JP7021405B2 - イソクエン酸脱水素酵素(idh)阻害剤 - Google Patents
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Description
1つの態様において、本開示は、式(I):
[式中、
ZおよびQは、独立に、CおよびNから選択され;
Aは、O、S、またはNRaであり;
Wは、直鎖状または分岐状C1~6アルキレンであり;
Xは、C6~12アリール、C6~12ヘテロアリール、3~10員飽和または不飽和シクロアルキル、3~10員飽和または不飽和ヘテロシクロアルキルであり;
Yは、ハロ、シアノ、C1~12アルキル、C6~12アリール、C1~12アルコキシル、C6~12アリールオキシル、3~10員飽和もしくは不飽和シクロアルキル、3~10員飽和もしくは不飽和ヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、-C(O)ORb、-C(O)NRcRdであり、これらは、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、C1~12アルキル、C2~12アルケニル、C2~12アルキニル、C5~10アリール、C1~12アルコキシ、3~10員飽和もしくは不飽和シクロアルキル、3~10員ヘテロシクロアルキル、または3~10員ヘテロアリール、C5~10アリールオキシルのうちの1つまたは複数によって一置換または独立に多置換されていてもよく;
R1は、C1~12アルキル、3~10員飽和もしくは不飽和シクロアルキル、C6~12アラルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアラルキル、または-NReRfであり;
R2は、水素、-NRgRh、-C(O)ORb、または-C(O)NRcRdであり;
Ra、Rb、Rc、Rd、Re、Rf、RgおよびRhは、独立に、水素、C1~12アルキル、3~10員飽和もしくは不飽和シクロアルキル、C6~12アリールから選択され、これらは、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、C1~12アルキル、C2~12アルケニル、C2~12アルキニル、C5~10アリール、C1~12アルコキシ、3~10員飽和もしくは不飽和シクロアルキル、3~10員ヘテロシクロアルキル、または3~10員ヘテロアリール、C5~10アリールオキシルによって一置換または独立に多置換されていてもよく;
RcおよびRdは、これらが結合している窒素原子と一緒になって、N、S、およびOから選択される1つまたは複数の追加のヘテロ原子を含んでいてもよい4~8員ヘテロシクリルを形成してもよく、
RgおよびRhは、これらが結合している窒素原子と一緒になって、N、S、およびOから選択される1つまたは複数の追加のヘテロ原子を含んでいてもよい4~8員ヘテロシクリルを形成していてもよく;
nは0、1または2である]
の化合物および薬学的に許容されるその塩、エステル、水和物、または溶媒和物または立体異性体を提供する。
いくつかの実施形態において、本開示の化合物は式(Ia):
[式中、
Wは、直鎖状または分岐状C1~6アルキレンであり;
Xは、C6~12アリール、C6~12ヘテロアリール、3~10員飽和または不飽和シクロアルキル、3~10員飽和または不飽和ヘテロシクロアルキルであり;
Yは、ハロ、シアノ、C1~12アルキル、C6~12アリール、C1~12アルコキシル、C6~12アリールオキシル、3~10員飽和もしくは不飽和シクロアルキル、3~10員飽和もしくは不飽和ヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、-C(O)ORb、-C(O)NRcRdであり、これらは、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、C1~12アルキル、C2~12アルケニル、C2~12アルキニル、C5~10アリール、C1~12アルコキシ、3~10員飽和もしくは不飽和シクロアルキル、3~10員ヘテロシクロアルキル、または3~10員ヘテロアリール、C5~10アリールオキシルのうちの1つまたは複数によって一置換または独立に多置換されていてもよく;
R1は、C1~12アルキル、3~10員飽和もしくは不飽和シクロアルキル、C6~12アラルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアラルキル、または-NReRfであり;
R2は、水素、-NRgRh、-C(O)ORb、または-C(O)NRcRdであり;
Ra、Rb、Rc、Rd、Re、Rf、RgおよびRhは、独立に、水素、C1~12アルキル、3~10員飽和もしくは不飽和シクロアルキル、C6~12アリールから選択され、これらは、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、C1~12アルキル、C2~12アルケニル、C2~12アルキニル、C5~10アリール、C1~12アルコキシ、3~10員飽和もしくは不飽和シクロアルキル、3~10員ヘテロシクロアルキル、または3~10員ヘテロアリール、C5~10アリールオキシルによって一置換または独立に多置換されていてもよく;
RcおよびRdは、これらが結合している窒素原子と一緒になって、N、S、およびOから選択される1つまたは複数の追加のヘテロ原子を含んでいてもよい4~8員ヘテロシクリルを形成していてもよく、
RgおよびRhは、これらが結合している窒素原子と一緒になって、N、S、およびOから選択される1つまたは複数の追加のヘテロ原子を含んでいてもよい4~8員ヘテロシクリルを形成していてもよく;
nは0、1または2である]
によって表される化合物および薬学的に許容されるその塩、エステル、水和物、溶媒和物または立体異性体である。
ヒトIDH1タンパク質(NCBI登録番号:O75874.2、配列番号:1)
1 mskkisggsv vemqgdemtr iiwelikekl ifpyveldlh sydlgienrd atndqvtkda
61 aeaikkhnvg vkcatitpde krveefklkq mwkspngtir nilggtvfre aiickniprl
121 vsgwvkpiii grhaygdqyr atdfvvpgpg kveitytpsd gtqkvtylvh nfeegggvam
181 gmynqdksie dfahssfqma lskgwplyls tkntilkkyd grfkdifqei ydkqyksqfe
241 aqkiwyehrl iddmvaqamk seggfiwack nydgdvqsds vaqgygslgm mtsvlvcpdg
301 ktveaeaahg tvtrhyrmyq kgqetstnpi asifawtrgl ahrakldnnk elaffanale
361 evsietieag fmtkdlaaci kglpnvqrsd ylntfefmdk lgenlkikla qakl
ヒトIDH2タンパク質(NCBI登録番号:P48735.2、配列番号:2)
1 magylrvvrs lcrasgsrpa wapaaltapt sqeqprrhya dkrikvakpv vemdgdemtr
61 iiwqfikekl ilphvdiqlk yfdlglpnrd qtddqvtids alatqkysva vkcatitpde
121 arveefklkk mwkspngtir nilggtvfre piickniprl vpgwtkpiti grhahgdqyk
181 atdfvadrag tfkmvftpkd gsgvkewevy nfpaggvgmg myntdesisg fahscfqyai
241 qkkwplymst kntilkaydg rfkdifqeif dkhyktdfdk nkiwyehrli ddmvaqvlks
301 sggfvwackn ydgdvqsdil aqgfgslglm tsvlvcpdgk tieaeaahgt vtrhyrehqk
361 grptstnpia sifawtrgle hrgkldgnqd lirfaqmlek vcvetvesga mtkdlagcih
421 glsnvklneh flnttdfldt iksnldralg rq
が挙げられる。
その塩、エステル、水和物、または溶媒和物または立体異性体を含む、本明細書において提供される化合物の合成は、以下の一般的な合成スキームで示される。本明細書において提供される化合物は、任意の公知の有機合成技術を使用して調製することができ、かつ多数の可能な合成経路のいずれかに従って合成することができ、したがって、これらのスキームは、単なる例示にすぎず、かつ本明細書において提供される化合物の調製に使用することができる他の可能な方法を限定することを意味するものではない。さらに、スキーム中のステップはさらに例示するためのものであり、必要に応じて変更することができる。例中の化合物の実施形態は、研究のために、かつ規制当局へ提出の可能性があるために、中国で合成した。
ステップ2:化合物1002を、R1NH2 HClと、Cs2CO3の存在下で反応させ、化合物1004を得た(式中、R1の定義は上記で開示されるとおりである)。
ステップ2:THF中の化合物1006を、(R)-(+)-2-メチル-2-プロパンスルフィンアミドと、Ti(OEt)4の存在下で反応させ、化合物1007を得た。
ステップ3:無水THF中の化合物1007を、L-セレクトリドと反応させ、化合物1008を得た。
ステップ4:MeOH中の化合物1008を、HCl/MeOHと反応させ、化合物1009を得た。
ステップ2:THF中の化合物1011を、(R)-(+)-2-メチル-2-プロパンスルフィンアミドと、Ti(OEt)4の存在下で反応させ、化合物1012を得た。
ステップ3:無水THF中の化合物1012を、L-セレクトリドと反応させ、化合物1013を得た。
ステップ4:MeOH中の化合物1013を、HCl/MeOHと反応させ、化合物1014を得た。
ステップ2:THF中の化合物1016を、(R)-(+)-2-メチル-2-プロパンスルフィンアミドと、Ti(OEt)4の存在下で反応させ、化合物1017を得た。
ステップ3:無水THF中の化合物1017を、L-セレクトリドと反応させ、化合物1018を得た。
ステップ4:MeOH中の化合物1018を、HCl/MeOHと反応させ、化合物1019を得た。
ステップ2:THF中の化合物1021を、(R)-(+)-2-メチル-2-プロパンスルフィンアミドと、Ti(OEt)4の存在下で反応させ、化合物1022を得た。
ステップ3:無水THF中の化合物1022を、L-セレクトリドと反応させ、化合物1023を得た。
ステップ4:MeOH中の化合物1023を、HCl/MeOHと反応させ、化合物1024を得た。
ステップ2:DMF中の化合物1027を、アニリン、DIPEAおよびHATUと反応させ、標的化合物を得た。
ステップ2:MeOH中の化合物1030を、HCl/MeOHと反応させ、標的化合物を得た。
本開示は、本明細書において開示される少なくとも1種の化合物を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、本明細書において開示される1種を超える化合物を含む。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、本明細書において開示される1種または複数の化合物と、薬学的に許容される担体とを含む。
本開示は、IDHと関連する疾患を処置する方法であって、1種または複数の化合物、薬学的に許容されるその塩、水和物、溶媒和物もしくは立体異性体または本明細書において開示される医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む方法を提供する。
以下の例における化合物の構造を、核磁気共鳴(NMR)または/および質量分析法(ESI)によって特性決定した。NMRシフト(δ)を10-6(ppm)の単位で得た。1H-NMRスペクトルを、ジメチルスルホキシド-d6(DMSO-d6)またはCDCl3中、Varian Mercury VX 400分光器で、内部標準としてテトラメチルシラン(TMS)を用いて記録した。
メチル3-(ブロモメチル)-2-クロロイソニコチネート
メチル2-クロロ-3-メチルイソニコチネート(6.00g、32.32mmol)のCCl4(30mL)中溶液に、NBS(6.06g、33.94mmol)およびBPO(780mg、3.23mmol)を添加した。添加後、反応混合物を3時間加熱還流した。TLCによって、出発材料が消費されたことが示された。次いで、それを周囲温度に冷却し、得られた沈殿物をろ過によって除去し、CCl4(5mL)で洗浄した。ろ液を真空中で濃縮し、粗製生成物メチル3-(ブロモメチル)-2-クロロイソニコチネートを黄色油状物として得、それをさらに精製することなく次のステップで使用した。
4-クロロ-2-エチル-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
上記粗製生成物をTHF(50mL)中に溶解した。エタンアミン塩酸塩(2.64g、32.32mmol)およびCs2CO3(42.12g、129.28mmol)を反応混合物に添加した。それを周囲温度で12時間撹拌した。TLCによって、出発材料が消費されたことが示された。固形物をろ過によって除去し、酢酸エチル(10mL)で洗浄し、ろ液を真空中で濃縮した。粗製生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=2:1で溶離させた)で精製し、所望の生成物を淡黄色固形物として得た(2.31g、収率36.2%、2ステップで)。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.51 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 7.64 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 4.40 (s, 2H), 3.67 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 1.28 (t, J= 7.2 Hz, 3H).
(S)-4-((1-(4-ブロモフェニル)エチル)アミノ)-2-エチル-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
4-クロロ-2-エチル-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン(150mg、0.76mmol)のエチレングリコール(15mL)中溶液に、(S)-1-(4-ブロモフェニル)エタンアミン(229mg、1.14mmol)およびTEA(232mg、2.29mmol)を添加した。反応混合物を150℃に加熱し、5時間撹拌した。それを周囲温度に冷却し、水30mLで希釈し、酢酸エチル(25mL×2)で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。粗製生成物を、分取TLC(DCM:MeOH=20:1)で精製し、所望の生成物を白色固形物として得た(80mg、収率29.1%)。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.13 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.04 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 6.84 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 5.24 (br, 1H), 4.72 - 4.52 (m, 1H), 4.21 (s, 2H), 3.40 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.05 (s, 3H), 1.54 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.14 (t, J = 7.1 Hz, 3H). ESI-MS m/z 360.1 [M+H].
(S)-2-エチル-4-(1-(4-フルオロフェニル)エチルアミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
本開示の化合物1を、スキーム1および6に従って調製した。合成方法は、(S)-1-(4-ブロモフェニル)エタンアミンを(S)-1-(4-フルオロフェニル)エタンアミンで置き換えたことを除いて、合成例1と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.14 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 7.42-7.31(m, 2H), 7.27-7.09 (m, 2H), 6.99 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 5.28 (br, 1H), 4.61-4.41 (m, 1H), 4.15 (s, 2H), 3.51 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 2.35 (s, 3H), 1.58 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.12 (t, J = 7.2 Hz, 3H). ESI-MS m/z 300.1 [M+H].
(S)-2-エチル-4-(1-p-トリルエチルアミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
本開示の化合物3を、スキーム1および6に従って調製した。合成方法は、(S)-1-(4-ブロモフェニル)エタンアミンを(S)-1-(4-メチルフェニル)エタンアミンで置き換えたことを除いて合成例1と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.14 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.07 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 6.94 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 5.27 (br, 1H), 4.69 - 4.42 (m, 1H), 4.12 (s, 2H), 3.56 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 2.25 (s, 3H), 1.52 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.16 (t, J = 7.4 Hz, 3H). ESI-MS m/z 296.2 [M+H].
(S)-2-シクロプロピル-4-(1-フェニルエチルアミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
本開示の化合物4を、スキーム1および6に従って調製した。合成方法は、エタンアミン塩酸塩をシクロプロパンアミン塩酸塩で置き換え、かつ(S)-1-(4-ブロモフェニル)エタンアミンを(S)-1-フェニルエタンアミンで置き換えたことを除いて、合成例1と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.12 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.24 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.20 - 7.13 (m, 1H), 6.91 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 5.30 (p, J = 7.0 Hz, 1H), 4.54 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.07 (s, 2H), 2.81 (h, J = 4.7, 3.6 Hz, 1H), 1.52 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.88 - 0.69 (m, 4H). ESI-MS m/z 294.2 [M+H].
(S)-2-ブチル-4-(1-フェニルエチルアミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
本開示の化合物5を、スキーム1および6に従って調製した。合成方法は、エタンアミン塩酸塩をn-ブチルアミン塩酸塩で置き換え、かつ(S)-1-(4-ブロモフェニル)エタンアミンを(S)-1-フェニルエタンアミンで置き換えたことを除いて、合成例1と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.14 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.22 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.12 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 5.41-5.22 (m, 1H), 4.07 (s, 2H), 3.62 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.61-1.68 (m, 2H), 1.35-1.42 (m, 2H), 0.95 (t, J = 7.4 Hz, 3H). ESI-MS m/z 310.2 [M+H].
(S)-2-ベンジル-4-(1-フェニルエチルアミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
本開示の化合物6を、スキーム1および6に従って調製した。合成方法は、エタンアミン塩酸塩をベンジルアミンで置き換え、かつ(S)-1-(4-ブロモフェニル)エタンアミンを(S)-1-フェニルエタンアミンで置き換えたことを除いて、合成例1と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.14 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.37 - 7.11 (m, 10H), 7.09 - 6.94 (m, 1H), 5.23 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 4.69 (d, J = 2.7 Hz, 2H), 4.09 (s, 2H), 1.53 (s, 3H). ESI-MS m/z 344.2 [M+H].
(S)-2-(4-メトキシベンジル)-4-(1-フェニルエチルアミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
本開示の化合物7を、スキーム1および6に従って調製した。合成方法は、エタンアミン塩酸塩を4-メトキシベンジルアミンで置き換え、かつ(S)-1-(4-ブロモフェニル)エタンアミンを(S)-1-フェニルエタンアミンで置き換えたことを除いて、合成例1と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.14 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.31 - 7.15 (m, 5H), 7.14 - 7.08 (m, 2H), 7.01 - 6.95 (m, 1H), 6.82 - 6.74 (m, 2H), 5.26 (p, J = 6.9 Hz, 1H), 4.61 (d, J = 2.5 Hz, 2H), 4.17 (s, 2H), 3.95 (s, 2H), 3.71 (d, J = 1.9 Hz, 3H), 1.49 (d, J = 6.6 Hz, 3H). ESI-MS m/z 374.2 [M+H].
(S)-2-イソプロピル-4-(1-フェニルエチルアミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
本開示の化合物8を、スキーム1および6に従って調製した。合成方法は、エタンアミン塩酸塩をイソプロピルアミンで置き換え、かつ(S)-1-(4-ブロモフェニル)エタンアミンを(S)-1-フェニルエタンアミンで置き換えたことを除いて、合成例1と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.13 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.26 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.18 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 5.32 (p, J = 7.2 Hz, 1H), 4.68-4.49 (m, 2H), 4.07 (s, 2H), 1.54 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.18 (d, J = 6.7 Hz, 6H). ESI-MS m/z 296.2 [M+H].
(S)-2-(2-メトキシエチル)-4-(1-フェニルエチルアミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
本開示の化合物9を、スキーム1および6に従って調製した。合成方法は、エタンアミン塩酸塩を2-メトキシエチルアミンで置き換え、かつ(S)-1-(4-ブロモフェニル)エタンアミンを(S)-1-フェニルエタンアミンで置き換えたことを除いて、合成例1と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.15 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 7.26 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 7.23 - 7.13 (m, 1H), 6.96 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 5.32 (p, J = 7.1 Hz, 1H), 4.38 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 4.27 (s, 2H), 3.70 (t, J = 5.1 Hz, 2H), 3.53 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 3.27 (s, 3H), 1.54 (d, J = 6.7 Hz, 3H). ESI-MS m/z 312.2 [M+H].
(S)-2-エチル-4-(1-フェニルエチルアミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
本開示の化合物10を、スキーム1および6に従って調製した。合成方法は、(S)-1-(4-ブロモフェニル)エタンアミンを(S)-1-フェニルエタンアミンで置き換えたことを除いて、合成例1と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.15 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.32 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 7.30 (s, 2H), 7.19 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 6.96 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 5.32 (p, J = 6.6 Hz, 1H), 4.46 (s, 1H), 4.13 (d, J = 3.0 Hz, 2H), 3.57 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.54 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.17 (t, J = 7.1 Hz, 3H). ESI-MS m/z 282.2 [M+H].
(S)-2-エチル-4-(1-(4-メトキシフェニル)エチルアミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
本開示の化合物11を、スキーム1および6に従って調製した。合成方法は、(S)-1-(4-ブロモフェニル)エタンアミンを(S)-1-(4-メトキシフェニル)エタンアミンで置き換えたことを除いて、合成例1と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.22 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.02 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.87 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 5.33 (p, J = 6.9 Hz, 1H), 4.49 (s, 1H), 4.18 (s, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.64 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 1.59 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.29 - 1.23 (m, 3H). ESI-MS m/z 312.2 [M+H].
(S)-エチル-4-(1-(2-エチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-4-イルアミノ)エチル)ベンゾエート
本開示の化合物12を、スキーム1および6に従って調製した。合成方法は、(S)-1-(4-ブロモフェニル)エタンアミンを(S)-エチル-4-((1-アミノ)エチル)ベンゾエートで置き換えたことを除いて、合成例1と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.16 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.00 (dd, J = 16.5, 8.2 Hz, 2H), 7.43 (t, J = 9.1 Hz, 2H), 7.01 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 5.41 (p, J = 6.6 Hz, 1H), 4.70 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 4.34 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.24 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.63 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.58 (t, J = 7.6 Hz, 3H), 1.36 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.24 (t, J = 7.2 Hz, 3H). ESI-MS m/z 354.2 [M+H].
(S)-4-(1-((2-エチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-4-イル)アミノ)エチル)安息香酸
化合物12(500mg、1.41mmol)のTHF(10mL)中溶液に、NaOH(141mg、3.54mmol)の水(5mL)中溶液を添加した。反応混合物を、周囲温度で5時間撹拌した。TLCによって、反応が完了したことが示された。混合物を濃縮し、大部分のTHFを除去し、水(10mL)で希釈し、2N HCl溶液を添加することによってpH7に酸性化した。得られた沈殿物をろ過によって収集し、水(5mL)で洗浄し、真空中、75℃で乾燥し、所望の生成物を白色固形物として得た(330mg、収率71.7%)。
(S)-4-(1-((2-エチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-4-イル)アミノ)エチル)-N-フェニルベンズアミド
(S)-4-(1-((2-エチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-4-イル)アミノ)エチル)安息香酸(320mg、0.98mmol)のDMF(10mL)中溶液に、アニリン(110mg、1.18mmol)、DIPEA(254mg、1.97mmol)およびHATU(559mg、1.47mmol)を添加した。添加後、それを周囲温度で10時間撹拌した。TLCによって、反応が完了したことが示された。溶媒を真空中で濃縮することによって除去し、残渣を酢酸エチル(20mL)中に溶解し、水(15mL×2)および食塩水(15mL)で洗浄した。分離した有機層を濃縮し、粗製生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(DCM:MeOH=30:1で溶離させた)で精製し、所望の生成物を白色固形物として得た(120mg、収率30.5%)。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.18 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.81 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.63 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.48 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.36 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 7.14 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 5.49 - 5.37 (m, 1H), 4.63 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 4.25 (d, J = 2.6 Hz, 2H), 3.64 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.31 - 3.23 (m, 1H), 1.61 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.25 (t, J = 7.3 Hz, 3H). ESI-MS m/z 401.2 [M+H].
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.20 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.71 (s, 1H), 7.45 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.03 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 5.40 (p, J = 6.8 Hz, 1H), 4.66 (s, 1H), 4.23 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 4.12 (d, J = 10.2 Hz, 3H), 3.68 - 3.59 (m, 2H), 1.62 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.24 (t, J = 7.2 Hz, 3H). ESI-MS m/z 363.2 [M+H].
1-(4-(m-トリルオキシ)フェニル)エタノン
1-(4-ヒドロキシフェニル)エタノン(3.00g、22.03mmol)のDCM(30mL)中溶液に、m-トリルボロン酸(4.50g、33.10mmol)、Cu(OAc)2(8.00g、44.07mmol)およびTEA(11.15g、110.17mmol)を添加した。添加後、混合物を周囲温度で12時間撹拌した。TLCによって、1-(4-ヒドロキシフェニル)エタノンが消費されたことが示された。固形物をろ過によって除去し、DCM(10mL)で洗浄し、ろ液を水(30mL)で洗浄した。分離した有機層を真空中で濃縮し、粗製生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=20:1で溶離させた)で精製し、所望の生成物を淡黄色固形物として得た(2.00g、収率40.1%)。
(Rs)-2-メチル-N-(1-(4-(m-トリルオキシ)フェニル)エチリデン)プロパン-2-スルフィンアミド
1-(4-(m-トリルオキシ)フェニル)エタノン(1.50g、6.63mmol)のTHF(20mL)中溶液に、(R)-(+)-2-メチル-2-プロパンスルフィンアミド(1.21g、9.94mmol)およびTi(OEt)4(4.54g、19.89mmol)を添加した。反応混合物を16時間加熱還流した。TLCによって、出発材料が消費されたことが示された。それを周囲温度に冷却し、次いで水性飽和NaCl溶液(50mL)へ注ぎ入れた。得られた固形物をろ過によって除去し、酢酸エチル(10mL)で洗浄した。そして、ろ液を酢酸エチル(40mL)で抽出した。分離した有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮し、粗製生成物を得(1.60g、収率73.3%)、それをさらに精製することなく次のステップで使用した。
(Rs)-2-メチル-N-((S)-1-(4-(m-トリルオキシ)フェニル)エチル)プロパン-2-スルフィンアミド
(Rs)-2-メチル-N-(1-(4-(m-トリルオキシ)フェニル)エチリデン)プロパン-2-スルフィンアミド(800mg、2.30mmol)および無水THF(10mL)の混合物を-50℃に冷却し、L-セレクトリド(1M、4.6ml、4.60mmol)を混合物へ、N2下、-50℃で撹拌しながら滴下した。混合物を1時間撹拌し、次いで周囲温度に加温した。完了時に、反応生成物を水(50mL)でクエンチし、酢酸エチル(60mL)で抽出した。分離した有機層を真空中で濃縮した。粗製生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=1:10で溶離させた)で精製し、所望の生成物を黄色固形物として得た(500mg、収率62.1%)。
(S)-1-(4-(m-トリルオキシ)フェニル)エタンアミン塩酸塩
(Rs)-2-メチル-N-((S)-1-(4-(m-トリルオキシ)フェニル)エチル)プロパン-2-スルフィンアミド(450mg、1.28mmol)のMeOH(5mL)中溶液に、HCl/MeOH(4M、3.2mL、12.80mmol)を添加した。添加後、それを周囲温度で16時間撹拌した。MeOHを真空下で除去した。酢酸エチル(10mL)を残渣に添加し、30分間撹拌した。酢酸エチルを真空下で除去し、次いでMTBE(10mL)を残渣に添加し、1時間撹拌した。生成物をろ過によって収集し、MTBE(5mL)で洗浄し、真空中で乾燥し、所望の生成物をオフホワイト色固形物として得た(310mg、収率86.6%)。
(S)-2-エチル-4-((1-(4-(m-トリルオキシ)フェニル)エチル)アミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
合成例1のように得た、4-クロロ-2-エチル-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン(120mg、0.61mmol)のエチレングリコール(10mL)中溶液に、(S)-1-(4-(m-トリルオキシ)フェニル)エタンアミン塩酸塩(208mg、0.92mmol)およびTEA(185mg、1.83mmol)を添加した。反応混合物を150℃に加熱し、5時間撹拌した。それを周囲温度に冷却し、水30mLで希釈し、酢酸エチル(20mL×2)で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。粗製生成物を、分取TLC(DCM:MeOH=20:1)で精製し、所望の生成物を白色固形物として得た(78mg、収率26.4%)。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.23 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.20 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.96 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.91 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.86 - 6.75 (m, 2H), 5.46 - 5.31 (m, 1H), 4.49 (s, 1H), 4.21 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.65 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 2.32 (s, 3H), 1.61 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.25 (t, J = 7.3 Hz, 3H). ESI-MS m/z 388.2 [M+H].
(S)-2-エチル-4-(1-(4-(p-トリルオキシ)フェニル)エチルアミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
本開示の化合物16を、スキーム1、2および6に従って調製した。合成方法は、m-トリルボロン酸をp-トリルボロン酸で置き換えたことを除いて、合成例15と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.23 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.13 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.04 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.92 (dd, J = 13.5, 8.5 Hz, 4H), 5.37 (p, J = 6.6 Hz, 1H), 4.50 (s, 1H), 4.20 (d, J = 1.6 Hz, 2H), 3.65 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 2.33 (s, 3H), 1.60 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.25 (t, J = 7.3 Hz, 3H). ESI-MS m/z 388.2 [M+H].
(S)-2-エチル-4-(1-(4-(o-トリルオキシ)フェニル)エチルアミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
本開示の化合物17を、スキーム1、2および6に従って調製した。合成方法は、m-トリルボロン酸をo-トリルボロン酸で置き換えたことを除いて、合成例15と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.23 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.26 (dd, J = 8.7, 6.1 Hz, 1H), 7.20 - 7.11 (m, 2H), 7.06 (dd, J = 12.4, 6.1 Hz, 2H), 6.88 (t, J = 9.2 Hz, 2H), 5.37 (p, J = 6.7 Hz, 1H), 4.48 (s, 1H), 4.20 (d, J = 1.5 Hz, 2H), 3.65 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 2.36 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 2.23 (s, 3H), 1.59 (t, J = 9.8 Hz, 3H), 1.25 (t, J = 7.3 Hz, 3H). ESI-MS m/z 388.2 [M+H].
(S)-2-エチル-4-(1-(4-フェノキシフェニル)エチルアミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
本開示の化合物18を、スキーム1、2および6に従って調製した。合成方法は、m-トリルボロン酸をフェニルボロン酸で置き換えたことを除いて、合成例15と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.23 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.41 - 7.28 (m, 4H), 7.10 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.98 (dd, J = 11.8, 8.3 Hz, 4H), 5.39 (p, J = 7.0 Hz, 1H), 4.48 (s, 1H), 4.21 (s, 2H), 3.65 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 1.61 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.25 (t, J = 7.2 Hz, 3H). ESI-MS m/z 374.2 [M+H].
(S)-2-エチル-4-(1-(4-(4-メトキシフェノキシ)フェニル)エチルアミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
本開示の化合物19を、スキーム1、2および6に従って調製した。合成方法は、m-トリルボロン酸を4-メトキシフェニルボロン酸で置き換えたことを除いて、合成例15と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.22 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.04 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.96 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.88 (dd, J = 11.4, 8.8 Hz, 4H), 5.36 (p, J = 6.9 Hz, 1H), 4.49 (s, 1H), 4.19 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.65 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.60 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.25 (t, J = 7.2 Hz, 3H). ESI-MS m/z 404.2 [M+H].
(S)-2-エチル-4-(1-(4-(4-フルオロフェノキシ)フェニル)エチルアミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
本開示の化合物20を、スキーム1、2および6に従って調製した。合成方法は、m-トリルボロン酸を4-フルオロフェニルボロン酸で置き換えたことを除いて、合成例15と同様であった。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.23 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.08 - 6.89 (m, 7H), 5.43 - 5.33 (m, 1H), 4.41 (s, 1H), 4.20 (s, 2H), 3.66 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.60 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.26 (t, J = 7.3 Hz, 3H). ESI-MS m/z 392.2 [M+H].
(S)-2-エチル-4-((1-(4-(3-フルオロフェノキシ)フェニル)エチル)アミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
本開示の化合物21を、スキーム1、2および6に従って調製した。化合物21の合成および特性決定方法は、m-トリルボロン酸を3-フルオロフェニルボロン酸で置き換えたことを除いて、合成例15と同様であった。
(S)-2-エチル-4-((1-(4-(2-フルオロフェノキシ)フェニル)エチル)アミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
本開示の化合物22を、スキーム1、2および6に従って調製した。化合物22の合成および特性決定方法は、m-トリルボロン酸を2-フルオロフェニルボロン酸で置き換えたことを除いて、合成例15と同様であった。
(S)-2-エチル-4-((1-(3-フルオロ-4-フェノキシフェニル)エチル)アミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
本開示の化合物23を、スキーム1、2および6に従って調製した。化合物23の合成および特性決定方法は、1-(4-ヒドロキシフェニル)エタノンを1-(3-フルオロ-4-ヒドロキシフェニル)エタノンで置き換え、かつm-トリルボロン酸をフェニルボロン酸で置き換えたことを除いて、合成例15と同様であった。
(S)-2-エチル-4-((1-(3-フルオロ-4-(p-トリルオキシ)フェニル)エチル)アミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
本開示の化合物24を、スキーム1、2および6に従って調製した。化合物24の合成および特性決定方法は、1-(4-ヒドロキシフェニル)エタノンを1-(3-フルオロ-4-ヒドロキシフェニル)エタノンで置き換え、かつm-トリルボロン酸をp-トリルボロン酸で置き換えたことを除いて、合成例15と同様であった。
(S)-2-エチル-4-((1-(6-(p-トリルオキシ)ピリジン-3-イル)エチル)アミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
本開示の化合物25を、スキーム1、3および6に従って調製した。
1-(6-(p-トリルオキシ)ピリジン-3-イル)エタノン
1-(6-クロロピリジン-3-イル)エタノン(2.00g、12.85mmol)のトルエン(20mL)中溶液に、p-クレゾール(2.09g、19.28mmol)、CuI(450mg、2.57mmol)およびCs2CO3(8.38g、25.71mmol)を添加した。反応混合物を5時間加熱還流した。TLCによって、反応が完了したことが示された。固形物をろ過によって除去し、トルエン(5mL)で洗浄した。ろ液を飽和NaHCO3水性溶液(15mL)および食塩水(15mL)で洗浄した。分離した有機層を濃縮し、粗製生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=6:1で溶離させた)で精製し、所望の生成物を白色固形物として得た(1.80g、収率61.6%)。
(Rs)-2-メチル-N-(1-(6-(p-トリルオキシ)ピリジン-3-イル)エチリデン)プロパン-2-スルフィンアミド
1-(6-(p-トリルオキシ)ピリジン-3-イル)エタノン(1.50g、6.60mmol)のTHF(20mL)中溶液に、(R)-(+)-2-メチル-2-プロパンスルフィンアミド(1.20g、9.90mmol)およびTi(OEt)4(4.52g、19.80mmol)を添加した。反応混合物を16時間加熱還流した。TLCによって、出発材料が消費されたことが示された。それを周囲温度に冷却し、次いで水性飽和NaCl溶液(50mL)に注ぎ入れた。得られた固形物をろ過によって除去し、酢酸エチル(10mL)で洗浄した。そして、ろ液を酢酸エチル(40mL)で抽出した。分離した有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮し、粗製生成物を得(1.70g、収率77.9%)、それをさらに精製することなく次のステップで使用した。
(Rs)-2-メチル-N-((S)-1-(6-(p-トリルオキシ)ピリジン-3-イル)エチル)プロパン-2-スルフィンアミド
(Rs)-2-メチル-N-(1-(6-(p-トリルオキシ)ピリジン-3-イル)エチリデン)プロパン-2-スルフィンアミド(800mg、2.42mmol)および無水THF(10mL)の混合物を-50℃に冷却し、L-セレクトリド(1M、4.6ml、4.60mmol)を混合物へ、N2下、-50℃で撹拌しながら滴下した。混合物を1時間撹拌し、次いで周囲温度に加温した。完了時に、反応生成物を水(50mL)でクエンチし、酢酸エチル(60mL)で抽出した。分離した有機層を真空中で濃縮した。粗製生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=1:10で溶離させた)で精製し、所望の生成物を黄色固形物として得た(500mg、収率62.1%)。
(S)-1-(6-(p-トリルオキシ)ピリジン-3-イル)エタンアミン二塩酸塩
(Rs)-2-メチル-N-((S)-1-(6-(p-トリルオキシ)ピリジン-3-イル)エチル)プロパン-2-スルフィンアミド(450mg、1.35mmol)のMeOH(5mL)中溶液に、HCl/MeOH(4M、3.4mL、13.50mmol)を添加した。添加後、それを周囲温度で16時間撹拌した。MeOHを真空下で除去した。酢酸エチル(10mL)を残渣に添加し、30分間撹拌した。酢酸エチルを真空下で除去し、次いでMTBE(10mL)を残渣に添加し、1時間撹拌した。生成物をろ過によって収集し、MTBE(5mL)で洗浄し、真空中で乾燥し、所望の生成物をオフホワイト色固形物として得た(310mg、収率76.0%)。
(S)-2-エチル-4-((1-(6-(p-トリルオキシ)ピリジン-3-イル)エチル)アミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
4-クロロ-2-エチル-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン(120mg、0.61mmol)のエチレングリコール(10mL)中溶液に、(S)-1-(4-(p-トリルオキシ)フェニル)エタンアミン塩酸塩(276mg、0.92mmol)およびTEA(247mg、2.44mmol)を添加した。反応混合物を150℃に加熱し、5時間撹拌した。それを周囲温度に冷却し、水30mLで希釈し、酢酸エチル(20mL×2)で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。粗製生成物を、分取TLC(DCM:MeOH=20:1)で精製し、化合物25を白色固形物として得(60mg、25.3%)、それをNMRおよびMSによってさらに特性決定した。
(S)-2-エチル-4-((1-(4-((4-メチルピペラジン-1-イル)メチル)フェニル)エチル)アミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
本開示の化合物26を、スキーム1、4および6に従って調製した。
1-(4-((4-メチルピペラジン-1-イル)メチル)フェニル)エタノン
1-(4-(ブロモメチル)フェニル)エタノン(5.00g、23.47mmol)のトルエン(50mL)中溶液に、1-メチルピペラジン(2.35g、23.47mmol)およびK2CO3(3.89g、28.16mmol)を添加した。添加後、それを70℃で3時間加熱した。TLCによって、反応が完了したことが示された。固形物をろ過によって除去し、トルエン(5mL)で洗浄した。ろ液を真空中で濃縮し、粗製生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=3:1で溶離させた)で精製し、所望の生成物を淡黄色油状物として得た(2.80g、収率51.4%)。
(Rs)-2-メチル-N-(1-(4-((4-メチルピペラジン-1-イル)メチル)フェニル)エチリデン)プロパン-2-スルフィンアミド
1-(4-((4-メチルピペラジン-1-イル)メチル)フェニル)エタノン(1.50g、6.46mmol)のTHF(20mL)中溶液に、(R)-(+)-2-メチル-2-プロパンスルフィンアミド(1.17g、9.68mmol)およびTi(OEt)4(4.42g、19.37mmol)を添加した。反応混合物を16時間加熱還流した。TLCによって、出発材料が消費されたことが示された。それを周囲温度に冷却し、次いで水性飽和NaCl溶液(50mL)に注ぎ入れた。得られた固形物をろ過によって除去し、酢酸エチル(10mL)で洗浄した。そして、ろ液を酢酸エチル(40mL)で抽出した。分離した有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮し、粗製生成物を得(1.70g、収率78.5%)、それをさらに精製することなく次のステップで使用した。
(Rs)-2-メチル-N-((S)-1-(4-((4-メチルピペラジン-1-イル)メチル)フェニル)エチル)プロパン-2-スルフィンアミド
(Rs)-2-メチル-N-(1-(4-((4-メチルピペラジン-1-イル)メチル)フェニル)エチリデン)プロパン-2-スルフィンアミド(800mg 2.38mmol)および無水THF(10mL)の混合物を-50℃に冷却し、L-セレクトリド(1M、4.8ml、4.76mmol)を混合物へN2下、-50℃で撹拌しながら滴下した。混合物を1時間撹拌し、次いで周囲温度に加温した。完了時に、反応生成物を水(50mL)でクエンチし、酢酸エチル(60mL)で抽出した。分離した有機層を真空中で濃縮した。粗製生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(DCM:MeOH=20:1で溶離させた)で精製し、所望の生成物を黄色固形物として得た(550mg、収率68.3%)。
(S)-1-(4-((4-メチルピペラジン-1-イル)メチル)フェニル)エタンアミン三塩酸塩
(Rs)-2-メチル-N-((S)-1-(4-((4-メチルピペラジン-1-イル)メチル)フェニル)エチル)プロパン-2-スルフィンアミド(450mg、1.33mmol)のMeOH(5mL)中溶液に、HCl/MeOH(4M、3.3mL、13.30mmol)を添加した。添加後、それを周囲温度で16時間撹拌した。MeOHを真空下で除去した。酢酸エチル(10mL)を残渣に添加し、30分間撹拌した。酢酸エチルを真空下で除去し、次いでMTBE(10mL)を残渣に添加し、1時間撹拌した。生成物をろ過によって収集し、MTBE(5mL)で洗浄し、真空中で乾燥し、所望の生成物をオフホワイト色固形物として得た(350mg、収率76.6%)。
(S)-2-エチル-4-((1-(4-((4-メチルピペラジン-1-イル)メチル)フェニル)エチル)アミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
4-クロロ-2-エチル-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン(120mg、0.61mmol)のエチレングリコール(10mL)中溶液に、(S)-1-(4-((4-メチルピペラジン-1-イル)メチル)フェニル)エタンアミン三塩酸塩(314mg、0.92mmol)およびTEA(247mg、2.44mmol)を添加した。反応混合物を150℃に加熱し、5時間撹拌した。それを周囲温度に冷却し、水30mLで希釈し、酢酸エチル(20mL×2)で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。粗製生成物を、分取TLC(DCM:MeOH=20:1)で精製し、化合物26を白色固形物として得(52mg、収率21.7%)、それをNMRおよびMSによってさらに特性決定した。
(S)-2-エチル-4-((1-(1-(4-フルオロフェニル)-1H-ピラゾール-3-イル)エチル)アミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
本開示の化合物27を、スキーム1、5および6に従って調製した。
1-(1-(4-フルオロフェニル)-1H-ピラゾール-3-イル)エタノン
1-(1H-ピラゾール-3-イル)エタノン(5.00g、45.41mmol)のDCM(50mL)中溶液に、(4-フルオロフェニル)ボロン酸(9.53g、68.11mmol)、Cu(OAc)2(16.50g、90.82mmol)およびTEA(22.97g、227.04mmol)を添加した。添加後、混合物を周囲温度で12時間撹拌した。TLCによって、1-(1H-ピラゾール-3-イル)エタノンが消費されたことが示された。固形物をろ過によって除去し、DCM(20mL)で洗浄し、ろ液を水(50mL)で洗浄した。分離した有機層を真空中で濃縮し、粗製生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=5:1で溶離させた)で精製し、所望の生成物を淡黄色固形物として得た(3.1g、収率33.4%)。
(Rs)-N-(1-(1-(4-フルオロフェニル)-1H-ピラゾール-3-イル)エチリデン)-2-メチルプロパン-2-スルフィンアミド
1-(1-(4-フルオロフェニル)-1H-ピラゾール-3-イル)エタノン(1.50g、7.35mmol)のTHF(20mL)中溶液に、(R)-(+)-2-メチル-2-プロパンスルフィンアミド(1.34g、11.02mmol)およびTi(OEt)4(5.03g、22.04mmol)を添加した。反応混合物を16時間加熱還流した。TLCによって、出発材料が消費されたことが示された。それを周囲温度に冷却し、次いで水性飽和NaCl溶液(50mL)に注ぎ入れた。得られた固形物をろ過によって除去し、酢酸エチル(10mL)で洗浄した。そして、ろ液を酢酸エチル(40mL)で抽出した。分離した有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮し、粗製生成物を得(1.90g、収率84.2%)、それをさらに精製することなく次のステップで使用した。
(Rs)-N-((S)-1-(1-(4-フルオロフェニル)-1H-ピラゾール-3-イル)エチル)-2-メチルプロパン-2-スルフィンアミド
(Rs)-N-(1-(1-(4-フルオロフェニル)-1H-ピラゾール-3-イル)エチリデン)-2-メチルプロパン-2-スルフィンアミド(800mg 2.60mmol)および無水THF(10mL)の混合物を-50℃に冷却し、L-セレクトリド(1M、5.2mL、5.20mmol)を混合物に、N2下、-50℃で、撹拌しながら滴下した。混合物を1時間撹拌し、次いで周囲温度に加温した。完了時に、反応生成物を水(50mL)でクエンチし、酢酸エチル(60mL)で抽出した。分離した有機層を真空中で濃縮した。粗製生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=1:15で溶離させた)で精製し、所望の生成物を黄色固形物として得た(360mg、収率44.7%)。
(S)-1-(1-(4-フルオロフェニル)-1H-ピラゾール-3-イル)エタンアミン塩酸塩
(Rs)-N-((S)-1-(1-(4-フルオロフェニル)-1H-ピラゾール-3-イル)エチル)-2-メチルプロパン-2-スルフィンアミド(360mg、1.16mmol)のMeOH(5mL)中溶液に、HCl/MeOH(4M、2.9mL、11.60mmol)を添加した。添加後、それを周囲温度で16時間撹拌した。MeOHを真空下で除去した。酢酸エチル(10mL)を残渣に添加し、30分間撹拌した。酢酸エチルを真空下で除去し、次いでMTBE(10mL)を残渣に添加し、1時間撹拌した。生成物をろ過によって収集し、MTBE(5mL)で洗浄し、真空中で乾燥し、所望の生成物をオフホワイト色固形物として得た(240mg、収率85.3%)。
(S)-2-エチル-4-((1-(1-(4-フルオロフェニル)-1H-ピラゾール-3-イル)エチル)アミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
4-クロロ-2-エチル-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン(120mg、0.61mmol)のエチレングリコール(10mL)中溶液に、(S)-1-(1-(4-フルオロフェニル)-1H-ピラゾール-3-イル)エタンアミン塩酸塩(221mg、0.92mmol)およびTEA(185mg、1.83mmol)を添加した。反応混合物を150℃に加熱し、5時間撹拌した。それを周囲温度に冷却し、水30mLで希釈し、酢酸エチル(20mL×2)で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。粗製生成物を、分取TLC(DCM:MeOH=20:1)で精製し、化合物27を白色固形物として得(40mg、17.9%)、それをNMRおよびMSによってさらに特性決定した。
(S)-N-シクロヘキシル-4-(1-((2-エチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-4-イル)アミノ)エチル)ベンズアミド
化合物12から出発し、本開示の化合物28を、スキーム7に従って調製した。合成および特性決定方法は、アニリンをシクロヘキシルアミンで置き換えたことを除いて、合成例13と同様であった。
(S)-N-シクロヘキシル-4-(1-((2-エチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-4-イル)アミノ)エチル)-2-フルオロベンズアミド
本開示の化合物29を、スキーム1、6および7に従って調製した。化合物29を調製するための出発化合物(スキーム7に示す1026と同様である)を、(S)-1-(4-ブロモフェニル)エタンアミンを(S)-エチル-2-フルオロ-4-((1-アミノ)エチル)-ベンゾエートで置き換えたことを除いて、合成例1のように合成した。得られた出発化合物を使用して、化合物29を、アニリンをシクロヘキシルアミンで置き換えたことを除いて、合成例13のように調製し、NMRおよびMSによってさらに特性決定した。
(S)-2-メチル-4-((1-(4-(p-トリルオキシ)フェニル)エチル)アミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
本開示の化合物30を、スキーム1、2および6に従って調製した。合成方法は、m-トリルボロン酸をp-トリルボロン酸で置き換え、かつ4-クロロ-2-エチル-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オンを4-クロロ-2-メチル-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オンで置き換えたことを除いて、合成例15と同様であり、4-クロロ-2-メチル-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オンは、エタンアミン塩酸塩をメチルアミンで置き換えたことを除いて合成例1のように得た。化合物30を、NMRおよびMSによってさらに特性決定した。
本開示の化合物31を、スキーム1、2および6に従って調製した。合成方法は、m-トリルボロン酸をp-トリルボロン酸で置き換え、かつ4-クロロ-2-エチル-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オンを4-クロロ-2-イソプロピル-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オンで置き換えたことを除いて、合成例15と同様であり、4-クロロ-2-イソプロピル-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オンは、エタンアミン塩酸塩をイソプロピルアミンで置き換えたことを除いて、合成例1のように得た。化合物31をNMRおよびMSによってさらに特性決定した。
(S)-2-(2-ヒドロキシエチル)-4-((1-(4-(p-トリルオキシ)フェニル)エチル)アミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
本開示の化合物32を、スキーム1、2および6に従って調製した。合成方法は、m-トリルボロン酸をp-トリルボロン酸で置き換え、かつ4-クロロ-2-エチル-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オンを4-クロロ-2-(2-ヒドロキシエチル)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オンで置き換えたことを除いて、合成例15と同様であり、4-クロロ-2-(2-ヒドロキシエチル)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オンは、エタンアミン塩酸塩を2-ヒドロキシエタンアミンで置き換えたことを除いて、合成例1のように得た。化合物32をNMRおよびMSによってさらに特性決定した。
(S)-2-ベンジル-4-((1-(4-(p-トリルオキシ)フェニル)エチル)アミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
本開示の化合物33を、スキーム1、2および6に従って調製した。合成方法は、m-トリルボロン酸をp-トリルボロン酸で置き換え、かつ4-クロロ-2-エチル-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オンを4-クロロ-2-ベンジル-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オンで置き換えたことを除いて、合成例15と同様であり、4-クロロ-2-ベンジル-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オンは、エタンアミン塩酸塩をベンジルアミンで置き換えたことを除いて、合成例1のように得た。化合物33を、NMRおよびMSによってさらに特性決定した。
(S)-2-フェネチル-4-((1-(4-(p-トリルオキシ)フェニル)エチル)アミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
本開示の化合物34を、スキーム1、2および6に従って調製した。合成方法は、m-トリルボロン酸をp-トリルボロン酸で置き換え、かつ4-クロロ-2-エチル-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オンを4-クロロ-2-フェネチル-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オンで置き換えたことを除いて、合成例15と同様であり、4-クロロ-2-フェネチル-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オンは、エタンアミン塩酸塩をフェネチルアミンで置き換えたことを除いて、合成例1のように得た。化合物34をNMRおよびMSによってさらに特性決定した。
(S)-6-アミノ-2-エチル-4-((1-(4-(p-トリルオキシ)フェニル)エチル)アミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
本開示の化合物35を、スキーム1、2、6および9に従って調製した。
メチル3-(ブロモメチル)-2,6-ジクロロイソニコチネート
メチル2,6-ジクロロ-3-メチルイソニコチネート(10.00g、45.44mmol)のCCl4(100mL)中溶液に、NBS(8.90g、49.99mmol)およびBPO(550mg、2.27mmol)を添加した。添加後、反応混合物を4時間加熱還流した。TLCによって、出発材料が消費されたことが示された。次いで、それを周囲温度に冷却し、得られた沈殿物をろ過によって除去し、CCl4(10mL)で洗浄した。ろ液を真空中で濃縮し、粗製生成物を黄色固形物として得、それをさらに精製することなく次のステップで使用した。
4,6-ジクロロ-2-エチル-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
上記粗製生成物をTHF(100mL)中に溶解した。エタンアミン塩酸塩(3.71g、45.44mmol)およびCs2CO3(59.23g、181.77mmol)を反応混合物に添加した。それを周囲温度で12時間撹拌した。TLCによって、出発材料が消費されたことが示された。固形物をろ過によって除去し、酢酸エチル(15mL)で洗浄し、ろ液を真空中で濃縮した。粗製生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=2:1で溶離させた)で精製し、所望の生成物を淡黄色固形物として得た(5.40g、収率51.4%、2ステップで)。
(S)-6-クロロ-2-エチル-4-((1-(4-(p-トリルオキシ)フェニル)エチル)アミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
4,6-ジクロロ-2-エチル-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン(4.00g、17.31mmol)のエチレングリコール(40mL)中溶液に、(S)-1-(4-(p-トリルオキシ)フェニル)エタンアミン(5.12g、22.50mmol)およびTEA(2.63g、25.97mmol)を添加した。反応混合物を150℃に加熱し、7時間撹拌した。それを周囲温度に冷却し、水80mLで希釈し、酢酸エチル(100mL×2)で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。粗製生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(DCM:MeOH=30:1で溶離させた)で精製し、所望の生成物を得た(3.20g、収率43.8%)。
(S)-tert-ブチル(2-エチル-1-オキソ-4-((1-(4-(p-トリルオキシ)フェニル)エチル)アミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-6-イル)カルバメート
(S)-6-クロロ-2-エチル-4-((1-(4-(p-トリルオキシ)フェニル)エチル)アミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン(2.00g、4.74mmol)のジオキサン(20mL)中溶液に、tert-ブチルカルバメート(1.11g、9.50mmol)、t-BuOK(1.42g、12.67mmol)、Pd(PPh3)4(548mg、0.47mmol)およびX-phos(226mg、0.47mmol)を添加した。それをN2雰囲気下、80℃で5時間加熱した。TLCによって、反応が完了したことが示された。溶媒を真空中で濃縮することによって除去し、残渣をDCM(150mL)中に溶解し、水(100mL×2)および食塩水(100mL)で洗浄した。分離した有機層を濃縮し、粗製生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(DCM:MeOH=30:1で溶離させた)で精製し、所望の生成物を黄色固形物として得た(1.50g、収率63.0%)。
(S)-6-アミノ-2-エチル-4-((1-(4-(p-トリルオキシ)フェニル)エチル)アミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-1-オン
(S)-tert-ブチル(2-エチル-1-オキソ-4-((1-(4-(p-トリルオキシ)フェニル)エチル)アミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-6-イル)カルバメート(1.00g、1.99mmol)のMeOH(15mL)中溶液に、HCl/MeOH(4M、5.0mL、19.90mmol)を添加した。それを周囲温度で5時間撹拌した。溶媒を真空中で濃縮し、粗製生成物をDCM(50mL)中に溶解し、飽和NaHCO3水性溶液(30mL)および食塩水(30mL)で洗浄した。分離した有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮し、化合物35を白色固形物として得(530mg、収率66.2%)、それをNMRおよびMSによってさらに特性決定した。
(S)-N-(2-エチル-1-オキソ-4-((1-(4-(p-トリルオキシ)フェニル)エチル)アミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-6-イル)アセトアミド
化合物35から出発し、本開示の化合物36を、スキーム10に従って調製した。
(S)-2-エチル-1-オキソ-4-((1-(4-(p-トリルオキシ)フェニル)エチル)アミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-7-カルボン酸
本開示の化合物37を、スキーム1、2、6および11に従って調製した。
ジメチル5-(ブロモメチル)-6-クロロピリジン-3,4-ジカルボキシレート
ジメチル6-クロロ-5-メチルピリジン-3,4-ジカルボキシレート(5.00g、20.52mmol)のCCl4(30mL)中溶液に、NBS(4.02g、22.57mmol)およびBPO(249mg、1.03mmol)を添加した。添加後、反応混合物を3時間加熱還流した。TLCによって、出発材料が消費されたことが示された。次いで、それを周囲温度に冷却し、得られた沈殿物をろ過によって除去し、CCl4(5mL)で洗浄した。ろ液を真空中で濃縮し、粗製生成物を黄色固形物として得、それをさらに精製することなく次のステップで使用した。
メチル4-クロロ-2-エチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-7-カルボキシレート
上記粗製生成物をTHF(150mL)中に溶解した。エタンアミン塩酸塩(1.67g、20.52mmol)およびCs2CO3(26.75g、82.09mmol)を反応混合物に添加した。それを周囲温度で12時間撹拌した。TLCによって、出発材料が消費されたことが示された。固形物をろ過によって除去し、酢酸エチル(10mL)で洗浄し、ろ液を真空中で濃縮した。粗製生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=2:1で溶離させた)で精製し、所望の生成物を淡黄色固形物として得た(3.20g、収率61.2%、2ステップで)。
(S)-メチル2-エチル-1-オキソ-4-((1-(4-(p-トリルオキシ)フェニル)エチル)アミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-7-カルボキシレート
メチル4-クロロ-2-エチル-1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-7-カルボキシレート(1.10g、4.32mmol)のエチレングリコール(20mL)中溶液に、(S)-1-(4-(p-トリルオキシ)フェニル)エタンアミン塩酸塩(1.71g、6.48mmol)およびTEA(874mg、8.64mmol)を添加した。反応混合物を150℃に加熱し、5時間撹拌した。それを周囲温度に冷却し、水50mLで希釈し、酢酸エチル(80mL×2)で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。粗製生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(DCM:MeOH=20:1で溶離させた)で精製し、所望の生成物を白色固形物として得た(1.20g、収率62.4%)。
(S)-2-エチル-1-オキソ-4-((1-(4-(p-トリルオキシ)フェニル)エチル)アミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-7-カルボン酸
(S)-メチル2-エチル-1-オキソ-4-((1-(4-(p-トリルオキシ)フェニル)エチル)アミノ)-2,3-ジヒドロ-1H-ピロロ[3,4-c]ピリジン-7-カルボキシレート(300mg、0.67mmol)を溶解させたTHF(15mL)中溶液に、NaOH(54mg、1.35mmol)の水(5mL)中溶液を添加した。添加後、それを周囲温度で5時間撹拌した。TLCによって、反応が完了したことが示された。有機溶媒を真空中で濃縮することによって除去し、残渣を水(10mL)で希釈し、MTBE(8mL)を混合物に添加し、10分間撹拌した。次いで有機層を抽出することによって除去し、水性層を、2N HCl水性溶液を添加することによってpH7に酸性化した。得られた沈殿物をろ過によって収集し、水(5mL)で洗浄し、真空中で乾燥し、化合物37を白色固形物として得(90mg、収率31.0%)、それをNMRおよびMSによってさらに特性決定した。
試験1:野生型および変異体IDHタンパク質の精製
IDH1タンパク質の精製
本開示は、大腸菌(E.coli)における変異体および野生型組換えIDH1タンパク質を精製する方法を提供する。
IDH2タンパク質は、そのN-末端ミトコンドリア標的化シグナルのため、不溶性であり、かつ大腸菌から精製することができない。本開示は、昆虫細胞におけるバキュロウイルスを利用することによって、IDH2タンパク質を発現させ、精製する新規な方法を提供する。その同じ技術を使用して、IDH1(R132)変異体と類似しているヒトIDH2(R172KまたはR172S)変異体も発現させ、精製することができる。
マウス、ラット、イヌ、サルおよびヒトの肝ミクロソームを、Corning Inc.から購入し、使用前は-60℃で保管した。アセトニトリルおよびNADPHは、Honeywell International Inc.(New Jersey、U.S.)およびRoche Inc.(Basel、Swiss)から購入した。ミダゾラムは陽性対照として使用し、かつNational Institutes for Food and Drug Control(Beijing、China)から購入した。
k=-傾き
T1/2=0.693/k
CLint=k/Cタンパク質
[式中、Cタンパク質(mg・mL-1)は、インキュベート系中のミクロソームタンパク質濃度である]。
ブランク雄/雌マウス血漿は、3D BioOptima(Suzhou、China)より提供され、使用前に新たに採取した。アセトニトリルは、Honeywell International Inc.(New Jersey、U.S.)から購入した。
本開示の化合物の薬物動態特性を、ICRマウス(雄、6~8週齢、20.0~25.3g)において、p.o.およびi.v.投与後に評価した。
用量体積(mL)=[名目用量(mg・kg-1)/用量濃度(mg・mL-1)]×動物体重(kg)
本開示は、IDH酵素活性を直接検出することによって、化合物のIDH阻害および選択性を検出するための生化学的アッセイ方法を提供する。
溶液Aを、1Mトリス-HCl pH7.5(300μL)、5M NaCl(450μL)、1M MgCl2(150μL)、1M DTT(15μL)、20mg/mL BSA(37.5μL)、50mM NADP(20μL)、80mMイソシトレート(20μL)、100mMレザズリン(20μL)および0.1単位/μLジアフォラーゼ(50μL)を合わせ、続いて、脱イオン水を添加し、最終体積を15mLとすることによって調製した。
溶液Aを、1Mトリス-HCl pH7.5(300μL)、5M NaCl(450μL)、1M MgCl2(150μL)、1M DTT(15μL)、20mg/mL BSA(37.5μL)、20mM NADPH(20μL)、および0.5mM α-KG(40μL)を合わせ、続いて、脱イオン水を添加し、最終体積を15mLとすることによって調製した。
本開示はまた、内因性ヘテロ接合IDH1 R132CおよびR132H変異をそれぞれ保持し、かつD-2-HGを蓄積する、ヒト線維肉腫細胞株HT1080および胆管細胞癌細胞株HCCC9810において、化合物のIDH阻害および選択性をアッセイするための細胞ベースの方法を提供する。腫瘍由来のIDH変異体は、α-KGを産生するその正常な活性を損失しており、かつD-2-HGを産生する新規の活性を獲得している。D-2-HGは、IDH変異腫瘍試料で特に高く認められる代謝産物である。正常な組織におけるその濃度はごくわずかであり、かつ正常な組織において知られている生理学的機能を有さない。変異体IDH1およびIDH2は、正常な細胞における機能を有さない新規の触媒活性を獲得するために、その結果として、変異体IDH酵素の阻害剤は、変異体IDHを発現している腫瘍細胞の成長を効果的に阻害するが、正常な細胞の成長に影響を与えないであろう。したがって、本方法を使用し、変異体IDHを有する細胞に高い特異性を有し、かつ正常な細胞に低い毒性を有する化合物をスクリーニングすることができる。
本開示はまた、HT1080およびHCCC9810細胞におけるD-2-HG脱水素酵素の安定な過剰発現に関与する化合物の、IDH阻害および選択性に関する改善された細胞ベースのアッセイを提供する。
足場非依存性細胞成長ががん細胞の基本的な特性であることは、十分に確立されている。足場非依存性成長の能力は、in vivoでの腫瘍細胞の腫瘍形成能および転移能と密接に関連する。
先行研究では、変異体IDH R132Cを阻害すると、HT1080の腫瘍成長を抑制できるであろうことが異種移植実験によって示されている[「D-2-hydroxyglutarate is essential for maintaining oncogenic property of mutant IDH-containing cancer cells but dispensable for cell growth」、Ma,S.ら、Oncotarget、(2015年)]。患者由来異種移植マウス(PDX)モデルを、腫瘍阻害における化合物の活性を測定するための、好都合なかつ有益なin vivoアッセイとして本明細書において使用する。最初の実験として、IDH1変異体神経膠腫PDXモデルを、IDH1 R132H変異を有するBt142神経膠腫脳幹細胞株から確立する[「An in vivo patient-derived model of endogenous IDH1-mutant glioma」、Luchman,H.A.ら、Neuro Oncol、(2012年)]。このマウスモデルを使用し、IDH1 R132H変異を有する神経膠腫の抑制における本開示の化合物の有効性を試験する。本開示の化合物は、異種移植モデルにおいてIDH1 R132H変異を保持する腫瘍の成長を阻害する。
pSJ3-IDH1-R132H、pSJ3-IDH1-R132C、およびpSJ3-IDH1-WTプラスミドを、BL21株にそれぞれ形質転換した。IDH1 WT/R132H/R132Cタンパク質を、生物学的評価の項の試験1で開示された方法に従って、誘発し、精製した。各精製タンパク質に関する濃度をブラッドフォードアッセイによって判定した。図3は、IDH1-R132H、IDH1-R132C、およびIDH1-WTタンパク質それぞれに関するクーマシー染色を示し、タンパク質の発現および精製が成功したことを証明する。
2.1 肝ミクロソームにおける代謝安定性
本研究において、化合物の代謝安定性を、生物学的評価の項の試験2で開示された方法に従って、マウス、ラット、イヌ、サルおよびヒトの肝ミクロソームで評価した。ミダゾラムを陽性対照として使用した。
本研究において、マウス血漿における化合物の代謝安定性を、生物学的評価の項の試験3で開示された方法に従って評価した。
化合物の薬物動態(PK)研究を、生物学的評価の項の試験4で開示された方法に従って、10mg・kg-1単回p.o.用量または2mg・kg-1の単回i.v.用量が投与されたICRマウス(雄、6~8週齢、20.0~25.3g、Vital River Laboratory Technology Co.,Ltd.)において行った。
化合物のIDH阻害活性を、生物学的評価の項の試験5に従って評価した。各化合物の変異体IDH1 R132H/R132C阻害に関する試験を3回繰り返して行った。IDH1 R132Hに関しては、例示的化合物16、21、22、23、24および31の酵素活性を、図8A~図8C、図9A~図9C、図10A~図10C、図11A~図11C、図12A~図12Cおよび図13A~図13Cの化合物の濃度の対数の関数としてそれぞれプロットする。IDH1 R132Hに対する化合物16、21、22、23、24および31のIC50値は1.0μM未満である。IDH1 R132Cに関しては、例示的化合物16、21、22、23、24および31の酵素活性を、図14A~図14C、図15A~図15C、図16A~図16C、図17A~図17C、図18A~図18Cおよび図19A~図19Cの化合物の濃度の対数の関数としてそれぞれプロットする。IDH1 R132Cに対する化合物16、21、22、23、24および31のIC50値は1.5μM未満である。IDH1 R132Cに対する化合物のIC50値を表9に示す。
HT1080細胞を35mmプレートで培養し、10μMの各化合物1~37で12時間処置し、D-2-HG濃度を、生物学的評価の項の試験6で開示された方法に従って分析した。いくつかの化合物で処置した後のD-2-HG濃度を図20に示した。
HT1080細胞を35mmプレートで培養し、指数成長期で回収し、生物学的評価の項の試験8の記載に従って軟寒天で使用する。本開示の化合物は、IDH-変異体がん細胞の足場非依存性成長を阻害する。
生物学的評価の項の試験9の記載に従って動物試験を行う。本開示の化合物は、PDXモデルにおいてIDH1 R132H変異を保持している腫瘍の成長を阻害する。
Claims (12)
- 式(Ia)に示す化学構造を有する化合物:
または薬学的に許容されるその塩、水和物、もしくは溶媒和物である、化合物
[式中、
Wは、直鎖状または分岐状C1~6アルキレンであり;
Xは、C6~12アリールであり;
Yは、ハロ、シアノ、C1~12アルキル、C6~12アリール、C1~12アルコキシル、C6~12アリールオキシル、3~10員飽和もしくは不飽和シクロアルキル、3~10員飽和もしくは不飽和ヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、-C(O)ORb、-C(O)NRcRdであり、これらは、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、C1~12アルキル、C2~12アルケニル、C2~12アルキニル、C 1~12アルコキシのうちの1つまたは複数によって一置換または独立に多置換されていてもよく;
R1は、C1~12アルキル、3~10員飽和もしくは不飽和シクロアルキル、アラルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、またはアルコキシアラルキルであり;
R2は、水素、-NRgRh、-C(O)ORb、または-C(O)NRcRdであり;
Ra、Rb、Rc、Rd、Re、Rf、RgおよびRhは、独立に、水素、C1~12アルキル、3~10員飽和または不飽和シクロアルキル、C6~12アリールから選択され、これらは、ハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、C1~12アルキル、C2~12アルケニル、C2~12アルキニル、C5~10アリール、C1~12アルコキシ、3~10員飽和または不飽和シクロアルキル、3~10員ヘテロシクロアルキル、または3~10員ヘテロアリール、C5~10アリールオキシルによって一置換または独立に多置換されていてもよく;
RcおよびRdは、これらが結合している窒素原子と一緒になって、N、S、およびOから選択される1つまたは複数の追加のヘテロ原子を含んでいてもよい4~8員ヘテロシクリルを形成していてもよく、
RgおよびRhは、これらが結合している窒素原子と一緒になって、N、S、およびOから選択される1つまたは複数の追加のヘテロ原子を含んでいてもよい4~8員ヘテロシクリルを形成していてもよく;
nは、0である]。 - Raが水素である、請求項1に記載の化合物。
- Wが分岐状C1~3アルキレンである、請求項1に記載の化合物。
- Xが、フェニルである、請求項3に記載の化合物。
- (R)-立体配置、(S)-立体配置またはこれらの混合を有する請求項1から5のいずれか一項に記載の化合物。
- 第1の有効成分としての、請求項1から7のいずれか一項に記載の、1種もしくは複数の化合物、薬学的に許容されるその塩、水和物、溶媒和物または立体異性体と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
- 疾患を処置するための医薬組成物であって、請求項1から7のいずれか一項に記載の1種もしくは複数の化合物、薬学的に許容されるその塩、水和物、溶媒和物または立体異性体の有効量、または請求項8に記載の医薬組成物を対象に投与することを含み、疾患が、α-KGのD-2-HGへの変換と関連する疾患である、前記医薬組成物。
- 疾患ががんである、請求項9に記載の医薬組成物。
- 請求項1から7のいずれか一項に記載の1種もしくは複数の化合物、薬学的に許容されるその塩、水和物、溶媒和物または立体異性体、または請求項8に記載の医薬組成物を使用することによって、α-KGのD-2-HGへの変換を阻害するための医薬組成物。
- 請求項1から7のいずれか一項に記載の1種もしくは複数の化合物、薬学的に許容されるその塩、水和物、溶媒和物または立体異性体、または請求項8に記載の医薬組成物を使用することによって、変異体IDH、野生型IDHまたは両方を阻害するための医薬組成物。
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