JP7029415B2 - 過リン酸化タウに特異的な抗体およびその使用方法 - Google Patents
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Description
本出願は、米国特許法施行規則(37 C.F.R.)第1.821条に従う1つまたは複数の配列表(以下参照)を含み、これは、コンピュータ可読媒体(ファイル名:1049-WO-PCT FINAL ST25 1.txt、2017年6月13日に作成され、65kBのサイズを有する)で開示され、このファイルは、全体が参照により本明細書に援用される。
Clavagueraおよび同僚は、タウ自体が内因性病原体(endo-pathogen)として働き得ることを実証した(Clavaguera,F.et al.(2009)Nat.Cell Biol.11,909-913)。低スピン(low spin)脳抽出物を、P301Sタウトランスジェニックマウスから単離し(Allen,B.et al.(2002)J.Neurosci.22,9340-9351)、希釈し、幼若ALZ17マウスの海馬および皮質領域に注入した。ALZ17マウスは、遅い病変(late pathology)のみを発現するタウトランスジェニックマウス株である(Probst,A.et al.(2000)Acta Neuropathol.99,469-481)。注入されたALZ17マウスは、固体線維状病変を直ぐに発現し、P301Sマウスに由来するタウ免疫枯渇された脳抽出物または野生型マウスに由来する抽出物の投与は、タウ病変を誘発しなかった。可溶性(S1)およびサルコシル不溶性タウ(P3)中の脳抽出物の分別(Sahara,N.et al.(2013)J.Alzheimer’s.Dis.33,249-263)およびALZ17マウスへのこれらの注入は、P3画分が、病変の誘発に最も有効であることを実証した。それは、細胞内の過リン酸化線維状タウの大部分を含有する。病変の大部分は、P301S抽出物を野生型マウスの脳内に注入した場合にも誘発され得るが、NFTは形成されなかった。その後の研究において、Clavagueraらは、他のタウオパチー(嗜銀顆粒病(AGD)、進行性核上性まひ(PSP)、および大脳皮質基底核変性症(CBD))の死後脳組織から抽出されたヒトタウも、ALZ17モデルにおいてタウ病変を誘発し得ることを示した(Clavaguera,F.et al.(2013)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.110,9535-9540)。これらのデータの提示以来、いくつかの他のタウシーディングおよび拡散モデルが報告されている(Ahmed,Z.et al.(2014)Acta Neuropathol.127,667-683;Walker,L.C.et al.(2013)JAMA Neurol.70,304-310)。これらの研究からの主な結論は、細胞内封入体中の病原性タウが細胞から細胞周辺腔中へと分泌される機構を示す。次に、病理学的タウ材料は、順行および逆行方向の両方で、小胞の鞘に沿って輸送され、その後、バルクエンドサイトーシスによって、隣接する細胞によって取り込まれる。この機構は、ヒトの疾患において観察される病変の拡散が、明確な解剖学的パターンにしたがう理由を説明する。興味深いことに、病理学的タウの末梢投与は、ALZ17マウスにおけるタウ病変の形成を加速させ得る(Clavaguera,F.et al.(2014)Acta Neuropathol.127,299-301)。この拡散機構は、他のタンパク質症における疾患伝播を説明し得る(Goedert,M.et al.(2010)Trends
Neurosci.33,317-325;Sigurdsson,E.M.et al.(2002)Trends Mol.Med.8,411-413)。
タウタンパク質が、内因性病原体として働き得るという発見は、潜在的な介入治療において標的にされ得る「病原性種」への探求を引き起こした。
免疫療法は、従来、受動および能動ワクチン手法に分けられる。能動ワクチン手法では、病原因子または不活性化した病原因子が患者に注入され、免疫系が免疫応答を引き起こす。これは、投与された抗原に対する高親和性抗体または細胞応答を生成するB細胞の成熟を誘発する。受動ワクチン手法では、免疫系の誘発は、抗原に対して特異的な抗体を注入することによって回避される。次に、固有のクリアランス系が、抗体結合リガンドを除去する。
(a)配列番号3、配列番号31;配列番号32;配列番号33;配列番号34;配列番号35;配列番号36;配列番号37;配列番号38;配列番号40;および配列番号46からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1;
(b)配列番号4;配列番号41;および配列番号47のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2;
(c)配列番号5;配列番号42;および配列番号48のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3;
(d)配列番号6;配列番号43;配列番号49;配列番号52;および配列番号55のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1;
(e)配列番号7;配列番号28;配列番号29;配列番号30;配列番号44;配列番号50;配列番号53;および配列番号56からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖CDR2;および
(f)配列番号8、配列番号39;配列番号45;配列番号51;配列番号54;および配列番号57からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖CDR3
を含む、過リン酸化ヒトタウに対するモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号12;配列番号16;配列番号17;配列番号18;配列番号19;配列番号20;配列番号21;配列番号22および配列番号23からなる群から選択される軽鎖;および
(b)配列番号11;配列番号13;配列番号14;配列番号15;配列番号24;配列番号25;配列番号26;および配列番号27からなる群から選択される重鎖
を含む、過リン酸化ヒトタウに対するモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、過リン酸化ヒトタウに対するモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号31のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
を含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含む、過リン酸化ヒトタウに対するモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号31のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含み;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;および
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2
のうちの少なくとも1つをさらに含む、過リン酸化ヒトタウに対するモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
配列番号1:ヒトタウ(2N4R)
配列番号2:タウ残基386~408(pS396、pS404)
配列番号3:C10-2軽鎖CDR1
配列番号4:C10-2軽鎖CDR2
配列番号5:C10-2軽鎖CDR3
配列番号6:C10-2重鎖CDR1
配列番号7:C10-2重鎖CDR2
配列番号8:C10-2重鎖CDR3
配列番号9:マウスC10-2軽鎖
配列番号10:マウスC10-2重鎖
配列番号11:ヒト化C10-2重鎖
配列番号12:ヒト化C10-2軽鎖
配列番号13:ヒト化C10-2重鎖変異体D55E
配列番号14:ヒト化C10-2重鎖変異体D55Q
配列番号15:ヒト化C10-2重鎖変異体D55S
配列番号16:ヒト化C10-2軽鎖変異体N32S
配列番号17:ヒト化C10-2軽鎖変異体N32Q
配列番号18:ヒト化C10-2軽鎖変異体N34S
配列番号19:ヒト化C10-2軽鎖変異体N34Q
配列番号20:ヒト化C10-2軽鎖変異体N32S、N34S
配列番号21:ヒト化C10-2軽鎖変異体N32Q、N34S
配列番号22:ヒト化C10-2軽鎖変異体N32Q、N34Q
配列番号23:ヒト化C10-2軽鎖変異体N32S、N34Q
配列番号24:ヒト化C10-2重鎖変異体A101T
配列番号25:ヒト化C10-2重鎖変異体D55E、A101T
配列番号26:ヒト化C10-2重鎖変異体D55Q、A101T
配列番号27:ヒト化C10-2重鎖変異体D55S、A101T
配列番号28:ヒト化C10-2重鎖CDR2変異体D55E
配列番号29:ヒト化C10-2重鎖CDR2変異体D55Q
配列番号30:ヒト化C10-2重鎖CDR2変異体D55S
配列番号31:ヒト化C10-2軽鎖CDR1変異体N32S
配列番号32:ヒト化C10-2軽鎖CDR1変異体N32Q
配列番号33:ヒト化C10-2軽鎖CDR1変異体N34S
配列番号34:ヒト化C10-2軽鎖CDR1変異体N34Q
配列番号35:ヒト化C10-2軽鎖CDR1変異体N32S、N34S
配列番号36:ヒト化C10-2軽鎖CDR1変異体N32Q、N34S
配列番号37:ヒト化C10-2軽鎖CDR1変異体N32Q、N34Q
配列番号38:ヒト化C10-2軽鎖CDR1変異体N32S、N34Q
配列番号39:ヒト化C10-2重鎖CDR3変異体A101T
配列番号40:IMGT番号付けヒト化C10-2軽鎖CDR1
配列番号41:IMGT番号付けヒト化C10-2軽鎖CDR2
配列番号42:IMGT番号付けヒト化C10-2軽鎖CDR3
配列番号43:IMGT番号付けヒト化C10-2重鎖CDR1
配列番号44:IMGT番号付けヒト化C10-2重鎖CDR2
配列番号45:IMGT番号付けヒト化C10-2重鎖CDR3
配列番号46:IMGT番号付けヒト化C10-2軽鎖CDR1変異体N32S
配列番号47:IMGT番号付けヒト化C10-2軽鎖CDR2変異体N32S
配列番号48:IMGT番号付けヒト化C10-2軽鎖CDR3変異体N32S
配列番号49:IMGT番号付けヒト化C10-2重鎖CDR1変異体A101T
配列番号50:IMGT番号付けヒト化C10-2重鎖CDR2変異体A101T
配列番号51:IMGT番号付けヒト化C10-2重鎖CDR3変異体A101T
配列番号52:Chotia番号付けヒト化C10-2重鎖CDR1
配列番号53:Chotia番号付けヒト化C10-2重鎖CDR2
配列番号54:Chotia番号付けヒト化C10-2重鎖CDR3
配列番号55:Chotia番号付けヒト化C10-2重鎖CDR1変異体A101T
配列番号56:Chotia番号付けヒト化C10-2重鎖CDR2変異体A101T
配列番号57:Chotia番号付けヒト化C10-2重鎖CDR3変異体A101T
本明細書において使用される際、「タウ」という用語は、「タウタンパク質」と同義であり、タウタンパク質アイソフォーム(例えば、P10636、1-9としてUniProtにおいて同定される)のいずれかを指す。本明細書において使用されるタウのアミノ酸の番号付けは、以下に示されるようにアイソフォーム2(配列番号1)に対して示され、メチオニン(M)は、アミノ酸残基1である:
(a)配列番号1のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(b)配列番号2のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR4;および
(c)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR5
を有する抗体軽鎖可変領域;
ならびに
(d)配列番号4のアミノ酸配列を有する重鎖CDR6;
(e)配列番号5のアミノ酸配列を有する重鎖CDR7;および
(f)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR8
を有する抗体軽鎖可変ドメインを含むかまたはそれからなる抗体またはそのエピトープ結合フラグメントを示すことが意図される。
(i)非リン酸化タウに結合することが実質的にできないこと;
(ii)S404においてリン酸化され、S396においてリン酸化されないタウに結合することが実質的にできないこと;
(iii)S396においてリン酸化されるタウに結合する能力;
(iv)S396およびS404の両方においてリン酸化されるタウに結合する能力;
(v)それがリン酸化404残基(pS404)に結合することが実質的にできないように、リン酸化タウ残基S396およびS404を選択的に区別する能力;
(vi)ヒトアルツハイマー病の脳に由来する過リン酸化タウに結合する能力;
(vii)病理学的および非病理学的ヒトタウタンパク質を区別する能力;および/または
(viii)本明細書に記載されるように、トランスジェニックマウスに由来する免疫枯渇されたrTg4510抽出物とともに使用されるとき、過リン酸化タウ64kDaおよび70kDaバンドを少なくとも90%だけ特異的に減少させる一方、55kDaタウバンドを10%超減少させない能力;または本明細書に記載されるように、ヒトAD死後脳に由来する抽出物とともに使用されるとき、S396リン酸化過リン酸化タウバンドを少なくとも90%だけ特異的に減少させる一方、非過リン酸化タウバンドを10%超減少させない能力
の1つまたは複数を示す抗タウ抗体またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(A)免疫原を哺乳動物に注入して、それによって、前記哺乳動物を免疫する工程と;
(B)前記哺乳動物の前記免疫化を2回以上繰り返す工程と;
(C)他のタンパク質に結合する能力が実質的に低いが所望の高特異性、高親和性抗体の存在について、前記繰り返し免疫された哺乳動物に由来する血清試料をスクリーニングする工程と;
(D)前記高特異性、高親和性抗体を回収する工程と
を含む方法に関する。
(A)2N4Rタウの残基386~410をカバーするTDHGAEIVYK{p}SPVVSGDT{p}SPRHL(配列番号2)を含む、18~40、例えば18~30、例えば20~30連続アミノ酸残基を含む二リン酸化ペプチドを含む免疫原を哺乳動物に注入して、それによって、前記哺乳動物を免疫する工程と;
(B)前記哺乳動物の前記免疫化を2回以上繰り返す工程と;
(C)残基リン酸化S396を含む病原性過リン酸化タウに結合することが可能であるが、非病原性タウに結合する能力が実質的に低い高特異性、高親和性抗体の存在について、前記繰り返し免疫された哺乳動物に由来する血清試料をスクリーニングする工程と;
(D)前記高特異性、高親和性抗体を回収する工程と
によって、高特異性、高親和性抗体を生成するための上述される方法の適合によって生成され得る。
本発明の一態様は、
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号12のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号40のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号41のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号42のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号43のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号44のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号45のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号52のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号53のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号54のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
本発明の一態様は、抗体C10-2の変異体抗体、抗体D55Eに関する。本発明のこの態様は、
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号28のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3。
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号12のアミノ酸配列を含む軽鎖:
(b)配列番号13のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
のうちの少なくとも1つを含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号28のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
をさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
本発明の別の態様は、抗体C10-2の変異体抗体、抗体D55Qに関する。本発明のこの態様は、
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号29のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号12のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号14のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
のうちの少なくとも1つを含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号29のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
をさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
本発明の別の態様は、抗体C10-2の変異体抗体、抗体D55Sに関する。本発明のこの態様は、
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号30のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号12のアミノ酸配列を含む軽鎖および
(b)配列番号15のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
のうちの少なくとも1つを含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号30のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
をさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
本発明の別の態様は、抗体C10-2の変異体抗体、抗体N32Sに関する。本発明のこの態様は、
(a)配列番号31のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号16のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号31のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
を含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号46のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号47のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号48のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号43のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号44のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号45のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントである。
(a)配列番号31のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号52のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号53のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号54のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントである。
本発明の別の態様は、抗体C10-2の変異体抗体、抗体N32Qに関する。本発明のこの態様は、
(a)配列番号32のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号17のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号32のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
を含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
本発明の別の態様は、抗体C10-2の変異体抗体、抗体N34Sに関する。本発明のこの態様は、
(a)配列番号33のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号18のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号33のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
を含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
本発明の別の態様は、抗体C10-2の変異体抗体、抗体N34Qに関する。本発明のこの態様は、
(a)配列番号34のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号19のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号34のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
を含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
本発明の別の態様は、抗体C10-2の変異体抗体、抗体N32S、N34Sに関する。本発明のこの態様は、
(a)配列番号35のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号20のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号35のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
を含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
本発明の別の態様は、抗体C10-2の変異体抗体、抗体N32Q、N34Sに関する。本発明のこの態様は、
(a)配列番号36のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号21のアミノ酸配列を含む軽鎖;
(b)配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号36のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
を含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
本発明の別の態様は、抗体C10-2の変異体抗体、抗体N32Q、N34Qに関する。本発明のこの態様は、
(a)配列番号37のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号22のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号37のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
を含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
本発明の別の態様は、抗体C10-2の変異体抗体、抗体N32S、N34Qに関する。本発明のこの態様は、
(a)配列番号38のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号23のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号38のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
を含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
本発明の別の態様は、抗体C10-2の変異体抗体、抗体A101Tに関する。本発明のこの態様は、
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号12のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号24のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
のうちの少なくとも1つを含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
をさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
本発明の別の態様は、抗体C10-2の変異体抗体、抗体N32S、A101Tに関する。本発明のこの態様は、
(a)配列番号31のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号16のアミノ酸配列を含む軽鎖;
(b)配列番号24のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号31のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含み;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;および
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2
のうちの少なくとも1つをさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号46のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号47のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号48のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号49のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号50のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号51のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントである。
(a)配列番号31のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号55のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号56のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号57のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントである。
本発明の別の態様は、抗体C10-2の変異体抗体、抗体N32Q、A101Tに関する。本発明のこの態様は、
(a)配列番号32のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号17のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号24のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号32のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含み;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;および
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2
のうちの少なくとも1つをさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
本発明の別の態様は、抗体C10-2の変異体抗体、抗体N32S、D55Eに関する。本発明のこの態様は、
(a)配列番号31のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号28のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号16のアミノ酸配列を含む軽鎖;
(b)配列番号13のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号31のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;および
(e)配列番号28のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2
を含み;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
本発明の別の態様は、抗体C10-2の変異体抗体、抗体N32Q、D55Eに関する。本発明のこの態様は、
(a)配列番号32のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号28のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号17のアミノ酸配列を含む軽鎖;
(b)配列番号13のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号32のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;および
(e)配列番号28のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2
を含み;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
本発明の別の態様は、抗体C10-2の変異体抗体、抗体N34S、A101Tに関する。本発明のこの態様は、
(a)配列番号33のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号18のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号24のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号33のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含み;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;および
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2
のうちの少なくとも1つをさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
本発明の別の態様は、抗体C10-2の変異体抗体、抗体N34Q、A101Tに関する。本発明のこの態様は、
(a)配列番号34のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号19のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号24のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号34のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含み;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2
のうちの少なくとも1つをさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
本発明の別の態様は、抗体C10-2の変異体抗体、抗体D55E、A101Tに関する。本発明のこの態様は、
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号28のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号12のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号25のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
のうちの少なくとも1つを含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号28のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
をさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
本発明の別の態様は、抗体C10-2の変異体抗体、抗体D55Q、A101Tに関する。本発明のこの態様は、
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号29のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号12のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号26のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
のうちの少なくとも1つを含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号29のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
をさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
本発明の別の態様は、抗体C10-2の変異体抗体、抗体D55S、A101Tに関する。本発明のこの態様は、
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号30のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号12のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号27のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
のうちの少なくとも1つを含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号30のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
をさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
配列番号12(軽鎖C10-2);配列番号16(軽鎖変異体N32S);配列番号17(軽鎖変異体N32Q);配列番号18(軽鎖変異体N34S);配列番号19(軽鎖変異体N34Q);配列番号20(軽鎖変異体N32S、N34S);配列番号21(軽鎖変異体N32Q、N34S);配列番号22(軽鎖変異体N32Q、N34Q);および配列番号23(軽鎖変異体N32S、N34Q)からなる群から選択される軽鎖;および
配列番号11(重鎖C10-2);配列番号13(重鎖変異体D55E);配列番号14(重鎖変異体D55Q);配列番号15(重鎖変異体D55S);配列番号24(重鎖変異体A101T);配列番号25(重鎖変異体D55E、A101T);配列番号26(重鎖変異体D55Q、A101T)、および配列番号27(重鎖変異体D55S、A101T)からなる群から選択される重鎖を含む。
(a)配列番号3、配列番号31;配列番号32;配列番号33;配列番号34;配列番号35;配列番号36;配列番号37;および配列番号38からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1;(b)配列番号4のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2;(c)配列番号5のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3;(d)配列番号6のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1;(e)配列番号7;配列番号28;配列番号29;および配列番号30からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖CDR2;および(f)配列番号8、および配列番号39からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖CDR3を含む。
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;および
(d)配列番号11、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号24、配列番号25、配列番号26、および配列番号27からなる群から選択される重鎖
を含む抗体に関する。
(a)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(b)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;
(c)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3;および
(d)配列番号16、配列番号17、配列番号18、配列番号19、配列番号20、配列番号21、配列番号22、および配列番号23からなる群から選択される軽鎖
を含む抗体に関する。
Y-X-S(リン酸化)-P-
を有し、ここで、Yがチロシンであり、Xが天然アミノ酸であり、Pがプロリンであり、S(リン酸化)が、リン酸化ヒドロキシル側鎖を有するセリンである。
a)BACE阻害剤;
b)能動または受動タウ免疫療法に有用な化合物;
c)能動または受動Aβペプチド免疫療法に有用な化合物;
d)NMDA受容体拮抗薬;
e)さらなるタウタンパク質凝集阻害剤;
e)アセチルコリンエステラーゼ阻害剤;
f)抗てんかん薬;
g)抗炎症薬;および
h)SSRI
の投与を含む治療法に関する。
a)BACE阻害剤;
b)能動または受動タウ免疫療法に有用な化合物;
c)能動または受動Aβペプチド免疫療法に有用な化合物;
d)NMDA受容体拮抗薬;
e)さらなるタウタンパク質凝集阻害剤;
e)アセチルコリンエステラーゼ阻害剤;
f)抗てんかん薬;
g)抗炎症薬;および
h)SSRI
を含む組成物に関する。
a)BACE阻害剤;
b)能動または受動タウ免疫療法に有用な化合物;
c)能動または受動Aβペプチド免疫療法に有用な化合物;
d)NMDA受容体拮抗薬;
e)さらなるタウタンパク質凝集阻害剤;
f)アセチルコリンエステラーゼ阻害剤;
g)抗てんかん薬;
h)抗炎症薬;および
i)抗うつ剤
を含むキットに関する。
この治療法では、本発明の組成物またはキット、タウ抗体は、BACE 1阻害剤と組み合わされ得る。BACE1阻害剤は、LY2886721、MK-8931、AZD3293、またはE2609などの小分子BACE I阻害剤であり得る。
(式中、Arが、フェニル、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、イミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリルからなる群から選択され、ここで、Arが、ハロゲン、CN、C1~C6アルキル、C2~C6アルケニル、C2~C6アルキニル、C1~C6フルオロアルキルまたはC1~C6アルコキシから選択される1つまたは複数の置換基で任意選択的に置換され;R1が、1つまたは複数の水素、ハロゲン、C1~C3フルオロアルキルまたはC1~C3アルキルであり;R2が、水素またはフルオロを表す)のものである。
(3S,6S)-6-(5-アミノ-2-フルオロフェニル)-3-フルオロ-3-(フルオロメチル)-6-メチルピペリジン-2-チオン
(3R,6S)-6-(5-アミノ-2-フルオロフェニル)-3-フルオロ-3-(フルオロメチル)-6-メチルピペリジン-2-チオン
(3S,6S)-6-(5-アミノ-2,3-ジフルオロフェニル)-3-フルオロ-3-(フルオロメチル)-6-メチルピペリジン-2-チオン
(3R,6S)-6-(5-アミノ-2,3-ジフルオロフェニル)-3-フルオロ-3-(フルオロメチル)-6-メチルピペリジン-2-チオン
(6S)-6-(5-アミノ-2-フルオロフェニル)-3-フルオロ-3,6-ビス(フルオロメチル)ピペリジン-2-チオン
(式中、Arが、フェニル、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、イミダゾリル、ピラゾリル、1,2,4-トリアゾリル、チオフェニル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、1,3,4-チアジアゾリル、イソチアゾリル、1,3,4-オキサジアゾリル、1,2,4-オキサジアゾリル、フラザニルおよび1,2,4-チアジアゾリルからなる群から選択され、ここで、Arが、1つまたは複数のハロゲン、CN、C1~C6アルキル、C2~C6アルケニル、C2~C6アルキニル、C1~C6フルオロアルキルまたはC1~C6アルコキシで任意選択的に置換され;R1が、C1~C3アルキルまたはC1~C3フルオロアルキルであり;R2が、水素、ハロゲン、C1~C3フルオロアルキルまたはC1~C3アルキルであり;R3がC1~C3アルキルである)のものであり得る。
(式中、Arが、フェニル、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、イミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリルからなる群から選択され、ここで、Arが、ハロゲン、CN、C1~C6アルキル、C2~C6アルケニル、C2~C6アルキニル、C1~C6フルオロアルキルまたはC1~C6アルコキシから選択される1つまたは複数の置換基で任意選択的に置換され;
R1が、1つまたは複数の水素、ハロゲン、C1~C3フルオロアルキルまたはC1~C3アルキルであり;
R2が、水素またはフルオロを表す);
またはその薬学的に許容できる塩から選択され得る。
N-(3-((2S,5S)-6-アミノ-5-フルオロ-5-(フルオロメチル)-2-メチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-メトキシピコリンアミド;
N-(3-((2S,5S)-6-アミノ-5-フルオロ-5-(フルオロメチル)-2-メチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-(メトキシ-d3)ピコリンアミド;
N-(3-((2S,5S)-6-アミノ-5-フルオロ-5-(フルオロメチル)-2-メチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-シアノ-3-メチルピコリンアミド;
N-(3-((2S,5S)-6-アミノ-5-フルオロ-5-(フルオロメチル)-2-メチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-クロロピコリンアミド;
N-(3-((2S,5S)-6-アミノ-5-フルオロ-5-(フルオロメチル)-2-メチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-メトキシピラジン-2-カルボキサミド;
N-(3-((2S,5S)-6-アミノ-5-フルオロ-5-(フルオロメチル)-2-メチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-2-メチルオキサゾール-4-カルボキサミド;
N-(3-((2S,5S)-6-アミノ-5-フルオロ-5-(フルオロメチル)-2-メチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-4-ブロモ-1-メチル-1H-イミダゾール-2-カルボキサミド;
N-(3-((2S,5S)-6-アミノ-5-フルオロ-5-(フルオロメチル)-2-メチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-4-メチルチアゾール-2-カルボキサミド;
N-(3-((2S,5S)-6-アミノ-5-フルオロ-5-(フルオロメチル)-2-メチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-2-(ジフルオロメチル)オキサゾール-4-カルボキサミド;
N-(3-((2S,5S)-6-アミノ-5-フルオロ-5-(フルオロメチル)-2-メチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-1-(ジフルオロメチル)-1H-ピラゾール-3-カルボキサミド;
N-(3-((2S,5S)-6-アミノ-5-フルオロ-5-(フルオロメチル)-2-メチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-(ジフルオロメチル)ピラジン-2-カルボキサミド;
N-(3-((2S,5S)-6-アミノ-5-フルオロ-5-(フルオロメチル)-2-メチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-4-クロロベンズアミド;
N-(3-((2S,5S)-6-アミノ-5-フルオロ-5-(フルオロメチル)-2-メチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-フルオロピコリンアミド;
N-(3-((2S,5R)-6-アミノ-5-フルオロ-5-(フルオロメチル)-2-メチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-メトキシピコリンアミド;
N-[3-[(2S,5S)-6-アミノ-5-フルオロ-5-(フルオロメチル)-2-メチル-3,4-ジヒドロピリジン-2-イル]-4,5-ジフルオロ-フェニル]-5-フルオロ-ピリジン-2-カルボキサミド;
N-[3-[(2S,5S)-6-アミノ-5-フルオロ-5-(フルオロメチル)-2-メチル-3,4-ジヒドロピリジン-2-イル]-4,5-ジフルオロ-フェニル]-5-メトキシ-ピリジン-2-カルボキサミド;
N-[3-[(2S,5S)-6-アミノ-5-フルオロ-5-(フルオロメチル)-2-メチル-3,4-ジヒドロピリジン-2-イル]-4,5-ジフルオロ-フェニル]-5-メトキシ-ピラジン-2-カルボキサミド;
N-[3-[(2S,5R)-6-アミノ-5-フルオロ-5-(フルオロメチル)-2-メチル-3,4-ジヒドロピリジン-2-イル]-4,5-ジフルオロ-フェニル]-5-フルオロ-ピリジン-2-カルボキサミド;
N-[3-[(2S,5R)-6-アミノ-5-フルオロ-5-(フルオロメチル)-2-メチル-3,4-ジヒドロピリジン-2-イル]-4,5-ジフルオロ-フェニル]-5-メトキシ-ピリジン-2-カルボキサミド;
N-[3-[(2S,5R)-6-アミノ-5-フルオロ-5-(フルオロメチル)-2-メチル-3,4-ジヒドロピリジン-2-イル]-4,5-ジフルオロ-フェニル]-5-メトキシ-ピラジン-2-カルボキサミド;
N-[3-[(2S,5S)-6-アミノ-5-フルオロ-2,5-ビス(フルオロメチル)-3,4-ジヒドロピリジン-2-イル]-4-フルオロ-フェニル]-5-フルオロ-ピリジン-2-カルボキサミド;
N-[3-[(2S,5S)-6-アミノ-5-フルオロ-2,5-ビス(フルオロメチル)-3,4-ジヒドロピリジン-2-イル]-4-フルオロ-フェニル]-5-メトキシ-ピリジン-2-カルボキサミド;
N-[3-[(2S,5S)-6-アミノ-5-フルオロ-2,5-ビス(フルオロメチル)-3,4-ジヒドロピリジン-2-イル]-4-フルオロ-フェニル]-5-メトキシ-ピラジン-2-カルボキサミド;
N-[3-[(2S,5R)-6-アミノ-5-フルオロ-2,5-ビス(フルオロメチル)-3,4-ジヒドロピリジン-2-イル]-4-フルオロ-フェニル]-5-フルオロ-ピリジン-2-カルボキサミド;
N-[3-[(2S,5R)-6-アミノ-5-フルオロ-2,5-ビス(フルオロメチル)-3,4-ジヒドロピリジン-2-イル]-4-フルオロ-フェニル]-5-メトキシ-ピリジン-2-カルボキサミドおよび
N-[3-[(2S,5R)-6-アミノ-5-フルオロ-2,5-ビス(フルオロメチル)-3,4-ジヒドロピリジン-2-イル]-4-フルオロ-フェニル]-5-メトキシ-ピラジン-2-カルボキサミド
などの化合物;
または前記化合物の薬学的に許容できる塩。
(式中、Arが、フェニル、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、イミダゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、チアゾリルおよびイソオキサゾリルからなる群から選択され、ここで、Arが、1つまたは複数のハロゲン、CN、C1~C6アルキル、C2~C6アルケニル、C2~C6アルキニル、C1~C6フルオロアルキルまたはC1~C6アルコキシで任意選択的に置換され;
R1およびR2が、独立して、水素、ハロゲン、C1~C3フルオロアルキルまたはC1~C3アルキルである)のもの;
またはその薬学的に許容できる塩であり得る。
(S)-N-(3-(6-アミノ-3,3-ジフルオロ-2-(フルオロメチル)-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-クロロピコリンアミド
(S)-N-(3-(6-アミノ-3,3-ジフルオロ-2-(フルオロメチル)-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-フルオロピコリンアミド
(S)-N-(3-(6-アミノ-3,3-ジフルオロ-2-(フルオロメチル)-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-メトキシピラジン-2-カルボキサミド
(S)-N-(3-(6-アミノ-3,3-ジフルオロ-2-(フルオロメチル)-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-1-(ジフルオロメチル)-1H-ピラゾール-3-カルボキサミド
(S)-N-(3-(6-アミノ-3,3-ジフルオロ-2-(フルオロメチル)-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-2-(ジフルオロメチル)オキサゾール-4-カルボキサミド
(S)-N-(3-(6-アミノ-3,3-ジフルオロ-2-(フルオロメチル)-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-シアノピコリンアミド
(S)-N-(3-(6-アミノ-3,3-ジフルオロ-2-(フルオロメチル)-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-2-メチルオキサゾール-4-カルボキサミド
(S)-N-(3-(6-アミノ-3,3-ジフルオロ-2-(フルオロメチル)-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-メトキシピリミジン-2-カルボキサミド
(S)-N-(3-(6-アミノ-3,3-ジフルオロ-2-(フルオロメチル)-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-(ジフルオロメチル)ピラジン-2-カルボキサミド
(S)-N-(3-(6-アミノ-3,3-ジフルオロ-2-(フルオロメチル)-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4,5-ジフルオロフェニル)-2-メチルオキサゾール-4-カルボキサミド
(S)-N-(3-(6-アミノ-3,3-ジフルオロ-2-(フルオロメチル)-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4,5-ジフルオロフェニル)-5-メトキシピラジン-2-カルボキサミド
(S)-N-(3-(6-アミノ-3,3-ジフルオロ-2-(フルオロメチル)-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4,5-ジフルオロフェニル)-5-フルオロピコリンアミド
(S)-N-(3-(6-アミノ-3,3-ジフルオロ-2-(フルオロメチル)-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4,5-ジフルオロフェニル)-5-クロロピコリンアミド
(S)-N-(3-(6-アミノ-3,3-ジフルオロ-2-(フルオロメチル)-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4,5-ジフルオロフェニル)-5-シアノピコリンアミド
(S)-N-(3-(6-アミノ-3,3-ジフルオロ-2-(フルオロメチル)-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4,5-ジフルオロフェニル)-5-メトキシピコリンアミド
(S)-N-(3-(6-アミノ-3,3-ジフルオロ-2-(フルオロメチル)-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4,5-ジフルオロフェニル)-5-(メトキシ-d3)ピコリンアミド
(S)-N-(3-(6-アミノ-3,3-ジフルオロ-2-(フルオロメチル)-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4,5-ジフルオロフェニル)-5-シアノ-3-メチルピコリンアミド
(S)-N-(3-(6-アミノ-3,3-ジフルオロ-2-(フルオロメチル)-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-(メトキシ-d3)ピコリンアミド(S)-N-(3-(6-アミノ-3,3-ジフルオロ-2-(フルオロメチル)-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-ブロモピコリンアミド
(S)-N-(3-(6-アミノ-3,3-ジフルオロ-2-(フルオロメチル)-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-ブロモピコリンアミド
などの化合物
または前記化合物の薬学的に許容できる塩。
(式中、Arが、フェニル、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、イミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリルからなる群から選択され、ここで、Arが、ハロゲン、CN、C1~C6アルキル、C2~C6アルケニル、C2~C6アルキニル、C1~C6フルオロアルキルまたはC1~C6アルコキシから選択される1つまたは複数の置換基で任意選択的に置換され;
R1が、水素、ハロゲン、C1~C3フルオロアルキルまたはC1~C3アルキルである);
またはその薬学的に許容できる塩からのものであり得る。
(S)-N-(3-(6-アミノ-2-(ジフルオロメチル)-3,3-ジフルオロ-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-クロロピコリンアミド、
(S)-N-(3-(6-アミノ-2-(ジフルオロメチル)-3,3-ジフルオロ-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-フルオロピコリンアミド、
(S)-N-(3-(6-アミノ-2-(ジフルオロメチル)-3,3-ジフルオロ-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-メトキシピラジン-2-カルボキサミド、
(S)-N-(3-(6-アミノ-2-(ジフルオロメチル)-3,3-ジフルオロ-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-2-メチルオキサゾール-4-カルボキサミド、
(S)-N-(3-(6-アミノ-2-(ジフルオロメチル)-3,3-ジフルオロ-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-メトキシピコリンアミド、
(S)-N-(3-(6-アミノ-2-(ジフルオロメチル)-3,3-ジフルオロ-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-(ジフルオロメチル)ピラジン-2-カルボキサミド、
(S)-N-(3-(6-アミノ-2-(ジフルオロメチル)-3,3-ジフルオロ-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-シアノピコリンアミド、
(S)-N-(3-(6-アミノ-2-(ジフルオロメチル)-3,3-ジフルオロ-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-4-メチルチアゾール-2-カルボキサミド、
(S)-N-(3-(6-アミノ-2-(ジフルオロメチル)-3,3-ジフルオロ-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-メトキシピリミジン-2-カルボキサミド、
(S)-N-(3-(6-アミノ-2-(ジフルオロメチル)-3,3-ジフルオロ-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-メトキシ-3-メチルピラジン-2-カルボキサミド、
(S)-N-(3-(6-アミノ-2-(ジフルオロメチル)-3,3-ジフルオロ-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-シアノ-3-メチルピコリンアミド、
(S)-N-(3-(6-アミノ-2-(ジフルオロメチル)-3,3-ジフルオロ-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-ブロモピコリンアミド、
(S)-N-(3-(6-アミノ-2-(ジフルオロメチル)-3,3-ジフルオロ-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-(メトキシ-d3)ピコリンアミドおよび
(S)-N-(3-(6-アミノ-2-(ジフルオロメチル)-3,3-ジフルオロ-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-(メトキシ-d3)ピラジン-2-カルボキサミド;
または前記化合物の薬学的に許容できる塩であり得る。
(式中、Arが、フェニル、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、イミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリルからなる群から選択され、ここで、Arが、ハロゲン、CN、C1~C6アルキル、C2~C6アルケニル、C2~C6アルキニル、C1~C6フルオロアルキルまたはC1~C6アルコキシから選択される1つまたは複数の置換基で任意選択的に置換され;
R1が、1つまたは複数の水素、ハロゲン、C1~C3フルオロアルキルまたはC1~C3アルキルである)のもの;
またはその薬学的に許容できる塩であり得る。
N-(3-((2R,3S,5S)-6-アミノ-3,5-ジフルオロ-2,5-ジメチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-フルオロピコリンアミド、
N-(3-((2R,3S,5S)-6-アミノ-3,5-ジフルオロ-2,5-ジメチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-メトキシピラジン-2-カルボキサミド、
N-(3-((2R,3S,5S)-6-アミノ-3,5-ジフルオロ-2,5-ジメチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-メトキシピコリンアミド、
N-(3-((2R,3S,5R)-6-アミノ-3,5-ジフルオロ-2,5-ジメチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-フルオロピコリンアミド、
N-(3-((2R,3S,5R)-6-アミノ-3,5-ジフルオロ-2,5-ジメチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-メトキシピラジン-2-カルボキサミド、
N-(3-((2R,3S,5R)-6-アミノ-3,5-ジフルオロ-2,5-ジメチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-2-メチルオキサゾール-4-カルボキサミド、
N-(3-((2R,3S,5R)-6-アミノ-3,5-ジフルオロ-2,5-ジメチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-メトキシピコリンアミド、
N-(3-((2R,3S,5R)-6-アミノ-3,5-ジフルオロ-2,5-ジメチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-(メトキシ-d3)ピコリンアミド、
N-(3-((2R,3S,5R)-6-アミノ-3,5-ジフルオロ-2,5-ジメチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-クロロピコリンアミド、
N-(3-((2R,3S,5R)-6-アミノ-3,5-ジフルオロ-2,5-ジメチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-1-メチル-1H-イミダゾール-2-カルボキサミド、
N-(3-((2R,3S,5R)-6-アミノ-3,5-ジフルオロ-2,5-ジメチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-(トリフルオロメチル)ピラジン-2-カルボキサミド、
N-(3-((2R,3S,5R)-6-アミノ-3,5-ジフルオロ-2,5-ジメチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-4-メチルチアゾール-2-カルボキサミド、
N-(3-((2R,3S,5R)-6-アミノ-3,5-ジフルオロ-2,5-ジメチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-2-(ジフルオロメチル)オキサゾール-4-カルボキサミド、
N-(3-((2R,3S,5R)-6-アミノ-3,5-ジフルオロ-2,5-ジメチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-1-(ジフルオロメチル)-1H-ピラゾール-3-カルボキサミド、
N-(3-((2R,3S,5R)-6-アミノ-3,5-ジフルオロ-2,5-ジメチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-(ジフルオロメチル)ピラジン-2-カルボキサミド、
N-(3-((2R,3S,5R)-6-アミノ-3,5-ジフルオロ-2,5-ジメチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-4-クロロベンズアミド、
N-(3-((2R,3S,5R)-6-アミノ-3,5-ジフルオロ-2,5-ジメチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-シアノピコリンアミド、
N-(3-((2R,3S,5R)-6-アミノ-3,5-ジフルオロ-2,5-ジメチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4,5-ジフルオロフェニル)-5-(メトキシ-d3)ピコリンアミド、
N-(3-((2R,3S,5S)-6-アミノ-3,5-ジフルオロ-2,5-ジメチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-(メトキシ-d3)ピコリンアミド、
N-(3-((2R,3S,5S)-6-アミノ-3,5-ジフルオロ-2,5-ジメチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-(メトキシ-d3)ピラジン-2-カルボキサミド、
N-(3-((2R,3S,5S)-6-アミノ-3,5-ジフルオロ-2,5-ジメチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-シアノ-3-メチルピコリンアミド、
N-(3-((2R,3S,5S)-6-アミノ-3,5-ジフルオロ-2,5-ジメチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4,5-ジフルオロフェニル)-5-(メトキシ-d3)ピコリンアミド、
N-(3-((2R,3R,5S)-6-アミノ-3,5-ジフルオロ-2,5-ジメチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-(メトキシ-d3)ピコリンアミド、
N-(3-((2R,3S,5S)-6-アミノ-3,5-ジフルオロ-2,5-ジメチル-2,3,4,5-テトラヒドロピリジン-2-イル)-4-フルオロフェニル)-5-ブロモピコリンアミド
または前記化合物の薬学的に許容できる塩であり得る。
この治療法では、本発明の組成物またはキット、タウ抗体は、N3PGLU Aβ抗体と組み合わされ得る。
この治療法では、本発明の組成物またはキット、タウ抗体は、能動または受動Aβペプチド免疫療法に有用な化合物と組み合わされ得る。
この治療法では、本発明の組成物またはキット、タウ抗体は、NMDA受容体拮抗薬と組み合わされ得る。NMDA受容体拮抗薬は、メマンチン、ナメンダ、ナムザリック(メマンチン/ドネペジル)、およびそのジェネリック形態からなる群から選択され得る。NMDA受容体拮抗薬は、抗精神病薬から選択され得る。シナプス前ニューロンは、ネガティブフィードバック機構を介して過剰なグルタメート放出を妨げるが、このような機構は、ADなどの、細胞ストレスの条件下で損なわれる。シナプス間隙における過剰なグルタメートは、シナプス後カルシウムチャネルを持続的に開かせて、ニューロン内の細胞内カルシウムレベルの増加を招き、深刻な神経損傷および/または死を引き起こす。過剰なカルシウム流入の条件下で、NMDA受容体に拮抗することによって、抗精神病薬は、ニューロン中へのカルシウムの過剰な流入を減少させて、細胞損傷を減少させ、正常な神経シグナル伝達、ひいては認知機能を改善する。
この治療法では、本発明の組成物またはキット、タウ抗体は、タウタンパク質凝集阻害剤と組み合わされ得る。
この治療法では、本発明の組成物またはキット、タウ抗体は、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤(AChEI)と組み合わされ得る。AChEIは、軽度から中度のADの認知症状のための第一選択治療として使用されることが多い。この亜集団に認められるドネペジルを含むAChEIはまた、中度から重度のADを処置するために広く使用される。AChEIは、AD患者において観察されるコリン作動性欠損を軽減し、日常活動を行う患者の能力を改善する。一実施形態において、本発明は、本明細書において定義されるタウ抗体、およびアセチルコリンエステラーゼ阻害剤を含む治療法を含む。
この治療法では、本発明の組成物またはキット、タウ抗体は、抗てんかん薬と組み合わされ得る。
この治療法では、本発明の組成物またはキット、タウ抗体は、抗炎症薬と組み合わされ得る。
この治療法では、本発明の組成物またはキット、タウ抗体は、抗うつ剤と組み合わされ得る。
(i)本明細書に記載される本発明の抗体の可変領域または前記領域のエピトープ結合部分、および
(ii)免疫グロブリンのCH領域またはCH2およびCH3領域を含むその領域
を含む一価抗体であり、ここで、CH領域またはその領域は、ヒンジ領域に対応する領域および、免疫グロブリンがIgG4サブタイプでない場合、CH3領域などのCH領域の他の領域が、ポリクローナルヒトIgGの存在下で、同一のCH領域とともにジスルフィド結合を形成するか、または同一のCH領域とともに他の共有結合または安定した非共有重鎖間結合を形成することが可能なアミノ酸残基を含まないように修飾されている。
(i)非リン酸化タウに結合することが実質的にできないこと;
(ii)S404においてリン酸化され、S396においてリン酸化されないタウに結合することが実質的にできないこと;
(iii)S396においてリン酸化されるタウに結合する能力;
(iv)S396およびS404の両方においてリン酸化されるタウに結合する能力;
(v)それがリン酸化404残基に結合することが実質的にできないように、リン酸化タウ残基S396およびS404を選択的に区別する能力;
(vi)ヒトアルツハイマー病の脳に由来する過リン酸化タウに結合する能力;
(vii)病理学的および非病理学的ヒトタウタンパク質を区別する能力;および/または
(viii)本明細書に記載されるように、トランスジェニックマウスに由来する免疫枯渇されたrTg4510抽出物とともに使用されるとき、過リン酸化タウ64kDaおよび70kDaバンドを少なくとも90%だけ特異的に減少させる一方、55kDaタウバンドを10%超減少させない能力または本明細書に記載されるように、ヒトAD死後脳に由来する抽出物とともに使用されるとき、S396リン酸化過リン酸化タウバンドを少なくとも90%だけ特異的に減少させる一方、非過リン酸化タウバンドを10%超減少させない能力
である。
(i)非リン酸化タウに結合することが実質的にできないこと;
(ii)S404においてリン酸化され、S396においてリン酸化されないタウに結合することが実質的にできないこと;
(iii)S396においてリン酸化されるタウに結合する能力;
(iv)S396およびS404の両方においてリン酸化されるタウに結合する能力;
(v)それがリン酸化404残基に結合することが実質的にできないように、リン酸化タウ残基S396およびS404を選択的に区別する能力;
(vi)ヒトアルツハイマー病の脳に由来する過リン酸化タウに結合する能力;
(vii)病理学的および非病理学的ヒトタウタンパク質を区別する能力;および/または
(viii)本明細書に記載されるように、トランスジェニックマウスに由来する免疫枯渇されたrTg4510抽出物とともに使用されるとき、過リン酸化タウ64kDaおよび70kDaバンドを少なくとも90%だけ特異的に減少させる一方、55kDaタウバンドを10%超減少させない能力;または本明細書に記載されるように、ヒトAD死後脳に由来する抽出物とともに使用されるとき、S396リン酸化過リン酸化タウバンドを少なくとも90%だけ特異的に減少させる一方、非過リン酸化タウバンドを10%超減少させない能力
であり、特に、このような変化した機能性は、構造変化の結果であり、したがってそれと切り離すことができない。
(i)本明細書に定義されるタウ抗体またはそのエピトープ結合フラグメント、または調製物であって、このような用語が本明細書において定義される際、このような抗タウ抗体またはそのエピトープ結合フラグメントを含む調製物、および
(ii)薬学的に許容できる担体
を含む医薬組成物に関する。
1.抗体またはそのエピトープ結合フラグメントが、残基396がリン酸化されないとき、残基404においてリン酸化される配列番号1に実質的に結合しないように、ヒトタウ(配列番号1)のリン酸化残基396に特異的に結合することが可能なモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号3、配列番号31;配列番号32;配列番号33;配列番号34;配列番号35;配列番号36;配列番号37;配列番号38;配列番号40;および配列番号46からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1;
(b)配列番号4;配列番号41;および配列番号47のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2;
(c)配列番号5;配列番号42;および配列番号48のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3;
(d)配列番号6;配列番号43;配列番号49;配列番号52;および配列番号55のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1;
(e)配列番号7;配列番号28;配列番号29;配列番号30;配列番号44;配列番号50;配列番号53;および配列番号56からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖CDR2;および
(f)配列番号8、配列番号39;配列番号45;配列番号51;配列番号54;および配列番号57からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖CDR3
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号12;配列番号16;配列番号17;配列番号18;配列番号19;配列番号20;配列番号21;配列番号22および配列番号23からなる群から選択される軽鎖;および
(b)配列番号11;配列番号13;配列番号14;配列番号15;配列番号24;配列番号25;配列番号26;および配列番号27からなる群から選択される重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)軽鎖が配列番号12であり;
(b)重鎖が、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号24、配列番号25、配列番号26および配列番号27からなる群から選択される、実施形態1または5に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)軽鎖が、配列番号16;配列番号17;配列番号18;配列番号19;配列番号20;配列番号21;配列番号22および配列番号23からなる群から選択され;
(b)重鎖が配列番号11である、実施形態1または5に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号28のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号12のアミノ酸配列を含む軽鎖:
(b)配列番号13のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態1または5に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
のうちの少なくとも1つを含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号28のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
をさらに含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号29のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号12のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号14のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態1または5に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
のうちの少なくとも1つを含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号29のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
をさらに含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号30のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号12のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号15のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態1または5に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
のうちの少なくとも1つを含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号30のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
をさらに含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号31のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号16のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態1または5に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号31のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
を含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号32のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号17のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態1または5に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号32のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
を含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号33のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号18のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態1または5に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号33のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
を含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号34のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号19のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態1または5に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号34のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
を含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号35のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号20のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態1または5に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号35のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
を含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号36のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号21のアミノ酸配列を含む軽鎖;
(b)配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態1または5に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号36のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
を含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号37のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号22のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態1または5に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号37のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
を含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号38のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号23のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態1または5に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号38のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
を含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含む、実施形態4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号12のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号24のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態1または5に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
のうちの少なくとも1つを含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
をさらに含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号31のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号16のアミノ酸配列を含む軽鎖;
(b)配列番号24のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態1または5に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号31のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含み;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;および
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2
のうちの少なくとも1つをさらに含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号32のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号17のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号24のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態1または5に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号32のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含み;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;および
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2
のうちの少なくとも1つをさらに含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号31のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号28のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号16のアミノ酸配列を含む軽鎖;
(b)配列番号13のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態1または5に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号31のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;および
(e)配列番号28のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2
を含み;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号32のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号28のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号17のアミノ酸配列を含む軽鎖;
(b)配列番号13のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態1または5に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号32のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;および
(e)配列番号28のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2
を含み;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号33のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号18のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号24のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態1または5に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号33のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含み;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;および
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2
のうちの少なくとも1つをさらに含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号34のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号19のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号24のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態1または5に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号34のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含み;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
のうちの少なくとも1つをさらに含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2
のうちの少なくとも1つをさらに含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号28のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号12のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号25のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態1または5に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
を含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号28のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
をさらに含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号29のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号12のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号26のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態1または5に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
を含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号29のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
をさらに含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号30のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号12のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号27のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態1または5に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;および
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3
を含み;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号30のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
をさらに含む、実施形態1または4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
-Y-X-S(リン酸化)-P-
を有し、ここで、Yがチロシンであり、Xが天然アミノ酸であり、Pがプロリンであり、S(リン酸化)が、リン酸化ヒドロキシル側鎖を有するセリンである、実施形態71に記載のモノクローナル抗体またはそのエピトープ結合フラグメント。
(i)非リン酸化タウに結合することが実質的にできないこと;
(ii)S404においてリン酸化され、S396においてリン酸化されないタウに結合することが実質的にできないこと;
(iii)S396においてリン酸化されるタウに結合する能力;
(iv)S396およびS404の両方においてリン酸化されるタウを結合する能力;
(v)それがリン酸化404残基に結合することが実質的にできないようにまたはそれがS396に優先的に結合するように、リン酸化タウ残基S396およびS404を選択的に区別する能力;
(vi)ヒトアルツハイマー病の脳に由来する過リン酸化タウに結合する能力;
(vii)病理学的および非病理学的ヒトタウタンパク質を区別する能力;および/または
(viii)実施例に記載されるように、トランスジェニックマウスに由来する免疫枯渇されたrTg4510抽出物とともに使用されるとき、過リン酸化タウ64kDaおよび70kDaバンドを少なくとも90%だけ特異的に減少させる一方、55kDaタウバンドを10%超減少させない能力
からなる群から選択される調製物。
(i)非リン酸化タウに結合することが実質的にできないこと;
(ii)S404においてリン酸化され、S396においてリン酸化されないタウに結合することが実質的にできないこと;
(iii)S396においてリン酸化されるタウに結合する能力;
(iv)S396およびS404の両方においてリン酸化されるタウに結合する能力;
(v)それがリン酸化404残基に結合することが実質的にできないようにまたはそれがS396に優先的に結合するように、リン酸化タウ残基S396およびS404を選択的に区別する能力;
(vi)ヒトアルツハイマー病の脳に由来する過リン酸化タウに結合する能力;
(vii)病理学的および非病理学的ヒトタウタンパク質を区別する能力;および/または
(viii)本明細書に記載されるように、トランスジェニックマウスに由来する免疫枯渇されたrTg4510抽出物とともに使用されるとき、過リン酸化タウ64kDaおよび70kDaバンドを少なくとも90%だけ特異的に減少させる一方、55kDaタウバンドを10%超減少させない能力
からなる群から選択される調製物。
a)BACE阻害剤;
b)能動または受動タウ免疫療法に有用な化合物;
c)能動または受動Aβペプチド免疫療法に有用な化合物;
d)NMDA受容体拮抗薬;
e)さらなるタウタンパク質凝集阻害剤;
e)アセチルコリンエステラーゼ阻害剤;
f)抗てんかん薬;
g)抗炎症薬;および
h)SSRI;および
iii)1つまたは複数の薬学的に許容できる賦形剤
を含む医薬組成物。
a)BACE阻害剤;
b)能動または受動タウ免疫療法に有用な化合物;
c)能動または受動Aβペプチド免疫療法に有用な化合物;
d)NMDA受容体拮抗薬;
e)さらなるタウタンパク質凝集阻害剤;
e)アセチルコリンエステラーゼ阻害剤;
f)抗てんかん薬;
g)抗炎症薬;および
h)SSRI
の投与を含む治療を含む方法。
a)BACE阻害剤;
b)能動または受動タウ免疫療法に有用な化合物;
c)能動または受動Aβペプチド免疫療法に有用な化合物;
d)NMDA受容体拮抗薬;
e)さらなるタウタンパク質凝集阻害剤;
f)アセチルコリンエステラーゼ阻害剤;
g)抗てんかん薬;
h)抗炎症薬;および
i)抗うつ剤
を含むキット。
(式中、Arが、フェニル、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、イミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリルからなる群から選択され、ここで、Arが、ハロゲン、CN、C1~C6アルキル、C2~C6アルケニル、C2~C6アルキニル、C1~C6フルオロアルキルまたはC1~C6アルコキシから選択される1つまたは複数の置換基で任意選択的に置換され;R1が、1つまたは複数の水素、ハロゲン、C1~C3フルオロアルキルまたはC1~C3アルキルであり;R2が、水素またはフルオロを表す)のものである、請求項106に記載の組成物、請求項107に記載の方法、請求項108に記載のキット。
(3S,6S)-6-(5-アミノ-2-フルオロフェニル)-3-フルオロ-3-(フルオロメチル)-6-メチルピペリジン-2-チオン
(3R,6S)-6-(5-アミノ-2-フルオロフェニル)-3-フルオロ-3-(フルオロメチル)-6-メチルピペリジン-2-チオン
(3S,6S)-6-(5-アミノ-2,3-ジフルオロフェニル)-3-フルオロ-3-(フルオロメチル)-6-メチルピペリジン-2-チオン
(3R,6S)-6-(5-アミノ-2,3-ジフルオロフェニル)-3-フルオロ-3-(フルオロメチル)-6-メチルピペリジン-2-チオン
(6S)-6-(5-アミノ-2-フルオロフェニル)-3-フルオロ-3,6-ビス(フルオロメチル)ピペリジン-2-チオン
(式中、Arが、フェニル、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、イミダゾリル、ピラゾリル、1,2,4-トリアゾリル、チオフェニル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、1,3,4-チアジアゾリル、イソチアゾリル、1,3,4-オキサジアゾリル、1,2,4-オキサジアゾリル、フラザニルおよび1,2,4-チアジアゾリルからなる群から選択され、ここで、Arが、1つまたは複数のハロゲン、CN、C1~C6アルキル、C2~C6アルケニル、C2~C6アルキニル、C1~C6フルオロアルキルまたはC1~C6アルコキシで任意選択的に置換され;R1が、C1~C3アルキルまたはC1~C3フルオロアルキルであり;R2が、水素、ハロゲン、C1~C3フルオロアルキルまたはC1~C3アルキルであり;R3がC1~C3アルキルである)のものである、請求項106に記載の組成物、請求項107に記載の方法、請求項108に記載のキット。
C56/BL6およびFVBマウスを、TiterMax補助剤中で製剤化された10μgのP30コンジュゲートリン酸化タウペプチド386~408(pS396/pS404)(配列番号2)で免疫した。
マウスを、対応するマウスの脾細からの採取およびそれに続く脾細胞とSP-2細胞との融合の3日前にTitermaxなしのP30コンジュゲートリン酸化タウ386~408(pS396/pS404)で追加免疫した。ELISAに検出されたリン酸化タウ386~408(pS396/pS404)への陽性結合、およびドットブロットおよび脳溶解物で被覆されたELISAまたはMSDプレートを用いて、対照に由来する脳溶解物と比較した、ADおよびTG4510脳溶解物に由来するS1およびP3抗原に対する優先的結合活性の後、ハイブリドーマを、再クローニングサイクルのために選択した。
タウ生化学的分画
ヒトタウ突然変異P301Lを過剰発現するヒトまたはrTg4510マウスに由来する脳組織を、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を含有する10体積のトリス-緩衝生理食塩水中で以下のように均質化した:50mMのトリス/HCl(pH7.4);274mMのNaCl;5mMのKCl;1%のプロテアーゼ阻害剤混合物(Roche);1%のホスファターゼ阻害剤混液IおよびII(Sigma);および1mMのフッ化フェニルメチルスルホニル(PMSF;Sigma)。ホモジネートを、4℃で20分間にわたって27,000×gで遠心分離して、上清(S1)およびペレット画分を得た。ペレットを、5体積の高塩/スクロース緩衝液(0.8MのNaCl、10%のスクロース、10mMのトリス/HCl、[pH7.4]、1mMのEGTA、1mMのPMSF)中で再度均質化し、上記のように遠心分離した。上清を収集し、37℃で1時間にわたってサルコシル(1%の最終濃度;Sigma)とともにインキュベートした後、4℃で1時間にわたって150,000×gで遠心分離して、P3画分と呼ばれるサルコシル不溶性ペレットを得た。P3ペレットを、脳ホモジネートに使用された元の体積の半分に等しい体積になるまで、TE緩衝液(10mMのトリス/HCl[pH8.0]、1mMのEDTA)中で再懸濁させた。
分画された組織抽出物S1およびP3を、0.1MのDTTを含有するSDS-試料緩衝液に溶解させた。熱処理された試料(95℃で10分間)を、4~12%のビス-トリスSDS-PAGEゲル(Invitrogen)におけるゲル電気泳動によって分離し、PVDF膜(BioRad Laboratories,Hercules,CA)上に移した。ドットブロット試料を、試料にわたって公知の濃度で、ニトロセルロース膜(Amersham,Pittsburgh,PA)上に直接滴下した。ウエスタンおよびドットブロット膜の両方を、TBS-Tween(0.5%)pH7.4中の5%の脱脂粉乳中でブロックした後、1μg/mlのC10-2中で、4℃で一晩インキュベートした。膜を洗浄し、ペルオキシダーゼコンジュゲート抗マウスIgG(1:5000;Jackson ImmunoResearch,West Grove,PA)とともにインキュベートした。結合抗体を、強化化学発光システム(ECL PLUS kit;PerkinElmer)を用いて検出した。定量化およびウエスタンおよびドットブロット免疫反応性の視覚分析を、コンピュータに接続されたLAS-4000 BioImaging Analyzer System(Fujifilm,Tokyo,Japan)およびMulti Gauge v3.1ソフトウェア(Fujifilm)を用いて行った。タンパク質充填量を、元の画分の体積によって調整し、これは元の組織の湿重量に換算され得る。
実施例3Aの目的:マウスC10.2に対するAD-P3脳物質中のpS396タウ抗原に結合するヒトC10-2および突然変異変異体の阻害を定量化するため。対象とするC10.2変異体とともにプレインキュベートされたAD-P3またはAD-P3とインキュベートする前に、MSDプレートをマウスC10-2で被覆した。阻害の程度が、抗原に結合する流体相抗体の見かけの親和性を反映するIC50値として示される。Graph Pad Prismソフトウェアを用いて1または2部位結合モデルに適合させることによって、IC50値を得た。P(404)タウと反応性の陰性対照抗体(マウスC10-1)を、比較のために加えた(データは示されない)。
組織
マウス:マウス脳組織を、8月齢のrTg4510マウスから採取した。これらのトランスジェニックマウスは、CamK2陽性ニューロン中、tet-off応答因子下でヒト変異タウ(P301L 0N4R)を発現し、6月齢以降に顕著なタウ過リン酸化およびもつれ形成を示す。非トランスジェニック同腹仔を対照として用いた。マウス脳を、4%のパラホルムアルデヒドへの浸漬によって固定し、パラフィンに包埋した。ヒト:ホルマリンで固定され、パラフィンで包埋された、前頭葉のヒト脳試料を、Tissue Solutions(Glasgow,UK)から取得した。末期と診断されたアルツハイマー病(AD;Braak段階V~VI)の3つのドナーに由来する組織を、月齢をマッチさせた、認知症でない対照ドナーと比較した。
マウスおよびヒト組織の4μm厚の切片を、ミクロトームで切断し、脱パラフィン化し、10分間にわたって、10mMのクエン酸緩衝液、pH6中で切片をマイクロ波処理することによって、抗原賦活化を行った。内因性ペルオキシダーゼを、1%の過酸化水素、続いて、PBS、1%のBSA、0.3%のTriton X-100(PBS-BT)中の5%の正常なブタ血清によりブロッキングした。切片を、図1に示される濃度の範囲で、PBS-BT中で希釈されたhC10-2、hC10-2_N32SおよびhC10-2_N32S_A101T抗体とともに、4℃で一晩インキュベートした。切片を、PBS、0.25%のBSA、0.1%のTriton X-100中で洗浄してから、1時間にわたって1:200でビオチン化二次ブタ抗ヒト抗体(#B1140;Sigma-Aldrich)とともにインキュベートした。さらなる洗浄後、ストレプトアビジン-ビオチン複合体キット(Vector Laboratories,Burlingame,CA)を適用し、最後に、免疫活性を、0.05%のジアミノベンジジンで視覚化した。切片を、核の位置を示すためにヘマトキシリンで対比染色した。
hC10-2、hC10-2_N32SおよびhC10-2_N32S_A101Tは、3つのAD脳内の病理学的タウ(すなわち、もつれ、神経絨毛糸、ジストロフィー性神経突起)と一致する構造を標識した。免疫活性の強度は、濃度依存性であった。例えばグリア細胞または血管の明らかな標識は検出されなかった。対照脳に由来する切片で免疫活性は検出されなかった。同様に、全ての3つの抗体は、rTg4510脳の海馬および皮質の両方においてリン酸化タウについて予測されるパターンを生じた。非トランスジェニックマウスに由来する脳切片では、免疫活性は検出されなかった。
方法
10月齢のrTg4510マウス。これらのトランスジェニックマウスは、CamK2陽性ニューロン中、tet-off応答因子下でヒト変異タウ(P301L 0N4R)を発現し、6月齢以降に顕著なタウ過リン酸化およびもつれ形成を示す。さらに、神経変性が、強い病変を有する領域において、rTg4510マウスの10月齢の時点で存在する。単一トランスジェニックtTA同腹仔を対照として用いた。マウスに、80mg/kgの濃度で、hC10-2、hC10-2_N32SまたはhC10-2_N32S_A101T抗体のいずれかを、尾静脈を介して単回注射した。マウス1匹につき150μLの体積を注射した。注射の3日後、マウスに、PBSを2分間灌流させた後、4%のパラホルムアルデヒドを10分間灌流させた。脳を、30%のスクロース中で凍結防止し、40ミクロンの自由に浮遊する低温切開片に切り分けた。切片を、20分間にわたってPBS/1%のBSA/0.3%のTriton X-100中の5%の正常なブタ血清とともにインキュベートし、PBSで洗浄し、最後に、1:200でAlexaFluor488コンジュゲート二次抗ヒトIgG(#709-545-149;Jackson ImmunoResearch Laboratories,West Grove,USA)とともにインキュベートした。Hoechstを核染色に使用した。切片を、PBS中で洗浄し、取り付け、蛍光顕微鏡によって調べた。
hC10-2、hC10-2_N32SおよびhC10-2_N32S_A101Tの静脈内(i.v.)注射により、老化したrTg4510マウス脳の海馬および皮質における標的構造へのインビボ結合が生じた(図4~7)。観察される陽性構造の数は、個々のrTg4510動物によって異なっていた。tTA対照マウスでは、3つの抗体のいずれの注射の後も、特定の蛍光シグナルは検出されなかった(図4~7)。陰性対照として用いる、対照ヒトIgGの注射は、rTg4510マウスにおいてシグナルを生じなかった(データは示されない)。rTg4510脳における陽性シグナルは、細胞内染色として容易に見えず、神経変性の過程で放出される細胞外のタウ物質を表し得る。まとめると、これらのデータは、hC10-2、hC10-2_N32SおよびhC10-2_N32S_A101T抗体が、脳実質中に浸透することができ、インビボでrTg4510マウスにおける標的を特異的に装飾することを示唆している。
組織:
パラフィンで包埋された、前頭葉のヒト脳試料を、Tissue Solutions(Glasgow,UK)から取得した。末期と診断されたアルツハイマー病(AD;Braak段階V~VI)のドナーに由来する組織が含まれていた。
ヒト組織の4μm厚の切片を、ミクロトームで切断し、脱パラフィン化し、10分間にわたって、10mMのクエン酸緩衝液、pH6中で切片をマイクロ波処理することによって、抗原賦活化を行った。切片を、PBS、1%のBSA、0.3%のTriton X-100(PBS-BT)中の5%の正常なブタ血清とともにインキュベートした後、PBS-BTで希釈されたhC10-2またはhC10-2_N32S_A101T抗体とともに、4℃で一晩インキュベートした。切片を、PBS、0.25%のBSA、0.1%のTriton X-100中で洗浄した。免疫活性を、AlexaFluor488コンジュゲート二次抗ヒトIgG(1:200;#709-545-149,Jackson ImmunoResearch Laboratories,West Grove,USA)によって視覚化した。蛍光免疫二重染色のための、切片を、AT8(1:500;#MN1020,ThermoFisher,Waltham USA)またはE1総ヒトタウ抗体とともに共インキュベートし、特注のウサギ抗体が、N末端タウ19-33に対して産生された(Crowe et al,1991)。AT8およびE1の免疫活性をそれぞれ、抗マウスAlexaFluor568(1:400;#A10037,ThermoFisher)および抗ウサギAlexaFluor568(1:400;#A10042,ThermoFisher)で視覚化した。切片を、蛍光顕微鏡によって分析した。
N末端総タウおよびpS396タウについて二重染色されたAD切片において、もつれを有するニューロンの集団を、E1ならびにhC10-2およびhC10-2_N32S_A101T抗体のいずれかによって標識した(図7)。多くのタウもつれが、hC10-2およびhC10-2_N32S_A101T抗体のいずれかのみによって標識された(図7、矢印)。細胞外タウ(ゴーストもつれ)は、N末端タウ抗体によって染色されないことが以前に示されている(例えばBondareff et al,1990;Braak et al,1994;Flores-Rodrigues et al,2015)。したがって、hC10-2またはhC10-2_N32S_A101T抗体のみによって標識されるタウ種は、細胞外のゴーストもつれを表す可能性が高い。
実験手順および実験の説明
トランスジェニックrTg4510マウスを使用した:P301L突然変異を有するヒトタウcDNA(4R0NタウP301L)を、テトラサイクリン-オペロン-レスポンダー(TRE)構築物の下流に配置した。導入遺伝子を活性化するために、レスポンダーは、テトラサイクリン調整遺伝子発現系(tTA)からなるアクチベータ構築物と共発現される必要がある。tTAアクチベータ系を、CaMKIIαプロモータの下流に配置し、それによって、主に前脳構造に対するTREの発現を制限した。タウ導入遺伝子レスポンダーは、FVB/N(Taconic)マウス系統で発現され、tTAアクチベータ系は、129S6(Taconic)マウス系統において維持された。それらのF1子孫は、非トランスジェニック(非tg)および単一トランスジェニック同腹仔マウスとともにレスポンダーおよびアクチベータ導入遺伝子(rTg4510)を有していた。F1マウスのみを実験に使用した。全てのマウスを、Taconic(Denmark)で飼育し、tTAアクチベータ導入遺伝子についてはプライマー対の5’-GATTAACAGCGCATTAGAGCTG-3’および5’-GCATATGATCAATTCAAGGCCGATAAG-3’、ならびに突然変異体タウレスポンダー導入遺伝子については5’-TGAACCAGGATGGCTGAGCC-3’および5’-TTGTCATCGCTTCCAGTCCCCG-3’を用いた尾部DNAの分析によって、遺伝子型を同定した。マウスを集団で飼育し、水および食物(Brogaarden、Denmark)を自由に与えるとともに栄養強化物質を与えた。明/暗サイクルは12時間であり;室温は21±2℃であり、55%±5%の相対湿度であった。実験動物(登録番号2014-15-0201-00339)についてのデンマークの法律にしたがって実験を行った。
3匹の32週齢のrTg4510マウスおよび非トランスジェニック(非tg)対照同腹仔からプールされた前脳ホモジネートならびに4匹のADおよび4匹の健常対照(HC)ドナーからプールされた皮質試験片を、可溶性(S1)、TBS可溶性ペレット(S1p)およびサルコシル不溶性画分(P3)中に単離した。hC10.2、hC10-2_N32S、hC10-2_N32S_A101Tを、ウエスタンブロットにおいて1μg/mlで使用し、rTg4510マウスおよびADから病理学的タウを検出した。本発明者らは、32週齢のrTg4510マウスに由来するS1において55および64kDaタウ、およびP3およびS1p画分において64および70kDaタウの検出を観察した。さらに、50kDa未満の3つの切断された(truncated)タウバンドが、P3画分において観察された。ヒト導入遺伝子タウを発現しない非tg対照同腹仔に由来するS1pおよびP3においてシグナルは検出されなかった。50kDa前後の弱いシグナルが、非tgマウスに由来するS1画分において検出され、これは、S396残基においてリン酸化される内因性マウスタウを表す可能性が最も高い(図8A~8C)。hC10.2、hC10-2_N32S、hC10-2_N32S_A101Tは、rTg4510マウスにおいて、pS396タウ、ならびに正常なリン酸化55kDaおよび過リン酸化64kDaタウ種の両方を検出したことが要約される。最も強いシグナルが、hC10-2_N32S_A101Tで観察された。
非変性条件下でタウに結合するhC10.2、hC10-2_N32S、hC10-2_N32S_A101Tの能力を決定するために、タウ抗体をプロテインA/G樹脂上へと共有結合的に架橋し、それによって、抗体汚染のないIPを得るタウ免疫沈降(IP)プロトコルを確立した。SDS-PAGEによるタウ分析では、両方のタンパク質が50kDa前後で検出されるため、IPに使用される抗体の重鎖の存在は、シグナルを邪魔し得る。ヒト脳に由来する病理学的タウを破壊するhC10.2、hC10-2_N32S、hC10-2_N32S_A101Tの有効性を調べた。抗原として、それぞれ0.1μgおよび0.15μgのヒトタウ(ヒトタウELISAによって決定される)を含有する4匹のプールされたADおよびHCドナーに由来する脳ホモジネートからの500μgのプレクリアされた溶解物を使用した。hC10.2、hC10-2_N32S、hC10-2_N32S_A101T(10μg)は、ポリクローナルウサギ抗pS396タウ抗体によって視覚化されるプレクリアされたADホモジネート(抗原/ab1:100の比率)からの54、64、69および74kDaタウ種(4つの病理学的タウバンド)およびAD塗抹標本を破壊した(図9)。hC10.2、hC10-2_N32S、hC10-2_N32S_A101Tで破壊されたAD脳に由来するタウバンドの強度を、対照ヒトIgG抗体およびHC脳と比較すると、hC10.2、hC10-2_N32S、hC10-2_N32S_A101Tが、AD脳のみに由来するpS396部位において過リン酸化タウを免疫沈降し、1:100の抗原/抗体比で有効であったことが要約され得る。
HEK293細胞を、平板培養の24時間後に、6ウェルプレートにおいてヒトタウ-P301L-FLAGで一過性にトランスフェクトし、続いて、24時間後に、24時間にわたって脳ホモジネートとともにインキュベートした後、細胞を分割および再度平板培養し、さらに24時間後に収集した。細胞を溶解させ、1%のtriton X、Phos-stopおよび完全なホスファターゼおよびプロテアーゼ阻害剤(Roche)緩衝液が補充されたPBS中で超音波処理し、30分間にわたって100,000×gで超遠心分離した。ペレットを、SDS中で再懸濁させ、超音波処理し、30分間にわたって100,000×gで超遠心分離した。上清を、ウエスタンブロット法によって分析した。ヒトタウ-P301Lを発現する細胞は、rTg4510タウトランスジェニックマウスに由来する総脳ホモジネートをシーディングすると、不溶性(SDS画分、E1/FLAG検出)、過リン酸化(pS396検出)タウを示した。
アルツハイマー病の脳抽出物を、10倍体積の滅菌冷PBS中の凍結された死後前頭前皮質から作製した。組織を、ナイフホモジザイナー(knife homogenizer)を用いて均質化した後、超音波処理し、出力2で5×0.9秒パルス(Branson sonifier)にかけた。次に、ホモジネートを、4℃で5分間にわたって3000gで遠心分離した。上清を分割し、急速凍結させ、使用するまで-80℃で貯蔵した。
試料を、1×SDSローディングバッファーおよび100mMのDTT中で沸騰させた。3μlの抽出物に対応する体積を、4~12%のビス-トリスNuPAGE Gel(LifeTech Novex)上に充填した。電気泳動の後、タンパク質を、Immobilon-FL PVDF膜(0.45μm、IPFL10100、Millipore)上にブロッティングした。膜を、SEAブロッキングバッファー(Prod#37527、Thermo)を用いてブロッキングした。タウおよびP-タウレベルを、タウ5(タウ5は、エピトープがタウアミノ酸210~241の中にあることが記載される市販の抗タウ抗体である)を用いて試料中で評価した。それは、タウに対するマウスモノクローナルである。Abcam ab80579、1:2000)マウスC10-2(1μg/ml)、P-S199/202(Invitrogen 44768 G、1:1000)、P-S422(Abcam ab79415、1:750)、ヒトIPN(1μg/ml)。Gapdhおよびアクチンを、充填対照(Abcam ab9484、1:2000、Sigma A5441、1:20000)として使用した。二次フルオロフォアコンジュゲートIgG抗体を使用し(IRDye 800CWヤギ抗ヒト、IRDye 800CW、ヤギ抗ウサギ、IRDye 680ヤギ抗マウス、LI-COR biosciences)、シグナルを、Odyssey CLxおよびImage studioソフトウェア(LI-COR biosciences)を用いて定量化した。全レーンにおける個々のバンドならびにシグナルの定量化を行い、これから、S字形用量反応曲線をプロットし、可能であれば、最大効果およびEC50値を推定した。
2.10.3およびC10-2抗体は両方とも、アルツハイマー病の脳の調製物からタウのごく一部を除去する。これは、総タウタンパク質含量中のタウのサブセットに対する選択性を示す。pS422タウに対する特異性を有するように設計された2.10.3は、総タウ量の最大で24%を除去する一方、C10-2は、総タウの最大で15%を除去する(図11を参照)。これは、pS396サブセットが、全ての他の因子が等しいタウのより小さいサブセットであると解釈され得る。あるいは、データは、2.10.3抗体がpS422に対して選択的であるより、C10-2抗体がpS396に対して選択的であると解釈され得る。
全てのC10-2変異体は、免疫枯渇アッセイにおいて同じ効率を有していた(図16を参照)。これらの結果は、導入された突然変異が、アルツハイマー病の脳に特有のタウへの機能的結合を変化させていないことを示す。
CamK2陽性ニューロン(rTg4510)中、tet-off応答因子下でヒト突然変異タウ(P301L 0N4R)を発現するトランスジェニックマウスを使用した。このモデルは、通常、3月齢でタウ病変を発生し始めるが、妊娠中および子が生まれてから最初の3週間にわたって母親にドキシサイクリンを供給することによって、病変は、より遅い段階で発生する(6月齢後に開始する)。ドキシサイクリンで予め処理されたマウスを、2月齢から開始して、15mg/kg/週で、mC10-2、hC10-2、2.10.3または対照抗体で長期的に処理した。2.5ヶ月の時点で、アルツハイマー病の脳抽出物を、海馬に注入した。マウス20匹に、吸入剤の吸入によって麻酔をかけ、定位フレームに固定した。頭蓋骨を露出させ、ブレグマおよびラムダが水平になるまで調整した。ブレグマの2mm側方(右)および2.4mm後方で、頭蓋骨に孔を空けた。10μlのシリンジのベベルチップ(SGE)を用いて、シーディング材料を、上記の配置で、脳表面の1.4mm前面に注入した。2μlの、実施例7に記載される抽出物を、その部位(1μl/分)にゆっくりと注入し、シリンジを5分間そのままにして置いてから、それを取り出した。創傷を縫うことによって閉じ、目を覚ますまでマウスを加熱した。マウスを3ヶ月間飼育してから殺処分し、かん流を4%で固定。マウスを、シーディングの3ヵ月後に殺処分するまで、抗体で処理した。
固定された脳を、NSA30において35μmの冠状断面へと切断し、6つ置きの切片を、タウもつれ(ガリアス銀染色)について染色した。陽性染色されたニューロン(細胞体)を、全ての脳の海馬の同側および反対側で計数した。海馬の全てのサブ領域が含まれていた。脳当たり8つの切片を計数した。結果は、8つの切片からの陽性ニューロンの合計を反映する。
試験の目的
タウ凝集体の細胞間伝播は、CNS内のアルツハイマー病の病変の発達および位相的な拡大に寄与することが示唆されている。インビトロシーディングモデルを確立し、それによって、HEK293細胞において発現された細胞内ヒトタウに、細胞外で適用された病理学的タウ凝集体を播種する。この試験の目的は、治療パラダイムにおいてシーディングした後のモノクローナルヒトC10.2および変異体の治療効果を評価および比較することであった。シーディングは、細胞内で発現されたタウの過リン酸化/ミスフォールディングを開始させる量の過リン酸化タウ(シード)の導入を意味することが意図される。
Aβの細胞外プラークおよびタウの神経内の対になったらせん状フィラメントの堆積は、アルツハイマー病の特徴である。タウの神経内封入体は、洗浄剤に不溶性の、過リン酸化された、アミロイド形態のタウから主に構成され、AD患者において、CNS内で凝集体の拡大を示唆する空間時間的パターンで堆積される。タウ凝集体は、プリオン様の機構で、インビボおよびインビトロの両方で、細胞間で伝播することが実験的に示されている。疾患の伝播に影響を与える細胞外の拡大のこの存在は、CNS浸透抗体を用いた免疫療法のための道を切り開くものである。
抗体C10-2(hC10.2)
抗体N32S(hC10.2 N32S)
抗体N32Q(hC10.2 N32Q)
抗体N32S、D55E(hC10.2 N32S D55E)
抗体N32Q、D55E(hC10.2 N32Q D55E)
抗体N32S、A101T(hC10.2 N32S A101T)
対照hIgG1(B12)
HEK293細胞に、hタウ-P301L(0N4R)を一過性にトランスフェクトした。
シーディング材料:12月齢のマウスに由来するTg4510ホモジネート(および対照)を、ビーズ均質化(bead homogenization)によって阻害剤なしでTBS中の10%のホモジネートとして均質化し、超音波処理した。ホモジネートを、15分間にわたって21000×gで回転させ、可溶性画分をシーディングに使用した。
データは、異なる2週間にわたって行われ、分析された4つの独立した生物学的反復のプールされたデータ+/-S.E.M.として表される。データは、テューキーの多重比較検定とともに一元配置ANOVAを用いて分析される(*P<0.05、**P<0.01、***P<0.001)。
hC10.2は、対照と比較して約40%だけ、シーディングおよび不溶性過リン酸化タウに対する減少の影響を有していた。全ての他の抗体は、同様またはhC10.2より優れた効果を示した。特に、hC10.2のN32SおよびN32S_A101T変異体は、より強い効果、凝集タウの45%および62%の減少を示した。N32S_A101T変異体は、hC10.2と比較して、凝集に対して大幅に強い効果を示した。
試験の目的
この試験は、変異体の電位差を明らかにするためにストレス条件に焦点を合わせて、本発明の抗体の基本的安定性の問題を評価するために行った。
全ての試料を、同一の出発条件(緩衝液、濃度および凝集体レベル)になるように最初に調製した。これは、試料の挙動のその後の発生に潜在的に影響し得る初期特性の差をなくし得る。対照を-80℃に保持し、ストレスを加えた試料(40℃)と並行して分析した。試料を、異なる時点で40℃から取り出し、SEC-uplc、液体クロマトグラフィー-質量分析法(LCMS)によるペプチドマッピングおよび示差走査蛍光定量法(DSF)によって、最後に同時に分析した。
抗体C10-2(hC10.2)
抗体N32S(hC10.2 N32S)
抗体N32Q(hC10.2 N32Q)
抗体N32S、D55E(hC10.2 N32S D55E)
抗体N32Q、D55E(hC10.2 N32Q D55E)
抗体N32S、A101(hC10.2 N32S A101T)
抗体A101T(hC10.2 A101T)
抗体D55E(hC10.2 D55E)
抗体N32Q、A101T(hC10.2 N32Q A101T)
試験の期間にわたって-80℃で貯蔵された抗体試料を、参照用に使用した。
モノクローナル抗体の安定性の側面は、製剤原料の製造、最終的な貯蔵および製剤化の側面のために重要である。この試験では、本発明者らは、明白な問題が候補のいずれかにおいて明らかであるかどうかを明らかにするために、凍結融解サイクル、高温および低pHによって抗体にストレスを与えた。
脱アミド化試験のために、試料を、1mlの試料中でバイアルに入れ、40℃でインキュベートする。所定の時点で、試料を-80℃にし、分析するまで貯蔵する。
該当する実際の残基についての詳細な情報を得るために、Asn残基の脱アミド化を、ペプチドレベルで試験する。したがって、標準的プロトコルを用いた還元およびアルキル化(ヨード酢酸)の後、mAbをブタトリプシンで消化する。ペプチドを、CSHT130 C18 1.7μmのカラムにおいて分離し、MSeモードで動作するXEVO QTOF(Waters)MS機器に導入した。一連の試験を通して、同一のパラメータを使用した。全ての時点からのペプチドマップを、BiopharmaLynxにおいて分析し、以下の制限を有して定量化した:明白に識別された脱アミド化ペプチドのみが含まれ、インソースフラグメントは含まれない。それぞれの識別されたペプチドの脱アミド化%を、経時的に監視する。
TUV検出器を備えたAcquity UPLC(waters)においてACQUITY UPLC(登録商標)BEH200 SEC 1.7μm 4.6×150mMのカラム上で、SECクロマトグラフィーによって、凝集を決定した。(泳動用緩衝液:Gibco PBS-Invitrogen #14190-094+0.1MのNaClで希釈された)100μg/mlに調整された20μlの試料を、0.4ml/分でカラムに適用し、定組成溶離によって6分間にわたって分離した。
hC10.2を、プロテインGカラムに適用し、標準条件を用いてpH2.8で溶離した。試料をpH2.8に保持し、アリコートを、時間0、15、30、60、120および180分の時点で取り出し、中和してから、PBS中で脱塩した。試料を、結合親和性、凝集および脱アミド化について分析した。
Asnの脱アミド化が、ペプチドLC:T2、HC:T36およびHC:T25によってカバーされるいくつかの主要でない部位および3つの主要な部位において観察される。これらにおいて、脱アミド化が時間とともに増加し、それぞれ75%、38%および28%で終了する。ペプチドHC:T36およびT25と対照的に、LC:T2ペプチドにおけるAsn残基(LC N32およびN34)は、インシリコ分析(配列モチーフ)に基づいて、脱アミド化しやすいと予測されなかったが、意外なことに、実際の実験では、それらは、hC10.2における他のAsn残基と明らかに区別される。このペプチドの増加した脱アミド化は、二重リン酸化ペプチドに対する結合活性の低下と相関し、脱アミド化およびIC50の間の機械的関係を示唆する。この観察は、hC10.2 LCにおけるAsn 残基32および/または34を変更すると、これらの部位における脱アミド化を減少させ得ることも示唆している。
この試験では、本発明者らは、40℃安定性試験について上述されるのと同じ方法でhC10.2を分析した。この場合のみ、トリプシンおよびLys-Cの混合物を用いて(Promega製品)、リジン残基における切断を最適化した。脱アミド化のさらなる部位または程度は観察されず、ここでも、最も顕著なペプチドは、LC-T2、HC-T25およびHC-T36であった。さらに、低pHで処理された試料においてIC50の変化は観察されなかった。
凝集のレベルは、全ての調製物において3%未満であり、凝集の程度の変化は、40℃で28日間にわたって観察されなかった。
rTg4510マウスからのタウシードの単離
rTg4510マウスは、テトラサイクリン-オペロン-レスポンダー(TRE)およびテトラサイクリン調整遺伝子発現系(tTA)からなるアクチベータ構築物の下流のヒトMAPT遺伝子におけるP301L突然変異を有する4R0Nタウを共発現する二重トランスジェニックマウスである。P301L突然変異は、染色体に関連するパーキンソニズム17(FTDP-17)を伴う前頭側頭型認知症を招く優性突然変異である。rTg4510マウスにおいて、P301L hタウの発現は、年齢に依存して、プレタングル(pre-tangle)および神経原線維変化(NFT)形成、ニューロンの損失および行動異常を含むタウ病変を誘発する。NFTは、対になったらせん状フィラメント(PHF)、ねじれたリボン(twisted ribbon)から構成される神経内タウ凝集体であり、または直線フィラメントは、洗浄剤に不溶性であり、主に、過リン酸化タウを含有する。過リン酸化は、タウが、成人健常脳に由来するタウより多くの部位においてリン酸化されること、および所与の部位について、通常のパーセンテージより高いタウ分子がリン酸化される(>8のリン酸化モル/タウモル)ことを意味する。NFTの解剖学的分布は、アルツハイマー病(AD)における認知低下ならびに正常な老化および軽度の認知機能障害における記憶力低下と相関する死後の病理組織学的特徴である。AD患者の脳におけるNFTの分布パターンは、非常に階層的であり、6つの段階に分けられている。NFT変化による脳における段階的な浸潤はまた、生化学的に確認されており、罹患領域にしたがって10段階に分類されている。AD脳に由来する異なるタウ種の生化学的特性評価は、元々、不溶性タウの単離のための1%のサルコシルを用いた分画プロトコルに基づいていた。この方法に基づいて、サルコシル不溶性ペレット(P3)画分において単離されるサルコシル不溶性過リン酸化タウ種が、PHF-タウとして定義され、生化学的なNFT同等物と見なされる。可溶性画分(S1)において単離される緩衝液可溶性過リン酸化タウ種は、非原線維オリゴマータウ種として定義され、生化学的なプレタングルタウ同等物と見なされる。rTg4510マウスにおいて、正常なモノマーリン酸化および非リン酸化ヒト4R0Nトランスジェニックタウが、可溶性画分(S1)中に存在し、SDS pageにおいて55kDaタウ種として視覚化される。P301L突然変異を有する過リン酸化4R0Nタウが、可溶性(S1)画分において、ならびにトリス-緩衝生理食塩水(TBS)可溶性沈殿物(S1p)およびサルコシル不溶性ペレット(P3)画分のみにおいて、64kDaおよび70kDaの移動度がシフトされたタウとして示される。P3において単離されるサルコシル不溶性64kDaおよび70kDaタウ種は、タウ原線維(PHF-タウ)および生化学的なNFT同等物である。S1におけるおよびTBS可溶性沈殿物画分(S1p)が富化された緩衝液可溶性64kDaおよび70kDaタウ種は、オリゴマータウであり、生化学的なプレタングルタウ同等物である。70kDaタウ種は、P301L突然変異体に対して特異的であり、FTDP-17患者の脳においても見られる。40週齢のrTg4510マウスに由来する脳組織を、50mMのトリス/HCl(pH7.4)、274mMのNaCl、および5mMのKClを含有する10体積のTBS中で均質化した。ホモジネートを、4℃で20分間にわたって27,000×gで遠心分離して、上清(S1)およびペレット(P1)画分を得た。TBS抽出性S1画分を、4℃で1時間にわたる150,000×gでの遠心分離によって、上清(S1s)および沈殿物(S1p)画分に分けた。S1pペレットを、10mMのトリス/HCl[pH8.0]中で、元のS1体積の5分の1に等しい体積になるまで再度懸濁させた。P1ペレットを、5体積の高塩/スクロース緩衝液(0.8MのNaCl、10%のスクロース、10mMのトリス/HCl、[pH7.4])中で再度均質化し、4℃で20分間にわたって27,000×gで遠心分離した。上清を収集し、37℃で1時間にわたってサルコシル(1%の最終濃度;Sigma)とともにインキュベートした後、4℃で1時間にわたって150,000×gで遠心分離して、P3画分と呼ばれるサルコシル不溶性ペレットを得た。P3ペレットを、10mMのトリス/HCl[pH8.0]中で、脳ホモジネートに使用される元の体積の半分に等しい体積になるまで再度懸濁させた。SDS-pageにおいて64および70kDaの過リン酸化タウとして特性評価されるrTg4510マウス脳に由来する病理学的タウは、それぞれTBS可溶性オリゴマーおよびサルコシル不溶性原線維タウとして、S1pおよびP3画分のみに存在していた。S1s画分は、SDS-pageにおいて55kDaタウとして示される正常な非リン酸化およびリン酸化タウを含有する。病理学的タウ、それぞれS1pおよびP3画分において単離される可溶性オリゴマーおよび不溶性原線維を、過リン酸化タウシードとして用いて、内因性モノマーヒトタウを、凝集タウの封入体中に動員し、rTg4510マウスから単離される初代皮質培養物におけるタウシーディングを誘導した。
マウス皮質ニューロン(CTX)を、E14~16日目に、rTg4510マウス胚から単離した。単一トランスジェニックtTAアクチベータマウスを、単一トランスジェニック突然変異体タウレスポンダーマウスと交配期を合わせた(time-mated)。妊娠した雌を、受胎後14~16日の時点で安楽死させ、胚は、tTAアクチベータ導入遺伝子についてプライマー対の5’-GATTAACAGCGCATTAGAGCTG-3’および5’-GCATATGATCAATTCAAGGCCGATAAG-3’、ならびに突然変異体タウレスポンダー導入遺伝子について5’-TGAACCAGGATGGCTGAGCC-3’および5’-TTGTCATCGCTTCCAGTCCCCG-3’を用いた脳DNAを有する遺伝子型であった一方、単離された胚皮質を、4℃で塩化カルシウム(BrainBits LLC)なしでHibernate E中に保持した。rTg4510マウス胚に由来する皮質を選択し、溶解されたニューロンを、0.13×106個の細胞/cm2(420,000個の細胞/ml、100μl/ウェル、96ウェルプレート)の密度で100μg/mlのポリ-L-リジン被覆皿において平板培養し、酸化防止剤、0.5mMのL-グルタミン、100U/mlのペニシリン、0.1mg/mlのストレプトマイシン(全ての溶液はGibco-BRL Invitrogen製)とともに2%のB-27補給剤が補充されたグリア調整Neurobasal培地中で培養した。グリア調整Neurobasal培地を、24時間のインキュベーションの後、コンフルエントおよび非増殖性初代マウス星状膠細胞培養物によって生成した。ニューロンを、培地の半分を新鮮なグリア調整Neurobasal培地と交換することによってインビトロで4日(DIV)の時点で供給し、その後、供給を、7日置きに行った。供給後DIV4で、神経培養物を、1μMのシトシンアラビノシドで処理して、細胞の増殖を停止させた。培養物中のグリア細胞の割合は、DIV15でグリア原線維酸性タンパク質(GFAP)に対する抗体によって評価した際、10%未満であった。rTg4510マウスに由来するCTXは、内因性マウスタウおよびトランスジェニックヒトタウ4R0Nを発現する。rTg4510マウスに由来するCTXは、SDS-pageにおいて55kDaタウバンドとして示される正常なヒトモノマー非リン酸化およびリン酸化タウのみを含有し;過リン酸化タウ種(64および70kDa)は、rTg4510マウスに由来する未処理のCTX中に存在しない。DIV7で、病理学的タウシード、それぞれS1pおよびP3画分において単離される可溶性オリゴマーまたは不溶性原線維過リン酸化タウのいずれかとともにCTXをインキュベートすることによって、タウシーディングを誘発した。完全な培地交換を、DIV11で導入して、病理学的タウシードの連続的な取り込みを防ぎ、CTXにおけるタウシーディングを、DIV15で測定した。タウシーディングは、SDS pageにおける64、70および140kDaのより高い分子量における移動度がシフトされたタウバンドとして示される凝集および過リン酸化タウの封入体中へのモノマー可溶性ヒトタウの動員によって特徴付けられた。過リン酸化タウシード、それぞれS1pおよびP3画分からの可溶性オリゴマーまたは不溶性原線維は、CTXにおいて同等にタウシーディングを誘発した。タウシーディングに対するタウ抗体の効果を調べるために、CTXを、40週齢のrTg4510マウスから単離される0.1μlのP3または0.2μlのS1p画分(0.2ngの総ヒトタウを含有する)および10μgの抗体(hC10.2、hC10.2_N32S、hC10.2_A101T_N32S、ヒトIgG対照)またはリン酸緩衝生理食塩水(PBS)の混合物で処理した。タウシード抗体混合物を、CTXへの添加の前に4℃で2時間プレインキュベートした。DIV11で、新鮮なグリア調整Neurobasal培地への完全な培地交換を行った。DIV15で、4℃で45分間にわたって200rpmで振とうしながら、ニューロンを、1%のプロテアーゼ阻害剤混合物(Roche)、1%のホスファターゼ阻害剤混合物IおよびII(Sigma)、および0.2%のBenzonase(Sigma))を含む氷冷triton溶解緩衝液(50mMのトリス、150mMのNaCl中1%のtriton X-100(pH7.6)に溶解させ、溶解物を、Cisbioインビトロ凝集アッセイにおいて使用し、タンパク質含量を、製造業者の指示にしたがって、ビシンコニン酸(BCA)アッセイによって決定した。Cisbio製のタウ凝集アッセイは、蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)においてドナー(Tb3+コンジュゲート)およびアクセプタ(d2コンジュゲート)抗体の両方について同じ抗体を用いた時間分解蛍光に基づいており、製造業者の指示にしたがって行った。簡潔に述べると、9μlの試料を、9μlの抗体混合物と混合し、20時間インキュベートした。プレートを、Pherastaプレートリーダーで読み取って、時間分解蛍光(励起光のスイッチング後に測定/積分される(integrated)FRETシグナル)を評価した。アッセイは、rTg4510マウスに由来する脳物質において、および高い特異性および感度でrTg4510胚から単離されるタウ播種CTXに由来するニューロン溶解物において、タウオリゴマーおよび原線維の両方のタウ凝集を測定する。結果が図21に見られる。ヒトIgG対照抗体とのP3またはS1pシードのインキュベーションは、播種CTXから、PBSとのP3またはS1pシードのインキュベーションと同様のタウ凝集シグナルをもたらした。PBSおよびヒトIgG対照抗体からのシグナルを平均し、100%タウ凝集として設定した。タウ抗体hC10.2、hC10.2N32SおよびhC10.2A101T-N32Sは、DIV15で、P3およびS1p誘発タウシーディングの両方からのタウ凝集シグナルを著しく減少させた。2つの個々の実験からの結果を要約した。hC10.2抗体は、P3およびS1p誘発タウシーディングを23%だけ減少させた。変異体hC10.2N32SおよびhC10.2A101T-N32Sは、P3およびS1p誘発タウシーディングを、それぞれ41~53%および48~60%だけ減少させた。変異体hC10.2N32SおよびhC10.2A101T-N32Sは、それぞれオリゴマーまたは原線維タウからなるS1pまたはP3からの過リン酸化タウシードによって誘発されるrTg4510に由来するCTXにおけるタウシーディングを減少させる際に、hC10.2と比較して優れていた。
hC10-2_N32S_A101Tの静脈内(i.v.)注射後のrTg4510マウスにおけるタウ構造の用量依存的装飾
方法:
12月齢のrTg4510マウス。これらのトランスジェニックマウスは、CamK2陽性ニューロン中、tet-off応答因子下でヒト変異タウ(P301L 0N4R)を発現し、6月齢以降に顕著なタウ過リン酸化およびもつれ形成を示す。さらに、神経変性が、強い病変を有する領域において、rTg4510マウスの12月齢の時点で存在する。マウスに、80mg/kg、20mg/kg、8mg/kgおよび0.8mg/kgの用量でhC10-2_N32S抗体を、尾静脈を介して単回静脈内(i.v.)注射した。マウス1匹につき100μLの体積を注射した。注射の3日後、マウスに、PBSを2分間灌流させた後、4%のパラホルムアルデヒドを10分間灌流させた。脳を、30%のスクロース中で凍結防止し、40ミクロンの自由に浮遊する低温切開片に切り分けた。切片を、20分間にわたってPBS/1%のBSA/0.3%のTriton X-100中の5%の正常なブタ血清とともにインキュベートし、PBS中で洗浄し、最後に、1:200でAlexaFluor488コンジュゲート二次抗ヒトIgG(#709-545-149;Jackson ImmunoResearch Laboratories,West Grove,USA)とともにインキュベートした。切片を、PBS中で洗浄し、取り付け、蛍光顕微鏡によって調べた。
hC10-2_N32Sの静脈内(i.v.)注射により、老化したrTg4510マウス脳の主に海馬および皮質において標的構造へのインビボ結合が生じた(図1)。観察される陽性構造の数は、個々のrTg4510動物によって異なっていた。rTg4510脳における陽性シグナルは、細胞内染色として容易に見えず、神経変性の過程で放出される細胞外のタウ物質を表し得る。半定量的採点によって、最も高いシグナル(蛍光強度および陽性構造の数)が、20および80mg/kgで投与された全てのマウスにおいて検出された(表6)。標識された構造が、4匹中3匹のマウスにおいて8mg/kgで存在したが、20および80mg/kgにおけるより明らかに低いレベルであった。0.8mg/kgの静脈注射は、適用される視覚化方法を用いてバックグラウンド上にシグナルを生じなかった。まとめると、これらのデータは、hC10-2_N32S抗体が、用量依存的に、脳実質中に浸透することができ、インビボでrTg4510マウスにおける標的を特異的に装飾することを示唆している。図22。
シードの調製
ADドナーに由来する凍結された皮質組織試料を、Tissue Solutions(Glasgow,UK)から入手した。脳組織を秤量し、滅菌冷PBS(脳試料の10倍の体積)中でナイフホモジザイナーを用いて均質化した。次に、ホモジネートを、出力2に設定されたBranson sonifierにおいて5×0.9秒パルスによって超音波処理した。ホモジネートを、4℃で5分間にわたって3000gで遠心分離し、上清を分割し、ドライアイス上で急速凍結させ、使用するまで-80℃で貯蔵した。
CamKII陽性ニューロン(rtg4510)中で、テトラサイクリン制御性トランス活性化因子下でヒト変異タウ(P301L 0N4R)を発現するトランスジェニックマウスを使用した。このモデルは、通常、3~4月齢でタウ病変を発生し始める。妊娠中の母親および子が生まれてから最初の3週間にわたってドキシサイクリンを供給することによって、病変は、より遅い段階(6月齢後)で発生する。試験に使用される、ドキシサイクリンで予め処理されたマウスは、シーディングの時点で2.5月齢であった。
抗体を、滅菌PBS中1.5mg/mlの濃度で調製し、1つの投与時点に十分な抗体を含むアリコートにした。アリコートを、使用されるまで4℃で貯蔵した。2月齢から5.5月齢で殺処分されるまで、マウスに、抗体(10ml/kgに等しい15mg/kg)の腹腔内(IP)投与を週に1回与えた。以下の抗体を使用した:対照ヒトB12-IgGI、hC10-2、hC10-2_N32SおよびhC10-2_N32S_A101T。
3回目の抗体投与を与えた直後に、イソフルラン吸入によってマウスに麻酔をかけ、定位フレームに固定した。頭蓋骨を露出させ、ブレグマおよびラムダが水平になるまで位置を調整した。ブレグマの2mm側方(右)および2.4mm後方で、頭蓋骨に孔を空けた。26ゲージのベベルチップ(SGE)を備えた10μlのシリンジのを用いて、シーディング材料を、脳表面の1.4mm前面に注入した。
固定された脳を、MultiBrain(登録商標)技術を用いてNeuroscience Associates(Knoxville,TN)で処理した。ブロック当たり最大で25のマウス脳を一緒に埋め込み、脳全体を通して冠状面において35μmの凍結切片にした。6つ置きの切片を、Gallyas銀染色で染色して、神経原線維変化を明らかにした。切片を取り付け、カバースリップし、Gallyas銀陽性ニューロン(細胞体)を、全ての脳の海馬の注入側で計数した。海馬の全てのサブ領域が含まれていた。脳当たり8つの切片を計数した。結果は、8つの切片からの陽性ニューロンの合計を反映する。
hC10-2、hC10-2_N32SおよびhC10-2_N32S_A101Tは全て、注射された海馬においてタウもつれのシーディングを著しく減少させた(一元配置anovaおよびテューキーの多重比較検定)。対照処理マウスと比較して、hC10-2:50%、hC10-2_N32S:47%およびhC10-2_N32S_A101T:60%。図23。
本発明は以下の態様を含み得る。
[1]
(a)配列番号3、配列番号31;配列番号32;配列番号33;配列番号34;配列番号35;配列番号36;配列番号37;配列番号38;配列番号40;および配列番号46からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖CDR1;
(b)配列番号4;配列番号41;および配列番号47のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR2;
(c)配列番号5;配列番号42;および配列番号48のアミノ酸配列を含む軽鎖CDR3;
(d)配列番号6;配列番号43;配列番号49;配列番号52;および配列番号55のアミノ酸配列を含む重鎖CDR1;
(e)配列番号7;配列番号28;配列番号29;配列番号30;配列番号44;配列番号50;配列番号53;および配列番号56からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖CDR2;および
(f)配列番号8、配列番号39;配列番号45;配列番号51;配列番号54;および配列番号57からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖CDR3
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
[2]
(a)配列番号12;配列番号16;配列番号17;配列番号18;配列番号19;配列番号20;配列番号21;配列番号22および配列番号23からなる群から選択される軽鎖;および
(b)配列番号11;配列番号13;配列番号14;配列番号15;配列番号24;配列番号25;配列番号26;および配列番号27からなる群から選択される重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
[3]
(a)前記軽鎖が配列番号12であり;
(b)前記重鎖が、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号24、配列番号25、配列番号26および配列番号27からなる群から選択される、請求項1または2に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
[4]
(a)前記軽鎖が、配列番号16;配列番号17;配列番号18;配列番号19;配列番号20;配列番号21;配列番号22および配列番号23からなる群から選択され;
(b)前記重鎖が配列番号11である、先行請求項のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
[5]
(a)配列番号31のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
[6]
(a)配列番号16のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項1または5に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
[7]
(a)配列番号32のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、請求項1~4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
[8]
(a)配列番号17のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項7に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
[9]
(a)配列番号33のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、請求項1~4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
[10]
(a)配列番号18のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項9に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
[11]
(a)配列番号34のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、請求項1~4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
[12]
(a)配列番号19のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項11に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
[13]
(a)配列番号3のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、請求項1~4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
[14]
(a)配列番号12のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号24のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項13に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
[15]
(a)配列番号31のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR1;
(b)配列番号4のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR2;
(c)配列番号5のアミノ酸配列を有する軽鎖CDR3;
(d)配列番号6のアミノ酸配列を有する重鎖CDR1;
(e)配列番号7のアミノ酸配列を有する重鎖CDR2;および
(f)配列番号39のアミノ酸配列を有する重鎖CDR3
を含む、請求項1~4に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
[16]
(a)配列番号16のアミノ酸配列を含む軽鎖;
(b)配列番号24のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項15に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
[18]
請求項1~16のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはそのエピトープ結合フラグメントと、薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物。
[17]
アルツハイマー病、嗜銀顆粒病(AGD)、精神病、特に、ADに起因する精神病またはADの患者における精神病、ADに起因するアパシーまたはADの患者におけるアパシー、レビー小体型認知症の患者の精神医学的症状、進行性核上性まひ(PSP)、前頭側頭型認知症(FTDまたはその変異型)、TBI(急性または慢性外傷性脳損傷)、大脳皮質基底核変性症(CBD)、ピック病、原発性加齢性タウオパチー(PART)、神経原線維変化優位型老年性認知症、拳闘家認知症、慢性外傷性脳症、脳卒中、脳卒中の回復、パーキンソン病に関連する神経変性、染色体に関連するパーキンソニズム、リティコ-ボディグ病(グアムパーキンソン認知症複合)、神経節膠腫および神経節細胞腫、髄膜血管腫症、脳炎後パーキンソニズム、亜急性硬化性全脳炎、ハンチントン病、鉛脳症、結節性硬化症、ハレルフォルデン・スパッツ病およびリポフスチン沈着症からなる群から選択されるタウオパチーを治療するのに使用するための、請求項1~16のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
[18]
アルツハイマー病の治療に使用するための、請求項1~16のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
[19]
アルツハイマー病、嗜銀顆粒病(AGD)、精神病、特に、ADに起因する精神病またはADの患者における精神病、ADに起因するアパシーまたはADの患者におけるアパシー、レビー小体型認知症の患者の精神医学的症状、進行性核上性まひ(PSP)、前頭側頭型認知症(FTDまたはその変異型)、TBI(急性または慢性外傷性脳損傷)、大脳皮質基底核変性症(CBD)、ピック病、原発性加齢性タウオパチー(PART)、神経原線維変化優位型老年性認知症、拳闘家認知症、慢性外傷性脳症、脳卒中、脳卒中の回復、パーキンソン病に関連する神経変性、染色体に関連するパーキンソニズム、リティコ-ボディグ病(グアムパーキンソン認知症複合)、神経節膠腫および神経節細胞腫、髄膜血管腫症、脳炎後パーキンソニズム、亜急性硬化性全脳炎、ハンチントン病、鉛脳症、結節性硬化症、ハレルフォルデン・スパッツ病およびリポフスチン沈着症からなる群から選択される疾患を治療するための薬剤として使用するための、請求項1~16のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
[20]
被験体におけるアルツハイマー病または他のタウオパチーを治療、診断またはイメージングする方法であって、治療的に有効な量の請求項1~16のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントを、前記被験体に投与する工程を含む方法。
[21]
前記治療が、長期である、請求項20に記載の方法。
Claims (6)
- (a)配列番号16のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号11のアミノ酸配列を含む重鎖、
または
(a)配列番号16のアミノ酸配列を含む軽鎖;および
(b)配列番号24のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体。 - (a)配列番号16のアミノ酸配列を有する軽鎖;および
(b)配列番号11のアミノ酸配列を有する重鎖
を含む、請求項1に記載のモノクローナル抗体。 - (a)配列番号16のアミノ酸配列を有する軽鎖;および
(b)配列番号24のアミノ酸配列を有する重鎖
を含む、請求項1に記載のモノクローナル抗体。 - 請求項1~3のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体と、薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物。
- アルツハイマー病、嗜銀顆粒病(AGD)、精神病、特に、ADに起因する精神病またはADの患者における精神病、ADに起因するアパシーまたはADの患者におけるアパシー、レビー小体型認知症の患者の精神医学的症状、進行性核上性まひ(PSP)、前頭側頭型認知症(FTDまたはその変異型)、TBI(急性または慢性外傷性脳損傷)、大脳皮質基底核変性症(CBD)、ピック病、原発性加齢性タウオパチー(PART)、神経原線維変化優位型老年性認知症、拳闘家認知症、慢性外傷性脳症、脳卒中、脳卒中の回復、パーキンソン病に関連する神経変性、染色体に関連するパーキンソニズム、リティコ-ボディグ病(グアムパーキンソン認知症複合)、神経節膠腫および神経節細胞腫、髄膜血管腫症、脳炎後パーキンソニズム、亜急性硬化性全脳炎、ハンチントン病、鉛脳症、結節性硬化症、ハレルフォルデン・スパッツ病およびリポフスチン沈着症からなる群から選択されるタウオパチーを治療するための、請求項1~3のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体を含む医薬組成物、または請求項4に記載の医薬組成物。
- アルツハイマー病の治療のための、請求項4または5に記載の医薬組成物。
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