JP6978609B2 - 新規なプロモーター及びその用途 - Google Patents
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Description
cj1プロモーター配列を含む組換えベクターの変異ライブラリーの作製
微生物菌株において遺伝子発現を強く誘導するプロモーターを見出すために、強力な活性を示すことが知られている従来のcj1プロモーター(特許文献1)に基づいて変異ライブラリーを作製した。
組換えベクターの緑色蛍光タンパク質(green fluorescent protein, GFP)活性強度の評価
実施例1で作製した組換えベクター変異ライブラリーの活性を評価するために、そのGFP活性を比較した。
cj2.2プロモーターの発現ベクターの作製
実施例2において組換えベクターライブラリーのうちcj2.2プロモーターの活性が最も高いことが確認されたので、それを微生物菌株に導入するために、pCL_Pcj1ベクターを用いて部位特異的突然変異誘発(Site-directed mutagenesis)を行った。
cj2.2プロモーターの活性の測定
実施例4−1:メチオニン変換酵素(O−アセチルホモセリンスルフヒドリラーゼ)の発現量の測定
cj2.2プロモーターの活性及びそれによる遺伝子発現誘導能を確認するために、cj2.2プロモーターにメチオニン変換酵素(O−アセチルホモセリンスルフヒドリラーゼ)を連結してその発現量を確認した。
cj2.2プロモーターの活性及びそれによる遺伝子発現誘導能を確認するために、cj2.2プロモーターにシステイン変換酵素(O−ホスホセリンスルフヒドリラーゼ)を連結してその発現量を確認した。
cj2.2プロモーターで生産した酵素を用いた標的産物の生産
実施例5−1:メチオニンの生産
実施例4−1により、cj2.2プロモーターを用いるとメチオニン変換酵素(O−アセチルホモセリンスルフヒドリラーゼ)の活性が増加することが確認されたので、前記酵素を用いて標的産物であるメチオニンを生産することにより、その活性及び反応器システムにおけるメチオニン生産効率を確認した。
実施例4−2により、cj2.2プロモーターを用いるとシステイン変換酵素(O−ホスホセリンスルフヒドリラーゼ)の活性が増加することが確認されたので、前記酵素を用いて標的産物であるシステインを生産することにより、その活性及び反応器システムにおけるシステイン生産効率を確認した。
Claims (6)
- 配列番号1のポリヌクレオチド配列を含む、プロモーター活性を有するポリヌクレオチド。
- 請求項1に記載のプロモーター活性を有するポリヌクレオチドを含むベクター。
- 前記ベクターは、標的タンパク質をコードする遺伝子を含む、請求項2に記載のベクター。
- 請求項2に記載のベクターが導入され、請求項1に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞。
- 前記宿主細胞は、コリネバクテリウム属又はエシェリキア属に属するバクテリア細胞である、請求項4に記載の宿主細胞。
- 請求項4に記載の宿主細胞を培養するステップと、前記宿主細胞又はそれを培養した培地から標的物質を分離するステップとを含む、標的物質を生産する方法。
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