JP7070238B2

JP7070238B2 - 液体クロマトグラフ分析装置、移動相供給装置、液体クロマトグラフ分析方法および移動相供給方法

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Publication number: JP7070238B2
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Inventors: 淳家氏
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Description

本発明は、移動相を供給する液体クロマトグラフ分析装置、移動相供給装置、液体クロマトグラフ分析方法および移動相供給方法に関する。

液体クロマトグラフ分析装置においては、塩を含む水溶液（以下、単に水溶液と呼ぶ。）と有機溶媒との混合液が移動相として用いられることがある。例えば、水溶液と有機溶媒とが共通のボトル内で予め混合されることにより混合液が生成される。この場合、水溶液中の塩が析出することはほとんどない。仮に、塩が析出した場合でも、ボトル内で混合液を撹拌することにより塩を混合液に再度溶解させることができる。

一方、水溶液と有機溶媒とが別個のボトルに貯留され、試料の分析時に、ボトルから供給された水溶液と有機溶媒とが共通の流路内で混合されることにより混合液が生成されることがある。この場合、水溶液と有機溶媒とが接触する界面では、有機溶媒の濃度が高くなるため、塩の析出が発生しやすくなる。有機溶媒の濃度が高い場合には、この問題はより顕在化する。

特許文献１には、塩を溶解した緩衝液（以下、単に緩衝液と呼ぶ。）と有機溶媒との混合液を移動相として液体クロマトグラフの分析流路へ供給する移動相供給装置が記載されている。この移動相供給装置においては、第１の貯留タンクに貯留された緩衝液が、第１の電磁弁、第１の逆流防止弁および混合流路を通して送液ポンプに供給される。また、第２の貯留タンクに貯留された有機溶媒が、第２の電磁弁、第２の逆流防止弁および混合流路を通して送液ポンプに供給される。緩衝液と有機溶媒とは、送液ポンプのポンプ室内で混合される。

特開２０１０－１５６６６０号公報

特許文献１に記載された移動相供給装置においては、混合流路で緩衝液と有機溶媒とが接触した際に塩が析出した場合でも、第１および第２の逆流防止弁により第１および第２の電磁弁に塩が侵入することがそれぞれ防止される。しかしながら、塩の析出自体を防止することはできず、析出された塩により移動相の安定的な供給が阻害される可能性がある。

本発明の目的は、移動相を安定的に供給することが可能な液体クロマトグラフ分析装置、移動相供給装置、液体クロマトグラフ分析方法および移動相供給方法を提供することである。

（１）第１の発明に係る液体クロマトグラフ分析装置は、移動相を生成する移動相供給装置と、移動相供給装置により生成された移動相および試料が供給されるインジェクタと、インジェクタに供給された移動相および試料が導入されるカラムと、カラムを通過した試料を検出する検出器とを備え、移動相供給装置は、塩を含む水溶液を貯留する第１の貯留部と、有機溶媒を貯留する第２の貯留部と、第１の貯留部に貯留された水溶液と第２の貯留部に貯留された有機溶媒とを混合することにより移動相を生成する混合部と、混合部と第１の貯留部とを接続する第１の配管と、混合部と第２の貯留部とを接続する第２の配管と、混合部により生成される移動相の温度が水溶液に含まれる塩の溶解温度以上になるように、第１の配管の少なくとも一部および第２の配管の少なくとも一部を加熱する加熱部とを含む。

この液体クロマトグラフ分析装置においては、移動相供給装置により生成された移動相および試料がインジェクタに供給される。インジェクタに供給された移動相および試料がカラムに導入され、カラムを通過した試料が検出器により検出される。

移動相供給装置においては、第１の貯留部に貯留された塩を含む水溶液が第１の配管を通して混合部に導かれ、第２の貯留部に貯留された有機溶媒が第２の配管を通して混合部に導かれる。混合部により水溶液と有機溶媒とが混合されることにより移動相が生成される。ここで、混合部により生成される移動相の温度が水溶液に含まれる塩の溶解温度以上になるように、第１の配管の少なくとも一部および第２の配管の少なくとも一部が加熱部により加熱される。

この構成によれば、混合部よりも上流において、移動相の温度が水溶液に含まれる塩の溶解温度以上になるように水溶液および有機溶媒が加熱される。そのため、水溶液が有機溶媒と接触した場合でも、有機溶媒の濃度に関わらず塩が析出することが防止される。したがって、塩が移動相の安定的な供給を阻害することがない。これにより、移動相を安定的に供給することができる。

（２）液体クロマトグラフ分析装置は、カラムを収容し、カラムの温度を調整するカラム恒温槽をさらに備え、カラム恒温槽は、加熱部を含み、第１の配管の少なくとも一部および第２の配管の少なくとも一部をさらに収容しつつ、第１の配管の少なくとも一部および第２の配管の少なくとも一部を加熱してもよい。この場合、第１の配管の少なくとも一部および第２の配管の少なくとも一部を加熱するための加熱部をカラム恒温槽と別個に設ける必要がない。これにより、移動相供給装置のコストを低減しつつ、移動相供給装置をコンパクトにすることができる。

（３）第２の発明に係る移動相供給装置は、試料の液体クロマトグラフ分析に用いる移動相を供給する移動相供給装置であって、塩を含む水溶液を貯留する第１の貯留部と、有機溶媒を貯留する第２の貯留部と、第１の貯留部に貯留された水溶液と第２の貯留部に貯留された有機溶媒とを混合することにより移動相を生成する混合部と、混合部と第１の貯留部とを接続する第１の配管と、混合部と第２の貯留部とを接続する第２の配管と、混合部により生成される移動相の温度が水溶液に含まれる塩の溶解温度以上になるように、第１の配管の少なくとも一部および第２の配管の少なくとも一部を加熱する加熱部とを備える。

この移動相供給装置においては、水溶液が有機溶媒と接触した場合でも、有機溶媒の濃度に関わらず塩が析出することが防止される。したがって、塩が移動相の安定的な供給を阻害することがない。これにより、移動相を安定的に供給することができる。

（４）第３の発明に係る液体クロマトグラフ分析方法は、移動相供給装置により移動相を生成するステップと、移動相供給装置により生成された移動相および試料をインジェクタに供給するステップと、インジェクタに供給された移動相および試料をカラムに導入するステップと、カラムを通過した試料を検出器により検出するステップとを含み、移動相供給装置により移動相を生成するステップは、第１の貯留部に貯留された塩を含む水溶液を第１の配管を通して混合部に導くことと、第２の貯留部に貯留された有機溶媒を第２の配管を通して混合部に導くことと、混合部により水溶液と有機溶媒とを混合することにより移動相を生成することと、混合部により生成される移動相の温度が水溶液に含まれる塩の溶解温度以上になるように、第１の配管の少なくとも一部および第２の配管の少なくとも一部を加熱部により加熱することとを含む。

この液体クロマトグラフ分析方法によれば、移動相供給装置において水溶液が有機溶媒と接触した場合でも、有機溶媒の濃度に関わらず塩が析出することが防止される。したがって、塩が移動相の安定的な供給を阻害することがない。これにより、移動相を安定的に供給することができる。

（５）液体クロマトグラフ分析方法は、カラムを収容するカラム恒温槽によりカラムの温度を調整するステップをさらに含み、カラム恒温槽は、加熱部を含み、第１の配管の少なくとも一部および第２の配管の少なくとも一部を加熱部により加熱することは、第１の配管の少なくとも一部および第２の配管の少なくとも一部をカラム恒温槽に収容することと、第１の配管の少なくとも一部および第２の配管の少なくとも一部をカラム恒温槽により加熱することとを含んでもよい。この場合、移動相供給装置のコストを低減しつつ、移動相供給装置をコンパクトにすることができる。

（６）第４の発明に係る移動相供給方法は、試料の液体クロマトグラフ分析に用いる移動相を供給する移動相供給方法であって、第１の貯留部に貯留された塩を含む水溶液を第１の配管を通して混合部に導くステップと、第２の貯留部に貯留された有機溶媒を第２の配管を通して混合部に導くステップと、混合部により水溶液と有機溶媒とを混合することにより移動相を生成するステップと、混合部により生成される移動相の温度が水溶液に含まれる塩の溶解温度以上になるように、第１の配管の少なくとも一部および第２の配管の少なくとも一部を加熱部により加熱するステップとを含む。

この移動相供給方法によれば、水溶液が有機溶媒と接触した場合でも、有機溶媒の濃度に関わらず塩が析出することが防止される。したがって、塩が移動相の安定的な供給を阻害することがない。これにより、移動相を安定的に供給することができる。

本発明によれば、移動相を安定的に供給することができる。

本発明の一実施の形態に係る液体クロマトグラフ分析装置の構成を示す図である。第１の変形例に係る液体クロマトグラフ分析装置の構成を示す図である。第２の変形例に係る液体クロマトグラフ分析装置の構成を示す図である。実施例１における送液部の圧力指示値の時間変化を示す図である。比較例１における送液部の圧力指示値の時間変化を示す図である。実施例２における試料の分析の結果を示す図である。実施例３における試料のグラジエント分析の結果を示す図である。

（１）液体クロマトグラフ分析装置の構成
以下、本発明の実施の形態に係る移動相供給装置、液体クロマトグラフ分析装置、移動相供給方法および液体クロマトグラフ分析方法について図面を参照しながら詳細に説明する。図１は、本発明の一実施の形態に係る液体クロマトグラフ分析装置の構成を示す図である。図１の液体クロマトグラフ分析装置１００は、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフ分析装置）である。

図１に示すように、液体クロマトグラフ分析装置１００は、移動相供給装置１０、インジェクタ２０、カラム恒温槽３０および検出器４０を含む。カラム恒温槽３０は、加熱部を含む。カラム恒温槽３０の内部にはカラム３１が収容され、カラム恒温槽３０の内部は所定の一定温度に調整される。

移動相供給装置１０は、配管１，２，３、貯留部１１，１２、混合部１３、脱気装置１４および送液部１５を含む。また、本実施の形態においては、移動相供給装置１０は、カラム恒温槽３０の一部（加熱部）を含む。貯留部１１は、薬液ボトルであり、塩を含む水溶液（以下、単に水溶液と呼ぶ。）を貯留する。貯留部１２は、貯留部１１と同様の薬液ボトルであり、有機溶媒を貯留する。貯留部１１，１２は、それぞれ第１および第２の貯留部の例である。

混合部１３は、例えば低圧グラジエントユニットであり、ポートＡ，Ｂ，Ｃを含む。貯留部１１と混合部１３のポートＡとが配管１により接続される。貯留部１２と混合部１３のポートＢとが配管２により接続される。配管１，２は、それぞれ第１および第２の配管の例である。混合部１３のポートＣに配管３が接続される。混合部１３は、配管１を通してポートＡに供給された貯留部１１からの水溶液と、配管２を通してポートＢに供給された貯留部１２からの有機溶媒とを混合することにより移動相を生成し、生成された移動相をポートＣから出力する。

以下の説明では、水溶液または有機溶媒の流れを基準として液体クロマトグラフ分析装置１００の上流および下流を定義する。混合後の移動相の温度が水溶液に含まれる塩の溶解温度以上になるように、混合部１３よりも上流に位置する配管１，２の少なくとも一部が加熱される。本実施の形態においては、配管１，２の各々の一部がカラム恒温槽３０内に配置される。これにより、カラム恒温槽３０内において、混合後の移動相の温度が塩の溶解温度以上になるだけの熱交換を水溶液および有機溶媒に行うことができる。

カラム恒温槽３０に配置される配管１，２の部分は、ループ状に形成されてもよい。この場合、カラム恒温槽３０に配置される配管１，２の部分を十分に長くしつつコンパクトに維持することができる。その結果、上記の熱交換をより容易に行うことができる。

脱気装置１４は、配管１，２の各々に介挿され、配管１内を流れる水溶液に含まれる気体を除去するとともに、配管２内を流れる有機溶媒に含まれる気体を除去する。送液部１５は、例えばポンプユニットであり、配管３に介挿される。送液部１５は、混合部１３のポートＣから出力された移動相を下流に圧送する。

配管３には、送液部１５よりも下流において、インジェクタ２０、カラム３１および検出器４０がこの順で介挿される。インジェクタ２０には、測定対象の試料が供給され、送液部１５により圧送される移動相とともにカラム３１に導入される。カラム３１に導入された試料は、成分ごとに分離され、異なる時間で溶出される。検出器４０は、カラム３１から溶出された試料を検出する。

（２）変形例
図２は、第１の変形例に係る液体クロマトグラフ分析装置１００の構成を示す図である。図２に示すように、第１の変形例に係る液体クロマトグラフ分析装置１００は、加熱部１６，１７を含む。第１の変形例に係る液体クロマトグラフ分析装置１００は、脱気装置１４を含まないが、脱気装置１４を含んでもよい。後述する第２の変形例に係る液体クロマトグラフ分析装置１００においても同様である。

加熱部１６，１７は、温水槽、電熱ヒータまたはペルチェ素子等のいずれであってもよく、混合後の移動相の温度が水溶液に含まれる塩の溶解温度以上になるように、配管１，２の少なくとも一部をそれぞれ加熱する。この場合、配管１，２の各々の一部がカラム恒温槽３０内に配置されなくてもよい。なお、第１の変形例に係る液体クロマトグラフ分析装置１００は、加熱部１６，１７に代えて、混合部１３を加熱する共通の加熱部を含んでもよい。

図３は、第２の変形例に係る液体クロマトグラフ分析装置１００の構成を示す図である。図３に示すように、第２の変形例に係る液体クロマトグラフ分析装置１００は、送液部１５に代えて、送液部１５と同様の送液部１５ａ，１５ｂを含む。また、混合部１３は、低圧グラジエントユニットではなく、例えばミキサユニットである。

送液部１５ａは、配管１に介挿され、貯留部１１に貯留された水溶液を混合部１３に向けて圧送する。送液部１５ｂは、配管２に介挿され、貯留部１２に貯留された有機溶媒を混合部１３に向けて圧送する。この場合、水溶液と有機溶媒とが別個の送液部１５ａ，１５ｂにより送液される。これにより、高圧グラジエント法を用いて試料の分析を行うことができる。

第２の変形例に係る液体クロマトグラフ分析装置１００は、第１の変形例と同様の加熱部１６，１７、または混合部１３を加熱する共通の加熱部を含んでもよい。この場合、配管１，２の各々の一部がカラム恒温槽３０内に配置されなくてもよい。

（３）効果
本実施の形態に係る液体クロマトグラフ分析装置１００においては、移動相供給装置１０により生成された移動相および試料がインジェクタ２０に供給される。インジェクタ２０に供給された移動相および試料がカラム恒温槽３０に収容されたカラム３１に導入され、カラム３１を通過した試料が検出器４０により検出される。

移動相供給装置１０においては、貯留部１１に貯留された塩を含む水溶液が配管１を通して混合部１３に導かれ、貯留部１２に貯留された有機溶媒が配管２を通して混合部１３に導かれる。混合部１３により水溶液と有機溶媒とが混合されることにより移動相が生成される。ここで、配管１の少なくとも一部および配管２の少なくとも一部がカラム恒温槽３０に収容される。混合部１３により生成される移動相の温度が水溶液に含まれる塩の溶解温度以上になるように、配管１の少なくとも一部および配管２の少なくとも一部がカラム恒温槽３０により加熱される。

この構成によれば、混合部１３よりも上流において、移動相の温度が水溶液に含まれる塩の溶解温度以上になるように水溶液および有機溶媒が加熱される。そのため、水溶液が有機溶媒と接触した場合でも、有機溶媒の濃度に関わらず塩が析出することが防止される。したがって、塩が移動相の安定的な供給を阻害することがない。これにより、移動相を安定的に供給することができる。

また、本実施の形態においては、配管１の少なくとも一部および配管２の少なくとも一部がカラム恒温槽３０により加熱されるので、加熱部をカラム恒温槽３０と別個に設ける必要がない。これにより、移動相供給装置１０のコストを低減しつつ、移動相供給装置１０をコンパクトにすることができる。

（４）実施例１および比較例
実施例１では、予め冷却されたリン酸カリウム緩衝液および予め冷却されたアセトニトリルをそれぞれ水溶液および有機溶媒とし、図１の移動相供給装置１０を用いて移動相の供給を行った。以下、リン酸カリウム緩衝液をＡ液と呼び、アセトニトリルをＢ液と呼ぶ。後述する比較例１、実施例２および実施例３においても同様である。

具体的には、実施例１では、貯留部１１に５０ｍｍｏｌ／ＬのＡ液が貯留され、貯留部１２に５０ｍｍｏｌ／ＬのＢ液が貯留された。これらの貯留部１１，１２から４５：５５の流量の比率でＡ液およびＢ液が送液されるように混合部１３が制御された。ここで、混合部１３は、低圧グラジエントユニットである。

また、配管１，２をそれぞれ流れるＡ液およびＢ液が、約１０分間カラム恒温槽３０内を滞留して加熱されるように、各配管１，２における約５ｍＬの部分がカラム恒温槽３０内に配置された。Ａ液およびＢ液は、カラム恒温槽３０により加熱され、混合部１３により混合された後、送液部１５により下流に送液された。

図４は、実施例１における送液部１５の圧力指示値の時間変化を示す図である。図４に示すように、実施例１においては、送液部１５の圧力は略一定であり、圧力に変動が発生しなかった。これにより、実施例１においては、Ａ液とＢ液とが混合されても塩が析出することがなく、したがって、移動相を安定的に供給することが可能であることが確認された。

一方、比較例１では、配管１，２を加熱するための構成が設けられない点を除いて図１の移動相供給装置１０と同様の構成を有する液体クロマトグラフ分析装置を用いて、実施例１と同様の移動相の供給を行った。したがって、Ａ液およびＢ液は、加熱されることなく混合部１３により混合された後、送液部１５により下流に送液された。

図５は、比較例１における送液部１５の圧力指示値の時間変化を示す図である。図５に示すように、比較例１においては、送液開始後、７分間程度は送液部１５の圧力は略一定であり、圧力に変動が発生しなかった。これは、送液開始時の送液部１５の温度が高かったため、塩が析出しなかったことが原因であると考えられる。しかしながら、送液開始後７分を超えると、送液部１５の圧力が小刻みに大きく変動し、移動相を安定的に供給することが不可能になった。これは、送液部１５の温度が低下したため、塩が析出したことが原因であると考えられる。

（５）実施例２
実施例２では、図１の液体クロマトグラフ分析装置１００を用いて試料の分析を行った。試料は、農薬のチウラム標準液である。具体的には、濃度０．１ｍｇ／Ｌ、０．２ｍｇ／Ｌ、０．５ｍｇ／Ｌおよび１．０ｍｇ／Ｌのチウラム標準液がインジェクタ２０に順次供給され、実施例１と同一の条件で生成された移動相によりカラム３１に導入された。ここで、カラム３１は、ＯＤＳ（オクタデシルシリル）カラムであり、カラム３１の温度は４０℃である。移動相の流量および供給量は、それぞれは１．０ｍＬ／ｍｉｎおよび２０μＬである。

図６は、実施例２における試料の分析の結果を示す図である。図６の横軸は時間を示し、縦軸は試料の検出強度を示す。また、濃度０．１ｍｇ／Ｌ、０．２ｍｇ／Ｌ、０．５ｍｇ／Ｌおよび１．０ｍｇ／Ｌの試料の分析結果が、実線、点線、一点鎖線および二点鎖線によりそれぞれ示される。図６に示すように、実施例２においては、試料の濃度に関わらず、検出強度のベースラインに変動が発生しなかった。これにより、移動相を安定的に供給し、試料の検出および分析を安定的に行うことが可能であることが確認された。

（６）実施例３
実施例３では、試料のグラジエント分析を行った。具体的には、濃度１．０ｍｇ／Ｌのチウラム標準液が試料として用いられ、Ａ液とＢ液との濃度が７０：３０～３０：７０の範囲で連続的に変化された。他の分析条件は、実施例２における分析条件と同一である。

図７（ａ）～（ｃ）は、実施例３における試料のグラジエント分析の結果を示す図である。図７（ａ）～（ｃ）の横軸は共通の時間を示し、図７（ａ）の縦軸はＢ液の比率（濃度）を示し、図７（ｂ）の縦軸は送液部１５の圧力の指示値を示し、図７（ｃ）の縦軸は試料の検出強度を示す。

図７（ａ），（ｂ）に示すように、Ｂ液の濃度を３０％から７０％に上昇させた場合でも、送液部１５の圧力が小刻みに変動することはなかった。これにより、Ａ液が高い濃度を有するＢ液に混合された場合でも、塩が析出することがなく、したがって、移動相を安定的に供給することが可能であることが確認された。また、図７（ｃ）に示すように、検出強度のベースラインに変動が発生しなかった。これにより、試料の検出およびグラジエント分析を安定的に行うことが可能であることが確認された。

１～３…配管，１０…移動相供給装置，１１，１２…貯留部，１３…混合部，１４…脱気装置，１５，１５ａ，１５ｂ…送液部，１６，１７…加熱部，２０…インジェクタ，３０…カラム恒温槽，３１…カラム，４０…検出器，１００…液体クロマトグラフ分析装置，Ａ～Ｃ…ポート

Claims

移動相を生成する移動相供給装置と、
前記移動相供給装置により生成された移動相および試料が供給されるインジェクタと、
前記インジェクタに供給された移動相および試料が導入されるカラムと、
前記カラムを通過した試料を検出する検出器とを備え、
前記移動相供給装置は、
塩を含む水溶液を貯留する第１の貯留部と、
有機溶媒を貯留する第２の貯留部と、
前記第１の貯留部に貯留された水溶液と前記第２の貯留部に貯留された有機溶媒とを混合することにより移動相を生成する混合部と、
前記混合部と前記第１の貯留部とを接続する第１の配管と、
前記混合部と前記第２の貯留部とを接続する第２の配管と、
前記混合部により生成される移動相の温度が水溶液に含まれる塩の溶解温度以上になるように、前記第１の配管の少なくとも一部および前記第２の配管の少なくとも一部を加熱する加熱部とを含む、液体クロマトグラフ分析装置。
前記カラムを収容し、前記カラムの温度を調整するカラム恒温槽をさらに備え、
前記カラム恒温槽は、前記加熱部を含み、前記第１の配管の少なくとも一部および前記第２の配管の少なくとも一部をさらに収容しつつ、前記第１の配管の少なくとも一部および前記第２の配管の少なくとも一部を加熱する、請求項１記載の液体クロマトグラフ分析装置。
試料の液体クロマトグラフ分析に用いる移動相を供給する移動相供給装置であって、
塩を含む水溶液を貯留する第１の貯留部と、
有機溶媒を貯留する第２の貯留部と、
前記第１の貯留部に貯留された水溶液と前記第２の貯留部に貯留された有機溶媒とを混合することにより移動相を生成する混合部と、
前記混合部と前記第１の貯留部とを接続する第１の配管と、
前記混合部と前記第２の貯留部とを接続する第２の配管と、
前記混合部により生成される移動相の温度が水溶液に含まれる塩の溶解温度以上になるように、前記第１の配管の少なくとも一部および前記第２の配管の少なくとも一部を加熱する加熱部とを備える、移動相供給装置。
移動相供給装置により移動相を生成するステップと、
前記移動相供給装置により生成された移動相および試料をインジェクタに供給するステップと、
前記インジェクタに供給された移動相および試料をカラムに導入するステップと、
前記カラムを通過した試料を検出器により検出するステップとを含み、
前記移動相供給装置により移動相を生成するステップは、
第１の貯留部に貯留された塩を含む水溶液を第１の配管を通して混合部に導くことと、
第２の貯留部に貯留された有機溶媒を第２の配管を通して前記混合部に導くことと、
前記混合部により水溶液と有機溶媒とを混合することにより移動相を生成することと、
前記混合部により生成される移動相の温度が水溶液に含まれる塩の溶解温度以上になるように、前記第１の配管の少なくとも一部および前記第２の配管の少なくとも一部を加熱部により加熱することとを含む、液体クロマトグラフ分析方法。
前記カラムを収容するカラム恒温槽により前記カラムの温度を調整するステップをさらに含み、
前記カラム恒温槽は、前記加熱部を含み、
前記第１の配管の少なくとも一部および前記第２の配管の少なくとも一部を加熱部により加熱することは、
前記第１の配管の少なくとも一部および前記第２の配管の少なくとも一部を前記カラム恒温槽に収容することと、
前記第１の配管の少なくとも一部および前記第２の配管の少なくとも一部を前記カラム恒温槽により加熱することとを含む、請求項４記載の液体クロマトグラフ分析方法。
試料の液体クロマトグラフ分析に用いる移動相を供給する移動相供給方法であって、
第１の貯留部に貯留された塩を含む水溶液を第１の配管を通して混合部に導くステップと、
第２の貯留部に貯留された有機溶媒を第２の配管を通して前記混合部に導くステップと、
前記混合部により水溶液と有機溶媒とを混合することにより移動相を生成するステップと、
前記混合部により生成される移動相の温度が水溶液に含まれる塩の溶解温度以上になるように、前記第１の配管の少なくとも一部および前記第２の配管の少なくとも一部を加熱部により加熱するステップとを含む、移動相供給方法。