JP6894026B2 - 生物学的汚染物質を検出するための組成物および方法 - Google Patents
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Description
本出願は、米国特許法第119条(e)の下で、2015年3月27日に提出された米国仮特許出願第62/139,321号の優先権の恩典を主張するものであり、その出願は参照によりその全体が本明細書に具体的に組み入れられる。
本発明は、概して、細胞培養により生物学的分子を製造するプロセスに関する。本発明は、より具体的には、しかしながら排他的にではなく、細胞培養物における生物学的汚染物質を検出するための組成物および方法に関する。
バイオ医薬品、とりわけ治療用抗体は、哺乳動物細胞培養物によって生産される。チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞は、最もよく用いられる宿主細胞である。これらの生産系は、外来性および内因性のウイルス感染を起こしやすく、それは、バイオ医薬品に関する潜在的な安全性の問題を提示する。したがって、薬物の安全性を向上させるために、ウイルスクリアランス手順およびウイルス量測定が用いられる。ウイルス量を低下させるために採用されるステップには、ナノ濾過、熱またはpHの保持によるウイルス不活性化、およびクロマトグラフィーが含まれる。ウイルス量、およびウイルス除去効果は、時間のかかる感染性アッセイによって、またはリアルタイムPCRもしくは定量ポリメラーゼ連鎖反応(Q-PCR)などの迅速な定量アッセイによってモニターされ得る。
の核酸配列を含む。
[本発明1001]
人工ヌクレオチド配列、フルオロフォア、およびクエンチャーを含む組成物であって、該人工ヌクレオチド配列が、その3'末端に、SEQ ID NO:9および12〜37のいずれか1つの配列と同一である連続した5個以下の核酸を含む、組成物。
[本発明1002]
フルオロフォアが、495nm以上680nm以下の範囲内の励起波長、および515nm以上710nm以下の範囲内の発光波長を有するフルオロフォアの群より選択される、本発明1001の組成物。
[本発明1003]
クエンチャーが、430nm以上672nm以下の範囲内に吸収のピークを有する色素の群より選択される、本発明1002の組成物。
[本発明1004]
フルオロフォアが、495nmの励起波長および520nmの発光波長を有する、本発明1001の組成物。
[本発明1005]
フルオロフォアがFAMである、本発明1004の組成物。
[本発明1006]
クエンチャーがBHQ-1である、本発明1005の組成物。
[本発明1007]
フルオロフォアが人工ヌクレオチド配列の5'末端に結合しており、かつクエンチャーが人工ヌクレオチド配列の3'末端に結合している、本発明1001の組成物。
[本発明1008]
人工ヌクレオチド配列が、
の核酸配列を含む、本発明1001の組成物。
[本発明1009]
a.齧歯類パルボウイルス特異的順方向オリゴヌクレオチドプライマー;
b.齧歯類パルボウイルス特異的オリゴヌクレオチド検出プローブ;
c.人工オリゴヌクレオチド検出プローブ;
d.齧歯類パルボウイルス特異的逆方向オリゴヌクレオチドプライマー;
e.M13特異的順方向オリゴヌクレオチドプライマー;
f.M13特異的オリゴヌクレオチド検出プローブ;および
g.M13特異的逆方向オリゴヌクレオチドプライマー
を含む、組成物。
[本発明1010]
a、b、およびdのオリゴヌクレオチド配列がそれぞれ、マウスの微小ウイルスプロトタイプ系統(MVMp)、マウスの微小ウイルス免疫抑制系統(MVMi)、マウスの微小ウイルスCutter系統(MVMc)、マウスパルボウイルス1b(MPV-1b)、マウスパルボウイルス1a(MPV-1a)、マウスパルボウイルス1c(MPV-1c)、ハムスターパルボウイルス(HaPV)、Toolanのパルボウイルス(H-1)、Kilhamラットウイルス(KRV)、ラットパルボウイルス1a、ラット微小ウイルス、およびラットウイルスLのUmass系統(RV-Umass)からなる群より選択される齧歯類パルボウイルスのNS-1配列を含む、本発明1009の組成物。
[本発明1011]
人工オリゴヌクレオチド検出プローブが、その3'末端に、SEQ ID NO:9および12〜37のいずれか1つの配列と同一である連続した5個以下の核酸を有するヌクレオチド配列を含む、本発明1009の組成物。
[本発明1012]
a、b、およびdのオリゴヌクレオチド配列がSEQ ID NO:37にハイブリダイズする、本発明1010の組成物。
[本発明1013]
b、c、およびfの各検出プローブが、各検出プローブに対するフルオロフォアが異なる波長で光を放つようなフルオロフォアおよびクエンチャーを含む、本発明1009の組成物。
[本発明1014]
各プローブのフルオロフォアが、495nm以上680nm以下の範囲内の励起波長、および515nm以上710nm以下の範囲内の発光波長を有するフルオロフォアの群より選択される、本発明1013の組成物。
[本発明1015]
クエンチャーが、430nm以上672nm以下の範囲内に吸収のピークを有する色素の群より選択される、本発明1014の組成物。
[本発明1016]
人工オリゴヌクレオチド検出プローブ(c)が、フルオロフォアFAMおよびクエンチャーBHQ-1を含み;齧歯類パルボウイルス特異的オリゴヌクレオチド検出プローブ(b)が、フルオロフォアVICおよび副溝結合非蛍光性クエンチャー(MGBNFQ)を含み;かつM13特異的オリゴヌクレオチド検出プローブが、フルオロフォアCy5およびクエンチャーBHQ2を含む、本発明1013の組成物。
[本発明1017]
齧歯類パルボウイルス特異的順方向オリゴヌクレオチドプライマー(a)が、SEQ ID NO:1の核酸配列を含み;齧歯類パルボウイルス特異的逆方向オリゴヌクレオチドプライマー(d)が、SEQ ID NO:4の核酸配列を含み;かつ齧歯類パルボウイルス特異的オリゴヌクレオチド検出プローブ(b)が、SEQ ID NO:2の核酸配列を含む、本発明1012の組成物。
[本発明1018]
人工オリゴヌクレオチド検出プローブ(c)が、SEQ ID NO:3の核酸配列を含む、本発明1011の組成物。
[本発明1019]
M13特異的順方向オリゴヌクレオチドプライマー(e)が、SEQ ID NO:5の核酸配列を含み;M13特異的オリゴヌクレオチド検出プローブ(f)が、SEQ ID NO:6の核酸配列を含み;かつM13特異的逆方向オリゴヌクレオチドプライマー(g)が、SEQ ID NO:7の核酸配列を含む、本発明1009の組成物。
[本発明1020]
a.反応混合物を作製するために複数の成分を混合する段階であって、該成分が、(i)試験サンプルに由来する核酸サンプル、(ii)オリゴヌクレオチド、および(iii)DNAポリメラーゼを含む、前記段階;
b.反応混合物をポリメラーゼ連鎖反応(PCR)に供する段階;
c.PCR中、(i)標的増幅ポリヌクレオチド(TAP)、(ii)核酸抽出対照増幅ポリヌクレオチド(NACP)、および(iii)プラスミド増幅対照ポリヌクレオチド(PACP)の産生をモニターする段階;ならびに
d.TAPの産生をNACPおよびPACPの産生と比較する段階
を含み、PCR中に産生されたTAPの存在、NACPの存在、およびPACPの非存在が、試験サンプルが生物学的汚染物質を含有しかつ陽性増幅対照プラスミドを含有しないことを表す、試験サンプルにおける生物学的汚染物質を検出する方法。
[本発明1021]
オリゴヌクレオチドが、(a)齧歯類パルボウイルス特異的順方向オリゴヌクレオチドプライマー、(b)齧歯類パルボウイルス特異的オリゴヌクレオチド検出プローブ、(c)人工オリゴヌクレオチド検出プローブ、(d)齧歯類パルボウイルス特異的逆方向オリゴヌクレオチドプライマー、(e)M13特異的順方向オリゴヌクレオチドプライマー、(f)M13特異的オリゴヌクレオチド検出プローブ、および(g)M13特異的逆方向オリゴヌクレオチドプライマーを含む、本発明1020の方法。
[本発明1022]
試験サンプルが、哺乳動物細胞培養物またはその精製された画分から入手される、本発明1020の方法。
[本発明1023]
試験サンプルにM13K07ファージが加えられる、本発明1020の方法。
[本発明1024]
核酸サンプルが、約1mLの試験サンプルを溶解、タンパク質分解、および熱変性に供し、それに続いてサンプルと抽出対照サンプルとを混合し、次いで該サンプルから核酸を抽出することによって調製される、本発明1020の方法。
[本発明1025]
抽出対照サンプルがM13K07ファージである、本発明1024の方法。
[本発明1026]
(a)齧歯類パルボウイルス特異的順方向オリゴヌクレオチドプライマーが、SEQ ID NO:1の核酸配列を含み;(b)齧歯類パルボウイルス特異的オリゴヌクレオチド検出プローブが、VICフルオロフォア、副溝結合非蛍光性クエンチャー(MGBNFQ)、およびSEQ ID NO:2の核酸配列を含み;(c)人工オリゴヌクレオチド検出プローブが、FAMフルオロフォア、非蛍光性クエンチャーBHQ、およびSEQ ID NO:3の核酸配列を含み;(d)齧歯類パルボウイルス特異的逆方向オリゴヌクレオチドプライマーが、SEQ ID NO:4の核酸配列を含み;(e)M13特異的順方向オリゴヌクレオチドプライマーが、SEQ ID NO:5の核酸配列を含み;(f)M13特異的オリゴヌクレオチド検出プローブが、Cy5フルオロフォア、BHQ-2クエンチャー、およびSEQ ID NO:6の核酸配列を含み;かつM13特異的逆方向オリゴヌクレオチドプライマーが、SEQ ID NO:7の核酸配列を含む、本発明1025の方法。
[本発明1027]
前記成分がウラシル-N-グリコシラーゼ(UNG)を含む、本発明1020の方法。
[本発明1028]
反応混合物を50℃で少なくとも2分間インキュベートする段階を含む、本発明1020の方法。
[本発明1029]
PCR段階(b)が、
(i)反応混合物を95℃で2分間インキュベートする段階;それに続く
(ii)(1)95℃で10秒間の変性、それに続く(2)30秒間のアニーリングの8回のサイクルであって、該8回のサイクルの最初のアニーリング温度が70℃であり、アニーリング温度が1サイクル毎に1℃低下し、かつ該8回のサイクルの最後のアニーリング温度が62℃である、前記8回のサイクル;それに続く
(iii)(1)95℃で10秒間の変性段階、それに続く(2)62℃で30秒間のアニーリング段階を含む少なくとも40回のサイクルのDNA増幅であって、変性温度からアニーリング温度への温度変化の割合は1秒間あたり約4.4℃であり、かつアニーリング温度から変性温度へは1秒間あたり約2.2℃である、前記DNA増幅
を含む、本発明1028の方法。
[本発明1030]
(a)TAPの産生を、各増幅サイクルで533〜580nmにおける蛍光を測定することによってモニターし;(b)NACPの産生を、各増幅サイクルで618〜660nmにおける蛍光を測定することによってモニターし;かつ(c)PACPの産生を、各増幅サイクルで465〜510nmにおける蛍光を測定することによってモニターする、本発明1026の方法。
[本発明1031]
試験サンプルに対して実施された方法から得られた結果を、外部陽性対照および外部陰性対照と比較する段階を含み、かつ該陰性対照または該陽性対照が失敗した場合は、試験サンプルに対して実行された方法から得られた結果は却下される、本発明1020の方法。
[本発明1032]
外部陽性対照が、
a.陽性対照混合物を作製するために複数の陽性対照成分を混合する段階であって、該陽性対照成分が、(i)陽性増幅対照(PAC)プラスミド、および(ii)陽性対照オリゴヌクレオチドカクテルを含み、かつ(iii)試験サンプルを含まない、前記段階;
b.陽性対照混合物を陽性対照のポリメラーゼ連鎖反応(PCR)に供する段階;ならびに
c.PCR中、(i)標的増幅ポリヌクレオチド(TAP)、(ii)核酸抽出対照増幅ポリヌクレオチド(NACP)、および(iii)プラスミド増幅対照ポリヌクレオチド(PACP)の産生をモニターする段階
を含み、PCR中に産生されたTAP、NACP、およびPACPの存在が、PCRが適正に機能していることを表し、かつTAP、NACP、またはPACPのうちのいずれか1つまたは複数の非存在が、陽性対照が失敗していることを表す、本発明1031の方法。
[本発明1033]
PACプラスミドが、(i)パルボウイルス核酸配列、(ii)M13K07核酸配列、および(iii)該プラスミドに一意的な人工核酸配列を含む、本発明1032の方法。
[本発明1034]
(i)パルボウイルス核酸配列がSEQ ID NO:37の配列を含み;(ii)M13K07核酸配列がSEQ ID NO:8の配列を含み;かつ(iii)前記プラスミドに一意的な人工核酸配列がSEQ ID NO:10の配列を含む、本発明1033の方法。
[本発明1035]
PACプラスミドがSEQ ID NO:11の核酸配列を含む、本発明1034の方法。
[本発明1036]
陽性対照オリゴヌクレオチドカクテルが、
SEQ ID NO:1の核酸配列を含む、齧歯類パルボウイルス特異的順方向オリゴヌクレオチドプライマー;
VICフルオロフォア、MGBNFQクエンチャー、およびSEQ ID NO:2の核酸配列を含む、齧歯類パルボウイルス特異的オリゴヌクレオチド検出プローブ;
FAMフルオロフォア、BHQクエンチャー、およびSEQ ID NO:3の核酸配列を含む、人工オリゴヌクレオチド検出プローブ;
SEQ ID NO:4の核酸配列を含む、齧歯類パルボウイルス特異的逆方向オリゴヌクレオチドプライマー;
SEQ ID NO:5の核酸配列を含む、M13特異的順方向オリゴヌクレオチドプライマー;
Cy5フルオロフォア、BHQ-2クエンチャー、およびSEQ ID NO:6の核酸配列を含む、M13特異的オリゴヌクレオチド検出プローブ;ならびに
SEQ ID NO:7の核酸配列を含む、M13特異的逆方向オリゴヌクレオチドプライマー
を含む、本発明1033の方法。
[本発明1037]
陽性対照PCRが、
a.陽性対照混合物を95℃で2分間インキュベートする段階;それに続く
b.8回のサイクルの最初のアニーリング温度が70℃であり、アニーリング温度が1サイクル毎に1℃低下し、かつ8回のサイクルの最後のアニーリング温度が62℃であるような、(i)95℃で10秒間の変性、それに続く(ii)30秒間のアニーリング、の8回のサイクル;およびそれに続く
c.(i)95℃で10秒間の変性段階、それに続く(ii)62℃で30秒間のアニーリングの段階を含む、40回のサイクルのDNA増幅
を含む、本発明1036の方法。
[本発明1038]
陽性対照PCRにおけるTAPの産生が、各増幅サイクルで533〜580nmにおける蛍光を測定することによってモニターされ、陽性対照PCRにおけるNACPの産生が、各増幅サイクルで618〜660nmにおける蛍光を測定することによってモニターされ;かつ陽性対照PCRにおけるPACPの産生が、各増幅サイクルで465〜510nmにおける蛍光を測定することによってモニターされる、本発明1036の方法。
[本発明1039]
a.陽性増幅対照(PAC)プラスミド;
b.齧歯類パルボウイルス特異的順方向オリゴヌクレオチドプライマー;
c.齧歯類パルボウイルス特異的オリゴヌクレオチド検出プローブ;
d.人工オリゴヌクレオチド検出プローブ;
e.齧歯類パルボウイルス特異的逆方向オリゴヌクレオチドプライマー;
f.M13特異的順方向オリゴヌクレオチドプライマー;
g.M13特異的オリゴヌクレオチド検出プローブ;
h.M13特異的逆方向オリゴヌクレオチドプライマー;および
i.バッファー
を含む、組成物。
[本発明1040]
PACプラスミドが、(i)パルボウイルス核酸配列、(ii)M13K07核酸配列、および(iii)該プラスミドに一意的な人工核酸配列を含む、本発明1039の組成物。
[本発明1041]
パルボウイルス核酸配列がSEQ ID NO:37の配列を含み、M13K07核酸配列がSEQ ID NO:8の配列を含み、かつ前記一意的核酸配列がSEQ ID NO:10の配列を含む、本発明1040の組成物。
[本発明1042]
PACプラスミドがSEQ ID NO:11の核酸配列を含む、本発明1041の組成物。
[本発明1043]
齧歯類パルボウイルス特異的順方向オリゴヌクレオチドプライマーが、SEQ ID NO:1の核酸配列を含み;
齧歯類パルボウイルス特異的オリゴヌクレオチド検出プローブが、VICフルオロフォア、副溝結合クエンチャー(MGBNFQ)、およびSEQ ID NO:2の核酸配列を含み;
人工オリゴヌクレオチド検出プローブが、VICフルオロフォア、非蛍光性クエンチャーBHQ、およびSEQ ID NO:3の核酸配列を含み;
齧歯類パルボウイルス特異的逆方向オリゴヌクレオチドプライマーが、SEQ ID NO:4の核酸配列を含み;
M13特異的順方向オリゴヌクレオチドプライマーが、SEQ ID NO:5の核酸配列を含み;
M13特異的オリゴヌクレオチド検出プローブが、Cy5フルオロフォア、BHQ-2クエンチャー、およびSEQ ID NO:6の核酸配列を含み;かつ
M13特異的逆方向オリゴヌクレオチドプライマーが、SEQ ID NO:7の核酸配列を含む、
本発明1042の組成物。
本発明を記載する前に、本発明は、記載される特定の方法および実験条件に限定されるわけではないことが理解されるべきである。なぜならば、そのような方法および条件は変動し得るためである。本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、本明細書において用いられる専門用語は、単に特定の態様を記載することを目的とするものであり、限定的であることを意図されるものではないことも理解されるべきである。
本明細書において使用する、「ポリメラーゼ連鎖反応」(「PCR」)という語句は、変性(鋳型DNA鎖の分離)、アニーリング(一本鎖鋳型DNA鎖への一本鎖オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーション)、およびDNA合成(DNAポリメラーゼが、鋳型DNA鎖を鋳型として用いて、ハイブリダイズしたオリゴヌクレオチドの3'末端からプライムされた新たなDNA鎖の合成を触媒する)の多数回のサイクルを採用することによって、核酸(例えば、DNA)のコピーを作製するための方法を意味する。増幅を起こすために、少なくとも2種類の異なるオリゴヌクレオチドプライマー(略して「プライマー」として知られる)が、PCR反応において用いられる。一般的に順方向プライマーと呼ばれる一方のプライマーは、鋳型DNAのアンチセンス鎖にハイブリダイズし、かつ新たに合成されたセンス鎖の5'末端を形成する。一般的に逆方向プライマーと呼ばれる他方のプライマーは、鋳型DNAのセンス鎖にハイブリダイズし、かつ新たに合成されたアンチセンス鎖の5'末端を形成する。各サイクルにおいて、各鋳型鎖がコピーされて、「アンプリコン」としても知られる新たな二本鎖DNA分子を形成する。ゆえに、非限定的な量のオリゴヌクレオチドプライマー、DNAポリメラーゼ(すなわち、Taqポリメラーゼまたは他の熱安定性DNAポリメラーゼ;Innis et al., DNA sequencing with Thermus aquaticus DNA polymerase and direct sequencing of polymerase chain reaction-amplified DNA, 85(24) Proc Natl Acad Sci U S A. 9436-40 (1988)を参照されたい)、およびヌクレオチド三リン酸を用いて、DNA分子(鋳型およびアンプリコン)の数を、各サイクルにおいて倍増させる。PCRは、米国特許第4,683,202号(1987年7月28日発行)に記載されている。PCR Primer: A Laboratory Manual (Carl W. Dieffenbach & Gabriela S. Dveksler eds., 1995)も参照されたい。
「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」、「プローブ」、「プライマー」または「ヌクレオチドプライマー」または「オリゴヌクレオチドプライマー」、「鋳型」または「鋳型核酸」または「鋳型DNA」という用語は、分子生物学の技術分野における当業者にとってのそれらの通常の意味に従って本明細書において用いられる。それぞれについての詳細な説明に関しては、例えばPCR Primer: A Laboratory Manual (Carl W. Dieffenbach & Gabriela S. Dveksler eds., 1995)を参照されたい。
本発明は、細胞培養物における生物学的汚染物質を検出するための改善されたQ-PCR法に向けられている。細胞培養は多くの場合、抗体、捕捉分子、およびFc融合タンパク質など、治療的使用のための複合した生物学的分子を生産するために使用される。これらの培養物は、生物学的汚染物質がない状態のままでなければならない。汚染物質の検出は、特定のバッチが廃棄されるまたは修復に供されるべきかどうかを判定するために重要である。
生物学的汚染についてモニターされる細胞培養を用いて、治療上効果的な抗体または他のバイオ医薬品原料など、関心対象のタンパク質または他の生物学的分子を生産してもよい。タンパク質産物(関心対象のタンパク質)は、とりわけ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、多特異性抗体、二重特異性抗体、抗原結合抗体フラグメント、一本鎖抗体、ダイアボディ、トリアボディ、またはテトラボディ、FabフラグメントまたはF(ab')2フラグメント、IgA抗体、IgD抗体、IgE抗体、IgM抗体、IgG抗体、IgG1抗体、IgG2抗体、IgG3抗体、またはIgG4抗体であり得る。一態様において、抗体はIgG1抗体である。一態様において、抗体はIgG2抗体である。一態様において、抗体はIgG4抗体である。
本明細書において使用する、「ペプチド」、「ポリペプチド」、および「タンパク質」は、全体を通して互換可能に用いられ、ペプチド結合によって互いにつながれた2個またはそれを上回る数のアミノ酸残基を含む分子を指す。ペプチド、ポリペプチド、およびタンパク質は、グリコシル化、脂質付着、硫酸化、グルタミン酸残基のγ-カルボキシル化、アルキル化、ヒドロキシル化、およびADPリボシル化などの修飾も含み得る。ペプチド、ポリペプチド、およびタンパク質は、タンパク質に基づく薬物など、科学的または商業的な関心対象のものであり得る。ペプチド、ポリペプチド、およびタンパク質には、数ある中でも、抗体およびキメラタンパク質または融合タンパク質が含まれる。ペプチド、ポリペプチド、およびタンパク質は、細胞培養法を用いて組換え動物細胞株によって産生される。
本明細書において使用する、「生物学的汚染物質」という用語は、不要な、望ましくない、有害な、または潜在的に有害な任意の生物学的実体を意味する。それらの実体には、とりわけプリオン(ウシ/伝達性海綿状脳症の病因学的原因)、ビリオン、ウイルス、マイコプラズマ、他の細菌、汚染後生動物細胞、DNA、RNA、トランスポゾン、他の転位性要素、酵母、他の真菌、藻類、原生生物、ならびに他の外来性および内因性の作用物質が含まれる。齧歯類細胞(CHO細胞およびCHO細胞の誘導体のような)を用いる生物製剤生産プロセスに対して特に懸念されるものは、細胞または培地または製造用原材料に伴う外来性ウイルスである。細胞培養バルク処理材料および結果として生じた薬物産物の汚染は、患者への直接的リスクならびに医薬の供給を妨げる間接的リスクをもたらす。
生物学的汚染物質についての試験は、精度、信頼性、および信憑性を保証するように適正に管理されるべきである。本明細書において用いられるように、「陰性対照」は、ほとんどまたはすべての実験試薬および条件を含むが、試験サンプルは含まない。試験サンプルは、関心対象の生物学的汚染物質を含有しないことが知られるバッファーまたは疑似培養培地で置き換えられ得る。さらに本明細書において用いられるように、「陰性対照」は、生物学的汚染物質に関して陰性の結果をもたらすはずである。陰性対照が陽性の生物学的汚染物質結果をもたらした場合、熟練した技術者または科学者は、並行した試験サンプルからの陽性結果は、該試験サンプルが生物学的汚染物質を含有するかどうかを正確に反映しない可能性があると推測することができる。
一部の態様において、ポリメラーゼ連鎖反応、より具体的にはQ-PCRの使用によって生物学的汚染物質を検出するための、改善された陽性対照系(すなわち、組成物および方法)が提供される。
を含み、これは、UAPSセンス鎖配列(例えば、すなわち
)に対してアンチセンスである。
齧歯類パルボウイルス、M13K07、および人工一意的オリゴヌクレオチド(オリゴ)を、表4に記載されている様々な供給業者から、様々な規模で、かつ様々な形式で入手した。すべてのオリゴに、供給業者から受け取り次第、3年間の使用期限を付与した。
パルボ-M13陽性増幅対照(PAC)プラスミドを、pUC57-Kanプラスミド(GeneWiz, Inc., South Plainfield, NJ)で調製した。このPACプラスミドは、SEQ ID NO:11に明示される配列からなる。パルボウイルス-M13 PACプラスミドは、以下の式:[数=(量*数/モル)/(bp*ng/g*bpのg/モル)];式中、量=ng、数/モル=6.022×1023、bp=4372、ng/g=1×109、およびbpのg/モル=650を用いて算出された、2.1×108コピー/ngを含有する。プラスミドの濃度を算出し、かつng/μLとして表現し、かつ102コピー/μLの10×濃度まで段階的に希釈した。102コピー/μL希釈から、50μLのアリコートを調製し、かつ2mLの滅菌スクリューキャップチューブに保管した。すべてのアリコートを≦-60℃で保管した。
K13K07ファージの10倍段階希釈を、MEMを希釈剤として用いて実施して、100pfu/μLの力価のM13K07を得た。200μLのアリコートを調製し、かつ≦-60℃で保管し、かつ3年間の使用期限を付与した。
齧歯類パルボウイルスリアルタイムPCR検出アッセイは、QIAsymphony(登録商標)(Qiagen)を用いた自動DNA精製、それに続く核酸増幅、およびLightCycler(登録商標)480機器(Roche Diagnostic)でのリアルタイムPCR産物検出からなる、完全に自動化されたTaqMan(登録商標)PCRプロセスである。各被験物質に内部対照(IC)としてファージM13K07を自動的に加え、PCR阻害因子の存在について評価した。齧歯類パルボウイルスプライマーオリゴヌクレオチドを、齧歯類パルボウイルスゲノムの高度に保存された領域(NS-1領域)内でハイブリダイズするように設計して、広域な検出を確保した。アッセイを二重(すなわち、2つの標的)形式で行い、そして齧歯類パルボウイルスおよびM13K07のプライマーは、それぞれおよそ110および97bpのPCR産物を生成した。PCR産物を、齧歯類パルボウイルスに対してVICフルオロフォアおよびM13K07ファージに対してCy5フルオロフォアである異なるレポーター色素で標識された2種類のプローブの切断により、リアルタイムで検出した。陽性増幅対照(PAC)プラスミドを、100コピー/uLの濃度で用いた。このプラスミドは、フルオロフォアFAMで標識された特異的プローブを用いて該プラスミドと野生型パルボウイルスとを識別する、一意的(Flag)配列(USP)を含有する。
すべてのサンプルは、外来性作用物質を含有するまたはそれで汚染されている可能性を有するため、すべてのサンプルの前処理ステップに対して無菌の実践を厳守した。以下のステップを、清潔なバイオセーフティーキャビネット内で実施した。被験物質(サンプル)を、抗体または捕捉分子を産生するEESYR(登録商標)細胞培養物から入手し、かつ凍結させたまたは直接用いた。
QIASymphony(登録商標)機器(Qiagen, Valencia, CA)でのプログラム化された抽出プロトコールには内部対照(IC)が要された。該機器は、120μLの再構成されたICを各サンプルに自動的に添加した。12サンプルごとに、1.8mLのIC(すなわち、1バイアル)が機器によって要された。1650μLのAVEバッファー(0.04%のアジ化ナトリウムを含有するRNase不含の水)を150μLのM13K07 ICに添加することによって、ICのバイアルを調製した。
TaqMan Triplexおよび/またはVeriquest Triplexという2つのプログラムのいずれか一方を用いて、LightCycler(登録商標)480機器(Roche, Branchburg, NJ)でQ-PCRを実施した。TaqMan Triplexプロトコールは、参照色素(ROX)を含まないTaqMan Fast Advance Custom Master Mixを用いた。3つの蛍光チャンネル(FAM、VIC、およびCY5)を選択し、およびUNGステップの時間は2分間であった。用いられた反応パラメーターは、表7に要約されている。
試験セッションが有効であると見なされるためには、以下の条件が満たされなければならない。陰性増幅対照(NAC、すなわち水)は、3つすべてのチャンネルにおける蛍光シグナルに対して陰性でなければならない。陰性抽出対照(NEC、すなわちPBS)または細胞培養陰性対照フラスコは、[533〜580]チャンネルにおける蛍光シグナル(すなわち、齧歯類パルボウイルスプローブVICシグナル)に対して陰性であり、[465〜510]チャンネルにおける蛍光シグナル(すなわち、陽性増幅対照[PAC]アンチセンスFlagプローブ-FAMシグナル)に対して陰性であり、かつ[618〜660]チャンネルにおける蛍光シグナル(すなわち、M13K07プローブ-CY5シグナル)に対して陽性でなければならない。PACは、3つすべてのチャンネルにおける蛍光シグナルに対して陽性であるはずである。NECにおけるM13K07のCp値を、サンプルにおける阻害性物質の存在を評価するための参照として用いた。
以下の条件のうちのいずれか1つまたは複数が満たされた場合、アッセイは無効であると見なされた:(1)PACに対して非常に低い増幅曲線(蛍光尺度で<1ユニット)、(2)系統誤差(determinant error)(機械、ソフトウェア、または人間の誤差)が確認された、(3)NACが、3つのチャンネルのいずれかにおける増幅に対して陽性であった、(4)NECが、[533〜580]VICチャンネルにおける増幅に対して陽性であるか、[465〜510]FAMチャンネルにおける増幅に対して陽性であるか、または[618〜660]Cy5チャンネルにおける増幅に対して陰性であった、および(5)PACが、3つのチャンネルのいずれかにおける増幅シグナルに対して陰性であった。アッセイが無効であると判定された場合はいつも、試験サンプルの調査および再試験が実施された。
有効な陰性パルボウイルス試験結果のためには、以下の条件のすべてが満たされなければならない。サンプルは、NEC-M13 Cp±4サイクルの予想Cp値範囲内で、M13[618〜660]チャンネルにおけるM13K07 DNA増幅シグナルに対して陽性でなければならず、これは、PCR阻害因子がないことを示唆する。サンプルは、パルボウイルス[533〜580]チャンネルにおけるパルボウイルスDNA増幅シグナルに対して陰性でなければならない。Cp値が許容される蛍光バックグラウンドレベル内にあると見なされるかどうかにかかわらず、蛍光尺度で1ユニットを下回る蛍光シグナルは、パルボウイルスDNA増幅に対して陰性であるとして報告された。サンプルは、アンチセンスFlag[465〜510]チャンネルにおけるPAC増幅シグナルに対して陰性でなければならない。Cp値(機器によって自動的にもたらされる)が許容される蛍光バックグラウンドレベル内にあると見なされるかどうかにかかわらず、蛍光尺度で1ユニットを下回る蛍光シグナルは、PACプラスミドDNA増幅に対して陰性として報告されたことに留意されたい。
「サンプルなし」結果は、以下の条件のうちのいずれか1つまたは複数が満たされた場合に生じた。サンプルが、Cy5チャンネル[618〜660]におけるM13K07 DNA増幅シグナルに対して陰性であり、パルボウイルスチャンネル[533〜580]におけるパルボウイルスDNA増幅シグナルに対して陰性であり、かつアンチセンスFlag FAMチャンネル[465〜510]におけるPAC増幅に対して陰性であった場合はいつも、サンプルまたはPCR試薬を、標準的実施手順に従って調査した。この条件は、PCR阻害因子の存在または適正な核酸抽出の失敗を示唆する。阻害を克服するために、サンプルは希釈され得る(1:2、1:5、1:10)。範囲(NEC M13 Cp±4サイクル)外にある、M13チャンネル[618 660]における蛍光シグナルのCp値は、PCRの部分的阻害またはファージ追加のエラーを示し、反復試験を必要とした。サンプルの希釈(1:2、1:5、1:10)は、PCRの任意の阻害を克服すると考えられ得る。サンプル適性の決定的な評価を許さない、M13チャンネル[618〜660]において観察された、系統誤差の何らかの証拠または予想外の非常に低い蛍光シグナル(蛍光尺度で<1ユニット)は、「サンプルなし結果」であると見なされ、かつ増幅またはDNA抽出の間の失敗を示唆した。これは、反復試験を必要とした。
サンプルは、それが(i)(2つの二つ組ウェルの少なくとも一方に関して)蛍光尺度で1ユニットを上回る蛍光シグナルで、パルボウイルスチャンネル[533〜580]におけるパルボウイルスDNA増幅シグナル(すなわち、齧歯類パルボウイルスプローブVICシグナル)に対して陽性であり、かつ(ii)アンチセンスFlag FAMチャンネル[465〜510]におけるPAC増幅に対して陰性(PACによる交差汚染がないことを示す)であった場合、iOOSであると見なされた。結果として、技術者は、(i)GLIF(一般的な実験室調査の形態)を開始し、(ii)試験のためにサンプルをQC(ウイルス学)に出したことを部門に通知し、(iii)NOEを開始し、(iv)さらなる調査(例えば、Flag配列スクリーニングまたはシーケンシング)のために増幅チューブを保管し(-20℃で凍結)、そして(v)アッセイを反復しかつサンプルを再試験しなければならない。
アッセイが無効であるまたはサンプル結果が「結果なし」と見なされた場合はいつも、反復試験が開始された。再試験は、iOOS事象(すなわち、最初のサンプル結果が、パルボウイルスチャンネル[533〜580]におけるDNA増幅シグナルに対して陽性であった)の確認のために実施された。再試験または反復試験は、新鮮な試薬アリコート(すなわち、マスターミックス試薬、抽出キット)を用いて実行されなければならない。
初回陽性結果(iOOS)を有した、例えば未処理のバルク材料、製造終了時の細胞(end-of-production cell)、インビトロ寿命の限界にある細胞、および大豆原料を含めた他のサンプルタイプを、4つの別個のアリコートを用いて以下のように再試験した。
細胞培養液、すなわち異種抗体の重鎖および軽鎖構築物を含有するCHO細胞誘導体を含有する生産バイオリアクター由来の未処理のバルク材料、についての試験に対する重要な工程内管理として、上記で記載されるQ-PCR手順を実施した。各異種モノクローナル抗体(mAb)は、異なる標的またはエピトープに結合する。大規模なバイオプロセス生産施設において、QC(ウイルス学)の科学者によって適正製造基準(Good manufacturing process)(GMP)試験が実施された。それらの試験のうちの16個が表9に列挙されている。それぞれの場合において、試験セッションは有効であり、アッセイシステム適性基準は満たされており、かつ偽陽性検出は観察されなかった。#13および#14の試験セッションにおいて、偽陰性検出が生じ、それはPCR阻害因子の存在または核酸抽出の失敗を示唆した。
Claims (10)
- a.(i)一意的人工プラスミド特異的配列(UAPS)、標的増幅ポリヌクレオチド(TAP)配列、および核酸抽出対照(NEC)ヌクレオチド配列を含む陽性増幅対照(PAC)プラスミドのサンプル、
(ii)一意的検出プローブ(UDP)、
(iii)TAP順方向オリゴヌクレオチドプライマー、
(iv)TAP逆方向オリゴヌクレオチドプライマー、
(v)TAP検出プローブ、および
(vi)DNAポリメラーゼ、
を混合する段階;
b.(i)試験サンプル、
(ii)UDP、
(iii)TAP順方向オリゴヌクレオチドプライマー、
(iv)TAP逆方向オリゴヌクレオチドプライマー、
(v)TAP検出プローブ、および
(vi)DNAポリメラーゼ、
を混合する段階;
c.段階aの混合サンプルおよび段階bの混合サンプルを、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)に供する段階;
d.該PCRを、該PACプラスミド中のTAP配列または生物学的汚染物質中のTAP配列へのTAP検出プローブの結合によりもたらされるTAPシグナルの産生、および該PACプラスミド中のUAPSへのUDPの結合によりもたらされるUDPシグナルの産生についてリアルタイムでモニターする段階;および
e.該試験サンプル中の生物学的汚染物質の存在または非存在を検出する段階、
を含み、
(i)該試験サンプルについて、TAPシグナルが観察されず、該PACプラスミドサンプルについてTAPシグナルが観察される場合は、該試験サンプルが生物学的汚染物質を含んでおらず、
(ii)該試験サンプルについて、TAPシグナルおよびUDPシグナルが観察される場合は、該試験サンプルが該PACプラスミドサンプルの一部により交差汚染されており、または
(iii)該試験サンプルについて、TAPシグナルが観察され、UDPシグナルが観察されない場合は、該TAPシグナルはPACプラスミド由来の交差汚染によるものではなく、該試験サンプルが生物学的汚染物質を有している、
生物学的汚染物質の存在または非存在を検出する方法。 - 該UDPが、少なくとも一つのフルオロフォアおよび少なくとも一つのクエンチャーをさらに含む、請求項1記載の方法。
- 該フルオロフォアが、495nm〜680nmの範囲内の励起波長、および515nm〜710nmの範囲内の発光波長を有するフルオロフォアの群より選択される、請求項2記載の方法。
- 該TAP検出プローブが、少なくとも一つのフルオロフォアおよび少なくとも一つのクエンチャーをさらに含む、請求項1乃至3のいずれか一項記載の方法。
- 該TAPシグナルが、約533〜約580nmでモニターされる、請求項4記載の方法。
- 反応容器からのオリゴヌクレオチド抽出を検出する段階をさらに含む、請求項1乃至5のいずれか一項記載の方法であって、
段階aおよびbが、
(vii)NEC特異的順方向オリゴヌクレオチドプライマー、
(viii)NEC特異的逆方向オリゴヌクレオチドプライマー、および
(ix)NEC特異的オリゴヌクレオチド検出プローブ、
を混合する段階であって、該NEC特異的オリゴヌクレオチド検出プローブは、該PACプラスミドサンプルまたは該試験サンプル中のNEC配列に結合する、
段階をさらに含み、;
段階dが、該PCRを、該PACプラスミドサンプルまたは該試験サンプル中のNECヌクレオチド配列への該NEC特異的オリゴヌクレオチド検出プローブの結合によりもたらされるNECシグナルの産生についてリアルタイムでモニターすることをさらに含み、および
f.反応容器からのオリゴヌクレオチド抽出を検出する段階、
をさらに含み、
(i)該試験サンプルおよび該PACプラスミドサンプルについて、NECシグナルが観察され、該試験サンプルについてUDPシグナルが観察されない場合は、該NECシグナルは、反応容器からのオリゴヌクレオチド抽出を示し、または、
(ii)該試験サンプルについて、NECシグナルおよびUDPシグナルが観察される場合は、該試験サンプルが該PACプラスミドサンプルの一部により交差汚染されている、
方法。 - 該NECヌクレオチド配列が、M13バクテリオファージヌクレオチド配列である、請求項6記載の方法。
- 該NEC特異的オリゴヌクレオチド検出プローブが、シアニン色素を含む、請求項6または7記載の方法。
- 該シアニン色素が、約650nmでの吸収極大および約670nmでの発光極大を有するシアニン色素のCy5である、請求項8記載の方法。
- PCR試薬中の、生物学的汚染物質またはPACプラスミドサンプルの一部の存在または非存在を検出する段階をさらに含む、請求項1乃至9のいずれか一項記載の方法であって、
g.(i)バッファーサンプル、
(ii)UDP、
(iii)TAP順方向オリゴヌクレオチドプライマー、
(iv)TAP逆方向オリゴヌクレオチドプライマー、
(v)TAP検出プローブ、および
(vi)DNAポリメラーゼ、
を混合する段階;
h.該混合バッファーサンプル、をポリメラーゼ連鎖反応(PCR)に供する段階;
i.該PCRを、該PACプラスミドまたは生物学的汚染物質中のTAP配列へのTAP検出プローブの結合によりもたらされるTAPシグナルの産生、および該PACプラスミド中のUAPSへのUDPの結合によりもたらされるUDPシグナルの産生についてリアルタイムでモニターする段階;および
j.PCR試薬中の、生物学的汚染物質またはPACプラスミドサンプルの一部の存在または非存在を検出する段階、
をさらに含み、
(i)該バッファーサンプルに、TAPシグナルも、UDPシグナルも観察されない場合は、該PCR試薬が、生物学的汚染物質または該PACプラスミドで汚染されておらず、
(ii)該バッファーサンプルに、TAPシグナルおよびUDPシグナルが観察される場合は、該PCR試薬が、該PACプラスミドの一部で汚染されており、または
(iii)該バッファーサンプルに、TAPシグナルが観察され、UDPシグナルが観察されない場合は、該PCR試薬が、生物学的汚染物質で汚染されている、
方法。
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---|---|---|---|---|
US4683202A (en) | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
US5585254A (en) * | 1987-08-21 | 1996-12-17 | University Of Colorado Foundation, Inc. | Autonomous parvovirus gene delivery vehicles and expression vectors |
US5371241A (en) | 1991-07-19 | 1994-12-06 | Pharmacia P-L Biochemicals Inc. | Fluorescein labelled phosphoramidites |
US7087411B2 (en) | 1999-06-08 | 2006-08-08 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Fusion protein capable of binding VEGF |
DE69942200D1 (de) | 1999-08-13 | 2010-05-12 | Deutsches Krebsforsch | Parvovirus NS1 Varianten |
AT409383B (de) * | 1999-12-22 | 2002-07-25 | Baxter Ag | Verfahren zur detektion und quantifizierung von nukleinsäuren in einer probe |
AU2001283278A1 (en) * | 2000-08-10 | 2002-02-25 | Neurologix, Inc. | Replication competent aav helper functions |
CN1324147C (zh) * | 2001-06-28 | 2007-07-04 | 希龙公司 | 细小病毒b19的诊断测试 |
DE60309238T2 (de) | 2002-03-08 | 2007-06-06 | Asml Netherlands B.V. | Lithographische Maske, lithographischer Apparat und Verfahren zur Herstellung einer Vorrichtung |
CA2506574A1 (en) * | 2002-11-12 | 2004-05-27 | Genolife | One step real-time rt pcr kits for the universal detection of organisms in industrial products |
JP4805158B2 (ja) * | 2003-05-16 | 2011-11-02 | アメリカ合衆国 | 核酸増幅系に用いる内部コントロール核酸分子 |
DE102006034844B3 (de) * | 2006-07-27 | 2007-12-06 | DRK-Blutspendedienst Baden-Württemberg-Hessen gGmbH | Zusammensetzungen und Verfahren zur Amplifikation von Hepatitis A-Viren (HAV) und/oder Parvoviren B19 (PB19) mittels Multiplex-PCR |
EP2150617B1 (en) | 2007-06-04 | 2014-10-22 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Enhanced expression and stability regions |
EP2098599A1 (en) * | 2008-03-05 | 2009-09-09 | Deutsches Krebsforschungszentrum, Stiftung des öffentlichen Rechts | Composition comprising an oligonucleotide mixture for the detection of contaminations in cell cultures |
WO2010111509A1 (en) * | 2009-03-25 | 2010-09-30 | Life Technologies Corporation | Discriminatory positive/extraction control dna |
CN103833855A (zh) | 2009-06-26 | 2014-06-04 | 瑞泽恩制药公司 | 容易地分离的具有天然免疫球蛋白形式的双特异性抗体 |
CA2814235C (en) | 2010-10-21 | 2016-05-31 | Deutsches Krebsforschungszentrum | Retargeting of rat parvovirus h-1pv to cancer cells through genetic engineering of its capsid |
CA2828192A1 (en) * | 2011-02-25 | 2012-08-30 | Novartis Ag | Exogenous internal positive control |
CN102206713B (zh) * | 2011-04-06 | 2013-01-02 | 浙江大学 | 三重荧光定量rt-pcr检测试剂盒及用途 |
GB201203568D0 (en) * | 2012-02-29 | 2012-04-11 | Vela Operations Pte Ltd | Real time PCR detection of streptococcus |
HU230463B1 (hu) | 2012-07-02 | 2016-07-28 | Ud-Genomed Medical Genomic Technologies Kft. | Kontroll rendszer immunprecipitációs vizsgálatokhoz |
MX358755B (es) * | 2012-10-02 | 2018-09-03 | Proclara Biosciences Inc | Uso del p3 de proteinas de fusion de bacteriofago como agentes de union amiloides. |
GB2525024A (en) * | 2014-04-10 | 2015-10-14 | Vela Operations Pte Ltd | Universal controls for sequencing assays |
TW202336236A (zh) | 2015-03-27 | 2023-09-16 | 美商再生元醫藥公司 | 偵測生物污染物之組成物及方法 |
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