JP7022993B2 - 多価かつ多重特異性の４１ｂｂ結合融合タンパク質 - Google Patents

多価かつ多重特異性の４１ｂｂ結合融合タンパク質 Download PDF

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Description

関連出願
本出願は、２０１６年１月１１日に出願された米国仮特許出願第６２／２７７，０２８号の利益を主張するものであり、この各々の内容全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
本発明は一般に、ＴＮＦ受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）のメンバーである４１ＢＢに特異的に係合する分子に関する。より具体的には、本発明は、少なくとも４１ＢＢに結合する多価かつ／または多重特異性の分子に関する。
腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーは、いくつかの構造的に関連した細胞表面受容体からなる。多量体リガンドによる活性化は、これらの受容体のうちの多くの一般的な特徴である。ＴＮＦＲＳＦの多くのメンバーは、適切に活性化された場合、多数の病理において治療的有用性を有する。この受容体ファミリーのアゴニズムはしばしば、より高次のクラスター化を必要とし、従来の二価抗体は、この目的のためには理想的ではない。したがって、ＴＮＦＲＳＦのより強力なアゴニスト分子に対する治療的必要性が存在する。
本開示は、少なくとも４１ＢＢ（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー４（ＴＮＦＲＳＦ９）及び／またはＣＤ１３７としても知られる）に結合する、多価かつ多重特異性のＴＮＦ受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）結合融合ポリペプチドを提供する。「４１ＢＢ」という用語の使用は、非限定的な例として、４１－ＢＢ及び／または４－１ＢＢなどのそのいかなる変化形も包含することが意図され、全ての変化形は、本明細書において互換的に使用される。少なくとも４１ＢＢに結合するこれらの分子は、本明細書において「４１ＢＢ標的化分子」または「４１ＢＢ標的化融合体」または「４１ＢＢ標的化タンパク質」または「４１ＢＢ標的化融合ポリペプチド」または「４１ＢＢ標的化融合タンパク質」と呼ばれる。いくつかの実施形態において、４１ＢＢ標的化分子は、多価分子、例えば、多価４１ＢＢ標的化融合タンパク質である。いくつかの実施形態において、４１ＢＢ標的化分子は、多重特異性分子、例えば、多重特異性４１ＢＢ標的化融合タンパク質である。いくつかの実施形態において、４１ＢＢ標的化分子は、多価かつ多重特異性の分子、例えば、多価かつ多重特異性の４１ＢＢ標的化融合タンパク質である。別段具体的に示されない限り、本明細書で使用される場合、「融合タンパク質」または「融合ポリペプチド」または「４１ＢＢ標的化融合タンパク質」または「４１ＢＢ標的化融合ポリペプチド」という用語は、多価融合タンパク質、多重特異性融合タンパク質、または多価かつ多重特異性の融合タンパク質を含むが、これらに限定されない、本開示の任意の融合タンパク質の実施形態を指す。
本開示はまた、少なくともプログラム死リガンド１（ＰＤＬ１）（ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２７４、Ｂ７ホモログ１、及び／またはＢ７－Ｈ１としても知られる）に結合する、多価かつ多重特異性の融合ポリペプチドも提供する。「ＰＤＬ１」という用語の使用は、非限定的な例として、ＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤＬ－１などのそのいかなる変化形も包含することが意図され、全ての変化形は、本明細書において互換的に使用される。少なくともＰＤＬ１に結合するこれらの分子は、本明細書において「ＰＤＬ１標的化分子」または「ＰＤＬ１標的化融合体」または「ＰＤＬ１標的化タンパク質」または「ＰＤＬ１標的化融合ポリペプチド」または「ＰＤＬ１標的化融合タンパク質」と呼ばれる。いくつかの実施形態において、ＰＤＬ１標的化分子は、多価分子、例えば、多価ＰＤＬ１標的化融合タンパク質である。いくつかの実施形態において、ＰＤＬ１標的化分子は、多重特異性分子、例えば、多重特異性ＰＤＬ１標的化融合タンパク質である。いくつかの実施形態において、ＰＤＬ１標的化分子は、多価かつ多重特異性の分子、例えば、多価かつ多重特異性のＰＤＬ１標的化融合タンパク質である。別段具体的に示されない限り、本明細書で使用される場合、「融合タンパク質」または「融合ポリペプチド」または「ＰＤＬ１標的化融合タンパク質」または「ＰＤＬ１標的化融合ポリペプチド」という用語は、多価融合タンパク質、多重特異性融合タンパク質、または多価かつ多重特異性の融合タンパク質を含むが、これらに限定されない、本開示の任意の融合タンパク質の実施形態を指す。
本開示はまた、少なくともＰＤＬ１及び４１ＢＢに結合する、多価かつ多重特異性の融合ポリペプチドも提供する。少なくともＰＤＬ１に結合するこれらの分子は、本明細書において「ＰＤＬ１×４１ＢＢ標的化分子」または「ＰＤＬ１×４１ＢＢ標的化融合体」または「ＰＤＬ１×４１ＢＢ標的化タンパク質」または「ＰＤＬ１×４１ＢＢ標的化融合ポリペプチド」または「ＰＤＬ１×４１ＢＢ標的化融合タンパク質」と呼ばれる。いくつかの実施形態において、ＰＤＬ１×４１ＢＢ標的化分子は、多価分子、例えば、多価ＰＤＬ１×４１ＢＢ標的化融合タンパク質である。いくつかの実施形態において、ＰＤＬ１×４１ＢＢ標的化分子は、多重特異性分子、例えば、多重特異性ＰＤＬ１×４１ＢＢ標的化融合タンパク質である。いくつかの実施形態において、ＰＤＬ１×４１ＢＢ標的化分子は、多価かつ多重特異性の分子、例えば、多価かつ多重特異性のＰＤＬ１標的化融合タンパク質である。別段具体的に示されない限り、本明細書で使用される場合、「融合タンパク質」または「融合ポリペプチド」または「ＰＤＬ１×４１ＢＢ標的化融合タンパク質」または「ＰＤＬ１×４１ＢＢ標的化融合ポリペプチド」という用語は、多価融合タンパク質、多重特異性融合タンパク質、または多価かつ多重特異性の融合タンパク質を含むが、これらに限定されない、本開示の任意の融合タンパク質の実施形態を指す。
いくつかの実施形態において、多価かつ／または多重特異性の融合タンパク質は、少なくとも４１ＢＢに結合する。ＤＲ４、ＤＲ５、ＧＩＴＲ、及びＯＸ４０に対する抗体の活性に、Ｆｃ－ガンマ受容体（ＦｃγＲ）が必要であることによって証明されるように、ＴＮＦ受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）の従来の抗体標的化メンバーは、十分なアゴニスト活性を達成するために外因的架橋を必要とすることが示されている（Ｉｃｈｉｋａｗａ ｅｔ ａｌ２００１ａｌ Ｎａｔ．Ｍｅｄ．７，９５４－９６０、Ｌｉ ｅｔ ａｌ２００８Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．Ｒｅｓ．６９，６９－８２、Ｐｕｋａｃ ｅｔ ａｌ２００５Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ９２，１４３０－１４４１、Ｙａｎｄａ ｅｔ ａｌ２００８Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌ．１９，１０６０－１０６７、Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ２００７Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔ．２５１：１４６－１５７、Ｂｕｌｌｉａｒｄ ｅｔ ａｌ２０１３ＪＥＭ２１０（９）：１６８５、Ｂｕｌｌｉａｒｄ ｅｔ ａｌ２０１４Ｉｍｍｕｎｏｌ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ９２：４７５－４８０）。ＦｃγＲを介した架橋に加えて、オリゴマーリガンドまたは抗体結合主体（例えば、タンパク質Ａ及び二次抗体）の添加を含む、他の外因的要因が、抗ＴＮＦＲＳＦ抗体クラスター化及び下流シグナル伝達を増強することが実証されている。例えば、ＤＲ５リガンドＴＲＡＩＬの添加は、抗ＤＲ５抗体の能力を誘導するアポトーシスを増強した（Ｇｒａｖｅｓ ｅｔ ａｌ２０１４Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ２６：１７７－１８９）。これらの発見は、二量体を超えるＴＮＦＲＳＦのクラスター化に対する必要性を示唆している。
本開示は、２つ以上のＴＮＦＲＳＦ結合ドメイン（ＴＢＤ）を含み、少なくとも１つのＴＢＤが４１ＢＢに結合する、多価ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態において、本開示の融合タンパク質は、新生物の治療において有用性を有する。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、２つ以上の異なるＴＢＤを含有し、各ＴＢＤは、４１ＢＢに結合する。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、４１ＢＢに結合するＴＢＤの複数の複製を含有する。例えば、いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、４１ＢＢに結合するＴＢＤの少なくとも２つの複製を含有する。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、４１ＢＢに結合するＴＢＤの少なくとも３つの複製を含有する。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、４１ＢＢに結合するＴＢＤの少なくとも４つの複製を含有する。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、４１ＢＢに結合するＴＢＤの少なくとも５つの複製を含有する。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、４１ＢＢに結合するＴＢＤの少なくとも６つの複製を含有する。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、４１ＢＢに結合するＴＢＤの少なくとも６つ以上の複製を含有する。
他の実施形態において、本開示の融合タンパク質は、４１ＢＢ、ならびに第２のＴＮＦＲＳＦメンバー、例えば、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＴＮＦＲ２、及び／またはＣＤ４０に結合する。これらの実施形態において、本開示の融合タンパク質は、免疫細胞を調節して、腫瘍破壊の増強をもたらす。他の実施形態において、本開示の融合タンパク質は、炎症性病態の治療において有用性を有する。これらの実施形態において、本開示の融合タンパク質は、免疫細胞を調節して、炎症性傷害の減衰をもたらす。例えば、特異的刺激ＴＮＦＲ２は、Ｔｒｅｇ増殖を増強して、免疫抑制をもたらすことができる。
本開示の融合タンパク質は、非架橋二価抗体と比較して、増強されたＴＮＦＲＳＦメンバーのクラスター化が可能である。本開示の融合タンパク質によって媒介されるＴＮＦＲＳＦメンバーのクラスター化の増強は、非架橋二価抗体と比較して、増強されたＴＮＦＲＳＦ依存性シグナル伝達を誘導する。ほとんどの実施形態において、融合タンパク質は、３つ以上、例えば、３つ、４つ、５つ、または６つのＴＢＤを組み込むだろう。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、多重特異性であり、ＴＢＤと、第２の抗原に対して指向された結合ドメインとを含有する。これらの実施形態において、第２の抗原に対する結合は追加の架橋機能を提供することができ、ＴＮＦＲＳＦ活性化が１つまたは２つのＴＢＤのみによって達成され得る。これらの実施形態において、ＴＮＦＲＳＦシグナル伝達は、第２の抗原の存在によって増強され、集中される。これらの多重特異性ＴＢＤ含有融合タンパク質は、所与のＴＮＦＲＳＦメンバーの条件付きシグナル伝達を達成するために有用な手段である。
これらの実施形態において、第２の抗原が同時係合されない限り、ＴＢＤによるＴＮＦＲＳＦメンバーに対する結合は、最小のシグナル伝達を誘導する。例えば、本開示の多重特異性融合タンパク質は４１ＢＢ及びＰＤ－Ｌ１に結合することができ、融合タンパク質がＰＤ－Ｌ１発現細胞に結合するとき、４１ＢＢ依存性シグナル伝達は大いに増強される。別の例において、本開示の多重特異性融合タンパク質は４１ＢＢ及び葉酸受容体アルファ（ＦＲα）に結合することができ、融合タンパク質がＦＲα発現細胞に結合するとき、４１ＢＢ依存性シグナル伝達は大いに増強される。
本開示は、４１ＢＢに特異的に結合する単離されたポリペプチドを提供する。いくつかの実施形態において、単離されたポリペプチドは、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ＶＮＡＲ、またはＶＨＨを含む、抗体または抗体フラグメントに由来する。いくつかの実施形態において、単離されたポリペプチドは、ヒトまたはヒト化ｓｄＡｂである。ｓｄＡｂフラグメントは、ＶＨＨ、ＶＮＡＲ、操作されたＶＨまたはＶＫドメインに由来し得る。ＶＨＨは、ラクダ重鎖のみ抗体から生成され得る。ＶＮＡＲは、軟骨魚類重鎖のみ抗体から生成され得る。界面操作及び特定の生殖系列ファミリーの選択を含む、従来ヘテロ二量体のＶＨ及びＶＫドメインから単量体ｓｄＡｂを生成するための様々な方法が実装されている。他の実施形態において、単離されたポリペプチドは、例えば、設計アンキリン反復タンパク質（ｄａｒｐｉｎ）、アビマー、アンチカリン／リポカリン、センチリン、及びフィノマーであるが、これらに限定されない、非抗体足場タンパク質に由来する。
いくつかの実施形態において、単離されたポリペプチドは、配列番号１６、２０、２３、２５、２９、３３、３９、３３～４１、４３、４５～４７、４９、５１、５３、５４、５６、５８～６０、６２、６５、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、及び８０～８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、単離されたポリペプチドは、配列番号３３、３９、３３～４１、４３、４５～４７、４９、５１、５３、５４、５６、５８～６０、６２、６５、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、及び８０～８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、単離されたポリペプチドは、配列番号１６、２０、２３、２５、２９、３３、３９、３３～４１、４３、４５～４７、４９、５１、５３、５４、５６、５８～６０、６２、６５、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、及び８０～８３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、単離されたポリペプチドは、配列番号３３、３９、３３～４１、４３、４５～４７、４９、５１、５３、５４、５６、５８～６０、６２、６５、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、及び８０～８３からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、単離されたポリペプチドは、配列番号１７、２１、２６、３０、５０、６５、及び６９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、配列番号１８、２７、３１、４２、４４、４８、５２、６１、６３、７１、７３、７５、７７、及び７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、配列番号１９、２２、２４、２８、３２、５５、及び５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）とを含む。
本開示は、２つ以上の結合ドメイン（ＢＤ）を含み、少なくとも１つのＢＤがＰＤＬ１に結合する、多価融合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態において、本開示の融合タンパク質は、新生物の治療において有用性を有する。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、２つ以上の異なるＢＤを含有し、各ＢＤは、ＰＤＬ１に結合する。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、ＰＤＬ１に結合するＢＤの複数の複製を含有する。例えば、いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、ＰＤＬ１に結合するＢＤの少なくとも２つの複製を含有する。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、ＰＤＬ１に結合するＢＤの少なくとも３つの複製を含有する。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、ＰＤＬ１に結合するＢＤの少なくとも４つの複製を含有する。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、ＰＤＬ１に結合するＢＤの少なくとも５つの複製を含有する。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、ＰＤＬ１に結合するＢＤの少なくとも６つの複製を含有する。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、ＰＤＬ１に結合するＢＤの少なくとも６つ以上の複製を含有する。
本開示は、４１ＢＢに特異的に結合する単離されたポリペプチドを提供する。いくつかの実施形態において、単離されたポリペプチドは、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ＶＮＡＲ、またはＶＨＨを含む、抗体または抗体フラグメントに由来する。いくつかの実施形態において、単離されたポリペプチドは、ヒトまたはヒト化ｓｄＡｂである。ｓｄＡｂフラグメントは、ＶＨＨ、ＶＮＡＲ、操作されたＶＨまたはＶＫドメインに由来し得る。ＶＨＨは、ラクダ重鎖のみ抗体から生成され得る。ＶＮＡＲは、軟骨魚類重鎖のみ抗体から生成され得る。界面操作及び特定の生殖系列ファミリーの選択を含む、従来ヘテロ二量体のＶＨ及びＶＫドメインから単量体ｓｄＡｂを生成するための様々な方法が実装されている。他の実施形態において、単離されたポリペプチドは、例えば、設計アンキリン反復タンパク質（ｄａｒｐｉｎ）、アビマー、アンチカリン／リポカリン、センチリン、及びフィノマーであるが、これらに限定されない、非抗体足場タンパク質に由来する。
いくつかの実施形態において、単離されたポリペプチドは、配列番号１００、１０４、１０８、１１２、１１４、１１６、及び１１９～１２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、単離されたポリペプチドは、配列番号１１９～１２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、単離されたポリペプチドは、配列番号１００、１０４、１０８、１１２、１１４、１１６、及び１１９～１２４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、単離されたポリペプチドは、配列番号１１９～１２４からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、単離されたポリペプチドは、配列番号１０１、１０５、及び１０９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、配列番号１０２、１０６、１１０、及び１１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、配列番号１０３、１０７、１１１、１１３、１１５、及び１１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）とを含む。
いくつかの実施形態において、本開示は、少なくとも４１ＢＢ及びＰＤＬ１に特異的に結合する単離されたポリペプチドを提供する。いくつかの実施形態において、単離されたポリペプチド中の各結合ドメイン（ＢＤ）は、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ＶＮＡＲ、またはＶＨＨを含む、抗体または抗体フラグメントに由来する。いくつかの実施形態において、各ＢＤは、ヒトまたはヒト化ｓｄＡｂである。ｓｄＡｂフラグメントは、ＶＨＨ、ＶＮＡＲ、操作されたＶＨまたはＶＫドメインに由来し得る。ＶＨＨは、ラクダ重鎖のみ抗体から生成され得る。ＶＮＡＲは、軟骨魚類重鎖のみ抗体から生成され得る。界面操作及び特定の生殖系列ファミリーの選択を含む、従来ヘテロ二量体のＶＨ及びＶＫドメインから単量体ｓｄＡｂを生成するための様々な方法が実装されている。他の実施形態において、単離されたポリペプチドは、例えば、設計アンキリン反復タンパク質（ｄａｒｐｉｎ）、アビマー、アンチカリン／リポカリン、センチリン、及びフィノマーであるが、これらに限定されない、非抗体足場タンパク質に由来する。
いくつかの実施形態において、単離されたポリペプチドは、配列番号１６、２０、２３、２５、２９、３３、３９、３３～４１、４３、４５～４７、４９、５１、５３、５４、５６、５８～６０、６２、６５、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、及び８０～８３からなる群から選択される４Ｂ１１に結合する第１のアミノ酸配列と、配列番号１００、１０４、１０８、１１２、１１４、１１６、及び１１９～１２４からなる群から選択されるＰＤＬ１に結合する第２のアミノ酸配列とを含む。
いくつかの実施形態において、単離されたポリペプチドは、配列番号３３、３９、３３～４１、４３、４５～４７、４９、５１、５３、５４、５６、５８～６０、６２、６５、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、及び８０～８３からなる群から選択される４Ｂ１１に結合する第１のアミノ酸配列と、配列番号１１９～１２４からなる群から選択されるＰＤＬ１に結合する第２のアミノ酸配列とを含む。
いくつかの実施形態において、単離されたポリペプチドは、配列番号１６、２０、２３、２５、２９、３３、３９、３３～４１、４３、４５～４７、４９、５１、５３、５４、５６、５８～６０、６２、６５、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、及び８０～８３からなる群から選択される４Ｂ１１に結合するアミノ酸配列と少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である第１のアミノ酸配列と、配列番号１００、１０４、１０８、１１２、１１４、１１６、及び１１９～１２４からなる群から選択されるＰＤＬ１に結合するアミノ酸配列と少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である第２のアミノ酸配列とを含む。
いくつかの実施形態において、単離されたポリペプチドは、配列番号３３、３９、３３～４１、４３、４５～４７、４９、５１、５３、５４、５６、５８～６０、６２、６５、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、及び８０～８３からなる群から選択される４Ｂ１１に結合するアミノ酸配列と少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である第１のアミノ酸配列と、配列番号１１９～１２４からなる群から選択されるＰＤＬ１に結合するアミノ酸配列と少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である第２のアミノ酸配列とを含む。
いくつかの実施形態において、単離されたポリペプチドは、（ｉ）４Ｂ１１に結合し、配列番号１７、２１、２６、３０、５０、６５、及び６９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、配列番号１８、２７、３１、４２、４４、４８、５２、６１、６３、７１、７３、７５、７７、及び７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、配列番号１９、２２、２４、２８、３２、５５、及び５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）とを含む、第１のアミノ酸配列、ならびに（ｉｉ）ＰＤＬ１に結合し、配列番号１０１、１０５、及び１０９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１０２、１０６、１１０、及び１１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１０３、１０７、１１１、１１３、１１５、及び１１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む、第２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、本開示の結合ドメイン（ＢＤ）、例えば、４１ＢＢ－結合ドメイン及び／またはＰＤＬ１－結合ドメインは、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ＶＮＡＲ、またはＶＨＨを含む、抗体または抗体フラグメントに由来する。いくつかの実施形態において、ＢＤは、ヒトまたはヒト化ｓｄＡｂである。ｓｄＡｂフラグメントは、ＶＨＨ、ＶＮＡＲ、操作されたＶＨまたはＶＫドメインに由来し得る。ＶＨＨは、ラクダ重鎖のみ抗体から生成され得る。ＶＮＡＲは、軟骨魚類重鎖のみ抗体から生成され得る。界面操作及び特定の生殖系列ファミリーの選択を含む、従来ヘテロ二量体のＶＨ及びＶＫドメインから単量体ｓｄＡｂを生成するための様々な方法が実装されている。他の実施形態において、ＢＤは、例えば、設計アンキリン反復タンパク質（ｄａｒｐｉｎ）、アビマー、アンチカリン／リポカリン、センチリン、及びフィノマーであるが、これらに限定されない、非抗体足場タンパク質に由来する。
一般に、本開示の融合タンパク質は、リンカーポリペプチドを介して動作可能に連結している少なくとも２つ以上のＢＤからなる。融合体内の特異的ＢＤとしてのｓｄＡｂフラグメントの利用、本開示は、多くの二重／多重特異性抗体アプローチにとって一般的である重鎖：軽鎖誤対合の問題を回避する利益を有する。加えて、本開示の融合タンパク質は、多くの二重特異性抗体によって必要とされる長いリンカーの使用を回避する。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質のＢＤのうちの全てが、所与のＴＮＦＲＳＦメンバー上の同一のエピトープを認識するＴＢＤである。例えば、本開示の融合タンパク質は、４１ＢＢに対する同一の特異性をもって、２、３、４、５、または６つのＴＢＤを組み込むことができる。他の実施形態において、融合タンパク質は、所与のＴＮＦＲＳＦメンバー上の異なるエピトープを認識するＴＢＤを組み込む。例えば、本開示の融合タンパク質は、４１ＢＢ上の様々なエピトープに対する異なる認識特異性をもって、２、３、４、５、または６つのＴＢＤを組み込むことができる。これらの実施形態において、本開示の融合タンパク質は、特定のＴＮＦＲＳＦメンバーの異なる領域を標的化する複数のＴＢＤを含有する。いくつかの実施形態において、ＴＢＤは、同一のＴＮＦＲＳＦメンバー上の異なるエピトープを認識しても、異なるＴＮＦＲＳＦメンバー上のエピトープを認識してもよい。例えば、本開示は、ＧＩＴＲ及び４１ＢＢ、またはＯＸ４０及び４１ＢＢ、またはＣＤ２７及び４１ＢＢに結合するＴＢＤを組み込む、多重特異性融合タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態において、多重特異性融合タンパク質は、４１ＢＢ及びＰＤＬ１を標的化する二重特異性分子である。いくつかの実施形態において、二重特異性融合タンパク質は、ＰＤＬ１に結合する第２の結合ドメイン（ＢＤ２）に動作可能に連結している、配列番号１６、２０、２３、２５、２９、３３、３９、３３～４１、４３、４５～４７、４９、５１、５３、５４、５６、５８～６０、６２、６５、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、及び８０～８３からなる群から選択される４１ＢＢ標的化結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＢＤ２は、ＰＤＬ１に特異的に結合するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＢＤ２は、配列番号１００、１０４、１０８、１１２、１１４、１１６、及び１１９～１２４からなる群から選択されるＰＤＬ１標的化ドメインを含む。いくつかの実施形態、ＢＤ２は、配列番号１１９～１２４からなる群から選択されるＰＤＬ１標的化ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＢＤ２は、ＰＤＬ１に特異的に結合し、配列番号１２６～４０８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、多重特異性融合タンパク質は、４１ＢＢ及びＰＤＬ１を標的化する二重特異性分子である。いくつかの実施形態において、二重特異性融合タンパク質は、ＰＤＬ１に結合する第２の結合ドメイン（ＢＤ２）に動作可能に連結している、配列番号３３～４１、４３、４５～４７、４９、５１、５３、５４、５６、５８～６０、６２、６５、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、及び８０～８３からなる群から選択される４１ＢＢ標的化結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＢＤ２は、ＰＤＬ１に特異的に結合するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＢＤ２は、配列番号１００、１０４、１０８、１１２、１１４、１１６、及び１１９～１２４からなる群から選択されるＰＤＬ１標的化ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＢＤ２は、配列番号１１９～１２４からなる群から選択されるＰＤＬ１標的化ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＢＤ２は、ＰＤＬ１に特異的に結合し、配列番号１２６～４０８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、多重特異性融合タンパク質は、４１ＢＢ及びＰＤＬ１を標的化する二重特異性分子である。いくつかの実施形態において、二重特異性融合タンパク質は、４１ＢＢに結合する第２のＴＢＤ（ＴＢＤ２）に動作可能に連結している、配列番号１００、１０４、１０８、１１２、１１４、１１６、及び１１９～１２４からなる群から選択されるＰＤＬ１標的化結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＴＢＤ２は、４１ＢＢに特異的に結合するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＴＢＤ２は、配列番号１６、２０、２３、２５、２９、３３、３９、３３～４１、４３、４５～４７、４９、５１、５３、５４、５６、５８～６０、６２、６５、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、及び８０～８３からなる群から選択される４１ＢＢ標的化ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＴＢＤ２は、４１ＢＢに特異的に結合し、配列番号８４～９９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、多重特異性融合タンパク質は、４１ＢＢ及びＰＤＬ１を標的化する二重特異性分子である。いくつかの実施形態において、二重特異性融合タンパク質は、４１ＢＢに結合する第２のＴＢＤ（ＴＢＤ２）に動作可能に連結している、配列番号１１９～１２４からなる群から選択されるＰＤＬ１標的化結合ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＴＢＤ２は、４１ＢＢに特異的に結合するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＴＢＤ２は、配列番号３３、３９、３３～４１、４３、４５～４７、４９、５１、５３、５４、５６、５８～６０、６２、６５、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、及び８０～８３からなる群から選択される４１ＢＢ標的化ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＴＢＤ２は、４１ＢＢに特異的に結合し、配列番号８４～９９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、多重特異性融合タンパク質は、４１ＢＢ及びＰＤＬ１を標的化する二重特異性分子であり、配列番号４４８～４５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、多重特異性融合タンパク質は、４１ＢＢ及びＰＤＬ１を標的化する二重特異性分子であり、配列番号４４８～４５６からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質のＢＤのうちの全てが、ＰＤＬ１上の同一のエピトープを認識する。例えば、本開示の融合タンパク質は、ＰＤＬ１に対する同一の特異性をもって、２、３、４、５、または６つのＢＤを組み込むことができる。他の実施形態において、融合タンパク質は、ＰＤＬ１上の異なるエピトープを認識するＢＤを組み込む。例えば、本開示の融合タンパク質は、ＰＤＬ１上の様々なエピトープに対する異なる認識特異性をもって、２、３、４、５、または６つのＢＤを組み込むことができる。これらの実施形態において、本開示の融合タンパク質は、ＰＤＬ１の異なる領域を標的化する複数のＢＤを含有する。いくつかの実施形態において、ＢＤは、ＰＤＬ１上の異なるエピトープを認識することができる。
いくつかの実施形態において、本開示の融合タンパク質は、単一のポリペプチドで構成される。他の実施形態において、本開示の融合タンパク質は、２つ以上のポリペプチドで構成される。例えば、非対称融合タンパク質を構築するように、ヘテロ二量体化ドメインが融合タンパク質内に組み込まれる。例えば、免疫グロブリンＦｃ領域が融合タンパク質内に組み込まれる場合、ＣＨ３ドメインをホモ二量体化ドメインとして使用しても、ヘテロ二量体化を可能にするためにＣＨ３二量体界面領域を変異させてもよい。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、ＢＤを反対端に含有する。例えば、ＢＤは、融合タンパク質のアミノ末端（Ｎ末端）部分上、及び融合タンパク質のカルボキシ末端（Ｃ末端）部分上の両方に位置する。他の実施形態において、全てのＴＢＤは、融合タンパク質の同一端上に存在する。例えば、ＢＤは、融合タンパク質のアミノ末端部分またはカルボキシ末端部分のいずれかの上に存在する。
いくつかの実施形態において、リンカーポリペプチドは、免疫グロブリンＦｃ領域を含有する。いくつかの実施形態において、免疫グロブリンＦｃ領域は、ＩｇＧ１サブクラス、ＩｇＧ２サブクラス、ＩｇＧ３サブクラス、及びＩｇＧ４サブクラスからなる群から選択されるＩｇＧアイソタイプである。
いくつかの実施形態において、免疫グロブリンＦｃ領域またはその免疫学的に活性なフラグメントは、ＩｇＧアイソタイプである。例えば、融合タンパク質の免疫グロブリンＦｃ領域は、以下のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ１サブクラスのものである。
Figure 0007022993000001
いくつかの実施形態において、免疫グロブリンＦｃ領域またはその免疫学的に活性なフラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるヒトＩｇＧ１ポリペプチド配列を含む。
いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、融合タンパク質のグリコシル化を防止するように、アミノ酸Ａｓｎ２９７（配列番号１～４において四角で囲まれた部分、Ｋａｂａｔ番号付け）、例えば、Ａｓｎ２９７Ａｌａ（Ｎ２９７Ａ）またはＡｓｎ２９７Ａｓｐ（Ｎ２９７Ｄ）で修飾される。いくつかの実施形態において、融合タンパク質のＦｃ領域は、Ｆｃ受容体相互作用を変更するように、アミノ酸Ｌｅｕ２３５（配列番号１において太字の部分、Ｋａｂａｔ番号付け）、例えば、Ｌｅｕ２３５Ｇｌｕ（Ｌ２３５Ｅ）またはＬｅｕ２３５Ａｌａ（Ｌ２３５Ａ）で修飾される。いくつかの実施形態において、融合タンパク質のＦｃ領域は、Ｆｃ受容体相互作用を変更するように、アミノ酸Ｌｅｕ２３４（配列番号１において太字の部分、Ｋａｂａｔ番号付け）、例えば、Ｌｅｕ２３４Ａｌａ（Ｌ２３４Ａ）で修飾される。いくつかの実施形態において、融合タンパク質のＦｃ領域は、Ｆｃ受容体相互作用を変更するように、アミノ酸Ｌｅｕ２３４（四角で囲まれた部分、Ｋａｂａｔ番号付け）、例えば、Ｌｅｕ２３５Ｇｌｕ（Ｌ２３５Ｅ）で修飾される。いくつかの実施形態において、融合タンパク質のＦｃ領域は、アミノ酸２３４及び２３５の両方、例えば、Ｌｅｕ２３４Ａｌａ及びＬｅｕ２３５Ａｌａ（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ）またはＬｅｕ２３４Ｖａｌ及びＬｅｕ２３５Ａｌａ（Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ）で変更される。いくつかの実施形態において、融合タンパク質のＦｃ領域は、Ｆｃ受容体結合を低減するように、以下の位置、Ｇｌｕ２３３（Ｅ２３３、配列番号１において太字の部分）、Ｌｅｕ２３４（Ｌ２３４）、またはＬｅｕ２３５（Ｌ２３５）のうちの１つ以上でアミノ酸を欠いている。いくつかの実施形態において、融合タンパク質のＦｃ領域は、Ｆｃ受容体結合を低減するように、Ｇｌｙ２３５で変更される。例えば、Ｇｌｙ２３５は、融合タンパク質から欠失される。いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、ＣＤ３２Ａとの相互作用を増強するように、アミノ酸Ｇｌｙ２３６（配列番号１において四角で囲まれた部分）、例えば、Ｇｌｙ２３６Ａｌａ（Ｇ２３６Ａ）で修飾される。いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、Ｌｙｓ４４７（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ１９９１Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ＩｎｔｅｒｅｓｔのＥＵインデックス）を欠く。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質のＦｃ領域は、Ｆｃ受容体結合を低減するように、以下の位置、Ｌｅｕ２３４（Ｌ２３４）、Ｌｅｕ２３５（Ｌ２３５）、Ａｓｐ２６５（Ｄ２６５）、Ａｓｐ２７０（Ｄ２７０）、Ｓｅｒ２９８（Ｓ２９８）、Ａｓｎ２９７（Ｎ２９７）、Ａｓｎ３２５（Ｎ３２５）、またはＡｌａ３２７（Ａ３２７）。例えば、Ｌｅｕ２３４Ａｌａ（Ｌ２３４Ａ）、Ｌｅｕ２３５Ａｌａ（Ｌ２３５Ａ）、Ａｓｐ２６５Ａｓｎ（Ｄ２６５Ｎ）、Ａｓｐ２７０Ａｓｎ（Ｄ２７０Ｎ）、Ｓｅｒ２９８Ａｓｎ（Ｓ２９８Ｎ）、Ａｓｎ２９７Ａｌａ（Ｎ２９７Ａ）、Ａｓｎ３２５Ｇｌｕ（Ｎ３２５Ｅ）、またはＡｌａ３２７Ｓｅｒ（Ａ３２７Ｓ）のうちの１つ以上で変更される。好ましい実施形態において、Ｆｃ領域内の修飾は、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する最小の影響を有しながら、Ｆｃ－受容体－ガンマ受容体に対する結合を低減する。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質のＦｃ領域は、Ｆｃ受容体結合を低減するように、以下の位置、Ｇｌｕ２３３（Ｅ２３３）、Ｌｅｕ２３４（Ｌ２３４）、またはＬｅｕ２３５（Ｌ２３５）のうちの１つ以上でアミノ酸を欠いている。これらの実施形態において、これら３つのアミノ酸のＦｃ欠失は、補体タンパク質Ｃ１ｑ結合を低減する。これらの修飾されたＦｃ領域ポリペプチドは、本明細書において「Ｆｃ欠失」ポリペプチドと呼ばれる。
Figure 0007022993000002
いくつかの実施形態において、免疫グロブリンＦｃ領域またはその免疫学的に活性なフラグメントは、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるヒトＩｇＧ１ポリペプチド配列を含む。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質の免疫グロブリンＦｃ領域または免疫学的に活性なフラグメントは、以下のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ２サブクラスのものである。
Figure 0007022993000003
いくつかの実施形態において、融合体またはその免疫学的に活性なフラグメントは、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるヒトＩｇＧ２ポリペプチド配列を含む。
いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域は、抗体のグリコシル化を防止するように、アミノ酸Ａｓｎ２９７（配列番号１、３、４、及び５において四角で囲まれた部分）、例えば、Ａｓｎ２９７Ａｌａ（Ｎ２９７Ａ）で修飾される。いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域は、配列番号３の残基２１７に対応するＬｙｓ４４７（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ１９９１Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ＩｎｔｅｒｅｓｔのＥＵインデックス）を欠く。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質の免疫グロブリンＦｃ領域または免疫学的に活性なフラグメントは、以下のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ３サブクラスのものである。
Figure 0007022993000004
いくつかの実施形態において、抗体またはその免疫学的に活性なフラグメントは、配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるヒトＩｇＧ３ポリペプチド配列を含む。
いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域は、抗体のグリコシル化を防止するように、アミノ酸Ａｓｎ２９７（配列番号１～４において四角で囲まれた部分、Ｋａｂａｔ番号付け）、例えば、Ａｓｎ２９７Ａｌａ（Ｎ２９７Ａ）で修飾される。いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域は、半減期を延長するように、アミノ酸４３５（配列番号１において四角で囲まれた部分）、例えば、Ａｒｇ４３５Ｈｉｓ（Ｒ４３５Ｈ、配列番号３において四角で囲まれた部分）で修飾される。いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域は、配列番号４の残基２１８に対応するＬｙｓ４４７（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ１９９１Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ＩｎｔｅｒｅｓｔのＥＵインデックス）を欠く。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質の免疫グロブリンＦｃ領域または免疫学的に活性なフラグメントは、以下のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ４サブクラスのものである。
Figure 0007022993000005
いくつかの実施形態において、抗体またはその免疫学的に活性なフラグメントは、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるヒトＩｇＧ４ポリペプチド配列を含む。
他の実施形態において、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、Ｆｃ受容体相互作用を変更するように、アミノ酸２３５、例えば、Ｌｅｕ２３５Ｇｌｕ（Ｌ２３５Ｅ）で修飾される。いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、抗体のグリコシル化を防止するように、アミノ酸Ａｓｎ２９７（配列番号１～４において四角で囲まれた部分、Ｋａｂａｔ番号付け）、例えば、Ａｓｎ２９７Ａｌａ（Ｎ２９７Ａ）で修飾される。いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、配列番号５の残基２１８に対応するＬｙｓ４４７（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ１９９１Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ＩｎｔｅｒｅｓｔのＥＵインデックス）を欠く。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質の免疫グロブリンＦｃ領域または免疫学的に活性なフラグメントは、以下のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ４アイソタイプのものである。
Figure 0007022993000006
いくつかの実施形態において、抗体またはその免疫学的に活性なフラグメントは、配列番号６のアミノ酸配列と少なくとも５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるヒトＩｇＧ４ポリペプチド配列を含む。
いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域は、ＦｃＲｎ結合を増強するように修飾される。ＦｃＲｎに対する結合を増強するＦｃ変異の例は、Ｍｅｔ２５２Ｔｙｒ、Ｓｅｒ２５４Ｔｈｒ、Ｔｈｒ２５６Ｇｌｕ（それぞれＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ）（Ｋａｂａｔ番号付け、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ２００６，Ｊ．Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ Ｖｏｌ．２８１（３３）２３５１４－２３５２４）、Ｍｅｔ４２８Ｌｅｕ及びＡｓｎ４３４Ｓｅｒ（Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ｓ）（Ｚａｌｅｖｓｋｙ ｅｔ ａｌ２０１０Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｖｏｌ．２８（２）１５７－１５９）、またはＭｅｔ２５２Ｉｌｅ、Ｔｈｒ２５６Ａｓｐ、Ｍｅｔ４２８Ｌｅｕ（それぞれＭ２５２Ｉ、Ｔ２５６Ｄ、Ｍ４２８Ｌ）（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ１９９１Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ＩｎｔｅｒｅｓｔのＥＵインデックス）である。Ｍｅｔ２５２は、配列番号１、４、及び５の残基２３と、配列番号３の残基２２とに対応する。Ｓｅｒ２５４は、配列番号１、４、及び５の残基２５と、配列番号３の残基２４とに対応するに対応する。Ｔｈｒ２５６は、配列番号１、４、及び５の残基２７と、配列番号３の残基２６とに対応する。Ｍｅｔ４２８は、配列番号１、４、及び５の残基１９９と、配列番号３の残基１９８とに対応する。Ａｓｎ４３４は、配列番号１、４、及び５の残基２０５と、配列番号３の残基２０４とに対応する。本開示の融合タンパク質がＦｃポリペプチドを含む、いくつかの実施形態において、Ｆｃポリペプチドは、変異または修飾される。これらの実施形態において、変異または修飾されたＦｃポリペプチドは、以下の変異、Ｍｅｔ２５２Ｔｙｒ及びＭｅｔ４２８Ｌｅｕ（Ｍ２５２Ｙ、Ｍ４２８Ｌ）（Ｋａｂａｔ番号付けシステムを使用）を有する。
いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域は、抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）及び／または補体依存性細胞傷害活性（ＣＤＣ）を変更するように修飾される（例えば、Ｎａｔｓｕｍｅ ｅｔ ａｌ．，２００８Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，６８（１０）：３８６３－７２、Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．，２００１Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１６６（４）：２５７１－５、Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．，２０１０ｍＡｂｓ，２（２）：１８１－１８９、Ｌａｚａｒ ｅｔ ａｌ．，２００６ＰＮＡＳ，１０３（１１）：４００５－４０１０、Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，２００１ＪＢＣ，２７６（９）：６５９１－６６０４、Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００７Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，６７（１８）：８８８２－８８９０、Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００８Ａｄｖａｎ．Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｇｕｌ．，４８：１５２－１６４、Ａｌｅｇｒｅ ｅｔ ａｌ，１９９２Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１４８：３４６１－３４６８に記載され、Ｋａｎｅｋｏ ａｎｄ Ｎｉｗａ，２０１１Ｂｉｏｄｒｕｇｓ，２５（１）：１－１１に概説されるアミノ酸修飾）。ＡＤＣＣを増強する変異の例としては、Ｓｅｒ２３９及びＩｌｅ３３２での修飾、例えば、Ｓｅｒ２３９Ａｓｐ及びＩｌｅ３３２Ｇｌｕ（Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ）が挙げられる。ＣＤＣを増強する変異の例としては、配列番号１、４、及び５の残基９７と、配列番号２の残基９６とに対応するＬｙｓ３２６、ならびに配列番号１、４、及び５の残基１０４と、配列番号３の残基１０３とに対応するＧｌｕ３３３での修飾が挙げられる。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、これらの位置のうちの一方または両方、例えば、Ｌｙｓ３２６Ａｌａ及び／またはＧｌｕ３３３Ａｌａ（Ｋ３２６Ａ及びＥ３３３Ａ）で変更される。
いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域は、ヘテロ二量体化を誘導するように修飾される。例えば、より嵩張るアミノ酸、例えば、Ｔｒｐ（Ｔ３６６Ｗ）で置換されたとき、配列番号１、４、及び５の残基１３７と、配列番号３の残基１３６とに対応するＴｈｒ３６６位、配列番号１、４、及び５の残基１３９と、配列番号２の残基１３８とに対応するＬｅｕ３６８位、ならびに配列番号１、４、及び５の残基１７８と、配列番号３の残基１７７とに対応するＴｙｒ４０７位、例えば、それぞれＳｅｒ、Ａｌａ、及びＶａｌ（Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ）で、より嵩張らないアミノ酸に対するアミノ酸修飾を有する第２のＣＨ３ドメインと優先的に対合することができるＴｈｒ３６６で、ＣＨ３ドメイン中にアミノ酸修飾を有すること。ＣＨ３修飾を介したヘテロ二量体化は、ジスルフィド結合の導入によって、例えば、配列番号１、４、及び５の残基１２５と、配列番号３の残基１２４とに対応するＳｅｒ３５４をＣｙｓ（Ｓ３５４Ｃ）に、及び配列番号１、４、及び５の残基１２０と、配列番号３の残基１１９とに対応するＴｙｒ３４９を反対のＣＨ３ドメイン上のＣｙｓ（Ｙ３４９Ｃ）に変更することによって、更に安定化され得る（Ｃａｒｔｅｒ，２００１Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，２４８：７－１５に概説）。これらの実施形態のうちのいくつかにおいて、Ｆｃ領域は、タンパク質Ａ結合を防止し、それによりヘテロ二量体融合タンパク質のより効率的な精製を可能にするように、ヘテロ二量体のうちの１つのメンバー上のタンパク質Ａ結合部位で修飾されてもよい。この結合部位内の例示的な修飾は、配列番号１、４、及び５の残基２４と、配列番号３の残基２３とに対応するＩｌｅ２５３、例えば、Ｉｌｅ２５３Ａｒｇ（Ｉ２５３Ｒ）である。例えば、Ｉ２５３Ｒ修飾は、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ修飾またはＴ３６６Ｗ修飾のいずれかと組み合わされてもよい。Ｔ３３６Ｗ修飾Ｆｃの場合に存在するような二量体化界面の立体的閉鎖が存在しないため、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ修飾Ｆｃは、ホモ二量体を形成することができる。したがって、いくつかの実施形態において、Ｉ２５３Ｒ修飾は、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ修飾Ｆｃと組み合わされて、形成されている可能性のあるいかなるホモ二量体Ｆｃの精製も不可能にする。
いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域は、二量体化を防止するように修飾される。これらの実施形態において、本開示の融合タンパク質は、単量体である。例えば、荷電残基、例えば、Ｔｈｒ３６６Ｌｙｓ、Ｔｈｒ３６６Ａｒｇ、Ｔｈｒ３６６Ａｓｐ、またはＴｈｒ３６６Ｇｌｕ（それぞれＴ３６６Ｋ、Ｔ３６６Ｒ、Ｔ３６６Ｄ、またはＴ３６６Ｅ）に対する残基Ｔｈｒ３６６の修飾は、ＣＨ３－ＣＨ３二量体化を防止する。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質のＦｃ領域は、Ｆｃ受容体結合を低減するように、以下の位置、Ｌｅｕ２３４（Ｌ２３４）、Ｌｅｕ２３５（Ｌ２３５）、Ａｓｐ２６５（Ｄ２６５）、Ａｓｐ２７０（Ｄ２７０）、Ｓｅｒ２９８（Ｓ２９８）、Ａｓｎ２９７（Ｎ２９７）、Ａｓｎ３２５（Ｎ３２５）、またはＡｌａ３２７（Ａ３２７）。例えば、Ｌｅｕ２３４Ａｌａ（Ｌ２３４Ａ）、Ｌｅｕ２３５Ａｌａ（Ｌ２３５Ａ）、Ａｓｐ２６５Ａｓｎ（Ｄ２６５Ｎ）、Ａｓｐ２７０Ａｓｎ（Ｄ２７０Ｎ）、Ｓｅｒ２９８Ａｓｎ（Ｓ２９８Ｎ）、Ａｓｎ２９７Ａｌａ（Ｎ２９７Ａ）、Ａｓｎ３２５Ｇｌｕ（Ｎ３２５Ｅ）、またはＡｌａ３２７Ｓｅｒ（Ａ３２７Ｓ）のうちの１つ以上で変更される。好ましい実施形態において、Ｆｃ領域内の修飾は、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する最小の影響を有しながら、Ｆｃ－受容体－ガンマ受容体に対する結合を低減する。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、免疫グロブリンヒンジ領域に由来するポリペプチドを含有する。ヒンジ領域は、ヒトＩｇＧサブクラスのうちのいずれかから選択されてもよい。例えば、融合タンパク質は、ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣ（配列番号７）の配列を有する修飾ＩｇＧ１ヒンジを含有してもよく、軽鎖のＣ末端システインとジスルフィドを形成するＣｙｓ２２０は、セリン、例えば、Ｃｙｓ２２０Ｓｅｒ（Ｃ２２０Ｓ）へと変異される。他の実施形態において、融合タンパク質は、配列ＤＫＴＨＴＣＰＰＣ（配列番号８）を有する切断型ヒンジを含有する。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、鎖交換を防止または低減するように修飾される、ＩｇＧ４から修飾されたヒンジ、例えば、配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣ（配列番号９）を有するＳｅｒ２２８Ｐｒｏ（Ｓ２２８Ｐ）を有する。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、１つ以上のリンカーポリペプチドを含有する。他の実施形態において、融合タンパク質は、リンカーポリペプチド及びヒンジポリペプチドを含有する。
いくつかの実施形態において、本開示の融合タンパク質は、Ｎ２９７でＮ連結グリカン鎖に結合するフコースを欠くか、またはそれが低減している。ＦＵＴ８欠損細胞株内での産生、哺乳動物細胞培養培地への阻害剤（例えば、カスタノスペルミン、２－デオキシ－フコース、２－フルロフコース）の添加、フコシル化経路が天然に低減している産生細胞株の使用、及び産生細胞株の代謝操作を含むが、これらに限定されない、フコシル化を防止するための多数の方法が存在する。
いくつかの実施形態において、単一ドメイン抗体、ＶＨＨ、またはヒト化単一ドメイン抗体、またはヒト単一ドメイン抗体は、ヒトに見出される既存の抗体による認識を排除するように操作される。いくつかの実施形態において、本開示の単一ドメイン抗体は、Ｌｅｕ１１位の変異、例えば、Ｌｅｕ１１Ｇｌｕ（Ｌ１１Ｅ）またはＬｅｕ１１Ｌｙｓ（Ｌ１１Ｋ）によって修飾される。他の実施形態において、本開示の単一ドメイン抗体は、カルボキシ末端領域内の変化によって修飾され、例えば、末端配列は、ＧＱＧＴＬＶＴＶＫＰＧＧ（配列番号１４）もしくはＧＱＧＴＬＶＴＶＥＰＧＧ（配列番号１５）、またはこれらの修飾形からなる。いくつかの実施形態において、本開示の単一ドメイン抗体は、１１位の変異によって、かつカルボキシ末端領域内の変化によって修飾される。
いくつかの実施形態において、本開示の融合タンパク質のＢＤは、アミノ酸リンカーを介して動作可能に連結している。いくつかの実施形態において、これらのリンカーは、本明細書においてＧＳ－リンカーとして示されるアミノ酸グリシン及びセリンで主に構成される。本開示の融合タンパク質のＧＳ－リンカーは、様々な長さ、例えば、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０アミノ酸長のものであり得る。
いくつかの実施形態において、ＧＳ－リンカーは、ＧＧＳＧＧＳ、すなわち（ＧＧＳ）２（配列番号１０）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳ、すなわち（ＧＧＳ）３（配列番号１１）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳ、すなわち（ＧＧＳ）４（配列番号１２）、及びＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳ、すなわち（ＧＧＳ）５（配列番号１３）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、多価結合融合タンパク質は、四価である。いくつかの実施形態において、四価融合タンパク質は、以下の構造、ＢＤ－リンカー－ＢＤ－リンカー－ヒンジ－Ｆｃを有する。いくつかの実施形態において、四価融合タンパク質は、以下の構造、ＢＤ－リンカー－ヒンジ－Ｆｃ－リンカー－ＢＤを有する。
いくつかの実施形態において、四価融合タンパク質のＢＤは、単一ドメイン抗体またはＶＨＨである。いくつかの実施形態において、四価融合タンパク質の各ＢＤは、単一ドメイン抗体またはＶＨＨである。いくつかの実施形態において、四価融合タンパク質は、以下の構造、ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－ヒンジ－Ｆｃ（式中、ＶＨＨは、ヒト化または完全ヒトＶＨＨ配列である）を有する。いくつかの実施形態において、四価融合タンパク質は、以下の構造、ＶＨＨ－リンカー－ヒンジ－Ｆｃ－リンカー－ＶＨＨ（式中、ＶＨＨは、ヒト化または完全ヒトＶＨＨ配列である）を有する。
いくつかの実施形態において、多価ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質は、四価である。いくつかの実施形態において、四価ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質は、以下の構造を有する。ＴＢＤ－リンカー－ＴＢＤ－リンカー－ヒンジ－Ｆｃ。いくつかの実施形態において、四価ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質は、以下の構造を有する。ＴＢＤ－リンカー－ヒンジ－Ｆｃ－リンカー－ＴＢＤ。
いくつかの実施形態において、四価ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質のＴＢＤは、単一ドメイン抗体またはＶＨＨである。いくつかの実施形態において、多価ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質の各ＴＢＤは、単一ドメイン抗体またはＶＨＨである。いくつかの実施形態において、四価ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質は、以下の構造、ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－ヒンジ－Ｆｃ（式中、ＶＨＨは、ヒト化または完全ヒトＶＨＨ配列である）を有する。いくつかの実施形態において、四価ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質は、以下の構造、ＶＨＨ－リンカー－ヒンジ－Ｆｃ－リンカー－ＶＨＨ（式中、ＶＨＨは、ヒト化または完全ヒトＶＨＨ配列である）を有する。
いくつかの実施形態において、ＧＳ－リンカーは、ＧＧＳＧＧＳ、すなわち（ＧＧＳ）２（配列番号１０）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳ、すなわち（ＧＧＳ）３（配列番号１１）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳ、すなわち（ＧＧＳ）４（配列番号１２）、及びＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳ、すなわち（ＧＧＳ）５（配列番号１３）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、多価融合タンパク質は、六価である。いくつかの実施形態において、六価融合タンパク質は、以下の構造、ＢＤ－リンカー－ＴＢＤ－リンカー－ＢＤ－リンカー－ヒンジ－Ｆｃを有する。いくつかの実施形態において、六価融合タンパク質は、以下の構造、ＢＤ－リンカー－ＢＤ－リンカー－ヒンジ－Ｆｃ－リンカー－ＢＤ、またはＢＤ－リンカー－ヒンジ－Ｆｃ－リンカー－ＢＤ－リンカー－ＢＤを有する。
いくつかの実施形態において、六価融合タンパク質のＢＤは、単一ドメイン抗体またはＶＨＨである。いくつかの実施形態において、六価融合タンパク質の各ＢＤは、単一ドメイン抗体またはＶＨＨである。いくつかの実施形態において、六価融合タンパク質は、以下の構造、ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－ヒンジ－Ｆｃ（式中、ＶＨＨは、ヒト化または完全ヒトＶＨＨ配列である）を有する。いくつかの実施形態において、六価融合タンパク質は、以下の構造、ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－ヒンジ－Ｆｃ－リンカー－ＶＨＨ、またはＶＨＨ－リンカー－ヒンジ－Ｆｃ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ（式中、ＶＨＨは、ヒト化または完全ヒトＶＨＨ配列である）を有する。
いくつかの実施形態において、多価ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質は、六価である。いくつかの実施形態において、六価ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質は、以下の構造、ＴＢＤ－リンカー－ＴＢＤ－リンカー－ＴＢＤ－リンカー－ヒンジ－Ｆｃを有する。いくつかの実施形態において、六価ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質は、以下の構造、ＴＢＤ－リンカー－ＴＢＤ－リンカー－ヒンジ－Ｆｃ－リンカー－ＴＢＤ、またはＴＢＤ－リンカー－ヒンジ－Ｆｃ－リンカー－ＴＢＤ－リンカー－ＴＢＤを有する。
いくつかの実施形態において、六価ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質のＴＢＤは、単一ドメイン抗体またはＶＨＨである。いくつかの実施形態において、六価ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質の各ＴＢＤは、単一ドメイン抗体またはＶＨＨである。いくつかの実施形態において、六価ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質は、以下の構造、ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－ヒンジ－Ｆｃ（式中、ＶＨＨは、ヒト化または完全ヒトＶＨＨ配列である）を有する。いくつかの実施形態において、六価ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質は、以下の構造、ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－ヒンジ－Ｆｃ－リンカー－ＶＨＨ、またはＶＨＨ－リンカー－ヒンジ－Ｆｃ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ（式中、ＶＨＨは、ヒト化または完全ヒトＶＨＨ配列である）を有する。
いくつかの実施形態において、多価融合タンパク質は、Ｆｃ領域を欠く。これらの実施形態のうちのいくつかにおいて、融合タンパク質は四価であり、以下の構造、ＢＤ－リンカー－ＢＤ－リンカー－ＢＤ－リンカー－ＢＤ－リンカーを有する。これらの実施形態のうちのいくつかにおいて、融合タンパク質は五価であり、以下の構造、ＢＤ－リンカー－ＢＤ－リンカー－ＢＤ－リンカー－ＢＤ－リンカー－ＢＤを有する。これらの実施形態のうちのいくつかにおいて、融合タンパク質は六価であり、以下の構造、ＢＤ－リンカー－ＢＤ－リンカー－ＢＤ－リンカー－ＢＤ－リンカー－ＢＤ－リンカー－ＢＤを有する。
いくつかの実施形態において、多価ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質は、Ｆｃ領域を欠く。これらの実施形態のうちのいくつかにおいて、ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質は四価であり、以下の構造、ＴＢＤ－リンカー－ＴＢＤ－リンカー－ＴＢＤ－リンカー－ＴＢＤ－リンカーを有する。これらの実施形態のうちのいくつかにおいて、ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質は五価であり、以下の構造、ＴＢＤ－リンカー－ＴＢＤ－リンカー－ＴＢＤ－リンカー－ＴＢＤ－リンカー－ＴＢＤを有する。これらの実施形態のうちのいくつかにおいて、ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質は六価であり、以下の構造、ＴＢＤ－リンカー－ＴＢＤ－リンカー－ＴＢＤ－リンカー－ＴＢＤ－リンカー－ＴＢＤ－リンカー－ＴＢＤを有する。
いくつかの実施形態において、多価融合タンパク質のＢＤは、単一ドメイン抗体またはＶＨＨである。いくつかの実施形態において、多価融合タンパク質は、Ｆｃ領域を欠く。これらの実施形態のうちのいくつかにおいて、融合タンパク質は四価であり、以下の構造、ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカーを有する。これらの実施形態のうちのいくつかにおいて、融合タンパク質は五価であり、以下の構造、ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨを有する。これらの実施形態のうちのいくつかにおいて、融合タンパク質は六価であり、以下の構造、ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨを有する。これらの実施形態のうちのいずれにおいても、ＶＨＨは、ヒト化または完全ヒトＶＨＨ配列である。
いくつかの実施形態において、多価ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質のＴＢＤは、単一ドメイン抗体またはＶＨＨである。いくつかの実施形態において、多価ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質は、Ｆｃ領域を欠く。これらの実施形態のうちのいくつかにおいて、ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質は四価であり、以下の構造、ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカーを有する。これらの実施形態のうちのいくつかにおいて、ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質は五価であり、以下の構造、ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨを有する。これらの実施形態のうちのいくつかにおいて、ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質は六価であり、以下の構造、ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨを有する。これらの実施形態のうちのいずれにおいても、ＶＨＨは、ヒト化または完全ヒトＶＨＨ配列である。
いくつかの実施形態において、ＧＳ－リンカーは、ＧＧＳＧＧＳ、すなわち（ＧＧＳ）２（配列番号１０）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳ、すなわち（ＧＧＳ）３（配列番号１１）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳ、すなわち（ＧＧＳ）４（配列番号１２）、及びＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳ、すなわち（ＧＧＳ）５（配列番号１３）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、多重特異性であり、ＴＢＤと、第２の抗原に対して指向された結合ドメインとを含有する。これらの実施形態において、第２の抗原結合ドメインは、ＴＢＤと比較して、分子内の多数の位置に位置付けられ得る。いくつかの実施形態において、第２の抗原結合ドメインは、Ｎ末端ＴＢＤに位置する。他の実施形態において、第２の抗原結合ドメインは、ＴＢＤに対してＣ末端に位置する。他の実施形態において、第２の抗原結合ドメインは、ＴＢＤを含有する第１のポリペプチドと会合する異なるポリペプチド上に位置する。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は多重特異性であり、抗４１ＢＢ結合ドメインと、第２の抗原に対して指向された結合ドメインとを含有する。これらの実施形態において、第２の抗原結合ドメインは、抗４１ＢＢ結合ドメインと比較して、分子内の多数の位置に位置付けられ得る。いくつかの実施形態において、第２の抗原結合ドメインは、Ｎ末端抗４１ＢＢ結合ドメインに位置する。他の実施形態において、第２の抗原結合ドメインは、抗４１ＢＢ結合ドメインに対してＣ末端に位置する。他の実施形態において、第２の抗原結合ドメインは、抗４１ＢＢ結合ドメインを含有する第１のポリペプチドと会合する異なるポリペプチド上に位置する。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は多重特異性であり、抗ＰＤＬ１結合ドメインと、第２の抗原に対して指向された結合ドメインとを含有する。これらの実施形態において、第２の抗原結合ドメインは、抗ＰＤＬ１結合ドメインと比較して、分子内の多数の位置に位置付けられ得る。いくつかの実施形態において、第２の抗原結合ドメインは、Ｎ末端抗ＰＤＬ１結合ドメインに位置する。他の実施形態において、第２の抗原結合ドメインは、抗ＰＤＬ１結合ドメインに対してＣ末端に位置する。他の実施形態において、第２の抗原結合ドメインは、抗ＰＤＬ１結合ドメインを含有する第１のポリペプチドと会合する異なるポリペプチド上に位置する。
いくつかの実施形態において、多重特異性ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質内のＴＢＤは、単一ドメイン抗体またはＶＨＨである。いくつかの実施形態において、多重特異性ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質内のＴＢＤは、抗体可変重（ＶＨ）鎖領域及び可変軽（ＶＬ）鎖領域で構成される。いくつかの実施形態において、ＴＢＤのＶＨ及びＶＬは、リンカー領域を介して接続された一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）として形式設定される。いくつかの実施形態において、ＴＢＤのＶＨ及びＶＬは、定常重１（ＣＨ１）ドメイン及び定常軽鎖（ＣＬ）ドメインを介して会合するＦＡＢフラグメントとして形式設定される。いくつかの実施形態において、ＴＢＤのＶＨ及びＶＬの適切な会合を可能にするために、非抗体ヘテロ二量体化ドメインが利用される。いくつかの実施形態において、多重特異性ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質内のＴＢＤは、例えば、設計アンキリン反復タンパク質（ｄａｒｐｉｎ）、アビマー、アンチカリン／リポカリン、センチリン、及びフィノマーであるが、これらに限定されない、非抗体足場タンパク質に由来する。
いくつかの実施形態において、多重特異性ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質内のＴＢＤは、４１ＢＢに結合する単一ドメイン抗体またはＶＨＨである。いくつかの実施形態において、多重特異性ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質内の抗４１ＢＢ結合ドメインは、抗体可変重（ＶＨ）鎖及び可変軽（ＶＬ）鎖領域で構成される。いくつかの実施形態において、抗４１ＢＢ結合ドメインのＶＨ及びＶＬは、リンカー領域を介して接続された一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）として形式設定される。いくつかの実施形態において、抗４１ＢＢ結合ドメインのＶＨ及びＶＬは、定常重１（ＣＨ１）ドメイン及び定常軽鎖（ＣＬ）ドメインを介して会合するＦａｂフラグメントとして形式設定される。いくつかの実施形態において、抗４１ＢＢ結合ドメインのＶＨ及びＶＬの適切な会合を可能にするために、非抗体ヘテロ二量体化ドメインが利用される。いくつかの実施形態において、多重特異性ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質内の抗４１ＢＢ結合ドメインは、例えば、設計アンキリン反復タンパク質（ｄａｒｐｉｎ）、アビマー、アンチカリン／リポカリン、センチリン、及びフィノマーであるが、これらに限定されない、非抗体足場タンパク質に由来する。
いくつかの実施形態において、多重特異性融合タンパク質内の結合ドメインは、ＰＤＬ１に結合する単一ドメイン抗体またはＶＨＨである。いくつかの実施形態において、多重特異性ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質内の抗ＰＤＬ１結合ドメインは、抗体可変重（ＶＨ）鎖及び可変軽（ＶＬ）鎖領域で構成される。いくつかの実施形態において、抗ＰＤＬ１結合ドメインのＶＨ及びＶＬは、リンカー領域を介して接続された一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）として形式設定される。いくつかの実施形態において、抗ＰＤＬ１結合ドメインのＶＨ及びＶＬは、定常重１（ＣＨ１）ドメイン及び定常軽鎖（ＣＬ）ドメインを介して会合するＦａｂフラグメントとして形式設定される。いくつかの実施形態において、抗ＰＤＬ１結合ドメインのＶＨ及びＶＬの適切な会合を可能にするために、非抗体ヘテロ二量体化ドメインが利用される。いくつかの実施形態において、多重特異性融合タンパク質内の抗ＰＤＬ１結合ドメインは、例えば、設計アンキリン反復タンパク質（ｄａｒｐｉｎ）、アビマー、アンチカリン／リポカリン、センチリン、及びフィノマーであるが、これらに限定されない、非抗体足場タンパク質に由来する。
いくつかの実施形態において、多重特異性ＴＮＦＲＳＦ結合融合タンパク質の抗４１ＢＢ結合ドメインは、二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメントである。
いくつかの実施形態において、多重特異性融合タンパク質の抗ＰＤＬ１結合ドメインは、二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメントである。
これらの実施形態のうちのいずれにおいても、二重特異性抗体またはその抗原フラグメントは、非限定的な例として、抗体フラグメントに基づく形式（例えば、Ｘ－Ｌｉｎｋ Ｆａｂ、架橋Ｆａｂフラグメント；ｔａｓｃＦｖ／ＢｉＴＥ、タンデム－ｓｃＦｖ／二重特異性Ｔ細胞係合体；Ｄｂ、ダイアボディ；ｔａＤｂ、タンデムダイアボディなど）、Ｆｃ融合体に基づく形式（例えば、Ｄｂ－Ｆｃ、ダイアボディ－Ｆｃ融合体；ｔａＤｂ－Ｆｃ融合体、タンデムダイアボディ－Ｆｃ融合体；ｔａＤｂ－ＣＨ３、タンデムダイアボディ－ＣＨ３融合体；（ｓｃＦｖ）４－Ｆｃ、テトラｓｃＦｖ－Ｆｃ融合体；ＤＶＤ－Ｉｇ、二重可変ドメイン免疫グロブリンなど）、ＩｇＧ形式（例えば、ノブ－ホール及びＳＥＥＤ、鎖交換操作されたドメイン；ＣｒｏｓｓＭａｂ、重鎖及び軽鎖ドメイン交換と組み合わされたノブ－ホール；ｂｓＡｂ、クアドローマ由来二重特異性抗体；ｓｄＡｂ、単一ドメイン系抗体；ならびにカッパ－ラムダボディ（ＰＣＴ出願第ＷＯ２０１２／０２３０５３号に記載されるものなど）など）を含む、当該技術分野において既知である任意の適切な二重特異性形式であり得る。
上記の実施形態のうちのいずれにおいても、少なくとも１つのＴＢＤが、配列番号１６、２０、２３、２５、２９、３３、３９、３３～４１、４３、４５～４７、４９、５１、５３、５４、５６、５８～６０、６２、６５、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、及び８０～８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
上記の実施形態のうちのいずれにおいても、少なくとも１つのＴＢＤが、配列番号３３、３９、３３～４１、４３、４５～４７、４９、５１、５３、５４、５６、５８～６０、６２、６５、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、及び８０～８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
上記の実施形態のうちのいずれにおいても、少なくとも１つのＴＢＤが、配列番号１７、２１、２６、３０、５０、６５、及び６９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、配列番号１８、２７、３１、４２、４４、４８、５２、６１、６３、７１、７３、７５、７７、及び７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、配列番号１９、２２、２４、２８、３２、５５、及び５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）とを含む。
上記の実施形態のうちのいずれにおいても、少なくとも１つのＢＤが、配列番号１００、１０４、１０８、１１２、１１４、１１６、及び１１９～１２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
上記の実施形態のうちのいずれにおいても、少なくとも１つのＢＤが、配列番号１１９～１２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
上記の実施形態のうちのいずれにおいても、少なくとも１つのＢＤが、配列番号１０１、１０５、及び１０９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１０２、１０６、１１０、及び１１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１０３、１０７、１１１、１１３、１１５、及び１１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む。
上記の実施形態のうちのいずれにおいても、少なくとも１つのＴＢＤが、配列番号１６、２０、２３、２５、２９、３３、３９、３３～４１、４３、４５～４７、４９、５１、５３、５４、５６、５８～６０、６２、６５、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、及び８０～８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、少なくとも１つのＢＤが、配列番号１００、１０４、１０８、１１２、１１４、１１６、及び１１９～１２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
上記の実施形態のうちのいずれにおいても、少なくとも１つのＴＢＤが、配列番号３３、３９、３３～４１、４３、４５～４７、４９、５１、５３、５４、５６、５８～６０、６２、６５、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、及び８０～８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、少なくとも１つのＢＤが、配列番号１１９～１２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
上記の実施形態のうちのいずれにおいても、少なくとも１つのＴＢＤが、配列番号１７、２１、２６、３０、５０、６５、及び６９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、配列番号１８、２７、３１、４２、４４、４８、５２、６１、６３、７１、７３、７５、７７、及び７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、配列番号１９、２２、２４、２８、３２、５５、及び５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）とを含み、少なくとも１つのＢＤが、配列番号１０１、１０５、及び１０９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１０２、１０６、１１０、及び１１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１０３、１０７、１１１、１１３、１１５、及び１１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む。
本開示の例示的な多価かつ多重特異性の融合タンパク質の模式図である。 ４１ＢＢ単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）が組み換えヒト４１ＢＢ（図２Ａ）またはカニクイザル４１ＢＢ（図２Ｂ）に結合する能力を実証する一対のグラフである。結合は、組み換え４１ＢＢ－ｍＦｃタンパク質をＭｅｄｉｓｏｒｐ９６ウェルプレート上に固定化するＥＬＩＳＡによって評価した。 ４１ＢＢ単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）が組み換えヒト４１ＢＢ（図２Ａ）またはカニクイザル４１ＢＢ（図２Ｂ）に結合する能力を実証する一対のグラフである。結合は、組み換え４１ＢＢ－ｍＦｃタンパク質をＭｅｄｉｓｏｒｐ９６ウェルプレート上に固定化するＥＬＩＳＡによって評価した。 ４１ＢＢ単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）が細胞表面４１ＢＢに結合する能力を実証するグラフである。結合は、４１ＢＢ発現ＣＨＯ細胞を使用するフローサイトメトリーによって評価し、データを蛍光強度中央値として提示する。 ４１ＢＢ単一ドメイン抗体ＲＨ３及び４Ｈ０４がカニクイザル４１ＢＢに結合する能力を実証するグラフである。結合は、組み換え４１ＢＢ－ｍＦｃタンパク質をＭｅｄｉｓｏｒｐ９６ウェルプレート上に固定化するＥＬＩＳＡによって評価した。 ４１ＢＢ単一ドメイン抗体（ＶＨＨ）が４１ＢＢと４１ＢＢＬとの間の相互作用を遮断する能力を実証するグラフである。ＲＨ３を除いて、試験した全ての単一ドメイン抗体が、４１ＢＢと４１ＢＢＬとの間の相互作用を遮断する。遮断は、組み換え４１ＢＢ融合タンパク質及び４１ＢＢ発現ＣＨＯ細胞を使用するフローサイトメトリーによって評価し、データを蛍光強度中央値として提示する。 外因的架橋抗ヒトＩｇＧ抗体と更にクラスター化されない限り、従来の二価抗４１ＢＢ抗体ＰＦ－０５０８２５６６が４１ＢＢシグナル伝達を誘導することができないことを実証するグラフである。４１ＢＢシグナル伝達は、４１ＢＢを発現するＮＦ－ｋＢレポーター２９３細胞株を使用して監視した。 例示的なＰＤＬ１単一ドメイン抗体（２８Ａ１０）が細胞表面ＰＤＬ１に結合し、ＰＤ１との相互作用を遮断する能力を実証する一対のグラフである。結合（図７Ａ）は、ＰＤＬ１発現ＣＨＯ細胞上のフローサイトメトリーによって評価した。遮断（図７Ｂ）は、組み換えＰＤ１融合タンパク質及びＰＤＬ１発現ＣＨＯ細胞を使用するフローサイトメトリーによって評価し、データを蛍光強度中央値として提示する。 例示的なＰＤＬ１単一ドメイン抗体（２８Ａ１０）が細胞表面ＰＤＬ１に結合し、ＰＤ１との相互作用を遮断する能力を実証する一対のグラフである。結合（図７Ａ）は、ＰＤＬ１発現ＣＨＯ細胞上のフローサイトメトリーによって評価した。遮断（図７Ｂ）は、組み換えＰＤ１融合タンパク質及びＰＤＬ１発現ＣＨＯ細胞を使用するフローサイトメトリーによって評価し、データを蛍光強度中央値として提示する。 本開示の二重特異性ＰＤＬ１－４１ＢＢ標的化融合タンパク質によって媒介されるＰＤＬ１依存性４１ＢＢアゴニズムを描写する一連の例証及びグラフである。図８Ａ及び８Ｂは、概念模式図であり、二重特異性融合タンパク質は、ＰＤ－Ｌ１発現細胞が結合しない限り（図８Ｂ）、最小の４１ＢＢアゴニスト特性を有する（図８Ａ）。図８Ｃは、ＰＤＬ１－陽性細胞（ここではＰＤＬ１でトランスフェクトされたＣＨＯ細胞）が４１ＢＢシグナル伝達を媒介する能力、及びＰＤＬ１－陰性細胞（ここではトランスフェクトされていないＣＨＯ細胞）が４１ＢＢシグナル伝達を媒介できないことを実証する一対のグラフである。４１ＢＢシグナル伝達は、４１ＢＢを発現するＮＦ－ｋＢレポーター２９３細胞株を使用して監視した。 本開示の二重特異性ＰＤＬ１－４１ＢＢ標的化融合タンパク質によって媒介されるＰＤＬ１依存性４１ＢＢアゴニズムを描写する一連の例証及びグラフである。図８Ａ及び８Ｂは、概念模式図であり、二重特異性融合タンパク質は、ＰＤ－Ｌ１発現細胞が結合しない限り（図８Ｂ）、最小の４１ＢＢアゴニスト特性を有する（図８Ａ）。図８Ｃは、ＰＤＬ１－陽性細胞（ここではＰＤＬ１でトランスフェクトされたＣＨＯ細胞）が４１ＢＢシグナル伝達を媒介する能力、及びＰＤＬ１－陰性細胞（ここではトランスフェクトされていないＣＨＯ細胞）が４１ＢＢシグナル伝達を媒介できないことを実証する一対のグラフである。４１ＢＢシグナル伝達は、４１ＢＢを発現するＮＦ－ｋＢレポーター２９３細胞株を使用して監視した。 本開示の二重特異性ＰＤＬ１－４１ＢＢ標的化融合タンパク質によって媒介されるＰＤＬ１依存性４１ＢＢアゴニズムを描写する一連の例証及びグラフである。図８Ａ及び８Ｂは、概念模式図であり、二重特異性融合タンパク質は、ＰＤ－Ｌ１発現細胞が結合しない限り（図８Ｂ）、最小の４１ＢＢアゴニスト特性を有する（図８Ａ）。図８Ｃは、ＰＤＬ１－陽性細胞（ここではＰＤＬ１でトランスフェクトされたＣＨＯ細胞）が４１ＢＢシグナル伝達を媒介する能力、及びＰＤＬ１－陰性細胞（ここではトランスフェクトされていないＣＨＯ細胞）が４１ＢＢシグナル伝達を媒介できないことを実証する一対のグラフである。４１ＢＢシグナル伝達は、４１ＢＢを発現するＮＦ－ｋＢレポーター２９３細胞株を使用して監視した。 ヒト（図９Ａ及び図９Ｃ）４１ＢＢまたはヒト化ＲＨ３変異形のカニクイザル（図９Ｂ及び図９Ｄ）４１ＢＢに対する結合を実証する一連のグラフである。結合は、４１ＢＢ発現２９３フリースタイル細胞上のフローサイトメトリーによって評価した。図９Ｅは、ヒト化変異形ｈｚＲＨ３ｖ５－１及びｈｚＲＨ３ｖ９が細胞表面４１ＢＢに対する４１ＢＢＬの結合を遮断しないことを実証するグラフである。ここでは、マウスＦｃ領域を含有する組み換え融合タンパク質４１ＢＢＬ－ｍＦｃを使用し、結合した４１ＢＢＬは、抗マウスＩｇＧ－Ｆｃ特異的二次抗体を使用して検出した。 ヒト（図９Ａ及び図９Ｃ）４１ＢＢまたはヒト化ＲＨ３変異形のカニクイザル（図９Ｂ及び図９Ｄ）４１ＢＢに対する結合を実証する一連のグラフである。結合は、４１ＢＢ発現２９３フリースタイル細胞上のフローサイトメトリーによって評価した。図９Ｅは、ヒト化変異形ｈｚＲＨ３ｖ５－１及びｈｚＲＨ３ｖ９が細胞表面４１ＢＢに対する４１ＢＢＬの結合を遮断しないことを実証するグラフである。ここでは、マウスＦｃ領域を含有する組み換え融合タンパク質４１ＢＢＬ－ｍＦｃを使用し、結合した４１ＢＢＬは、抗マウスＩｇＧ－Ｆｃ特異的二次抗体を使用して検出した。 ヒト（図９Ａ及び図９Ｃ）４１ＢＢまたはヒト化ＲＨ３変異形のカニクイザル（図９Ｂ及び図９Ｄ）４１ＢＢに対する結合を実証する一連のグラフである。結合は、４１ＢＢ発現２９３フリースタイル細胞上のフローサイトメトリーによって評価した。図９Ｅは、ヒト化変異形ｈｚＲＨ３ｖ５－１及びｈｚＲＨ３ｖ９が細胞表面４１ＢＢに対する４１ＢＢＬの結合を遮断しないことを実証するグラフである。ここでは、マウスＦｃ領域を含有する組み換え融合タンパク質４１ＢＢＬ－ｍＦｃを使用し、結合した４１ＢＢＬは、抗マウスＩｇＧ－Ｆｃ特異的二次抗体を使用して検出した。 ヒト（図９Ａ及び図９Ｃ）４１ＢＢまたはヒト化ＲＨ３変異形のカニクイザル（図９Ｂ及び図９Ｄ）４１ＢＢに対する結合を実証する一連のグラフである。結合は、４１ＢＢ発現２９３フリースタイル細胞上のフローサイトメトリーによって評価した。図９Ｅは、ヒト化変異形ｈｚＲＨ３ｖ５－１及びｈｚＲＨ３ｖ９が細胞表面４１ＢＢに対する４１ＢＢＬの結合を遮断しないことを実証するグラフである。ここでは、マウスＦｃ領域を含有する組み換え融合タンパク質４１ＢＢＬ－ｍＦｃを使用し、結合した４１ＢＢＬは、抗マウスＩｇＧ－Ｆｃ特異的二次抗体を使用して検出した。 ヒト（図９Ａ及び図９Ｃ）４１ＢＢまたはヒト化ＲＨ３変異形のカニクイザル（図９Ｂ及び図９Ｄ）４１ＢＢに対する結合を実証する一連のグラフである。結合は、４１ＢＢ発現２９３フリースタイル細胞上のフローサイトメトリーによって評価した。図９Ｅは、ヒト化変異形ｈｚＲＨ３ｖ５－１及びｈｚＲＨ３ｖ９が細胞表面４１ＢＢに対する４１ＢＢＬの結合を遮断しないことを実証するグラフである。ここでは、マウスＦｃ領域を含有する組み換え融合タンパク質４１ＢＢＬ－ｍＦｃを使用し、結合した４１ＢＢＬは、抗マウスＩｇＧ－Ｆｃ特異的二次抗体を使用して検出した。 他のＴＮＦＲＳＦメンバーＯＸ４０及びＧＩＴＲとの比較での、４１ＢＢに対するｈｚＲＨ３ｖ５－１（４０ｎＭ）の特異的結合を実証するグラフである。結合は、所与のＴＮＦＲＳＦメンバーを発現するＣＨＯ細胞を使用するフローサイトメトリーによって評価した。 ヒト（図１１Ａ及び図１１Ｃ）４１ＢＢまたはヒト化４Ｅ０１変異形のカニクイザル（図１１Ｂ）４１ＢＢに対する結合を実証する一連のグラフである。結合は、４１ＢＢ発現２９３フリースタイル細胞上のフローサイトメトリーによって評価した。図１１Ｄは、ヒト化変異形ｈｚ４Ｅ０１ｖ１６、ｈｚ４Ｅ０１ｖ１８、ｈｚ４Ｅ０１ｖ２１、ｈｚ４Ｅ０１ｖ２２、及びｈｚ４Ｅ０１ｖ２３が細胞表面４１ＢＢに対する４１ＢＢＬの結合を遮断することを実証するグラフである。これらの研究では、マウスＦｃ領域を含有する組み換え融合タンパク質４１ＢＢＬ－ｍＦｃを使用し、結合した４１ＢＢＬは、抗マウスＩｇＧ－Ｆｃ特異的二次抗体を使用して検出した。 ヒト（図１１Ａ及び図１１Ｃ）４１ＢＢまたはヒト化４Ｅ０１変異形のカニクイザル（図１１Ｂ）４１ＢＢに対する結合を実証する一連のグラフである。結合は、４１ＢＢ発現２９３フリースタイル細胞上のフローサイトメトリーによって評価した。図１１Ｄは、ヒト化変異形ｈｚ４Ｅ０１ｖ１６、ｈｚ４Ｅ０１ｖ１８、ｈｚ４Ｅ０１ｖ２１、ｈｚ４Ｅ０１ｖ２２、及びｈｚ４Ｅ０１ｖ２３が細胞表面４１ＢＢに対する４１ＢＢＬの結合を遮断することを実証するグラフである。これらの研究では、マウスＦｃ領域を含有する組み換え融合タンパク質４１ＢＢＬ－ｍＦｃを使用し、結合した４１ＢＢＬは、抗マウスＩｇＧ－Ｆｃ特異的二次抗体を使用して検出した。 ヒト（図１１Ａ及び図１１Ｃ）４１ＢＢまたはヒト化４Ｅ０１変異形のカニクイザル（図１１Ｂ）４１ＢＢに対する結合を実証する一連のグラフである。結合は、４１ＢＢ発現２９３フリースタイル細胞上のフローサイトメトリーによって評価した。図１１Ｄは、ヒト化変異形ｈｚ４Ｅ０１ｖ１６、ｈｚ４Ｅ０１ｖ１８、ｈｚ４Ｅ０１ｖ２１、ｈｚ４Ｅ０１ｖ２２、及びｈｚ４Ｅ０１ｖ２３が細胞表面４１ＢＢに対する４１ＢＢＬの結合を遮断することを実証するグラフである。これらの研究では、マウスＦｃ領域を含有する組み換え融合タンパク質４１ＢＢＬ－ｍＦｃを使用し、結合した４１ＢＢＬは、抗マウスＩｇＧ－Ｆｃ特異的二次抗体を使用して検出した。 ヒト（図１１Ａ及び図１１Ｃ）４１ＢＢまたはヒト化４Ｅ０１変異形のカニクイザル（図１１Ｂ）４１ＢＢに対する結合を実証する一連のグラフである。結合は、４１ＢＢ発現２９３フリースタイル細胞上のフローサイトメトリーによって評価した。図１１Ｄは、ヒト化変異形ｈｚ４Ｅ０１ｖ１６、ｈｚ４Ｅ０１ｖ１８、ｈｚ４Ｅ０１ｖ２１、ｈｚ４Ｅ０１ｖ２２、及びｈｚ４Ｅ０１ｖ２３が細胞表面４１ＢＢに対する４１ＢＢＬの結合を遮断することを実証するグラフである。これらの研究では、マウスＦｃ領域を含有する組み換え融合タンパク質４１ＢＢＬ－ｍＦｃを使用し、結合した４１ＢＢＬは、抗マウスＩｇＧ－Ｆｃ特異的二次抗体を使用して検出した。 ヒト化単一ドメイン抗体標的化ＰＤＬ１の結合を実証するグラフである。結合は、ＰＤＬ１発現ＣＨＯ細胞上のフローサイトメトリーによって評価した。 ＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性ＩＮＢＲＸ－１０５－１の２つの例示的な形式の模式図である。ＩＮＢＲＸ－１０５－１－Ａ（左）は、中央Ｆｃ領域をとともに、反対の末端位置に位置するＰＤＬ１及び４１ＢＢ結合ドメインを有する一方で、ＩＮＢＲＸ－１０５－１－Ｂ（右）は、Ｎ末端からＦｃ領域までタンデムで位置付けられるＰＤＬ１及び４１ＢＢ結合ドメインを有する。 本明細書においてＩＮＢＲＸ－１０５－１－Ａ及びＩＮＢＲＸ－１０５－１－Ｂと呼ばれる、２つの異なる形式の二重特異性融合タンパク質標的化ＰＤＬ１及び４１ＢＢによる、ヒト（図１４Ａ）４１ＢＢまたはカニクイザル（図１４Ｂ）４１ＢＢに対する同等の結合を実証する一連のグラフである。結合は、４１ＢＢ発現２９３フリースタイル細胞上のフローサイトメトリーによって評価した。図１４Ｃは、ｈｚＲｈ３ｖ５－１を含有する二重特異性融合タンパク質が細胞表面４１ＢＢに対する４１ＢＢＬ結合を遮断しないことを実証するグラフである。ここでは、４１ＢＢＬ及びマウスＦｃ領域の組み換え融合タンパク質を使用し、結合した４１ＢＢＬは、抗マウスＩｇＧ－Ｆｃ特異的二次抗体を使用して検出した。 本明細書においてＩＮＢＲＸ－１０５－１－Ａ及びＩＮＢＲＸ－１０５－１－Ｂと呼ばれる、２つの異なる形式の二重特異性融合タンパク質標的化ＰＤＬ１及び４１ＢＢによる、ヒト（図１４Ａ）４１ＢＢまたはカニクイザル（図１４Ｂ）４１ＢＢに対する同等の結合を実証する一連のグラフである。結合は、４１ＢＢ発現２９３フリースタイル細胞上のフローサイトメトリーによって評価した。図１４Ｃは、ｈｚＲｈ３ｖ５－１を含有する二重特異性融合タンパク質が細胞表面４１ＢＢに対する４１ＢＢＬ結合を遮断しないことを実証するグラフである。ここでは、４１ＢＢＬ及びマウスＦｃ領域の組み換え融合タンパク質を使用し、結合した４１ＢＢＬは、抗マウスＩｇＧ－Ｆｃ特異的二次抗体を使用して検出した。 本明細書においてＩＮＢＲＸ－１０５－１－Ａ及びＩＮＢＲＸ－１０５－１－Ｂと呼ばれる、２つの異なる形式の二重特異性融合タンパク質標的化ＰＤＬ１及び４１ＢＢによる、ヒト（図１４Ａ）４１ＢＢまたはカニクイザル（図１４Ｂ）４１ＢＢに対する同等の結合を実証する一連のグラフである。結合は、４１ＢＢ発現２９３フリースタイル細胞上のフローサイトメトリーによって評価した。図１４Ｃは、ｈｚＲｈ３ｖ５－１を含有する二重特異性融合タンパク質が細胞表面４１ＢＢに対する４１ＢＢＬ結合を遮断しないことを実証するグラフである。ここでは、４１ＢＢＬ及びマウスＦｃ領域の組み換え融合タンパク質を使用し、結合した４１ＢＢＬは、抗マウスＩｇＧ－Ｆｃ特異的二次抗体を使用して検出した。 本明細書においてＩＮＢＲＸ－１０５－１－Ａ及びＩＮＢＲＸ－１０５－１－Ｂと呼ばれる、２つの異なる形式の二重特異性融合タンパク質標的化ＰＤＬ１及び４１ＢＢによる、同等の結合（図１５Ａ及び図１５Ｃ）ならびにＰＤ１遮断（図１５Ｂ及び図１５Ｄ）を実証する一連のグラフである。結合は、ヒト（図１５Ａ）またはカニクイザル（図１５Ｃ）ＰＤＬ１発現２９３フリースタイル細胞上のフローサイトメトリーによって評価した。遮断は、組み換えヒト（図１５Ｂ）またはカニクイザル（図１５Ｄ）ＰＤ１－ｍＦｃ融合タンパク質のいずれかとともに２９３フリースタイル細胞を発現する、ヒト（図１５Ｂ）またはカニクイザル（図１５Ｄ）ＰＤＬ１を使用するフローサイトメトリーによって評価した。結合したＰＤ１は、抗マウスＩｇＧ－Ｆｃ特異的二次抗体を使用して検出した。 本明細書においてＩＮＢＲＸ－１０５－１－Ａ及びＩＮＢＲＸ－１０５－１－Ｂと呼ばれる、２つの異なる形式の二重特異性融合タンパク質標的化ＰＤＬ１及び４１ＢＢによる、同等の結合（図１５Ａ及び図１５Ｃ）ならびにＰＤ１遮断（図１５Ｂ及び図１５Ｄ）を実証する一連のグラフである。結合は、ヒト（図１５Ａ）またはカニクイザル（図１５Ｃ）ＰＤＬ１発現２９３フリースタイル細胞上のフローサイトメトリーによって評価した。遮断は、組み換えヒト（図１５Ｂ）またはカニクイザル（図１５Ｄ）ＰＤ１－ｍＦｃ融合タンパク質のいずれかとともに２９３フリースタイル細胞を発現する、ヒト（図１５Ｂ）またはカニクイザル（図１５Ｄ）ＰＤＬ１を使用するフローサイトメトリーによって評価した。結合したＰＤ１は、抗マウスＩｇＧ－Ｆｃ特異的二次抗体を使用して検出した。 本明細書においてＩＮＢＲＸ－１０５－１－Ａ及びＩＮＢＲＸ－１０５－１－Ｂと呼ばれる、２つの異なる形式の二重特異性融合タンパク質標的化ＰＤＬ１及び４１ＢＢによる、同等の結合（図１５Ａ及び図１５Ｃ）ならびにＰＤ１遮断（図１５Ｂ及び図１５Ｄ）を実証する一連のグラフである。結合は、ヒト（図１５Ａ）またはカニクイザル（図１５Ｃ）ＰＤＬ１発現２９３フリースタイル細胞上のフローサイトメトリーによって評価した。遮断は、組み換えヒト（図１５Ｂ）またはカニクイザル（図１５Ｄ）ＰＤ１－ｍＦｃ融合タンパク質のいずれかとともに２９３フリースタイル細胞を発現する、ヒト（図１５Ｂ）またはカニクイザル（図１５Ｄ）ＰＤＬ１を使用するフローサイトメトリーによって評価した。結合したＰＤ１は、抗マウスＩｇＧ－Ｆｃ特異的二次抗体を使用して検出した。 本明細書においてＩＮＢＲＸ－１０５－１－Ａ及びＩＮＢＲＸ－１０５－１－Ｂと呼ばれる、２つの異なる形式の二重特異性融合タンパク質標的化ＰＤＬ１及び４１ＢＢによる、同等の結合（図１５Ａ及び図１５Ｃ）ならびにＰＤ１遮断（図１５Ｂ及び図１５Ｄ）を実証する一連のグラフである。結合は、ヒト（図１５Ａ）またはカニクイザル（図１５Ｃ）ＰＤＬ１発現２９３フリースタイル細胞上のフローサイトメトリーによって評価した。遮断は、組み換えヒト（図１５Ｂ）またはカニクイザル（図１５Ｄ）ＰＤ１－ｍＦｃ融合タンパク質のいずれかとともに２９３フリースタイル細胞を発現する、ヒト（図１５Ｂ）またはカニクイザル（図１５Ｄ）ＰＤＬ１を使用するフローサイトメトリーによって評価した。結合したＰＤ１は、抗マウスＩｇＧ－Ｆｃ特異的二次抗体を使用して検出した。 ＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質のヒト化バージョン（ＩＮＢＲＸ－１０５－１）がＰＤＬ１依存性４１ＢＢアゴニズムを誘導する能力を実証するグラフである。４１ＢＢ発現ＨＥＫ２９３ＮＦ－ｋＢレポーター細胞株を使用して、４１ＢＢシグナル伝達を評価し、ＰＤＬ１発現ＣＨＯ細胞株をＰＤＬ１源として使用した。 本開示のＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質（ＩＮＢＲＸ－１０５－１）の４１ＢＢ結合部分による４１ＢＢ特異的結合を実証する一対のグラフである。結合は、４１ＢＢ（図１７Ａ）または最も近いホモログＴＮＦＲＳＦ２１／ＤＲ６（図１７Ｂ）発現２９３フリースタイル細胞上でフローサイトメトリーによって評価した。抗ＤＲ６抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）をＤＲ６発現の陽性対照として使用した。 本開示のＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質（ＩＮＢＲＸ－１０５－１）の４１ＢＢ結合部分による４１ＢＢ特異的結合を実証する一対のグラフである。結合は、４１ＢＢ（図１７Ａ）または最も近いホモログＴＮＦＲＳＦ２１／ＤＲ６（図１７Ｂ）発現２９３フリースタイル細胞上でフローサイトメトリーによって評価した。抗ＤＲ６抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）をＤＲ６発現の陽性対照として使用した。 本開示のＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質（ＩＮＢＲＸ－１０５－１）のＰＤＬ１結合部分によるＰＤＬ１特異的結合を実証する一対のグラフである。結合は、ＰＤＬ１（図１８Ａ）、及びその最も近いホモログＰＤＬ２（図１８Ｂ）またはＶＩＳＴＡ／ＰＤＬ３（図１８Ｃ）発現２９３フリースタイル細胞上でフローサイトメトリーによって評価した。抗ＰＤＬ２及び抗ＶＩＳＴＡ抗体をそれぞれ、ＰＤＬ２及びＰＤＬ３発現の陽性対照として使用した。 本開示のＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質（ＩＮＢＲＸ－１０５－１）のＰＤＬ１結合部分によるＰＤＬ１特異的結合を実証する一対のグラフである。結合は、ＰＤＬ１（図１８Ａ）、及びその最も近いホモログＰＤＬ２（図１８Ｂ）またはＶＩＳＴＡ／ＰＤＬ３（図１８Ｃ）発現２９３フリースタイル細胞上でフローサイトメトリーによって評価した。抗ＰＤＬ２及び抗ＶＩＳＴＡ抗体をそれぞれ、ＰＤＬ２及びＰＤＬ３発現の陽性対照として使用した。 本開示のＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質（ＩＮＢＲＸ－１０５－１）のＰＤＬ１結合部分によるＰＤＬ１特異的結合を実証する一対のグラフである。結合は、ＰＤＬ１（図１８Ａ）、及びその最も近いホモログＰＤＬ２（図１８Ｂ）またはＶＩＳＴＡ／ＰＤＬ３（図１８Ｃ）発現２９３フリースタイル細胞上でフローサイトメトリーによって評価した。抗ＰＤＬ２及び抗ＶＩＳＴＡ抗体をそれぞれ、ＰＤＬ２及びＰＤＬ３発現の陽性対照として使用した。 ＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質がＰＤＬ１及び４１ＢＢに同時に結合する能力を実証する一対のグラフである。結合した４１ＢＢは、抗マウスＩｇＧ－Ｆｃ特異的二次抗体を使用して検出した。図１９Ａは、ＰＤＬ１発現Ｋ５６２細胞に対するＩＮＢＲＸ－１０５－１の結合を示すグラフである。図１９Ｂは、ＰＤＬ１発現細胞上のＩＮＢＲＸ－１０５－１に対する組み換え４１ＢＢの結合を示すグラフである。 ＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質がＰＤＬ１及び４１ＢＢに同時に結合する能力を実証する一対のグラフである。結合した４１ＢＢは、抗マウスＩｇＧ－Ｆｃ特異的二次抗体を使用して検出した。図１９Ａは、ＰＤＬ１発現Ｋ５６２細胞に対するＩＮＢＲＸ－１０５－１の結合を示すグラフである。図１９Ｂは、ＰＤＬ１発現細胞上のＩＮＢＲＸ－１０５－１に対する組み換え４１ＢＢの結合を示すグラフである。 ＥＬＩＳＡにおいて、ＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質が組み換えＰＤＬ１及び組み換え４１ＢＢに同時に結合する能力を実証するグラフである。結合した組み換え４１ＢＢは、ストレプトアビジン－ＨＲＰを介して検出した。 Ｔ細胞活性化及び増殖に対する、本開示のＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質（ＩＮＢＲＸ－１０５－１）の効果を実証する一連のグラフである。細胞上清中のＩＮＦγ産生は、ＥＬＩＳＡを使用して監視し、標準曲線に対して正規化した。Ｔ細胞増殖は、Ｔ細胞のＣＴＶ標識化を使用するフローサイトメトリーによって監視した。Ｔ細胞活性化は、フローサイトメトリーによって監視される活性化マーカーＣＤ２５の存在によって評価した。抗体は、１０ｎＭで使用した。 Ｔ細胞活性化及び増殖に対する、本開示のＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質（ＩＮＢＲＸ－１０５－１）の効果を実証する一連のグラフである。細胞上清中のＩＮＦγ産生は、ＥＬＩＳＡを使用して監視し、標準曲線に対して正規化した。Ｔ細胞増殖は、Ｔ細胞のＣＴＶ標識化を使用するフローサイトメトリーによって監視した。Ｔ細胞活性化は、フローサイトメトリーによって監視される活性化マーカーＣＤ２５の存在によって評価した。抗体は、１０ｎＭで使用した。 Ｔ細胞活性化及び増殖に対する、本開示のＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質（ＩＮＢＲＸ－１０５－１）の効果を実証する一連のグラフである。細胞上清中のＩＮＦγ産生は、ＥＬＩＳＡを使用して監視し、標準曲線に対して正規化した。Ｔ細胞増殖は、Ｔ細胞のＣＴＶ標識化を使用するフローサイトメトリーによって監視した。Ｔ細胞活性化は、フローサイトメトリーによって監視される活性化マーカーＣＤ２５の存在によって評価した。抗体は、１０ｎＭで使用した。 本開示のＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質（ＩＮＢＲＸ－１０５－１）によって媒介されるＰＤＬ１依存性４１ＢＢアゴニズムを実証する一対のグラフである。ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖（図２２Ａ）は、ＣＴＶ標識化を使用して監視し、細胞上清中のＩＮＦγ産生（図２２Ｂ）は、ＥＬＩＳＡを使用して監視し、標準曲線に対して正規化した。 本開示のＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質（ＩＮＢＲＸ－１０５－１）によって媒介されるＰＤＬ１依存性４１ＢＢアゴニズムを実証する一対のグラフである。ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖（図２２Ａ）は、ＣＴＶ標識化を使用して監視し、細胞上清中のＩＮＦγ産生（図２２Ｂ）は、ＥＬＩＳＡを使用して監視し、標準曲線に対して正規化した。 本開示のＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質（ＩＮＢＲＸ－１０５－１）が、Ｔ細胞集団内でのＴｈ１系譜定義転写因子（Ｔ－ｂｅｔ）発現を増強する能力を実証するグラフである。Ｔ－ｂｅｔ発現は、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞集団上で、固定及び透過処理の後、細胞内染色を介してフローサイトメトリーによって評価した。 本開示のＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質（ＩＮＢＲＸ－１０５－１）、及び単一特異性抗体アテゾリズマブ（抗ＰＤＬ１）とウトミルマブ（抗４１ＢＢ）との組み合わせが、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞からのＩＮＦγ（図２４Ａ）またはＴＮＦα（図２４Ｂ）産生を誘導する能力を対照する一対のグラフである。サイトカイン発現は、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞集団上で、固定及び透過処理の後、細胞内染色を介してフローサイトメトリーによって評価した。 本開示のＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質（ＩＮＢＲＸ－１０５－１）、及び単一特異性抗体アテゾリズマブ（抗ＰＤＬ１）とウトミルマブ（抗４１ＢＢ）との組み合わせが、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞からのＩＮＦγ（図２４Ａ）またはＴＮＦα（図２４Ｂ）産生を誘導する能力を対照する一対のグラフである。サイトカイン発現は、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞集団上で、固定及び透過処理の後、細胞内染色を介してフローサイトメトリーによって評価した。 追加のＰＤＬ１陽性（図２５Ａ）または陰性（図２５Ｂ）細胞株の存在下での、四価４１ＢＢ結合融合タンパク質、及び本開示のＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質のアゴニスト能力を実証する一対のグラフである。ここでは、４１ＢＢ発現ＨＥＫ２９３ＮＦ－ｋＢレポーター細胞を使用し、ＰＤＬ１－陰性Ｋ５６２細胞株（図２５Ｂ）または安定してトランスフェクトされたＰＤＬ１発現Ｋ５６２細胞株（図２５Ａ）のいずれかとともに同時インキュベートした。 追加のＰＤＬ１陽性（図２５Ａ）または陰性（図２５Ｂ）細胞株の存在下での、四価４１ＢＢ結合融合タンパク質、及び本開示のＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質のアゴニスト能力を実証する一対のグラフである。ここでは、４１ＢＢ発現ＨＥＫ２９３ＮＦ－ｋＢレポーター細胞を使用し、ＰＤＬ１－陰性Ｋ５６２細胞株（図２５Ｂ）または安定してトランスフェクトされたＰＤＬ１発現Ｋ５６２細胞株（図２５Ａ）のいずれかとともに同時インキュベートした。
本明細書において言及される全ての特許及び刊行物は、各個別の特許及び刊行物が、具体的かつ個々に参照により組み込まれることが示されているのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
定義
別段定義されない限り、本発明に関連して使用される科学用語及び技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。更に、別段文脈によって要求されない限り、単数形の用語は複数形を含むものとし、複数形の用語は単数形を含むものとする。一般に、本明細書に記載される、細胞及び組織培養、分子生物学、ならびにタンパク質及びオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチド化学及びハイブリダイゼーションに関連して利用される命名法及びその技術は、当該技術分野において周知であり、一般的に使用されているものである。組み換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、ならびに組織培養及び形質転換（例えば、電気穿孔、リポフェクション）には、標準技術が使用される。酵素反応及び精製技術は、製造業者の仕様書に従って、または当該技術分野において一般的に達成されるように、または本明細書に記載されるように実行される。前述の技術及び手順は一般に、当該技術分野において周知である従来の方法に従って、かつ本明細書全体を通して引用され、考察される、一般的かつより具体的な様々な参考文献に記載されるように実行される。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照されたい。本明細書に記載される分析化学、合成有機化学、ならびに医薬品化学及び製薬化学に関連して利用される命名法、ならびにその研究室手順及び技術は、当該技術分野において周知であり、一般的に使用されているものである。化学合成、化学分析、薬学的調製、製剤化、及び送達、ならびに患者の治療には、標準技術が使用される。
本開示に従って利用される場合、別段示されない限り、以下の用語は、以下の意味を有すると理解されるものとする。
本明細書で使用される場合、「二重標的化融合タンパク質」及び「抗体」という用語は、同義語であり得る。本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子、及び免疫グロブリン（Ｉｇ）分子（すなわち、抗原に特異的に結合する（それと免疫反応する）抗原結合部位を含有する分子）の免疫学的に活性な部分を指す。「に特異的に結合する」または「と免疫反応する」または「に対して指向される」によって、抗体が、所望の抗原の１つ以上の抗原決定因子と反応し、他のポリペプチドと反応したり、またはより一層低い親和性（Ｋｄ＞１０－６）で結合したりしないことが意味される。抗体としては、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、ｄＡｂ（ドメイン抗体）、一本鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ発現ライブラリ、ならびに単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）フラグメント、例えば、ＶＨＨ、ＶＮＡＲ、操作されたＶＨ、またはＶＫが挙げられるが、これらに限定されない。
基本的な抗体構造単位は、四量体を含むことが知られている。各四量体は、２つの同一のポリペプチド鎖対で構成され、各対は、１つの「軽鎖」（約２５ｋＤａ）及び１つの「重鎖」（約５０～７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識に関与する約１００～１１０以上のアミノ酸長の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクター機能に関与する定常領域を定義する。一般に、ヒトから得られる抗体分子は、クラスＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、及びＩｇＤのうちのいずれかに関連し、これは、分子内に存在する重鎖の性質によって互いに異なる。特定のクラスは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及び他のものなどのサブクラス（アイソタイプとしても知られる）も有する。更に、ヒトにおいて、軽鎖は、カッパ鎖またはラムダ鎖であり得る。
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」（ＭＡｂ）または「モノクローナル抗体組成物」という用語は、特有の軽鎖遺伝子産物及び特有の重鎖遺伝子産物からなる抗体分子の１つの分子種のみを含有する抗体分子の集団を指す。具体的には、モノクローナル抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）は、その集団の全ての分子内で同一である。ＭＡｂは、それに対する特有の結合親和性を特徴とする抗原の特定のエピトープと免疫反応することができる抗原結合部位を含有する。
「抗原結合部位」または「結合部分」という用語は、抗原結合に関与する免疫グロブリン分子の部分を指す。抗原結合部位は、重鎖（「Ｈ」）鎖及び軽（「Ｌ」）鎖のＮ末端可変（「Ｖ」）領域のアミノ酸残基によって形成される。「超可変領域」と呼ばれる、重鎖及び軽鎖のＶ領域内の３つの高度に多岐にわたる伸展が、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」として知られるより保存された隣接伸展間に挿入される。したがって、「ＦＲ」という用語は、免疫グロブリン内の超可変領域間、及びそれに隣接して天然に見出されるアミノ酸配列を指す。抗体分子内で、軽鎖の３つの超可変領域及び重鎖の超可変領域は、三次元空間において互いに相対的に配置されて、抗原結合表面を形成する。抗原結合表面は、結合した抗原のこの三次元表面に対して相補的であり、重鎖及び軽鎖の各々の３つの超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」と呼ばれる。各ドメインへのアミノ酸の割り当ては、Ｋａｂａｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７ａｎｄ１９９１））、またはＣｈｏｔｈｉａ＆Ｌｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７８－８８３（１９８９）の定義に従う。
本開示の融合タンパク質の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）フラグメント部分は、本明細書において互換的に本明細書の標的化ポリペプチドとも呼ばれる。
本明細書で使用される場合、「エピトープ」という用語は、免疫グロブリンもしくはそのフラグメント、またはＴ細胞受容体に対して／によって特異的に結合することができるいかなるタンパク質決定因子も含む。「エピトープ」という用語は、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に対して／によって特異的に結合することができるいかなるタンパク質決定因子も含む。エピトープ決定因子は通常、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面分類からなり、通常特定の三次元構造特徴及び特定の電荷特徴を有する。抗体は、解離定数が１ｍＭ以下、例えば、１μＭ以下、例えば、１００ｎＭ以下、例えば、１０ｎＭ以下、例えば、１ｎＭ以下である場合に、抗原に特異的に結合すると言われる。
本明細書で使用される場合、「免疫学的結合」及び「免疫学的結合特性」という用語は、免疫グロブリン分子とその免疫グロブリンが特異的である抗原との間に生じる、その種類の非共有結合的相互作用を指す。免疫学的結合相互作用の強度または親和性は、相互作用の解離定数（Ｋｄ）の観点から表すことができ、より小さなＫｄはより大きな親和性を表す。選択されるポリペプチドの免疫学的結合特性は、当該技術分野において周知である方法を使用して定量化することができる。１つのそのような方法は、抗原結合部位／抗原複合体形成及び解離の速度の測定を伴い、それらの速度は、複合体パートナーの濃度、相互作用の親和性、及び両方向において速度に等しく影響する幾何的パラメータに依存する。したがって、「オン速度定数」（ｋｏｎ）及び「オフ速度定数」（ｋｏｆｆ）の両方は、濃度ならびに会合及び解離の実際の速度を計算することによって決定することができる。（Ｎａｔｕｒｅ３６１：１８６－８７（１９９３）を参照されたい）。ｋｏｆｆ／ｋｏｎの比率は、親和性に関連しない全てのパラメータの解除を可能にし、解離定数Ｋｄに等しい。（一般に、Ｄａｖｉｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ５９：４３９－４７３を参照されたい）。本開示の抗体は、放射性リガンド結合アッセイ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、フローサイトメトリー結合アッセイ、または当業者にとって既知である類似のアッセイなどのアッセイによって測定される平衡結合定数（Ｋｄ）が１μＭ以下、例えば、１０ｎＭ以下、例えば、１００ｐＭ～約１ｐＭ以下である場合に、抗原に特異的に結合すると言われる。
本明細書で使用される場合、「単離されたポリヌクレオチド」という用語は、ゲノム起源（ｃＤＮＡ）もしくは合成起源、またはこれらのいくつかの組み合わせのポリヌクレオチドを意味するものとし、その起源のために、「単離されたポリヌクレオチド」は、（１）「単離されたポリヌクレオチド」が天然に見出されるポリヌクレオチドの全てまたは一部分とは関連していないか、（２）それが天然には連結していないポリヌクレオチドに動作可能に連結しているか、または（３）より大きな配列の一部として天然には存在しない。
本明細書において言及される「単離されたタンパク質」という用語は、ｃＤＮＡ、組み換えＲＮＡ、もしくは合成起源、またはこれらの組み合わせのタンパク質を意味し、その起源または誘導源のために、「単離されたタンパク質」は、（１）天然に見出されるタンパク質とは関連していないか、（２）同一の供給源からの他のタンパク質を含まない、例えば、海洋タンパク質を含まないか、（３）異なる種の細胞によって発現されるか、または（４）天然に存在しない。
本明細書において、「ポリペプチド」という用語は、あるポリペプチド配列の天然タンパク質、フラグメント、または類似体を指すための総称として使用される。したがって、天然タンパク質フラグメント及び類似体は、ポリペプチド属の種である。
本明細書で使用される場合、「天然に存在する」という用語は、ある対象に適用される場合、対象を天然に見出すことができるという事実を指す。例えば、天然の供給源から単離され得、かつ研究室において人間によって意図的に修飾されていないか、または別様に天然に存在する、ある生物（ウイルスを含む）に存在するポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列。
本明細書で使用される場合、「動作可能に連結している」という用語は、記載されている構成要素の位置が、それらがそれらの意図される様式で機能することを可能にする関係にあることを指す。コード配列に「動作可能に連結している」制御配列は、コード配列の発現が制御配列と適合する条件下で達成されるような方法で連結している。
本明細書で使用される場合、「制御配列」は、それらが連結しているコード配列の発現及びプロセシングをもたらすのに必要なポリヌクレオチド配列を指す。そのような制御配列の性質は、原核生物中の宿主生物によって異なり、そのような制御配列は一般に、真核生物中のプロモーター、リボソーム結合部位、及び転写終結配列を含み、一般に、そのような制御配列は、プロモーター及び転写終結配列を含む。「制御配列」という用語は、最低でも、その存在が発現及びプロセシングに必須である全ての構成要素を含み、その存在が有利である追加の構成要素（例えば、リーダー配列及び融合パートナー配列）も含み得ることが意図される。本明細書で言及される場合、「ポリヌクレオチド」は、少なくとも１０塩基長のヌクレオチドの重合ホウ素、リボヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドのいずれか、またはいずれかの種類のヌクレオチドの修飾形態を指す。この用語は、一本鎖及び二本鎖形態のＤＮＡを含む。
本明細書において言及される「オリゴヌクレオチド」は、天然に存在するヌクレオチド、ならびに天然に存在するオリゴヌクレオチド連鎖及び天然に存在しないオリゴヌクレオチド連鎖によってともに連結している修飾されたヌクレオチドを含む。オリゴヌクレオチドは、一般に２００以下の塩基長を含むポリヌクレオチドサブセットである。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、１０～６０塩基長、例えば、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０～４０塩基長である。オリゴヌクレオチドは通常、例えば、プローブのためには一本鎖であるが、オリゴヌクレオチドは、例えば、遺伝子変異体の構築における使用のためには二本鎖であってもよい。本開示のオリゴヌクレオチドは、センスオリゴヌクレオチドまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドのいずれかである。
本明細書において言及される「天然に存在するヌクレオチド」という用語は、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドを含む。本明細書において言及される「修飾されたヌクレオチド」という用語は、修飾または置換された糖基を有するヌクレオチドなどを含む。本明細書において言及される「オリゴヌクレオチド連鎖」という用語は、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレロエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート、ホスホラニラデート、及びホスホロンミデートなどのオリゴヌクレオチド連鎖を含む。例えば、ＬａＰｌａｎｃｈｅ ｅｔ ａｌ．Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１４：９０８１（１９８６）、Ｓｔｅｃ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０６：６０７７（１９８４）、Ｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１６：３２０９（１９８８）、Ｚｏｎ ｅｔ ａｌ．Ａｎｔｉ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ６：５３９（１９９１）、Ｚｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ｐｐ．８７－１０８（Ｆ．Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｅｎｇｌａｎｄ（１９９１））、Ｓｔｅｃらの米国特許第５，１５１，５１０号、Ｕｈｌｍａｎｎ ａｎｄ Ｐｅｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ９０：５４３（１９９０）を参照されたい。オリゴヌクレオチドは、所望される場合、検出のために標識を含んでもよい。
本明細書において言及される「選択的にハイブリダイズする」という用語は、検出可能かつ特異的に結合することを意味する。本開示に従うポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、及びそれらのフラグメントは、非特異的な核酸に対する認識できる量の検出可能な結合を最小化するハイブリダイゼーション及び洗浄条件下で、核酸鎖に選択的にハイブリダイズする。高度な厳密性条件を使用して、当該技術分野において既知であり、本明細書において考察される選択的ハイブリダイゼーション条件を達成することができる。一般に、本開示のポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、及びフラグメントと、対象となる核酸配列との間の核酸配列相同性は、少なくとも８０％であり、より典型的には少なくとも８５％、９０％、９５％、９９％、及び１００％の増加する相同性である。２つのアミノ酸配列は、それらの配列間に部分的または完全な同一性が存在する場合に相同である。例えば、８５％の相同性は、２つの配列が最大整合のために整列されたときに、８５％のアミノ酸が同一であることを意味する。（整合されている２つの配列のうちのいずれかにおける）間隙が整合を最大化する上で許容され、５以下の間隙長が好ましく、２以下がより好ましい。あるいは、２つのタンパク質配列（または少なくとも３０アミノ酸長のそれらから誘導されるポリペプチド配列）は、それらが、変異データマトリクス及び６以上の間隙ペナルティでプログラムＡＬＩＧＮを使用して、（標準偏差単位で）５超の整列スコアを有する場合に、相同（この用語が本明細書で使用される場合）である。Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．，ｉｎ Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｐｐ．１０１－１１０（Ｖｏｌｕｍｅ５，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ（１９７２））及びこの巻のＳｕｐｐｌｅｍｅｎｔ２，ｐｐ．１－１０を参照されたい。２つの配列またはそれらの部分は、それらのアミノ酸がＡＬＩＧＮプログラムを使用して最適に整列されたときに５０％以上同一である場合に、より好ましく相同である。「に対応する」という用語は、本明細書において、ポリヌクレオチド配列が参照ポリヌクレオチド配列の全てもしくは一部分に対して相同である（すなわち、同一であり、厳密には進化的に関連していない）こと、またはポリペプチド配列が参照ポリペプチド配列に対して同一であることを意味するために使用される。対照的に、「に相補的な」という用語は、本明細書において、相補的配列が参照ポリヌクレオチド配列の全てまたは一部分に対して相同であることを意味するために使用される。例えば、ヌクレオチド配列「ＴＡＴＡＣ」は、参照配列「ＴＡＴＡＣ」に対応し、参照配列「ＧＴＡＴＡ」に相補的である。
以下の用語、「参照配列」、「比較ウィンドウ」、「配列同一性」、「配列同一性のパーセンテージ」、及び「実質的同一性」は、２つ以上のポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列間の配列関係を記載するために使用される。「参照配列」は、配列比較の基準として使用される定義された配列であり、参照配列は、より大きな配列のサブセット（例えば、配列表において与えられる完全長ｃＤＮＡまたは遺伝子配列のセグメントとして）であっても、完全なｃＤＮＡまたは遺伝子配列を含んでもよい。一般に、参照配列は、少なくとも１８ヌクレオチド長または６アミノ酸長、頻繁に少なくとも２４ヌクレオチド長または８アミノ酸長、及びしばしば少なくとも４８ヌクレオチド長または１６アミノ酸長である。２つのポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列は各々、（１）２つの分子間に類似している配列（すなわち、完全なポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列の一部分）を含み、（２）２つのポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列間で異なる配列を更に含み得るため、２つ（以上）の分子間の配列比較は典型的には、２つの分子の配列を「比較ウィンドウ」と比較して、配列が類似している局所領域を特定し、比較することによって実行される。本明細書で使用される場合、「比較ウィンドウ」は、少なくとも１８の近接ヌクレオチド位置または６のアミノ酸の概念セグメントを指し、ポリヌクレオチド配列またはアミノ酸配列は、少なくとも１８の近接ヌクレオチドまたは６のアミノ酸配列の参照配列と比較することができ、比較ウィンドウ内のポリヌクレオチド配列の部分は、２つの配列の最適な整列のために、（付加または欠失を含まない）参照配列と比較して、２０パーセント以下の付加、欠失、及び置換など（すなわち、間隙）を含んでもよい。比較ウィンドウを整列させるための配列の最適な整列は、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局所相同性アルゴリズムによって、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同性整列アルゴリズムによって、Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）８５：２４４４（１９８８）の類似性検索法によって、これらのアルゴリズムのコンピュータ化実装（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ Ｒｅｌｅａｓｅ７．０，（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）Ｇｅｎｅｗｏｒｋｓ、またはＭａｃＶｅｃｔｏｒソフトウェアパッケージ）のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡによって、または検査によって実行することができ、様々な方法によって生成される最良の整列（すなわち、その比較ウィンドウにわたる最高パーセンテージの相同性をもたらす）が選択される。
「配列同一性」という用語は、比較ウィンドウにわたって２つのポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列が同一である（すなわち、ヌクレオチド毎または残基毎に基づいて）ことを意味する。「配列同一性のパーセンテージ」という用語は、比較ウィンドウにわたって２つの最適に整列された配列を比較し、両方の配列において同一の核酸塩基（例えば、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｕ、もしくはＩ）または残基が生じる位置の数を決定して、整合された位置の数を得、整合された位置の数を比較ウィンドウ内の位置の総数（すなわち、ウィンドウサイズ）で除し、結果に１００を乗じて、配列同一性のパーセンテージを得ることによって計算される。本明細書で使用される場合、「実質的同一性」という用語は、ポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列の特徴を示し、ポリヌクレオチドまたはアミノ酸は、少なくとも１８のヌクレオチド（６のアミノ酸）位置の比較ウィンドウにわたって、頻繁に少なくとも２４～４８ヌクレオチド（８～１６のアミノ酸）位置のウィンドウにわたって、参照配列と比較して、少なくとも８５パーセントの配列同一性、好ましくは少なくとも９０～９５パーセントの配列同一性、より通常は少なくとも９９パーセントの配列同一性を有する配列を含み、配列同一性のパーセンテージは、参照配列を、比較ウィンドウにわたって参照配列の総計２０パーセント以下の欠失または付加を含み得る配列と比較することによって計算される。参照配列は、より大きな配列のサブセットであってもよい。
本明細書で使用される場合、２０の従来のアミノ酸及びそれらの略称は、従来の使用法に従う。Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ－Ａ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅ．Ｓ．Ｇｏｌｕｂ ａｎｄ Ｄ．Ｒ．Ｇｒｅｎ，Ｅｄｓ．，Ｓｉｎａｕｅｒ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ７Ｍａｓｓ．（１９９１））を参照されたい。２０の従来のアミノ酸の立体異性体（例えば、Ｄ－アミノ酸）、非天然アミノ酸（α－α－二置換アミノ酸など）、Ｎ－アルキルアミノ酸、乳酸、及び他の非定型アミノ酸もまた、本開示のポリペプチドの好適な構成要素であり得る。非定型アミノ酸の例としては、４ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタミン酸、ε－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルリジン、ε－Ｎ－アセチルリジン、Ｏ－ホスホセリン、Ｎ－アセチルセリン、Ｎ－ホルミルメチオニン、３－メチルヒスチジン、５－ヒドロキシリジン、σ－Ｎ－メチルアルギニン、ならびに他の類似したアミノ酸及びイミノ酸（例えば、４－ヒドロキシプロリン）が挙げられる。本明細書で使用されるポリペプチド表示法において、標準使用法及び慣習に従って、左手方向はアミノ末端方向であり、右手方向はカルボキシ末端方向である。
同様に、別段指定されない限り、一本鎖ポリヌクレオチド配列の左手端は５’端であり、二本鎖ポリヌクレオチド配列の左手方向は５’方向と呼ばれる。新生ＲＮＡ転写の５’から３’の付加の方向は、転写方向と呼ばれ、ＲＮＡと同一の配列を有し、ＲＮＡ転写の５’から５’端であるＤＮＡ鎖上の配列領域は、「上流配列」と呼ばれ、ＲＮＡと同一の配列を有し、ＲＮＡ転写の３’から３’端であるＤＮＡ鎖上の配列領域は、「下流配列」と呼ばれる。
ポリペプチドに適用される場合、「実質的同一性」という用語は、デフォルト間隙重量を使用するプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴなどによって最適に整列されたときに、２つのペプチド配列が少なくとも８０パーセントの配列同一性、例えば、少なくとも９０パーセントの配列同一性、例えば、少なくとも９５パーセントの配列同一性、及び例えば、少なくとも９９パーセントの配列同一性を共有することを意味する。
いくつかの実施形態において、同一ではない残基位置は、保存的アミノ酸置換によって異なる。
保存的アミノ酸置換は、類似した側鎖を有する残基の互換性を指す。例えば、脂肪族側鎖を有するアミノ酸の群は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、及びイソロイシンであり、脂肪族－ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸の群は、セリン及びスレオニンであり、アミド含有側鎖を有するアミノ酸の群は、アスパラギン及びグルタミンであり、芳香族側鎖を有するアミノ酸の群は、フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファンであり、塩基性側鎖を有するアミノ酸の群は、リジン、アルギニン、及びヒスチジンであり、硫黄含有側鎖を有するアミノ酸の群は、システイン及びメチオニンである。好適な保存的アミノ酸置換基は、バリン－ロイシン－イソロイシン、フェニルアラニン－チロシン、リジン－アルギニン、アラニンバリン、グルタミン酸－アスパラギン酸、及びアスパラギン－グルタミンである。
本明細書において考察されるように、抗体または免疫グロブリン分子のアミノ酸配列のわずかな変化形は、本開示によって包含されることが企図されるが、但し、そのアミノ酸配列の変化形が、少なくとも７５％、例えば、少なくとも８０％、９０％、９５％、及び例えば、９９％を維持することを条件とする。具体的には、保存的アミノ酸置換が企図される。保存的置換は、それらの側鎖において関連するアミノ酸のファミリー内で起こる置換である。遺伝子的にコードされたアミノ酸は一般に、ファミリーに分けられ、（１）酸性アミノ酸は、アスパラギン酸、グルタミン酸であり、（２）塩基性アミノ酸は、リジン、アルギニン、ヒスチジンであり、（３）非極性アミノ酸は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファンであり、（４）無電荷極性アミノ酸は、グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシンである。親水性アミノ酸としては、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、リジン、セリン、及びスレオニンが挙げられる。疎水性アミノ酸としては、アラニン、システイン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、チロシン、及びバリンが挙げられる。アミノ酸の他のファミリーとしては、（ｉ）脂肪族ヒドロキシファミリーであるセリン及びスレオニン、（ｉｉ）アミド含有ファミリーであるアスパラギン及びグルタミン、（ｉｉｉ）脂肪族ファミリーであるアラニン、バリン、ロイシン、及びイソロイシン、ならびに（ｉｖ）芳香族ファミリーであるフェニルアラニン、トリプトファン、及びチロシンが挙げられる。例えば、ロイシンのイソロイシンまたはバリンとの、アスパラギン酸のグルタミン酸との、スレオニンのセリンとの単離された置換、またはアミノ酸の構造的に関連したアミノ酸との類似した置換は、特に、置換がフレームワーク部位内のアミノ酸に関与しない場合、結合または結果として得られる分子の特性に対して主要な影響を有さないと予想することが妥当である。アミノ酸変化が機能性ペプチドをもたらすかどうかは、ポリペプチド誘導体の特異的活性をアッセイすることによって容易に決定することができる。アッセイは、本明細書に詳細に記載されている。抗体または免疫グロブリン分子のフラグメントまたは類似体は、当業者が容易に調製することができる。フラグメントまたは類似体の好適なアミノ末端及びカルボキシ末端は、機能的ドメインの境界近くで生じる。構造的及び機能的ドメインは、ヌクレオチド及び／またはアミノ酸配列データを好適または専有配列データベースと比較することによって特定することができる。いくつかの実施形態において、構造及び／または機能が既知である他のタンパク質内で生じる、配列モチーフまたは予想されるタンパク質立体構造ドメインを特定するために、コンピュータ化比較法が使用される。既知の三次元構造へと折り畳まれるタンパク質配列を特定するための方法は、既知である。Ｂｏｗｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ２５３：１６４（１９９１）。したがって、前述の例は、当業者が、本開示に従う構造的及び機能的ドメインを定義するために使用することができる配列モチーフ及び構造的立体構造を認識できることを実証する。
好適なアミノ酸置換は、（１）タンパク質分解に対する感受性を低減するもの、（２）酸化に対する感受性を低減するもの、（３）タンパク質複合体を形成するための結合親和性を変更するもの、（４）の結合親和性を変更するもの、（４）そのような類似体の他の物理化学的または機能的特性を与えるか、修飾するものである。類似体は、天然に存在するペプチド配列以外の、ある配列の様々な変異タンパク質を含み得る。例えば、単一または複数のアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）は、天然に存在する配列において（例えば、分子内接触を形成するドメイン（複数可）の外部のポリペプチドの部分において）行われてもよい。保存的アミノ酸置換は、親配列の構造的特徴を実質的には変更しないだろう（例えば、置換アミノ酸は、親配列において生じるヘリックスを切断する傾向も、親配列を特徴付ける他の種類の二次構造を妨害する傾向もないだろう）。当該技術分野において認識されているポリペプチド二次構造及び三次構造の例は、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４））、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｃ．Ｂｒａｎｄｅｎ ａｎｄ Ｊ．Ｔｏｏｚｅ，ｅｄｓ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９１））、及びＴｈｏｒｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ３５４：１０５（１９９１）に記載されている。
本明細書で使用される場合、「ポリペプチドフラグメント」という用語は、アミノ末端及び／またはカルボキシ末端欠失を有するが、残りのアミノ酸配列は、例えば、完全長ｃＤＮＡ配列に由来する、天然に存在する推定配列における対応する位置と同一であるポリペプチドを指す。フラグメントは典型的には、少なくとも５、６、８、または１０アミノ酸長、例えば、少なくとも１４アミノ酸長、例えば、少なくとも２０アミノ酸長、通常少なくとも５０アミノ酸長、及び例えば、少なくとも７０アミノ酸長である。本明細書で使用される場合、「類似体」という用語は、推定アミノ酸配列の一部分に対して実質的同一性を有する、少なくとも２５のアミノ酸のセグメントで構成され、かつ好適な結合条件下でＣＤ４７に対する特異的結合を有するポリペプチドを指す。典型的には、ポリペプチド類似体は、天然に存在する配列に関して保存的アミノ酸置換（または付加もしくは欠失）を含む。類似体は典型的には、少なくとも２０アミノ酸長、例えば、少なくとも５０アミノ酸長以上であり、しばしば天然に存在する完全長ポリペプチドほど長くあり得る。
ペプチド類似体は一般的に、鋳型ペプチドの特性に類似した特性を有する非ペプチド薬物として製薬産業において使用される。これらの種類の非ペプチド化合物は、「ペプチド模倣物」または「ペプチド模倣薬」と呼ばれる。Ｆａｕｃｈｅｒｅ，Ｊ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｒｅｓ．１５：２９（１９８６）、Ｖｅｂｅｒ ａｎｄ Ｆｒｅｉｄｉｎｇｅｒ ＴＩＮＳ ｐ．３９２（１９８５）、及びＥｖａｎｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３０：１２２９（１９８７）。そのような化合物はしばしば、コンピュータ化分子モデル化の助けを借りて開発される。治療的に有用なペプチドと構造的に類似しているペプチド模倣物を使用して、同等の治療的または予防的効果を生み出すことができる。一般に、ペプチド模倣薬は、ヒト抗体などのパラダイムポリペプチド（すなわち、生化学的特性または薬理学的活性を有するポリペプチド）と構造的に類似しているが、当該技術分野において周知の方法によって、
－ＣＨ２ＮＨ－、－ＣＨ２Ｓ－、－ＣＨ２－ＣＨ２－、－ＣＨ＝ＣＨ－（シス及びトランス）、－ＣＯＣＨ２－、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２－、及び－ＣＨ２ＳＯ－からなる群から選択される連鎖によって任意で置換される１つ以上のペプチド連鎖を有する。あるコンセンサス配列の１つ以上のアミノ酸の、同一の種類のＤ－アミノ酸での系統的置換（例えば、Ｌ－リジンの代わりにＤ－リジン）を使用して、より安定したペプチドを生成することができる。加えて、コンセンサス配列または実質的に同一であるコンセンサス配列の変化形を含む拘束されたペプチドは、当該技術分野において既知の方法（Ｒｉｚｏ ａｎｄ Ｇｉｅｒａｓｃｈ Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６１：３８７（１９９２））によって、例えば、ペプチドを環化させる分子内ジスルフィド架橋を形成することができる内部システイン残基を付加することによって、生成することができる。
「薬剤」という用語は、本明細書において、化学化合物、化学化合物の混合物、生物学的巨大分子、及び／または生物学的材料から抽出された抽出物を示すために使用される。
本明細書で使用される場合、「標識」または「標識化された」という用語は、例えば、放射性標識化されたアミノ酸の組み込み、または標識されたアビジン（例えば、蛍光マーカー、または光学法もしくは熱量測定法によって検出され得る酵素活性を含有するストレプトアビジン）によって検出され得るビオチニル部分のポリペプチドへの結合による、検出可能なマーカーの組み込みを指す。特定の状況において、標識またはマーカーはまた、治療的なものでもあり得る。ポリペプチド及び糖タンパク質を標識化する様々な方法が、当該技術分野において既知であり、使用され得る。ポリペプチドの標識の例としては、以下、放射性同位体または放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ）、蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニドリン光体）、酵素標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光、ビオチニル基、二次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、標識は、潜在的な立体障害を低減するために、様々な長さのスペーサーアームによって結合される。本明細書で使用される場合、「薬学的薬剤または薬学的薬物」という用語は、患者に適切に投与されるときに所望される治療的作用を誘導することができる化学化合物または組成物を指す。
「抗悪性腫瘍剤」という用語は、本明細書において、ヒトにおいて新生物、特に悪性（癌性）病変（癌腫、肉腫、リンパ腫、または白血病など）の発症または進行を阻害する機能的特性を有する薬剤を指すために使用される。転移の阻害は頻繁に、抗悪性腫瘍剤の特性である。
本明細書で使用される場合、「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、及び「治療」などという用語は、障害及び／またはそれに関連する症状を低減かつ／または寛解することを指す。「軽減する（ａｌｌｅｖｉａｔｅ）」及び／または「軽減する（ａｌｌｅｖｉａｔｉｎｇ）」によって、例えば、癌などの疾患の発症または進行を低下、抑制、減弱化、減少、抑止、かつ／または安定化することが意味される。除外されてはいないものの、障害または病態を治療することは、障害、病態、またはそれらに関連する症状が完全に排除されることを必要としないことが理解されるだろう。
本明細書の他の化学的用語は、Ｔｈｅ ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｒｍｓ（Ｐａｒｋｅｒ，Ｓ．，Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ（１９８５））に例示されるように、当該技術分野の従来の使用法に従って使用される。
本明細書で使用される場合、「実質的に純粋な」とは、対象の種が、存在する主要種である（すなわち、それが組成物中のいかなる他の個々の種よりもモルベースで豊富である）ことを意味し、実質的に精製された画分は、対象の種が（モルベースで）存在する全ての巨大分子種の少なくとも約５０パーセントを含む組成物である。
一般に、実質的に純粋な組成物は、組成物中に存在する全ての巨大分子種の約８０パーセント超、例えば、約８５％、９０％、９５％、及び９９％超を構成するだろう。いくつかの実施形態において、対象の種は、本質的に均一になるまで精製され（従来の検出方法によって、組成物中に汚染種を検出することができない）、組成物は、単一の巨大分子種から本質的になる。
本開示において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含有する」、及び「有する」などは、米国特許法においてそれらに帰せられる意味を有し得、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」及び「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」などを意味し得、「から本質的になる」または「本質的になる」という用語は、同様に、米国特許法において帰せられる意味を有し、これらの用語は制限がなく、引用されるものの基本的または新規の特徴が引用されるもの以上のものの存在によって変化しない限り、引用されるもの以上のものの存在を許容するが、先行技術の実施形態は除外する。
「有効量」によって、未治療の患者と比較して、疾患の症状を寛解するのに必要とされる量が意味される。ある疾患の治療的処置のために本開示を実施するのに使用される活性化合物（複数可）の有効量は、投与様式、対象の年齢、体重、及び一般的健康によって異なる。究極的には、担当医師または獣医が、適切な量及び投薬レジメンを決定するだろう。そのような量は、「有効」量と呼ばれる。
「対象」によって、ヒトまたは非ヒト哺乳動物（ウシ、ウマ、イヌ、齧歯類、ヒツジ、霊長類、ラクダ、またはネコなど）を含むが、これらに限定されない、哺乳動物が意味される。
本明細書で使用される場合、「投与する」という用語は、ある治療剤での治療を必要とする対象にそのような治療剤を輸送、送達、導入、または運搬する任意の機序を指す。そのような機序としては、経口、局所、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮内、鼻腔内、及び皮下投与が挙げられるが、これらに限定されない。
「フラグメント」によって、ポリペプチドまたは核酸分子の一部分が意味される。この部分は、例えば、参照核酸分子またはポリペプチドの全長の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％を含有する。フラグメントは、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、または１０００のヌクレオチドまたはアミノ酸を含有し得る。
本明細書において提供される範囲は、その範囲内の全ての値の簡略表記であることが理解される。例えば、１～５０の範囲は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０からなる群からの任意の数、数の組み合わせ、または下位範囲を含むことが理解される。
具体的に述べられるか、文脈から明らかでない限り、本明細書で使用される場合、「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その」という用語は、単数形または複数形であることが理解される。具体的に述べられるか、文脈から明らかでない限り、本明細書で使用される場合、「または」という用語は、包括的であることが理解される。
具体的に述べられるか、文脈から明らかでない限り、本明細書で使用される場合、「約」という用語は、当該技術分野における通常の許容範囲内、例えば、平均の２標準偏差内にあるものと理解される。約は、述べられる値の１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％、または０．０１％以内にあるものと理解され得る。別段文脈から明確でない限り、本明細書において提供される全ての数値は、「約」という用語によって修飾されているものとする。
４１ＢＢ（ＣＤ１３７、ＴＮＦＲＳＦ９）標的化
４１ＢＢは、活性化Ｔ細胞及びＮＫ細胞上で主に発現され、同時刺激分子として役割を果たすＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバーである。刺激４１ＢＢは、Ｔ細胞増殖及び生存、細胞溶解活性、ならびにサイトカイン分泌（例えば、ＩＬ－２、ＴＮＦα、及びＩＮＦγ）を増強する。マウスにおいて、４１ＢＢ係合は、抗腫瘍免疫を増強することが示されている。（Ｃｒｏｆｔ，２００９，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ９：２７１－２８５、Ｌｙｎｃｈ，２００８，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．２２：２７７－２８６）。重要なことに、腫瘍浸潤性細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）は、４１ＢＢを発現することが示されており、これらの４１ＢＢ陽性ＣＴＬが、最も高い抗腫瘍細胞傷害活性を有する（Ｙｅ ｅｔ ａｌ Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ；２０（１）：４４－５５）。４１ＢＢのリガンドである４１ＢＢＬは、ホモ三量体を天然に形成し、それによりシグナル伝達が４１ＢＢの高次のクラスター化によって媒介されることを示唆する。これは、活性化機構であるは、ＴＮＦＲＳＦの多くのメンバーと共有される。抗腫瘍免疫療法への４１ＢＢシグナル伝達の活用における関心が、治療的４１ＢＢ抗体の開発を促進している。しかしながら、外因的クラスター化事象の不在下では、二価４１ＢＢ抗体がシグナル伝達を誘導する能力は弱い。これは、Ｆｃγ－受容体（ＦｃγＲ）との相互作用を通してある程度達成され得るが、これもまた、エフェクター機構（例えば、ＡＤＣＣ及びＡＤＣＰ）を通した４１ＢＢ発現細胞の枯渇をもたらし得る。更に、血清中の高濃度のＩｇＧとの競合は、効率的なＦｃγＲ相互作用を減弱化する。したがって、現在の二価抗体標的化４１ＢＢは、無効なアゴニストであるか、４１ＢＢシグナル伝達が所望される場合に変更細胞を枯渇させることができないかのいずれかである。治療的４１ＢＢ抗体であるＰＦ－０５０８２５６６が、抗ヒト二次抗体に架橋された状態でのみ、媒介された４１ＢＢシグナル伝達をすることがきることが以前に示されている（Ｆｉｓｈｅｒ ｅｔ ａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ（２０１２）６１：１７２１－１７３３）。したがって、外因的架橋剤またはＦｃγＲ相互作用の不在下でシグナル伝達を媒介することができる最適化された４１ＢＢアゴニストに対する必要性が存在する。本開示の融合タンパク質は、１）多価融合タンパク質として形式設定される場合、いかなる追加の相互作用もなく、または２）多重特異性融合タンパク質として形式設定される場合、少なくとも１つの第２の抗原相互作用に係合されたときに、条件付きで強力な４１ＢＢシグナル伝達を媒介することができる。本開示の融合タンパク質は、Ｔ細胞及びＮＫ細胞に対する、独立型（多価）または条件付き（多重特異性）同時刺激活性が可能である。
４１ＢＢ結合単一ドメイン抗体の例示的なアミノ酸配列を以下に示す。
Figure 0007022993000007
Figure 0007022993000008
Figure 0007022993000009
Figure 0007022993000010
Figure 0007022993000011
Figure 0007022993000012
Figure 0007022993000013
Figure 0007022993000014
Figure 0007022993000015
いくつかの実施形態において、４１ＢＢ結合ドメインは、以下からなる群から選択される可変重鎖（ＶＨ）配列と可変軽鎖（ＶＬ）配列との組み合わせを含む抗体配列またはその抗原結合フラグメントを含むか、またはそれから誘導される。
ＶＨ配列：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＮＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＧＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＫＮＥＥＤＧＧＦＤＨＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８４）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＶＩＳＧＳＧＳＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＹＡＱＦＥＧＤＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８５）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＳＴＹＷＩＳＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＫＩＹＰＧＤＳＹＴＮＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＧＹＧＩＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８６）
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＲＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＳＴＹＷＩＳＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＫＩＹＰＧＤＳＹＴＮＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＧＹＧＩＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８７）
ＶＬ配列：
ＤＩＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＱＴＡＲＩＳＣＳＧＤＮＬＧＤＹＹＡＳＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＤＤＳＮＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＧＴＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＱＴＷＤＧＴＬＨＦＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号８８）
ＤＩＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＱＴＡＲＩＳＣＳＧＤＮＩＧＳＫＹＶＳＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＳＤＳＥＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＧＴＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＷＤＧＳＩＳＲＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号８９）
ＤＩＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＱＴＡＲＩＳＣＳＧＤＮＩＧＤＱＹＡＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＶＶＩＹＱＤＫＮＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＧＴＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＡＴＹＴＧＦＧＳＬＡＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号９０）
ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＳＩＴＣＳＧＤＮＩＧＤＱＹＡＨＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＶＬＶＩＹＱＤＫＮＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＧＴＱＡＭＤＥＡＤＹＹＣＡＴＹＴＧＦＧＳＬＡＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号９１）
ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＳＩＴＣＳＧＤＮＩＧＤＱＹＡＨＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＶＶＶＩＹＱＤＫＮＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＧＴＱＡＭＤＥＡＤＹＹＣＡＴＹＴＧＦＧＳＬＡＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号９２）
ＤＩＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＱＴＡＲＩＳＣＳＧＤＮＩＧＤＱＹＡＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＶＶＩＹＱＤＫＮＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＧＴＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＳＴＹＴＦＶＧＦＴＴＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号９３）
ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＳＩＴＣＳＧＤＮＩＧＤＱＹＡＨＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＶＬＶＩＹＱＤＫＮＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＧＴＱＡＭＤＥＡＤＹＹＣＳＴＹＴＦＶＧＦＴＴＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号９４）
ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＳＩＴＣＳＧＤＮＩＧＤＱＹＡＨＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＶＶＶＩＹＱＤＫＮＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＧＴＱＡＭＤＥＡＤＹＹＣＳＴＹＴＦＶＧＦＴＴＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号９５）
いくつかの実施形態において、４１ＢＢ結合ドメインは、以下からなる群から選択される重鎖（ＨＣ）配列と軽鎖（ＬＣ）配列との組み合わせを含む抗体配列またはその抗原結合フラグメントを含むか、またはそれから誘導される。
ＨＣ配列：
ＱＶＱＬＱＱＷＧＡＧＬＬＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＡＶＹＧＧＳＦＳＧＹＹＷＳＷＩＲＱＳＰＥＫＧＬＥＷＩＧＥＩＮＨＧＧＹＶＴＹＮＰＳＬＥＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＹＧＰＧＮＹＤＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号９６）
ＱＶＱＬＱＱＷＧＡＧＬＬＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＡＶＹＧＧＳＦＳＧＹＹＷＳＷＩＲＱＳＰＥＫＧＬＥＷＩＧＥＩＮＨＧＧＹＶＴＹＮＰＳＬＥＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＹＧＰＧＮＹＤＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号９７）
ＬＣ配列：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＰＡＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号９８）
いくつかの実施形態において、４１ＢＢ結合ドメインは、米国特許出願公開第２０１６０２４４５２８号（これにより、この内容全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載される抗体配列から選択される抗体配列またはその抗原結合フラグメントを含むか、またはそれから誘導される。
いくつかの実施形態において、４１ＢＢ結合ドメインは、米国特許第８，３３７，８５０号（これにより、この内容全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載される抗体配列から選択される抗体配列またはその抗原結合フラグメントを含むか、またはそれから誘導される。
いくつかの実施形態において、４１ＢＢ結合ドメインは、ＰＣＴ出願第ＷＯ２００５／０３５５８４号（これにより、この内容全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載される抗体配列から選択される抗体配列またはその抗原結合フラグメントを含むか、またはそれから誘導される。
いくつかの実施形態において、４１ＢＢ結合ドメインは、ＥＰ特許第ＥＰ１６７０８２８Ｂ１号（これにより、この内容全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載される抗体配列から選択される抗体配列またはその抗原結合フラグメントを含むか、またはそれから誘導される。
いくつかの実施形態において、４１ＢＢ結合ドメインは、ＰＣＴ出願第ＷＯ２００６／０８８４４７号（これにより、この内容全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載される抗体配列から選択される抗体配列またはその抗原結合フラグメントを含むか、またはそれから誘導される。
いくつかの実施形態において、４１ＢＢ結合ドメインは、米国特許出願公開第２００８０１６６３３６号（これにより、この内容全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載される抗体配列から選択される抗体配列またはその抗原結合フラグメントを含むか、またはそれから誘導される。
いくつかの実施形態において、４１ＢＢ結合ドメインは、ＰＣＴ出願第ＷＯ２０１６／１７７８０２号（これにより、この内容全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載される配列から選択される抗癌融合タンパク質配列またはその抗原結合フラグメントを含むか、またはそれから誘導される。いくつかの実施形態において、４１ＢＢ結合ドメインは、
ＱＤＳＴＳＤＬＩＰＡＰＰＬＳＫＶＰＬＱＱＮＦＱＤＮＱＦＨＧＫＷＹＶＶＧＱＡＧＮＩＲＬＲＥＤＫＤＰＩＫＭＭＡＴＩＹＥＬＫＥＤＫＳＹＤＶＴＭＶＫＦＤＤＫＫＣＭＹＤＩＷＴＦＶＰＧＳＱＰＧＥＦＴＬＧＫＩＫＳＦＰＧＨＴＳＳＬＶＲＶＶＳＴＮＹＮＱＨＡＭＶＦＦＫＦＶＦＱＮＲＥＥＦＹＩＴＬＹＧＲＴＫＥＬＴＳＥＬＫＥＮＦＩＲＦＳＫＳＬＧＬＰＥＮＨＩＶＦＰＶＰＩＤＱＣＩＤＧ（配列番号９９）を含むアミノ酸配列を含むか、またはそれから誘導される。
いくつかの実施形態において、４１ＢＢ結合ドメインは、ＰＣＴ出願第ＷＯ２０１６／１７７７６２号（これにより、この内容全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載される配列から選択される４１ＢＢ標的化ポリペプチド配列またはその抗原結合フラグメントを含むか、またはそれから誘導される。いくつかの実施形態において、４１ＢＢ結合ドメインは、を含むアミノ酸配列を含むか、またはそれから誘導される。
ＰＤＬ１標的化
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、多重特異性であり、少なくとも１つの第１の結合ドメイン（例えば、ＴＢＤ）と、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）に対して指向された第２の結合ドメインとを含有する。これらの実施形態において、ＰＤ－Ｌ１に対する結合は追加の架橋機能を提供することができ、ＴＮＦＲＳＦ活性化が１つまたは２つのＴＢＤのみによって達成される。これらの実施形態において、ＴＮＦＲＳＦシグナル伝達は、ＰＤ－Ｌ１発現細胞の存在によって増強され、集中される。
ＰＤＬ１は、ＣＤ２７９としても知られる、その受容体プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ１）と複合体を形成する４０ｋＤａのＩ型膜貫通タンパク質である。ＰＤＬ１のＴ細胞上のその受容体ＰＤ１との係合は、ＩＬ－２産生及びＴ細胞増殖のＴＣＲ媒介活性化を阻害するシグナルを送達する。ＰＤＬ１及びＰＤＬ１関連シグナル伝達の異常発現及び／または活性は、癌、炎症、及び自己免疫などの多くの疾患及び障害の病理発生に関連付けられている。
いくつかの実施形態において、ＰＤ－Ｌ１結合部分は、単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態において、融合体のＰＤＬ１結合部分は、ＰＤＬ１及びＰＤ－１の相互作用を遮断または減衰する。例示的なＰＤＬ１標的化単一ドメイン配列を以下に示す。
Figure 0007022993000016
Figure 0007022993000017
Figure 0007022993000018
他の実施形態において、ＰＤ－Ｌ１結合部分は、少なくとも以下に示されるＩｇＶドメインを含有するＰＤ－１の細胞外ドメインから誘導される。
ＰＴＦＳＰＡＬＬＶＶＴＥＧＤＮＡＴＦＴＣＳＦＳＮＴＳＥＳＦＶＬＮＷＹＲＭＳＰＳＮＱＴＤＫＬＡＡＦＰＥＤＲＳＱＰＧＱＤＣＲＦＲＶＴＱＬＰＮＧＲＤＦＨＭＳＶＶＲＡＲＲＮＤＳＧＴＹＬＣＧＡＩＳＬＡＰＫＡＱＩＫＥＳＬＲＡＥＬＲＶＴ（配列番号１２５）
いくつかの実施形態において、ＰＤＬ１結合ドメインは、既知の抗ＰＤＬ１抗体配列またはその抗原結合フラグメントを含むか、またはそれから誘導される。いくつかの実施形態において、ＰＤＬ１結合ドメインは、ＰＣＴ出願第ＷＯ２０１６／１４９２０１号（これにより、この内容全体が参照により本明細書に組み込まれる）に開示される抗体配列を含むか、またはそれから誘導される。
いくつかの実施形態において、ＰＤＬ１結合ドメインは、以下からなる群から選択される可変重鎖（ＶＨ）配列と可変軽鎖（ＶＬ）配列との組み合わせを含む抗体配列またはその抗原結合フラグメントを含むか、またはそれから誘導される。
ＶＨ配列：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＧＦＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＴＡＹＮＧＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧＲＶＴＭＴＴＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＹＦＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１２６）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＴＳＧＤＴＦＳＴＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＫＡＨＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＫＦＨＦＶＳＧＳＰＦＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１２７）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＤＶＨＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＭＧＷＬＨＡＤＴＧＩＴＫＦＳＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＲＤＴＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＲＩＱＬＷＦＤＹＷＧＱＧＴ（配列番号１２８）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＶＳＧＧＩＦＳＴＹＡＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＨＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＧＩＡＡＡＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１２９）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＦＴＦＤＤＹＶＶＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＮＳＧＮＩＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＬＹＹＣＡＶＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１３０）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＴＳＧＤＴＦＳＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＲＡＨＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＦＣＡＲＫＦＨＦＶＳＧＳＰＦＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１３１）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＴＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＫＡＨＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＴＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＫＹＤＹＶＳＧＳＰＦＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１３２）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＳＡＮＹＡＱＫＦＱＤＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＡＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＳＳＧＷＳＲＹＹＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１３３）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＥＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＮＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＬＦＧＩＡＨＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＮＴＡＹＭＤＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＫＹＳＹＶＳＧＳＰＦＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１３４）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＩＴＦＤＤＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＷＮＲＧＲＩＥＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＬＹＹＣＡＫＧＲＦＲＹＦＤＷＦＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１３５）
ＱＭＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＧＳＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＹＦＷＳＧＦＳＡＦＤＩＷＧＫＧＴＬＶＴＶＳ（配列番号１３６）
ＶＬ配列：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＶＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１３７）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１３８）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＥＫＡＰＫＳＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１３９）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＳＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１４０）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＳＰＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１４１）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫ（配列番号１４２）
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いくつかの実施形態において、ＰＤＬ１結合ドメインは、以下からなる群から選択されるＶＨ配列とＶＬ配列との組み合わせを含む抗体配列またはその抗原結合フラグメントを含むか、またはそれから誘導される。
ＶＨ配列：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＲＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＧＳＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＧＷＦＧＥＬＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１４５）
ＶＬ配列：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＲＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＬＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１４６）
いくつかの実施形態において、ＰＤＬ１結合ドメインは、以下からなる群から選択されるＶＨ配列とＶＬ配列との組み合わせを含む抗体配列またはその抗原結合フラグメントを含むか、またはそれから誘導される。
ＶＨ配列：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号１４７）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＧＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＬＰＹＧＧＳＳＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号１４８）
ＶＬ配列：
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ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＮＶＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１５０）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＡＰＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１５１）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＴＶＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１５２）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＶＩＮＴＦＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＴＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１５３）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＹＧＶＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１５４）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＦＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１５５）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＦＩＴＰＴＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１５６）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＹＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１５７）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＦＦＹＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１５８）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＬＦＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１５９）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＬＹＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１６０）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＷＹＨＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１６１）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＦＹＩＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１６２）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＷＹＴＰＴＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１６３）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＦＩＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１６４）
いくつかの実施形態において、ＰＤＬ１結合ドメインは、以下からなる群から選択されるＶＨ配列とＶＬ配列との組み合わせを含む抗体配列またはその抗原結合フラグメントを含むか、またはそれから誘導される。
ＶＨ配列：
ＭＥＴＧＬＲＷＬＬＬＶＡＶＬＫＧＶＱＣＬＳＶＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＡＳＧＦＴＩＴＮＹＨＭＦＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＩＴＳＳＧＩＧＳＳＳＴＴＹＹＡＴＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＴＴＶＮＬＲＩＴＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＤＹＦＴＮＴＹＹＡＬＤＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６５）
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ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＤＶＨＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＭＧＷＬＨＡＤＴＧＩＴＫＦＳＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＲＤＴＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＲＩＱＬＷＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６７）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＶＳＧＧＩＦＳＴＹＡＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＨＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＧＩＡＡＡＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６８）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＶＳＧＦＴＦＤＤＹＶＶＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＧＮＳＧＮＩＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＬＹＹＣＡＶＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６９）
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ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＳＡＮＹＡＱＫＦＱＤＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＡＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＳＳＧＷＳＲＹＹＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１７２）
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ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１７７）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＥＫＡＰＫＳＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１７８）
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ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＳＰＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１８０）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫ（配列番号１８１）
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いくつかの実施形態において、ＰＤＬ１結合ドメインは、以下からなる群から選択されるＶＨ配列とＶＬ配列との組み合わせを含む抗体配列またはその抗原結合フラグメントを含むか、またはそれから誘導される。
ＶＨ配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＩＭＭＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＹＰＳＧＧＩＴＦＹＡＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＩＫＬＧＴＶＴＴＶＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１８３）
ＶＬ配列：
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いくつかの実施形態において、ＰＤＬ１結合ドメインは、以下からなる群から選択されるＶＨ配列とＶＬ配列との組み合わせを含む抗体配列またはその抗原結合フラグメントを含むか、またはそれから誘導される。
ＶＨ配列：
ＥＶＫＬＱＥＳＧＰＳＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＳＶＴＧＹＳＩＴＳＤＹＷＮＷＩＲＫＦＰＧＮＫＬＥＹＶＧＹＩＳＹＴＧＳＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＩＳＩＴＲＤＴＳＫＮＱＹＹＬＱＬＮＳＶＴＳＥＤＴＡＴＹＹＣＡＲＹＧＧＷＬＳＰＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号１８５）
ＥＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＩＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴＴＹＳＩＮＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＭＷＡＧＧＧＴＮＳＮＳＶＬＫＳＲＬＩＩＳＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＲＹＹＣＡＲＹＹＧＮＳＰＹＹＡＩＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号１８６）
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ＥＶＫＬＱＥＳＧＰＳＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＤＩＮＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＷＩＦＰＲＤＮＮＴＫＹＮＥＮＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＴＳＳＴＴＡＹＭＥＬＨＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＴＫＥＮＷＶＧＤＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＬＳＳ（配列番号１８８）
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＤＬＶＴＰＧＡＳＶＲＩＳＣＱＡＳＧＹＴＦＰＤＹＹＭＮＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＷＩＧＤＩＤＰＮＹＧＧＴＴＹＮＱＫＦＫＧＫＡＩＬＴＶＤＲＳＳＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＡＬＴＤＷＧＱＧＴＳＬＴＶＳＳ（配列番号１８９）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＳＳＶＳＹＩＹＷＦＱＱＫＰＧＱＳＰＲＰＬＩＹＡＡＦＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＷＳＮＮＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１９０）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＰＤＹＹＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＤＩＤＰＮＹＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＡＬＴＤＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号１９１
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＰＤＹＹＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＳＬＥＷＭＧＤＩＤＰＮＹＧＧＴＮＹＮＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＡＬＴＤＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号１９２）
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＰＤＹＹＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＳＬＥＷＭＧＤＩＤＰＮＹＧＧＴＮＹＮＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＶＤＲＳＳＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＡＬＴＤＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号１９３）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＴＡＳＧＹＴＦＰＤＹＹＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＤＩＤＰＮＹＧＧＴＴＹＡＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＶＤＲＳＫＳＩＡＹＬＱＭＳＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＧＡＬＴＤＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号１９４）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＴＡＳＧＹＴＦＰＤＹＹＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＤＩＤＰＮＹＧＧＴＴＹＮＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＶＤＲＳＫＳＩＡＹＬＱＭＳＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＡＬＴＤＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号１９５）
ＶＬ配列：
ＤＩＶＭＴＱＳＨＫＬＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＮＶＱＳＥＤＬＡＤＹＦＣＱＱＤＳＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＶＥＬＫ（配列番号１９６）
ＤＩＶＴＴＱＳＨＫＬＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＮＶＱＳＥＤＬＡＤＹＦＣＱＱＤＳＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＶＥＬＫ（配列番号１９７）
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＶＳＭＧＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＳＮＱＫＮＳＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＤＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＧＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号１９８）
ＤＩＶＭＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＩＲＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＴＳＰＫＲＷＩＳＤＴＳＫＬＴＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＡＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＨＱＲＳＳＹＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１９９）
ＱＩＶＬＳＱＳＰＡＩＬＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＲＡＳＳＳＶＳＹＩＹＷＦＱＱＫＰＧＳＳＰＫＰＷＩＹＡＴＦＮＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＲＶＥＴＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＮＮＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号２００）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＳＳＶＳＹＩＹＷＦＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＡＡＦＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＷＳＮＮＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０１）
ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＳＳＶＳＹＩＹＷＦＱＱＫＰＧＱＳＰＲＰＬＩＹＡＴＦＮＬＡＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＷＳＮＮＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０２）
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＳＧＶＳＹＩＹＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＦＮＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＷＳＮＮＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０３）
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＳＧＶＳＹＩＹＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＰＬＩＹＡＡＦＮＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＷＳＮＮＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０４）
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＩＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳＹＩＹＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＰＬＩＹＡＴＦＮＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＷＳＮＮＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２０５）
いくつかの実施形態において、ＰＤＬ１結合ドメインは、以下からなる群から選択されるＶＨ配列とＶＬ配列との組み合わせを含む抗体配列またはその抗原結合フラグメントを含むか、またはそれから誘導される。
ＶＨ配列：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＳＡＹＮＧＮＴＮＹＡＱＫＬＱＧＲＶＴＭＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＡＬＰＳＧＴＩＬＶＧＧＷＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２０６）
ＥＶＱＬＶＱＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＬＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＧＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＤＶＦＰＥＴＦＳＭＮＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２０７）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＶＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＬＩＳＧＤＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＬＹＹＣＡＫＶＬＬＰＣＳＳＴＳＣＹＧＳＶＧＡＦＤＩＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号２０８）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＳＶＶＲＰＧＥＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＩＦＤＮＹＤＭＳＷＶＲＱＶＰＧＫＧＬＥＷＶＳＲＶＮＷＮＧＧＳＴＴＹＡＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＴＫＮＳＬＹＬＱＭＮＮＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲＥＦＶＧＡＹＤＬＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号２０９）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＴＶＫＶＳＣＫＶＦＧＤＴＦＲＧＬＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＴＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＧＬＲＷＧＩＷＧＷＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２１０）
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＬＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＦＧＧＴＦＳＤＮＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＰＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＫＰＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＶＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＴＭＶＲＧＦＬＧＶＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号２１１）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＤＱＦＶＴＩＦＧＶＰＲＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号２１２）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＲＱＭＦＧＡＧＩＤＦＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２１３）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＶＳＧＧＴＦＧＴＹＡＬＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＲＩＶＰＬＩＧＬＶＮＹＡＨＮＦＥＧＲＩＳＩＴＡＤＫＳＴＧＴＡＹＭＥＬＳＮＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＶＹＧＧＮＳＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２１４）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＬＳＳＨＧＩＴＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＳＡＨＮＧＨＡＳＮＡＱＫＶＥＤＲＶＴＭＴＴＤＴＳＴＮＴＡＹＭＥＬＲＳＬＴＡＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＶＨＡＡＬＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２１５）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＳＡＳＧＦＴＦＳＲＨＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＨＤＧＳＶＫＹＹＡＤＳＭＫＧＲＦＳＩＳＲＤＮＳＮＮＴＬＹＬＱＭＤＳＬＲＡＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＬＳＹＱＶＳＧＷＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２１６）
ＮＦＭＬＴＱＰＨＳＶＳＥＳＰＧＫＴＶＴＩＳＣＴＲＳＳＧＳＩＡＳＮＹＶＱＷＹＱＱＲＰＧＳＳＰＴＴＶＩＹＥＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＩＤＴＳＳＮＳＡＳＬＴＩＳＧＬＫＴＫＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＧＩＴＶＩＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号２１７）
ＮＦＭＬＴＱＰＨＳＶＳＧＳＰＧＫＴＶＴＬＰＣＴＲＳＳＧＳＩＡＳＨＹＶＱＷＹＱＱＲＰＧＳＡＰＴＴＶＩＹＥＤＮＫＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＩＤＳＳＳＮＳＡＳＬＳＩＳＧＬＫＴＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＳＮＲＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号２１８）
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ＶＬ配列：
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ＬＰＶＬＴＱＡＰＳＶＳＶＡＰＧＫＴＡＲＩＴＣＧＧＳＤＩＧＲＫＳＶＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＡＬＶＩＹＳＤＲＤＲＰＳＧＩＳＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧＤＥＡＤＹＹＣＱＶＷＤＮＮＳＤＨＹＶＦＧＡＧＴＥＬＩＶＬ（配列番号２２２）
ＱＳＡＬＴＱＰＡＳＶＳＧＳＰＧＱＳＩＴＩＳＣＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳＷＹＱＱＨＰＧＫＡＰＫＬＭＩＹＤＶＳＮＲＰＳＧＶＳＮＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＳＳＹＴＳＳＴＬＰＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号２２３）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＩＧＮＳＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＭＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＡＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＴＩＰＴＦＳＦＧＰＧＴＫＶＥＶＫ（配列番号２２４）
ＤＩＶＭＴＱＴＰＳＦＬＳＡＳＩＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＧＳＹＬＡＷＹＱＱＲＰＧＥＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＮＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＮＮＹＰＩＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫ（配列番号２２５）
ＱＳＡＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＮＩＰＣＳＧＤＫＬＧＮＫＹＡＹＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＶＬＬＩＹＱＤＩＫＲＰＳＲＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＡＤＴＡＴＬＴＩＳＧＴＱＡＭＤＥＡＤＹＹＣＱＴＷＤＮＳＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号２２６）
ＮＦＭＬＴＱＰＨＳＶＳＥＳＰＧＫＴＶＴＩＳＣＴＲＳＳＧＳＩＤＳＮＹＶＱＷＹＱＱＲＰＧＳＡＰＴＴＶＩＹＥＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＩＤＳＳＳＮＳＡＳＬＴＩＳＧＬＫＴＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＮＮＲＨＶＩＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号２２７）
ＮＦＭＬＴＱＰＨＳＶＳＥＳＰＧＫＴＶＴＩＳＣＴＲＳＳＧＮＩＧＴＮＹＶＱＷＹＱＱＲＰＧＳＡＰＶＡＬＩＹＥＤＹＲＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＩＤＳＳＳＮＳＡＳＬＩＩＳＧＬＫＰＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＨＳＳＧＷＥＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号２２８）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＱＴＡＲＩＴＣＧＧＮＮＩＧＳＫＧＶＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＶＹＤＤＳＤＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧＤＥＡＤＹＹＣＱＶＷＤＳＳＳＤＨＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号２２９）
ＮＦＭＬＴＱＰＨＳＶＳＥＳＰＧＫＴＶＴＩＳＣＴＲＳＳＧＳＩＡＳＮＹＶＱＷＹＱＱＲＰＧＳＡＰＴＴＶＩＹＥＤＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＩＤＳＳＳＮＳＡＳＬＴＩＳＧＬＫＴＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＴＴＰＳＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号２３０）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＴＳＰＨＮＧＬＴＡＦＡＱＩＬＥＧＲＶＴＭＴＴＤＴＳＴＮＴＡＹＭＥＬＲＮＬＴＦＤＤＴＡＶＹＦＣＡＫＶＨＰＶＦＳＹＡＬＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２３１）
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いくつかの実施形態において、ＰＤＬ１結合ドメインは、以下からなる群から選択されるＶＨ配列とＶＬ配列との組み合わせを含む抗体配列またはその抗原結合フラグメントを含むか、またはそれから誘導される。
ＶＨ配列：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＰＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＫＱＡＰＧＱＲＬＥＷＩＧＹＶＮＰＦＮＤＧＴＫＹＮＥＭＦＫＧＲＡＴＬＴＳＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＱＡＷＧＹＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２３４）
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ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＩＧＹＶＮＰＦＮＤＧＴＫＹＮＥＭＦＫＧＲＡＴＬＴＳＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＱＡＷＧＹＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２３６）
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＩＧＹＶＮＰＦＮＤＧＴＫＹＮＥＭＦＫＧＲＡＴＬＴＳＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＱＡＷＧＹＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２３７）
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＩＧＹＶＮＰＦＮＤＧＴＫＹＮＥＭＦＫＧＲＡＴＩＴＳＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＱＡＷＧＹＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２３８）
ＶＬ配列：
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＴＥＳＶＥＹＹＧＴＳＬＶＱＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＶＤＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＥＥＤＡＡＭＹＦＣＱＱＳＲＲＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２３９）
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＴＥＳＶＥＹＹＧＴＳＬＶＱＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＶＤＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＭＹＦＣＱＱＳＲＲＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２４０）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＴＥＳＶＥＹＹＧＴＳＬＶＱＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＶＤＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＭＹＦＣＱＱＳＲＲＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２４１）
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＴＥＳＶＥＹＹＧＴＳＬＶＱＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＶＤＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＦＣＱＱＳＲＲＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２４２）
いくつかの実施形態において、ＰＤＬ１結合ドメインは、以下からなる群から選択されるＶＨ配列とＶＬ配列との組み合わせを含む抗体配列またはその抗原結合フラグメントを含むか、またはそれから誘導される。
ＶＨ配列：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＴＩＹＤＳＳＧＹＳＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２４３）
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ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＡＶＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＱＷＬＶＴＥＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２４６）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＳＥＶＥＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＤＳＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＭＦＡＴＰＹＹＡＱＫＦＱＤＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＧＬＲＳＤＤＴＡＶＦＹＣＡＲＤＲＧＲＧＨＬＰＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２４７）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＡＰＹＹＹＹＹＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号２４８）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＬＳＲＹＡＬＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＰＥＷＶＧＡＩＩＰＩＦＧＴＰＨＹＳＫＫＦＱＤＲＶＩＩＴＶＤＴＳＴＮＴＡＦＭＥＬＳＳＬＲＦＥＤＴＡＬＹＦＣＡＲＧＨＤＥＹＤＩＳＧＹＨＲＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２４９）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＳＧＹＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＤＰＮＳＧＶＴＮＹＶＲＲＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＬＳＴＡＹＭＥＬＳＧＬＴＡＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＥＮＬＷＱＦＧＹＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２５０）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＲＹＧＶＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＲＬＩＰＩＶＳＭＴＮＹＡＱＫＦＱＤＲＶＳＩＴＴＤＫＳＴＧＴＡＹＭＥＬＲＳＬＴＳＥＤＴＡＬＹＹＣＡＳＶＧＱＱＬＰＷＶＦＦＡＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２５１）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＦＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＲＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＷＬＤＲＤＩＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２５２）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＦＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＲＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＷＬＤＲＤＩＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２５３）
ＥＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＹＧＭＨＷＶＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＬＡＶＩＳＹＤＧＳＹＫＩＨＡＤＳＶＱＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＶＦＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＴＤＲＫＷＬＡＷＨＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号２５４）
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＩＶＡＤＦＱＨＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２５５）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＤＴＦＳＲＹＧＩＴＷＶＲＱＡＰＧＲＧＬＥＷＭＧＮＩＶＰＦＦＧＡＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＬＴＩＴＡＤＫＳＳＹＴＳＹＭＤＬＳＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＨＦＹＧＳＧＧＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２５６）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＮＳＹＤＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＶＦＧＴＡＮＹＡＥＳＦＱＧＲＶＴＭＴＡＤＨＳＴＳＴＡＹＭＥＬＮＮＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＲＷＨＹＥＳＲＰＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号２５７）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＲＰＧＧＳＬＲＬＡＣＡＡＳＧＦＳＦＳＤＹＹＭＴＷＩＲＱＡＰＧＲＧＬＥＷＩＡＹＩＳＤＳＧＱＴＶＨＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＴＫＮＳＬＦＬＱＶＮＴＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＬＬＧＹＹＬＱＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２５８）
ＱＶＱＬＱＱＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＡＩＳＧＤＳＶＳＳＮＳＡＡＷＮＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＲＴＹＹＲＳＫＷＹＮＤＹＡＶＳＶＫＳＲＩＴＩＮＰＤＴＳＫＮＱＦＳＬＱＬＮＳＶＴＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＥＰＲＡＶＡＧＳＱＡＹＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号２５９）
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＩＩＮＰＳＤＧＳＴＳＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＨＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＦＰＨＩＹＧＮＹＹＧＭＤＩＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号２６０）
ＱＭＱＬＶＱＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＦＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＲＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＷＬＤＲＤＩＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２６１）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＦＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＲＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＷＬＤＲＤＩＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２６２）
ＶＬ配列：
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＳＧＮＮＳＮＩＡＮＮＹＶＳＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＤＮＮＹＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＴＬＤＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＧＶＷＤＧＳＬＴＴＧＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号２６３）
ＡＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＬＡＴＹＹＣＱＱＬＨＴＦＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２６４）
ＱＰＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＳＰＧＱＳＶＴＩＳＣＴＧＴＳＳＤＶＧＡＹＮＦＶＳＷＹＲＱＨＰＧＫＡＰＫＬＭＩＹＥＶＮＫＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＳＬＴＶＳＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＳＳＹＡＧＴＮＳＬＧＩＦＧＴＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号２６５）
ＱＳＶＶＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＤＩＧＮＨＹＶＳＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＤＮＮＱＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＴＬＡＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＧＴＷＤＮＳＬＳＰＨＬＬＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号２６６）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＭＧＮＮＹＶＳＷＹＫＱＶＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＥＮＤＫＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＴＬＧＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＧＴＷＤＮＳＬＳＧＦＶＦＡＳＧＴＫＶＴＶＬ（配列番号２６７）
ＱＳＡＬＴＱＰＡＳＶＳＧＳＬＧＱＳＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＤＶＧＳＹＮＬＶＳＷＹＱＱＨＰＧＫＡＰＮＬＭＩＹＤＶＳＫＲＳＧＶＳＮＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＳＳＹＴＧＩＳＴＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号２６８）
ＱＳＶＬＴＱＰＡＳＶＳＧＳＰＧＱＳＩＴＩＳＣＴＧＴＳＳＤＶＧＳＹＮＬＶＳＷＹＱＱＨＰＧＫＡＰＫＬＭＩＹＥＶＳＫＲＰＳＧＶＳＮＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＳＳＹＧＧＦＮＮＬＬＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号２６９）
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＩＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＲＩＳＡＹＶＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＶＬＩＹＡＡＳＳＬＲＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＴＹＳＳＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２７０）
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ＬＰＶＬＴＱＰＡＳＶＳＧＳＰＧＱＳＩＴＩＳＣＴＧＴＴＳＤＩＧＧＹＤＹＶＳＷＹＱＱＨＰＧＫＡＰＫＬＭＩＹＤＶＳＫＲＰＳＧＶＳＮＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＳＳＹＴＳＳＳＴＨＶＦＧＴＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号２７２）
ＱＳＡＬＴＱＰＡＳＶＳＧＳＰＧＱＳＩＴＩＳＣＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳＷＹＱＱＨＰＧＫＡＰＫＬＭＩＹＤＶＳＮＲＰＳＧＶＳＮＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＳＳＹＲＳＳＴＬＧＰＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号２７３）
ＱＡＧＬＴＱＰＰＳＶＳＥＡＰＲＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＡＶＮＷＹＱＱＬＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＤＤＬＬＰＳＧＶＳＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＧＹＶＦＧＴＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号２７４）
ＱＳＡＬＴＱＰＲＳＶＳＧＳＰＧＱＳＶＴＩＳＣＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳＷＹＱＱＨＰＧＫＡＰＫＬＭＩＹＤＶＳＫＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＳＳＹＴＳＳＴＴＨＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ（配列番号２７５）
ＱＳＶＶＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＹＶＳＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＤＮＮＫＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＴＬＧＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＧＴＷＤＳＳＬＳＶＷＶＦＧＧＧＴＱＬＴＶＬ（配列番号２７６）
ＱＳＶＬＴＱＰＡＳＶＳＧＳＰＧＱＳＩＴＩＳＣＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳＷＹＱＱＨＰＧＲＡＰＲＬＭＩＹＤＶＳＮＲＰＳＧＶＳＮＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＥＧＤＹＹＣＳＳＹＴＳＧＧＴＬＧＰＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号２７７）
ＱＡＧＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＳＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＧＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号２７８）
ＡＩＲＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＲＰＧＫＡＰＮＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＴＹＳＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２７９）
ＱＳＶＬＴＱＰＡＳＶＳＧＳＰＧＱＳＩＴＩＳＣＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳＷＹＲＱＨＰＧＫＡＰＫＬＭＩＹＤＶＳＹＲＰＳＧＶＳＮＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＳＳＹＴＤＳＳＴＲＹＶＦＧＴＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号２８０）
ＱＰＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＡＩＳＣＳＧＳＲＳＮＩＥＩＮＳＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＤＮＮＫＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＴＬＧＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＧＳＷＤＳＳＬＳＡＤＶＦＧＴＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号２８１）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＫＫＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＹＶＳＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＲＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＴＷＤＤＳＬＮＧＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号２８２）
ＱＳＶＶＴＱＰＰＳＶＳＧＡＰＧＱＲＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＡＧＹＤＶＨＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＧＮＮＮＲＨＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＴＧＬＱＡＥＤＥＡＥＦＦＣＧＴＷＤＳＲＬＴＴＹＶＦＧＳＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号２８３）
ＱＳＶＶＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＹＶＳＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＤＮＮＫＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＴＬＧＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＧＴＷＤＳＳＬＳＡＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号２８４）
ＶＩＷＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＡＡＳＳＬＱＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＡＳＴＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２８５）
ＱＳＶＶＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＹＶＳＷＹＱＱＶＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＤＮＮＫＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＮＳＤＴＳＡＴＬＧＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＧＴＷＤＳＳＬＳＡＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号２８６）
ＱＳＶＶＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＹＶＳＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＤＮＮＫＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＴＬＧＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＧＴＷＤＳＳＬＳＡＧＳＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号２８７）
ＳＹＥＬＭＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＫＴＡＴＩＡＣＧＧＥＮＩＧＲＫＴＶＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＹＤＳＤＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧＤＥＡＤＹＹＣＬＶＷＤＳＳＳＤＨＲＩＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号２８８）
ＳＹＥＬＭＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＫＴＡＴＩＡＣＧＧＥＮＩＧＲＫＴＶＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＹＤＳＤＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧＤＥＡＤＹＹＣＱＶＷＤＳＳＳＤＨＲＩＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号２８９）
ＳＹＥＬＭＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＫＴＡＴＩＡＣＧＧＥＮＩＧＲＫＴＶＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＹＤＳＤＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧＤＥＡＤＹＹＣＱＶＷＤＳＳＳＤＨＲＩＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号２９０）
ＳＹＥＬＭＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＫＴＡＴＩＡＣＧＧＥＮＩＧＲＫＴＶＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＹＤＳＤＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧＤＥＡＤＹＹＣＱＶＷＤＳＳＳＤＨＲＩＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号２９１）
いくつかの実施形態において、ＰＤＬ１結合ドメインは、以下からなる群から選択される重鎖配列（ＨＣ）と軽鎖配列（ＬＣ）との組み合わせを含む抗体配列またはその抗原結合フラグメントを含むか、またはそれから誘導される。
ＨＣ配列：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＶＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＹＭＹＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＮＰＳＮＧＧＴＮＦＮＥＫＦＫＮＲＶＴＬＴＴＤＳＳＴＴＴＡＹＭＥＬＫＳＬＱＦＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＤＹＲＦＤＭＧＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号２９２）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＤＣＫＡＳＧＩＴＦＳＮＳＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＷＹＤＧＳＫＲＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＦＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＮＤＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号２９３）
ＬＣ配列：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＫＧＶＳＴＳＧＹＳＹＬＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＬＡＳＹＬＥＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＨＳＲＤＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２９４）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＳＳＮＷＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２９５）
いくつかの実施形態において、ＰＤＬ１結合ドメインは、以下からなる群から選択されるＶＨ配列とＶＬ配列との組み合わせを含む抗体配列またはその抗原結合フラグメントを含むか、またはそれから誘導される。
ＶＨ配列：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫ（配列番号２９６）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２９７）
ＨＣ配列：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２９８）
ＶＬ配列：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＹＨＰＡＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号２９９）
ＬＣ配列：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＹＨＰＡＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号３００）
いくつかの実施形態において、ＰＤＬ１結合ドメインは、以下からなる群から選択されるＶＨ配列とＶＬ配列との組み合わせを含む抗体配列またはその抗原結合フラグメントを含むか、またはそれから誘導される。
ＶＨ配列：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＲＦＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＮＱＤＧＴＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＧＤＴＡＶＹＹＣＡＮＴＹＹＤＦＷＳＧＨＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３０１）
ＱＥＨＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＥＡＳＧＦＴＦＳＮＦＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＡＬＷＳＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＶＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＲＧＡＰＧＩＰＩＦＧＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３０２）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＡＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＲＩＫＲＫＴＤＧＧＴＴＤＹＡＡＰＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＨＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＴＤＤＩＶＶＶＰＡＶＭＲＥＹＹＦＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号３０３）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＱＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＧＹＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＮＳＧＴＫＫＹＡＨＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＤＴＡＹＭＩＬＳＳＬＩＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＥＤＷＮＦＧＳＷＦＤＳＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３０４）
ＱＶＨＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＨＧＬＥＷＭＧＷＬＮＰＮＴＧＴＴＫＹＩＱＮＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＳＳＴＡＹＭＥＬＴＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＥＤＷＮＹＧＳＷＦＤＴＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３０５）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＲＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＧＭＴＷＶＲＱＡＰＧＲＧＬＥＷＶＳＧＩＨＷＨＧＫＲＴＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＫＳＬＹＬＱＭＮＳＬＫＧＥＤＴＡＬＹＨＣＶＲＧＧＭＳＴＧＤＷＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＩＶＳＳ（配列番号３０６）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＲＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＧＭＴＷＶＲＱＶＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＨＷＳＧＲＳＴＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＬＹＹＣＡＲＧＧＭＳＴＧＤＷＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３０７）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＶＧＳＮＹＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＶＩＹＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＬＴＳＫＮＴＬＹＬＱＭＳＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＩＲＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号３０８）
ＥＥＲＬＶＥＳＧＧＤＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＩＴＶＧＴＮＹＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＶＩＳＳＧＧＮＴＨＹＡＤＳＶＫＧＲＦＩＭＳＲＱＴＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＥＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＩＲＧＬＤＶＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号３０９）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＭＰＧＳＳＶＲＶＳＣＫＡＳＧＧＩＦＳＳＳＴＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＥＩＩＰＶＦＧＴＶＮＹＡＱＫＦＱＤＲＶＩＦＴＡＤＥＳＴＴＴＡＹＭＥＬＳＳＬＫＳＧＤＴＡＶＹＦＣＡＲＮＷＧＬＧＳＦＹＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号３１０）
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ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＴＬＩＳＹＥＧＲＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＤＲＴＬＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号３１２）
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ＶＬ配列：
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ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＳＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＰＳＬＶＨＳＤＧＮＴＹＬＳＷＬＱＱＲＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＫＩＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＡＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＡＴＨＦＰＩＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＲ（配列番号３３１）
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ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＴＩＮＩＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＲＡＰＲＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＨＱＳＹＳＴＰＰＩＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫ（配列番号３３４）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＭＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＲＡＰＫＬＬＩＦＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＰＩＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫ（配列番号３３５）
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ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＰＩＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫ（配列番号３３８）
ＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＶＩＳＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＶＰＲＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＫＹＮＳＡＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号３３９）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＮＩＮＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＦＱＮＡＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＮＴＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号３４０）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＨＮＳＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号３４１）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＰＩＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫ（配列番号３４２）
いくつかの実施形態において、ＰＤＬ１結合ドメインは、以下からなる群から選択されるＶＨ配列とＶＬ配列との組み合わせを含む抗体配列またはその抗原結合フラグメントを含むか、またはそれから誘導される。
ＶＨ配列：
ＱＳＬＥＥＳＧＧＲＬＶＫＰＤＥＴＬＴＩＴＣＴＶＳＧＩＤＬＳＳＮＧＬＴＷＶＲＱＡＰＧＥＧＬＥＷＩＧＴＩＮＫＤＡＳＡＹＹＡＳＷＡＫＧＲＬＴＩＳＫＰＳＳＴＫＶＤＬＫＩＴＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＧＲＩＡＦＫＴＧＴＳＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３４３）
ＶＬ配列：
ＡＩＶＭＴＱＴＰＳＰＶＳＡＡＶＧＧＴＶＴＩＮＣＱＡＳＥＳＶＹＳＮＮＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＬＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＧＶＱＣＤＤＡＡＴＹＹＣＩＧＧＫＳＳＳＴＤＧＮＡＦＧＧＧＴＥＶＶＶＲ（配列番号３４４）
いくつかの実施形態において、ＰＤＬ１結合ドメインは、以下からなる群から選択されるＶＨ配列とＶＬ配列との組み合わせを含む抗体配列またはその抗原結合フラグメントを含むか、またはそれから誘導される。
ＶＨ配列：
ＱＭＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＮＩＶＡＴＩＴＰＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３４５）
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ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＦＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＲＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＷＬＤＲＤＩＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３４９）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＦＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＲＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＷＬＤＲＤＩＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３５０）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＦＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＲＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＷＬＤＲＤＩＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３５１）
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ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＦＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＲＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＷＬＤＲＤＩＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３５３）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＲＹＧＶＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＲＬＩＰＩＶＳＭＴＮＹＡＱＫＦＱＤＲＶＳＩＴＴＤＫＳＴＧＴＡＹＭＥＬＲＳＬＴＳＥＤＴＡＬＹＹＣＡＳＶＧＱＱＬＰＷＶＦＦＡＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３５４）
ＱＭＱＬＶＱＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＦＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＲＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＷＬＤＲＤＩＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３５５）
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ＱＭＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＹＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＰＩＶＡＴＩＴＰＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３５８）
ＱＭＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＹＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＳＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＰＩＶＡＴＩＴＰＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３５９）
ＱＭＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＡＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＰＩＶＡＴＩＴＰＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３６０）
ＶＬ配列：
ＳＹＥＬＭＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＫＴＡＴＩＡＣＧＧＥＮＩＧＲＫＴＶＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＹＤＳＤＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧＤＥＡＤＹＹＣＱＶＷＤＳＳＳＤＨＲＩＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号３６１）
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ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＳＧＮＮＳＮＩＡＮＮＹＶＳＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＤＮＮＹＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＴＬＤＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＧＶＷＤＧＳＬＴＴＧＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号３６３）
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ＱＳＡＬＴＱＰＡＳＶＳＧＳＰＧＱＳＩＴＩＳＣＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳＷＹＱＱＨＰＧＫＡＰＫＬＭＩＹＤＶＳＮＲＰＳＧＶＳＮＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＳＳＹＲＳＳＴＬＧＰＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号３６５）
ＱＡＧＬＴＱＰＰＳＶＳＥＡＰＲＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＡＶＮＷＹＱＱＬＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＤＤＬＬＰＳＧＶＳＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＮＧＹＶＦＧＴＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号３６６）
ＱＳＡＬＴＱＰＲＳＶＳＧＳＰＧＱＳＶＴＩＳＣＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳＷＹＱＱＨＰＧＫＡＰＫＬＭＩＹＤＶＳＫＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＳＳＹＴＳＳＴＴＨＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ（配列番号３６７）
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ＱＳＶＬＴＱＰＡＳＶＳＧＳＰＧＱＳＩＴＩＳＣＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳＷＹＱＱＨＰＧＲＡＰＲＬＭＩＹＤＶＳＮＲＰＳＧＶＳＮＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＥＧＤＹＹＣＳＳＹＴＳＧＧＴＬＧＰＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号３６９）
ＱＳＶＶＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＹＶＳＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＤＮＮＫＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＴＬＧＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＧＴＷＤＳＳＬＳＡＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号３７０）
ＱＳＶＶＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＹＶＳＷＹＱＱＶＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＤＮＮＫＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＮＳＤＴＳＡＴＬＧＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＧＴＷＤＳＳＬＳＡＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号３７１）
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ＳＹＥＬＭＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＫＴＡＴＩＡＣＧＧＥＮＩＧＲＫＴＶＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＹＤＳＤＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧＤＥＡＤＹＹＣＬＶＷＤＳＳＳＤＨＲＩＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号３７３）
ＳＹＥＬＭＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＫＴＡＴＩＡＣＧＧＥＮＩＧＲＫＴＶＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＹＤＳＤＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧＤＥＡＤＹＹＣＱＶＷＤＳＳＳＤＨＲＩＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号３７４）
ＳＹＥＬＭＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＫＴＡＴＩＡＣＧＧＥＮＩＧＲＫＴＶＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＹＤＳＤＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧＤＥＡＤＹＹＣＱＶＷＤＳＳＳＤＨＲＩＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号３７５）
ＳＹＥＬＭＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＫＴＡＴＩＡＣＧＧＥＮＩＧＲＫＴＶＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＹＤＳＤＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧＤＥＡＤＹＹＣＱＶＷＤＳＳＳＤＨＲＩＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号３７６）
いくつかの実施形態において、ＰＤＬ１結合ドメインは、以下からなる群から選択されるＶＨ配列とＶＬ配列との組み合わせを含む抗体配列またはその抗原結合フラグメントを含むか、またはそれから誘導される。
ＶＨ配列：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＳＥＶＫＫＳＧＳＳＶＫＶＳＣＫＴＳＧＧＴＦＳＩＴＮＹＡＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＬＰＩＦＧＡＡＫＹＡＱＫＦＱＤＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＮＴＡＹＬＥＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＧＫＲＷＬＱＳＤＬＱＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３７７）
ＶＬ配列：
ＱＰＶＬＴＱＰＡＳＶＳＧＳＰＧＱＳＩＴＩＳＣＴＧＳＳＳＤＶＧＳＹＤＬＶＳＷＹＱＱＳＰＧＫＶＰＫＬＬＩＹＥＧＶＫＲＰＳＧＶＳＮＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＳＳＹＡＧＴＲＮＦＶＦＧＧＧＴＱＬＴＶＬ（配列番号３７８）
いくつかの実施形態において、ＰＤＬ１結合ドメインは、以下からなる群から選択されるＶＨ配列とＶＬ配列との組み合わせを含む抗体配列またはその抗原結合フラグメントを含むか、またはそれから誘導される。
ＶＨ配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＹＳＴＧＧＡＴＡＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＳＳＡＧＱＳＲＰＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３７９）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＹＳＴＧＧＡＴＡＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＳＳＡＧＱＳＷＰＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３８０）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＹＳＴＧＧＡＴＡＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＳＳＡＧＱＳＦＰＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３８１）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＹＳＴＧＧＡＴＡＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＷＳＡＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３８２）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＹＳＴＧＧＡＴＡＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＷＳＡＧＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３８３）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＹＳＴＧＧＡＴＡＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＷＳＫＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３８４）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＷＫＱＧＩＶＴＶＹＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＳＳＡＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶ（配列番号３８５）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＷＲＮＧＩＶＴＶＹＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＳＳＡＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３８６）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＤＩＷＫＱＧＭＶＴＶＹＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＳＳＡＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３８７）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＷＲＱＧＬＡＴＡＹＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＳＳＡＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３８８）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＥＩＶＡＴＧＩＬＴＳＹＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＳＳＡＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３８９）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＧＲＱＧＬＩＴＶＹＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＳＳＡＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３９０）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＷＹＱＧＬＶＴＶＹＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＳＳＡＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３９１）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＤＩＷＫＱＧＦＡＴＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＳＳＡＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３９２）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＷＫＱＧＩＶＴＶＹＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＳＳＡＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３９３）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＷＲＱＧＬＡＴＡＹＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＳＳＡＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３９４）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＷＲＮＧＩＶＴＶＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＷＳＡＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３９５）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＷＲＮＧＩＶＴＶＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＷＳＡＧＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３９６）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＷＲＮＧＩＶＴＶＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＷＳＫＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３９７）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭｅｔＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＷＹＱＧＬＶＴＶＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭｅｔＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＷＳＡＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３９８）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＷＹＱＧＬＶＴＶＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＷＳＡＧＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３９９）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＷＹＱＧＬＶＴＶＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＷＳＫＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４００）
ＶＬ配列：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＤＮＧＹＰＳＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号４０１）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＤＮＧＹＰＳＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号４０２）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＤＮＧＹＰＳＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号４０３）
いくつかの実施形態において、ＰＤＬ１結合ドメインは、以下からなる群から選択される一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）配列を含む抗体配列またはその抗原結合フラグメントを含むか、またはそれから誘導される。
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＤＩＴＡＳＧＱＲＴＴＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＫＩＡＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＴＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＫＡＳＲＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＲＡＬＫＰＶＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号４０４）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＮＫＤＧＨＹＴＳＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＮＬＤＥＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＴＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＮＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号４０５）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＭＡＴＧＡＧＴＬＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＤＧＡＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＴＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＱＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＡＮＳＲＰＳＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号４０６）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＳＴＩＴＳＳＧＡＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＮＹＴＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＴＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＮＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＴＹＧＰＧＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号４０７）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＹＳＴＧＧＡＴＡＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＳＳＡＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＴＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＤＮＧＹＰＳＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号４０８）
ＰＤＬ１×４１ＢＢ二重標的化
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、４１ＢＢに結合するＴＢＤと、ＰＤＬ１に対して指向された結合ドメインとを含む二重特異性分子である。これらの実施形態において、ＰＤＬ１に対する結合は追加の架橋機能を提供することができ、ＴＮＦＲＳＦ活性化が１つまたは２つの抗４１ＢＢ ＴＢＤのみによって達成され得る。これらの実施形態において、ＴＮＦＲＳＦシグナル伝達は、ＰＤＬ１発現細胞の存在によって増強され、集中される。
Figure 0007022993000019
Figure 0007022993000020
Figure 0007022993000021
葉酸受容体アルファ（ＦＲα）標的化
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、多重特異性であり、ＴＢＤと、葉酸受容体アルファ（ＦＲα）に対して指向された結合ドメインとを含有する。これらの実施形態において、ＦＲαに対する結合は追加の架橋機能を提供することができ、ＴＮＦＲＳＦ活性化が１つまたは２つのＴＢＤのみによって達成され得る。これらの実施形態において、ＴＮＦＲＳＦシグナル伝達は、ＦＲα発現細胞の存在によって増強され、集中される。
例示的なＦＲα標的化単一ドメイン配列を以下に示す。
Figure 0007022993000022
Figure 0007022993000023
本開示は、以下の実施例において更に説明されるが、これらの実施例は、特許請求の範囲に記載される本開示の範囲を制限するものではない。
実施例１。４１ＢＢ標的化単一ドメイン抗体は、４１ＢＢに結合する
本明細書において１Ｇ３（配列番号４３２）、１Ｈ４（配列番号４３６）、１Ｈ１（配列番号４４０）、４Ｈ４（配列番号１６）、１Ｈ８（配列番号４４４）、４Ｆ５（配列番号２３）、及び４Ｅ１（配列番号２０）と呼ばれる、４１ＢＢ標的化単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）は、組み換えヒト４１ＢＢ（図２Ａ）、カニクイザル４１ＢＢ（図２Ｂ）に結合する。本明細書において４Ｆ５（配列番号２３）、４Ｈ０４（配列番号１６）、４Ｅ０１（配列番号２０）、ＲＨ０３（配列番号２５）、及びＤ１（配列番号２９）と呼ばれる、４１ＢＢ標的化単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）は、ＣＨＯ細胞の細胞表面上に発現されるヒト４１ＢＢ（図３）に結合する。本明細書において４Ｈ０４、ＲＨ０３、及びと呼ばれる、４１ＢＢ標的化ｓｄＡｂは、カニクイザル４１ＢＢに結合する。図２Ａ、図２Ｂ、及び図４について、結合は、組み換え４１ＢＢ－ｍＦｃ融合タンパク質（マウスＦｃ領域に動作可能に連結している４１ＢＢを含有する融合タンパク質）をＭｅｄｉｓｏｒｐ９６ウェルプレート上に固定化するＥＬＩＳＡによって評価した。図３について、結合は、４１ＢＢ発現ＣＨＯ細胞を使用するフローサイトメトリーによって評価し、データを蛍光強度中央値として提示する。
実施例２。４１ＢＢ標的化単一ドメイン抗体は、４１ＢＢを遮断する
本明細書において４Ｆ０５（配列番号２３）、４Ｈ０４（配列番号１６）、４Ｅ０１（配列番号２０）、ＲＨ０３（配列番号２５）、及びＤ１（配列番号２９）と呼ばれる、４１ＢＢ標的化単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）は、４１ＢＢとそのリガンド４１ＢＢＬとの間の相互作用を遮断する。ＲＨ３を除いて、試験した全ての単一ドメイン抗体が、４１ＢＢと４１ＢＢＬとの間の相互作用を遮断する。遮断は、組み換え４１ＢＢ融合タンパク質及び４１ＢＢ発現ＣＨＯ細胞を使用するフローサイトメトリーによって評価し、データを蛍光強度中央値として提示する。
本開示の４１ＢＢ ｓｄＡｂとは対照的に、外因的架橋抗ヒトＩｇＧ抗体と更にクラスター化されない限り、従来の二価抗４１ＢＢ抗体は、４１ＢＢシグナル伝達を誘導しない。図６は、外因的架橋抗ヒトＩｇＧ抗体と更にクラスター化されない限り、米国特許第８，３３７，８５０号に開示される従来の二価抗４１ＢＢ抗体ＰＦ－０５０８２５６６が４１ＢＢシグナル伝達を誘導することができないことを実証する。図６において、４１ＢＢシグナル伝達は、４１ＢＢを発現するＮＦ－ｋＢレポーター２９３細胞株を使用して監視した。
実施例３。ＰＤＬ１標的化単一ドメイン抗体は、ＰＤＬ１に結合し、ＰＬＤ１とＰＤ１との間の相互作用を遮断する
本明細書に提示される研究は、本明細書において２８Ａ１０（配列番号１００）と呼ばれる、例示的なＰＤＬ１単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を使用して、本開示のＰＤＬ１標的化ｓｄＡｂが細胞表面ＰＤＬ１に結合し（図７Ａ）、ＰＤＬ１とＰＤ１との相互作用を遮断する（図７Ｂ）ことを実証する。結合は、ＰＤＬ１発現ＣＨＯ細胞上のフローサイトメトリーによって評価し、遮断は、組み換えＰＤ１融合タンパク質及びＰＤＬ１発現ＣＨＯ細胞を使用するフローサイトメトリーによって評価した。図７Ａ及び７Ｂに提示するデータは、蛍光強度中央値として提示する。
実施例４。ＰＤＬ１－４１ＢＢ標的化融合タンパク質
本開示は、少なくともＰＤＬ１及び４１ＢＢを標的化する融合タンパク質を提供する。これらの二重特異性ＰＤＬ１－４１ＢＢ標的化融合タンパク質は、ＰＤＬ１依存性４１ＢＢ媒介シグナル伝達のアゴニストである。図８Ａ及び８Ｂは、概念模式図であり、二重特異性融合タンパク質は、ＰＤ－Ｌ１発現細胞が結合しない限り（図８Ｂ）、最小の４１ＢＢアゴニスト特性を有する（図８Ａ）。図８Ｃは、ＰＤＬ１－陽性細胞（この場合、ＰＤＬ１でトランスフェクトされたＣＨＯ細胞の集団）が４１ＢＢシグナル伝達を媒介する能力、及びＰＤＬ１－陰性細胞（この場合、トランスフェクトされていないＣＨＯ細胞の集団）が４１ＢＢシグナル伝達を媒介することができないことを実証する。この図において、２つの異なる二重特異性融合タンパク質が示され、各々が、異なる４１ＢＢ結合ＶＨＨ（例えば、４Ｅ０１またはＲＨ３）と、同一のＰＤ－Ｌ１ ＶＨＨである２８Ａ１０とを含有する。４１ＢＢシグナル伝達は、４１ＢＢを発現するＮＦ－ｋＢレポーター２９３細胞株を使用して監視した。このレポーター細胞株は、ＮＦ－ｋＢ駆動分泌アルカリホスファターゼを実装して、ＮＦ－ｋＢシグナル伝達を監視する。
本開示のＰＤＬ１－４１ＢＢ標的化融合タンパク質は、ヒト化抗４１ＢＢ配列を含む。本明細書に提示される研究において、本開示のＰＤＬ１－４１ＢＢ標的化融合タンパク質は、ｈｚＲＨ３ｖ５－１（配列番号３０）及び／またはｈｚＲＨ３ｖ９（配列番号８２）などのヒト化抗４１ＢＢ配列を含み、ＣＨＯ細胞の表面上に発現されるヒト４１ＢＢ及びカニクイザル４１ＢＢ（図９Ｃ、９Ｄ）を含むヒト４１ＢＢ及びカニクイザル４１ＢＢ（図９Ａ、９Ｂ）の両方に結合する。結合は、４１ＢＢ発現２９３フリースタイル細胞上のフローサイトメトリーによって評価した。
ヒト化変異形ｈｚＲＨ３ｖ５－１及びｈｚＲＨ３ｖ９は、図９Ｅに示されるように、細胞表面４１ＢＢに対する４１ＢＢＬの結合を遮断しない。これらの研究において、マウスＦｃ領域を含有する組み換え融合タンパク質４１ＢＢＬ－ｍＦｃを使用し、結合した４１ＢＢＬは、抗マウスＩｇＧ－Ｆｃ特異的二次抗体を使用して検出した。
ヒト化変異形ｈｚＲＨ３ｖ５－１は、他のＴＮＦＲＳＦメンバーＯＸ４０及びＧＩＴＲと比較して、４１ＢＢに特異的に結合する（図１０）。結合は、所与のＴＮＦＲＳＦメンバーを発現するＣＨＯ細胞を使用するフローサイトメトリーによって評価した。
追加のヒト化４１ＢＢ変異形を分析した。図１１Ａ、１１Ｂ、１１Ｃ、及び１１Ｄは、ヒト（図１１Ａ及び図１１Ｃ）４１ＢＢまたはカニクイザル（図１１Ｂ）４１ＢＢに対するヒト化４Ｅ０１変異形の結合を実証する。結合は、４１ＢＢ発現２９３フリースタイル細胞上のフローサイトメトリーによって評価した。図１１Ｄは、ヒト化変異形ｈｚ４Ｅ０１ｖ１６、ｈｚ４Ｅ０１ｖ１８、ｈｚ４Ｅ０１ｖ２１、ｈｚ４Ｅ０１ｖ２２、及びｈｚ４Ｅ０１ｖ２３が細胞表面４１ＢＢに対する４１ＢＢＬの結合を遮断することを実証する。これらの研究では、マウスＦｃ領域を含有する組み換え融合タンパク質４１ＢＢＬ－ｍＦｃを使用し、結合した４１ＢＢＬは、抗マウスＩｇＧ－Ｆｃ特異的二次抗体を使用して検出した。
本開示のＰＤＬ１－４１ＢＢ標的化融合タンパク質はまた、ヒト化抗ＰＤＬ１配列も含む。本明細書に提示される研究において、本開示のＰＤＬ１－４１ＢＢ標的化融合タンパク質は、ｈｚ２８Ａ２ｖ１（配列番号１２０）、ｈｚ２８Ａ２ｖ２（配列番号１２１）、ｈｚ２８Ａ２ｖ３（配列番号１２２）、及びｈｚ２８Ａ２ｖ４－１（配列番号１２３）などのヒト化抗ＰＤＬ１配列を含む。図１２は、ヒト化単一ドメイン抗体標的化ＰＤＬ１の結合を実証する。結合は、ＰＤＬ１発現ＣＨＯ細胞上のフローサイトメトリーによって評価した。
図１３は、本明細書においてＩＮＢＲＸ－１０５－１と呼ばれる、本開示のＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質の２つの例示的な形式の模式図である。ＩＮＢＲＸ－１０５－１－Ａ（左）は、中央Ｆｃ領域をとともに、反対の末端位置に位置するＰＤＬ１及び４１ＢＢ結合ドメインを有する一方で、ＩＮＢＲＸ－１０５－１－Ｂ（右）は、Ｎ末端からＦｃ領域までタンデムで位置付けられるＰＤＬ１及び４１ＢＢ結合ドメインを有する。
これらの２つの形式を、それらがヒト４１ＢＢまたはカニクイザル４１ＢＢに結合する能力、４１ＢＢと４１ＢＢＬとの間の相互作用を遮断する能力、ＰＤＬ１に結合する能力、及びＰＤＬ１とＰＤ１との間の相互作用を遮断する能力について更に評価した。
具体的には、図１４Ａ、１４Ｂ、及び１４Ｃは、本明細書においてＩＮＢＲＸ－１０５－１－Ａ及びＩＮＢＲＸ－１０５－１－Ｂと呼ばれ、図１３に例証される、２つの異なる形式の二重特異性融合タンパク質標的化ＰＤＬ１及び４１ＢＢによる、ヒト（図１４Ａ）４１ＢＢまたはカニクイザル（図１４Ｂ）４１ＢＢに対する同等の結合を実証する。結合は、４１ＢＢ発現２９３フリースタイル細胞上のフローサイトメトリーによって評価した。本明細書に提示される研究において、ｈｚＲＨ３ｖ５－１（配列番号１２４）は、両方の形式において使用される４１ＢＢ結合ドメインである。図１４Ｃに示されるように、ｈｚＲｈ３ｖ５－１を含有する二重特異性融合タンパク質は、細胞表面４１ＢＢに対する４１ＢＢＬ結合を遮断しない。これらの研究において、４１ＢＢＬの組み換え融合タンパク質及びマウスＦｃ領域を使用し、結合した４１ＢＢＬは、抗マウスＩｇＧ－Ｆｃ特異的二次抗体を使用して検出した。
更に、図１５Ａ、１５Ｂ、１５Ｃ、及び１５Ｄは、本明細書においてＩＮＢＲＸ－１０５－１－Ａ及びＩＮＢＲＸ－１０５－１－Ｂと呼ばれる、２つの異なる形式の二重特異性融合タンパク質標的化ＰＤＬ１及び４１ＢＢによる、同等の結合（図１５Ａ及び図１５Ｃ）ならびにＰＤ１遮断（図１５Ｂ及び図１５Ｄ）を実証する。結合は、ヒト（図１５Ａ）またはカニクイザル（図１５Ｃ）ＰＤＬ１発現２９３フリースタイル細胞上のフローサイトメトリーによって評価した。遮断は、組み換えヒト（図１５Ｂ）またはカニクイザル（図１５Ｄ）ＰＤ１－ｍＦｃ融合タンパク質のいずれかとともに２９３フリースタイル細胞を発現する、ヒト（図１５Ｂ）またはカニクイザル（図１５Ｄ）ＰＤＬ１を使用するフローサイトメトリーによって評価した。結合したＰＤ１は、抗マウスＩｇＧ－Ｆｃ特異的二次抗体を使用して検出した。本明細書に提示される研究において、ｈｚ２８Ａ２ｖ５は、両方の形式において使用されるＰＤＬ１結合ドメインである。
ＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質を、それらがＰＤＬ１依存性４１ＢＢアゴニズムを誘導する能力について評価した。図１６は、ＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質（ＩＮＢＲＸ－１０５－１）のヒト化バージョンがＰＤＬ１依存性４１ＢＢアゴニズムを誘導する能力を実証する。本明細書において比較されるのは、２つの異なる形式のＩＮＢＲＸ－１０５－１－Ａ対ＩＮＢＲＸ－１０５－１－Ｂであり、これらはそれぞれ、ＰＤＬ１及び４１ＢＢ結合ドメインが、反対の末端に位置付けられるか、または融合タンパク質内にタンデムで位置付けられる。注目すべきことに、ＩＮＢＲＸ－１０５－１－Ａ対ＩＮＢＲＸ－１０５－１－Ｂは、同等のＰＤＬ１依存性アゴニスト活性を実証する。４１ＢＢ発現ＨＥＫ２９３ＮＦ－ｋＢレポーター細胞株を使用して、４１ＢＢシグナル伝達を評価し、ＰＤＬ１発現ＣＨＯ細胞株をＰＤＬ１源として使用した。このレポーター細胞株は、ＮＦ－ｋＢ駆動分泌アルカリホスファターゼを実装して、ＮＦ－ｋＢシグナル伝達を監視する。
ＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質内の結合ドメインによる、４１ＢＢ特異的結合及びＰＤＬ１特異的結合の能力を評価した。図１７Ａ及び１７Ｂは、本開示のＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質（ＩＮＢＲＸ－１０５－１）の４１ＢＢ結合部分による４１ＢＢ特異的結合を実証する。結合は、４１ＢＢ（図１７Ａ）または最も近いホモログＴＮＦＲＳＦ２１／ＤＲ６（図１７Ｂ）発現２９３フリースタイル細胞上でフローサイトメトリーによって評価した。抗ＤＲ６抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）をＤＲ６発現の陽性対照として使用した。加えて、図１８Ａ、１８Ｂ、及び１８Ｃは、本開示のＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質（ＩＮＢＲＸ－１０５－１）のＰＤＬ１結合部分によるＰＤＬ１特異的結合を実証する。結合は、ＰＤＬ１（図１８Ａ）、最も近いホモログＰＤＬ２（図１８Ｂ）、またはＶＩＳＴＡ／ＰＤＬ３（図１８Ｃ）発現２９３フリースタイル細胞上でフローサイトメトリーによって評価した。抗ＰＤＬ２抗体及び抗ＶＩＳＴＡ抗体（ＶＳＴＢ１７４として知られ、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／０９７５３６号に開示される）をそれぞれ、ＰＤＬ２及びＰＤＬ３発現の陽性対照として使用した。
ＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質が４１ＢＢ及びＰＤＬ１の両方に同時に結合する能力を評価した。図１９Ａ及び１９Ｂは、ＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質がＰＤＬ１及び４１ＢＢに同時に結合する能力を実証する。ＩＮＢＲＸ－１０５－１をＰＤＬ１発現Ｋ５６２細胞上に滴定し、２５ｎＭの組み換え４１ＢＢ－ｍＦｃタンパク質を添加した。結合した４１ＢＢは、抗マウスＩｇＧ－Ｆｃ特異的二次抗体を使用して検出した。図１９Ａは、ＰＤＬ１発現Ｋ５６２細胞に対するＩＮＢＲＸ－１０５－１の結合を示すグラフである。図１９Ｂは、ＰＤＬ１発現細胞上のＩＮＢＲＸ－１０５－１に対する組み換え４１ＢＢの結合を示すグラフである。
図２０は、ＥＬＩＳＡにおいて、ＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質が組み換えＰＤＬ１及び組み換え４１ＢＢに同時に結合する能力を実証する。ＩＮＢＲＸ－１０５－１を固定化した（Ｍｅｄｉｓｏｒｐプレート）組み換えＰＤＬ１上に滴定し、その後、２または１０μｇ／ｍｌのビオチン化組み換え４１ＢＢ（Ｈｉｓタグ付け）いずれかを添加した。結合した組み換え４１ＢＢは、ストレプトアビジン－ＨＲＰを介して検出した。
Ｔ細胞活性化及び増殖に対する、ＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質の効果を評価した。図２１Ａ、２１Ｂ、及び２１Ｃは、Ｔ細胞活性化及び増殖に対する、本開示のＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質（ＩＮＢＲＸ－１０５－１）の効果を実証する。本明細書において、未熟ＤＣ（ｉＤＣ）及びドナー整合Ｔ細胞を実装する自家インビトロ共培養系を７日間実行した。ヒトドナーＰＢＭＣから単球集団を富化する（ＥａｓｙＳｅｐ（商標）Ｈｕｍａｎ Ｍｏｎｏｃｙｔｅ Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ Ｋｉｔ、ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．）し、それらを５００Ｕ／ｍｌのＧＭ－ＣＳＦ及び２５０Ｕ／ｍｌのＩＬ－４中で７日間培養することによって、ＰＤＬ１＋ｉＤＣを誘導した。同時に、自家Ｔ細胞を富化し（ＥａｓｙＳｅｐ（商標）Ｈｕｍａｎ Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ Ｋｉｔ、ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．）、ｉＤＣ誘導が完了するまで凍結保存した。富化したＴ細胞を、約２０：１（Ｔ細胞：ｉＤＣ）でｉＤＣに添加し、ＩＬ－７の存在下で少なくとも７日間共培養した。ＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性ＩＮＢＲＸ－１０５－１は、ＩＮＦγ（図２１Ａ）の誘導またはＣＤ８＋Ｔ細胞増殖（図２１Ｂ）及び活性化（図２１Ｃ）の媒介において、単一特異性ＰＤＬ１ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質（ｈｚ２８Ａ２ｖ５－Ｆｃ）、４１ＢＢ ｓｄＡｂ－Ｆｃ融合タンパク質（ｈｚＲＨ３ｖ５－１－Ｆｃ）、ｈｚ２８Ａ２ｖ５－ＦｃとｈｚＲＨ３ｖ５－１－Ｆｃとの組み合わせ、抗ＰＤＬ１抗体アテゾリズマブ、抗４１ＢＢ抗体、ウトミルマブ（ＰＦ－０５０８２５６６、ＵＳ８３３７８５０に開示される）、または抗ＰＤ１抗体プレムブロリズマブ（Ｐｒｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、及びこれらの組み合わせよりも優れている。細胞上清中のＩＮＦγ産生は、ＥＬＩＳＡを使用して監視し、標準曲線に対して正規化した。Ｔ細胞増殖は、Ｔ細胞のＣＴＶ標識化を使用するフローサイトメトリーによって監視した。Ｔ細胞活性化は、フローサイトメトリーによって監視される活性化マーカーＣＤ２５の存在によって評価した。抗体は、１０ｎＭで使用した。ＩＮＢＲＸ－１０５－１は外見上、ＰＤＬ１：ＰＤ１相互作用によって減衰される低レベル及び／または持続性のＴ細胞活性化／シグナル伝達事象を増大させるようである。
図２２Ａ及び２２Ｂは、本開示のＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質（ＩＮＢＲＸ－１０５－１）によって媒介されるＰＤＬ１依存性４１ＢＢアゴニズムを実証する。これらの研究において、Ｔ細胞を、１０ｎＭのＩＮＢＲＸ－１０５－１の存在または不在下、単独で、または自家未熟ＤＣ（ｉＤＣ、ＰＤＬ１発現）、ＰＤＬ１発現Ｋ５６２細胞株、もしくは親Ｋ５６２細胞株（ＰＤＬ１陰性）とともに７日間培養した。ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖（図２２Ａ）は、ＣＴＶ標識化を使用して監視し、細胞上清中のＩＮＦγ産生（図２２Ｂ）は、ＥＬＩＳＡを使用して監視し、標準曲線に対して正規化した。
図２３は、本開示のＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質（ＩＮＢＲＸ－１０５－１）が、Ｔ細胞集団内でのＴｈ１系譜定義転写因子（Ｔ－ｂｅｔ）発現を増強する能力を実証する。ここでは、Ｔ細胞を、ＩＮＢＲＸ－１０５－１の存在または不在下、自家未熟ＤＣとともに７日間共培養した。Ｔ－ｂｅｔ発現は、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞集団上で、固定及び透過処理の後、細胞内染色を介してフローサイトメトリーによって評価した。ＩＮＢＲＸ－１０５－１は、ＣＤ８＋Ｔ細胞内でのＴ－ｂｅｔ発現に対してより劇的な効果を有する。
本開示のＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質を、様々な既知の単一特異性抗体と比較した。図２４Ａ及び２４Ｂは、本開示のＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質（ＩＮＢＲＸ－１０５－１）、及び単一特異性抗体アテゾリズマブ（抗ＰＤＬ１）とウトミルマブ（抗４１ＢＢ）との組み合わせが、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞からのＩＮＦγ（図２４Ａ）またはＴＮＦα（図２４Ｂ）産生を誘導する能力を対照する。ここでは、Ｔ細胞を、ＩＮＢＲＸ－１０５－１または単一特異性抗体の組み合わせの存在または不在下、自家未熟ＤＣとともに７日間共培養した。ＩＮＢＲＸ－１０５－１は、同一の抗原を標的化する単一特異性抗体と比較して、Ｔ細胞同時刺激において遥かに優れている。サイトカイン発現は、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞集団上で、固定及び透過処理の後、細胞内染色を介してフローサイトメトリーによって評価した。
図２５Ａ及び２５Ｂは、追加のＰＤＬ１陽性（図２５Ａ）または陰性（図２５Ｂ）細胞株の存在下での、四価４１ＢＢ結合融合タンパク質、及び本開示のＰＤＬ１×４１ＢＢ二重特異性融合タンパク質のアゴニスト能力を実証する。注目すべきことに、四価４１ＢＢ結合融合タンパク質のみが、ＰＤＬ１発現細胞株の不在下で４１ＢＢシグナル伝達を誘導することができる。二重特異性ＰＤＬ１×４１ＢＢ融合タンパク質（ＩＮＢＲＸ－１０５－１、ＩＮＢＲＸ－１０５－２、及びＩＮＢＲＸ－１０５－１６）は、図２５Ａに示されるように、細胞表面ＰＤＬ１に結合したときにのみ、４１ＢＢシグナル伝達を誘導した。これは、ＩＮＢＲＸ－１０５の場合のように、４１ＢＢの二価係合が、４１ＢＢを効果的にクラスター化し、生産的な４１ＢＢシグナル伝達を媒介するのに不十分であることを実証する。本実施例におけるように、第２の細胞表面抗原、ＰＤＬ１の係合は、４１ＢＢの更なるクラスター化及び生産的なシグナル伝達を可能にする。ここでは、４１ＢＢ発現ＨＥＫ２９３ＮＦ－ｋＢレポーター細胞を使用し、ＰＤＬ１－陰性Ｋ５６２細胞株（図２５Ｂ）または安定してトランスフェクトされたＰＤＬ１発現Ｋ５６２細胞株（図２５Ａ）のいずれかとともに同時インキュベートした。ＩＮＢＲＸ－１０５－１は、４１ＢＢ標的化ｓｄＡｂを組み込み、ｈｚＲＨ３ｖ５－１、ＩＮＢＲＸ－１０５－２は、４１ＢＢ標的化ｓｄＡｂを組み込み、ｈｚＲＨ３ｖ５－２及びＩＮＢＲＸ－１０５－１６は、４１ＢＢ標的化ｓｄＡｂを組み込み、ｈｚＲＨ３ｖ５－１６及び全ては、ｈｚ２８Ａ２ｖ５ ＰＤＬ１標的化ｓｄＡｂを組み込む。本明細書で使用される四価４１ＢＢ標的化融合タンパク質は、ｈｚＲＨ３ｖ５－１－Ｆｃ－ｈｚＲＨ３ｖ５－１を含む以下の形式を有する。

Claims (32)

  1. ＰＤＬ１及び４１ＢＢに結合し、複数のポリペプチド結合ドメイン（ＢＤ）及び複数の腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）結合ドメイン（ＴＢＤ）を含む、単離されたポリペプチドであって、各結合ドメイン（ＢＤ）が、ＰＤＬ１に結合し、各ＴＮＦＲＳＦ結合ドメイン（ＴＢＤ）が、４１ＢＢに結合し、
    前記複数のＴＢＤ中の各ＴＢＤまたは前記複数のＢＤ中の各ＢＤが、それらの抗体または抗原結合フラグメントを含む、前記単離されたポリペプチド。
  2. 少なくとも１つのＴＢＤが
    配列番号２６、６１、及び２８；配列番号１７、１８、及び１９；配列番号２６、２７、及び２８；配列番号３０、３１、及び３２；配列番号２１、１８、及び２２；配列番号１７、１８、及び２４；配列番号２１、４２、及び２２；配列番号２１、４４、及び２２；配列番号２１、４８、及び１９；配列番号２１、４８、及び２２；配列番号５０、４８、及び２２；配列番号２１、５２、及び２２；配列番号５０、５２、及び２２；配列番号２１、４８、及び５５；配列番号２１、４８、及び５７；配列番号２６、６３、及び２８；配列番号６５、６１、及び２８；配列番号６７、６１、及び２８；配列番号６９、６１、及び２８；配列番号２６、７１、及び２８；配列番号２６、７３、及び２８；配列番号２６、７５、及び２８；配列番号２６、７７、及び２８；配列番号２６、７９、及び２８；配列番号４３３、４３４、及び４３５；配列番号４３７、４３８、及び４３９；配列番号４４１、４４２、及び４４３；並びに配列番号４４５、４４６、及び４４７から選択されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、４１ＢＢに結合するＶＨＨドメインである、請求項１に記載の単離されたポリペプチド。
  3. 少なくとも１つのＴＢＤが４１ＢＢに結合するＶＨＨドメインであり、
    配列番号１６、２０、２３、２５、２９、３３～４１、４３、４５～４７、４９、５１、５３、５４、５６、５８～６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０～８３、４３２、４３６、４４０、及び４４４から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の単離されたポリペプチド。
  4. 少なくとも１つのＢＤが
    配列番号１０５、１０６、及び１０７；配列番号１０１、１０２、及び１０３；配列番号１０９、１１０、及び１１１；配列番号１０１、１１０、及び１１３；配列番号１０１、１１０、及び１１５；並びに配列番号１０１、１１７、及び１１８から選択されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、ＰＤＬ１に結合するＶＨＨドメインである、請求項１～３のいずれか１項に記載の単離されたポリペプチド。
  5. 少なくとも１つのＢＤがＰＤＬ１に結合するＶＨＨドメインであり、
    配列番号１００、１０４、１０８、１１２、１１４、１１６、及び１１９～１２４から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項４に記載の単離されたポリペプチド。
  6. 前記複数のＴＢＤ中の各ＴＢＤが、４１ＢＢに結合するＶＨＨドメインである、請求項１～５のいずれか１項に記載の単離されたポリペプチド。
  7. 前記複数のＴＢＤ中の各ＴＢＤが、４１ＢＢ上の同一のエピトープに結合する、請求項１～６のいずれか１項に記載の単離されたポリペプチド。
  8. 前記複数のＴＢＤ中の少なくとも２つのＴＢＤが、４１ＢＢ上の異なるエピトープに結合する、請求項１～６のいずれか１項に記載の単離されたポリペプチド。
  9. 前記複数のＢＤ中の各ＢＤが、ＰＤＬ１に結合するＶＨＨドメインである、請求項１～８のいずれか１項に記載の単離されたポリペプチド。
  10. 前記複数のＢＤ中の各ＢＤが、ＰＤＬ１上の同一のエピトープに結合する、請求項１～９のいずれか１項に記載の単離されたポリペプチド。
  11. 前記複数のＢＤ中の少なくとも２つのＢＤが、ＰＤＬ１上の異なるエピトープに結合する、請求項１～９のいずれか１項に記載の単離されたポリペプチド。
  12. 前記複数のＴＢＤ中の前記ＴＢＤの各々及び前記複数のＢＤ中の前記ＢＤの各々が、リンカーポリペプチドを介して動作可能に連結している、請求項１～１１のいずれか１項に記載の単離されたポリペプチド。
  13. 少なくとも１つのＴＢＤが、４１ＢＢに結合するＶＨＨドメインであり、
    配列番号２６のアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、配列番号６１のアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、配列番号２８のアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含む、請求項１～１２のいずれか１項に記載の単離されたポリペプチド。
  14. ＰＤＬ１に結合する少なくとも１つのＶＨＨドメインが、
    配列番号１０５のアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、配列番号１０７のアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含む、請求項１～１３のいずれか１項に記載の単離されたポリペプチド。
  15. 少なくとも１つのＴＢＤが、４１ＢＢに結合するＶＨＨドメインであり、
    配列番号２６のアミノ酸配列を含む相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、配列番号６１のアミノ酸配列を含む相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、配列番号２８のアミノ酸配列を含む相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含み、
    少なくとも１つのＢＤが、ＰＤＬ１に結合するＶＨＨドメインであり、
    配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３と、を含む、請求項１に記載の単離されたポリペプチド。
  16. 少なくとも１つのＴＢＤが、４１ＢＢに結合するＶＨＨドメインであり、配列番号６０のアミノ酸配列を含み、
    少なくとも１つのＢＤが、ＰＤＬ１に結合するＶＨＨドメインであり、配列番号１２４のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離されたポリペプチド。
  17. 各ＶＨＨが、ヒト化ＶＨＨである、請求項１～１６のいずれかに記載の単離されたポリペプチド。
  18. 前記単離されたポリペプチドが、免疫グロブリンＦｃ領域ポリペプチドを含む、請求項１～１７のいずれか１項に記載の単離されたポリペプチド。
  19. 前記免疫グロブリンＦｃ領域ポリペプチドが、配列番号１～６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１８に記載の単離されたポリペプチド。
  20. 前記ポリペプチドが、四価である、請求項１８又は１９に記載の単離されたポリペプチド。
  21. 前記ポリペプチドが、構造、ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－ヒンジ－Ｆｃを含み、式中、各ＶＨＨが、ヒト化ＶＨＨ配列である、請求項２０に記載の単離されたポリペプチド。
  22. 前記ポリペプチドが、六価である、請求項１８又は１９に記載の単離されたポリペプチド。
  23. 前記ポリペプチドが、構造、ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－ヒンジ－Ｆｃを含み、式中、各ＶＨＨが、ヒト化ＶＨＨ配列である、請求項２２に記載の単離されたポリペプチド。
  24. 前記ポリペプチドが、配列番号４４９～４５６から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離されたポリペプチド。
  25. ポリペプチド結合ドメイン（ＢＤ）及び腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）結合ドメイン（ＴＢＤ）を含む、単離されたポリペプチドであり、
    前記ＢＤが、ＰＤＬ１に結合し、前記ＴＢＤが、４１ＢＢに結合し、
    前記ＴＢＤ及び／又はＢＤがそれらの抗体または抗原結合フラグメントを含む、単離されたポリペプチド。
  26. 請求項１～２５のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチド。
  27. 請求項２６に記載のポリヌクレオチドを含む、単離された細胞。
  28. 請求項１～２５のいずれか１項に記載のポリペプチドを発現する単離された細胞。
  29. 請求項２７または２８に記載の単離された細胞を、ポリペプチドを発現するために適した条件下で培養することを含む、請求項１～２５のいずれか１項に記載のポリペプチドを製造する方法。
  30. 請求項１～２５のいずれか１項に記載の単離されたポリペプチドを含む、新生物を治療するため組成物。
  31. 前記新生物が、癌である請求項３０に記載の組成物。
  32. 請求項１～２５のいずれか１項に記載の単離されたポリペプチドを含む、免疫細胞を調節して、腫瘍破壊を増強するための組成物。
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