鈷(32mg，0.13mmol)，加完後氮氣置換三次，攪拌30分鐘，緩慢滴加2mL硼氫化鈉(126mg，3.33mmol)的N,N-二甲基甲醯胺溶液，滴完後攪拌反應2小時，繼續滴加1mL硼氫化鈉(76mg，2.01mmol)的N,N-二甲基甲醯胺溶液，滴完後攪拌2.5小時。冰浴下向反應液中加入水(60mL)，用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，得到粗品標題產物13c(336mg)，產物不經純化直接進行下一步反應。
MS m/z(ESI)：533.3[M+1]。
第三步
(2R,11aS)-2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-8-((1-(3-乙氧基-3-側氧丙基)環丙基)甲氧基)-7-甲氧基-5-側氧-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-10(5H)-羧酸烯丙酯13d
將13c(336mg，0.63mmol)溶於二氯甲烷(8mL)中，冰浴下加入吡啶(100mg，1.26mmol)，滴加氯甲酸烯丙酯(304mg，2.52mmol)，加完後攪拌15分鐘。反應液中加入冰冷的10%檸檬酸溶液(10mL)，用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到標題產物13d(313mg，產率：80.4%)。
MS m/z(ESI)：617.3[M+1]。
第四步
(2R,11aS)-2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-8-((1-(3-羥基丙基)環丙基)甲氧基)-7-甲氧基-5-側氧-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-10(5H)-羧酸烯丙酯13e
將13d(300mg，0.49mmol)溶於16mL四氫呋喃和乙醇(V/V=1：1)混合溶劑中，加入硼氫化鈉(110mg，2.91mmol)和氯化鋰(134mg，3.16mmol)，加完後氮氣置換三次，攪拌反應1.5小時，向反應液中補加硼氫化鈉(55mg，1.46mmol)和氯化鋰(67mg，1.58mmol)，繼續攪拌反應4小時。向反應液中加入氯化銨溶液(30mL)和水(20mL)，用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到標題產物13e(204mg，產率：72.9%)。
MS m/z(ESI)：575.3[M+1]。
第五步
(2R,11aS)-8-((1-(3-溴丙基)環丙基)甲氧基)-2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-甲氧基-5-側氧-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-10(5H)-羧酸烯丙酯13f
將13e(187mg，0.32mmol)溶於二氯甲烷(5mL)中，加入三乙胺(164mg，1.63mmol)，冰浴下加入4-二甲胺基吡啶(12mg，0.10mmol)，滴加甲烷磺醯氯(112mg，0.98mmol)，加完後升至室溫攪拌1.5小時。反應液中加入水(15mL)，用二氯甲烷萃取(6mL×3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，將所得殘餘物溶於四氫呋喃(5mL)中，加入溴化鋰(339mg，3.91mmol)，攪拌反應16小時。向反應液中加入水(20mL)，用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，得到粗品標題產物13f(207mg)，產物不經純化直接進行下一步反應。
MS m/z(ESI)：637.2[M+1]。
第六步
(2R,11aS)-8-((1-(3-溴丙基)環丙基)甲氧基)-2-羥基-7-甲氧基-5-側氧-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-10(5H)-羧酸烯丙酯13g
將13f(207mg，0.32mmol)溶於四氫呋喃(5mL)中，冰浴下加入四丁基氟化銨的四氫呋喃溶液(1M，0.96mL，0.96mmol)，加畢，撤去冰浴，升至室溫攪拌1.5小時。反應液中加入飽和氯化銨溶液(20mL)和水(10mL)，用乙酸乙酯萃取(8mL×3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液(15mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系A純化，得到標題產物13g(160mg，產率：94.1%)。
MS m/z(ESI)：523.1[M+1]。
第七步
(S)-8-((1-(3-溴丙基)環丙基)甲氧基)-7-甲氧基-2,5-二側氧-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-10(5H)-羧酸烯丙酯13h
將13g(160mg，0.31mmol)溶於二氯甲烷(5mL)中，冰浴下依次加入碳酸氫鈉(154mg，1.83mmol)和戴斯-馬丁氧化劑(390mg，0.92mmol)，加畢，撤去冰水浴，升至室溫攪拌1.5小時。加入飽和碳酸氫鈉溶液(10mL)淬滅，用二氯甲烷萃取(8mL×3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到標題產物13h(127mg，產率：79.7%)。
MS m/z(ESI)：521.0[M+1]。
第八步
(S)-8-((1-(3-溴丙基)環丙基)甲氧基)-7-甲氧基-5-側氧-2-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)-11,11a-二氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-10(5H)-羧酸烯丙酯13i
將13h(127mg，0.24mmol)溶於二氯甲烷(5mL)中，氮氣置換三次，用乙腈-乾冰浴冷卻至-40℃，滴加2,6-二甲基吡啶(78mg，0.73mmol)，攪拌5分鐘，再加入三氟甲磺酸酐(138mg，0.49mmol)，加畢，在-40℃下繼續攪拌40分鐘。加入飽和氯化銨水溶液(8mL)淬滅，加入水(10mL)，用二氯甲烷萃取(6mL×3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液(15mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到標題產物13i(66mg，產率：41.3%)。
MS m/z(ESI)：653.0[M+1]。
第九步
(S)-8-((1-(3-溴丙基)環丙基)甲氧基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1,10,11,11a-四氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-5-酮13j
將13i(66mg，0.10mmol)和對甲氧基苯硼酸(46mg，0.30mmol，韶遠)溶於3.5mL四氫呋喃和水(V/V=6：1)混合溶劑中，依次加入碳酸鉀(70mg，0.51mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀(23mg，0.031mmol，adamas)，加完後氮氣置換三次，攪拌反應16小時。反應液中加入水(15mL)，用乙酸乙酯萃取(8mL×3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液(15mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到標題產物13j(31mg，產率：58.2%)。
MS m/z(ESI)：527.1[M+1]。
第十步
(S)-8-((1-(3-溴丙基)環丙基)甲氧基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-11,11a-二氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-10(5H)-羧酸烯丙酯13k
將13j(31mg，0.059mmol)溶於二氯甲烷(3mL)中，冰浴下加入吡啶(9.3mg，0.12mmol)，滴加氯甲酸烯丙酯(28mg，0.23mmol)，加完後攪拌15分鐘。反應液中加入冰冷的10%檸檬酸溶液(4mL)，用二氯甲烷萃取(6mL×3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到標題產物13k(33mg，產率：91.8%)。
MS m/z(ESI)：611.1[M+1]。
第十一步
(11aS)-8-(3-(1-((((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)甲基)環丙基)丙氧基)-11-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯13l
將13k(33mg，0.054mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(1.5mL)中，加入1k(29mg，0.059mmol)和碳酸鉀(23mg，0.17mmol)，加完後氮氣置換三次，攪拌反應16小時。反應液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取(8mL×3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液(15mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物13l(44mg，產率：80.0%)。
MS m/z(ESI)：1019.3[M+1]。
第十二步
(11aS)-8-(3-(1-((((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)甲基)環丙基)丙氧基)-11-羥基-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯13m
將13l(44mg，0.043mmol)溶於四氫呋喃(3mL)中，依次加入冰乙酸(15mg，0.25mmol)和四丁基氟化銨的四氫呋喃溶液(1M，0.21mL，0.21mmol)，攪拌反應1小時。加入乙酸乙酯(5mL)稀釋，依次用飽和碳酸氫鈉水溶液(8mL)和飽和氯化鈉水溶液(10mL)洗滌。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾後 減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系A純化，得到標題產物13m(36mg，產率：92.1%)。
MS m/z(ESI)：905.8[M+1]。
第十三步
(S)-7-甲氧基-8-(3-(1-((((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)甲基)環丙基)丙氧基)-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮13
將13m(18mg，0.02mmol)溶於二氯甲烷(2mL)中，氮氣置換三次，依次加入吡咯烷(8.9mg，0.13mmol)和四(三苯基膦)鈀(2.4mg，0.002mmol)，反應攪拌30分鐘。反應液減壓濃縮，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物13(8mg，產率：56.0%)。
MS m/z(ESI)：719.6[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 7.89(d,1H),7.44(s,1H),7.37(d,2H),7.30(t,1H),7.04(s,1H),6.90(d,2H),6.80(s,1H),6.48(d,1H),6.29-6.25(m,1H),4.21-4.07(m,2H),3.99-3.89(m,2H),3.82-3.73(m,6H),3.69-3.61(m,3H),3.59-3.43(m,3H),3.27-3.20(m,2H),2.75(dd,1H),2.44-2.27(m,2H),2.07-1.95(m,2H),1.91-1.81(m,2H),1.65-1.56(m,2H),1.34(d,1H),0.87-0.81(m,1H),0.69-0.62(m,2H),0.59-0.46(m,4H)。
實施例2-14 14
(S)-7-甲氧基-8-((1-(3-(((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)丙基)環丙基)甲氧基)-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮14
Figure 111137361-A0202-12-0129-653
實施例2-15 15
(S)-8-((3-胺基-5-((((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)甲基)苄基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮15
Figure 111137361-A0202-12-0129-654
實施例2-16 16
(S)-7-環丙氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮16
Figure 111137361-A0202-12-0129-655
Figure 111137361-A0202-12-0130-656
第一步
5-環丙氧基-4-羥基-2-硝基苯甲酸甲酯16b
將4-溴-5-環丙氧基-2-硝基苯甲酸甲酯16a(1.6g，5.07mmol，採用專利申請“CN112110918 A中說明書第54頁”實施例18公開的方法製備而得)置於反應瓶中，加入1,4-二噁烷(20mL)溶解，依次加入聯硼酸頻那醇酯(3.22g，12.69mmol)、乙酸鉀(1.49g，15.2mmol)和雙三苯基磷二氯化鈀(1.06g，1.51mmol，adamas)，加完後氮氣置換3次，升溫至101℃攪拌反應16小時。反應液過濾後減壓濃縮，所得殘餘物溶於四氫呋喃(40mL)中，加入冰乙酸(5mL)，降溫至0℃，滴入雙氧水(10mL，35%)，加完後自然升溫至室溫，攪拌反應3小時，將反應溫度降至0℃，滴入硫代硫酸鈉飽和溶液(70mL)，加完後用乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合併有機相，依次用水(40mL)和飽和氯化鈉溶液(40mL)洗滌，用 無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到標題產物16b(902mg，產率：70.4%)。
MS m/z(ESI)：252.2[M-1]。
第二步
5-環丙氧基-4-羥基-2-硝基苯甲酸16c
將16b(900mg，3.55mmol)置於反應瓶中，加入四氫呋喃(8mL)、甲醇(2mL)、水(2mL)，再加入氫氧化鋰一水合物(373mg，8.88mmol)，室溫攪拌反應2小時，反應液濃縮，向所得殘餘物中加入乙酸乙酯(30mL)溶解，依次用水(15mL)和飽和氯化鈉溶液洗滌(15mL)，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系A純化，得到標題產物16c(770mg，產率：90.6%)。
MS m/z(ESI)：238.2[M-1]。
第三步
5-環丙氧基-2-硝基-4-((三異丙基矽基)氧基)苯甲酸16d
將16c(1.25g，5.23mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(20mL)中，加入三異丙基氯矽烷(5.04g，26.14mmol)，再加入咪唑(2.8g，41.17mmol)，加完後室溫攪拌20小時。反應液中加入水(30mL)，用乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物中加入甲醇(10mL)和水(2.5mL)，室溫攪拌3小時。反應液減壓濃縮，殘餘物中加入乙酸乙酯(30mL)，依次用水(15mL)和飽和氯化鈉溶液洗滌(15mL)，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系A純化，得到標題產物16d(1.4g，產率：67.9%)。
MS m/z(ESI)：396.4[M+1]。
第四步
(S)-(6-(((第三丁基二甲基矽基)氧基)甲基)-5-氮雜螺[2.4]庚-5-基)(5-環丙氧基-2-硝基-4-((三異丙基矽基)氧基)苯基)甲酮16e
將16d(1.4g，3.54mmol)溶於二氯甲烷(25mL)中，冰浴下，氮氣置換3次加入N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮雜苯并***-1-基)六氟磷酸脲(1.62g，4.26mmol，韶遠)和三乙胺(536mg，5.30mmol)，加完後攪拌30分鐘，再加入(S)-6-(((第三丁基二甲基矽基)氧基)甲基)-5-氮雜螺[2.4]庚烷(854mg，3.54mmol，採用專利“CN 111164208 A中說明書第98頁的中間體1-4”公開的方法製備而得)，加完後攪拌2小時。反應液依次用水(15mL)和飽和氯化鈉溶液(15mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到標題產物16e(1.1g，產率：50.2%)。
MS m/z(ESI)：619.3[M+1]。
第五步
(S)-(2-胺基-5-環丙氧基-4-((三異丙基矽基)氧基)苯基)(6-(((第三丁基二甲基矽基)氧基)甲基)-5-氮雜螺[2.4]庚-5-基)甲酮16f
將16e(1.1g，1.78mmol)溶於乙醇(15mL)和四氫呋喃(5mL)混合溶液中，加入鈀碳(200mg，含量10%，乾型)，反應體系用氫氣置換三次，室溫攪拌反應2小時，反應液藉由矽藻土過濾，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系A純化，得到標題產物16f(620mg，產率：59.6%)。
MS m/z(ESI)：589.4[M+1]。
第六步
(S)-(2-(6-(((第三丁基二甲基矽基)氧基)甲基)-5-氮雜螺[2.4]庚烷-5-羰基)-4-環丙氧基-5-((三異丙基矽基)氧基)苯基)胺基甲酸烯丙酯16g
將16f(1g，1.70mmol)溶於二氯甲烷(15mL)中，加入吡啶(403mg，5.10mmol)，將反應體系用氮氣置換3次，降溫至-65℃，緩慢滴入氯甲酸烯丙酯(205mg，1.70mmol)，加完後繼續在-65℃攪拌20分鐘，加入氯化銨(20mL)淬滅，分液，收集有機相，依次用水(15mL)和飽和氯化鈉溶液(15mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到標題產物16g(900mg，產率：78.9%)。
MS m/z(ESI)：671.3[M-1]。
第七步
(S)-(4-環丙氧基-2-(6-(羥甲基)-5-氮雜螺[2.4]庚烷-5-羰基)-5-((三異丙基矽基)氧基)苯基)胺基甲酸烯丙酯16h
將16g(900mg，1.34mmol)溶於四氫呋喃(2mL)、甲醇(2mL)和水(2mL)的混合溶液中，加入冰乙酸(8mL)，將反應體系用氮氣置換3次，室溫攪拌反應5小時，反應液經減壓濃縮，殘餘物用乙酸乙酯(20mL)溶解，依次用水(15mL)和飽和氯化鈉溶液洗滌(15mL)，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到標題產物16h(643mg，產率：86.1%)。
MS m/z(ESI)：559.3[M+1]。
第八步
(11aS)-7-環丙氧基-11-羥基-5-側氧-8-((三異丙基矽基)氧基)-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯16i
將16h(620mg，1.11mmol)溶於二氯甲烷(8mL)中，加入碘苯二乙酸(536.8mg，1.66mmol)，將反應體系用氮氣置換3次，加入2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(17.5mg，0.11mmol)，室溫攪拌反應4小時，反應液依次用水(10mL)和飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到標題產物16i(500mg，產率：81%)。
MS m/z(ESI)：557.3[M+1]。
第九步
(11aS)-11-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-環丙氧基-5-側氧-8-((三異丙基矽基)氧基)-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯16j
將16i(500mg，0.899mmol)溶於二氯甲烷(8mL)中，反應體系用氮氣置換3次，降溫至-40℃，加入4-二甲胺基吡啶(438.8mg，3.59mmol)和第三丁基二甲矽基三氟甲磺酸酯(712.2mg，2.69mmol)，加完後撤掉冷卻浴，室溫攪拌反應16小時，降溫至-40℃後補加4-二甲胺基吡啶(438.8mg，3.59mmol)、第三丁基二甲矽基三氟甲磺酸酯(712.2mg，2.69mmol)，再升至室溫反應10小時，加入氯化銨(15mL)淬滅，分液，收集有機相，依次用水(15mL)和飽和氯化鈉溶液(15mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用 CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到標題產物16j(420mg，產率：69.7%)。
MS m/z(ESI)：671.4[M+1]。
第十步
(11aS)-11-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-環丙氧基-8-羥基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷1-10(5H)-羧酸烯丙酯16k
將16j(420mg，0.626mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(5mL)和水(0.1mL)的混合溶液中，加入醋酸鋰(49.6mg，0.751mmol)，室溫攪拌反應3.5小時，加入水(10mL)，乙酸乙酯萃取(10mL×2)，收集有機相，依次用水(10mL)和飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到標題產物16k(312mg，產率：96.8%)。
MS m/z(ESI)：513.6[M-1]。
第十一步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-環丙氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯16l
將16k(26mg，0.051mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(2mL)中，加入(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧基-11,11a-二氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-10(5H)-羧酸烯丙酯(30mg，0.051mmol，採用專 利“CN 111164208 A中說明書第103頁的中間體3-10”公開的方法製備而得)，加入碳酸鉀(21.3mg，0.154mmol)，室溫攪拌反應16小時，加入水(6mL)，乙酸乙酯萃取(10mL×2)，收集有機相，依次用水(10mL)和飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物16l(40mg，產率：76.4%)。
MS m/z(ESI)：1020.4[M+1]。
第十二步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-環丙氧基-11-羥基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯16m
將實施例2-1 1第十一步原料1l替換為16l(40mg，0.039mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物16m(28mg，產率：78.9%)。
MS m/z(ESI)：903.2[M-1]。
第十三步
(S)-7-環丙氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮16
將實施例2-1 1第十二步原料1m替換為16m(28mg，0.031mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物16(20mg，產率：90.1%)。
MS m/z(ESI)：719.8[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 7.92(d,1H),7.66(s,1H),7.46-7.44(m,1H),7.39-7.37(m,2H),7.31-7.30(m,1H),6.93-6.90(m,2H),6.85-6.84(m,1H),6.32-6.31(m,1H),4.23-4.16(m,2H),4.13-4.08(m,1H),4.04-3.99(m,1H),3.96-3.91(m,3H),3.91-3.86(m,1H),3.85-3.81(m,1H),3.76(s,3H),3.67(s,3H),3.57-3.49(m,2H),3.28-3.25(m,2H),2.79-2.74(m,1H),2.45-2.43(m,1H),2.08-1.97(m,4H),1.84-1.78(m,1H),1.59-1.53(m,2H),0.88-0.84(m,2H),0.81-0.77(m,2H),0.72-0.64(m,4H)。
實施例2-17 17
(S)-4-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,2,7a,8-四氫-10H,12H-螺[苯并呋喃并[5,4-e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-9,1'-環丙烷]-12-酮17
Figure 111137361-A0202-12-0137-657
實施例2-18 18
(S)-8-((5-(((S)-7-環丙氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮18
Figure 111137361-A0202-12-0137-658
Figure 111137361-A0202-12-0138-659
第一步
(2S,4R)-1-(5-環丙氧基-2-硝基-4-((三異丙基矽基)氧基)苯甲醯基)-4-羥基吡咯烷-2-羧酸甲酯18a
將16d(6.5g，16.4mmol)溶於二氯甲烷(60mL)中，冰浴下，氮氣置換3次加入草醯氯(2.3g，18.1mmol，阿達瑪斯)，再滴入N,N-二甲基甲醯胺(0.3mL)，滴完有大量氣體產生，升至室溫攪拌16小時。將(4R)-4-羥基吡咯烷-2-羧酸甲酯(2.4g，16.53mmol，韶遠)溶於二氯甲烷(60mL)中，冰浴保護，加入三乙胺(16g，158.1mmol)，再滴入上述的溶液，滴完後升至室溫攪拌反應20小時。反應液依次用水(80mL)和飽和氯化鈉溶液(80mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到標題產物18a(8.6g，產率：100%)。
第二步
(2R,11aS)-7-環丙氧基-2-羥基-8-((三異丙基矽基)氧基)-1,2,3,11a-四氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚烷-5,11(10H)-二酮18b
將18a(8.6g，16.50mmol)溶於乙醇(150mL)中，加入還原鐵粉(4.6g，82.40mmol)，再加入氯化銨(10.6g，198.20mmol)，反應體系用氮氣置換三次，升至70℃攪拌反應16小時，反應液趁熱藉由矽藻土過濾，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到粗品標題產物18b(5.9g)，直接用於下一步反應。
MS m/z(ESI)：461.6[M+1]。
第三步
(2R,11aS)-2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-環丙氧基-8-((三異丙基矽基)氧基)-1,2,3,11a-四氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚烷-5,11(10H)-二酮18c
將18b(5.9g，12.8mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(60mL)中，依次加入咪唑(5.2g，76.4mmol)、第三丁基二甲基氯矽烷(5.8g，38.5mmol)、4-二甲胺基吡啶(3.2g，25.9mmol)，加完後室溫攪拌20小時，加入水(120mL)，乙酸乙酯萃取(100mL×2)，收集有機相，依次用水(100mL)和飽和氯化鈉溶液(100mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物18c(6.1g，產率：82.8%)。
MS m/z(ESI)：575.2[M+1]。
第四步
(2R,11aS)-2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-環丙氧基-8-((三異丙基矽基)氧基)-1,2,3,10,11,11a-六氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚烷-5-酮18d
將18c(6g，10.4mmol)溶於四氫呋喃(60mL)中，冰浴下，滴入硼氫化鋰的四氫呋喃溶液(1M，41.7mL，41.7mmol)，滴完後升至室溫攪拌反應4小時，緩慢滴入甲醇(20mL)淬滅反應，濃縮反應液，所得殘餘物用乙酸乙酯(40mL)溶解，依次用水(25mL)和飽和氯化鈉溶液(25mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到標題產物18d(4.26g，產率：72.8%)。
第五步
(2R,11aS)-2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-環丙氧基-5-側氧-8-((三異丙基矽基)氧基)-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚烷-10(5H)-羧酸烯丙酯18e
將18d(6.5g，11.6mmol)溶於二氯甲烷(70mL)中，氮氣保護降至0℃，依次加入吡啶(1.8mg，22.8mmol)、氯甲酸烯丙酯(5.6mg，46.5mmol)，0℃攪拌反應1小時，反應液依次用水(50mL)和飽和氯化鈉溶液(50mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到標題產物18e(4.26g，產率：56.9%)。
MS m/z(ESI)：645.3[M+1]。
第六步
(2R,11aS)-2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-環丙氧基-8-羥基-5-側氧-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚烷-10(5H)-羧酸烯丙酯18f
將18e(4.26g，6.60mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺和水的混液(V/V=50/1，25mL)中，加入醋酸鋰(523mg，7.92mmol)，加完後室溫反應4小時，加入乙酸乙酯(40mL)，依次用水(35mL×2)和飽和氯化鈉溶液(15mL)洗滌， 無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到標題產物18f(2.5g，產率：77.6%)。
MS m/z(ESI)：489.2[M+1]。
第七步
(2R,11aS)-8-((5-溴戊基)氧基)-2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-環丙氧基-5-側氧-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚烷-10(5H)-羧酸烯丙酯18g
將18f(2.5mg，5.12mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(20mL)中，加入1,5-二溴戊烷(5.88g，25.6mmol，阿達瑪斯)、碳酸鉀(847mg，6.14mmol)，室溫攪拌反應16小時。加入乙酸乙酯(50mL)，依次用水(30mL×2)和飽和氯化鈉溶液(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到標題產物18g(2.71g，產率：83.1%)。
MS m/z(ESI)：637.2[M+1]。
第八步
(2R,11aS)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-環丙氧基-2-羥基-5-側氧-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚烷-10(5H)-羧酸烯丙酯18h
將18g(2.71g，4.25mmol)溶於四氫呋喃(30mL)中，加入四丁基氟化銨(1M，6.35mL，6.35mmol)，加完室溫攪拌反應3小時。加入氯化銨溶液(30mL)，乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合併有機相，依次用水(30mL×2)和飽和氯化鈉溶液(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用 CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到標題產物18h(2.24g，粗品產率：>100%)。
MS m/z(ESI)：523.2[M+1]。
第九步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-環丙氧基-2,5-二側氧-2,3,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-10(5H)-羧酸烯丙酯18i
將18h(2.22g，4.25mmol)溶於二氯甲烷(40mL)中，降至0℃，加入碳酸氫鈉(2.2g，26.2mmol)、戴斯-馬丁氧化劑(5.44g，12.8mmol，阿達瑪斯)，加完升至室溫攪拌反應20小時。反應液依次用水(30mL×2)和飽和氯化鈉溶液(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到標題產物18i(1.62g，產率：72.6%)。
MS m/z(ESI)：521.2[M+1]。
第十步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-環丙氧基-5-側氧-2-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)-11,11a-二氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-10(5H)-羧酸烯丙酯18j
將實施例2-1 1第七步原料1g替換為18i，採用相同的反應條件，得到標題產物18j(430mg，產率：66%)。
MS m/z(ESI)：653.1[M+1]。
第十一步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-環丙氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1,10,11,11a-四氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-5-酮18k
將實施例2-1 1第八步原料1h替換為18j，4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸替換為4-甲氧基苯硼酸(韶遠)，採用相同的反應條件，得到標題產物18k(82mg，產率：70%)。
MS m/z(ESI)：527.1[M+1]。
第十二步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-環丙氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-11,11a-二氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-10(5H)-羧酸烯丙酯18l
將實施例2-1 1第九步原料1i替換為18k，採用相同的反應條件，得到標題產物18l(88mg，產率：93%)。
MS m/z(ESI)：611.2[M+1]。
第十三步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-環丙氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯18m
將實施例2-1 1第十步原料1j替換為18l(34mg，0.06mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物18m(45mg，產率：79.4%)。
MS m/z(ESI)：1019.9[M+1]。
第十四步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-環丙氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧 基)-11-羥基-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯18n
將實施例2-1 1第十一步原料1l替換為18m(45mg，0.04mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物18n(40mg，產率：100%)。
MS m/z(ESI)：905.7[M+1]。
第十五步
(S)-8-((5-(((S)-7-環丙氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮18
將實施例2-1 1第十二步原料1m替換為18n(40mg，0.04mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物18(20mg，產率：62.9%)。
MS m/z(ESI)：719.6[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 7.91(d,1H),7.56(s,1H),7.45(s,1H),7.38(d,2H),7.33(s,1H),6.91(d,2H),6.85(s,1H),6.55(d,1H),6.31(s,1H),4.24-4.18(m,1H),4.14-4.08(m,1H),4.05-3.99(m,1H),3.96-3.91(m,2H),3.82(s,3H),3.76(s,3H),3.73-3.70(m,1H),3.62-3.58(m,1H),3.57-3.52(m,1H),3.50(d,1H),3.27-3.22(m,1H),2.79-2.74(m,1H),2.45-2.40(m,1H),2.06(d,1H),2.03-1.97(m,1H),1.84-1.78(m,4H),1.60-1.53(m,2H),1.37-1.33(m,1H),0.86(t,1H),0.81-0.76(m,1H),0.69-0.60(m,6H)。
實施例2-19 19
(S)-7-環丙氧基-8-((5-(((S)-7-環丙氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮19
Figure 111137361-A0202-12-0145-660
實施例2-20 20和21
(1aS,9aR,10aS)-5-甲氧基-6-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-1a,9a,10,10a-四氫苯并[e]丙環并[4,5]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-3(1H)-酮
和
(1aS,9aS,10aS)-5-甲氧基-6-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-1a,9a,10,10a-四氫苯并[e]丙環并[4,5]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-3(1H)-酮
Figure 111137361-A0202-12-0145-661
Figure 111137361-A0202-12-0146-662
第一步
(1S,3S,5S)-3-(((第三丁基二甲基矽基)氧基)甲基)-2-氮雜二環[3.1.0]己烷20b
將((1S,3S,5S)-2-氮雜二環[3.1.0]己烷-3-基)甲醇20a(246mg，2.17mmol，採用專利申請“CN104098481 A中說明書第5頁實施例5”公開的方法製備而得)置於反應瓶中，加入二氯甲烷(6mL)溶解，加入三乙胺(217mg，2.14mmol)、2,6-二甲基吡啶(455mg，4.25mmol)，降溫至0℃，將反應體系用氮氣置換3次，滴入第三丁基二甲矽基三氟甲磺酸酯(862mg，3.26mmol)，升至室溫攪拌反應2小時。反應液中加入氯化銨(8mL)淬滅，分液，收集有機相，依次用水(6mL)和飽和氯化鈉溶液(6mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到標題產物20b(470mg，產率：94.5%)。
MS m/z(ESI)：228.2[M+1]。
第二步
((1S,3S,5S)-3-(((第三丁基二甲基矽基)氧基)甲基)-2-氮雜二環[3.1.0]己-2-基)(5-甲氧基-2-硝基-4-((三異丙基矽基)氧基)苯基)甲酮20c
將5-甲氧基-2-硝基-4-((三異丙基矽基)氧基)苯甲酸(657mg，1.78mmol，採用專利申請“WO2013053872 A1中說明書第60頁化合物2”公開的方法製備而得)置於反應瓶中，加入二氯甲烷(6mL)、三乙胺(297mg，2.94mmol)，冰浴下加入N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮雜苯并***-1-基)六氟磷酸脲(812mg，2.13mmol，韶遠)，升至室溫攪拌反應1小時，再降溫至0℃，向反應液中滴加20b(450mg，1.98mmol)和三乙胺(297mg，2.94mmol)的二氯甲烷(6mL)溶液，加完升至室溫攪拌反應1小時，依次用水(10mL)和飽和氯化鈉溶液洗滌(10mL)，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到標題產物20c(930mg，產率：90.3%)。
MS m/z(ESI)：579.3[M+1]。
第三步
(2-胺基-5-甲氧基-4-((三異丙基矽基)氧基)苯基)((1S,3S,5S)-3-(((第三丁基二甲基矽基)氧基)甲基)-2-氮雜二環[3.1.0]己-2-基)甲酮20d
將20c(903mg，1.56mmol)溶於乙醇(20mL)中，加入鈀碳(180mg，含量10%，乾型)，氫氣置換三次，室溫攪拌反應2小時，反應液藉由矽藻土過濾，濾液減壓濃縮，真空乾燥，得到粗品標題產物20d(866mg)。
MS m/z(ESI)：549.3[M+1]。
第四步
(2-((1S,3S,5S)-3-(((第三丁基二甲基矽基)氧基)甲基)-2-氮雜二環[3.1.0]己-2-羰基)-4-甲氧基-5-((三異丙基矽基)氧基)苯基)胺基甲酸烯丙酯20e
將20d(347mg，0.633mmol)溶於二氯甲烷(8mL)中，加入吡啶(147mg，1.86mmol)，反應體系用氮氣置換3次，降溫至-65℃，緩慢滴入氯甲酸烯丙酯(76mg，0.631mmol)，加完後升至室溫攪拌15分鐘，加入10%檸檬酸溶液(6mL)淬滅，分液，收集有機相，依次用水(10mL)、碳酸氫鈉溶液(10mL)和飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到標題產物20e(360mg，產率：90%)。
MS m/z(ESI)：633.4[M+1]。
第五步
(2-((1S,3S,5S)-3-(羥甲基)-2-氮雜二環[3.1.0]己烷-2-羰基)-4-甲氧基-5-((三異丙基矽基)氧基)苯基)胺基甲酸烯丙酯20f
將20e(360mg，0.569mmol)溶於四氫呋喃(2mL)、甲醇(2mL)和水(2mL)的混合溶液中，加入冰乙酸(8mL)，反應體系用氮氣置換3次，室溫攪拌反應3小時，反應液經減壓濃縮除去有機相，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合併有機相，依次用水(10mL)、碳酸氫鈉溶液(10mL)和飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到標題產物20f(266mg，產率：90.1%)。
MS m/z(ESI)：519.2[M+1]。
第六步
(1aS,9aS,10aS)-9-羥基-5-甲氧基-3-側氧-6-((三異丙基矽基)氧基)-1,1a,9,9a,10,10a-六氫苯并[e]丙環并[4,5]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8(3H)-羧酸烯丙酯20g
將20f(266mg，0.513mmol)溶於二氯甲烷(8mL)中，反應體系用氮氣置換3次，降溫至0℃，加入碳酸氫鈉(103.5mg，1.23mmol)，再加入(1,1,1-三乙醯氧基)-1,1-二氫-1,2-苯碘醯-3(1H)-酮(261mg，0.615mmol，adamas)，加完後升至室溫攪拌1.5小時，加入二氯甲烷(10mL)稀釋反應液，再依次用碳酸氫鈉飽和溶液(10mL)、水(10mL)和飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到標題產物20g(260mg，產率：98.1%)。
MS m/z(ESI)：517.2[M+1]。
第七步
(1aS,9aS,10aS)-9-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-5-甲氧基-3-側氧-6-((三異丙基矽基)氧基)-1,1a,9,9a,10,10a-六氫苯并[e]丙環并[4,5]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8(3H)-羧酸烯丙酯20h
將20g(260mg，0.503mmol)溶於二氯甲烷(8mL)中，反應體系用氮氣置換3次，降溫至-40℃，加入4-二甲胺基吡啶(438.8mg，3.59mmol)，加入第三丁基二甲矽基三氟甲磺酸酯(799mg，3.02mmol)，加完後撤掉冷卻浴，室溫攪拌反應16小時，降溫至-40℃後補加4-二甲胺基吡啶(246mg，2.01mmol)、第三丁基二甲矽基三氟甲磺酸酯(399mg，1.51mmol)，再升至室溫反應6小時，加入氯化銨(15mL)淬滅，分液，收集有機相，依次用水(15mL)和飽和氯化鈉溶 液(15mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到標題產物20h(209mg，產率：65.8%)。
MS m/z(ESI)：631.3[M+1]。
第八步
(1aS,9aS,10aS)-9-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-6-羥基-5-甲氧基-3-側氧-1,1a,9,9a,10,10a-六氫苯并[e]丙環并[4,5]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8(3H)-羧酸烯丙酯20i
將20h(209mg，0.331mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(3mL)和水(0.06mL)的混合溶液中，加入乙酸鋰(26.3mg，0.398mmol)，反應體系用氮氣置換3次，室溫攪拌反應3小時，反應液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合併有機相，依次用水(10mL)和飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到粗品標題產物20i(160mg)。
MS m/z(ESI)：473.1[M-1]。
第九步
(1aS,9aS,10aS)-6-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-9-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-5-甲氧基-3-側氧-1,1a,9,9a,10,10a-六氫苯并[e]丙環并[4,5]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8(3H)-羧酸烯丙酯20j
將實施例2-1 1第十步原料1k替換為20i(71.8mg，0.151mmol)和(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-11,11a-二氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-10(5H)-羧酸烯丙酯(77mg，0.131mmol，採用專 利申請“CN 111164208 A中說明書第103頁的中間體3-10”公開的方法製備而得)採用相同的反應條件，得到標題產物20j(41mg，產率：31.7%)。
MS m/z(ESI)：979.3[M+1]。
第十步
(1aS,10aS)-6-((5-(((S)-10-(烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-9-羥基-5-甲氧基-3-側氧-1,1a,9,9a,10,10a-六氫苯并[e]丙環并[4,5]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8(3H)-羧酸烯丙酯20k
將實施例2-1 1第十一步原料1l替換為20j(30mg，0.03mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物20k(26.5mg，產率：100%)。
MS m/z(ESI)：865.3[M+1]。
第十一步
(1aS,9aR,10aS)-5-甲氧基-6-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-1a,9a,10,10a-四氫苯并[e]丙環并[4,5]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-3(1H)-酮20
(1aS,9aS,10aS)-5-甲氧基-6-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-1a,9a,10,10a-四氫苯并[e]丙環并[4,5]吡咯[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-3(1H)-酮21
將實施例2-1 1第十二步原料1m替換為20k(26.5mg，0.03mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物粗品。將粗品用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物(8mg，12mg)。
單一構型化合物(較短保留時間)：
MS m/z(ESI)：679.3[M+1]。
HPLC分析：保留時間8.929分鐘，(色譜管柱：Waters Sunfire C18 4.6*75mm,3.5um：流動相：A(%)0.1%FA-H2O/B(%)0.08%FA-ACN=70/5==>30/95)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 7.83(d,1H),7.45(s,1H),7.41-7.35(m,3H),7.30(s,1H),6.93-6.88(m,2H),6.84-6.81(m,1H),6.33-6.29(m,1H),4.23-4.16(m,1H),4.13-4.08(m,1H),4.04-3.99(m,1H),3.96-3.91(m,2H),3.83(s,3H),3.76(s,3H),3.66(s,3H),3.65-3.60(m,2H),3.58-3.51(m,2H),3.28-3.21(m,2H),2.79-2.74(m,1H),2.46-2.42(m,1H),2.03-1.96(m,2H),1.84-1.80(m,2H),1.61-1.53(m,2H),0.93-0.81(m,4H)。
單一構型化合物(較長保留時間)：
MS m/z(ESI)：679.3[M+1]。
HPLC分析：保留時間9.612分鐘。(色譜管柱：Waters Sunfire C18 4.6*75mm,3.5um；流動相：A(%)0.1%FA-H2O/B(%)0.08%FA-ACN=70/5==>30/95)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 7.72(d,1H),7.45(s,1H),7.40-7.36(m,2H),7.31-7.27(m,2H),6.93-6.89(m,2H),6.79(s,1H),6.31(s,1H),4.22-4.17(m,1H),4.13-4.04(m,2H),4.03-3.97(m,1H),3.96-3.91(m,2H),3.82(s,3H),3.76(s,3H),3.74-3.71(m,1H),3.67(s,3H),3.58-3.52(m,2H),3.29-3.21(m,2H),2.79-2.73(m,1H),2.42-2.36(m,1H),2.03-1.96(m,2H),1.84-1.80(m,2H),1.61-1.53(m,2H),1.05-0.99(m,2H),0.88-0.83(m,2H)。
實施例2-22 22
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-5-側氧-5,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-8-基)氧基)戊基)氧基)-2-(4-甲氧基苯基)-1,11a-二氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-5,11(10H)-二酮22
Figure 111137361-A0202-12-0153-663
第一步
(S)-8-羥基-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1,11a-二氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-5,11(10H)-二酮22b
在100mL單口瓶中加入化合物(S)-8-(苄氧基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1,11a-二氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-5,11(10H)二酮22a(300mg，657.18μmol，採用專利申請“CN109180681A中說明書第8頁的中間體005”公開的方法製備而得)，再加二氯甲烷(10mL)攪拌，冰浴冷至0-5℃，滴加甲磺酸(3mL)，並於0-5℃攪拌2小時。反應液加水，析出白色固體，抽濾，濾餅用少量水淋洗，收集濾餅，真空乾燥，得到粗品標題產物(180mg)。所得粗品再加二氯甲烷(2mL×2)攪拌，反應液抽濾，濾餅用少量二氯甲烷淋洗，收集濾餅，真空乾燥，得到標題產物22b(100mg，產率：42.0%)。
MS m/z(ESI)：367.50[M+1]。
第二步
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-5-側氧-5,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-8-基)氧基)戊基)氧基)-2-(4-甲氧基苯基)-1,11a-二氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-5,11(10H)-二酮22
在10mL單口瓶中加入化合物22b(60mg，163.77μmol)和化合物(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮22c(69mg，163.77μmol，採用專利申請“CN113166764A中說明書第105頁的中間體6-7”公開的方法製備而得)，加入碳酸鉀(45mg，327.54μmol)，再加入N,N-二甲基甲醯胺(1mL)，升溫至50℃攪拌反應3小時。冷卻至室溫，反應液用高效液相色譜法(GILSON，色譜管柱：PNtulips C18,30*150mm,5μm；流動相：水相(20mmol/L碳酸氫銨)和甲醇，梯度配比：甲醇70%-80%，流速：30mL/min)純化，收集其相應組分，得到標題產物22(29mg，產率：25.2%)。
MS m/z(ESI)：707.30[M+1]。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 7.33-7.44(m,5H),7.16(s,1H),6.91-6.93(m,3H),6.68(s,1H),6.51(s,1H),4.67-4.70(m,1H),4.05-4.10(m,4H),3.78-3.80(s,6H),3.80-3.82(s,3H),3.15-3.27(m,3H),2.39-2.47(m,1H),2.21-2.31(m,1H),1.87-1.94(m,6H),1.67-1.71(m,2H),0.63-0.71(m,4H)。
實施例2-26 26
(S)-7-甲氧基-8-(2-(2-(((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)乙氧基)乙氧基)-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮26
Figure 111137361-A0202-12-0155-664
第一步
(S)-8-(苄氧基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1,11a-二氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-5-酮26b
向原料(S)-8-(苄氧基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-10-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1,11a-二氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-5,11(10H)-二酮26a(250mg，426.07μmol，採用專利申請CN109180681 A說明書第8頁中間體006公開的方法製備而得)中加入四氫呋喃(2mL)，室溫攪拌，氮氣置換3次，乾冰-乙醇浴冷卻至-78℃，滴加四硼酸鋰(2.13mL，4.26mmol，2M四氫呋喃溶液)，並於-5℃攪拌24小時。反應液加冰水(20mL)淬滅，水相用二氯甲烷萃取(20mL×3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL)，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物26b(118mg)。
MS m/z(ESI)：441.17[M+1]。
第二步
(S)-8-(苄氧基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1,10,11,11a-四氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-5-酮26c
將原料26b(118mg，267.88μmol)溶於二氯甲烷(1mL)，冰浴至0-5℃，分批加入三乙醯氧基硼氫化鈉(114mg，535.76μmol)，於0-5℃攪拌反應1小時。反應液直接用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物26c(90mg)。
MS m/z(ESI)：443.19[M+1]。
第三步
(S)-8-羥基-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1,10,11,11a-四氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-5-酮26d
將化合物26c(90mg，203.38μmol)，溶於二氯甲烷(2.8mL)，氮氣置換3次，冰浴冷至0-5℃，滴加甲磺酸(1mL)，並於0-5℃攪拌2小時。反應液加冰水(20mL)淬滅，水相用二氯甲烷萃取(20mL×3)，合併有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL)，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物26d(20mg)。
MS m/z(ESI)：353.15[M+1]。
第四步
(S)-8-(2-(2-溴乙氧基)乙氧基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1,10,11,11a-四氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-5-酮26f
在10mL單口瓶中加入原料26d(35mg，99.32μmol)、1-溴-2-(2-溴乙氧基)乙烷26e(115mg，496.61μmol)、碳酸鉀(82mg，595.93μmol)，加入N,N-二甲基甲醯胺(0.5mL)，升溫至50℃攪拌反應3小時。反應液加水(5mL)，水相用二氯甲烷萃取(5mL×3)，合併有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(5mL)，無水 硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物26f(30mg)。
MS m/z(ESI)：503.25[M+1]。
第五步
(S)-7-甲氧基-8-(2-(2-(((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)乙氧基)乙氧基)-10-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5,11(10H)-二酮26h
在10mL單口瓶中加入原料26f(30mg，59.60μmol)、(S)-8-羥基-7-甲氧基-10-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5,11(10H)-二酮26g(25mg，59.60μmol，採用專利申請“CN113166764A中說明書第105頁的中間體6-5”公開的方法製備而得)、碳酸鉀(16mg，119.19μmol)，再加N,N-二甲基甲醯胺(0.5mL)，升溫至50℃攪拌反應3小時。反應液加水(5mL)，水相用二氯甲烷萃取(5mL×3)，合併有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(5mL)，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物26h(40mg)。
MS m/z(ESI)：841.55[M+1]。
第六步
(S)-7-甲氧基-8-(2-(2-(((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)乙氧基)乙氧基)-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮26
在25mL反應管中加入原料26h(40mg，47.56μmol)，再加入四氫呋喃(2mL)攪拌，氮氣置換3次，乾冰-乙醇浴冷卻至-78℃，滴加四硼酸鋰(0.71mL，1.43mmol，2M四氫呋喃溶液)，並於-5℃攪拌7小時。反應液加冰水(5mL)淬滅，水相用二氯甲烷萃取(5mL×3)，合併有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(5mL)，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用高效液相色譜法(GILSON，色譜管柱：PNtulips C18,30*150mm,5μm；流動相：水相(20mmol/L碳酸氫銨)和甲醇，梯度配比：甲醇75%-90%，流速：30mL/min)純化，得到標題產物26(8.7mg，產率：26.3%)。
MS m/z(ESI)：695.30[M+1]。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 7.45-7.47(m,5H),7.18-7.19(m,1H),6.87-6.99(m,3H),6.31(s,1H),4.20-4.25(m,1H),3.92-3.97(m,4H),3.38-3.90(m,12H),3.63-3.64(m,1H),3.35-3.44(m,4H),3.21-3.30(m,2H),2.74-2.84(m,1H),2.40-2.48(m,1H),2.01-2.09(m,1H),0.63-0.79(m,4H)。
實施例2-27 27
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,10,11,11a-四氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮27
Figure 111137361-A0202-12-0158-217
Figure 111137361-A0202-12-0159-218
第一步
(S)-8-(苄氧基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1,11a-二氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-5-酮27b
在25mL反應管中加入(S)-8-(苄氧基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-10-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1,11a-二氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-5,11(10H)-二酮27a(250mg，426.07μmol，採用專利申請“CN109180681A中說明書第8頁的化合物006”公開的方法製備而得)，再加四氫呋喃(2mL)攪拌，氮氣置換3次，乾冰-乙醇浴冷至-78℃，滴加四硼酸鋰(2.13mL，4.26mmol，2.0M四氫呋喃溶液)，並於-5℃攪拌24小時。反應液加冰水(20mL)淬滅，水相用二氯甲烷(20mL×3)萃取，合併有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL)，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提體系A純化，得到標題產物27b(118mg)。
MS m/z(ESI)：441.17[M+1]。
第二步
(S)-8-(苄氧基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1,10,11,11a-四氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-5-酮27c
在25mL單口瓶中加入原料27b(118mg，267.88μmol)，加二氯甲烷(1mL)攪拌溶解，冰浴至0-5℃，分批加入三乙醯氧基硼氫化鈉(114mg，535.76μmol)，於0-5℃攪拌反應1小時。反應液用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物27c(90mg)。
MS m/z(ESI)：443.19[M+1]。
第三步
(S)-8-羥基-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1,10,11,11a-四氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-5-酮27d
在100mL單口瓶中加入原料27c(90mg，203.38μmol)，再加二氯甲烷(2.8mL)攪拌溶解，氮氣置換3次，冰浴冷至0-5℃，滴加甲磺酸(1mL)，並於0-5℃攪拌2小時。反應液加冰水(20mL)淬滅，水相用二氯甲烷萃取(20mL×3)，合併有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(20mL)，無水硫酸鈉乾燥，過濾後濾液減壓濃縮，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物27d(20mg)。
MS m/z(ESI)：353.15[M+1]。
第四步
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,10,11,11a-四氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮27
將27d(15mg，0.426mmol)置於反應瓶中，加入化合物(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-1,10,11,11a-四氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮27e(34mg，0.639mmol，採用專利申請 “CN113166764,A說明書第124頁中間體6-7中公開的方法製備而得)，加入碳酸鉀(10mg，0.724mmol)，再加入N,N-二甲基甲醯胺(0.5mL)，氮氣置換三次，升溫至50℃攪拌反應3小時，降溫至室溫，反應液直接用高效液相色譜法(GILSON，色譜管柱：PNtulips C18,30*150mm,5μm；流動相：水相(20mmol/L碳酸氫銨)和乙腈，梯度配比：乙腈40%-70%，流速：30mL/min)純化，得到標題產物27(16mg，產率：54.2%)。
MS m/z(ESI)：695.4[M+1]。
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ 7.42-7.47(m,1H),7.34-7.40(m,2H),7.27-7.343(m,2H),6.87-6.93(m,2H),6.50-6.57(d,1H),6.28-6.32(d,2H),6.23-6.28(d,1H),4.13-4.29(m,1H),3.88-3.99(m,4H),3.79-3.87(m,1H),3.72-3.78(s,3H),3.60-3.69(s,6H)，3.43-3.57(m,3H),3.08-3.31(m,4H),2.69-2.81(m,1H)，1.91-2.01(m,1H)，1.76-1.86(m,5H)，1.50-1.61(m,2H),0.46-0.69(m,4H)。
實施例2-29 29
(S)-7-甲氧基-8-((5-((((S)-7-甲氧基-2-(4-(甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)甲基)吡啶-3-基)甲氧基)-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮29
Figure 111137361-A0202-12-0161-220
Figure 111137361-A0202-12-0162-221
第一步
(S)-8-((5-(氯甲基)吡啶-3-基)甲氧基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1,10,11,11a-四氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-5-酮29b
在10mL單口瓶中加入原料27d(50mg，141.89μmol)、3,5-雙(氯甲基)吡啶鹽酸鹽29a(75mg，354.72μmol)、碳酸鉀(78mg，567.55μmol)，再加N,N-二甲基甲醯胺(0.5mL)，升溫至50℃攪拌反應3小時，反應液直接用高效液相色譜法(色譜管柱：Batch ODS-C18,80g Flash；流動相：水相和乙腈，梯度配比：乙腈0%-60%，流速：50mL/min)純化，得到標題產物29b(27mg)。
MS m/z(ESI)：492.20[M+1]。
第二步
(S)-8-羥基-7-甲氧基-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮29c
在250mL三口瓶中加入原料26g(1g，2.39mmol)，加四氫呋喃(20mL)攪拌溶解，氮氣置換3次，乾冰-乙醇浴冷至-78℃，滴加三乙醯氧基硼氫化鋰(24mL，23.9mmol，1.0M四氫呋喃溶液)，並於-78℃攪拌1小時。反應結束後，反應液緩慢倒入冰水(200mL)中，水相用二氯甲烷萃取(200mL×3)，合併 有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌(100mL)，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，得到標題產物29c(870mg)。
Ms(ESI)：m/z 273.12[M+1]。
第三步
(S)-7-甲氧基-8-((5-((((S)-7-甲氧基-2-(4-(甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)甲基)吡啶-3-基)甲氧基)-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮29
在10mL單口瓶中加入原料29b(27mg，54.88μmol)、29c(25mg，54.88μmol)、碳酸鉀(19mg，137.20μmol)，再加N,N-二甲基甲醯胺(0.5mL)，升溫至50℃攪拌反應3小時，反應液直接用高效液相色譜法(GILSON，色譜管柱：Xtimate C18,30*150mm,5μm；流動相：水相(20mmol/L碳酸氫銨)和甲醇，梯度配比：甲醇65%-80%，流速：30mL/min)純化，得到標題產物29(2.1mg)。
MS m/z(ESI)：728.30[M+1]。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ 8.60(s,2H),8.02(s,2H),7.32-7.46(m,4H),7.20(s,1H),6.88-6.90(m,2H),6.66(s,1H),6.34(s,1H),5.17-5.21(m,5H),4.18-4.28(m,1H),3.75-3.82(m,9H),3.70-3.75(m,1H),3.55-3.68(m,2H),3.38-3.42(m,1H),3.23-3.26(m,1H),2.73-2.85(m,1H),2.37-2.45(m,1H),1.23-1.38(m,2H),0.60-0.69(m,4H)。
實施例2-30 30
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(4-(2-羥乙基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧 基-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮30
Figure 111137361-A0202-12-0164-222
第一步
(S)-4-(4-(8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2-基)苯基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯30a
將實施例2-1 1第八步原料4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸替換為4-(4-第三丁氧羰基哌嗪)苯硼酸頻那醇酯，採用相同的條件，得到標題產物30a(228mg，產率：62.3%)。
MS m/z(ESI)：655.5[M+1]。
第二步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-2-(4-(4-(第三丁氧羰基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-10(5H)-羧酸烯丙酯30b
將實施例2-1 1第九步原料1i替換為30a(228mg，0.04mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物30b(204mg，產率：79.3%)。
MS m/z(ESI)：739.5[M+1]。
第三步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-5-側氧-2-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-11,11a-二氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-10(5H)-羧酸烯丙酯30c
將30b(100mg,0.14mmol)溶於無水二氯甲烷(1mL)，加三氟乙酸(0.3mL)，室溫攪拌1小時。反應液減壓濃縮除去有機溶劑，油泵抽乾。殘餘物溶於乙酸乙酯(20mL)，依次用飽和碳酸氫鈉溶液(10mL×2)和飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，真空乾燥，得到粗品標題產物30c(70mg，產率：80.7%)。產物不經純化直接用於下一步反應。
MS m/z(ESI)：639.5[M+1]。
第四步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-2-(4-(4-(2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)乙基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-10(5H)-羧酸烯丙酯30d
將30c(70mg,0.11mmol)溶於無水四氫呋喃(3mL)中，加第三丁基二甲基矽氧烷基乙醛(96mg,0.55mmol，Acros)，室溫攪拌30分鐘。向反應液中緩慢加入三乙醯氧基硼氫化鈉(140mg,0.66mmol)，加畢，室溫繼續攪拌2小 時。向反應液中加入飽和碳酸氫鈉水溶液(10mL)，用乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物30d(60mg，產率：68.7%)。
MS m/z(ESI)：797.5[M+1]。
第五步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-2-(4-(4-(2-((第三丁基二甲基矽基)氧基)乙基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯30e
將實施例2-1 1第十步原料1j替換為30d(45mg，0.07mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物30e(62mg，產率：68.4%)。
MS m/z(ESI)：1205.7[M+1]。
第六步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-2-(4-(4-(2-羥乙基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羥基-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯30f
將實施例2-1 1第十一步原料1l替換為30e(62mg，0.05mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物30f(20mg，產率：39.8%)。
MS m/z(ESI)：978.0[M+1]。
第七步
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(4-(2-羥乙基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮30
將實施例2-1 1第十二步原料1m替換為30f(20mg，0.02mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物30(10mg，產率：61.8%)。
MS m/z(ESI)：791.6[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 7.92(d,1H),7.39(s,1H),7.33(s,1H),7.29(d,2H),7.21-7.15(m,1H),6.90(d,2H),6.85(s,1H),6.68-6.62(m,1H),6.54-6.50(m,1H),6.32(s,1H),5.33(t,1H),4.44-4.40(m,1H),4.22-4.09(m,4H),4.05-4.01(m,1H),3.97-3.90(m,3H),3.82(s,2H),3.67(s,3H),3.57-3.49(m,4H),3.27-3.20(m,2H),3.17-3.09(m,4H),2.03-1.95(m,3H),1.86-1.78(m,3H),1.62-1.55(m,2H),1.49-1.44(m,2H),1.35(d,1H),0.86(t,3H),0.80-0.76(m,1H),0.69-0.64(m,2H)。
實施例2-31 31
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(4-((R)-2,3-二羥基丙基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮31
Figure 111137361-A0202-12-0167-223
Figure 111137361-A0202-12-0168-224
第一步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-2-(4-(4-(第三丁氧羰基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯31a
將實施例2-1 1第十步原料1j替換為30b(260mg，0.35mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物31a(360mg，產率：89.3%)。
MS m/z(ESI)：1147.1[M+1]。
第二步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-5-側氧-2-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羥基-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯31b
將實施例2-30 30第三步原料30b替換為31a(360mg，0.31mmol)，採用相同的反應條件，得到粗品標題產物31b(300mg)。
MS m/z(ESI)：933.5[M+1]。
第三步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-2-(4-(4-(((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧雜環戊-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羥基-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯31c
將31b(65mg,0.07mmol)溶於無水四氫呋喃(4mL)中，加(S)-2,2-二甲基-1,3-二氧雜環戊-4-甲醛(200mg,0.77mmol，畢得)，室溫攪拌30分鐘。向反應液中緩慢加入三乙醯氧基硼氫化鈉(115mg,0.54mmol)，加畢，室溫繼續攪拌1小時。向反應液中加入飽和碳酸氫鈉水溶液(10mL)，用乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物31c(60mg，產率：82.2%)。
MS m/z(ESI)：1045.7[M-1]。
第四步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-2-(4-(4-((R)-2,3-二羥基丙基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羥基-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯31d
將31c(60mg,0.06mmol)溶於無水二氯甲烷(2mL)，加三氟乙酸(0.4mL)，室溫攪拌10分鐘。減壓濃縮，油泵抽乾。殘餘物溶於乙酸乙酯(20mL)，依次用飽和碳酸氫鈉溶液(10mL×2)和飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物31d(14mg，產率：24.3%)。
MS m/z(ESI)：1007.9[M+1]。
第五步
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(4-((R)-2,3-二羥基丙基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮31
將實施例2-1 1第十二步原料1m替換為31d(14mg，0.01mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物31(10mg，產率：87.6%)。
MS m/z(ESI)：821.6[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 7.92(d,1H),7.40-7.38(m,1H),7.33(s,1H),7.31-7.28(m,2H),6.91(d,1H),6.85(s,1H),6.67-6.64(m,1H),6.53(d,1H),6.32(s,1H),5.33(t,1H),4.54-4.50(m,1H),4.44-4.41(m,1H),4.18-4.11(m,2H),4.04-4.01(m,1H),3.95-3.92(m,2H),3.82(s,2H),3.66(s,4H),3.56-3.50(m,3H),3.17-3.03(m,6H),2.74-2.71(m,1H),2.03-1.95(m,6H),1.85-1.77(m,5H),1.61-1.55(m,2H),1.48-1.44(m,2H),1.35(d,1H),0.86(t,4H),0.69-0.64(m,2H)。
實施例2-32 32
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(4-(2-羥基乙醯基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮32
Figure 111137361-A0202-12-0171-225
第一步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-2-(4-(4-(2-羥基乙醯基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羥基-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯32a
將31b(50mg，0.05mmol)溶於無水二氯甲烷(5mL)和甲醇(0.5mL)中，依次加入2-羥基乙酸(4.1mg，0.05mmol，伊諾凱)和4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基氯化嗎啉鹽(30mg，0.11mmol，韶遠)，室溫攪拌1小時。減壓濃縮，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物32a(34mg，產率：64.0%)。
MS m/z(ESI)：991.8[M+1]。
第二步
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(4-(2-羥基乙醯基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮32
將實施例2-1 1第十二步原料1m替換為32a(34mg，0.03mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物32(25mg，產率：90.5%)。
MS m/z(ESI)：805.9[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 7.90(d,1H),7.39(s,1H),7.33-7.24(m,2H),7.04(s,1H),6.91(d,1H),6.83(s,1H),6.56(s,1H),6.52-6.47(m,1H),6.29(s,1H),4.60(t,1H),4.19-4.08(m,3H),3.98-3.89(m,3H),3.82-3.77(m,1H),3.69-3.62(m,3H),3.61-3.56(m,2H),3.55-3.40(m,6H),3.25-3.19(m,2H),3.17-3.09(m,3H),2.72(dd,1H),2.36-2.25(m,2H),2.19-2.15(m,1H),2.05-1.93(m,2H),1.86-1.73(m,4H),1.60-1.51(m,2H),1.46-1.41(m,1H),0.86-0.77(m,2H),0.69-0.51(m,3H)。
實施例2-33 33
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(4-((S)-2,3-二羥基丙基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮33
Figure 111137361-A0202-12-0172-226
Figure 111137361-A0202-12-0173-227
第一步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-2-(4-(4-(((S)-2,2-二甲基-1,3-二氧雜環戊-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羥基-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯33a
將實施例2-31 31第三步原料(S)-2,2-二甲基-1,3-二氧雜環戊-4-甲醛替換為(R)-2,2-二甲基-1,3-二氧雜環戊-4-甲醛，採用相同的反應條件，得到標題產物33a(23mg，產率：82.0%)。
MS m/z(ESI)：1047.9[M+1]。
第二步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-2-(4-(4-((S)-2,3-二羥基丙基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羥基-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯33b
將33a(23mg，0.02mmol)溶於乙腈(2mL)，加三氟甲磺酸鐿(28mg，0.05mmol，韶遠)，加熱至60℃繼續攪拌16小時。反應液冷卻至室溫，減 壓濃縮，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物33b(10mg，產率：45.2%)。
MS m/z(ESI)：1005.8[M-1]。
第三步
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(4-((S)-2,3-二羥基丙基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮33
將實施例2-1 1第十二步原料1m替換為33b(10mg，0.01mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物33(5mg，產率：61.3%)。
MS m/z(ESI)：821.6[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 7.89(d,1H),7.36(s,1H),7.31(s,1H),7.30-7.22(m,2H),6.88(d,1H),6.83(s,1H),6.63(br,1H),6.52-6.49(m,1H),6.29(s,1H),5.30(t,1H),4.50(br,1H),4.40(d,1H),4.17-4.06(m,2H),4.03-3.98(m,1H),3.95-3.87(m,2H),3.82-3.76(m,2H),3.70-3.58(m,4H),3.55-3.44(m,3H),3.20-3.05(m,6H),2.72(dd,1H),2.35-2.14(m,6H),2.02-1.93(m,3H),1.84-1.74(m,2H),1.58-1.51(m,2H),1.47-1.39(m,2H),1.34-1.30(m,1H),0.90-0.76(m,4H),0.67-0.59(m,2H)。
實施例2-34 34
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-((環丙基甲基)硫基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮34
Figure 111137361-A0202-12-0175-228
第一步
(4-((環丙基甲基)硫基)苯基)硼酸
將四氫呋喃(1mL)置於反應瓶中，反應體系用氮氣置換三次，用乾冰丙酮浴冷卻至-78℃，滴加2.5M正丁基鋰溶液(1.89mL，4.73mmol)，滴完後攪拌10分鐘。滴加(4-溴苯基)(環丙基甲基)硫烷(700mg，2.88mmol，採用專利申請“WO2006/134341,A1中說明書第43頁的實施例7”公開的方法製備而得)的5mL四氫呋喃溶液，滴完後於-78℃繼續攪拌1小時，滴加硼酸三異丙酯(740mg，3.93mmol)的5mL四氫呋喃溶液，滴完後將反應液升至室溫，繼續攪拌3小時。向反應液中加入20mL水，攪拌30分鐘，然後加入1M鹽酸調節反應液pH為1，加完後攪拌30分鐘。反應液減壓濃縮，用乙酸乙酯萃取(15mL×3)，飽和氯化鈉溶液(30mL)洗滌，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得 殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到標題產物(4-((環丙基甲基)硫基)苯基)硼酸(352mg，產率：58.7%)。
MS m/z(ESI)：207.1[M-1]。
採用實施例2-1 1的合成路線，將第八步試劑4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸替換為(4-((環丙基甲基)硫基)苯基)硼酸，製得標題產物34(12mg，總產率：11.9%)。
MS m/z(ESI)：749.5[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 7.89(d,1H),7.55(s,1H),7.39-7.33(m,2H),7.32-7.22(m,3H),7.03(s,1H),6.84-6.81(m,1H),6.58-6.53(m,1H),6.32-6.28(m,1H),4.23-4.16(m,1H),4.13-4.07(m,1H),4.03-3.98(m,1H),3.96-3.90(m,2H),3.82-3.76(m,2H),3.70-3.62(m,4H),3.60-3.46(m,3H),3.27-3.19(m,2H),2.90(d,2H),2.75(dd,1H),2.43-2.38(m,1H),2.34-2.25(m,1H),2.19-2.14(m,1H),2.06-1.94(m,2H),1.83-1.72(m,3H),1.62-1.51(m,2H),1.35-1.31(m,1H),1.00-0.94(m,1H),0.86-0.80(m,1H),0.64-0.57(m,1H),0.52-0.45(m,2H),0.26-0.20(m,2H)。
實施例2-35 35
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(環丁基硫基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮35
Figure 111137361-A0202-12-0176-230
Figure 111137361-A0202-12-0177-231
第一步
(4-(環丁基硫基)苯基)硼酸
將四氫呋喃(3mL)置於反應瓶中，反應體系用氮氣置換三次，用乾冰丙酮浴冷卻至-78℃，滴加2.5M正丁基鋰溶液(3.23mL，8.07mmol)，滴完後攪拌10分鐘。滴加(4-溴苯基)(環丁基)硫烷(1.2g，4.94mmol，採用專利申請“EP1921074A1中說明書第17頁的實施例14”公開的方法製備而得)的10mL四氫呋喃溶液，滴完後於-78℃繼續攪拌1小時，滴加硼酸三異丙酯(1.27g，6.75mmol)的8mL四氫呋喃溶液，滴完後將反應液升至室溫，繼續攪拌3小時。向反應液中加入30mL水，攪拌30分鐘，然後加入1M鹽酸調節反應液pH為1，攪拌30分鐘。反應液減壓濃縮，用乙酸乙酯萃取(20mL×3)，飽和氯化鈉溶液(50mL)洗滌，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用CombiFlash快速製備儀以沖提劑體系B純化，得到標題產物(4-(環丁基硫基)苯基)硼酸(821mg，產率：79.9%)。
MS m/z(ESI)：207.1[M-1]。
採用實施例2-1 1的合成路線，將第八步試劑4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸替換為(4-(環丁基硫基)苯基)硼酸，製得標題產物35(10mg，總產率：12.8%)。
MS m/z(ESI)：749.5[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 7.90(d,1H),7.57(s,1H),7.37(d,2H),7.29(t,2H),7.18(d,2H),7.06-7.03(m,1H),6.85-6.82(m,1H),6.59-6.54(m,1H),6.33-6.29(m,1H),4.24-4.16(m,2H),4.14-4.07(m,1H),4.04-3.92(m,4H),3.83-3.78(m,1H),3.71-3.64(m,4H),3.62-3.47(m,3H),3.26-3.19(m,2H),2.76(dd,1H),2.43-2.32(m,2H),2.21-2.15(m,1H),2.05-1.96(m,2H),1.84-1.76(m,4H),1.61-1.53(m,2H),1.36-1.32(m,1H),0.87-0.81(m,2H),0.69-0.53(m,4H)。
實施例2-36 36
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(1-環丙基哌啶-4-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮36
Figure 111137361-A0202-12-0178-232
Figure 111137361-A0202-12-0179-233
採用實施例2-1 1的合成路線，將第八步試劑4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸替換為1-環丙基-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)苯基)哌啶(採用專利申請“KR102019/0109007A中說明書第59頁的實施例10”公開的方法製備而得)，製得標題產物36(25mg，總產率：20.9%)。
MS m/z(ESI)：786.5[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 7.90(d,1H),7.52(s,1H),7.38-7.31(m,2H),7.29(s,1H),7.19(d,2H),6.84(s,1H),6.54(d,1H),6.32(s,1H),4.24-4.16(m,1H),4.15-4.08(m,1H),4.05-3.99(m,1H),3.98-3.91(m,2H),3.81(s,3H),3.65(s,3H),3.57-3.46(m,2H),3.27-3.18(m,2H),3.02(br,2H),2.76(dd,1H),2.46-2.37(m,2H),2.29-2.17(m,2H),2.08-1.95(m,2H),1.88-1.76(m,4H),1.74-1.66(m,2H),1.63-1.51(m,4H),1.37-1.32(m,1H),0.89-0.74(m,3H),0.71-0.60(m,3H),0.48-0.38(m,2H),0.34-0.25(m,2H)。
實施例2-37 37
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-5-側氧-2-(4-(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)苯基)-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊 基)氧基)-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮37
Figure 111137361-A0202-12-0180-234
採用實施例2-1 1的合成路線，將第八步試劑4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸替換為4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)苯基)-1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶(採用專利申請“US2013/210798,A1中說明書第40頁的實施例60”公開的方法製備而得)，製得標題產物37(16mg，總產率：20.7%)。
MS m/z(ESI)：828.6[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 7.90(d,1H),7.50(s,1H),7.37-7.30(m,2H),7.28(s,1H),7.19(d,2H),6.83(s,1H),6.57-6.50(m,1H),6.29(s,1H),4.22-4.14(m,1H),4.12-4.06(m,1H),4.03-3.97(m,1H),3.96-3.89(m,2H),3.82-3.76(m,2H),3.70-3.61(m,4H),3.60-3.44(m,3H),3.25-3.09(m,4H),2.99(d,2H),2.75(dd,1H),2.43-2.36 (m,2H),2.34-2.25(m,1H),2.05-1.93(m,2H),1.83-1.74(m,4H),1.71-1.52(m,6H),1.33(d,1H),0.83(t,1H),0.79-0.73(m,1H),0.69-0.51(m,3H)。
實施例2-38 38
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(1-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮38
Figure 111137361-A0202-12-0181-235
採用實施例2-1 1的合成路線，將第八步試劑4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸替換為1-(2,2-二氟乙基)-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)苯基)哌啶(採用專利申請“WO2020002487,A1中說明書第122頁的實施例59第二步”公開的方法製備而得)，製得標題產物38(13mg，總產率：15.7%)。
MS m/z(ESI)：810.7[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 7.90(d,1H),7.52(s,1H),7.38-7.32(m,2H),7.29(s,1H),7.21(d,2H),6.84(s,1H),6.57-6.52(m,1H),6.32(s,1H),5.32(t,1H),4.23-4.17(m,1H),4.14-4.09(m,1H),4.05-3.99(m,1H),3.97-3.91(m,2H),3.83-3.80(m,2H),3.68-3.64(m,3H),3.58-3.47(m,3H),3.27-3.19(m,2H),3.00(d,2H),2.80-2.70(m,3H),2.47-2.40(m,2H),2.30-2.22(m,2H),2.08-1.96(m,3H),1.85-1.78(m,3H),1.74-1.54(m,6H),1.37-1.31(m,1H),0.86(t,1H),0.81-0.75(m,1H),0.72-0.61(m,3H)。
實施例2-39 39
(S)-7-環丙氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-5-側氧-2-(4-(四氫-2H-吡喃-4-基)苯基)-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氫-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-5-酮39
Figure 111137361-A0202-12-0182-236
採用實施例2-1 1的合成路線，將第十步試劑1j替換為5b，將1k替換為16k，製得標題產物39(20mg，總產率：16.3%)。
MS m/z(ESI)：773.6[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 7.99(s,1H),7.73-7.65(m,2H),7.64-7.56(m,2H),7.47-7.39(m,1H),7.35(s,1H),7.28(d,1H),6.91(s,1H),6.64-6.58(m,1H),6.40-6.37(m,1H),4.30-4.14(m,2H),4.10-3.86(m,5H),3.73(s,2H),3.70-3.45(m,5H),3.32-3.27(m,1H),3.20(d,1H),2.89-2.76(m,2H),2.70(s,1H),2.48-2.35(m,2H),2.14-1.99(m,2H),1.86(br,4H),1.78-1.55(m,5H),1.43-1.39(m,1H),0.94-0.82(m,3H),0.80-0.61(m,5H)。
三、連接子-藥物的實施例
實施例3-1 LD-1
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮雜三環[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-側氧丁醯胺基)乙醯胺基]乙醯胺基}-3-甲基丁醯胺基]丙醯胺基]苯基}甲基(7'S)-8'-羥基-13'-甲氧基-12'-[(5-{[(7S)-13-甲氧基-5-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]-2-側氧-3,9-二氮雜三環[8.4.0.03,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-2'-側氧-3',9'-二氮雜螺[環丙烷-1,5'-三環[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-1
Figure 111137361-A0202-12-0183-237
Figure 111137361-A0202-12-0184-238
第一步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苄基(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-2-(4-(4-(第三丁氧羰基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-1b
將30b(66mg，0.09mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(3mL)中，加入4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苄基(11aS)-11-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-8-羥基-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-1a(60mg，0.07mmol，採用專利申請“CN 111164208 A中說明書第123頁的實施例1”公開的方法製備而得)，再加入無水碳酸鉀(31mg，0.22mmol)，室溫攪拌16小時。向反應液中加水(10mL)，用乙酸乙酯萃取(15mL×3)，合併有機相，依次用水(15mL×3)和飽和氯化鈉溶液(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得 殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物LD-1b(89mg，產率：81.7%)。
MS m/z(ESI)：1466.4[M+1]。
第二步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苄基(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羥基-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-1c
將LD-1b(89mg，0.06mmol)溶於無水二氯甲烷(0.5mL)，加入4N的鹽酸1,4-二噁烷溶液(1mL)，室溫攪拌1小時。反應液減壓濃縮，油泵抽乾，所得殘餘物溶於乙酸乙酯(20mL)，依次用飽和碳酸氫鈉溶液(5mL×2)和飽和食鹽水(5mL)洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾後濾液減壓濃縮。所得殘餘物溶於無水四氫呋喃(4mL)，加入甲醛水溶液(50mg，含量37%，0.62mmol)，室溫攪拌30分鐘。向反應液中緩慢加入三乙醯氧基硼氫化鈉(39mg，0.18mmol)，室溫繼續攪拌1小時。冰浴冷卻，加入飽和碳酸氫鈉溶液(10mL)淬滅反應，用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物LD-1c(34mg，產率：44.2%)。
MS m/z(ESI)：1266.9[M+1]。
第三步
4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苄基(11aS)-11-羥基-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-1d
將實施例2-1 1第十二步原料1m替換為LD-1c(34mg，0.03mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物LD-1d(40mg，粗品產率：>100%)。
MS m/z(ESI)：1098.7[M+1]。
第四步
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮雜三環[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-側氧丁醯胺基)乙醯胺基]乙醯胺基}-3-甲基丁醯胺基]丙醯胺基]苯基}甲基(7'S)-8'-羥基-13'-甲氧基-12'-[(5-{[(7S)-13-甲氧基-5-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]-2-側氧-3,9-二氮雜三環[8.4.0.03,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-2'-側氧-3',9'-二氮雜螺[環丙烷-1,5'-三環[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-1
將LD-1d(10mg，0.01mmol)溶於1.1mL無水二氯甲烷和甲醇(V/V=10：1)的混合溶劑，依次加入2-[2-(4-{2-氮雜三環[10.4.0.04,9]十六-1(12),4,6,8,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-側氧丁醯胺基)乙醯胺基]乙酸LD-1e(3.9mg，0.01mmol，採用專利申請“CN 111164208 A中說明書第127頁的實施例2”公開的方法製備而得)和4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鹽酸鹽(5mg，0.02mmol，韶遠)，氮氣置換三次，室溫攪拌反應30分鐘。反應液經減壓濃縮除去有機溶劑，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物LD-1(10mg，產率：73.2%)。
MS m/z(ESI)：1499.8[M/2+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 9.90(s,1H),8.25-8.20(m,1H),8.19-8.10(m,1H),8.08-8.00(m,1H),7.79-7.64(m,2H),7.60(t,1H),7.57-7.53(m,1H),7.51-7.47(m,1H),7.46-7.42(m,2H),7.37-7.32(m,4H),7.29(s,2H),7.20(d,2H),7.05(s,1H),6.97(d,1H),6.72(s,1H),6.68-6.63(m,1H),6.56-6.52(m,1H),6.32(s,1H),5.76(t,1H),5.32(t,2H),5.19(d,1H),5.02(d,1H),4.84-4.76(m,1H),4.40-4.33(m,1H),4.23-4.15(m,2H),3.97-3.91(m,3H),3.80-3.73(m,5H),3.66(s,3H),3.62-3.58(m,2H),3.56-3.51(m,2H),3.41(t,1H),2.78-2.71(m,1H),2.64(s,2H),2.31-2.24(m,2H),2.04-1.96(m,9H),1.83-1.74(m,5H),1.59-1.44(m,8H),1.37-1.33(m,5H),0.89-0.86(m,5H),0.82-0.78(m,3H),0.65-0.55(m,4H)。
實施例3-2 LD-2
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮雜三環[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-側氧丁醯胺基)乙醯胺基]乙醯胺基}-3-甲基丁醯胺基]丙醯胺基]苯基}甲基(7'S)-8'-羥基-13'-甲氧基-12'-[(5-{[(7S)-13-甲氧基-5-[4-(嗎啉-4-基)苯基]-2-側氧-3,9-二氮雜三環[8.4.0.03,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-2'-側氧-3',9'-二氮雜螺[環丙烷-1,5'-三環[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-2
Figure 111137361-A0202-12-0187-239
Figure 111137361-A0202-12-0188-240
第一步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苄基(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-(嗎啉-4-基)苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-甲氧基-5-氧基-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-2a
將2b(51.4mg，0.08mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(2mL)中，加入LD-1a(50mg，0.06mmol)和無水碳酸鉀(25.6mg，0.19mmol)，室溫攪拌16小時。向反應液中加入水(6mL)，用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合併有機相，依次用水(10mL×3)和飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物LD-2a(65mg，產率：76.9%)。
MS m/z(ESI)：1367.9[M+1]。
第二步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苄基(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-(嗎啉-4-基)苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羥基-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-2b
將LD-2a(65mg，0.05mmol)溶於無水四氫呋喃(3mL)中，冰水浴冷卻，加入冰乙酸(17.1mg，0.29mmol)，再加入四丁基氟化銨的四氫呋喃溶液(1M，0.24mL，0.24mmol)，加畢，撤去冰水浴，室溫攪拌22小時。加入乙酸乙酯(6mL)稀釋，依次用飽和氯化銨水溶液(10mL×2)和飽和氯化鈉水溶液洗滌(10mL×2)。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化，得到標題產物LD-2b(59.5mg，產率：100%)。
MS m/z(ESI)：1253.8[M+1]。
第三步
4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苄基(11aS)-11-羥基-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-(嗎啉-4-基)苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜-8-基)氧基)戊基)氧基)-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-2c
將LD-2b(59.5mg，0.047mmol)溶於無水二氯甲烷(2mL)，依次加入吡咯烷(33.8mg，0.48mmol)和四(三苯基膦)鈀(5.5mg，0.0047mmol)，氮氣氛圍下攪拌30分鐘。減壓濃縮除去有機溶劑，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物LD-2c(45mg，產率：87.3%)。
MS m/z(ESI)：1085.6[M+1]。
第四步
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮雜三環[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-側氧丁醯胺基)乙醯胺基]乙醯胺基}-3-甲基丁醯胺基]丙醯胺基]苯基}甲基(7'S)-8'-羥基-13'-甲氧基-12'-[(5-{[(7S)-13-甲氧基-5-[4-(嗎啉-4-基)苯基]-2-側氧-3,9-二氮雜三環[8.4.0.03,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-2'-側氧-3',9'-二氮雜螺[環丙烷-1,5'-三環[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-2
將LD-2c(10mg，0.01mmol)溶於二氯甲烷和甲醇的混液(V/V=10/1，2mL)中，依次加入LD-1e(3.86mg，0.01mmol)和4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鹽酸鹽(6.4mg，0.02mmol)，氮氣氛圍下攪拌30分鐘。減壓濃縮除去有機溶劑，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物LD-2(2.1mg，產率：15.4%)。
MS m/z(ESI)：1486.9[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.42(s,1H),9.89(s,1H),8.24-8.18(m,1H),8.18-8.14(m,1H),8.14-8.10(m,1H),8.07-7.99(m,1H),7.78-7.73(m,1H),7.72-7.63(m,2H),7.62-7.57(m,1H),7.57-7.51(m,1H),7.51-7.39(m,3H),7.38-7.27(m,3H),7.23-7.16(m,2H),7.07-7.02(m,1H),6.93-6.88(m,1H),6.75-6.70(m,1H),6.69-6.62(m,1H),6.57-6.48(m,2H),6.31(s,1H),5.35-5.30(m,1H),5.23-5.14(m,1H),5.04-4.98(m,1H),4.84-4.77(m,1H),4.40-4.31(m,2H),4.23-4.12(m,2H),4.03-3.83(m,6H),3.81-3.71(m,5H),3.66(s,2H),3.63-3.48(m,5H),3.43-3.38(m,2H),3.28-3.20(m,2H),3.16-3.08(m,3H),2.80-2.60(m,7H),2.39-2.22(m,3H),2.10-1.92(m,4H),1.84- 1.71(m,3H),1.61-1.49(m,3H),1.49-1.41(m,2H),1.37-1.32(m,1H),0.90-0.77(m,5H),0.74-0.67(m,1H),0.64-0.54(m,2H)。
實施例3-3 LD-3
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮雜三環[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-側氧丁醯胺基)乙醯胺基]乙醯胺基}-3-甲基丁醯胺基]丙醯胺基]苯基}甲基(7'S)-12'-[(5-{[(7S)-5-[4-(環丙基硫基)苯基]-13-甲氧基-2-側氧-3,9-二氮雜三環[8.4.0.03,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-8'-羥基-13'-甲氧基-2'-側氧-3',9'-二氮雜螺[環丙烷-1,5'-三環[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-3
Figure 111137361-A0202-12-0191-242
第一步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-2-(4-(環丙基硫基)苯基)-7-甲氧基-1,10,11,11a-四氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-5-酮LD-3a
將實施例2-1 1第八步原料4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸替換為((4-環丙基硫基)苯基)硼酸，採用相同的條件，得到標題產物LD-3a(110mg，產率：69.9%)。
MS m/z(ESI)：543.1[M+1]。
第二步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-2-(4-(環丙基硫基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-10(5H)-羧酸烯丙酯LD-3b
將實施例2-1 1第九步原料1i替換為LD-3a(110mg，0.20mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物LD-3b(108mg，產率：85.0%)。
MS m/z(ESI)：627.1[M+1]。
第三步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苄基(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-2-(4-(環丙基硫基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-3c
將實施例3-1 LD-1第一步原料30b替換為LD-3b(56mg，0.09mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物LD-3c(90mg，產率：82.6%)。
MS m/z(ESI)：1354.8[M+1]。
第四步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苄基(11aS)-8-((5-(((S)-10-(烯丙氧基)羰基)-2-(4-(環丙基硫基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羥基-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-3d
將實施例2-1 1第十一步原料1l替換為LD-3c(90mg，0.07mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物LD-3d(75mg，產率：91.0%)。
MS m/z(ESI)：1240.8[M+1]。
第五步
4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苄基(11aS)-8-((5-(((S)-2-(4-(環丙基硫基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羥基-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-3e
將實施例2-1 1第十二步原料1m替換為LD-3d(75mg，0.06mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物LD-3e(51mg，產率：78.7%)。
MS m/z(ESI)：1072.8[M+1]。
第六步
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮雜三環[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-側氧丁醯胺基)乙醯胺基]乙醯胺基}-3-甲基丁醯胺基]丙醯胺基]苯基}甲基(7'S)-12'-[(5-{[(7S)-5-[4-(環丙基硫基)苯基]-13-甲氧基-2-側氧-3,9-二氮雜三環[8.4.0.03,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-8'-羥基- 13'-甲氧基-2'-側氧-3',9'-二氮雜螺[環丙烷-1,5'-三環[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-3
將實施例3-1 LD-1第四步原料LD-1d替換為LD-3e(17mg，0.02mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物LD-3(5mg，產率：21.4%)。
MS m/z(ESI)：1473.5[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 9.90(s,1H),8.25-8.11(m,2H),8.09-8.00(m,1H),7.76(d,1H),7.74-7.64(m,2H),7.61(t,1H),7.57(s,1H),7.55-7.53(m,1H),7.50-7.48(m,1H),7.45-7.43(m,1H),7.40(d,2H),7.38-7.34(m,2H),7.33(s,1H),7.31(s,2H),7.22-7.17(m,2H),7.05(s,1H),6.73(s,1H),6.59-6.51(m,2H),6.32(s,1H),5.77(t,1H),5.33(t,1H),5.19(d,1H),5.06-4.98(m,1H),4.40-4.32(m,1H),4.25-4.17(m,2H),3.94(t,3H),3.79(s,3H),3.76-3.72(s,2H),3.67(s,3H),3.62-3.58(m,3H),3.56-3.52(m,3H),3.42(t,2H),3.15(d,1H),2.81-2.75(m,2H),2.30-2.24(m,2H),2.11-2.03(m,2H),2.02-1.95(m,5H),1.83-1.76(m,4H),1.61-1.51(m,4H),1.50-1.43(m,2H),1.10-1.07(m,2H),0.88-0.84(m,5H),0.81(t,3H),0.61-0.57(m,4H)。
實施例3-4 LD-4
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮雜三環[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-側氧丁醯胺基)乙醯胺基]乙醯胺基}-3-甲基丁醯胺基]丙醯胺基]苯基}甲基(7'S)-8'-羥基-13'-甲氧基-12'-[(5-{[(7S)-13-甲氧基-2-側氧-5-[4-(1H-吡唑-1-基)苯基]-3,9-二氮雜三環[8.4.0.03,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-2'-側氧-3',9'-二氮雜螺[環丙烷-1,5'-三環[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-4
Figure 111137361-A0202-12-0195-243
採用實施例3-2 LD-2的合成路線，將第一步試劑2b替換為4b，製得標題產物LD-4(15mg，總產率：43%)。
MS m/z(ESI)：1467.6[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ 9.90(s,1H),8.52-8.50(m,1H),8.29-7.98(m,4H),7.81(d,2H),7.78-7.64(m,3H),7.64-7.52(m,3H),7.52-7.42(m,3H),7.40-7.29(m,3H),7.25-7.15(m,3H),7.10-7.02(m,1H),6.77-6.63(m,2H),6.60-6.52(m,2H),6.33(s,1H),5.22-5.18(m,1H),5.05-5.00(m,1H),4.86-4.80(m,1H),4.40-4.32(m,1H),4.28-4.19(m,2H),4.02-3.38(m,24H),3.20-3.15(m,1H),2.72-2.61(m,2H),2.33-2.23(m,2H),2.07-1.92(m,2H),1.89-1.68(m,4H),1.63-1.53(m,3H),1.49-1.45(m,3H),1.00-0.78(m,6H),0.73-0.53(m,4H)。
實施例3-5 LD-5
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮雜三環[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-側氧丁醯胺基)乙醯胺基]乙醯胺基}-3-甲基丁醯胺基]丙醯胺基]苯基}甲基(7'S)-8'-羥基-13'-甲氧基-12'-[(5-{[(7S)-13-甲氧基-5-[4-(氧烷-4-基)苯基]-2-側氧-3,9-二氮雜三環[8.4.0.03,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-2'-側氧-3',9'-二氮雜螺[環丙烷-1,5'-三環[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-5
Figure 111137361-A0202-12-0196-244
採用實施例3-2 LD-2的合成路線，將第一步試劑2b替換為5b，製得標題產物LD-5(18mg，總產率：42%)。
MS m/z(ESI)：1485.6[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ 9.89(s,1H),8.31-7.94(m,3H),7.79-7.64(m,2H),7.63-7.44(m,7H),7.40-7.28(m,6H),7.25-7.15(m,1H),7.07-7.02(m,1H),6.80-6.64(m,2H),6.60-6.50(m,2H),6.32(s,1H),5.82-5.70(m,1H),5.26-5.15(m,1H),5.07-4.97(m,1H),4.87-4.76(m,1H),4.41-4.34(m,1H),4.25-4.16(m,2H),4.00-3.51(m,27H),3.18-3.12(m,1H),2.80-2.70(m,1H),2.68-2.60(m,2H),2.33-2.23(m,2H),2.10-1.94(m,6H),1.85-1.74(m,4H),1.62-1.53(m,3H),1.51-1.43(m,3H),0.87-0.80(m,6H),0.76-0.53(m,4H)。
實施例3-6 LD-6
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮雜三環[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-側氧丁醯胺基)乙醯胺基]乙醯胺基}-3-甲基丁醯胺基]丙醯胺基]苯基}甲基(7'S)-8'-羥基-12'-[(5-{[(7S)-5-{4-[1-(2-羥乙醯基)哌啶-4-基]苯基}-13-甲氧基-2-側氧-3,9-二氮雜三環[8.4.0.03,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-13'-甲氧基-2'-側氧-3',9'-二氮雜螺[環丙烷-1,5'-三環[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-6
Figure 111137361-A0202-12-0197-245
實施例3-7 LD-7
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮雜三環[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-側氧丁醯胺基)乙醯胺基]乙醯胺基}-3-甲基丁醯胺基]丙醯胺基]苯基}甲基(7'S)-8'-羥基-13'-甲氧基-12'-[(5-{[(7S)-13-甲氧基-2-側氧-5-[4-(2H-1,2,3-***-2-基)苯基]-3,9-二氮雜三環[8.4.0.03,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-2'-側氧-3',9'-二氮雜螺[環丙烷-1,5'-三環[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-7
Figure 111137361-A0202-12-0197-246
Figure 111137361-A0202-12-0198-247
採用實施例3-2 LD-2的合成路線，將第一步試劑2b替換為7b(70mg，0.11mmol)，製得標題產物LD-7(13mg，總產率：7.8%)。
MS m/z(ESI)：735.0[M/2+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 9.89(s,1H),8.23-8.15(m,2H),8.12(s,2H),8.08-8.00(m,1H),7.98(d,1H),7.76(d,1H),7.73-7.55(m,4H),7.57-7.52(m,1H),7.51-7.40(m,2H),7.39-7.27(m,3H),7.23-7.16(m,2H),7.07-7.02(m,1H),6.75-6.70(m,1H),6.68-6.50(m,3H),6.32(s,1H),5.35-5.30(m,1H),5.22-5.15(m,1H),5.04-4.98(m,1H),4.84-4.77(m,1H),4.40-4.32(m,2H),4.29-4.16(m,2H),3.99-3.89(m,3H),3.87-3.71(m,5H),3.67(s,2H),3.64-3.50(m,4H),3.43-3.35(m,2H),3.29-3.22(m,2H),3.18-3.09(m,2H),2.88-2.79(m,2H),2.69-2.59(m,3H),2.40-2.32(m,2H),2.31-2.21(m,2H),2.10-1.92(m,4H),1.84-1.71(m,4H),1.61-1.50(m,3H),1.49-1.41(m,2H),1.39-1.32(m,1H),0.90-0.77(m,5H),0.75-0.66(m,1H),0.64-0.54(m,2H)。
實施例3-8 LD-8
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮雜三環[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-側氧丁醯胺基)乙醯胺基]乙醯胺基}-3-甲基丁醯胺基]丙醯胺 基]苯基}甲基(7'S)-8'-羥基-13'-甲氧基-12'-[(5-{[(7S)-13-甲氧基-5-[4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基]-2-側氧-3,9-二氮雜三環[8.4.0.03,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-2'-側氧-3',9'-二氮雜螺[環丙烷-1,5'-三環[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-8
Figure 111137361-A0202-12-0199-248
採用實施例3-2 LD-2的合成路線，將第一步試劑2b替換為6b，製得標題產物LD-8(13mg，總產率：29%)。
MS m/z(ESI)：1498.7[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ 9.89(s,1H),8.27-7.96(m,3H),7.83-7.63(m,2H),7.62-7.26(m,12H),7.24-7.14(m,3H),7.08-7.02(m,1H),6.75-6.68(m,1H),6.61-6.50(m,2H),6.32(s,1H),5.80-5.72(m,1H),5.24-5.15(m,1H),5.05-4.98(m,1H),4.87-4.77(m,1H),4.41-4.31(m,1H),4.25-4.16(m,2H),3.97-3.90(m,5H),3.88-3.72(m,9H),3.70-3.38(m,14H),3.27-3.10(m,2H),2.81-2.60(m,4H),2.31-2.22(m,2H),2.09-1.95(m,6H),1.86-1.69(m,4H),1.60-1.51(m,3H),1.49-1.42(m,3H),0.92-0.76(m,6H),0.73-0.55(m,4H)。
實施例3-9 LD-9
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮雜三環[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-側氧丁醯胺基)乙醯胺基]乙醯胺基}-3-甲基丁醯胺基]丙醯胺基]苯基}甲基(7'S)-8'-羥基-13'-甲氧基-12'-{3-[1-({[(7S)-13-甲氧基-5-(4-甲氧基苯 基)-2-側氧-3,9-二氮雜三環[8.4.0.03,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}甲基)環丙基]丙氧基}-2'-側氧-3',9'-二氮雜螺[環丙烷-1,5'-三環[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-9
Figure 111137361-A0202-12-0200-249
第一步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苄基(11aS)-8-(3-(1-((((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)甲基)環丙基)丙氧基)-11-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-9a
將實施例3-1 LD-1第一步原料30b替換為13k(58mg，0.01mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物LD-9a(98mg，產率：84.5%)。
MS m/z(ESI)：1338.6[M+1]。
第二步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苄基(11aS)-8-(3-(1-((((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)甲基)環丙基)丙氧基)-11-羥基-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-9b
將實施例2-1 1第十一步原料1l替換為LD-9a(98mg，0.07mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物LD-9b(73mg，產率：81.4%)。
MS m/z(ESI)：1224.7[M+1]。
第三步
4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苄基(11aS)-11-羥基-7-甲氧基-8-(3-(1-((((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-8-基)氧基)甲基)環丙基)丙氧基)-5-側氧-11,11a-二 氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-9c
將實施例2-1 1第十二步原料1m替換為LD-9b(73mg，0.06mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物LD-9c(58mg，產率：88.4%)。
MS m/z(ESI)：1056.8[M+1]。
第四步
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮雜三環[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-側氧丁醯胺基)乙醯胺基]乙醯胺基}-3-甲基丁醯胺基]丙醯胺基]苯基}甲基(7'S)-8'-羥基-13'-甲氧基-12'-{3-[1-({[(7S)-13-甲氧基-5-(4-甲氧基苯基)-2-側氧-3,9-二氮雜三環[8.4.0.03,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}甲基)環丙基]丙氧基}-2'-側氧-3',9'-二氮雜螺[環丙烷-1,5'-三環[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-9
將實施例3-1 LD-1第四步原料LD-1d替換為LD-9c(15mg，0.01mmol)，採用相同的反應條件，得到標題產物LD-9(17mg，產率：82.1%)。
MS m/z(ESI)：729.8[M/2+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 12.44(s,1H),9.87(s,1H),8.26-8.09(m,2H),8.08-7.99(m,1H),7.81-7.64(m,2H),7.60(s,1H),7.55-7.42(m,5H),7.40-7.27(m,6H),7.22-7.11(m,2H),7.04(s,1H),6.91(d,2H),6.78-6.69(m,1H),6.27(s,1H),5.75(s,1H),5.13(d,1H),5.02(d,1H),4.82(d,1H),4.36(s,1H),4.26-4.13(m,2H),3.99-3.93(m,1H),3.86(s,6H),3.79-3.72(m,9H),3.67(s,3H),3.61-3.57(m,3H),3.53(d,2H),3.43-3.37(m,2H),3.14(d,1H),2.76(d,1H),2.65-2.62(m,1H),2.38-2.29(m, 2H),2.00-1.95(m,2H),1.88-1.75(m,4H),1.62-1.54(m,3H),0.88-0.79(m,8H),0.64-0.56(m,3H),0.54-0.42(m,4H)。
實施例3-10 LD-10
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮雜三環[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-側氧丁醯胺基)乙醯胺基]乙醯胺基}-3-甲基丁醯胺基]丙醯胺基]苯基}甲基(7'S)-8'-羥基-13'-甲氧基-12'-{[1-(3-{[(7S)-13-甲氧基-5-(4-甲氧基苯基)-2-側氧-3,9-二氮雜三環[8.4.0.03,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}丙基)環丙基]甲氧基}-2'-側氧-3',9'-二氮雜螺[環丙烷-1,5'-三環[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-10
Figure 111137361-A0202-12-0203-250
實施例3-11 LD-11
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮雜三環[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-側氧丁醯胺基)乙醯胺基]乙醯胺基}-3-甲基丁醯胺基]丙醯胺基]苯基}甲基(7'S)-13'-環丙氧基-8'-羥基-12'-[(5-{[(7S)-13-甲氧基-5-(4-甲氧基苯基)-2-側氧-3,9-二氮雜三環[8.4.0.03,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-2'-側氧-3',9'-二氮雜螺[環丙烷-1,5'-三環[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-11
Figure 111137361-A0202-12-0204-251
第一步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苄基(2-((S)-6-(((第三丁基二甲基矽基)氧基)甲基)-5-氮雜螺[2.4]庚烷-5-羰基)-4-環丙氧基-5-((三異丙基矽基)氧基)苯基)胺基甲酸酯LD-11a
將16f(900mg，1.53mmol)溶於四氫呋喃(10mL)中，加入三乙胺(231mg，2.29mmol)，氮氣氛下降至0℃，加入三光氣(204mg，0.69mmol)，攪拌10分鐘後，滴入N-[(丙-2-烯-1-基氧基)羰基]-L-纈胺醯基-N-[4-(羥甲基)苯基]-L-丙胺酸醯胺(693mg，1.84mmol，依據專利“WO2020/006722 A1”中說明書第161 頁實施例113所示的方法合成)與三乙胺(231mg，2.29mmol)的四氫呋喃(4mL)、N,N-二甲基甲醯胺(0.4mL)混合溶液，加完後升至40℃攪拌反應19小時。向反應液中加入水(15mL)，用乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合併有機相，依次用水(15mL×2)和飽和氯化鈉溶液(15mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物LD-11a(937mg，產率：73.3%)。
第二步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苄基(4-環丙氧基-2-((S)-6-(羥甲基)-5-氮雜螺[2.4]庚烷-5-羰基)-5-((三異丙基矽基)氧基)苯基)胺基甲酸酯LD-11b
將LD-11a(930mg，0.05mmol)溶於四氫呋喃、甲醇和水的混液(V/V/V=1/1/1，8mL)中，加入冰乙酸(8mL)，室溫攪拌5小時。濃縮反應液，所得殘餘物用乙酸乙酯(10mL)溶解，依次用水(10mL×2)和飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物LD-11b(630mg，產率：76.5%)。
MS m/z(ESI)：878.3[M+1]。
第三步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苄基(11S,11aS)-7-環丙氧基-11-羥基-5-側氧-8-((三異丙基矽基)氧基)-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-11c
將LD-11b(580mg，0.66mmol)溶於無水二氯甲烷(6mL)，依次加入碘苯二乙酸(319.5mg，0.99mmol)、2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(10.4mg，0.07 mmol)，氮氣氛圍下攪拌16小時。反應液用氯化銨溶液(10mL)淬滅，分液，有機相用水(10mL×2)和飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物LD-11c(489mg，產率：84.6%)。
MS m/z(ESI)：876.3[M+1]。
第四步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苄基(11S,11aS)-11-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-環丙氧基-5-側氧-8-((三異丙基矽基)氧基)-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-11d
將LD-11c(489mg，0.56mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(2mL)中，氮氣氛下，降至零下40℃，依次加入4-二甲胺基吡啶(545mg，4.46mmol)、第三丁基二甲矽基三氟甲磺酸酯(1g，3.79mmol)，升至室溫攪拌16小時。反應液用氯化銨溶液(10mL)淬滅，分液，有機相用水(10mL×2)和飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物LD-11d(499mg，產率：90.3%)。
第五步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苄基(11S,11aS)-11-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-環丙氧基-8-羥基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-11e
將LD-11d(499mg，0.50mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺和水的混液(V/V=50/1,5mL)中，再加入醋酸鋰(40mg，0.61mmol)，氮氣氛下，室溫攪拌3小時。反應液中加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL×2)萃取，有機相用水(10mL×2)和飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物LD-11e(419mg，產率：99.7%)。
第六步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苄基(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-7-環丙氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-11f
將LD-11e(70mg，0.08mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(2mL)中，加入(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧基-11,11a-二氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-10(5H)-羧酸烯丙酯(58.9mg，0.10mmol，採用專利“CN 111164208 A中說明書第103頁的中間體3-10”公開的方法製備而得)，加入碳酸鉀(34.8mg，0.25mmol)，室溫攪拌反應16小時，加入水(6mL)，乙酸乙酯萃取(10mL×2)，收集有機相，依次用水(10mL)和飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物LD-11f(111mg，產率：98.7%)。
MS m/z(ESI)：1338.6[M+1]。
第七步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苄基(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-環丙氧基-11-羥基-5-側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-11g
將LD-11f(111mg，0.08mmol)溶於無水四氫呋喃(6mL)中，冰水浴冷卻，加入冰乙酸(29.9mg，0.49mmol)，再加入四丁基氟化銨的四氫呋喃溶液(1M，0.4mL，0.42mmol)，加畢，撤去冰水浴，室溫攪拌22小時。加入乙酸乙酯(10mL)稀釋，依次用飽和氯化銨水溶液(10mL×2)和飽和氯化鈉水溶液洗滌(10mL×2)。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化，得到標題產物LD-11g(92mg，產率：90.6%)。
MS m/z(ESI)：1224.4[M+1]。
第八步
4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)丙醯胺基)苄基(11aS)-7-環丙氧基-11-羥基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-側氧-5,10,11,11a-四氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜-8-基)氧基)戊基)氧基)-5側氧-11,11a-二氫-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜-2,1'-環丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-11h
將LD-11g(92mg，0.08mmol)溶於無水二氯甲烷(3mL)，依次加入吡咯烷(53.5mg，0.75mmol)和四(三苯基膦)鈀(8.7mg，0.0075mmol)，氮氣氛圍下攪拌30分鐘。減壓濃縮除去有機溶劑，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物LD-11h(49mg，產率：61.7%)。
MS m/z(ESI)：1056.9[M+1]。
第九步
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮雜三環[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-側氧丁醯胺基)乙醯胺基]乙醯胺基}-3-甲基丁醯胺基]丙醯胺基]苯基}甲基(7'S)-13'-環丙氧基-8'-羥基-12'-[(5-{[(7S)-13-甲氧基-5-(4-甲氧基苯基)-2-側氧-3,9-二氮雜三環[8.4.0.03,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-2'-側氧-3',9'-二氮雜螺[環丙烷-1,5'-三環[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-11
將LD-11h(25mg，0.02mmol)溶於二氯甲烷和甲醇的混液(V/V=10/1，2mL)中，依次加入LD-1e(9.9mg，0.02mmol)和4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鹽酸鹽(16.4mg，0.06mmol)，氮氣氛圍下攪拌30分鐘。減壓濃縮除去有機溶劑，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物LD-11(14mg，產率：40.5%)。
MS m/z(ESI)：729.8[M/2+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 9.89(s,1H),8.25-7.99(m,4H),7.76(d,1H),7.73-7.57(m,3H),7.57-7.51(m,1H),7.51-7.41(m,3H),7.40-7.27(m,4H),7.24-7.16(m,2H),6.93-6.88(m,1H),6.76-6.70(m,1H),6.68-6.61(m,1H),6.57-6.49(m,2H),6.31(s,1H),5.35-5.30(m,1H),5.23-5.16(m,1H),5.04-4.97(m,1H),4.85-4.76(m,1H),4.42-4.30(m,2H),4.23-4.14(m,2H),3.99-3.82(m,3H),3.76(s,3H),3.67(s,2H),3.63-3.50(m,5H),3.44-3.39(m,2H),3.27-3.21(m,1H),3.18-3.09(m,2H),2.78-2.62(m,7H),2.40-2.33(m,2H),2.31-2.23(m,2H),2.20-2.16(m,1H),2.10-1.93(m,4H),1.84-1.68(m,4H),1.61-1.41(m,5H),1.36(s,1H),0.89-0.73(m,6H),0.72-0.51(m,5H)。
實施例3-12 LD-12
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮雜三環[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-側氧丁醯胺基)乙醯胺基]乙醯胺基}-3-甲基丁醯胺基]丙醯胺基]苯基}甲基(4S,6S,8S)-9-羥基-14-甲氧基-13-[(5-{[(7S)-13-甲氧基-5-(4-甲氧基苯基)-2-側氧-3,9-二氮雜三環[8.4.0.03,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-2-側氧-3,10-二氮雜四環[9.4.0.03,8.04,6]十五-1(15),11,13-三烯-10-羧酸酯LD-12
Figure 111137361-A0202-12-0210-252
實施例3-13 LD-13
(2S,3S,4S,5R)-6-(4-{[(7S)-12-({5-[(7'S)-9'-[({4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮雜三環[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-側氧丁醯胺基)乙醯胺基]乙醯胺基}-3-甲基丁醯胺基]丙醯胺基]苯基}甲氧基)羰基]-8'-羥基-13'-甲氧基-2'-側氧-3',9'-二氮雜螺[環丙烷-1,5'-三環[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-12'-基氧基]戊基}氧基)-13-甲氧基-5-(嗎啉-4-基)-2-側氧-3,9-二氮雜三環[8.4.0.03,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-9-羰基氧基]甲基}-2-[(2-甲氧基乙基)胺基羰基]苯氧基)-3,4,5-三羥基氧烷-2-甲酸LD-13
Figure 111137361-A0202-12-0211-253
實施例3-14 LD-14
(2S,3S,4S,5R)-6-(4-{[(7S)-12-({5-[(7'S)-9'-[({4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮雜三環[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-側氧丁醯胺基)乙醯胺基]乙醯胺基}-3-甲基丁醯胺基]丙醯胺基]苯基}甲氧基)羰基]-8'-羥基-13'-甲氧基-2'-側氧-3',9'-二氮雜螺[環丙烷-1,5'-三環[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-12'-基氧基]戊基}氧基)-5-[4-(環丙基硫基)苯基]-13-甲氧基-2-側氧-3,9-二氮雜三環[8.4.0.03,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-9-羰基氧基]甲基}-2-[(2-甲氧基乙基)胺基羰基]苯氧基)-3,4,5-三羥基氧烷-2-甲酸LD-14
Figure 111137361-A0202-12-0211-254
實施例3-15 LD-15
(2S,3S,4S,5R)-6-(4-{[(7S)-12-[(1-{3-[(7'S)-9'-[({4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮雜三環[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-側氧丁醯胺基)乙醯胺基]乙醯胺基}-3-甲基丁醯胺基]丙醯胺基]苯基}甲氧基)羰基]-8'-羥基-13'-甲氧基-2'-側氧-3',9'-二氮雜螺[環丙烷-1,5'-三環[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-12'-基氧基]丙基}環丙基)甲氧基]-13-甲氧基-5-(4-甲氧基苯基)-2-側氧-3,9-二氮雜三環[8.4.0.03,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-9-羰基氧基]甲基}-2-[(2-甲氧基乙基)胺基羰基]苯氧基)-3,4,5-三羥基氧烷-2-甲酸LD-15
Figure 111137361-A0202-12-0212-255
實施例3 LD-16
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮雜三環[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4側氧丁醯胺基)乙醯胺基]乙醯胺基}-3-甲基丁醯胺基]丙醯胺基]苯基}甲基(7'S)-12'-[(5-{[(7S)-13-環丙氧基-5-(4-甲氧基苯基)-2-側氧-3,9-二氮雜三環[8.4.0.03,7]十四-1(14),4,10,12-四烯12-基]氧基}戊基)氧基]-8'-羥基-13'-甲氧基-2'-側氧-3',9'-二氮雜螺[環丙烷-1,5'-三環[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-16
Figure 111137361-A0202-12-0213-256
採用實施例3-2 LD-2的合成路線，將第一步試劑2b替換為18l，製得標題產物LD-16(16mg，總產率：50%)。
MS m/z(ESI)：1457.6[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ 9.89(s,1H),8.28-7.96(m,3H),7.79-7.64(m,2H),7.63-7.28(m,11H),7.24-7.17(m,2H),7.08-7.02(m,1H),6.91(d,2H),6.75-6.70(m,1H),6.60-6.51(m,2H),6.31(s,1H),5.80-5.74(m,1H),5.22-5.15(m,1H),5.05-5.00(m,1H),4.85-4.78(m,1H),4.40-4.33(m,1H),4.25-4.18(m,2H),4.00-3.70(m,20H),3.65-3.50(m,4H),3.18-3.10(m,1H),2.82-2.73(m,2H),2.31-2.25(m,2H),2.09-1.94(m,2H),1.84-1.72(m,4H),1.58-1.52(m,3H),1.50-1.43(m,3H),0.88-0.78(m,6H),0.68-0.55(m,8H)。
實施例3 LD-17
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮雜三環[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-側氧丁醯胺基)乙醯胺基]乙醯胺基}-3-甲基丁醯胺基]丙醯胺基苯基}甲基(7'S)-12'-[(5-{[(7S)-5-[4-(1-環丙基哌啶-4-基)苯基]-13-甲氧基-2-側氧-3,9-二氮雜三環[8.4.0.03,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-8'-羥基-13'-甲氧基-2'-側氧-3',9'-二氮雜螺[環丙烷-1,5'-三環[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-17
Figure 111137361-A0202-12-0214-257
採用實施例3-2 LD-2的合成路線，將第一步試劑2b替換為(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-2-(4-(1-環丙基哌啶-4-基)苯基)-7-甲氧基-5-側氧-11,11a-二氫-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-10(5H)-羧酸丙烯酯36b，製得標題產物LD-17(17mg，總產率：46%)。
MS m/z(ESI)：1524.7[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ 9.89(s,1H),8.32-8.00(m,3H),7.79-7.42(m,9H),7.40-7.25(m,5H),7.25-7.15(m,2H),7.09-7.01(m,1H),6.75-6.62(m,2H),6.60-6.50(m,2H),6.32(s,1H),5.80-5.72(m,1H),5.24-5.14(m,1H),5.05-4.98(m,1H),4.85-4.77(m,1H),4.40-4.31(m,1H),4.26-4.17(m,2H),4.00-3.87(m,6H),3.85-3.51(m,20H),3.27-3.14(m,3H),3.07-2.97(m,1H),2.80-2.72(m,2H),2.32-2.20(m,2H),2.06-1.93(m,6H),1.86-1.70(m,4H),1.66-1.51(m,3H),1.50-1.42(m,3H),0.90-0.80(m,6H),0.66-0.29(m,8H)。
實施例3-18 LD-18
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮雜三環[10.4.0.04,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-側氧丁醯胺基)乙醯胺基]乙醯胺基}-3-甲基丁醯胺基]丙醯胺基]苯基}甲基(7'S)-8'-羥基-13'-甲氧基-12'-[(5-{[(7S)-13-甲氧基-2-側氧-5-{4-[1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基]苯基}-3,9-二氮雜三環[8.4.0.03,7]十四-1(14),4,10,12-四 烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-2'-側氧-3',9'-二氮雜螺[環丙烷-1,5'-三環[8.4.0.03,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸鹽LD-18
Figure 111137361-A0202-12-0215-258
採用實施例3-9 LD-9的合成路線，將第一步試劑13k替換為(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-2-(4-(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)苯基)-1,10,11,11a-四氫-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜環庚-5-酮37b，製得標題產物LD-18(20mg，總產率：20.6%)。
MS m/z(ESI)：1566.4[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ 9.91(s,1H),8.29-8.10(m,2H),8.09-7.97(m,1H),7.78-7.63(m,2H),7.62-7.57(m,1H),7.57-7.51(m,2H),7.50-7.46(m,1H),7.46-7.41(m,1H),2.40-7.26(m,7H),7.25-7.15(m,4H),7.10-7.01(m,1H),6.72(s,1H),6.53(s,2H),6.35-6.27(m,1H),5.76(s,1H),5.38-5.28(m,1H),5.24-5.14(m,1H),5.06-4.97(m,1H),4.86-4.75(m,1H),4.35(s,1H),4.20(s,2H),3.93(s,3H),3.84(s,4H),3.81-3.71(m,6H),3.68-3.64(m,3H),3.63-3.57(m,5H),3.56-3.51(m,2H),3.05-2.97(m,2H),2.81-2.72(m,1H),2.36(s,1H),2.30-2.24(m,1H),2.06-1.92(m,3H),1.86-1.64(m,10H),1.55(s,3H),1.49-1.43(m,1H),1.37-1.32(m,2H),0.90-0.77(m,8H),0.75-0.66(m,1H),0.65-0.54(m,3H)。
四、糖鏈合成實施例
實施例4-1糖鏈OLS-1(包含OLS-1-a和OLS-1-b)的合成
Figure 111137361-A0202-12-0216-259
Figure 111137361-A0202-12-0217-260
Figure 111137361-A0202-12-0218-263
Figure 111137361-A0202-12-0218-264
第一步
OLS-1b(包括OLS-1b1和OLS-1b2)的合成
將OLS-1a(20mg，0.01mmol，採用公知的方法“Journal of Carbohydrate Chemistry,2017,36,336-346”製備而得)溶於1.2mL二甲亞碸和N,N-二甲基甲醯胺(V/V=5：7)混合溶劑中，依次加入N,N-二異丙基乙胺(2.55mg，0.02mmol)的N,N-二甲基甲醯胺溶液(0.1mL)，11-疊氮基-3,6,9-三氧雜十一烷-1-胺(1.51mg，0.007mmol，購於安耐吉)的N,N-二甲基甲醯胺溶液(0.1mL)和N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮雜苯并***-1-基)六氟磷酸脲(HATU，3.16mg，0.008mmol)的N,N-二甲基甲醯胺溶液(0.1mL)，在28℃攪拌反應6小時。反應液用高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：XBridge Prep Amide 5um 19*150mm；流動相：A-水(0.01%氨水)：B-乙腈，梯度沖提，流速：30mL/min)，收集其相應組分，凍乾得到標題產物OLS-1b(包括OLS-1b1和OLS-1b2)(4.7mg)。
MS m/z(ESI)：1110.5[M/2+1]。
第二步
OLS-1(包含OLS-1-a和OLS-1-b)的合成
將OLS-1b(包括OLS-1b1和OLS-1b2)(1mg，0.45umol)溶於水(0.2mL)中，冰浴下加入三乙胺(2mg，0.02mmol)和2-氯-1,3-二甲基咪唑氯化物(1.14mg，6.75umol)的水溶液(0.1mL)，冰浴下攪拌反應，每隔2小時補加三乙胺(2mg，0.02mmol)和2-氯-1,3-二甲基咪唑氯化物(DMC，1.14mg，6.75umol)的水溶液(0.1mL)，共攪拌反應8小時。反應液用高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Welch HILIC 5um 10*250mm；流動相：A-水(0.01%氨水)：B-乙腈， 梯度沖提，流速：15mL/min)，收集其相應組分，凍乾得到標題產物OLS-1(包含OLS-1-a和OLS-1-b)(0.2mg)。
MS m/z(ESI)：1101.7[M/2+1]。
實施例4-2糖鏈OLS-2(包含OLS-2-a和OLS-2-b)的合成
Figure 111137361-A0202-12-0220-267
Figure 111137361-A0202-12-0220-268
Figure 111137361-A0202-12-0221-269
Figure 111137361-A0202-12-0221-270
Figure 111137361-A0202-12-0222-265
第一步
OLS-2a(包括OLS-2a1和OLS-2a2)的合成
將OLS-1a(100mg，49.5μmol)溶於1mL 0.2M pH=5.0的磷酸緩衝液得到A液，將2-(2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基)乙-1-胺(N3-PEG2-NH2，100mg，574μmol，麥克林試劑)溶於1mL 0.2M pH=7.0的磷酸緩衝液得到B液，將4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鎓氯化物(DMTMM，100mg，361μmol，畢得醫藥)溶於1mL水得到C液。
將700μL的A液、186μL B液、466μL C液混合，調節pH=5.0，50℃孵育3小時，補加466μL C液，50℃孵育1.5小時。反應液用高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：XBridge® Prep C18 5μm OBDTM(19×250mm)；流動相：A-水：B-乙腈，梯度沖提，流速：8mL/min)，收集其相應組分，凍乾 得到標題產物OLS-2a(包括OLS-2a1和OLS-2a2)(61mg)。
MS m/z(ESI)：1088.9[M/2+1]。
第二步
OLS-2(包含OLS-2-a和OLS-2-b)的合成
將OLS-2a(61mg，28mmol)、2-氯-1,3-二甲基-1H-苯并咪唑-3-氯化物(CDMBI，30.4mg，140mmol)、磷酸鉀(89.2mg，420mmol)在2.8mL水中混合，冰浴冷卻並攪拌反應3小時。反應液生成沉澱時反應完成。反應液用凝膠色譜管柱法純化(填料：GE Healthcare SephadexTM G-25 Fine，流動相：在2‰的三乙胺的水相體系)，收集其相應組分，凍乾得到標題產物OLS-2(包含OLS-2-a和OLS-2-b)。
MS m/z(ESI)：1079.9[M/2+1]。
實施例4-3糖鏈OLS-3的合成
(2S,3S,4S,5R,6R)-4-(2-(2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)-2-(((3aR,5R,6S,7R,7aR)-7-羥基-5-(羥甲基)-2-甲基-3a,6,7,7a-四氫-5H-吡喃并[3,2-d]噁唑-6-基)氧基)-6-(羥甲基)四氫-2H-吡喃-3,5-二醇OLS-3
Figure 111137361-A0202-12-0223-271
Figure 111137361-A0202-12-0224-272
第一步
N-((2R,3R,4R,5S,6R)-2,4-雙(苄氧基)-5-(((2R,4aR,6S,7S,8S,8aR)-7-(苄氧基)-8-((4-甲氧基苄基)氧基)-2-苯基六氫吡喃并[3,2-d][1,3]二氧雜環己-6-基)氧基)-6-((苄氧基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)乙醯胺OLS-3b
向裝有(2R,4aR,6S,7S,8S,8aR)-6-(((2R,3S,4R,5R,6R)-5-疊氮基-4,6-雙(苄氧基)-2-((苄氧基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)氧基)-7-(苄氧基)-8-((4-甲氧基苄基)氧基)-2-苯基六氫吡喃并[3,2-d][1,3]二氧雜環己烷OLS-3a(214mg，0.23mmol，採用公知的方法“Journal of the American Chemistry Society,2008,130,13790-13803”製備而得)的反應瓶中加入異丙醇(10mL)和乙酸乙酯(10mL)，然後加入鎳(125mg)，氫氣置換三次，控溫15~25℃反應約65小時。反應液經矽藻土過濾，濾液減壓濃縮，向所得殘餘物依次加入吡啶(5mL)和乙酸酐(69mg，0.68mmol)，控溫15~25℃反應約2.5小時。將反應液用水(20mL)及乙酸乙酯(30mL)稀釋，分液，收集有機相，水相再用乙酸乙酯萃取(10mL)。合併有機相，依次用飽和碳酸氫鈉溶液(10mL×2)、水(10mL)和飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，得到粗品標題產物OLS-3b(185mg)。產物不經純化直接進行下一步反應。
第二步
N-((2R,3R,4R,5S,6R)-2,4-雙(苄氧基)-5-(((2R,4aR,6S,7S,8S,8aS)-7-(苄氧基)-8-羥基-2-苯基六氫吡喃并[3,2-d][1,3]二氧雜環己-6-基)氧基)-6-((苄氧基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)乙醯胺OLS-3c
向裝有OLS-3b(185mg，0.19mmol)的反應瓶中依次加入乙腈(5mL)、水(0.5mL)和硝酸鈰銨(220mg，0.41mmol)，控溫20~30℃反應約1.5小時。將反應液倒入飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)和乙酸乙酯(20mL)的混合溶液中，分液，收集有機相，水相再用乙酸乙酯(20mL)萃取。合併有機相，依次用飽和亞硫酸鈉溶液(20mL)和飽和氯化鈉溶液(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用薄層色譜法以展開劑體系C純化所得殘餘物，得到標題產物OLS-3c(65mg，產率：40.1%)。
MS m/z(ESI)：832.3[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 7.41-7.17(m,25H),5.57(d,1H),5.39(s,1H),4.95-4.81(m,4H),4.62(d,1H),4.58-4.47(m,4H),4.41(d,1H),4.09-4.02(m,2H),3.90(t,1H),3.72-3.62(m,4H),3.54-3.46(m,3H),3.40-3.34(m,1H),3.09-3.03(m,1H),2.25(s,1H),1.71(s,3H)。
第三步
N-((2R,3R,4R,5S,6R)-5-(((2R,4aR,6S,7S,8S,8aR)-8-(2-(2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)-7-(苄氧基)-2-苯基六氫吡喃并[3,2-d][1,3]二氧雜環己-6-基)氧基)-2,4-雙(苄氧基)-6-((苄氧基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)乙醯胺OLS-3e
依次將N,N-二甲基甲醯胺(2mL)和2-(2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯OLS-3d(24mg，0.073mmol，愛瑪特)加入裝有OLS-3c(28 mg，0.034mmol)的反應瓶中，冷卻至0℃。加入氫化鈉(11mg，0.28mmol，含量60%)，加畢，在0℃反應約1小時，然後升溫至15~25℃反應約15.5小時。將反應液倒入飽和氯化銨溶液(5mL)及水(20mL)的混合溶液中，用乙酸乙酯(20mL×2)萃取。合併有機相，依次用水(10mL)和飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系C純化，得到標題產物OLS-3e(33mg，產率：100.0%)。
MS m/z(ESI)：989.4[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.40-7.16(m,25H),5.70(d,1H),5.43(s,1H),4.87(d,1H),4.84-4.76(m,3H),4.70(d,1H),4.58-4.50(m,4H),4.39(d,1H),4.08-3.95(m,2H),3.93-3.85(m,2H),3.76-3.68(m,3H),3.62-3.51(m,9H),3.50-3.47(m,4H),3.34-3.31(m,1H),3.24-3.21(m,2H),3.11-3.06(m,1H),1.65(s,3H)。
第四步
N-((2R,3R,4R,5S,6R)-5-(((2S,3S,4S,5R,6R)-4-(2-(2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)-3-(苄氧基)-5-羥基-6-(羥甲基)四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)-2,4-雙(苄氧基)-6-((苄氧基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)乙醯胺OLS-3f
將化合物OLS-3e(84mg，0.085mmol)溶解於二氯甲烷(8mL)中，氮氣氛下降溫至-20℃，滴加三氟乙酸(1.5mL)，滴加完畢，升溫至0℃攪拌反應約3小時。加入甲醇(4mL)淬滅反應，加入二氯甲烷(20mL)稀釋，用飽和碳酸氫鈉溶液(10mL)洗滌，水相用二氯甲烷(20mL)萃取。合併有機相，用飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系D純化所得殘餘物，得到標題產物OLS-3f(46mg，產率：60.1%)。
MS m/z(ESI)：901.4[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.31-7.15(m,20H),5.70(d,1H),4.88-4.78(m,3H),4.69(s,2H),4.57-4.50(m,3H),4.43-4.39(m,2H),4.08-4.02(m,2H),3.82(t,2H),3.74-3.49(m,16H),3.46-3.37(m,2H),3.29(t,2H),3.11-3.06(m,1H),3.01-2.98(m,1H),1.66(s,3H)。
第五步
N-((3R,4R,5S,6R)-5-(((2S,3S,4S,5R,6R)-4-(2-(2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)-3,5-二羥基-6-(羥甲基)四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)-2,4-二羥基-6-(羥甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)乙醯胺OLS-3g(非對映異構體混合物)
將化合物OLS-3f(50mg，0.055mmol)溶解於四氫呋喃(5mL)和水(1mL)中，加入5%氫氧化鈀(14mg)、10%鈀碳(15mg)和鹽酸(1滴)。氫氣置換三次。室溫攪拌反應約3小時，過濾，濾液減壓濃縮，得中間體粗品。另取一反應瓶，依次加入咪唑-1-磺醯基疊氮鹽酸鹽(29.1mg，0.057mmol，採用公知的方法“Organic Letters,2007,9,3797-3800”製備而得)、碳酸鉀(39.2mg，0.28mmol)、五水硫酸銅(5.4mg，0.022mmol)及甲醇(2mL)，再將中間體粗品用甲醇(2mL)溶解後加入到反應瓶中，室溫反應約16小時。過濾，濾液減壓濃縮，加入乙醇(6mL)，過濾後所得濾液經減壓濃縮得到標題產物OLS-3g粗品1。
將化合物OLS-3f(144mg，0.16mmol)溶解於四氫呋喃(4mL)和水(1mL)中，加入5%氫氧化鈀(7mg)、10%鈀碳(5mg)和鹽酸(22mg，0.22mmol)。氫氣置換三次，室溫攪拌反應約3.5小時。向反應液中補加5%氫氧化鈀(32mg)，10%鈀碳(31mg)，氫氣置換三次，室溫攪拌反應約1.5小時。過濾，濾液減壓濃縮得中間體粗品(112mg)。另取一反應瓶，依次加入咪唑-1-磺醯基疊氮鹽酸鹽 (74.3mg，0.35mmol)、碳酸鉀(102.7mg，0.74mmol)、五水硫酸銅(11.8mg，0.047mmol)及甲醇(6mL)，再取中間體粗品(89.3mg)加入到反應瓶中，室溫反應約4.5小時。過濾，濾液減壓濃縮，加甲醇(12mL)，過濾後所得濾液經減壓濃縮得標題產物OLS-3g粗品2。
將以上兩部分標題產物OLS-3g的粗品合併，用高效液相色譜法(色譜管柱：Phenomenex C18，150*25mm，10μm；流動相：水相(10mM碳酸氫銨)和乙腈，梯度配比：乙腈0%-20%，流速：25mL/min)純化，得到標題產物OLS-3g(80mg，產率：68.7%)。
MS m/z(ESI)：541.2[M+1]。
1H NMR(400MHz,D2O)δ 5.20(d,1H),4.75(s,1H),4.30-4.24(m,1H),3.94-3.84(m,5H),3.81-3.77(m,1H),3.76-3.70(m,11H),3.67-3.62(m,2H),3.60-3.52(m,1H),3.51-3.44(m,4H),2.03(s,3H)。
第六步
(2S,3S,4S,5R,6R)-4-(2-(2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)-2-(((3aR,5R,6S,7R,7aR)-7-羥基-5-(羥甲基)-2-甲基-3a,6,7,7a-四氫-5H-吡喃并[3,2-d]噁唑-6-基)氧基)-6-(羥甲基)四氫-2H-吡喃-3,5-二醇OLS-3
冰浴下，將OLS-3g(50mg，0.093mmol)溶解於純水(12mL)中，加入碳酸銫(1.80g，5.52mmol)和2-氯-1,3-二甲基-1H-苯并咪唑-3-氯化物(420mg，1.93mmol，採用公知的方法“Helvetica Chimica Acta,2012,vol.95,1928-1936”製備而得)，0℃攪拌反應約13.5小時。用高效液相色譜法(色譜管柱：Phenomenex C18，150*25mm，10μm；流動相：水和乙腈，梯度配比：乙腈0%-20%，流速：25mL/min)純化反應液，得到標題產物OLS-3(15mg，產率：31.0%)。
MS m/z(ESI)：523.1[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 6.00(d,1H),5.38(s,1H),4.99(s,1H),4.65(s,1H),4.44-4.31(m,3H),4.12-4.02(m,3H),3.99-3.95(m,2H),3.89-3.87(m,1H),3.84-3.76(m,3H),3.75-3.65(m,9H),3.40(t,2H),3.37-3.35(m,1H),3.31-3.28(m,1H),2.67(s,2H),2.02(s,3H)。
實施例4-4糖鏈OLS-4的合成
(2S,3S,4S,5R,6R)-4-(2-(3-(2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基)丙氧基)乙氧基)-2-(((3aR,5R,6S,7R,7aR)-7-羥基-5-(羥甲基)-2-甲基-5,6,7,7a-四氫-3aH-吡喃并[3,2-d]噁唑-6-基)氧基)-6-(羥甲基)四氫-2H-吡喃-3,5-二醇OLS-4
Figure 111137361-A0202-12-0229-273
第一步
2-((4-甲氧基苄基)氧基)乙-1-醇OLS-4b
將乙二醇OLS-4a(50.00g，805.57mmol)溶解於無水四氫呋喃(300mL)中，依次加入鈉氫(4.93g，128.89mmol，含量60%)、四丁基碘化銨(5.37g，16.11mmol)，氮氣氛下，在0℃攪拌反應30分鐘，隨後緩慢滴加對甲氧基苄氯(20.19g，128.89mmol)，約30分鐘滴加完畢，升溫至80℃攪拌反應16小時。將反應液倒入冰水中攪拌淬滅，加入乙酸乙酯(500mL)攪拌，分液，所得水相用乙酸乙酯(150mL×3)萃取，合併有機相，有機相用水(250mL×3)，飽和氯化鈉溶液(250mL×2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系C純化所得殘餘物，得到標題產物OLS-4b(22.00g，產率：14.9%)。
MS m/z(ESI)：205.2[M+23]。
第二步
2-((4-甲氧基苄基)氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯OLS-4c
將OLS-4b(22.00g，120.74mmol)溶解於吡啶(98mL)中，在0℃加入對甲苯磺醯氯(27.62g，144.88mmol)。氮氣氛下，0℃攪拌反應並緩慢恢復至室溫反應16小時。加入乙酸乙酯(300mL)稀釋反應液，用鹽酸(10%，150mL×3)洗滌，有機相依次用水(150mL×3)、飽和氯化鈉溶液(250mL×2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥30分鐘，過濾，濾液減壓濃縮，殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系C純化所得殘餘物，得到標題產物OLS-4c(36.40g，產率：89.6%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.81(d,2H),7.33(d,2H),7.21(d,2H),6.88(d,2H),4.43(s,2H),4.23-4.17(m,2H),3.82(s,3H),3.68-3.61(m,2H),2.45(s,3H)。
第三步
3-(2-((4-甲氧基苄基)氧基)乙氧基)丙-1-醇OLS-4d
將OLS-4c(36.40g，108.20mmol)、1,3-丙二醇(82.34g，1.08mol)溶解於甲苯(100mL)中，室溫加入粉狀氫氧化鉀(15.18g，270.51mmol)，將混合物在氮氣氛下加熱至50℃，攪拌反應72小時。反應液倒入冰水(200mL)中，滴加濃鹽酸至反應液pH為3~4，加入乙酸乙酯(300mL)萃取，分液，水相用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥30分鐘，過濾，濾液減壓濃縮，殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系C純化所得殘餘物，得到標題產物OLS-4d(15.60g，產率：60.0%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.28(d,2H),6.89(d,2H),4.51(s,2H),3.81(s,3H),3.79(t,2H),3.68(t,2H),3.65-3.59(m,4H),2.51(br.s,1H),1.88-1.82(m,2H)。
第四步
3-(2-((4-甲氧基苄基)氧基)乙氧基)丙基4-甲基苯磺酸酯OLS-4e
將OLS-4d(15.60g，64.92mmol)溶解於吡啶(52mL)和二氯甲烷(52mL)的混合溶液中，在0℃加入對甲苯磺醯氯(18.56g，97.38mmol)，氮氣氛下，0℃攪拌反應並緩慢恢復至室溫反應16小時。加入乙酸乙酯(300mL)稀釋反應液，依次用鹽酸(10%，150mL×3)、水(150mL×3)和飽和氯化鈉溶液(250mL×2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥30分鐘，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系C純化所得殘餘物，得到標題產物OLS-4e(18.00g，產率：70.3%)。
MS m/z(ESI)：417.3[M+23]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.80(d,2H),7.34(d,2H),7.27(d,2H),6.90(d,2H),4.48(s,2H),4.16(t,2H),3.83(s,3H),3.53-3.49(m,6H),2.45(s,3H),1.96-1.91(m,2H)。
第五步
14-疊氮基-1-(4-甲氧基苯基)-2,5,9,12-四氧雜十四烷OLS-4f
將OLS-4e(8.00g，20.28mmol)、疊氮-二聚乙二醇(3.72g，28.39mol，愛瑪特)溶解於甲苯(33mL)中，室溫加入粉狀氫氧化鉀(2.84g，50.70mmol)，將混合物在氮氣氛下加熱至60℃，攪拌反應16小時。反應液倒入冰水(100mL)中，滴加濃鹽酸至反應液pH為3~4，加入乙酸乙酯(100mL)萃取，分液，水相用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥30分鐘，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系C純化所得殘餘物，得到標題產物OLS-4f(6.3g，產率：87.9%)。
MS m/z(ESI)：376.3[M+23]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.29(d,2H),6.89(d,2H),4.52(s,2H),3.82(s,3H),3.70-3.56(m,14H),3.40(t,2H),1.93-1.87(m,2H)。
第六步
2-(3-(2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基)丙氧基)乙-1-醇OLS-4g
將OLS-4f(6.30g，17.83mmol)溶解於二氯甲烷(31mL)和水(3.1mL)中，室溫下加入二氯二氰苯醌(4.45g，19.61mmol，阿拉丁)，氮氣氛下，25℃攪拌反應1.5小時。反應液用矽藻土過濾，濾液加入二氯甲烷(150mL)稀釋，依次用飽和碳酸氫鈉溶液(100mL×2)、飽和亞硫酸氫鈉溶液(100mL×2)、水(100mL)和飽和氯化鈉溶液(100mL×2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥30分鐘，過濾，濾液減壓 濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系C純化所得殘餘物，得到標題產物OLS-4g(3.2g，產率：76.9%)。
第七步
2-(3-(2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基)丙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯OLS-4h
將OLS-4g(3.20g，13.72mmol)溶解於吡啶(11mL)和二氯甲烷(11mL)中，冷卻至0℃，加入對甲苯磺醯氯(3.14g，16.46mmol)，氮氣氛下，0℃攪拌反應並緩慢恢復至室溫反應16小時。加入乙酸乙酯(200mL)稀釋反應液，依次用鹽酸(10%，150mL×3)、水(150mL×3)、飽和氯化鈉溶液(250mL×2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥30分鐘，過濾，濾液減壓濃縮，殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系C純化所得殘餘物，得到標題產物OLS-4h(4.80g，產率：90.3%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.79(d,2H),7.34(d,2H),4.14(t,2H),3.67-3.57(m,8H),3.51-3.46(m,4H),3.38(t,2H),2.44(s,3H),1.81-1.75(m,2H)。
第八步
N-((2R,3R,4R,5S,6R)-5-(((2R,4aR,6S,7S,8S,8aR)-8-(2-(3-(2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基)丙氧基)乙氧基)-7-(苄氧基)-2-苯基六氫吡喃并[3,2-d][1,3]二氧雜環己-6-基)氧基)-2,4-雙(苄氧基)-6-((苄氧基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)乙醯胺OLS-4i
依次將OLS-3c(340mg，0.41mmol)、N,N-二甲基甲醯胺(4.8mL)和2mL OLS-4h(398mg，1.03mmol)的N,N-二甲基甲醯胺溶液加入反應瓶中，冷卻至0℃。加入氫化鈉(86mg，2.15mmol，含量60%)，0℃反應約0.5小時，然後升溫至20~30℃反應約0.5小時。將反應液倒入飽和氯化銨溶液(10mL)及水(10mL)的混合溶液中，乙酸乙酯(10mL×3)萃取。合併有機相，依次用水(10mL)和飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用薄 層色譜法以展開劑體系C純化所得殘餘物，得到標題產物OLS-4i(362mg，產率：84.6%)。
MS m/z(ESI)：1047.4[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.40-7.16(m,25H),5.70(d,1H),5.44(s,1H),4.87(d,1H),4.84-4.78(m,3H),4.71-4.68(m,1H),4.57-4.50(m,4H),4.41-4.38(m,1H),4.04-4.01(m,1H),3.97(t,1H),3.93-3.84(m,2H),3.76-3.68(m,3H),3.61-3.40(m,16H),3.34-3.27(m,3H),3.11-3.05(m,2H),1.78-1.72(m,2H),1.51(s,3H)。
第九步
N-((2R,3R,4R,5S,6R)-5-(((2S,3S,4S,5R,6R)-4-(2-(3-(2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基)丙氧基)乙氧基)-3-(苄氧基)-5-羥基-6-(羥甲基)四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)-2,4-雙(苄氧基)-6-((苄氧基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)乙醯胺OLS-4j
依次將化合物OLS-4i(360mg，0.34mmol)和二氯甲烷(26mL)加入反應瓶中，氮氣氛下冷卻至-30~-20℃，滴加三氟乙酸(3.6mL)，滴加完畢，升溫至-5~5℃攪拌反應約1.5小時。加入甲醇(5.1mL)淬滅反應，加入二氯甲烷(12.3mL)稀釋，依次用飽和碳酸氫鈉溶液(26mL×2)和飽和氯化鈉溶液(13mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系C純化所得殘餘物，得到標題產物OLS-4j(234mg，產率：71.0%)。
MS m/z(ESI)：959.7[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.31-7.17(m,20H),5.64(d,1H),4.87(d,1H),4.84-4.79(m,2H),4.70(s,2H),4.58-4.50(m,3H),4.43-4.39(m,2H),4.05(t,1H),3.82(t,1H),3.74-3.36(m,23H),3.30(t,2H),3.10-3.07(m,1H),3.00-2.97(m,1H),2.21(br.s,1H),1.81-1.75(m,2H),1.66(s,3H)。
第十步
N-((3R,4R,5S,6R)-5-(((2S,3S,4S,5R,6R)-4-(2-(3-(2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基)丙氧基)乙氧基)-3,5-二羥基-6-(羥甲基)四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)-2,4-二羥基-6-(羥甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)乙醯胺OLS-4k(非對映異構體混合物)
將OLS-4j(150mg，158.72μmol)溶解於四氫呋喃(8mL)和水(2mL)中，加入氫氧化鈀(50.0mg，含量15%)、鈀碳(61mg，含量10%)和鹽酸(1滴)。氫氣置換三次，室溫攪拌反應12小時。過濾除去催化劑，濾液減壓濃縮，所得殘餘物溶解於甲醇(7mL)中，加入咪唑-1-磺醯基疊氮鹽酸鹽(6mg，220.41μmol)、碳酸鉀(68mg，492.00μmol)和硫酸銅(5.7mg，22.83μmol)，室溫攪拌反應12小時。過濾除去無機鹽，用甲醇(3mL)淋洗固體，合併有機相，濾液減壓濃縮，得到粗品標題產物OLS-4k(161mg)。產物不經純化直接進行下一步反應。
MS m/z(ESI)：599.3[M+1]。
第十一步
(2S,3S,4S,5R,6R)-4-(2-(3-(2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基)丙氧基)乙氧基)-2-(((3aR,5R,6S,7R,7aR)-7-羥基-5-(羥甲基)-2-甲基-5,6,7,7a-四氫-3aH-吡喃并[3,2-d]噁唑-6-基)氧基)-6-(羥甲基)四氫-2H-吡喃-3,5-二醇OLS-4
冰浴下，將粗品化合物OLS-4k(161mg，148.01μmol)溶解於純水(8mL)中，加入2-氯-1,3-二甲基-1H-苯并咪唑-3-氯化物(557mg，3.07mmol)和碳酸銫(3.00g，9.20mmol)，0℃攪拌反應12小時。用高效液相色譜法(色譜管柱：Phenomenex C18，150*25mm，10μm；流動相：水(0.01%氨水)和乙腈，梯度配 比：乙腈0%-30%，流速：25mL/min)純化反應液，5mol%氫氧化鈉溶液中凍乾得到標題產物OLS-4(35mg，第十步和十一步兩步總產率：38.2%)。
MS m/z(ESI)：581.3[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 6.02(d,1H),4.65(s,2H),4.30(s,2H),4.09-3.93(m,5H),3.86-3.77(m,4H),3.73-3.51(m,16H),3.40-3.28(m,5H),2.01(s,3H),1.88-1.81(m,2H)。
實施例4-5糖鏈OLS-5的合成
(2S,3S,4S,5R,6R)-4-(2-(3-(2-疊氮基乙氧基)丙氧基)乙氧基)-2-(((3aR,5R,6S,7R,7aR)-7-羥基-5-(羥甲基)-2-甲基-3a,6,7,7a-四氫-5H-吡喃并[3,2-d]噁唑-6-基)氧基)-6-(羥甲基)四氫-2H-吡喃-3,5-二醇OLS-5
Figure 111137361-A0202-12-0236-274
第一步
1-((2-(3-(2-疊氮基乙氧基)丙氧基)乙氧基)甲基)-4-甲氧基苯OLS-5a
將OLS-4e(2.0g，5.07mmol)、2-疊氮基乙醇(593mg，6.08mmol)溶解於甲苯(7mL)中，室溫加入粉狀氫氧化鉀(711mg，12.67mmol)，將混合物在氮氣氛下加熱至60℃，攪拌反應16小時。反應液倒入冰水(100mL)中，滴加濃鹽酸至反應液pH為3~4，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥30分鐘，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系C純化所得殘餘物，得到標題產物OLS-5a(1.09g，產率：69.4%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.27(d,2H),6.88(d,2H),4.50(s,2H),3.80(s,3H),3.62-3.55(m,10H),3.35(t,2H),1.91-1.85(m,2H)。
第二步
2-(3-(2-疊氮基乙氧基)丙氧基)乙-1-醇OLS-5b
將OLS-5a(1090mg，3.56mmol)溶解於二氯甲烷(5.0mL)和水(0.5mL)中，室溫加入二氯二氰苯醌(888mg，3.91mmol)，氮氣氛下25℃攪拌反應1小時。加入二氯甲烷(150mL)稀釋，依次用飽和碳酸氫鈉溶液(100mL×2)、飽和亞硫酸氫鈉溶液(100mL×2)、水(100mL)和飽和氯化鈉溶液(100mL×2)洗滌，有機相用無水硫酸鈉乾燥30分鐘，過濾，濾液減壓濃縮，殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系C純化所得殘餘物，得到標題產物OLS-5b(385mg，產率：57.2%)。
第三步
2-(3-(2-疊氮基乙氧基)丙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯OLS-5c
將OLS-5b(385mg，2.03mmol)溶解於吡啶(3mL)中，冷卻至0℃，加入對甲苯磺醯氯(466mg，2.44mmol)，氮氣氛下，0℃攪拌反應並緩慢恢復至室溫反應4小時。加入乙酸乙酯(200mL)稀釋反應液，依次用鹽酸(10%，150mL×3 mL)、水(150mL×3)和飽和氯化鈉溶液(250mL×2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥30分鐘，過濾，濾液減壓濃縮，殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系C純化所得殘餘物，得到標題產物OLS-5c(509mg，產率：72.9%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.80(d,2H),7.34(d,2H),4.15(t,2H),3.63-3.59(m,4H),3.53-3.49(m,4H),3.35(t,2H),2.45(s,3H),1.82-1.76(m,2H)。
第四步
N-((2R,3R,4R,5S,6R)-5-(((2R,4aR,6S,7S,8S,8aR)-8-(2-(3-(2-疊氮基乙氧基)丙氧基)乙氧基)-7-(苄氧基)-2-苯基六氫吡喃并[3,2-d][1,3]二氧雜環己-6-基)氧基)-2,4-雙(苄氧基)-6-((苄氧基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)乙醯胺OLS-5d
依次將OLS-3c(437mg，0.53mmol)、OLS-5c(451mg，1.31mmol)和N,N-二甲基甲醯胺(9.0mL)加入反應瓶中，冰水浴冷卻，加入氫化鈉(106mg，2.65mmol，含量60%)，控溫0~10℃反應約0.5小時，然後升溫至20~30℃反應約2.5小時。將反應液倒入飽和氯化銨溶液(10mL)及水(10mL)的混合溶液中，乙酸乙酯(15mL×3)萃取。合併有機相，依次用水(15mL)和飽和氯化鈉溶液(15mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系C純化所得殘餘物，得到標題產物OLS-5d(358mg，產率：67.9%)。
MS m/z(ESI)：1003.7[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.40-7.16(m,25H),5.71(d,1H),5.44(s,1H),4.87(d,1H),4.84-4.78(m,3H),4.70(d,1H),4.57-4.50(m,4H),4.39(d,1H),4.06-4.01(m,1H),3.98-3.84(m,3H),3.76-3.68(m,3H),3.61-3.40(m,13H),3.34-3.31(m,1H),3.22(t,2H),3.11-3.05(m,1H),1.77-1.71(m,2H),1.64(s,3H)。
第五步
N-((2R,3R,4R,5S,6R)-5-(((2S,3S,4S,5R,6R)-4-(2-(3-(2-疊氮基乙氧基)丙氧基)乙氧基)-3-(苄氧基)-5-羥基-6-(羥甲基)四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)-2,4-雙(苄氧基)-6-((苄氧基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)乙醯胺OLS-5e
將OLS-5d(342mg，0.34mmol)溶解於二氯甲烷(20mL)中，氮氣氛下降溫至-20℃，控溫-30~-20℃滴加三氟乙酸(3.4mL)，滴加完畢，升溫至0℃攪拌反應約1.5小時。加入甲醇(4mL)淬滅反應，將反應液倒入飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)中，用碳酸氫鈉固體調節pH至7~8，分液，水相用二氯甲烷/甲醇(v/v=10：1)混合溶劑萃取(10mL×2)，合併有機相。有機相用飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用薄層色譜法以展開劑體系D純化所得殘餘物，得到標題產物OLS-5e(193mg，產率：61.9%)。
MS m/z(ESI)：915.7[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.31-7.17(m,20H),5.65(d,1H),4.87-4.79(m,3H),4.70(s,2H),4.58-4.50(m,3H),4.44-4.39(m,2H),4.04(t,1H),3.82(t,1H),3.74-3.63(m,10H),3.53-3.45(m,10H),3.26(t,2H),3.11-3.05(m,1H),3.00-2.98(m,1H),1.81-1.75(m,2H),1.66(s,3H)。
第六步
N-((3R,4R,5S,6R)-5-(((2S,3S,4S,5R,6R)-4-(2-(3-(2-疊氮基乙氧基)丙氧基)乙氧基)-3,5-二羥基-6-(羥甲基)四氫-2H-吡喃-2-基)氧基)-2,4-二羥基-6-(羥甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)乙醯胺OLS-5f(非對映異構體混合物)
將OLS-5e(190mg，207.64μmol)溶解於四氫呋喃(8mL)和水(2mL)中，加入氫氧化鈀(66mg，含量15%)、鈀碳(77mg，含量10%)和鹽酸(1滴)。氫氣置換三次，室溫攪拌反應12小時。過濾除去催化劑，濾液減壓濃縮，所得 殘餘物溶解於甲醇(8mL)中，加入咪唑-1-磺醯基疊氮鹽酸鹽(56.7mg，270.50μmol)、碳酸鉀(71mg，510.11μmol)和硫酸銅(9.3mg，37.25μmol)，室溫攪拌反應12小時。過濾除去無機鹽，用甲醇(3mL)淋洗固體，濾液減壓濃縮，得到粗品標題產物OLS-5f(194mg)。產物不經純化直接進行下一步反應。
MS m/z(ESI)：555.4[M+1]。
第七步
(2S,3S,4S,5R,6R)-4-(2-(3-(2-疊氮基乙氧基)丙氧基)乙氧基)-2-(((3aR,5R,6S,7R,7aR)-7-羥基-5-(羥甲基)-2-甲基-3a,6,7,7a-四氫-5H-吡喃并[3,2-d]噁唑-6-基)氧基)-6-(羥甲基)四氫-2H-吡喃-3,5-二醇OLS-5
冰浴下，將粗品OLS-5f(100mg，90.16μmol)溶解於純水(6mL)中，加入2-氯-1,3-二甲基-1H-苯并咪唑-3-氯化物(344mg，1.89mmol)和碳酸銫(1.76g，5.40mmol)，0℃下攪拌反應12小時，得反應液1。
冰浴下，將粗品OLS-5f(100mg，90.16μmol)溶解於純水(6mL)中，加入2-氯-1,3-二甲基-1H-苯并咪唑-3-氯化物(339mg，1.87mmol)和碳酸銫(1.75g，5.39mmol)，0℃下攪拌反應12小時，得反應液2。
將反應液1和反應液2合併，用高效液相色譜法(色譜管柱：Phenomenex C18，150*25mm，10μm；流動相：水(0.01%氨水)和乙腈，梯度配比：乙腈0%-30%，流速：25mL/min)純化，5mol%氫氧化鈉溶液中凍乾得到標題產物OLS-5(22mg，第六步和第七步兩步總產率：19.8%)。
MS m/z(ESI)：537.1[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 6.02(d,1H),4.66(s,2H),4.30(s,2H),4.10-3.95(m,5H),3.88-3.78(m,4H),3.68-3.53(m,12H),3.37-3.29(m,5H)。
實施例4-6糖鏈OLS-6的合成
(2R,3S,4S,5S,6S)-2-(14-疊氮基-2,5,9,12-四氧雜十四烷基)-6-(((3aR,5R,6S,7R,7aR)-7-羥基-5-(羥甲基)-2-甲基-3a,6,7,7a-四氫-5H-吡喃并[3,2-d]噁唑-6-基)氧基)四氫-2H-吡喃-3,4,5-三醇OLS-6
Figure 111137361-A0202-12-0241-275
實施例4-7糖鏈OLS-7的合成
(2R,3S,4S,5S,6S)-2-((2-(3-(2-疊氮基乙氧基)丙氧基)乙氧基)甲基)-6-(((3aR,5R,6S,7R,7aR)-7-羥基-5-(羥甲基)-2-甲基-3a,6,7,7a-四氫-5H-吡喃并[3,2-d]噁唑-6-基)氧基)四氫-2H-吡喃-3,4,5-三醇OLS-7
Figure 111137361-A0202-12-0241-277
實施例4-8糖鏈OLS-8的合成
(2R,3R,4S,5S,6S)-2-(14-疊氮基-2,5,9,12-四氧雜十四烷基)-4-(2-(2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)-6-(((3aR,5R,6S,7R,7aR)-7-羥基-5-(羥甲基)-2-甲基-3a,6,7,7a-四氫-5H-吡喃并[3,2-d]噁唑-6-基)氧基)四氫-2H-吡喃-3,5-二醇OLS-8
Figure 111137361-A0202-12-0241-278
實施例4-9糖鏈OLS-9的合成
(2R,3R,4S,5S,6S)-4-(2-(2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)-2-((2-(3-(2-疊氮基乙氧基)丙氧基)乙氧基)甲基)-6-(((3aR,5R,6S,7R,7aR)-7-羥基-5-(羥甲基)-2-甲 基-3a,6,7,7a-四氫-5H-吡喃并[3,2-d]噁唑-6-基)氧基)四氫-2H-吡喃-3,5-二醇OLS-9
Figure 111137361-A0202-12-0242-279
實施例4-10糖鏈OLS-10的合成
(2R,3R,4S,5S,6S)-2-((2-(2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)甲基)-4-(2-(3-(2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基)丙氧基)乙氧基)-6-(((3aR,5R,6S,7R,7aR)-7-羥基-5-(羥甲基)-2-甲基-3a,6,7,7a-四氫-5H-吡喃并[3,2-d]噁唑-6-基)氧基)四氫-2H-吡喃-3,5-二醇OLS-10
Figure 111137361-A0202-12-0242-280
實施例4-11糖鏈OLS-11的合成
(2R,3R,4S,5S,6S)-2-((2-(2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)甲基)-4-(2-(3-(2-(2-疊氮基乙氧基)丙氧基)乙氧基)-6-(((3aR,5R,6S,7R,7aR)-7-羥基-5-(羥甲基)-2-甲基-3a,6,7,7a-四氫-5H-吡喃并[3,2-d]噁唑-6-基)氧基)四氫-2H-吡喃-3,5-二醇OLS-11
Figure 111137361-A0202-12-0242-281
實施例4-12糖鏈OLS-12的合成
(2R,3R,4S,5S,6S)-2-(14-疊氮基-2,5,9,12-四氧雜十四烷基)-4-(2-(3-(2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基)丙氧基)乙氧基)-6-(((3aR,5R,6S,7R,7aR)-7-羥基-5-(羥甲基)-2-甲基-3a,6,7,7a-四氫-5H-吡喃并[3,2-d]噁唑-6-基)氧基)四氫-2H-吡喃-3,5-二醇OLS-12
五、ADC合成實施例
實施例5-1 ADC-1
(第三步中形成的***環具有幾何結構，所得到的化合物包含上述作為R所示的兩種結構。)
第一步
在37℃條件下，向抗體Ab1的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液；10mg/mL，20mL)加入Endo S酶(19.16mg/mL，0.052mL)，置於水浴振盪器，於37℃振盪反應12小時，停止反應。將反應液用Hitrap Protein A HP蛋白純化管柱純化(沖提相：pH為3.0的醋酸緩衝水溶液)，得到1-a的親和沖提液，於4℃冷藏儲存。
第二步
在37℃條件下，向1-a的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液；10.0mg/mL，0.2mL)加入Endo S酶(1mg/mL，0.02mL)和OLS-3(0.28mg)，置於水浴振盪器，於37℃振盪反應1小時，停止反應。將反應液用Hitrap Protein A HP蛋白純化管柱純化(沖提相：pH為3.0的醋酸緩衝水溶液)，得到1-b的親和沖提液，於4℃冷藏儲存。y1表示糖鏈重構至抗體重鏈N297位的平均數量，抗體重鏈的2個N297位點可以重構2個糖鏈，或1個糖鏈。
第三步
在25℃條件下，向1-b的PBS緩衝水溶液(pH=7.4的PBS緩衝水溶液；8.02mg/mL，0.125mL)加入1,2-丙二醇(0.112mL)。將化合物LD-8(0.20mg)溶解於13μL二甲基亞碸，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃振盪反應5小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為7.4的PBS緩衝水溶液)，得到標題產物ADC-1的PBS緩衝液，於4℃冷藏儲存。
MS計算每一分子抗體的平均藥物結合數：y=1.88。
具有相似結構及分子量的抗體如Ab2、Ab3或Ab4等可採用類似製備1-a的步驟進行去糖基化，並藉由與製備1-b類似的第二步驟重構糖鏈，然後藉由類似製備ADC-1的第三步驟與藥物連接子(LD)進行偶聯，得到ADC。
實施例5-2 ADC-2
(第二步中形成的***環具有幾何結構，所得到的化合物包含上述作為R所示的兩種結構。)
第一步
在37℃條件下，向1-a的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液；10.0mg/mL，0.2mL)加入Endo S酶(1mg/mL，0.02mL)和OLS-4(0.31mg)，置於水浴振盪器，於37℃振盪反應1小時，停止反應。將反應液用Hitrap Protein A HP蛋白純化管柱純化(沖提相：pH為3.0的醋酸緩衝水溶液)，得到2-a的親 和沖提液，於4℃冷藏儲存。y1表示糖鏈重構至抗體重鏈N297位的平均數量，抗體重鏈的2個N297位點可以重構2個糖鏈，或1個糖鏈。
第二步
在25℃條件下，向2-a的PBS緩衝水溶液(pH=7.4的PBS緩衝水溶液；7.44mg/mL，0.134mL)加入1,2-丙二醇(0.12mL)。將化合物LD-8(0.20mg)溶解於14μL二甲基亞碸，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃振盪反應12小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為7.4的PBS緩衝水溶液)，得到標題產物ADC-2的PBS緩衝液，於4℃冷藏儲存。
MS計算每一分子抗體的平均藥物結合數：y=1.98。
實施例5-3 ADC-3
(第二步中形成的***環具有幾何結構，所得到的化合物包含上述作為R所示的兩種結構。)
第一步
在37℃條件下，向1-a的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液；10.0mg/mL，0.2mL)加入Endo S酶(1mg/mL，0.02mL)和OLS-5(0.29mg)，置於水浴振盪器，於37℃振盪反應1小時，停止反應。將反應液用Hitrap Protein A HP蛋白純化管柱純化(沖提相：pH為3.0的醋酸緩衝水溶液)，得到3-a的親和沖提液，於4℃冷藏儲存。y1表示糖鏈重構至抗體重鏈N297位的平均數量，抗體重鏈的2個N297位點可以重構2個糖鏈，或1個糖鏈。
第二步
在25℃條件下，向3-a的PBS緩衝水溶液(pH=7.4的PBS緩衝水溶液；6.88mg/mL，0.145mL)加入1,2-丙二醇(0.13mL)。將化合物LD-8(0.20mg)溶解於15μL二甲基亞碸，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃振盪反應12小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為7.4的PBS緩衝水溶液)，得到標題產物ADC-3的PBS緩衝液，於4℃冷藏儲存。
MS計算每一分子抗體的平均藥物結合數：y=2。
實施例5抗體與糖鏈OLS-1的重構及ADC的偶聯
以下步驟適合ADC-4、ADC-5、ADC-6、ADC-7、ADC-8、ADC-9的製備：
第一步 抗體糖鏈mAb-(OLS-1)的重構
在37℃條件下，向1-a的PBS緩衝水溶液(pH=7.4的PBS緩衝水溶液；20.0mg/mL，0.1mL)加入Endo F3(D126A)酶(採用專利申請US10851174B2第21頁公開的方法製備而得)(20mg/mL，0.05mL)、PBS緩衝水溶液(pH=7.4，0.05mL)和OLS-1(1.19mg)，置於水浴振盪器，於37℃振盪反應5分鐘，停止反應。將反應液用Hitrap Protein A HP蛋白純化管柱純化(沖提相：pH為3.0的醋酸緩衝水溶液)，得到mAb-(OLS-1)的親和沖提液，於4℃冷藏儲存。
mAb-(OLS-1)包含如下所示的mAb-(OLS-1)a 1 、mAb-(OLS-1)a 2 、mAb-(OLS-1)a 3 和mAb-(OLS-1)a 4 四種結構：
Figure 111137361-A0202-12-0249-288
Figure 111137361-A0202-12-0249-289
Figure 111137361-A0202-12-0250-290
Figure 111137361-A0202-12-0250-291
第二步ADC的合成
實施例ADC-4、ADC-5、ADC-6、ADC-7、ADC-8和ADC-9的製備，藉由mAb-OLS-1與不同的藥物連接子偶聯，得到mAb-(OLS-1)-R。
其中mAb-(OLS-1)-R包含如下所示的mAb-(OLS-1)-Ra、mAb-(OLS-1)-Rb、mAb-(OLS-1)-Rc和mAb-(OLS-1)-Rd四種結構：
Figure 111137361-A0202-12-0251-292
Figure 111137361-A0202-12-0252-293
Figure 111137361-A0202-12-0252-294
Figure 111137361-A0202-12-0253-295
ADC-4、ADC-5、ADC-6、ADC-7、ADC-8和ADC-9結構式如mAb-(OLS-1)-R所示，其中R基根據各實施例使用的藥物連接子而不同，同時R基的***環具有兩種結構。具有相似結構及分子量的抗體如Ab2、Ab3或Ab4等可採用類似製備1-a類似的步驟進行去糖基化，並藉由與製備mAb-(OLS-1)類似的重構糖鏈，然後藉由類似製備mAb-(OLS-1)-R的步驟與藥物連接子(LD)進行偶聯。
實施例5-4 ADC-4
R選自：
Figure 111137361-A0202-12-0253-296
在25℃條件下，向mAb-(OLS-1)的PBS緩衝水溶液(pH=7.4的PBS緩衝水溶液；7.2mg/mL，0.139mL)加入1,2-丙二醇(0.125mL)。將化合物LD-2(0.20mg)溶解於14μL二甲基亞碸，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃振盪反應12小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為7.4的PBS緩衝水溶液)，得到標題產物ADC-4的PBS緩衝液，於4℃冷藏儲存。
MS計算每一分子抗體的平均藥物結合數(DAR)：y=1.76。
實施例5-5 ADC-5
R選自：
Figure 111137361-A0202-12-0254-297
(所形成的***環具有幾何結構，所得到的化合物包含上述作為R所示的兩種結構。)
在25℃條件下，向mAb-(OLS-1)的PBS緩衝水溶液(pH=7.4的PBS緩衝水溶液；7.2mg/mL，0.139mL)加入1,2-丙二醇(0.125mL)。將化合物LD-3(0.20mg)溶解於14μL二甲基亞碸，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃振盪反應12小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為7.4的PBS緩衝水溶液)，得到標題產物ADC-5的PBS緩衝液，於4℃冷藏儲存。
MS計算每一分子抗體的平均藥物結合數(DAR)：y=1.37。
實施例5-6 ADC-6
R選自：
Figure 111137361-A0202-12-0255-299
(所形成的***環具有幾何結構，所得到的化合物包含上述作為R所示的兩種結構。)
在25℃條件下，向mAb-(OLS-1)的PBS緩衝水溶液(pH=7.4的PBS緩衝水溶液；7.2mg/mL，0.139mL)加入1,2-丙二醇(0.125mL)。將化合物LD-4(0.20mg)溶解於14μL二甲基亞碸，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃振盪反應12小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為7.4的PBS緩衝水溶液)，得到標題產物ADC-6的PBS緩衝液，於4℃冷藏儲存。
MS計算每一分子抗體的平均藥物結合數(DAR)：y=1.89。
實施例5-7 ADC-7
R選自：
Figure 111137361-A0202-12-0255-300
(所形成的***環具有幾何結構，所得到的化合物包含上述作為R所示的兩種結構。)
在25℃條件下，向mAb-(OLS-1)的PBS緩衝水溶液(pH=7.4的PBS緩衝水溶液；7.2mg/mL，0.139mL)加入1,2-丙二醇(0.125mL)。將化合物LD-8(0.20mg)溶解於14μL二甲基亞碸，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃振盪反應12小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為7.4的PBS緩衝水溶液)，得到標題產物ADC-7的PBS緩衝液，於4℃冷藏儲存。
MS計算每一分子抗體的平均藥物結合數(DAR)：y=1.80。
實施例5-8 ADC-8
R選自：
Figure 111137361-A0202-12-0256-301
(所形成的***環具有幾何結構，所得到的化合物包含上述作為R所示的兩種結構。)
在25℃條件下，向mAb-(OLS-1)的PBS緩衝水溶液(pH=7.4的PBS緩衝水溶液；7.2mg/mL，0.139mL加入1,2-丙二醇(0.125mL)。將化合物LD-9(0.20mg)溶解於14μL二甲基亞碸，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃振盪反應12小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為7.4的PBS緩衝水溶液)，得到標題產物ADC-8的PBS緩衝液，於4℃冷藏儲存。
MS計算每一分子抗體的平均藥物結合數(DAR)：y=1.80。
實施例5-9 ADC-9
R選自：
Figure 111137361-A0202-12-0257-302
(所形成的***環具有幾何結構，所得到的化合物包含上述作為R所示的兩種結構。)
在25℃條件下，向mAb-(OLS-1)的PBS緩衝水溶液(pH=7.4的PBS緩衝水溶液；7.2mg/mL，0.139mL)加入1,2-丙二醇(0.125mL)。將化合物LD-11(0.20mg)溶解於14μL二甲基亞碸，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃振盪反應12小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為7.4的PBS緩衝水溶液)，得到標題產物ADC-9的PBS緩衝液，於4℃冷藏儲存。
MS計算每一分子抗體的平均藥物結合數(DAR)：y=1.31。
實施例5-10 ADC-10
Figure 111137361-A0202-12-0257-303
(所形成的***環具有幾何結構，所得到的化合物包含上述作為R所示的兩種結構。)
在25℃條件下，向2-a的PBS緩衝水溶液(pH=7.4的PBS緩衝水溶液；7.44mg/mL，0.134mL)加入1,2-丙二醇(0.12mL)。將化合物LD-5(0.20mg)溶解於14μL二甲基亞碸，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃振盪反應12小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為7.4的PBS緩衝水溶液)，得到標題產物ADC-10的PBS緩衝液，於4℃冷藏儲存。
MS計算每一分子抗體的平均藥物結合數y=1.99。
實施例5-11 ADC-11
Figure 111137361-A0202-12-0258-304
(所形成的***環具有幾何結構，所得到的化合物包含上述作為R所示的兩種結構。)
在25℃條件下，向2-a的PBS緩衝水溶液(pH=7.4的PBS緩衝水溶液；7.44mg/mL，0.134mL)加入1,2-丙二醇(0.12mL)。將化合物LD-11(0.20mg)溶解於14μL二甲基亞碸，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃ 振盪反應12小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為7.4的PBS緩衝水溶液)，得到標題產物ADC-11的PBS緩衝液，於4℃冷藏儲存。
MS計算每一分子抗體的平均藥物結合數y=1.93。
實施例5-12 ADC-12
Figure 111137361-A0202-12-0259-305
(所形成的***環具有幾何結構，所得到的化合物包含上述作為R所示的兩種結構。)
在25℃條件下，向2-a的PBS緩衝水溶液(pH=7.4的PBS緩衝水溶液；7.44mg/mL，0.134mL)加入1,2-丙二醇(0.12mL)。將化合物LD-16(0.20mg)溶解於14μL二甲基亞碸，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃振盪反應12小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為7.4的PBS緩衝水溶液)，得到標題產物ADC-12的PBS緩衝液，於4℃冷藏儲存。
MS計算每一分子抗體的平均藥物結合數y=1.99。
實施例5-13 ADC-13
Figure 111137361-A0202-12-0260-306
(所形成的***環具有幾何結構，所得到的化合物包含上述作為R所示的兩種結構。)
在25℃條件下，向2-a的PBS緩衝水溶液(pH=7.4的PBS緩衝水溶液；7.44mg/mL，0.134mL)加入1,2-丙二醇(0.12mL)。將化合物LD-2(0.20mg)溶解於14μL二甲基亞碸，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃振盪反應12小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為7.4的PBS緩衝水溶液)，得到標題產物ADC-13的PBS緩衝液，於4℃冷藏儲存。
MS計算每一分子抗體的平均藥物結合數y=1.99。
實施例5-14 ADC-14
Figure 111137361-A0202-12-0261-307
(所形成的***環具有幾何結構，所得到的化合物包含上述作為R所示的兩種結構。)
在25℃條件下，向2-a的PBS緩衝水溶液(pH=7.4的PBS緩衝水溶液；7.44mg/mL，0.134mL)加入1,2-丙二醇(0.12mL)。將化合物LD-4(0.20mg)溶解於14μL二甲基亞碸，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃振盪反應12小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為7.4的PBS緩衝水溶液)，得到標題產物ADC-14的PBS緩衝液，於4℃冷藏儲存。
MS計算每一分子抗體的平均藥物結合數y=2.0。
實施例5-15 ADC-15
Figure 111137361-A0202-12-0262-308
(所形成的***環具有幾何結構，所得到的化合物包含上述作為R所示的兩種結構。)
在25℃條件下，向2-a的PBS緩衝水溶液(pH=7.4的PBS緩衝水溶液；7.44mg/mL，0.134mL)加入1,2-丙二醇(0.12mL)。將化合物LD-17(0.20mg)溶解於14μL二甲基亞碸，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃振盪反應12小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為7.4的PBS緩衝水溶液)，得到標題產物ADC-15的PBS緩衝液，於4℃冷藏儲存。
MS計算每一分子抗體的平均藥物結合數y=1.48。
實施例5-16 ADC-16
(所形成的***環具有幾何結構，所得到的化合物包含上述作為R所示的兩種結構。)
在25℃條件下，向2-a的PBS緩衝水溶液(pH=7.4的PBS緩衝水溶液；7.44mg/mL，0.134mL)加入1,2-丙二醇(0.12mL)。將化合物LD-1(0.20mg)溶解於14μL二甲基亞碸，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃振盪反應12小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為7.4的PBS緩衝水溶液)，得到標題產物ADC-16的PBS緩衝液，於4℃冷藏儲存。
MS計算每一分子抗體的平均藥物結合數y=1.97。
實施例5-18 ADC-18
Figure 111137361-A0202-12-0264-311
第一步
在37℃條件下，向抗體Ab1的PBS緩衝水溶液(10.0mg/mL，0.35mL，23.6nmol，PBS緩衝水溶液為pH=6.5，0.05M)加入Endo S(WT)(2.74mg/mL，13μL)；加畢，置於37℃搖床上，反應3小時後停止反應得到粗品1-a。
第二步
向粗品1-a的反應液中加入OLS-4(0.41mg，709nmol)。加畢，置於37℃搖床上，反應1小時後停止反應。使用PBS 7.4緩衝溶液將反應液多次離心換液，除去多餘的疊氮化物至終體積410μL，得到粗品2-a。
第三步
向粗品2-a的處理後的反應液中加入269μL 1,2-丙二醇，搖勻後加入LD-11溶液(0.21mg，142nmol，溶於41μL二甲基亞碸與100μL 1,2-丙二醇)；置於室溫搖床上反應12小時。將反應液離心取上清液用1mL PBS 7.4緩衝溶液稀釋後，用Hitrap Protein A HP蛋白純化管柱純化(沖提相：pH為3.0的醋酸緩衝水溶液)，所得溶液用三羥甲基胺基甲烷鹽酸鹽溶液(1M，pH=8.0)調節至pH約為5.0，得到標題產物ADC-18的親和沖提液，於4℃冷藏儲存。
MS計算平均值：y=1.95。
實施例5-20 ADC-20
Figure 111137361-A0202-12-0266-313
第一步
在37℃條件下，向抗體Ab3的PBS緩衝水溶液(10.0mg/ml，0.35mL，24.1nmol，PBS緩衝水溶液為pH=6.5，0.05M)加入Endo S(WT)(Endo S(WT)2.74mg/mL，13μL)；加畢，置於37℃搖床上，反應3小時後停止反應得到粗品20-a。
第二步
向粗品20-a的反應液中加入OLS-4(0.42mg，724nmol)。加畢，置於37℃搖床上，反應1小時後停止反應。使用PBS 7.4緩衝溶液將反應液多次離心換液，除去多餘的疊氮化物至終體積410μL，得到粗品20-b。
第三步
向粗品20-b的處理後的反應液中加入269μL 1,2-丙二醇，搖勻後加入LD-11溶液(0.21mg，145nmol，溶於41μL二甲基亞碸與100μL 1,2-丙二醇)；置於室溫搖床上反應12小時。將反應液離心取上清液用1mL PBS 7.4緩衝溶液稀釋後用Hitrap Protein A HP蛋白純化管柱純化(沖提相：pH為3.0的醋酸緩衝水溶液)，所得溶液用三羥甲基胺基甲烷鹽酸鹽溶液(1M，pH=8.0)調節至pH值約為5.0，得到標題產物ADC-20的親和沖提液，於4℃冷藏儲存。
MS計算平均值：y=1.98。
實施例5-22 ADC-22
Figure 111137361-A0202-12-0268-320
在37℃條件下，向抗體Ab2的PBS緩衝水溶液(10.0mg/ml，1.57mL，108nmol，PBS緩衝水溶液為pH=6.5，0.05M)加入Endo S(WT)(1.16mg/ml，135uL)；加畢，置於37℃搖床上，反應3小時後停止反應得到粗品22-a。
向粗品22-a的反應液中加入OLS-4(1.88mg，3.25umol)。加畢，置於37℃搖床上，反應1小時後停止反應。使用PBS 7.4緩衝溶液將反應液多次離心換液，除去多餘的疊氮化物至終體積1.8mL，得到粗品22-b。
向粗品22-b處理後的反應液中加入1.42mL 1,2-丙二醇，搖勻後加入LD-11溶液(0.93mg,650nmol，溶於180μL二甲基亞碸與200μL 1,2-丙二醇)；置於室溫搖床上反應12小時。將反應液離心取上清液用4mL PBS 7.4 緩衝溶液稀釋後，用Hitrap Protein A HP蛋白純化管柱純化(沖提相：pH為3.0的醋酸緩衝水溶液)，所得溶液用三羥甲基胺基甲烷鹽酸鹽溶液(1M，pH=8.0)調節至pH約為5.0，得到標題產物ADC-22的親和沖提液，於4℃冷藏儲存。
MS計算平均值：y=1.96。
生物學評價
測試例1、PBD類化合物對腫瘤細胞體外增殖抑制測試
一、實驗目的
本實驗的目的是為了檢測本揭露中的化合物對不同腫瘤細胞系SK-BR-3腫瘤細胞(人乳腺癌細胞，ATCC，貨號HTB-30)、NCI-H23(人非小細胞肺癌細胞，南京科佰，貨號CBP60132)和MKN45(人胃癌細胞，南京科佰，貨號CBP60488)的增殖抑制活性，以不同濃度的化合物體外處理細胞，經6天培養後，採用CTG(CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay，Promega，貨號：G7573)試劑對細胞的增值進行檢測，根據IC50值來評價該化合物的體外活性。
二、實驗方法
1、細胞培養：SK-BR-3、NCI-H23和MKN45細胞分別用含10%FBS(Gibco，10099-141)的McCoy's 5A培養基(ThermoFisher，貨號16600108)、RPMI 1640培養基(ThermoFisher，貨號11875119)進行培養。
2、細胞鋪板：分別將SK-BR-3、NCI-H23和MKN45用胰酶(0.25% Trypsin-EDTA(1x)，Life Technologies，貨號25200-072)消化後，使用各自培養基進行重新懸浮計數，使密度為1.48×104個/mL，每孔135μL鋪至96孔板(corning，貨號3903)，使每孔細胞數為2000，於37℃，培養24小時。
3、藥物配製：在圓底96孔板中配製PBD類藥物。配藥板1第一列為0.05mM， 此後從第二列到第四列3倍梯度稀釋於DMSO中，第五列到第六列5倍梯度稀釋於DMSO中，第七列到第第九列10倍梯度稀釋於DMSO中，第十列為DMSO。配藥板2中第一列至第十列每孔加入相應培養基196μL，從配藥板1的第一列至第十列吸取4μL溶液至配藥板2，混勻後，吸取15μL加入昨天鋪好的細胞中，繼續37℃，培養6天。
4、CTG檢測：取出細胞培養板，平衡至室溫。每孔加入75μL CTG，避光室溫反應10分鐘，酶標儀(BMG labtech，PHERAstar FS)讀取發光值。
三、數據分析
用Graphpad Prism 5對數據進行處理分析，試驗結果參見下表1。
Figure 111137361-A0202-12-0270-321
Figure 111137361-A0202-12-0271-323
測試例2、Caludin18.2-ADC體外藥效實驗
一、實驗目的：
利用CTG(CellTiter-Glo Luminescence Cell Viability AssayⓇ,Promega，G7573)檢測Claudin18.2-ADC在體外對人胃印戒細胞癌細胞株NUGC4的殺傷作用。
二、實驗方法：
1、細胞準備：
人胃印戒細胞癌細胞株NUGC4(南京科佰，CBP60493)；
藉由電轉染的方法將含有claudin18.2全長序列的PCDH質粒(SEQ ID NO：7)轉染進NUGC4細胞，加壓篩選兩週，檢測claudin18.2的表達量，並根據表達量利用流式細胞術分選出不同表達水平的單株細胞株。分別得到高表達人Claudin18.2的NUGC4/hCLDN18.2 1#單株細胞株，和中度表達人Claudin18.2的NUGC4/hCLDN18.2 11#單株細胞株。
2、第1天，收集NUGC4、NUGC4(WT)11#、NUGC4/hCLDN18.2 1#細胞，調整密度為2.5×104/mL，在96孔白色透明底板中加入90μL/孔，約為2500個細胞每孔。37℃，5% CO2培養箱過夜培養。
3、第2天，在96孔板中稀釋樣品，起始濃度為400nM，5×梯度稀釋，9個濃度點，向細胞板中加入10μL/孔稀釋好的樣品。37℃，5% CO2培養4天。
4、第8天，取出細胞培養板，加入50μL/孔Cell Titer-Glo Reagent，室溫放置2~3分鐘，在PHERAstar FS microplate reader(BMG LABTECH)上讀取螢光數值。
三、數據分析
利用GraphPad Prism軟體進行數據分析。
Figure 111137361-A0202-12-0272-326
四、結論
在高表達細胞系上，ADC-22有良好的殺傷活性。
測試例3、HER3-ADC體外藥效實驗
一、實驗目的
本實驗的目的是檢測HER3-ADC樣品對細胞殺傷作用，根據IC50和Emax來評價HER3-ADC的體外活性。
二、實驗方法：
1、HER3表達細胞株MCF7(ATCC,HTB-22)、FaDu(ATCC,HTB-43)、SW620(南京科佰，CBP60036)用胰酶消化，並用每個細胞對應的新鮮培養液終止消化。1000rpm離心後用新鮮培養液重新懸浮，計數後將細胞懸液密度調整為3703細胞/mL。以每孔135μL加入到96孔細胞培養板中，第11列不鋪細胞只加入135μL的培養基，5% CO2，37℃培養16小時。
2、HER3-ADC樣品用PBS稀釋成15μM(10×濃度)。以此為首濃度用PBS五倍稀釋，共8個濃度。每孔加入15μL的10×濃度溶液。5% CO2，37℃培養4天。
3、每孔加入50μL CTG，室溫下避光孵育10分鐘，將白色底膜貼在細胞培養板底部，置於酶標儀Victor3(PE)上讀取化學發光。
三、數據分析
本實驗的數據使用了數據處理軟體GraphPad prism5.0。
Figure 111137361-A0202-12-0273-324
四、結論
在不同HER3表達水平的細胞系上，ADC-20有良好的殺傷活性。
測試例4、HER2-ADC體外藥效實驗
一、實驗目的
本實驗的目的是檢測HER2-ADC樣品對細胞殺傷作用，根據IC50和Emax來評價HER2-ADC的體外活性。
二、實驗方法：
1、HER2表達細胞株MCF7(ATCC,HTB-22)、SK-BR-3(ATCC,HTB-30)用胰酶消化，新鮮培養液中和，1000rpm離心後用培養液重新懸浮，計數後將細胞懸液密度調整為3703細胞/mL，以每孔135μL加入到96孔細胞培養板3903中，第11列不鋪細胞只加入135μL的培養基，5%二氧化碳37℃ 16小時培養。
2、HER2-ADC樣品用PBS稀釋成15μM(10×濃度)。以此為首濃度，用PBS五倍稀釋，共8個濃度。每孔加入15μL的10×濃度溶液。5%CO2，37℃培養4天。
3、每孔加入70μL CTG，室溫下避光孵育10分鐘，將白色底膜貼在細胞培養板底部，置於酶標儀Victor3(PE)上讀取化學發光。
三、數據分析
本實驗的數據使用了數據處理軟體GraphPad prism5.0。
Figure 111137361-A0202-12-0274-325
四、結論
在不同HER2表達水平的細胞系上，ADC-18有良好的殺傷活性，且殺傷活性與抗原表達量相關，即細胞表面HER2表達量越高，ADC殺傷的活性越強。
雖然為了清楚的理解，已經借助於實例等詳細描述了上述發明，但是描述和實例不應當解釋為限制本揭露的範圍。本文中引用的所有專利和科學文獻的公開內容藉由引用完整地清楚結合。
TW202330608A_111137361_SEQL.xml
Figure 111137361-A0202-11-0002-468

Claims (37)

  1. 一種如下式所示抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，
    Figure 111137361-A0202-13-0001-327
    其中，Pc為抗體，該抗體的糖鏈是未重構的或重構的糖鏈；
    L為連接子；Pc藉由其胺基酸或糖鏈與L結合，
    y為約1至約10的載藥量；
    D如式(D)所示：
    Figure 111137361-A0202-13-0001-328
    其中，
    R1為H、側氧基、鹵素或烷基；
    R2為H、烷基或
    Figure 111137361-A0202-13-0001-329
    ，W為H、-C(O)Rt或-C(O)NH-Rt，G為葡 萄糖醛酸苷基或半乳糖苷基；Rt為烷基或烷氧基烷基；
    R3為H或烷基；
    R4為H或烷基；
    R5為H、鹵素或烷基；
    或者R3和R4與其所連接的原子一起成環，或R4和R5與其所連接的原子一 起成環；
    R6為H或烷基；
    R7為烷基或環烷基；或者R6和R7與其所連接的原子一起成環；
    R8為烷基或環烷基；
    Rx為H或羥基；
    X為亞(伸)烷基或-(CH2)m-X1-(CH2)n-；
    X1為氮原子、氧原子、硫原子、環烷基、雜環基、雜芳基或芳基；該環烷基、雜環基、雜芳基或芳基視需要被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自胺基、羥基、羥烷基、烷基和烷氧基；
    Y為鍵、氮原子、氧原子或硫原子；
    A為烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，該環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視需要被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、羥基、羥烷基、烷基、烷氧基、-C(O)R9、環烷基、環烷基烷基、鹵烷基、芳基和雜環基；
    R9為H、烷基和羥烷基；
    m為1、2或3；n為1、2或3；
    條件是當X為亞(伸)烷基時，1)R1為側氧基，或2)Rx為H，或3)R4和R5與其所連接的原子一起成環，或4)R6和R7與其所連接的原子一起成環，或5)R7和/或R8為環烷基；或6)A不是烷基。
  2. 如請求項1所述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其中該R1為H或側氧基；較佳地，R1為H。
  3. 如請求項1或2所述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其中該R2為H或C1-6烷基；較佳地，R2為H。
  4. 如請求項1或2所述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其中該R2為
    Figure 111137361-A0202-13-0003-330
    W為H或-C(O)NH-Rt，G為葡萄糖醛酸苷基；Rt為C1-6烷基或C1-6烷氧基C1-6烷基。
  5. 如請求項1至4中任一項所述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其中該Rx為羥基。
  6. 如請求項1至5中任一項所述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其中，
    R1為H或烷基；較佳地，R1為H或C1-6烷基；更佳地，R1為H；
    R3和R4與其所連接的原子一起成環；較佳地，R3和R4與其所連接的原子一起形成3員環烷基；
    R5為H；R6為H；
    R7是烷基；較佳地，R7為C1-6烷基；更佳地，R7為甲基；
    R8是烷基；較佳地，R8為C1-6烷基；更佳地，R8為甲基；
    X為亞(伸)烷基；較佳地，X為C1-12亞(伸)烷基；更佳地，X為亞(伸)戊基；
    Y選自鍵、氮原子、氧原子或硫原子；較佳地，Y為鍵或硫原子；更佳地，Y為鍵；
    A選自環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，該環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視需要被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、羥基、羥烷基、烷基、烷氧基、-C(O)R9、環烷基、環烷基烷基、鹵烷基、芳基和雜環基；較佳地，A選自C3-6環烷基、5至6員雜環基、苯基或5至6員雜芳基，該C3-6環烷基、5至6員雜環基、苯基或5至6員雜芳基視需要被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自C1-6羥烷基、C1-6烷基、C3-6環烷基C1-6烷基、C1-6鹵烷基和-C(O)R9；
    R9選自H、烷基和羥烷基；較佳地，R9為C1-6烷基或C1-6羥烷基。
  7. 如請求項1至5中任一項所述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其中，
    R1為H或烷基；較佳地，R1為H或C1-6烷基；更佳地，R1為H；
    R3和R4與其所連接的原子一起成環；較佳地，R3和R4與其所連接的原子一起形成3員碳環；
    R5為H；R6為H；
    R7是烷基；較佳地，R7為C1-6烷基；更佳地，R7為甲基；
    R8是烷基；較佳地，R8為C1-6烷基；更佳地，R8為甲基；
    X為-(CH2)m-X1-(CH2)n-；
    X1為氧原子、環烷基、雜芳基或芳基；該環烷基、雜芳基或芳基視需要被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自胺基、羥基、羥烷基、烷基 和烷氧基；較佳地，X1為氧原子、C3-6環烷基、吡啶基或苯基；該C3-6環烷基或苯基視需要被一個或多個胺基或C1-6烷基所取代；
    m選自1、2或3；n選自1、2或3。
  8. 如請求項1至5任一項所述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其中，
    R1為H或烷基；較佳地，R1為H或C1-6烷基；更佳地，R1為H；
    R3和R4與其所連接的原子一起成環；較佳地，R3和R4與其所連接的原子一起形成3員碳環；
    X為亞(伸)烷基；較佳地，X為C1-6亞(伸)烷基；更佳地，X為亞(伸)戊基；
    R6為H或烷基；較佳地，R6為H或C1-6烷基；
    R7為烷基或環烷基；較佳地，R7為C1-6烷基或C3-6環烷基；
    或者R6和R7與其所連接的原子一起成環；較佳地，R6和R7與其所連接的原子一起形成4-6員環；
    R8為烷基或環烷基；較佳地，R8為C1-6烷基或C3-6環烷基；
    條件是，R7和R8不同時為烷基。
  9. 如請求項1至5中任一項所述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其中
    R1為H或烷基；較佳地，R1為H或C1-6烷基；更佳地，R1為H；
    R3為H；
    R4和R5與其所連接的原子一起成環；較佳地，R4和R5與其所連接的原子一起形成3員碳環；
    R6為H；
    R7是烷基；較佳地，R7為C1-6烷基；更佳地，R7為甲基；
    R8是烷基；較佳地，R8為C1-6烷基；更佳地，R8為甲基；
    X為亞(伸)烷基；較佳地，X為C1-12亞(伸)烷基；更佳地，X為亞(伸)戊基。
  10. 如請求項1至9中任一項所述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其中L為-La-Lb-Lc-Ld-，
    La選自：
    Figure 111137361-A0202-13-0006-331
    和
    Figure 111137361-A0202-13-0006-332
    ；其中星號*表示與Lb結合，波浪線
    Figure 111137361-A0202-13-0006-460
    表示與Pc的重構的糖鏈結合；
    Lb選自-C(O)-CH2CH2-C(O)-、-C(O)-(CH2CH2)2-C(O)-、-C(O)-CH2CH2-C(O)-NH-(CH2CH2)2-C(O)-、-C(O)-CH2CH2-C(O)-NH-(CH2CH2O)2-CH2-C(O)-、-C(O)-CH2CH2-NH-C(O)-(CH2CH2O)4-CH2CH2-C(O)-、-CH2-OC(O)-和-OC(O)-；
    Lc為由2至7個胺基酸殘基構成的肽殘基，其中該胺基酸殘基是由***酸、丙胺酸、脯胺酸、異亮胺酸、甘胺酸、纈胺酸、賴胺酸、瓜胺酸、絲胺酸、谷胺酸或天冬胺酸所形成的殘基，該胺基酸殘基是未被取代的或各自獨立地被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、羥基、氰基、胺基、C1-6烷基、鹵C1-6烷基、C1-6烷氧基和C3-7環烷基；
    Ld為-NH-Ra-CH2O-C(O)-、-NH-CH2O-Rb-C(O)-或鍵；
    Ra為苯基或5-6員雜環基，該苯基和5-6員雜環基是未被取代的或各自獨立地被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、側氧基、羥基、氰基、胺基、C1-6烷基、鹵C1-6烷基和C1-6烷氧基；
    Rb為C1-6烷基或C3-7環烷基，該C1-6烷基和C3-7環烷基是未被取代的或各自獨立地被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、側氧基、羥基、氰基、胺基、C1-6烷基、C3-7環烷基、5-6員雜環基、鹵C1-6烷基和C1-6烷氧基。
  11. 如請求項10所述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其中Lb為
    -C(O)-CH2CH2-C(O)-。
  12. 如請求項10所述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其中Lc為-GGVA-、-VA-、-GGFG-、-GGPI-、-GGVK-和-GGPL-；較佳為-GGVA-。
  13. 如請求項10所述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其中
    Ld為-NH-Ra-CH2O-C(O)-，Ra為苯基。
  14. 如請求項1至13中任一項所述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，該Pc為與腫瘤細胞結合且能被吞入腫瘤細胞內的抗體；較佳地，該Pc選自抗HER2(ErbB2)抗體、抗EGFR抗體、抗B7H3抗體、抗c-Met抗體、抗HER3(ErbB3)抗體、抗HER4(ErbB4)抗體、抗CD20抗體、抗CD22抗體、抗CD30抗體、抗CD33抗體、抗CD44抗體、抗CD56抗體、抗CD70抗體、抗CD73抗體、抗CD105抗體、抗CEA抗體、抗A33抗體、抗Cripto抗體、抗EphA2抗體、抗G250抗體、抗MUC1抗體、抗Lewis Y抗體、抗VEGFR抗體、抗GPNMB抗體、抗Integrin抗體、抗PSMA抗體、抗Tenascin-C抗體、抗Claudin18.2 抗體、抗ROR1抗體、抗CD19抗體、抗Trop2抗體、抗CD79b抗體、抗SLC44A4抗體和抗Mesothelin抗體。
  15. 如請求項1至14中任一項所述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其中該y為1至8，較佳為1至4。
  16. 如請求項1至15中任一項所述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，該Pc藉由其N297糖鏈與L結合，該N297糖鏈結合於Pc重鏈第297位的Asn。
  17. 如請求項1至16中任一項所述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其為如下結構：
    Pc-(N297糖鏈)-[L-D]y
    該N297糖鏈為重構的糖鏈，結合於Pc重鏈第297位的Asn；
    其中y為1至4，較佳為1至2；
    Pc、L、D如請求像1中所述。
  18. 如請求項1至17中任一項所述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其中該糖鏈為N297糖鏈，結構選自如下所述的[N297-(Fuc)SG1]、[N297-(Fuc)SG2]、[N297-(Fuc)SG3]、[N297-(Fuc)SG4]和[N297-(Fuc)SG5]：
    Figure 111137361-A0202-13-0008-333
    Figure 111137361-A0202-13-0008-334
    Figure 111137361-A0202-13-0009-335
    Figure 111137361-A0202-13-0009-336
    Figure 111137361-A0202-13-0009-337
    式中，波浪線
    Figure 111137361-A0202-13-0009-461
    表示與Pc重鏈第297位的Asn結合，
    L(PEG)表示-(CH2CH2O)qCH2CH2-NH-，右端的胺基表示與N297糖鏈的β-Man支鏈的1-3鏈側或/和1-6鏈側的非還原末端的N-乙醯基神經胺酸的2位羧酸進行醯胺鍵合；q為0至20，較佳為1至10；
    星號*表示與該連接子L結合；
    較佳地，該糖鏈結構為：
    Figure 111137361-A0202-13-0009-339
    Figure 111137361-A0202-13-0009-340
    其中q為2或3。
  19. 如請求項1至17中任一項所述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其中該糖鏈結構為：
    Figure 111137361-A0202-13-0010-350
    式中，波浪線
    Figure 111137361-A0202-13-0010-462
    表示與Pc重鏈第297位的Asn結合；
    P1、P2各自獨立地選自羥基、*-(CH2CH2O)s1-和*-(CH2CH2O)s2-(CH2CH2CH2O)s3-(CH2CH2O)s4-，該*-(CH2CH2O)s1-和*-(CH2CH2O)s2-(CH2CH2CH2O)s3-(CH2CH2O)s4-是未被取代的或各自獨立地被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、C1-6烷基、C3-6環烷基和C1-6烷氧基；星號*表示與該連接子L結合；
    s1選自1-10，較佳1-5；s2選自0-10，較佳1-5；s3選自1-10，較佳1-5；s4選自0-10，較佳1-5；
    條件是，P1、P2不同時為羥基或*-(CH2CH2O)s1-；
    較佳地，該糖鏈結構選自：
    Figure 111137361-A0202-13-0010-351
    Figure 111137361-A0202-13-0011-352
    Figure 111137361-A0202-13-0011-353
    Figure 111137361-A0202-13-0011-354
    Figure 111137361-A0202-13-0011-355
    Figure 111137361-A0202-13-0011-356
    Figure 111137361-A0202-13-0011-357
    Figure 111137361-A0202-13-0012-358
    Figure 111137361-A0202-13-0012-359
    Figure 111137361-A0202-13-0012-360
  20. 如請求項1至19中任一項所述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽，其選自以下的組：
    組1：
    Figure 111137361-A0202-13-0012-361
    和/或
    Figure 111137361-A0202-13-0012-362
    組2：
    Figure 111137361-A0202-13-0013-363
    和/或
    Figure 111137361-A0202-13-0013-364
    組3：
    Figure 111137361-A0202-13-0013-365
    和/或
    Figure 111137361-A0202-13-0013-366
    組4：
    Figure 111137361-A0202-13-0014-367
    和/或
    Figure 111137361-A0202-13-0014-368
    組5：
    Figure 111137361-A0202-13-0014-369
    和/或
    Figure 111137361-A0202-13-0014-370
    組6：
    Figure 111137361-A0202-13-0015-371
    和/或
    Figure 111137361-A0202-13-0015-665
    組7：
    Figure 111137361-A0202-13-0015-373
    和/或
    Figure 111137361-A0202-13-0015-666
    組8：
    Figure 111137361-A0202-13-0016-375
    和/或
    Figure 111137361-A0202-13-0016-669
    組9：
    Figure 111137361-A0202-13-0016-377
    和/或
    Figure 111137361-A0202-13-0016-668
    組10：
    Figure 111137361-A0202-13-0017-379
    和/或
    Figure 111137361-A0202-13-0017-670
    組11：
    Figure 111137361-A0202-13-0017-381
    和/或
    Figure 111137361-A0202-13-0017-671
    組12：
    Figure 111137361-A0202-13-0018-383
    和/或
    Figure 111137361-A0202-13-0018-384
    組13：
    Figure 111137361-A0202-13-0018-385
    和/或
    Figure 111137361-A0202-13-0018-386
    組14：
    Figure 111137361-A0202-13-0019-387
    和/或
    Figure 111137361-A0202-13-0019-672
    組15：
    Figure 111137361-A0202-13-0020-389
    和/或
    Figure 111137361-A0202-13-0020-673
    組16：
    Figure 111137361-A0202-13-0020-392
    和/或
    Figure 111137361-A0202-13-0020-674
    組17：
    Figure 111137361-A0202-13-0021-394
    和/或
    Figure 111137361-A0202-13-0021-675
    組18：
    Figure 111137361-A0202-13-0021-396
    和/或
    Figure 111137361-A0202-13-0021-676
    其中，
    y選自1至4，較佳為1至2；
    該N297糖鏈結構選自：
    Figure 111137361-A0202-13-0022-341
    Figure 111137361-A0202-13-0022-342
    Figure 111137361-A0202-13-0022-343
    Figure 111137361-A0202-13-0022-344
    Figure 111137361-A0202-13-0022-345
    式中，波浪線
    Figure 111137361-A0202-13-0022-463
    表示與Pc重鏈第297位的Asn結合，星號*表示與該連接子L結合；
    L(PEG)表示-(CH2CH2O)qCH2CH2-NH-，q選自0-20，較佳自1-10；右端的胺基表示與N297糖鏈的β-Man支鏈的1-3鏈側或/和1-6鏈側的非還原末端的N-乙醯基神經胺酸的2位羧酸進行醯胺鍵合；
    或者，該N297糖鏈結構選自：
    Figure 111137361-A0202-13-0023-677
    式中，波浪線
    Figure 111137361-A0202-13-0023-465
    表示與Pc重鏈第297位的Asn結合；
    P1、P2各自獨立地選自羥基、*-(CH2CH2O)s1-和*-(CH2CH2O)s2-(CH2CH2CH2O)s3-(CH2CH2O)s4-，該*-(CH2CH2O)s1-和*-(CH2CH2O)s2-(CH2CH2CH2O)s3-(CH2CH2O)s4-是未被取代的或各自獨立地被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、C1-6烷基、C3-6環烷基和C1-6烷氧基；s1選自1-10，較佳1-5；s2選自0-10，較佳1-5；s3選自1-10，較佳1-5；s4選自0-10，較佳1-5；星號*表示與該連接子L結合；
    條件是P1、P2不同時為羥基或*-(CH2CH2O)s1-；
    該Pc如請求項14所述；較佳地，其中該Pc選自抗HER2抗體、抗HER3抗體、抗Claudin18.2抗體和抗CD19抗體；
    更佳地，該抗HER2抗體包含序列如SEQ ID NO：1所示的輕鏈，和序列如SEQ ID NO：2所示的重鏈；該抗Claudin18.2抗體包含序列如SEQ ID NO：3所示的輕鏈，和序列如SEQ ID NO：4所示的重鏈；該抗HER3抗體包含序列如SEQ ID NO：5所示的輕鏈，和序列如SEQ ID NO：6所示的重鏈。
  21. 一種式(DL)所示的化合物或其可藥用的鹽，
    Figure 111137361-A0202-13-0024-348
    其中，
    R11為H、側氧基、鹵素或烷基；
    R12為H、烷基或
    Figure 111137361-A0202-13-0024-399
    ，W為H、-C(O)Rt1或-C(O)NH-Rt1，G選 自葡萄糖醛酸苷基或半乳糖苷基；Rt1選自烷基或烷氧基烷基；
    R13為La’-Lb-Lc-Ld-：
    La’為
    Figure 111137361-A0202-13-0024-400
    Lb選自-C(O)-CH2CH2-C(O)-、-C(O)-(CH2CH2)2-C(O)-、-C(O)-CH2CH2-C(O)-NH-(CH2CH2)2-C(O)-、-C(O)-CH2CH2-C(O)-NH-(CH2CH2O)2-CH2-C(O)-、-C(O)-CH2CH2-NH-C(O)-(CH2CH2O)4-CH2CH2-C(O)-、-CH2-OC(O)-和-OC(O)-；
    Lc為由2至7個胺基酸殘基構成的肽殘基，其中該胺基酸殘基是由***酸、丙胺酸、脯胺酸、異亮胺酸、甘胺酸、纈胺酸、賴胺酸、瓜胺酸、絲胺酸、 谷胺酸或天冬胺酸所形成的殘基，該胺基酸殘基是未被取代的或各自獨立地被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、羥基、氰基、胺基、C1-6烷基、鹵C1-6烷基、C1-6烷氧基和C3-7環烷基；
    Ld為-NH-Ra-CH2O-C(O)-、-NH-CH2O-Rb-C(O)-或鍵；
    Ra為苯基或5-6員雜環基，該苯基和5-6員雜環基是未被取代的或各自獨立地被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、側氧基、羥基、氰基、胺基、C1-6烷基、鹵C1-6烷基和C1-6烷氧基；
    Rb為C1-6烷基或C3-7環烷基，該C1-6烷基和C3-7環烷基是未被取代的或各自獨立地被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、側氧基、羥基、氰基、胺基、C1-6烷基、C3-7環烷基、5-6員雜環基、鹵C1-6烷基和C1-6烷氧基；
    R14為H、羥基或烷氧基；
    或者R13和R14與相連的原子一起形成亞胺鍵(N=C)；
    R15為H或烷基；
    R16為H或烷基；
    R17為H、鹵素或烷基；
    或者R15和R16與其所連接的原子一起成環，或R16和R17與其所連接的原子一起成環；
    R18為H或烷基；
    R19為烷基或環烷基；或者R18和R19與其所連接的原子一起成環；
    R20為烷基或環烷基；
    X’為亞(伸)烷基或-(CH2)m’-X’1-(CH2)n’-；
    X’1為氮原子、氧原子、硫原子、環烷基、雜環基、雜芳基或芳基；該環烷基、雜環基、雜芳基或芳基視需要被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自胺基、羥基、羥烷基、烷基和烷氧基；
    Y’為鍵、氮原子、氧原子或硫原子；
    A’為烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，該環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視需要被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、羥基、羥烷基、烷基、烷氧基、-C(O)R21、環烷基、環烷基烷基、鹵烷基、芳基和雜環基；
    R21為H、烷基和羥烷基；
    m'為1、2或3；n’為1、2或3；
    條件是當X’為亞(伸)烷基時，1)R11為側氧基，或2)R14為H，或3)R16和R17與其所連接的原子一起成環，或4)R18和R19與其所連接的原子一起成環，或5)R19和/或R20為環烷基；或6)A’不是烷基。
  22. 如請求項21所述的化合物或其可藥用的鹽，其中R13和R14與相連的原子一起形成亞胺鍵(N=C)。
  23. 如請求項21或22所述的化合物或其可藥用的鹽，其中，
    R13為La’-Lb-Lc-Ld-：
    La’為
    Figure 111137361-A0202-13-0026-401
    Lb選自-C(O)-CH2CH2-C(O)-、-C(O)-(CH2CH2)2-C(O)-、-C(O)-CH2CH2-C(O)-NH-(CH2CH2)2-C(O)-、-C(O)-CH2CH2-C(O)-NH-(CH2CH2O)2-CH2-C(O)-、-C(O)-CH2CH2-NH-C(O)-(CH2CH2O)4-CH2CH2-C(O)-、-CH2-OC(O)-和-OC(O)-；
    Lc為由2至7個胺基酸殘基構成的肽殘基，其中該胺基酸殘基是由***酸、丙胺酸、脯胺酸、異亮胺酸、甘胺酸、纈胺酸、賴胺酸、瓜胺酸、絲胺酸、谷胺酸或天冬胺酸所形成的殘基，該胺基酸殘基是未被取代的或各自獨立地被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、羥基、氰基、胺基、C1-6烷基、鹵C1-6烷基、C1-6烷氧基和C3-7環烷基；
    Ld為-NH-Ra-CH2O-C(O)-、-NH-CH2O-Rb-C(O)-或鍵；
    Ra為苯基或5-6員雜環基，該苯基和5-6員雜環基是未被取代的或各自獨立地被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、側氧基、羥基、氰基、胺基、C1-6烷基、鹵C1-6烷基和C1-6烷氧基；
    Rb為C1-6烷基或C3-7環烷基，該C1-6烷基和C3-7環烷基是未被取代的或各自獨立地被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、側氧基、羥基、氰基、胺基、C1-6烷基、C3-7環烷基、5-6員雜環基、鹵C1-6烷基和C1-6烷氧基。
  24. 如請求項21所述的化合物或其可藥用的鹽，其中R14為H或羥基；較佳地，R14為羥基。
  25. 如請求項21至24中任一項所述的化合物或其可藥用的鹽，其中該R11為H或側氧基；較佳地，R11為H。
  26. 如請求項21至25中任一項所述的化合物或其可藥用的鹽，其中該R12為H或C1-6烷基；較佳地，R12為H。
  27. 如請求項21至25中任一項所述的化合物或其可藥用的鹽，其中該R12如以下結構所示：
    Figure 111137361-A0202-13-0028-402
    W為H或-C(O)NH-Rt1，G為葡萄糖醛酸苷基；Rt1選自C1-6烷基或C1-6烷氧基C1-6烷基。
  28. 如請求項21至27中任一項所述的化合物或其可藥用的鹽，其中，
    R11為H或烷基；較佳地，R11為H或C1-6烷基；
    R15和R16與其所連接的原子一起形成3-6員碳環；
    R17為H；R18為H；
    R19是烷基；較佳地，R19為C1-6烷基；
    R20是烷基；較佳地，R20為C1-6烷基；
    X’為亞(伸)烷基；較佳地，X’為C1-6亞(伸)烷基；更佳地，X’為亞(伸)戊基；
    Y’選自鍵、氮原子、氧原子或硫原子；較佳地，Y’為鍵或硫原子；更佳地，Y’為鍵；
    A’為環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，該環烷基、雜環基、芳基或雜芳基視需要被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、羥基、羥烷基、烷基、烷氧基、-C(O)R21、環烷基、環烷基烷基、鹵烷基、芳基和雜環基；較佳地，A’選自C3-6環烷基、5至6員雜環基、苯基或5至6員雜芳基，該C3-6環烷基、5至6員雜環基、苯基或5至6員雜芳基視需要被一個或多個取代基所 取代，其中每個取代基獨立地選自C1-6羥烷基、C1-6烷基、C3-6環烷基C1-6烷基、鹵C1-6烷基和-C(O)R21；
    R21選自H、烷基和羥烷基；較佳地，R21為C1-6烷基或C1-6羥烷基。
  29. 如請求項21至27中任一項所述的化合物或其可藥用的鹽，其中，
    R11為H或烷基；較佳地，R11為H或C1-6烷基；
    R15和R16與其所連接的原子一起形成3-6員碳環；
    R17為H；R18為H；
    R19是烷基；較佳地，R19為C1-6烷基；
    R20是烷基；較佳地，R20為C1-6烷基；
    X’為-(CH2)m’-X’1-(CH2)n’-；
    X’1為氮原子、氧原子、硫原子、環烷基、雜芳基或芳基；該環烷基、雜芳基或芳基視需要被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自胺基、羥基、羥烷基、烷基和烷氧基；較佳地，X’1為氧原子、C3-6環烷基、吡啶基或苯基；該C3-6環烷基、吡啶基或苯基視需要被一個或多個胺基或C1-6烷基所取代；
    Y’為氧原子；
    A’為烷基；較佳地A’為C1-6烷基；
    m'選自1、2或3；n’選自1、2或3。
  30. 如請求項21至27中任一項所述的化合物或其可藥用的鹽，其中，
    R11為H或烷基；較佳地，R11為H或C1-6烷基；
    R15和R16與其所連接的原子一起形成3-6員碳環；
    R17為H；
    R18為H或烷基；較佳地，R18為H或C1-6烷基；
    R19為烷基或環烷基；較佳地，R19為C1-6烷基或C1-6羥烷基；
    或者R18和R19與其所連接的原子一起成環；較佳地，R18和R19與其所連接的原子一起形成3-6員碳環；
    R20為烷基或環烷基；較佳地，R20為C1-6烷基或C1-6羥烷基；
    X’為亞(伸)烷基；較佳地，X’為C1-6亞(伸)烷基；更佳地，X’為亞(伸)戊基；
    Y’為氧原子；
    A’為烷基；較佳地A’為C1-6烷基；
    條件是，R19和R20不同時為烷基。
  31. 如請求項21至27中任一項所述的化合物或其可藥用的鹽，其中，
    R11為H或C1-6烷基；較佳地，R11為H；
    R15為H；
    R16和R17與其所連接的原子一起形成3-6員碳環；
    R18為H；
    R19是烷基；較佳地，R19為C1-6烷基；
    R20是烷基；較佳地，R20為C1-6烷基；
    X’為亞(伸)烷基；較佳地，X’為C1-6亞(伸)烷基；更佳地，X’為亞(伸)戊基；
    Y’為氧原子；
    A’為烷基；較佳地A’為C1-6烷基。
  32. 如請求項21至27中任一項所述的化合物或其可藥用的鹽，其選自：
    Figure 111137361-A0202-13-0031-403
    Figure 111137361-A0202-13-0031-404
    Figure 111137361-A0202-13-0031-405
    Figure 111137361-A0202-13-0031-406
    Figure 111137361-A0202-13-0031-407
    Figure 111137361-A0202-13-0031-408
    Figure 111137361-A0202-13-0032-409
    Figure 111137361-A0202-13-0032-410
    Figure 111137361-A0202-13-0032-411
    Figure 111137361-A0202-13-0032-412
    Figure 111137361-A0202-13-0032-413
    Figure 111137361-A0202-13-0032-414
    Figure 111137361-A0202-13-0032-415
    Figure 111137361-A0202-13-0032-416
    Figure 111137361-A0202-13-0033-417
    Figure 111137361-A0202-13-0033-418
    Figure 111137361-A0202-13-0033-419
    Figure 111137361-A0202-13-0033-420
    Figure 111137361-A0202-13-0033-421
    Figure 111137361-A0202-13-0033-430
    Figure 111137361-A0202-13-0033-431
    Figure 111137361-A0202-13-0034-423
    Figure 111137361-A0202-13-0034-424
    Figure 111137361-A0202-13-0034-425
    Figure 111137361-A0202-13-0034-426
    Figure 111137361-A0202-13-0034-427
    Figure 111137361-A0202-13-0034-428
    Figure 111137361-A0202-13-0034-432
    Figure 111137361-A0202-13-0034-433
    Figure 111137361-A0202-13-0035-434
    Figure 111137361-A0202-13-0035-435
    Figure 111137361-A0202-13-0035-436
    Figure 111137361-A0202-13-0035-437
    Figure 111137361-A0202-13-0035-438
    Figure 111137361-A0202-13-0035-439
    Figure 111137361-A0202-13-0036-440
    Figure 111137361-A0202-13-0036-441
    Figure 111137361-A0202-13-0036-442
    Figure 111137361-A0202-13-0036-443
    Figure 111137361-A0202-13-0037-444
    Figure 111137361-A0202-13-0037-445
    Figure 111137361-A0202-13-0037-446
    Figure 111137361-A0202-13-0037-447
    Figure 111137361-A0202-13-0038-448
    Figure 111137361-A0202-13-0038-449
    Figure 111137361-A0202-13-0038-450
    Figure 111137361-A0202-13-0038-451
    Figure 111137361-A0202-13-0039-452
    Figure 111137361-A0202-13-0039-453
    Figure 111137361-A0202-13-0039-454
    Figure 111137361-A0202-13-0040-455
    Figure 111137361-A0202-13-0040-456
  33. 一種醫藥組成物，其含有治療有效量的如請求項1至20中任一項所述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽或如請求項21至32中任一項所述的化合物或其可藥用的鹽，以及藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
  34. 如請求項1至20中任一項所述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽、或如請求項21至32中任一項所述的化合物或其可藥用的鹽、或如請求項33所述的醫藥組成物用作藥物。
  35. 一種如請求項1至20中任一項所述的抗體-藥物偶聯物或其可藥用的鹽、或如請求項21至32中任一項所述的化合物或其可藥用的鹽、或如請求項33所述的醫藥組成物在製備用於治療腫瘤的藥物中的用途；
    較佳地，該腫瘤為卵巢癌、肺癌、胃癌、子宮內膜癌、睾丸癌、宮頸癌、胎盤絨毛膜癌、腎癌、尿路上皮癌、大腸癌、***癌、多形性神經膠質母細胞瘤、腦腫瘤、胰腺癌、乳腺癌、黑色素瘤、肝癌、膀胱癌或食道癌。
  36. 一種式(OLS)所示的二糖化合物，
    Figure 111137361-A0202-13-0041-457
    P3、P4各自獨立地選自羥基、N3-(CH2CH2O)s1-和N3-(CH2CH2O)s2-(CH2CH2CH2O)s3-(CH2CH2O)s4-，該N3-(CH2CH2O)s1-和N3-(CH2CH2O)s2-(CH2CH2CH2O)s3-(CH2CH2O)s4-是未被取代的或各自獨立地被一個或多個取代基所取代，其中每個取代基獨立地選自鹵素、C1-6烷基、C3-6環烷基和C1-6烷氧基；
    s1選自1-10，較佳1-5；s2選自0-10，較佳1-5；s3選自1-10，較佳1-5；s4選自0-10，較佳1-5；
    條件是，P3、P4不同時為羥基或N3-(CH2CH2O)s1-；
    較佳地，式(OLS)所示的二糖化合物選自：
    Figure 111137361-A0202-13-0041-458
    Figure 111137361-A0202-13-0042-459
  37. 一種糖分子，其為：
    Figure 111137361-A0202-13-0042-349
    式中，q為0-20；較佳地，q為1-10；更佳地，q為2或3；其中，Oxa代表噁唑啉環。
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