CN116609443A - 氨基酸分析方法和液相色谱装置 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种氨基酸分析方法和液相色谱装置，在该氨基酸分析方法和液相色谱装置中实现苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸和丙氨酸的分离性能的提高。该氨基酸分析方法是使用具备阳离子交换柱的液相色谱装置对氨基酸进行分析的方法，其具备使含有作为氨基酸的苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸和丙氨酸的试样与洗脱液一起流通于阳离子交换柱以分离苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸和丙氨酸的工序，并使分离苏氨酸和丝氨酸时的柱温度高于分离甘氨酸和丙氨酸时的柱温度。
Description
技术领域
本公开涉及氨基酸分析方法和液相色谱装置。
背景技术
作为对试样中的试样成分进行分析的方法，已知有液相色谱法。在液相色谱法中，通常在利用分离柱的试样成分的分离工序中使分离柱的温度升温而实现分离性能的提高。
例如在专利文献1中公开了如下内容：使含有多种氨基酸的试样流通于在包含100℃以上的温度区域的温度梯度内加热的分离柱，以更短的时间对试样中的氨基酸进行高精度的分离和分析。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本特许第6595086号公报
发明内容
发明所要解决的课题
然而，在专利文献1那样的现有技术中，没有公开保留时间短、在分析的初期溶出的氨基酸成分(特别着眼于苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸和丙氨酸)的分离性能提高。
因此，本公开的课题在于，在氨基酸分析方法和液相色谱装置中，实现苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸和丙氨酸的分离性能的提高。
用于解决课题的手段
本公开的一个实施方式的氨基酸分析方法是使用具备阳离子交换柱的液相色谱装置对氨基酸进行分析的方法，其特征在于，具备使含有作为上述氨基酸的苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸和丙氨酸的试样与洗脱液一起流通于上述阳离子交换柱以分离上述苏氨酸、上述丝氨酸、上述甘氨酸和上述丙氨酸的工序，使分离上述苏氨酸和上述丝氨酸时的柱温度高于分离上述甘氨酸和上述丙氨酸时的柱温度。
另外，本公开的一个实施方式的液相色谱装置具备：将洗脱液输送至流路的送液部；设置于上述送液部的下游，向上述流路的洗脱液中注入含有苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸和丙氨酸的试样的试样注入部；设置于上述试样注入部的下游，分离上述试样中的试样成分的阳离子交换柱；调整上述阳离子交换柱的柱温度的温度调整单元；和控制上述温度调整单元的控制单元，其特征在于，上述控制单元控制上述温度调整单元，使得分离上述苏氨酸和上述丝氨酸时的上述柱温度高于分离上述甘氨酸和上述丙氨酸时的上述柱温度。
发明的效果
根据本公开，能够在氨基酸分析方法和液相色谱装置中实现苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸和丙氨酸的分离性能的提高。
附图说明
图1是实施例1的氨基酸分析计100的装置构成及流路的示意图。
图2是控制实施例1的氨基酸分析计100的动作的时间程序上的时间表的示意图。
图3是实施例1的色谱图。
图4是控制实施例2的氨基酸分析计100的动作的时间程序上的时间表的示意图。
图5是实施例2的色谱图。
图6是实施例3的色谱图。
图7是比较例1的色谱图。
图8是比较例2的色谱图。
具体实施方式
以下，基于附图详细说明本公开的实施方式。以下的优选实施方式的说明在本质上仅为例示，完全不意味着对本公开、其应用物或其用途进行限制。
＜液相色谱装置＞
液相色谱装置是一边输送移动相(洗脱液)一边用分离柱分离试样的目标成分，用分光光度计等检测器检测按照分离的顺序流动的成分，并分析试样的成分的装置。本公开的液相色谱装置例如可以举出高效液相色谱装置(HPLC)、超高效液相色谱装置(UHPLC)等，尽管不意味着限定，但优选为HPLC。
本公开的液相色谱装置的分离模式是分离试样中的离子性成分等的离子交换模式。需要说明的是，离子交换色谱法是如下方法：在由离子交换树脂等离子交换体构成的固定相和由缓冲液等构成的移动相这2个相中，利用与试样成分之间产生的相互作用，分离并分析不同性质的试样成分。通常，在离子交换体中，根据经化学修饰的离子交换基团的性质，存在磺酸、羧酸等阳离子交换体和季铵、叔铵等阴离子交换体。本公开的液相色谱装置的离子交换体是阳离子交换体，在本说明书中，将填充有作为固定相的阳离子交换体的柱称为阳离子交换柱或简称为分离柱。
本公开的液相色谱装置是用于对含有氨基酸的试样、特别是作为分离对象成分至少含有苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸和丙氨酸的试样进行分析的装置。具体而言，本公开的液相色谱装置例如为蛋白质/肽的氨基酸组成分析、医药品/生物体液等的氨基酸及其类似物等的分析中使用的氨基酸分析计、蛋白质、胺类、有机酸等的分析中使用的HPLC***等，优选为氨基酸分析计。
由本公开的液相色谱装置分析的试样只要至少含有苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸和丙氨酸即可，也可以含有其他氨基酸等。例如，在同时分析多种氨基酸的氨基酸同时分析中，作为分析对象的氨基酸和氨基酸类似物可大致分类为约20种蛋白质水解物氨基酸和40种以上的生物体液氨基酸及氨基酸类似物。将多个缓冲液混合，在混合后的缓冲液中添加试样，并使其通过分离柱进行检测，由此能够同时分析这些多种氨基酸。
本公开的液相色谱装置也可以是利用梯度洗脱法对试样成分进行分析的装置。在该情况下，作为用于分离的移动相，使用多种洗脱液。需要说明的是，在本说明书中，“梯度”的用语是作为包括阶梯梯度、曲线梯度和线性梯度的用语使用的。
本公开的液相色谱装置例如从流路的上游侧起依次具备送液部、试样注入部、分离部和检测器，并且具备与各部连接并控制它们的动作的控制装置。液相色谱装置除了这些构成以外，还可以具备其他任意的构成。具体而言，例如，从容易进行试样成分的检测的观点出发，也可以具备柱前衍生化或柱后衍生化用的试剂、泵、混合器、盒式的反应器等装置。
[送液部]
送液部将流动相输送至流路。详细而言，送液部至少输送单一的洗脱液作为用于分离的移动相。特别是在使用梯度洗脱法的情况下，送液部将2种以上的洗脱液输送至流路。另外，作为移动相，送液部也可以输送用于清洗分离柱的柱清洗液、用于调整分离柱的状态的调整液等不用于分离试样的移动相。需要说明的是，有时将柱清洗表述为柱再生，在本说明书中，将柱清洗液也称为柱再生液。
具体而言，送液部例如由贮存洗脱液、柱清洗液、调整液等各移动相的容器、开始/结束向流路输送各容器内的移动相或调整各液体的流量的电磁阀、将各容器中的移动相输送至流路并且调整各移动相的流速的泵等构成。电磁阀能够在与各容器对应地设置的流路上与各容器对应地设置。泵可以设置在流路上的上述电磁阀的下游。具体而言，例如，与各容器对应的流路在电磁阀的下游合流而成为1个流路，也可以在该流路上设置1个泵(低压梯度洗脱)。另外，也可以在与各容器对应的流路上与各容器对应地设置多个泵(高压梯度洗脱)。
作为洗脱液，没有限定，可以使用在基于液相色谱法的氨基酸的分析中通常使用的各液体。
具体而言，例如，作为洗脱液，可以采用含有多元酸的碱金属盐的水溶液和/或缓冲液等。作为多元酸，具体而言，例如可以举出硫酸、硒酸、磷酸和二磷酸等无机多元酸，柠檬酸、磺基水杨酸和氟邻苯二甲酸等有机多元酸。作为碱金属，具体而言，例如可以举出锂、钠、钾等。需要说明的是，从提高氨基酸的分离性能的观点出发，洗脱液优选包含选自柠檬酸钠缓冲液、柠檬酸锂缓冲液和硫酸钠水溶液的组中的至少1种。
需要说明的是，关于洗脱液的pH，虽然不意味着限定，但例如可以设为2以上且5以下，优选设为2.5以上且5以下。在使用梯度洗脱法的情况下，优选逐渐提高2种以上的洗脱液的pH。需要说明的是，先输送的洗脱液的pH与其下一次输送的洗脱液的pH之差优选为0.5以内，更优选为0.3以内。
另外，洗脱液中所含的阳离子浓度即盐浓度没有限定，例如可以设为0.05N以上且小于0.2N，优选为0.12N以上且0.19N以下。在使用梯度洗脱法的情况下，优选逐渐提高洗脱液的盐浓度。
另外，从提高氨基酸的分离性能的观点出发，洗脱液也可以含有上述的水溶液和/或缓冲液等作为主要成分，并含有有机溶剂。具体而言，有机溶剂例如可以举出乙醇和苯甲醇等醇、乙腈等。
洗脱液的流速没有限定，可以设为在液相色谱装置中通常使用的流速。需要说明的是，从实现分析的高速化的观点出发，洗脱液的流速例如可以设为超过0.40mL/min、优选设为0.50mL/min以上且2.0mL/min以下。
作为柱清洗液，没有限定，可以使用在基于液相色谱法的氨基酸的分析中通常使用的液体。
作为调整液，没有限定，可以使用在液相色谱法中通常使用的各液体。作为调整液，具体而言，例如可以利用低盐浓度水溶液、低pH水溶液、蒸馏水等纯水等。调整液的盐浓度优选低于洗脱液的盐浓度。另外，从使分离柱的盐浓度迅速地转变为初始状态的观点出发，作为调整液，更优选使用纯水。另外，在使用上述低pH水溶液作为调整液的情况下，优选该低pH水溶液的pH低于洗脱液的pH。
[试样注入部]
试样注入部是设置于流路中的送液部的下游，用于向在流路中流动的移动相中注入含有上述4种成分的试样的单元。试样注入部可以是手动式的手动喷射器，也可以是自动式的自动取样器，但从高精度地控制试样的注入时机以及注入量的观点出发，优选为自动取样器。
[分离部]
分离部具备：分离柱，其设置于流路中的试样注入部的下游，分离试样中的试样成分；和温度调整装置(温度调整单元)，其设置于分离柱，在利用分离柱进行试样成分的分离中调整分离柱的温度(柱温度)。
作为分离柱，只要是如上述那样填充有作为固定相的阳离子交换体的柱即可，没有特别限定，可以使用液相色谱法中通常使用的柱。
温度调整装置只要是能够调整分离柱的温度的装置就没有特别限定，例如是加热器、珀尔帖元件、热泵等公知的装置。
关于分离柱的温度，不意味着限定，但具体而言，例如可以调整为20℃以上且150℃以下。另外，关于作为分离苏氨酸和丝氨酸时的柱温度的第一温度与作为分离甘氨酸和丙氨酸时的柱温度的第二温度之差，不意味着限定，但例如可以设为10℃以上。
[检测器]
检测器设置在流路中的分离柱的下游，是用于检测由分离柱分离的试样成分的装置。作为检测器，没有特别限定，可以使用在液相色谱法中通常使用的例如电导率检测器、紫外/可见光吸光光度检测器、荧光光度检测器、电化学检测器等检测器。
[控制装置]
控制装置是至少控制温度调整装置的装置。控制装置可以是除了温度调整装置以外还控制送液部、试样注入部等各部的装置。
具体而言，控制装置例如与送液部的电磁阀和泵、在自动取样器的情况下的试样注入部、温度调整装置等电无线连接或电有线连接，向它们发送控制信号来控制它们的动作。另外，控制装置例如也与检测器等电无线连接或电有线连接，取得检测器的检测结果并作为色谱图和数据而输出。控制装置例如是以公知的微型计算机为基础的装置，具备输入来自外部的信息的输入部、存储信息的存储部、基于各种信息进行各种运算的运算部、以及输出信息的显示部等输出部等。
在控制装置的存储部中存储有用于执行后述的分析工序的时间程序。时间程序具备与后述的分析工序所包含的各工序对应的时间表。需要说明的是，在使用梯度洗脱法的情况下，时间程序包含用于使洗脱液的混合比率变化并将该洗脱液输送至送液部的梯度洗脱时间程序。即，在使用梯度洗脱法进行分析的液相色谱装置中，控制装置基于该梯度洗脱时间程序使2种以上的洗脱液的混合比率变化，并输送至送液部。
＜液相色谱装置的分析工序＞
液相色谱装置的分析工序例如具备试样注入工序、分离工序和注入前送液工序，将这些工序作为1种方式，按用户设定的次数进行重复。另外，分析工序也可以在分离工序后且注入前送液工序前具备输送柱清洗液来清洗分离柱的清洗工序、输送调整液而调整分离柱的状态的调整工序等。
试样注入工序是通过试样注入部向流路中的洗脱液注入含有上述4种成分的试样的工序。关于时间程序，不意味着限定，但可以将该试样注入工序作为时刻零而制成。
分离工序是在试样注入工序后，将在分离柱中与洗脱液一起流通的试样的试样成分、特别是上述4种成分分离的工序。在使用梯度洗脱法的情况下，至少在分离工序中，基于上述的梯度洗脱时间程序输送洗脱液。
需要说明的是，在分离工序中，如后所述，从提高分离柱的分离性能的观点出发，通过温度调整装置调整分离柱的温度。
分离工序结束时，为了下一个方式，需要使分离柱的温度、盐浓度、pH等状态转变至试样注入前的状态即初始状态而使其稳定化。分离工序后的注入前送液工序是为此而设置的。在注入前送液工序中，在下一个方式的试样注入工序前输送例如第一洗脱液，以使分离柱稳定化。
＜氨基酸分析方法＞
本公开的氨基酸分析方法的特征在于，将分离苏氨酸和丝氨酸(也称为“第一组”)时的柱温度(也称为“第一温度”)设为高于将甘氨酸和丙氨酸(也称为“第二组”)分离时的柱温度(也称为“第二温度”)。
即，控制单元执行以第一温度高于第二温度的方式构成的时间程序，对温度调整单元进行控制。
在使用阳离子交换柱分离苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸和丙氨酸的情况下，第一组的保留时间比第二组的保留时间短，第一组比第二组先溶出。因此，例如，控制单元只要执行如下构成的时间程序即可：在第一组溶出之后，降低柱温度而使第二组溶出。
在利用阳离子交换柱分离上述4种成分的情况下，如上所述，该4种成分的保留时间短，在分析的初期溶出。因此，在使柱温度恒定或逐渐升温的情况下，难以明确地分离这4种成分。详细而言，即使想要在保持能够分离第一组的温度的状态下分离第二组，甘氨酸和丙氨酸的峰也会重叠，难以明确地将它们分离。
在此，本申请发明人进行了深入研究，结果发现，在利用阳离子交换柱分离上述4种成分的情况下，第一组先于第二组溶出，另一方面，适合于第一组的分离的柱温度比适于第二组的分离的柱温度高。认为该现象的原因在于，各成分的保留时间对柱温度变化的响应性能不同。即，认为苏氨酸和丝氨酸的保留时间的差异因柱温度高而变大，另一方面，甘氨酸和丙氨酸的保留时间的差异因柱温度低而变大。因此，通过将第一温度和第二温度分别设定为能够将第一组和第二组分离的柱温度，在第一温度下将第一组分离后，使柱温度降低至第二温度而将第二组分离，由此能够提高4种成分的分离性能。
需要说明的是，在洗脱液中含有有机溶剂的情况下，优选例如通过梯度洗脱分离第一组时的洗脱液中的有机溶剂的浓度高于分离第二组时的洗脱液中的有机溶剂的浓度。换言之，优选在分离第一组之后，降低洗脱液中的有机溶剂的浓度，分离第二组。在该情况下，控制单元执行像那样构成的时间程序，进而控制送液部即可。由此，氨基酸、特别是第二组的分离性能进一步提高。
需要说明的是，关于分离第一组时的洗脱液中的有机溶剂的浓度，不意味着限定，但例如可以设为5％以上且20％以下，优选设为10％以上且15％以下。
另外，分离第二组时的洗脱液中的有机溶剂的浓度只要比分离第一组时的洗脱液中的有机溶剂的浓度低，就没有限定，具体而言，例如可以设为小于10％，优选设为小于5％。
[实施例]
以下，使用附图对本公开的实施例的氨基酸分析计100(液相色谱装置)和氨基酸分析方法进行说明。
[实施例1]
图1是本公开的实施例1的氨基酸分析计100的装置构成及流路的示意图。氨基酸分析计100是利用基于茚三酮的柱后衍生化法的离子交换色谱***。
在氨基酸分析计100中，作为流动相，可以设置第一洗脱液1～第四洗脱液4、作为调整液的蒸馏水5、柱再生液6(也分别称为“B1液”～“B6液”)。通过电磁阀7A～7F从其中选择任一种液体，并通过移动相泵9进行输送。洗脱液经过氨过滤柱11后，被导入分离柱13。在氨过滤柱11的下游且分离柱13的上游设置有自动取样器12(试样注入部)，氨基酸试样通过自动取样器12注入流路的洗脱液中。注入的氨基酸试样与洗脱液一起到达分离柱13，由分离柱13分离。
氨基酸分析计100还具备茚三酮试剂8和用于输送茚三酮试剂8的茚三酮泵10。在分离柱13中被分离的各氨基酸成分与由茚三酮泵10送来的茚三酮试剂8通过混合器14混合，在加热后的反应器15中反应。
通过检测器16连续地检测因反应而显色的氨基酸(鲁赫曼紫)，并通过数据处理装置17(控制装置)作为色谱图和数据输出，并进行记录、保存。
分离柱13为磺酸系的强阳离子交换柱(填充剂的基材：聚苯乙烯系树脂，粒径：3μm)。
在分离柱13设置有调整分离柱13的温度的温度调整装置13A，能够使柱温度自由地加热上升或冷却下降。也可以在各移动相的容器和反应器15等中设置调整它们的温度的温度调整装置(未图示)。
检测器16是主波长570nm的可见光吸光光度检测器，也能够检测以脯氨酸等为对象的440nm。
数据处理装置17控制储存B1液～B6液的各流动相的各容器的电磁阀7A～7F、移动相泵9、茚三酮泵10、自动取样器12、温度调整装置13A、在设置了的情况下的调节各流动相的容器及反应器15等的温度的温度调整装置(未图示)等。该控制主要通过存储在数据处理装置17的存储部(未图示)中的时间程序来执行。
在实施例1中，作为氨基酸试样，使用使苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸和丙氨酸的4种成分溶解于水中而成的试样。需要说明的是，在以下的说明中，作为分析对象的氨基酸的名称及简称依据表1的表述。
[表1]
| 简称 | 氨基酸名称 |
| Thr | 苏氨酸 |
| Ser | 丝氨酸 |
| Gly | 甘氨酸 |
| Ala | 丙氨酸 |
另外，作为洗脱液，使用单一的第一洗脱液1。将第一洗脱液1和柱再生液6的组成示于表2。需要说明的是，在表2中，将盐浓度表示为Na浓度。
[表2]
移动相组成
如表2所示，第一洗脱液1是含有13体积％的作为有机溶剂的乙醇的柠檬酸钠缓冲液。
氨基酸分析计100的详细构成和测定条件如表3所示。
[表3]
测定方法
图2是氨基酸分析计100的时间程序上的时间表的一例。如图2所示，在试样注入工序中，当通过自动取样器12向流路注入试样时，分离工序开始。在分离工序中，将第一洗脱液(B1液)向分离柱13输送。这样，进行试样成分的分离。若分析对象的试样成分全部溶出，分离工序结束，则开始清洗工序，输送柱再生液6(B6液)，进行分离柱13的清洗。当清洗工序结束时，开始注入前送液工序。注入前送液工序是在试样注入工序之前向分离柱13输送例如B1液的工序。由此，能够在试样注入前使分离柱13稳定化。
在实施例1中，在分离工序中，从分离工序的开始起，将柱温度设定为第一温度的60℃。接着，确认苏氨酸和丝氨酸的溶出后，使柱温度降低至第二温度的40℃。
图3表示实施例1的色谱图的一例。如图3所示，可知通过在第一组的分离时使柱温度为第一温度、在第二组的分离时使柱温度降低至第二温度，第一组和第二组均能够得到良好的分离性能。
[实施例2]
除了以下的构成以外，以与实施例1同样的步骤和条件进行分析。
如图4所示，在实施例2的分离工序中，基于梯度洗脱时间程序，使第一洗脱液1(B1液)和第二洗脱液2(B2液)的混合比率变化，并能够向分离柱13输送。
需要说明的是，作为第一洗脱液1，使用将表2的“柠檬酸钠”变更为“柠檬酸锂”的柠檬酸锂缓冲液。作为第二洗脱液2，使用将第一洗脱液1的乙醇的浓度设为0体积％的缓冲液。
在实施例2中，在分离工序中，在实施例1的柱温度控制的基础上，从分离工序的开始起，输送第一洗脱液1，使洗脱液中的乙醇的浓度为13体积％。接着，确认苏氨酸和丝氨酸的溶出后，代替第一洗脱液1而输送第二洗脱液2，使洗脱液中的乙醇的浓度为0体积％。
图5表示实施例2的色谱图的一例。如图5所示，可知在柱温度控制的基础上，通过在第二组的分离时使洗脱液中的乙醇的浓度降低来进一步提高4种成分、特别是第二组的分离性能。
[实施例3]
除了以下的构成以外，以与实施例2同样的步骤和条件进行分析。
将第一温度设定为比60℃高的温度(约80℃)，将第二温度设定为比40℃高的温度(约60℃)。另外，使洗脱液的流量从0.40mL/min上升约10％而设为0.44mL/min。
在实施例3中，与实施例1、2相比，使柱温度整体上升。由此，洗脱液的粘度降低，抑制了压力的上升，因此能够使流量上升。
图6表示实施例3的色谱图的一例。比较图5和图6可知，在维持4种成分的分离性能的状态下，缩短了4种成分的保留时间。即，可知通过使柱温度整体上升并且使流量上升，能够在维持第一组和第二组的良好的分离性能的同时缩短4种成分的保留时间，能够实现兼顾分析的高分离化和高速化。
[比较例1]
除了使柱温度恒定为40℃以外，以与实施例1同样的步骤和条件进行分析。
图7表示比较例1的色谱图的一例。如图7所示，可知在柱温度恒定为40℃的情况下，特别是第一组的苏氨酸和丝氨酸的峰重叠，得不到充分的分离性能。
[比较例2]
除了使柱温度恒定为60℃以外，以与实施例1同样的步骤和条件进行分析。
图8表示比较例2的色谱图的一例。如图8所示，可知在柱温度恒定为60℃的情况下，特别是第二组的甘氨酸和丙氨酸的峰重叠，得不到充分的分离性能。
[总结]
由图3、图7和图8的比较可知，第一组比第二组先溶出，另一方面，适于第一组的分离的柱温度比适于第二组的分离的柱温度高。认为这是由于苏氨酸和丝氨酸的保留时间的差异因柱温度高而变大，另一方面，甘氨酸和丙氨酸的保留时间的差异因柱温度低而变大。如图3所示，通过在第一组的分离时使柱温度为第一温度、在第二组的分离时使柱温度降低至第二温度，即使在使用单一的洗脱液的情况下，4种成分的分离性能也提高。
另外，如图5所示，与第一组的分离时相比，在第二组的分离时使洗脱液中的有机溶剂的浓度降低，对分离性能的提高也是有效的。
需要说明的是，在实施例1、2中，由于在第一组的分离后、第二组的分离时一度使柱温度降低，因此认为第二组的分离所需的分析时间延长。关于这一点，如图6所示，在实施例3中，通过使柱温度整体上升，能够使洗脱液的流量上升，因此即使第二组的分离需要些许时间，也能够实现分析的高分离化，并且整体上实现分析的高速化。
本公开并不限定于上述的实施例，而是包括各种变形例。例如，上述的实施例是为了容易理解地说明本公开而详细地进行了说明的例子，并不一定限定于具备所说明的全部构成。另外，能够将某实施例的构成的一部分置换为其他实施例的构成，另外，也能够在某实施例的构成中添加其他实施例的构成。另外，对于各实施例的构成的一部分，能够进行其他构成的追加、删除、置换。
符号说明
1，B1 第一洗脱液
2，B2 第二洗脱液
3 第三洗脱液
4 第四洗脱液
5 蒸馏水(调整液)
6，B6 柱再生液(柱清洗液)
7A，7B，7C，7D，7E，7F 电磁阀(送液部)
8 茚三酮试剂
9 移动相泵(送液部)
10 茚三酮泵
11 氨过滤柱
12 自动取样器(试样注入部)
13 分离柱
14 混合器
15 反应器
16 检测器
17 数据处理装置(控制装置)
Claims (8)
1.一种氨基酸分析方法，其是使用具备阳离子交换柱的液相色谱装置对氨基酸进行分析的方法，其特征在于，
具备使含有作为所述氨基酸的苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸和丙氨酸的试样与洗脱液一起流通于所述阳离子交换柱以分离所述苏氨酸、所述丝氨酸、所述甘氨酸和所述丙氨酸的工序，
使分离所述苏氨酸和所述丝氨酸时的柱温度高于分离所述甘氨酸和所述丙氨酸时的柱温度。
2.根据权利要求1所述的氨基酸分析方法，其特征在于，
所述苏氨酸和所述丝氨酸的保留时间比所述甘氨酸和所述丙氨酸的保留时间短，
在所述苏氨酸和所述丝氨酸溶出后，降低所述柱温度，使所述甘氨酸和所述丙氨酸溶出。
3.根据权利要求1所述的氨基酸分析方法，其特征在于，
所述洗脱液含有选自柠檬酸钠缓冲液、柠檬酸锂缓冲液和硫酸钠水溶液的组中的至少1种。
4.根据权利要求2所述的氨基酸分析方法，其特征在于，
所述洗脱液含有选自柠檬酸钠缓冲液、柠檬酸锂缓冲液和硫酸钠水溶液的组中的至少1种。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的氨基酸分析方法，其特征在于，
所述洗脱液含有有机溶剂，
使分离所述苏氨酸和所述丝氨酸时的所述洗脱液中的所述有机溶剂的浓度高于分离所述甘氨酸和所述丙氨酸时的所述洗脱液中的所述有机溶剂的浓度。
6.一种液相色谱装置，具备：
将洗脱液输送至流路的送液部；
设置在所述送液部的下游，向所述流路的洗脱液中注入含有苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸和丙氨酸的试样的试样注入部；
设置在所述试样注入部的下游，分离所述试样中的试样成分的阳离子交换柱；
调整所述阳离子交换柱的柱温度的温度调整单元；和
控制所述温度调整单元的控制单元；
其特征在于，所述控制单元控制所述温度调整单元，使得分离所述苏氨酸和所述丝氨酸时的所述柱温度高于分离所述甘氨酸和所述丙氨酸时的所述柱温度。
7.根据权利要求6所述的液相色谱装置，其特征在于，
所述苏氨酸和所述丝氨酸的保留时间比所述甘氨酸和所述丙氨酸的保留时间短，
所述控制单元控制所述温度调整单元，使得在所述苏氨酸和所述丝氨酸溶出后，降低所述柱温度，使所述甘氨酸和所述丙氨酸溶出。
8.根据权利要求6或7所述的液相色谱装置，其特征在于，
所述洗脱液含有有机溶剂，
所述控制单元还控制所述送液部，使得分离所述苏氨酸和所述丝氨酸时的所述洗脱液中的所述有机溶剂的浓度高于分离所述甘氨酸和所述丙氨酸时的所述洗脱液中的所述有机溶剂的浓度。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication |