JP6869300B2 - small,dense LDLコレステロールの定量方法およびキット - Google Patents
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Description
[1]small,dense LDL中コレステロールを2つの工程で定量する方法において用いる、
(1)コレステロールエステラーゼ活性、コレステロールオキシダーゼ活性、スフィンゴミエリナーゼ活性を有し、コレステロールエステラーゼ活性、コレステロールオキシダーゼ活性、スフィンゴミエリナーゼ活性の存在下でsmall,dense LDL以外のリポタンパク中のコレステロールを反応系外に導くための第1試薬組成物と、
(2)small,dense LDL中コレステロールを定量するための第2試薬組成物と、
を含む被検体試料中のsmall,dense LDLコレステロール定量キットであって、第1試薬組成物および第2試薬組成物のいずれかの試薬組成物において同一試薬組成物中にカップラー、鉄錯体、およびペルオキシダーゼを共存させないことを特徴とするキット。
[2]small,dense LDL中コレステロールを2つの工程で定量する方法において用いる、
(1)コレステロールエステラーゼ活性、コレステロールオキシダーゼ活性、スフィンゴミエリナーゼ活性を有し、コレステロールエステラーゼ活性、コレステロールオキシダーゼ活性、スフィンゴミエリナーゼ活性の存在下でsmall,dense LDL以外のリポタンパク中のコレステロールを反応系外に導くための第1試薬組成物と、
(2)small,dense LDL中コレステロールを定量するための第2試薬組成物と、
を含む被検体試料中のsmall,dense LDLコレステロール定量キットであって、第1試薬組成物および第2試薬組成物のいずれかの試薬組成物において同一試薬組成物中にカップラーおよび鉄錯体を共存させないことを特徴とするキット。
[3]第1試薬組成物がカタラーゼ活性およびカップラーを含み、第2試薬組成物が、電子供与体、鉄錯体およびペルオキシダーゼ活性を含むことを特徴とする[1]または[2]のキット。
[4]第1試薬組成物がペルオキシダーゼ活性およびカップラーを含み、第2試薬組成物が、電子供与体および鉄錯体を含むことを特徴とする[1] または[2]のキット。
[5]第1試薬組成物がカタラーゼ活性、カップラーおよび鉄錯体を含み、第2試薬組成物が、電子供与体およびペルオキシダーゼ活性を含むことを特徴とする[1]のキット。
[6]第1試薬組成物がペルオキシダーゼ活性および電子供与体を含み、第2試薬組成物が、カップラーおよび鉄錯体を含むことを特徴とする[1]のキット。
[7]第1試薬組成物がカタラーゼ活性、電子供与体および鉄錯体を含み、第2試薬組成物が、ペルオキシダーゼ活性およびカップラーを含むことを特徴とする[1]または[2]のキット。
[8]第1試薬組成物がペルオキシダーゼ活性、電子供与体および鉄錯体を含み、第2試薬組成物が、カップラーを含むことを特徴とする[1]または[2]のキット。
[9]第1試薬組成物が、さらにカタラーゼ活性を含むことを特徴とする[4]、[6]および[8]のいずれかのキット。
[10]第1試薬組成物が、さらにsmall,dense LDL以外のリポタンパクに作用する界面活性剤を含み、第2試薬組成物がさらに少なくともsmall,dense LDLに作用する界面活性剤を含むことを特徴とする[1]から[9]のいずれかのキット。
[11]第1試薬組成物に含まれる界面活性剤がポリオキシエチレン多環フェニルエーテルを含むことを特徴とする[10]のキット。
[12]ポリオキシエチレン多環フェニルエーテルがポリオキシエチレンベンジルフェニルエーテル誘導体および/またはポリオキシエチレンスチレン化フェニルエーテル誘導体を含むことを特徴とする[11]のキット。
[13]small,dense LDL中コレステロールを2つの工程で定量する方法であって、
(1)コレステロールエステラーゼ活性、コレステロールオキシダーゼ活性、スフィンゴミエリナーゼ活性の存在下でsmall,dense LDL以外のリポタンパク中のコレステロールを反応系外に導く第1工程と、
(2)前記第1工程で残存するリポ蛋白中のコレステロールを定量する第2工程、
を含む被検体試料中のsmall,dense LDLコレステロール定量方法であって、(1)または(2)いずれかの工程においてカップラー、鉄錯体、およびペルオキシダーゼを同時に用いないことを特徴とする定量方法。
[14]small,dense LDL中コレステロールを2つの工程で定量する方法であって、
(1)コレステロールエステラーゼ活性、コレステロールオキシダーゼ活性、スフィンゴミエリナーゼ活性の存在下でsmall,dense LDL以外のリポタンパク中のコレステロールを反応系外に導く第1工程と、
(2)前記第1工程で残存するリポ蛋白中のコレステロールを定量する第2工程、
を含む被検体試料中のsmall,dense LDLコレステロール定量方法であって、(1)または(2)いずれかの工程においてカップラーおよび鉄錯体を同時に用いないことを特徴とする定量方法。
[15]第1工程でカタラーゼ活性およびカップラーを用い、第2工程で、電子供与体、鉄錯体およびペルオキシダーゼ活性を用いることを特徴とする[13]または[14]の定量方法。
[16]第1工程でペルオキシダーゼ活性およびカップラーを用い、第2工程で、電子供与体および鉄錯体を用いることを特徴とする[13] または[14]の定量方法。
[17]第1工程でカタラーゼ活性、カップラーおよび鉄錯体を用い、第2工程で、電子供与体およびペルオキシダーゼ活性を用いることを特徴とする[13]の定量方法。
[18]第1工程でペルオキシダーゼ活性および電子供与体を用い、第2工程で、カップラーおよび鉄錯体を用いることを特徴とする[13]の定量方法。
[19]第1工程でカタラーゼ活性、電子供与体および鉄錯体を用い、第2工程で、ペルオキシダーゼ活性およびカップラーを用いることを特徴とする[13]または[14]の定量方法。
[20]第1工程でペルオキシダーゼ活性、電子供与体および鉄錯体を用い、第2工程で、カップラーを用いることを特徴とする[13]または[14]の定量方法。
[21]第1工程でさらにカタラーゼ活性を用いることを特徴とする[14]、[18]および[20]のいずれかの定量方法。
[22]第1工程で、さらにsmall,dense LDL以外のリポタンパクに作用する界面活性剤を用い、第2工程で、さらに少なくともsmall,dense LDLに作用する界面活性剤を用いることを特徴とする[13]から[21]のいずれかの定量方法。
[23]small,dense LDL中コレステロールを2つの工程で定量する方法において用いる、
(1)コレステロールエステラーゼ活性、コレステロールオキシダーゼ活性、スフィンゴミエリナーゼ活性を含む第1試薬組成物と、
(2)small,dense LDL中コレステロールを定量するための第2試薬組成物と、の
被検体試料中のsmall,dense LDLコレステロール定量キットの製造における使用であって、第1試薬組成物または第2試薬組成物のいずれかの試薬組成物において同一試薬組成物中にカップラー、鉄錯体、およびペルオキシダーゼを共存させないことを特徴とする、使用。
[24]small,dense LDL中コレステロールを2つの工程で定量する方法において用いる、
(1)コレステロールエステラーゼ活性、コレステロールオキシダーゼ活性、スフィンゴミエリナーゼ活性を含む第1試薬組成物と、
(2)small,dense LDL中コレステロールを定量するための第2試薬組成物と、の
被検体試料中のsmall,dense LDLコレステロール定量キットの製造における使用であって、第1試薬組成物または第2試薬組成物のいずれかの試薬組成物において同一試薬組成物中にカップラーおよび鉄錯体を共存させないことを特徴とする、使用。
リポ蛋白は大きくVLDL、LDLおよびHDLの分画に分けられ、LDLはさらにsmall,dense LDLとそれ以外の亜分画に分けられる。small,dense LDLを小粒子LDL 、SLDL(small LDL)、dense LDL、sd LDLと呼ぶこともあり、またそれ以外のLDLをL LDL(large LDL)、Light LDLと呼ぶこともある。これらの分画および亜分画は、粒子サイズまたは比重により区別できる。その粒子サイズの直径は、報告者により異なるがVLDLが30nm〜80nm(30nm〜75nm)で、LDLが22nm〜28nm(19nm〜30nm)、HDLが直径7〜10nmである。比重は、VLDLが1.006以下、LDLが1.019〜1.063、HDLが1.063〜1.21である。LDL粒子直径はグラジエントゲル電気泳動(GGE)(JAMA, 260, p.1917-21, 1988)、NMR(HANDBOOK OF LIPOPROTEIN TESTING 2ndEdition、 Nader Rifai他編、p.609-623、AACC PRESS:The Fats of Life Summer 2002、LVDD 15 YEAR ANNIVERSARY ISSUE、Volume AVI No.3、p.15-16)により測定でき、比重は超遠心分離による分析(Atherosclerosis, 106, p.241-253, 1994: Atherosclerosis, 83, p.59, 1990)に基づいて決定できる。
本発明の方法では、small, dense LDLコレステロールの濃度を定量する際に、電子供与体とカップラーをペルオキシダーゼ活性の存在下でカップリング反応させ、生成した色素により特定波長の吸光度を測定する。その際反応促進剤として鉄錯体が使用される。しかしながら、カップラーとペルオキシダーゼ活性、鉄錯体が同一試薬中に存在すると、試薬が徐々に自然発色し、small,dense LDLコレステロールの定量に影響を及ぼすという問題があった。そこで、本発明ではカップラーとペルオキシダーゼ活性、鉄錯体のうち、いずれかを別の試薬に存在させることにより試薬の自然発色を抑え安定化させる事が可能となった。ここで、「ペルオキシダーゼ活性が存在する」とは、ペルオキシダーゼが存在し、ペルオキシダーゼが触媒する反応が起こり得ることをいう。「ペルオキシダーゼ活性が存在する」という語を「ペルオキシダーゼが存在する」ということもできる。コレステロールエステラーゼ活性、コレステロールオキシダーゼ活性、カタラーゼ活性やスフィンゴミエリナーゼ活性についても同様である。
(1)第1工程で用いる第1試薬組成物中にカップラーを存在させ、ペルオキシダーゼ活性および鉄錯体を第2工程で用いる第2試薬組成物中に存在させる。
(2)第1試薬組成物中にカップラーおよびペルオキシダーゼ活性を存在させ、鉄錯体を第2試薬組成物中に存在させる。
(3)第1試薬組成物中にペルオキシダーゼ活性を存在させ、カップラーおよび鉄錯体を第2試薬組成物中に存在させる。
(4)第1試薬組成物中にカップラーおよび鉄錯体を存在させ、ペルオキシダーゼ活性を第2試薬組成物中に存在させる。
(5)第1試薬組成物中にペルオキシダーゼ活性および鉄錯体を存在させ、カップラーを第2試薬組成物中に存在させる。
(6)第1試薬組成物中に鉄錯体を存在させ、ペルオキシダーゼ活性およびカップラーを第2試薬組成物中に存在させる。
さらに、好ましくは、カップラーと電子供与体は別々の試薬組成物中に分離して存在させる。
本発明のキットは、small, dense LDL以外のリポ蛋白中のコレステロールを反応系外に導く工程で用いる第1の試薬生成物、およびsmall,dense LDL中コレステロールを測定する工程で用いる第2試薬生成物を含む。
small, dense LDL以外のリポ蛋白中コレステロールを反応系外に導く工程では、small, dense LDL以外のリポ蛋白中コレステロールを消去し反応系外に導く、small, dense LDL以外のリポ蛋白中を凝集させたり、後の工程で反応しないよう阻害したりする等の公知の技術を用いることができる。
(1)これらのリポ蛋白中コレステロールよりコレステロールエステラーゼ活性およびコレステロールオキシダーゼ活性により過酸化水素を生成させ、カタラーゼ活性の存在下で過酸化水素を水と酸素に分解させる方法、
(2)コレステロールエステラーゼ活性およびコレステロールオキシダーゼ活性により生じた過酸化水素、ならびにカップラーもしくは電子供与体の存在下で無色キノンを形成させる方法、ならびに
(3)カタラーゼ活性の存在下で過酸化水素を分解させ、かつ同時にカップラーまたは電子供与体の存在下で無色キノンを形成させる方法。
下記実施例および比較例で用いる成分は以下のとおりである。
下記実施例および比較例において、吸収スペクトルの測定には、HITACHI 社製のU-3900を用いた。
small,dense LDL以外のリポ蛋白中コレステロールを消去する第1工程、およびsmall,dense LDLコレステロールを測定する第2工程によりsmall,dense LDLを測定する試薬において、第2工程を行う第2試薬組成物を以下のように調製した。
PIPES緩衝液,pH7.0 50mmol/L
カップラー(4アミノアンチピリン) 4.0mmol/L
ペルオキシダーゼ 5.0U/mL
フェロシアン化カリウム 0.11mmol/L
アジ化ナトリウム 0.05%(w/v)
ポリオキシエチレンアルキルエーテル[花王製] 1.0%(w/v)
small,dense LDL以外のリポ蛋白中コレステロールを消去する第1工程、およびsmall,dense LDLコレステロールを測定する第2工程によりsmall,dense LDLを測定する試薬において、第1工程を行う第1試薬組成物を以下のように調製した。
PIPES緩衝液,pH7.0 50mmol/L
スフィンゴミエリナーゼ 2.7U/mL
コレステロールエステラーゼ 0.6U/mL
コレステロールオキシダーゼ 0.5U/mL
カップラー(4アミノアンチピリン) 1.3mmol/L
ペルオキシダーゼ 1.7U/mL
フェロシアン化カリウム 0.04mmol/L
ポリオキシエチレン誘導体[花王製] 0.3%(w/v)
small,dense LDL以外のリポ蛋白中コレステロールを消去する第1工程、およびsmall,dense LDLコレステロールを測定する第2工程によりsmall,dense LDLを測定する試薬において、第1工程を行う第1試薬組成物、および第2工程を行う第2試薬組成物を以下のように調製した。
PIPES緩衝液,pH7.0 50mmol/L
スフィンゴミエリナーゼ 2.7U/mL
コレステロールエステラーゼ 0.6U/mL
コレステロールオキシダーゼ 0.5U/mL
カタラーゼ 1200U/mL
4−アミノアンチピリン 1.3mmol/L
ポリオキシエチレン多環フェニルエーテル[花王製] 03%(w/v)
第2試薬組成物
PIPES緩衝液,pH7.0 50mmol/L
TOOS 6.0mmol/L
フェロシアン化カリウム 0.11mM
ペルオキシダーゼ 5.0U/mL
アジ化ナトリウム 0.05%(w/v)
ポリオキシエチレンアルキルエーテル[花王製] 1.0%(w/v)
small,dense LDL以外のリポ蛋白中コレステロールを消去する第1工程、およびsmall,dense LDLコレステロールを測定する第2工程によりsmall,dense LDLを測定する試薬において、第1工程を行う第1試薬組成物、および第2工程を行う第2試薬組成物を以下のように調製した。
PIPES緩衝液,pH7.0 50mmol/L
スフィンゴミエリナーゼ 2.7U/mL
コレステロールエステラーゼ 0.6U/mL
コレステロールオキシダーゼ 0.5U/mL
ペルオキシダーゼ 1.7U/mL
4−アミノアンチピリン 1.3mmol/L
ポリオキシエチレン多環フェニルエーテル[花王製] 0.3%(w/v)
第2試薬組成物
PIPES緩衝液,pH7.0 50mmol/L
TOOS 6.0mmol/L
ポリオキシエチレンアルキルエーテル[花王製] 1.0%(w/v)
フェロシアン化カリウム 0.11mmol/L
small,dense LDL以外のリポ蛋白中コレステロールを消去する第1工程、およびsmall,dense LDLコレステロールを測定する第2工程によりsmall,dense LDLを測定する試薬において、第1工程を行う第1試薬組成物、および第2工程を行う第2試薬組成物を以下のように調製した。
第1試薬組成物
PIPES緩衝液,pH7.0 50mmol/L
スフィンゴミエリナーゼ 2.7U/mL
コレステロールエステラーゼ 0.6U/mL
コレステロールオキシダーゼ 0.5U/mL
4−アミノアンチピリン 1.3mmol/L
フェロシアン化カリウム 0.04mM
カタラーゼ 1200U/mL
ポリオキシエチレン多環フェニルエーテル[花王製] 0.3%(w/v)
第2試薬組成物
PIPES緩衝液,pH7.0 50mmol/L
TOOS 6.0mmol/L
アジ化ナトリウム 0.05%(w/v)
ペルオキシダーゼ 5.0U/mL
ポリオキシエチレンアルキルエーテル[花王製] 1.0%(w/v)
small,dense LDL以外のリポ蛋白中コレステロールを消去する第1工程、およびsmall,dense LDLコレステロールを測定する第2工程によりsmall,dense LDLを測定する試薬において、第1工程を行う第1試薬組成物、および第2工程を行う第2試薬組成物を以下のように調製した。
PIPES緩衝液,pH7.0 50mmol/L
スフィンゴミエリナーゼ 2.7U/mL
コレステロールエステラーゼ 0.6U/mL
コレステロールオキシダーゼ 0.5U/mL
ペルオキシダーゼ 1.7U/mL
TOOS 2.0mmol/L
ポリオキシエチレン多環フェニルエーテル[花王製] 0.3%(w/v)
第2試薬組成物
PIPES緩衝液,pH7.0 50mmol/L
4−アミノアンチピリン 4.0mmol/L
フェロシアン化カリウム 0.11mM
ポリオキシエチレンアルキルエーテル[花王製] 1.0%(w/v)
small,dense LDL以外のリポ蛋白中コレステロールを消去する第1工程、およびsmall,dense LDLコレステロールを測定する第2工程によりsmall,dense LDLを測定する試薬において、第1工程を行う第1試薬組成物、および第2工程を行う第2試薬組成物を以下のように調製した。
PIPES緩衝液,pH7.0 50mmol/L
スフィンゴミエリナーゼ 2.7U/mL
コレステロールエステラーゼ 0.6U/mL
コレステロールオキシダーゼ 0.5U/mL
TOOS 2.0mmol/L
フェロシアン化カリウム 0.04mM
カタラーゼ 1200U/mL
ポリオキシエチレン多環フェニルエーテル[花王製] 0.3%(w/v)
第2試薬組成物
PIPES緩衝液,pH7.0 50mmol/L
4−アミノアンチピリン 4.0mmol/L
ペルオキシダーゼ 5.0U/mL
アジ化ナトリウム 0.05%(w/v)
ポリオキシエチレンアルキルエーテル[花王製] 1.0%(w/v)
small,dense LDL以外のリポ蛋白中コレステロールを消去する第1工程、およびsmall,dense LDLコレステロールを測定する第2工程によりsmall,dense LDLを測定する試薬組成物において、第1工程を行う第1試薬組成物、および第2工程を行う第2試薬組成物を以下のように調製した。
PIPES緩衝液,pH7.0 50mmol/L
スフィンゴミエリナーゼ 2.7U/mL
コレステロールエステラーゼ 0.6U/mL
コレステロールオキシダーゼ 0.5U/mL
TOOS 2.0mmol/L
フェロシアン化カリウム 0.04mM
ペルオキシダーゼ 1.7U/mL
ポリオキシエチレン多環フェニルエーテル[花王製] 0.3%(w/v)
第2試薬組成物
PIPES緩衝液,pH7.0 50mmol/L
4−アミノアンチピリン 4.0mmol/L
ポリオキシエチレンアルキルエーテル[花王製] 1.0%(w/v)
small,dense LDL以外のリポ蛋白中コレステロールを消去する第1工程、およびsmall,dense LDLコレステロールを測定する第2工程によりsmall,dense LDLを測定する試薬組成物において、第1工程を行う第1試薬組成物、および第2工程を行う第2試薬組成物を以下のように調製した。
PIPES緩衝液,pH7.0 50mmol/L
スフィンゴミエリナーゼ 2.7U/mL
コレステロールエステラーゼ 0.6U/mL
コレステロールオキシダーゼ 0.5U/mL
4−アミノアンチピリン 1.3mmol/L
ペルオキシダーゼ 1.7U/mL
カタラーゼ 1200U/mL
ポリオキシエチレン多環フェニルエーテル[花王製] 0.3%(w/v)
第2試薬組成物
PIPES緩衝液,pH7.0 50mmol/L
TOOS 6.0mmol/L
フェロシアン化カリウム 0.11mM
アジ化ナトリウム 0.05%(w/v)
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small,dense LDL以外のリポ蛋白中コレステロールを消去する第1工程、およびsmall,dense LDLコレステロールを測定する第2工程によりsmall,dense LDLを測定する試薬組成物において、第1工程を行う第1試薬組成物、および第2工程を行う第2試薬組成物を以下のように調製した。
PIPES緩衝液,pH7.0 50mmol/L
スフィンゴミエリナーゼ 2.7U/mL
コレステロールエステラーゼ 0.6U/mL
コレステロールオキシダーゼ 0.5U/mL
TOOS 2.0mmol/L
ペルオキシダーゼ 1.7U/mL
カタラーゼ 1200U/mL
ポリオキシエチレン多環フェニルエーテル[花王製] 0.3%(w/v)
第2試薬組成物
PIPES緩衝液,pH7.0 50mmol/L
4−アミノアンチピリン 4.0mmol/L
フェロシアン化カリウム 0.11mM
アジ化ナトリウム 0.05%(w/v)
ポリオキシエチレンアルキルエーテル[花王製] 1.0%(w/v)
small,dense LDL以外のリポ蛋白中コレステロールを消去する第1工程、およびsmall,dense LDLコレステロールを測定する第2工程によりsmall,dense LDLを測定する試薬組成物において、第1工程を行う第1試薬組成物、および第2工程を行う第2試薬組成物を以下のように調製した。
PIPES緩衝液,pH7.0 50mmol/L
スフィンゴミエリナーゼ 2.7U/mL
コレステロールエステラーゼ 0.6U/mL
コレステロールオキシダーゼ 0.5U/mL
TOOS 2.0mmol/L
フェロシアン化カリウム 0.04mM
ペルオキシダーゼ 1.7U/mL
カタラーゼ 1200U/mL
ポリオキシエチレン多環フェニルエーテル[花王製] 0.3%(w/v)
第2試薬組成物
PIPES緩衝液,pH7.0 50mmol/L
4−アミノアンチピリン 4.0mmol/L
アジ化ナトリウム 0.05%(w/v)
ポリオキシエチレンアルキルエーテル[花王製] 1.0%(w/v)
実施例1から実施例9までの定量キットを用いてsmall,dense LDLコレステロールを測定した。比較対象法として、デンカ生研社製のsmall,dense LDLコレステロール測定用試薬sd LDL-EX「生研」を用いた。small,dense LDLコレステロール濃度を比較した。結果として、同じサンプルに対する、各実施例のsmall,dense LDL中コレステロールの測定結果とsd LDL-EX「生研」の測定結果の相関係数を表1に示す。
Claims (11)
- small,dense LDL中コレステロールを2つの工程で定量する方法において用いる、
(1)コレステロールエステラーゼ、コレステロールオキシダーゼ、スフィンゴミエリナーゼを有し、small,dense LDL以外のリポタンパク中のコレステロールを反応系外に導くための第1試薬組成物と、
(2)small,dense LDL中コレステロールを定量するための第2試薬組成物と、
を含む被検体試料中のsmall,dense LDLコレステロール定量キットであって、
第1試薬組成物および第2試薬組成物のいずれかに、少なくともカップラー、鉄錯体、ペルオキシダーゼ、カタラーゼ、電子供与体および界面活性剤が含まれ、カップラーと電子供与体が同一の試薬組成物に含まれることはなく、第1試薬組成物および第2試薬組成物の一方の試薬組成物においてカップラーと鉄錯体を共存させ、他方の試薬組成物にペルオキシダーゼを存在させ、同一試薬中にカップラー、鉄錯体およびペルオキシダーゼを共存させないことを特徴とするsmall,dense LDLコレステロール定量キット。 - 第1試薬組成物がペルオキシダーゼおよび電子供与体を含み、第2試薬組成物が、カップラーおよび鉄錯体を含むことを特徴とする請求項1記載のsmall,dense LDLコレステロール定量キット。
- 第1試薬組成物が、さらにカタラーゼを含むことを特徴とする請求項2記載のsmall,dense LDLコレステロール定量キット。
- 第1試薬組成物が、さらにsmall,dense LDL以外のリポタンパクに作用する界面活性剤を含み、第2試薬組成物がさらに少なくともsmall,dense LDLに作用する界面活性剤を含むことを特徴とする請求項1から3のいずれか1項に記載のsmall,dense LDLコレステロール定量キット。
- 第1試薬組成物に含まれる界面活性剤がポリオキシエチレン多環フェニルエーテルを含むことを特徴とする請求項4記載のsmall,dense LDLコレステロール定量キット。
- ポリオキシエチレン多環フェニルエーテルがポリオキシエチレンベンジルフェニルエーテル誘導体および/またはポリオキシエチレンスチレン化フェニルエーテル誘導体を含むことを特徴とする請求項5記載のsmall,dense LDLコレステロール定量キット。
- small,dense LDL中コレステロールを2つの工程で定量する方法であって、
(1)コレステロールエステラーゼ、コレステロールオキシダーゼ、スフィンゴミエリナーゼの存在下でsmall,dense LDL以外のリポタンパク中のコレステロールを反応系外に導く第1工程と、
(2)前記第1工程で残存するリポ蛋白中のコレステロールを定量する第2工程、
を含む被検体試料中のsmall,dense LDLコレステロール定量方法であって、
(1)の工程または(2)の工程のいずれかで、少なくともカップラー、鉄錯体、カタラーゼ、ペルオキシダーゼ、カタラーゼ、電子供与体および界面活性剤を用い、カップラーと電子供与体が同一の工程で用いられることはなく、
(1)または(2)の一方の工程においてカップラーと鉄錯体を同時に用い、他方の工程でペルオキシダーゼを用い、1つの工程でカップラー、鉄錯体およびペルオキシダーゼを同時に用いないことを特徴とするsmall,dense LDLコレステロール定量方法。 - 第1工程でカタラーゼ、カップラーおよび鉄錯体を用い、第2工程で、電子供与体およびペルオキシダーゼを用いることを特徴とする請求項7記載のsmall,dense LDLコレステロール定量方法。
- 第1工程でペルオキシダーゼおよび電子供与体を用い、第2工程で、カップラーおよび鉄錯体を用いることを特徴とする請求項7記載のsmall,dense LDLコレステロール定量方法。
- 第1工程でさらにカタラーゼを用いることを特徴とする請求項9記載のsmall,dense LDLコレステロール定量方法。
- 第1工程で、さらにsmall,dense LDL以外のリポタンパクに作用する界面活性剤を用い、第2工程で、さらに少なくともsmall,dense LDLに作用する界面活性剤を用いることを特徴とする請求項7から10のいずれか1項に記載のsmall,dense LDLコレステロール定量方法。
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