JP6862761B2 - Copolymers, bioactive substance-immobilized polymers for biomolecule capture, coating compositions, and articles - Google Patents
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Description
本発明は、共重合体、生体分子捕捉用の生理活性物質固定化ポリマー、コーティング組成物、および物品に関する。より詳細には、バイオアッセイ等に用いることができる生体適合性を有する共重合体、ならびにこのような共重合体を含む、生理活性物質固定化ポリマー、コーティング組成物、および物品に関する。 The present invention relates to copolymers, bioactive substance-immobilized polymers for biomolecule capture, coating compositions, and articles. More specifically, the present invention relates to a biocompatible copolymer that can be used in a bioassay or the like, and a bioactive substance-immobilized polymer, a coating composition, and an article containing such a copolymer.
一般的に、バイオアッセイ等に用いられる生理活性物質を固定化するための担体は、粒子、基板、繊維、フィルター、膜、シートの形態で提供される。このような担体は、目的の生理活性物質を固定化するために、特定の生理活性物質と化学的に相互作用し得る機能性物質を導入する表面処理がなされている。 Generally, carriers for immobilizing bioactive substances used in bioassays and the like are provided in the form of particles, substrates, fibers, filters, membranes, and sheets. Such a carrier is surface-treated to introduce a functional substance capable of chemically interacting with a specific bioactive substance in order to immobilize the desired bioactive substance.
たとえば、特許文献１には、入手容易な汎用樹脂製マイクロビーズの表面に、親水性のスペーサー分子を介して機能性物質を結合させて得られる生理活性物質固定化マイクロビーズが記載されている。同文献では、基材であるマイクロビーズの表面を加水分解し、加水分解により生じたカルボン酸に、親水性のスペーサー分子を結合させ、このスペーサー分子に機能性物質を結合させている。ここでこの機能性物質は目的の生理活性物質に結合し得る選択結合性物質である。スペーサー分子の主鎖としては、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール等の、親水性を有する分子が用いられ、スペーサー分子が有する親水性により、生理活性物質の非特異的結合が抑制される。 For example, Patent Document 1 describes bioactive substance-immobilized microbeads obtained by binding a functional substance to the surface of easily available general-purpose resin microbeads via hydrophilic spacer molecules. In the same document, the surface of microbeads, which is a base material, is hydrolyzed, a hydrophilic spacer molecule is bound to the carboxylic acid generated by the hydrolysis, and a functional substance is bound to the spacer molecule. Here, this functional substance is a selective binding substance that can bind to the desired physiologically active substance. As the main chain of the spacer molecule, a hydrophilic molecule such as polyethylene glycol or polyvinyl alcohol is used, and the hydrophilicity of the spacer molecule suppresses non-specific binding of a physiologically active substance.
しかし、引用文献１に記載の技術は、実用化を考慮した場合、基材の表面処理にともなう煩雑性や、用いる基材の材料が限定される等の問題があった。そこで、本発明者らは、それ自体が親水性を有することにより生理活性物質に対して親和性が高く、かつ基材への適用が簡便であり、簡略化された工程により生理活性物質を固定化できる材料の探索という、従来とは異なる発想のもと鋭意検討した。その結果、特定の構造を有する共重合体が、高い親水性を有し、例えば、バイオアッセイ用材料として有用であることを見出した。 However, the technique described in Cited Document 1 has problems such as complexity due to surface treatment of the base material and limitation of the material of the base material to be used in consideration of practical use. Therefore, the present inventors have a high affinity for a physiologically active substance due to its hydrophilicity, and it is easy to apply to a base material, and the physiologically active substance is fixed by a simplified process. We made a diligent study based on a different idea from the conventional one, which is to search for materials that can be converted. As a result, it was found that a copolymer having a specific structure has high hydrophilicity and is useful as a material for bioassay, for example.
上記課題を解決する本発明によれば、目的の生理活性物質を固定化し得る機能を有するとともに、親水性が向上された共重合体、当該共重合体に生理活性物質が固定化された生理活性物質固定化ポリマー、ならびに当該共重合体または当該生理活性物質固定化ポリマーを含むコーティング組成物および物品が提供される。 According to the present invention for solving the above problems, a copolymer having a function of immobilizing a target physiologically active substance and having improved hydrophilicity, and a physiological activity in which the physiologically active substance is immobilized on the copolymer. Material-immobilized polymers and coating compositions and articles comprising the copolymers or bioactive substance-immobilized polymers are provided.
本発明によれば、
式（１）で表される構造単位Ａ、
式（３）で表される構造単位Ｂ、および
式（４）で表される構造体Ｃ、式（５）で表される構造体Ｄ、式（６）または式（７）で表される構造単位Ｅ、および式（８）で表される構造単位Ｆから選択される少なくとも１つ、を含む、共重合体が提供される。
According to the present invention
Structural unit A represented by equation (1) ,
The structural unit B represented by the formula (3) and
It is represented by the structure C represented by the formula (4), the structure D represented by the formula (5), the structural unit E represented by the formula (6) or the formula (7), and the formula (8). A copolymer is provided that comprises at least one selected from structural unit F.
また、本発明によれば、上記共重合体と、上記共重合体に固定化された生理活性物質とを含む、生体分子捕捉用の生理活性物質固定化ポリマーが提供される。
また、本発明によれば、上記共重合体および溶剤を含むコーティング組成物が提供される。
また、本発明によれば、上記生理活性物質固定化ポリマーおよび溶剤を含む、コーティング組成物が提供される。
また、本発明によれば、基材と、前記基材上に形成された上記共重合体を含むポリマー層とを備える物品が提供される。
また、本発明によれば、基材と、前記基材上に形成された上記生理活性物質固定化ポリマーを含む生理活性物質固定化ポリマー層とを備える物品が提供される。
Further, according to the present invention, there is provided a physiologically active substance-immobilized polymer for capturing biomolecules, which comprises the above-mentioned copolymer and the physiologically active substance immobilized on the above-mentioned copolymer.
Further, according to the present invention, a coating composition containing the above-mentioned copolymer and solvent is provided.
Further, according to the present invention, a coating composition containing the bioactive substance-immobilized polymer and a solvent is provided.
Further, according to the present invention, there is provided an article comprising a base material and a polymer layer containing the above-mentioned copolymer formed on the base material.
Further, according to the present invention, there is provided an article comprising a base material and a bioactive substance-immobilized polymer layer containing the bioactive substance-immobilized polymer formed on the base material.
本発明によれば、目的の生理活性物質を固定化し得る機能を有するとともに、親水性が向上された生体適合性の共重合体、ならびにこれを用いた生理活性物質固定化ポリマー、コーティング組成物および物品が提供される。 According to the present invention, a biocompatible copolymer having a function of immobilizing a target physiologically active substance and having improved hydrophilicity, a bioactive substance-immobilizing polymer using the same, a coating composition and a coating composition. Goods are provided.
以下、本発明の実施の形態について説明する。 Hereinafter, embodiments of the present invention will be described.
本実施形態に従う共重合体であるポリマーＰは、以下の構造単位Ａおよび構造単位Ｂを含む。
ここで、構造単位Ａは、式（１）で表される構造単位であり、構造単位Ｂは、式（２）で表される構造単位および式（３）で表される構造単位から選択される少なくとも１つの構造単位である：
Here, the structural unit A is a structural unit represented by the formula (1), and the structural unit B is selected from the structural unit represented by the formula (2) and the structural unit represented by the formula (3). At least one structural unit:
なお、本明細書において使用される、「活性エステル基」は、エステル基の片方の置換基に酸性度の高い電子求引性基を有して求核反応に対して活性化されたエステル群、すなわち反応活性の高いエステル基を意味するものとして、各種の化学合成、例えば高分子化学、ペプチド合成等の分野で慣用されているものである。実際的には、例えばある化合物中のカルボキシル基と、水酸基又はメルカプト基を有する化合物とが脱水縮合することにより生じるエステル基である。エステル基が導入されて生じるエステルとしては、フェノールエステル類、チオフェノールエステル類、Ｎ−ヒドロキシアミンエステル類、複素環ヒドロキシ化合物のエステル類等がアルキルエステル等に比べてはるかに高い活性を有する活性エステル基を有するものとして知られている。 The "active ester group" used in the present specification is an ester group in which one of the substituents of the ester group has an electron-attracting group with high acidity and is activated for a nucleophilic reaction. That is, as it means an ester group having high reaction activity, it is commonly used in various chemical syntheses such as polymer chemistry and peptide synthesis. Practically, for example, it is an ester group formed by dehydration condensation of a carboxyl group in a compound and a compound having a hydroxyl group or a mercapto group. As the ester produced by introducing the ester group, phenol esters, thiophenol esters, N-hydroxyamine esters, esters of heterocyclic hydroxy compounds and the like are active esters having much higher activity than alkyl esters and the like. It is known to have a group.
ポリマーＰは、式（１）で表される構造単位Ａを含むことにより、優れた親水性を有する。また、ポリマーＰは、式（２）で表される構造単位および式（３）で表される構造単位から選択される少なくとも１つの構造単位で表される構造単位Ｂを含むことにより、特定の生理活性物質を固定化することができる。本発明の共重合体に固定化され得る生理活性物質としては、糖、糖鎖、糖ペプチド、抗体、タンパク質等が挙げられる。さらに、構造単位Ａを含むポリマーＰは、目的の生理活性物質以外のタンパク質等の物質の非特異的吸着を抑制する機能を有する。このようなポリマーＰで表面処理された基材は、高い親水性を有し、細胞傷害性がほとんどなく、固定化される生理活性物質の機能への影響がなく、優れた生体適合性を有するため、バイオアッセイ等の生体物質と接触する環境で用いることができる。 The polymer P has excellent hydrophilicity by containing the structural unit A represented by the formula (1). Further, the polymer P is specified by containing a structural unit B represented by at least one structural unit selected from the structural unit represented by the formula (2) and the structural unit represented by the formula (3). Physiologically active substances can be immobilized. Examples of the physiologically active substance that can be immobilized on the copolymer of the present invention include sugars, sugar chains, glycopeptides, antibodies, proteins and the like. Further, the polymer P containing the structural unit A has a function of suppressing non-specific adsorption of substances such as proteins other than the target physiologically active substance. Such a substrate surface-treated with polymer P has high hydrophilicity, almost no cytotoxicity, no effect on the function of the immobilized bioactive substance, and has excellent biocompatibility. Therefore, it can be used in an environment where it comes into contact with a biological substance such as a bioassay.
構造単位Ａの原料となるモノマーとしては、式（１）の構造に対応する（メタ）アクリレートを使用でき、これらは１種単独で、または２種以上を組み合わせて用いることができる。このようなモノマーとしては、例えば、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アクリルアミド（ＨＥＡＡ）、メタクリル酸２−ヒドロキシエチル（ＨＥＭＡ）等が挙げられる。また、構造単位Ｂの原料となるモノマーとしては、構造単位Ｂが式（３）で表される場合、式（３）の構造に対応する（メタ）アクリレートを使用することができる。構造単位Ｂが式（２）で表される場合、式（２ａ）で表されるような、１級アミノ基が保護基により保護されたアクリレートモノマーを使用できる。これらのモノマーは、１種単独で、または２種以上を組み合わせて用いることができる。
一実施形態において、ポリマーＰは、式（４）で表される構造単位Ｃを含んでもよい。
このような構造単位Ｃを有することにより、ポリマーＰを基材に適用した場合、ポリマーＰと基材との結合性を向上させることができる。したがって、ポリマーＰが適用された基材が、加熱処理や洗浄処理等に供された場合、ポリマーＰは基材から脱離することなくその表面に留まる。そのため、このような基材は、ポリマーＰの脱離にともなう機能の低下が低減され、持続的な生理活性物質固定化能や親水性を有し得る。
構造単位Ｃの原料となるモノマーとしては、式（４）の構造に対応する（メタ）アクリレートを使用でき、これは１種単独で、または２種以上を組み合わせて用いることができる。このようなモノマーとしては、３−（メタクリロキシ）プロピルジメチルメトキシシラン、３−（メタクリルオキシ）プロピルジメチルエトキシシラン、３−（メタクリルオキシ）プロピルメチルジエトキシシラン、３−（メタクリルオキシ）プロピルメチルジメトキシシラン、３−（メタクリルオキシ）プロピルトリメトキシシラン、３−（メタクリルオキシ）プロピルトリエトキシシラン等が挙げられる。
By having such a structural unit C, when the polymer P is applied to a base material, the bondability between the polymer P and the base material can be improved. Therefore, when the base material to which the polymer P is applied is subjected to a heat treatment, a cleaning treatment, or the like, the polymer P stays on the surface of the base material without being detached from the base material. Therefore, such a base material may have a continuous ability to immobilize a physiologically active substance and hydrophilicity by reducing a decrease in function due to desorption of polymer P.
As the monomer used as the raw material of the structural unit C, (meth) acrylate corresponding to the structure of the formula (4) can be used, and this can be used alone or in combination of two or more. Examples of such monomers include 3- (methacryloxy) propyldimethylmethoxysilane, 3- (methacryloxy) propyldimethylethoxysilane, 3- (methacryloxy) propylmethyldiethoxysilane, and 3- (methacryloxy) propylmethyldimethoxysilane. , 3- (Methyloxy) propyltrimethoxysilane, 3- (methacryloxy) propyltriethoxysilane and the like.
一実施形態において、ポリマーＰは、式（５）で表される構造単位Ｄを含んでもよい。
このような構造単位Ｄを有することにより、ポリマーＰを基材に適用した場合、ポリマーＰと基材との結合性を向上させることができる。そのため、ポリマーＰが適用された基材は、持続的な生理活性物質固定化能や親水性を有し得る。
構造単位Ｄの原料となるモノマーとしては、式（５）の構造に対応する（メタ）アクリレートを使用でき、これらは１種単独で、または２種以上を組み合わせて用いることができる。このようなモノマーの例としては、メタクリロイルオキシエチル４−アジド桂皮酸エステル（ＭＥＣＡｚ）が挙げられる。
By having such a structural unit D, when the polymer P is applied to a base material, the bondability between the polymer P and the base material can be improved. Therefore, the base material to which the polymer P is applied may have a long-lasting ability to immobilize a physiologically active substance and hydrophilicity.
As the monomer used as the raw material of the structural unit D, (meth) acrylate corresponding to the structure of the formula (5) can be used, and these can be used alone or in combination of two or more. Examples of such monomers include methacryloyloxyethyl 4-azidocinnamic acid ester (MECAz).
一実施形態において、ポリマーＰは、式（６）で表される構造単位および式（７）で表される構造単位から選択される少なくとも１つの構造単位Ｅを含んでもよい。
ポリマーＰが式（６）で表される構造単位および式（７）で表される構造単位から選択される少なくとも１つの構造単位で表される構造単位Ｅを含むことにより、ポリマーＰへの様々なタンパク質の非特異的吸着の抑制の汎用性を高めることが可能となる。
構造単位Ｅの原料となるモノマーとしては、式（６）または式（７）の構造に対応する（メタ）アクリレートを使用でき、これらは１種単独で、または２種以上を組み合わせて用いることができる。式（６）の構造に対応する（メタ）アクリレートモノマーとしては、２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）が挙げられる。また、式（７）の構造に対応する（メタ）アクリレートモノマーとしては、メトキシポリエチレングリコールメタクリレート（ＰＥＧＭＡ）、メタクリル酸ジエチレングリコールモノメチルエーテル（ＤＥＧＭ）等が挙げられる。
In one embodiment, the polymer P may comprise at least one structural unit E selected from the structural units represented by the formula (6) and the structural units represented by the formula (7).
Various to the polymer P by including the structural unit E represented by at least one structural unit selected from the structural unit represented by the formula (6) and the structural unit represented by the formula (7). It is possible to increase the versatility of suppressing non-specific adsorption of various proteins.
As the monomer used as the raw material of the structural unit E, (meth) acrylate corresponding to the structure of the formula (6) or the formula (7) can be used, and these may be used alone or in combination of two or more. it can. Examples of the (meth) acrylate monomer corresponding to the structure of the formula (6) include 2-methacryloyloxyethyl phosphorylcholine (MPC). Examples of the (meth) acrylate monomer corresponding to the structure of the formula (7) include methoxypolyethylene glycol methacrylate (PEGMA) and diethylene glycol monomethyl ether (DEGM) methacrylate.
一実施形態において、ポリマーＰは、式（８）で表される構造単位Ｆを含む。
炭素数１〜１０の直鎖または分枝鎖のアルキルとしては、メチル、エチル、プロピル、メチルエチル、ブチル、１，２−ジメチルエチル、ペンチル、１−メチルブチル、２−メチルブチル、およびヘキシル等が挙げられる。炭素数３〜８の脂環式アルキルとしては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル等が挙げられる。
In one embodiment, the polymer P comprises a structural unit F represented by formula (8).
Examples of linear or branched alkyl having 1 to 10 carbon atoms include methyl, ethyl, propyl, methyl ethyl, butyl, 1,2-dimethylethyl, pentyl, 1-methylbutyl, 2-methylbutyl, and hexyl. Be done. Examples of the alicyclic alkyl having 3 to 8 carbon atoms include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl and the like.
このような構造単位Ｆを有することにより、ポリマーＰを基材に適用した場合、ポリマーＰと基材との結合性を向上させることができる。そのため、ポリマーＰが適用された基材は、持続的な生理活性物質固定化能や親水性を有し得る。
構造単位Ｆの原料となるモノマーとしては、式（８）の構造に対応する（メタ）アクリレートを使用でき、これは１種単独で、または２種以上を組み合わせて用いることができる。このようなモノマーとしては、ｎ−ブチルメタクリレート、シクロヘキシルメタクリレート等が挙げられる。
By having such a structural unit F, when the polymer P is applied to a base material, the bondability between the polymer P and the base material can be improved. Therefore, the base material to which the polymer P is applied may have a long-lasting ability to immobilize a physiologically active substance and hydrophilicity.
As the monomer used as the raw material of the structural unit F, (meth) acrylate corresponding to the structure of the formula (8) can be used, and this can be used alone or in combination of two or more. Examples of such a monomer include n-butyl methacrylate and cyclohexyl methacrylate.
ポリマーＰは、ランダム共重合体またはブロック共重合体であり得る。ランダム共重合体は、これを塗布した基材表面において均一な細胞非接着性が得られるため好ましい。 Polymer P can be a random copolymer or a block copolymer. Random copolymers are preferable because uniform cell non-adhesiveness can be obtained on the surface of the substrate to which the copolymer is applied.
ポリマーＰにおける構造単位Ａの含有率（モル％）は、１０モル％以上９９モル％以下であり、好ましくは、１５モル％以上７０％モル％以下であり、より好ましくは、１５モル％以上５０モル％以下である。また、ポリマーＰにおける構造単位Ｂの含有率（モル％）は、１モル％以上５０モル％以下であり、好ましくは２モル％以上４０モル％以下である。上記範囲で構造単位Ａおよび構造単位Ｂが含まれることにより、得られるポリマーＰは、生理活性物質を固定化する機能を有するとともに、優れた親水性を有する。 The content (mol%) of the structural unit A in the polymer P is 10 mol% or more and 99 mol% or less, preferably 15 mol% or more and 70% mol% or less, and more preferably 15 mol% or more and 50. It is less than or equal to the molar percentage. The content (mol%) of the structural unit B in the polymer P is 1 mol% or more and 50 mol% or less, preferably 2 mol% or more and 40 mol% or less. By including the structural unit A and the structural unit B in the above range, the obtained polymer P has a function of immobilizing a physiologically active substance and has excellent hydrophilicity.
ポリマーＰが、構造単位Ｃ〜Ｆの少なくとも１つを含む場合、ポリマーＰにおける構造単位Ｃ〜Ｆの合計の含有率は、１モル％以上８９モル％以下であり、好ましくは、１０モル％以上７０モル％以下であり、より好ましくは、２０モル％以上６０モル％以下である。上記範囲で構造単位Ｃ〜Ｆの少なくとも１つを含むポリマーＰは、良好な親水性および生理活性物質固定化能を維持しつつ、基材への結合性を有する。 When the polymer P contains at least one of the structural units C to F, the total content of the structural units C to F in the polymer P is 1 mol% or more and 89 mol% or less, preferably 10 mol% or more. It is 70 mol% or less, more preferably 20 mol% or more and 60 mol% or less. The polymer P containing at least one of the structural units C to F in the above range has good hydrophilicity and bondability to a substrate while maintaining good bioactive substance immobilization ability.
ポリマーＰにおける各構造単位の含有量および組成は、以下で説明するポリマーＰの製造において、重合反応に用いる原料モノマーの量を調整することにより制御できる。 The content and composition of each structural unit in the polymer P can be controlled by adjusting the amount of the raw material monomer used in the polymerization reaction in the production of the polymer P described below.
また、ポリマーＰの重量平均分子量Ｍｗは、１００００〜１００００００であり、好ましくは、２００００〜５０００００である。一実施形態において、ポリマーＰの数平均分子量Ｍｎは、５０００〜１０００００であり、好ましくは、１００００〜８００００である。重量平均分子量および数平均分子量が上記範囲内であることにより、ポリマーＰは合成時の取扱い性が良好であるとともに、優れた親水性を有する。 The weight average molecular weight Mw of the polymer P is 1,000,000 to 1,000,000, preferably 2000 to 500000. In one embodiment, the number average molecular weight Mn of the polymer P is 5000 to 100,000, preferably 1000 to 80,000. When the weight average molecular weight and the number average molecular weight are within the above ranges, the polymer P has good handleability at the time of synthesis and has excellent hydrophilicity.
なお、重量平均分子量（Ｍｗ）、および数平均分子量（Ｍｎ）は、ＧＰＣ測定により得られる標準ポリスチレン（ＰＳ）の検量線から求めた、換算値を用いる。本実施形態において、測定条件は、以下の通りである。
装置：ゲルパーミエーションクロマトグラフィー装置（日本分光株式会社製、ＬＣ−２０００Ｐｌｕｓシリーズ）
カラム：東ソー社製、ＴＳＫ−ＧＥＬＡＬＰＨＡ−Ｍ、ＡＬＰＨＡ−２５００
検出器：液体クロマトグラム用ＲＩ検出器
測定温度：４０℃
溶媒：メタノール／水＝７／３（ｖｏｌ／ｖｏｌ）混合溶媒
試料濃度：０．０５ｗｔ％
For the weight average molecular weight (Mw) and the number average molecular weight (Mn), converted values obtained from the calibration curve of standard polystyrene (PS) obtained by GPC measurement are used. In this embodiment, the measurement conditions are as follows.
Equipment: Gel permeation chromatography equipment (manufactured by JASCO Corporation, LC-2000Plus series)
Column: Tosoh, TSK-GELALPHA-M, ALPHA-2500
Detector: RI detector for liquid chromatogram Measurement temperature: 40 ° C
Solvent: Methanol / water = 7/3 (vol / vol) mixed solvent Sample concentration: 0.05 wt%
（ポリマーＰの製造方法）
本発明のポリマーＰの合成は、モノマー化合物の調製およびこれらの重合を含め、当該分野で公知の方法を用いて行うことができる。モノマー化合物は、市販の化合物を使用することができる。重合方法としては、例えば、ラジカル重合法が挙げられる。また、ラジカル重合法を用いる場合、ラジカル重合開始剤を用いて重合する方法が好適である。この場合、懸濁重合、溶液重合、分散重合、乳化重合等の方法を取ることができる。中でも、溶液重合が好ましい。溶液重合の際には、各モノマーを全量一括仕込みで行ってもよいし、一部を反応容器に仕込み、残りを滴下して行ってもよい。また、後述するように、基材上に重合性官能基や連鎖移動基等を導入し、基材上で上記ポリマーＰを合成してもよい。
(Manufacturing method of polymer P)
The synthesis of the polymer P of the present invention can be carried out using methods known in the art, including the preparation of monomer compounds and the polymerization thereof. As the monomer compound, a commercially available compound can be used. Examples of the polymerization method include a radical polymerization method. When the radical polymerization method is used, a method of polymerizing using a radical polymerization initiator is preferable. In this case, methods such as suspension polymerization, solution polymerization, dispersion polymerization, and emulsion polymerization can be used. Of these, solution polymerization is preferable. At the time of solution polymerization, all the monomers may be charged in a batch, or a part of the monomers may be charged in a reaction vessel and the rest may be dropped. Further, as will be described later, the polymer P may be synthesized on the base material by introducing a polymerizable functional group, a chain transfer group or the like on the base material.
ラジカル重合法に用いることができるラジカル重合開始剤としては、アゾ化合物および有機過酸化物のうちのいずれか１種以上を使用できる。
アゾ化合物としては、たとえば２，２'−アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）、ジメチル２，２'−アゾビス（２−メチルプロピオネート）、１，１'−アゾビス（シクロヘキサンカルボニトリル）（ＡＢＣＮ）等が挙げられ、これらのうち、いずれか１種以上を使用できる。
また、有機過酸化物としては、たとえば、ジターシャリブチルパーオキサイド（ＤＴＢＰ）、過酸化ベンゾイル（ベンゾイルパーオキサイド，ＢＰＯ）および、メチルエチルケトンパーオキサイド（ＭＥＫＰ）等を挙げることができ、これらのうち、いずれか１種以上を使用できる。
ラジカル重合開始剤の量（モル数）は、原料として用いるモノマーの合計モル数の０．０５％〜３％とすることが好ましい。重合開始剤の量を前記範囲内で適宜設定し、かつ、反応温度、反応時間を適宜設定することで、得られるポリマーの重量平均分子量（Ｍｗ）を１００００〜１００００００に調整することができる。
As the radical polymerization initiator that can be used in the radical polymerization method, any one or more of an azo compound and an organic peroxide can be used.
Examples of the azo compound include 2,2'-azobisisobutyronitrile (AIBN), dimethyl 2,2'-azobis (2-methylpropionate), and 1,1'-azobis (cyclohexanecarbonitrile) (ABCN). ), Etc., and any one or more of these can be used.
Examples of the organic peroxide include ditert-butyl peroxide (DTBP), benzoyl peroxide (benzoyl peroxide, BPO), methyl ethyl ketone peroxide (MEKP), and the like. Or one or more can be used.
The amount (number of moles) of the radical polymerization initiator is preferably 0.05% to 3% of the total number of moles of the monomers used as the raw material. By appropriately setting the amount of the polymerization initiator within the above range and appropriately setting the reaction temperature and the reaction time, the weight average molecular weight (Mw) of the obtained polymer can be adjusted to 1000 to 1,000,000.
ポリマーＰの製造に用いられる重合溶媒は、重合反応に関与せず、かつ重合体と相溶性のある溶媒であれば特に制限されず、例えば、水、メタノール、エタノール、プロパノール、ｔ−ブタノール、ベンゼン、トルエン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、クロロホルム、メチルエチルケトン等のケトン系溶媒およびこれらの混合溶媒等が挙げられる。これらの溶媒は、１種単独で、または２種以上を組み合わせて用いることができる。
重合溶媒には、必要に応じて、他の添加剤を含めてもよい。
The polymerization solvent used for producing the polymer P is not particularly limited as long as it is a solvent that does not participate in the polymerization reaction and is compatible with the polymer, and is, for example, water, methanol, ethanol, propanol, t-butanol, benzene. , Toluene, dimethylformamide, dimethylsulfoxide, tetrahydrofuran, chloroform, methyl ethyl ketone and other ketone solvents, and mixed solvents thereof and the like. These solvents can be used alone or in combination of two or more.
The polymerization solvent may contain other additives, if necessary.
（ポリマーＰの用途）
（ポリマーＰの基材への適用）
本発明のポリマーＰは、ポリマーＰを含むコーティング組成物を基材へ塗布することにより、当該基材の表面に適用される。基材は、無機または有機材料からなる基材を用いることができる。この場合、コーティング組成物は、ポリマーＰに加え、溶剤、および必要に応じて界面活性剤等の添加剤を含み得る。溶剤としては、水、エタノール、メタノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ｔ−ブチルアルコール、ｎ−ペンタノール、シクロヘキサノール等のアルコール、ベンゼン、トルエン、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、アセトン、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸ブチル、メチルエチルケトン、メチルブチルケトン、エチレングリコールモノエチルエーテル、エチレングリコールモノメチルエーテル、エチレングリコールモノブチルエーテル、シクロヘキサノン等が挙げられる。これらの溶媒は、単独で、または２種以上を組み合わせて用いることができる。中でも、アルコールが、プラスチック基材を変性させず、乾燥させやすいため好ましい。
(Use of polymer P)
(Application of polymer P to substrate)
The polymer P of the present invention is applied to the surface of the base material by applying a coating composition containing the polymer P to the base material. As the base material, a base material made of an inorganic or organic material can be used. In this case, the coating composition may contain a solvent and, if necessary, an additive such as a surfactant, in addition to the polymer P. Solvents include water, ethanol, methanol, isopropanol, n-butanol, t-butyl alcohol, n-pentanol, cyclohexanol and other alcohols, benzene, toluene, tetrahydrofuran, dioxane, dichloromethane, chloroform, acetone, methyl acetate, acetic acid. Examples thereof include ethyl, butyl acetate, methyl ethyl ketone, methyl butyl ketone, ethylene glycol monoethyl ether, ethylene glycol monomethyl ether, ethylene glycol monobutyl ether, cyclohexanone and the like. These solvents can be used alone or in combination of two or more. Of these, alcohol is preferable because it does not denature the plastic base material and is easy to dry.
コーティング組成物に含まれるポリマーＰの量は、適用される基材の種類、得られる膜の厚み、コーティング方法に依存して調整することができる。コーティング組成物中のポリマーＰの濃度は、例えば、０．０１重量％以上１．５重量％以下とすることができる。 The amount of polymer P contained in the coating composition can be adjusted depending on the type of substrate applied, the thickness of the film obtained, and the coating method. The concentration of the polymer P in the coating composition can be, for example, 0.01% by weight or more and 1.5% by weight or less.
本発明に用いる基材としては、スライド形状基板、マイクロウェルプレート、容器、マイクロフルイディスク基板等を用いることができるが、これらに限定されることはなく、適時最適な形状を選択できる。基材の材料としては、例えば、無機物質、有機高分子物質等が挙げられる。無機物質としては、シリカ、アルミナ、ガラス、金属等が挙げられる。有機高分子物質としては、熱可塑性樹脂等が挙げられ、熱可塑性樹脂としては、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン等の直鎖状ポリオレフィン樹脂；ポリスチレン樹脂；環状ポリオレフィン樹脂；含フッ素樹脂；ポリカーボネート樹脂等が挙げられる。中でも、耐熱性、耐薬品性、低蛍光性、成形性に特に優れる飽和環状ポリオレフィン樹脂を用いることが好ましい。本明細書において、飽和環状ポリオレフィン樹脂とは、環状オレフィン構造を有する単独重合体又は環状オレフィンとα−オレフィンとの共重合体に水素添加した飽和重合体を指す。 As the base material used in the present invention, a slide-shaped substrate, a microwell plate, a container, a microflui disk substrate and the like can be used, but the substrate is not limited thereto, and the optimum shape can be selected in a timely manner. Examples of the material of the base material include inorganic substances and organic polymer substances. Examples of the inorganic substance include silica, alumina, glass, and metal. Examples of the organic polymer substance include thermoplastic resins, and examples of the thermoplastic resin include linear polyolefin resins such as polyethylene and polypropylene; polystyrene resins; cyclic polyolefin resins; fluororesins; polycarbonate resins and the like. Be done. Above all, it is preferable to use a saturated cyclic polyolefin resin which is particularly excellent in heat resistance, chemical resistance, low fluorescence, and moldability. As used herein, the saturated cyclic polyolefin resin refers to a homopolymer having a cyclic olefin structure or a saturated polymer obtained by hydrogenating a copolymer of a cyclic olefin and an α-olefin.
ポリマーＰを含むコーティング組成物を用いて基材の表面修飾を行う方法としては、基材をコーティング組成物に浸漬する方法、またはコーティング組成物を、例えば、スプレー塗布により基材に塗布する方法が挙げられるが、これらに限定されず、当該分野において公知の他の手法により表面修飾を行うことができる。なお、表面修飾とは、すべてまたは連続であるものに限られず、一部または非連続であるものも含む。 As a method of surface-modifying the base material using the coating composition containing the polymer P, a method of immersing the base material in the coating composition or a method of applying the coating composition to the base material by, for example, spray coating is used. However, the surface modification can be performed by other methods known in the art, but not limited to these. The surface modification is not limited to all or continuous, but also includes partial or discontinuous.
基材表面と、これを被覆するポリマーＰを含むコーティング組成物との密着性を高めるために、基材表面を活性化することが好ましい。活性化する手段としては酸素雰囲気下、アルゴン雰囲気下、窒素雰囲気下、空気雰囲気下などの条件下でプラズマ処理する方法、フッ化アルゴン、フッ化クリプトンなどのエキシマレーザーで処理する方法があるが、酸素雰囲気下でプラズマ処理する方法が好ましい。 It is preferable to activate the surface of the base material in order to enhance the adhesion between the surface of the base material and the coating composition containing the polymer P that coats the surface of the base material. As a means of activation, there are a method of plasma treatment under conditions such as an oxygen atmosphere, an argon atmosphere, a nitrogen atmosphere, and an air atmosphere, and a method of treating with an excimer laser such as argon fluoride or krypton fluoride. A method of plasma treatment in an oxygen atmosphere is preferable.
ポリマーＰが構造単位Ｃを有する場合、基材を、ポリマーＰを含むコーティング組成物で表面修飾した後に、５０〜１２０℃で５分間〜１００時間加熱処理するのが好ましい。構造単位Ｃから産生するシラノール基が基材の官能基またはポリマーＰのシラノール基などと脱水縮合することにより、ポリマーＰを含むコーティング組成物と基材との結合性を向上させることができる。これにより前述のように、ポリマーＰを含むコーティング組成物を適用した基材が加熱処理や洗浄処理等に供された場合、ポリマーＰは基材から脱離することなくその表面に留まりやすくなる。このような基材は、ポリマーＰの脱離にともなう機能の低下が低減され、持続的な生理活性物質固定化能や親水性を有し得る。 When the polymer P has the structural unit C, it is preferable that the base material is surface-modified with a coating composition containing the polymer P and then heat-treated at 50 to 120 ° C. for 5 minutes to 100 hours. By dehydrating and condensing the silanol group produced from the structural unit C with the functional group of the base material or the silanol group of the polymer P, the bondability between the coating composition containing the polymer P and the base material can be improved. As a result, as described above, when the base material to which the coating composition containing the polymer P is applied is subjected to a heat treatment, a cleaning treatment, or the like, the polymer P tends to stay on the surface of the base material without being detached from the base material. Such a base material may have a long-lasting bioactive substance-immobilizing ability and hydrophilicity by reducing the deterioration of the function due to the desorption of the polymer P.
ポリマーＰが構造単位Ｄを有する場合、基材を、ポリマーＰを含むコーティング組成物で表面修飾した後に、光照射するのが好ましい。光照射する条件としては、１０ｍＪ／ｃｍ２以上１０００ｍＪ／ｃｍ２以下が挙げられ、５０ｍＪ／ｃｍ２以上８００ｍＪ／ｃｍ２以下であることが好ましく、１００ｍＪ／ｃｍ２以上７００ｍＪ／ｃｍ２以下であることがさらに好ましい。光照射により、構造単位Ｄからナイトレンを発生し、基材またはポリマーＰと反応する。これにより、ポリマーＰを含むコーティング組成物と基材との結合性を向上させることができる。その結果、ポリマーＰを含むコーティング組成物を適用した基材が、加熱処理や洗浄処理等に供された場合、ポリマーＰは基材から脱離することなくその表面に留まりやすくなる。このような基材は、ポリマーＰの脱離にともなう機能の低下が低減され、持続的な生理活性物質固定化能や親水性を有し得る。 When the polymer P has a structural unit D, it is preferable that the base material is surface-modified with a coating composition containing the polymer P and then irradiated with light. It The conditions of light irradiation, include 10 mJ / cm 2 or more 1000 mJ / cm 2 or less, it is preferably, 100 mJ / cm 2 or more 700 mJ / cm 2 or less at 50 mJ / cm 2 or more 800 mJ / cm 2 or less Is even more preferable. Upon light irradiation, nitrene is generated from the structural unit D and reacts with the base material or the polymer P. Thereby, the bondability between the coating composition containing the polymer P and the base material can be improved. As a result, when the base material to which the coating composition containing the polymer P is applied is subjected to a heat treatment, a cleaning treatment, or the like, the polymer P tends to stay on the surface of the base material without being detached from the base material. Such a base material may have a long-lasting bioactive substance-immobilizing ability and hydrophilicity by reducing the deterioration of the function due to the desorption of the polymer P.
（ポリマーＰへの生理活性物質の固定化）
本発明のポリマーＰが担持された基材（以下、担体という）には、各種の生理活性物質または生理活性物質含有物質を固定化することができる。生理活性物質としては、例えば、糖、糖質、糖鎖、ペプチド、タンパク質、核酸、細胞、脂質などが挙げられる。また、糖鎖または糖鎖を含む物質としては、単糖、２糖以上の糖鎖、糖アミノ酸、糖ペプチド、糖タンパク質、糖脂質、グリコサミノグリカン、グリコシルホスファチジルイノシトール、ペプチドグリカン、リポ多糖、およびそれらの誘導体などがある。なお、あらかじめポリマーＰに生理活性物質または生理活性物質含有物質を固定化して生理活性物質固定化ポリマーを作製し、その後これを基材に担持させてもよい。このような生理活性物質固定化ポリマーは、基材に担持せず、粒子状等にして単独で、生体物質捕捉用のポリマーとして使用することもできる。
(Immobilization of bioactive substances on polymer P)
Various physiologically active substances or substances containing a physiologically active substance can be immobilized on a base material (hereinafter referred to as a carrier) on which the polymer P of the present invention is supported. Examples of the physiologically active substance include sugars, sugars, sugar chains, peptides, proteins, nucleic acids, cells, lipids and the like. Examples of sugar chains or substances containing sugar chains include monosaccharides, sugar chains having two or more sugars, sugar amino acids, glycopeptides, glycoproteins, glycolipids, glycosaminoglycans, glycosylphosphatidylinositol, peptidoglycans, lipopolysaccharides, and so on. There are derivatives of them. In addition, a physiologically active substance or a physiologically active substance-containing substance may be immobilized on the polymer P in advance to prepare a physiologically active substance-immobilized polymer, and then this may be supported on a base material. Such a bioactive substance-immobilized polymer can be used alone as a polymer for capturing biological substances in the form of particles or the like without being supported on a base material.
基材表面に担持した本発明のポリマーＰにおける生理活性物質または生理活性物質含有物質を固定化する官能基が式（２）で表される構造単位であって、生理活性物質が、糖、糖質、糖鎖などの還元末端と反応する官能基を有する場合は、還元末端を有する生理活性物質をｐＨ４．０〜６．０の緩衝液中に溶解し、基材上にその溶液を室温〜１００℃、１０分〜２４時間静置することにより、生理活性物質をポリマーＰに固定化できる。 The functional group for immobilizing the physiologically active substance or the physiologically active substance-containing substance in the polymer P of the present invention supported on the surface of the base material is a structural unit represented by the formula (2), and the physiologically active substances are sugars and sugars. If it has a functional group that reacts with the reducing end such as quality or sugar chain, dissolve the physiologically active substance having the reducing end in a buffer solution having a pH of 4.0 to 6.0, and place the solution on the substrate at room temperature to room temperature. The bioactive substance can be immobilized on the polymer P by allowing it to stand at 100 ° C. for 10 minutes to 24 hours.
一方、ポリマーＰにおける生理活性物質または生理活性物質含有物質を固定化する官能基が、式（３）で表される活性エステル基など、求核性の官能基と反応する基である場合は、生理活性物質または生理活性物質含有物質は求核性の官能基を有する必要がある。求核性の官能基の一例としては、アミノ基が挙げられる。アミノ基を有する生理活性物質または生理活性物質含有物質をｐＨ７．０〜１０．０の緩衝液中に溶解し、基材上でその溶液を室温〜１００℃、１０分〜２４時間静置することにより、このような生理活性物質をポリマーＰに固定化できる。アミノ基を持たない生理活性物質または生理活性物質含有物質を用いる場合は、固定化の前にこれにアミノ基を導入する必要があるが、この場合アミノ基は生理活性物質または生理活性物質含有物質の末端に導入されることが好ましい。
こうして得られた生理活性物質または生理活性物質含有物質を固定化した担体は、十分な量の生理活性物質または生理活性物質含有物質が化学結合で強固に固定化され、さらに検出対象以外の非特異吸着を抑制できることから、該生理活性物質または生理活性物質含有物質と特異的に結合し得る物質を選択的に捕捉することができ、生体物質捕捉用担体として使用できる。例えば、担体が板状である場合、バイオチップとして好適に用いることができる。
On the other hand, when the functional group that immobilizes the physiologically active substance or the physiologically active substance-containing substance in the polymer P is a group that reacts with a nucleophilic functional group such as an active ester group represented by the formula (3), The bioactive substance or the bioactive substance-containing substance must have a nucleophilic functional group. An example of a nucleophilic functional group is an amino group. A bioactive substance having an amino group or a bioactive substance-containing substance is dissolved in a buffer solution having a pH of 7.0 to 10.0, and the solution is allowed to stand on a substrate at room temperature to 100 ° C. for 10 minutes to 24 hours. Therefore, such a physiologically active substance can be immobilized on the polymer P. When a bioactive substance or a bioactive substance-containing substance having no amino group is used, it is necessary to introduce an amino group into the bioactive substance before immobilization. In this case, the amino group is a bioactive substance or a bioactive substance-containing substance. It is preferably introduced at the end of.
In the carrier on which the physiologically active substance or the physiologically active substance-containing substance thus obtained is immobilized, a sufficient amount of the physiologically active substance or the physiologically active substance-containing substance is firmly immobilized by a chemical bond, and further, non-specific other than the detection target Since the adsorption can be suppressed, a substance capable of specifically binding to the physiologically active substance or the physiologically active substance-containing substance can be selectively captured, and can be used as a carrier for capturing biological substances. For example, when the carrier is plate-shaped, it can be suitably used as a biochip.
本発明において生理活性物質または生理活性物質含有物質をバイオチップ用担体上に固定化する際には、生理活性物質または生理活性物質含有物質を溶解または分散した液体を点着する方法を用いることが好ましい。点着後、静置すると、生理活性物質または生理活性物質含有物質が担体上の官能基と化学的に結合し、生理活性物質または生理活性物質含有物質が表面に固定化される。 In the present invention, when the physiologically active substance or the physiologically active substance-containing substance is immobilized on the carrier for biochip, a method of instilling a liquid in which the physiologically active substance or the physiologically active substance-containing substance is dissolved or dispersed is used. preferable. After instillation, when the substance is allowed to stand, the physiologically active substance or the physiologically active substance-containing substance is chemically bonded to the functional group on the carrier, and the physiologically active substance or the physiologically active substance-containing substance is immobilized on the surface.
生理活性物質または生理活性物質含有物質をバイオチップ用担体上に固定化した後は、生理活性物質または生理活性物質含有物質を固定化した部分以外の担体表面の官能基を不活性化処理するのが好ましい。例えば、担体の官能基が活性エステル基やアルデヒド基などの場合はアルカリ化合物、あるいは一級アミノ基を有する化合物で行うことが好ましい。 After the bioactive substance or the bioactive substance-containing substance is immobilized on the carrier for biochip, the functional groups on the surface of the carrier other than the portion on which the physiologically active substance or the physiologically active substance-containing substance is immobilized are inactivated. Is preferable. For example, when the functional group of the carrier is an active ester group, an aldehyde group, or the like, it is preferable to use an alkaline compound or a compound having a primary amino group.
アルカリ化合物としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、ホウ酸ナトリウム、水酸化リチウム、リン酸カリウムなどを好ましく用いることができる。一級アミノ基を有する化合物としては、メチルアミン、エチルアミン、ブチルアミン、グリシン、９−アミノアクアジン、アミノブタノール、４−アミノ酪酸、アミノカプリル酸、アミノエタノール、５−アミノ−２，３−ジヒドロ−１，４−ペンタノール、アミノエタンチオール塩酸塩、アミノエタンチオール硫酸、２−（２−アミノエチルアミノ）エタノール、リン酸二水素２−アミノエチル、硫酸水素アミノエチル、４−（２−アミノエチル）モルホリン、５−アミノフルオレセイン、６−アミノヘキサン酸、アミノヘキシルセルロース、ｐ−アミノ馬尿酸、２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−１，３−プロパンジオール、５−アミノイソフタル酸、アミノメタン、アミノフェノール、２−アミノオクタン、２−アミノオクタン酸、１−アミノ−２−プロパノール、３−アミノ−１−プロパノール、３−アミノプロペン、３−アミノプロピオニトリル、アミノピリジン、１１−アミノウンデカン酸、アミノサリチル酸、アミノキノリン、４−アミノフタロニトリル、３−アミノフタルイミド、ｐ−アミノプロピオフェノン、アミノフェニル酢酸、アミノナフタレンなどを好ましく用いることができ、アミノエタノール、グリシンが最も好ましい。 As the alkaline compound, sodium hydroxide, potassium hydroxide, sodium carbonate, sodium hydrogen carbonate, disodium hydrogen phosphate, calcium hydroxide, magnesium hydroxide, sodium borate, lithium hydroxide, potassium phosphate and the like are preferably used. Can be done. Compounds having a primary amino group include methylamine, ethylamine, butylamine, glycine, 9-aminoaquadin, aminobutanol, 4-aminobutyric acid, aminocaprylic acid, aminoethanol, 5-amino-2,3-dihydro-1. , 4-Pentanol, Aminoethanethiol hydrochloride, Aminoethanethiol sulfate, 2- (2-aminoethylamino) ethanol, 2-aminoethyl dihydrogen phosphate, Aminoethyl hydrogensulfate, 4- (2-Aminoethyl) Morpholine, 5-aminofluoresein, 6-aminohexanoic acid, aminohexyl cellulose, p-amino horseuric acid, 2-amino-2-hydroxymethyl-1,3-propanediol, 5-aminoisophthalic acid, aminomethane, aminophenol , 2-Aminooctane, 2-Aminooctanoic acid, 1-Amino-2-propanol, 3-Amino-1-propanol, 3-Aminopropene, 3-Aminopropionitrile, Aminopyridine, 11-Aminoundecanoic acid, Amino Salicylic acid, aminoquinoline, 4-aminophthalonitrile, 3-aminophthalimide, p-aminopropiophenone, aminophenylacetic acid, aminonaphthalene and the like can be preferably used, with aminoethanol and glycine being the most preferred.
また、担体の官能基がヒドラジド基又はアミノオキシ基などの場合は、例えば、酸無水物との反応やオキソ酸との縮合により行うことができる。酸無水物は特に限定されないが、反応性からカルボン酸無水物が好ましい。カルボン酸無水物の例としては、無水酢酸、無水プロピオン酸、無水コハク酸、無水マレイン酸、無水フタル酸、無水安息香酸などが挙げられるが、中でも無水酢酸、無水コハク酸がより好ましい。また、オキソ酸も特に限定されないが、反応性からカルボン酸が好ましい。カルボン酸の例としては、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、カプロン酸、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸等が挙げられるが、中でもギ酸、酢酸が好ましい。 When the functional group of the carrier is a hydrazide group or an aminooxy group, it can be carried out, for example, by reaction with an acid anhydride or condensation with an oxo acid. The acid anhydride is not particularly limited, but a carboxylic acid anhydride is preferable from the viewpoint of reactivity. Examples of carboxylic acid anhydrides include acetic anhydride, propionic anhydride, succinic anhydride, maleic anhydride, phthalic anhydride, benzoic anhydride and the like, with acetic anhydride and succinic anhydride being more preferred. The oxo acid is also not particularly limited, but a carboxylic acid is preferable from the viewpoint of reactivity. Examples of the carboxylic acid include formic acid, acetic acid, propionic acid, butyric acid, valeric acid, caproic acid, benzoic acid, hydroxybenzoic acid and the like, but formic acid and acetic acid are preferable.
また、前記不活性化処理工程では、担体の官能基と結合しなかった生理活性物質または生理活性物質含有物質も同時に洗浄・除去することができることが多い。除去できない場合は、不活性化処理前に基材を洗浄することで除去することが好ましい。例えば担体を超純水、界面活性剤含有緩衝液等で１〜５分間浸漬し洗浄することで、除去できる。 Further, in the inactivation treatment step, it is often possible to simultaneously wash and remove the physiologically active substance or the physiologically active substance-containing substance that has not been bound to the functional group of the carrier. If it cannot be removed, it is preferably removed by washing the substrate before the inactivation treatment. For example, the carrier can be removed by immersing the carrier in ultrapure water, a surfactant-containing buffer solution, or the like for 1 to 5 minutes and washing.
生理活性物質固定化担体は、上記ポリマーＰを準備する工程と、前記ポリマーＰを、基材の表面に担持させる工程と、前記ポリマーＰが担持された基材（担体）に、生理活性物質を固定化する工程と、前記生理活性物質が固定化された前記担体を純水またはバッファで洗浄する工程を用いて作製され得る。
純水またはバッファで洗浄する工程としては、上記のように担体の官能基と結合しなかった生理活性物質または生理活性物質含有物質も同時に洗浄・除去する工程や、過剰な検出対象物または非検出対象物を洗浄・除去する工程が挙げられる。また、担体は、前記記載のとおり、基材上に重合性官能基や連鎖移動基等を導入し、基材上で上記ポリマーＰを合成することにより作製してもよいし、あらかじめポリマーＰに生理活性物質または生理活性物質含有物質を固定化し、その後基材に担持させてもよい。
The physiologically active substance-immobilized carrier includes a step of preparing the polymer P, a step of supporting the polymer P on the surface of the base material, and a step of supporting the polymer P on the base material (carrier) on which the polymer P is supported. It can be produced by using a step of immobilizing and a step of washing the carrier on which the physiologically active substance is immobilized with pure water or a buffer.
As a step of washing with pure water or a buffer, as described above, a step of simultaneously washing and removing a physiologically active substance or a substance containing a physiologically active substance that has not been bonded to the functional group of the carrier, or an excessive detection target or non-detection An example is a step of cleaning / removing an object. Further, as described above, the carrier may be prepared by introducing a polymerizable functional group, a chain transfer group or the like on the base material and synthesizing the polymer P on the base material, or the carrier may be prepared in advance on the polymer P. The physiologically active substance or the physiologically active substance-containing substance may be immobilized and then supported on a substrate.
このように生理活性物質または生理活性物質含有物質を固定化することによって得られた基材は免疫診断システム、マイクロアレイシステム、マイクロフルイディスクデバイスを含めた多くの分析システムにおいて使用することができる。 The substrate obtained by immobilizing the bioactive substance or the bioactive substance-containing substance in this manner can be used in many analytical systems including an immunodiagnostic system, a microarray system, and a microflui disk device.
上記コーティング組成物を基材に塗布し、乾燥して得られるポリマーＰを含むポリマー層、または上述のような生理活性物質固定化ポリマーを含む生体分子捕捉ポリマー層の厚みは、親水性の発現とポリマー層または生体分子捕捉ポリマー層の均一性の観点から、１ｎｍ以上１００ｎｍ以下とすることができる。ポリマーＰを含むポリマー層または生理活性物質固定化ポリマー層の厚みは、基材の用途に基づいて適宜変更することができる。 The thickness of the polymer layer containing the polymer P obtained by applying the above coating composition to the substrate and drying it, or the biomolecule trapping polymer layer containing the biomolecule-capturing polymer as described above is the expression of hydrophilicity. From the viewpoint of the uniformity of the polymer layer or the biomolecule trapping polymer layer, it can be 1 nm or more and 100 nm or less. The thickness of the polymer layer containing the polymer P or the bioactive substance-immobilized polymer layer can be appropriately changed depending on the use of the base material.
上記表面修飾された基材は、ポリマーＰを含むポリマー層または生理活性物質固定化ポリマーを含む生体分子捕捉ポリマー層を設けることにより、その表面の純水に対する接触角を、５°以上８０°以下とすることができる。
ここで、本発明において、優れた親水性とは、純水との接触角が８０°以下の水濡れ性を呈する状態をいう。接触角の測定方法は、公知の方法を採用でき、たとえば、協和界面化学株式会社製「ＣＡ−Ｚ」等の市販の装置を用いて測定する方法を採用することができる。上記方法により、純水に対する接触角が８０°以下であれば、ポリマーＰ又は生理活性物質固定化ポリマーは優れた親水性を有し、優れた生体適合性を有すると判断することができる。
なお、好ましくは、この接触角は、５°以上６０°以下であり、さらに好ましくは５°以上４０°以下である。ポリマーＰを含むポリマー層、または生理活性物質固定化ポリマー層の接触角は、基材の用途に基づいて変更することができ、例えば、ポリマーＰを含むポリマー層、生理活性物質固定化ポリマー層の厚み、ポリマーＰを構成するモノマーの種類およびその組成、ポリマー層の形成方法等を選択することにより、調整できる。
The surface-modified substrate is provided with a polymer layer containing polymer P or a biomolecule-capturing polymer layer containing a bioactive substance-immobilized polymer, so that the contact angle of the surface with pure water is 5 ° or more and 80 ° or less. Can be.
Here, in the present invention, the excellent hydrophilicity refers to a state in which the contact angle with pure water exhibits water wettability of 80 ° or less. As a method for measuring the contact angle, a known method can be adopted, and for example, a method for measuring using a commercially available device such as "CA-Z" manufactured by Kyowa Surface Chemistry Co., Ltd. can be adopted. According to the above method, if the contact angle with respect to pure water is 80 ° or less, it can be determined that the polymer P or the bioactive substance-immobilized polymer has excellent hydrophilicity and has excellent biocompatibility.
The contact angle is preferably 5 ° or more and 60 ° or less, and more preferably 5 ° or more and 40 ° or less. The contact angle of the polymer layer containing the polymer P or the physiologically active substance-immobilized polymer layer can be changed based on the use of the substrate, for example, the polymer layer containing the polymer P or the physiologically active substance-immobilized polymer layer. It can be adjusted by selecting the thickness, the type and composition of the monomers constituting the polymer P, the method for forming the polymer layer, and the like.
より具体的には、本実施形態のポリマーＰまたは生理活性物質固定化ポリマーは、ポリスチレン基板に、ポリマーＰ又は生理活性物質固定化ポリマーの０．３重量％水またはアルコール溶液を塗布し、乾燥したとき、このポリスチレン基板の、純水に対する接触角が、５°以上８０°以下となり得る。好ましくは、この接触角は、５°以上６０°以下であり、より好ましくは、５°以上４０°以下である。 More specifically, the polymer P or the physiologically active substance-immobilized polymer of the present embodiment was dried by applying a 0.3% by weight water or alcohol solution of the polymer P or the physiologically active substance-immobilized polymer to a polystyrene substrate. At that time, the contact angle of this polystyrene substrate with respect to pure water can be 5 ° or more and 80 ° or less. Preferably, the contact angle is 5 ° or more and 60 ° or less, and more preferably 5 ° or more and 40 ° or less.
ポリマーＰは、特定の生理活性物質を固定化し得る機能を有するとともに、優れた親水性を有し、生体適合性材料として有用である。そのため、ポリマーＰが塗布された基材は、生体活性物質を固定化してバイオアッセイ用機器等の物品として使用され得る。 Polymer P has a function of immobilizing a specific physiologically active substance and has excellent hydrophilicity, and is useful as a biocompatible material. Therefore, the base material coated with the polymer P can be used as an article such as a bioassay device by immobilizing a bioactive substance.
以上、本発明の実施形態について述べたが、これらは本発明の例示であり、上記以外の様々な構成を採用することもできる。
以下、実施形態の例を付記する。
１． 構造単位Ａおよび構造単位Ｂを含む共重合体であって、
構造単位Ａは、式（１）で表される構造単位であり、
構造単位Ｂは、式（２）で表される構造単位および式（３）で表される構造単位から選択される少なくとも１つの構造単位である、共重合体：
２． 式（４）で表される構造単位Ｃを含む、１．に記載の共重合体。
３． 式（５）で表される構造単位Ｄを含む、１．または２．に記載の共重合体。
４． 式（６）で表される構造単位および式（７）で表される構造単位から選択される少なくとも１つの構造単位Ｅを含む、１．〜３．のいずれかに記載の共重合体。
５． 式（８）で表される構造単位Ｆを含む、１．〜４．のいずれかに記載の共重合体。
６． ポリスチレン基板に、０．３ｗｔ％水またはアルコール溶液を塗布し、乾燥したとき、当該共重合体が塗布された前記ポリスチレン基板の、純水に対する接触角が、５°以上８０°以下である、１．〜５．のいずれかに記載の共重合体。
７． １．〜６．のいずれかに記載の共重合体と、前記共重合体に固定化された生理活性物質とを含む、生体分子捕捉用の生理活性物質固定化ポリマー。
８． １．〜６．のいずれかに記載の共重合体および溶剤を含む、コーティング組成物。
９． ７．に記載の生理活性物質固定化ポリマーおよび溶剤を含む、コーティング組成物。
１０． 基材と、前記基材上に形成された１．〜６．のいずれかに記載の共重合体を含むポリマー層とを備える物品。
１１． 前記ポリマー層の、純水に対する接触角が、５°以上８０°以下である、１０．に記載の物品。
１２． 前記ポリマー層が、１ｎｍ以上１００ｎｍ以下の厚みを有する、１０．または１１．に記載の物品。
１３． バイオアッセイ用である、１０．〜１２．のいずれかに記載の物品。
１４． 前記ポリマー層に固定化された生理活性物質をさらに含む、１０．〜１３．のいずれかに記載の物品。
１５． 基材と、前記基材上に形成された７．に記載の生理活性物質固定化ポリマーを含む生理活性物質固定化ポリマー層とを備える物品。
１６． 前記生理活性物質固定化ポリマー層の、純水に対する接触角が、５°以上８０°以下である、１５．に記載の物品。
１７． 前記生理活性物質固定化ポリマー層が、１ｎｍ以上１００ｎｍ以下の厚みを有する、１５．または１６．に記載の物品。
１８． バイオアッセイ用である、１５．〜１７．のいずれかに記載の物品。
Although the embodiments of the present invention have been described above, these are examples of the present invention, and various configurations other than the above can be adopted.
Hereinafter, an example of the embodiment will be added.
1. 1. A copolymer containing structural unit A and structural unit B.
The structural unit A is a structural unit represented by the equation (1), and is a structural unit.
The structural unit B is at least one structural unit selected from the structural unit represented by the formula (2) and the structural unit represented by the formula (3).
2. 1. Including the structural unit C represented by the formula (4). The copolymer according to.
3. 3. 1. Including the structural unit D represented by the formula (5). Or 2. The copolymer according to.
4. 1. The structural unit E including at least one structural unit selected from the structural unit represented by the formula (6) and the structural unit represented by the formula (7). ~ 3. The copolymer according to any one of.
5. 1. Including the structural unit F represented by the formula (8). ~ 4. The copolymer according to any one of.
6. When a polystyrene substrate is coated with a 0.3 wt% water or alcohol solution and dried, the contact angle of the polystyrene substrate coated with the copolymer with respect to pure water is 5 ° or more and 80 ° or less. .. ~ 5. The copolymer according to any one of.
7. 1. 1. ~ 6. A biomolecular-capturing bioactive substance-immobilized polymer comprising the copolymer according to any one of the above and a bioactive substance immobilized on the copolymer.
8. 1. 1. ~ 6. A coating composition comprising the copolymer and solvent according to any one of.
9. 7. A coating composition comprising a bioactive substance-immobilized polymer and a solvent according to.
10. A base material and 1. formed on the base material. ~ 6. An article comprising a polymer layer containing the copolymer according to any one of.
11. The contact angle of the polymer layer with pure water is 5 ° or more and 80 ° or less. Articles listed in.
12. 10. The polymer layer has a thickness of 1 nm or more and 100 nm or less. Or 11. Articles listed in.
13. For bioassays 10. ~ 12. The article described in any of.
14. 10. Further containing a physiologically active substance immobilized on the polymer layer. ~ 13. The article described in any of.
15. 7. The base material and the base material formed on the base material. An article comprising a bioactive substance-immobilized polymer layer comprising the bioactive substance-immobilized polymer according to.
16. The contact angle of the bioactive substance-immobilized polymer layer with respect to pure water is 5 ° or more and 80 ° or less. Articles listed in.
17. The bioactive substance-immobilized polymer layer has a thickness of 1 nm or more and 100 nm or less. Or 16. Articles listed in.
18. For bioassay, 15. ~ 17. The article described in any of.
以下、実施例を参照して本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの例示に限定されるものではない。 Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to Examples, but the present invention is not limited to these examples.
（合成例１）
（ＨＥＡＡ／ＡＥＧ／シランカップリング剤ポリマーの合成）
２．１２ｇ（１８．４ｍｍｏｌ）のＮ−（２−ヒドロキシエチル）アクリルアミド（ＨＥＡＡ、東京化成工業製）、０．４７ｇ（１．０ｍｍｏｌ）のｐ−ニトロフェニルオキシカルボニル−４，５−ポリエチレングリコールメタクリレート（ＡＥＧ、株式会社ナード研究所製）、０．１３５ｇ（０．６ｍｍｏｌ）の３−（メタクリロキシ）プロピルジメチルメトキシシラン（Ｇｅｌｅｓｔ社製）、および０．０６６ｇ（０．４ｍｍｏｌ）の２，２'−アゾビス（イソブチロニトリル）をエタノール１０ｍＬに溶解させた後、得られた混合溶液を反応容器内に導入した。次に、１０分間アルゴンガスを吹き込んだ後密閉し、６０℃で２０時間反応させた。
得られた溶液を、撹拌しながら、ヘキサン：アセトン：エタノール混合溶媒（体積比６：３：１）４００ｍＬ中に徐々に滴下し、滴下終了後１時間撹拌した後、静置して析出物を沈降させた。上清を除去し、残った析出物をエタノール２００ｍＬに再溶解し、エバポレーターで濃縮して、目的のポリマーを含むエタノール溶液を得た。得られたポリマー溶液の一部をサンプル瓶に移し、４８時間真空乾燥させた後の重量を測定して、このポリマー溶液の濃度を算出し、この値を基に、塗布用の０．３ｗｔ％エタノール溶液を作製した。
(Synthesis Example 1)
(Synthesis of HEAA / AEG / Silane Coupling Polymer)
2.12 g (18.4 mmol) of N- (2-hydroxyethyl) acrylamide (HEAA, manufactured by Tokyo Chemical Industry), 0.47 g (1.0 mmol) of p-nitrophenyloxycarbonyl-4,5-polyethylene glycol methacrylate (AEG, manufactured by Nard Laboratory Co., Ltd.), 0.135 g (0.6 mmol) of 3- (methacryloxy) propyldimethylmethoxysilane (manufactured by Gelest), and 0.066 g (0.4 mmol) of 2,2'-. After dissolving azobis (isobutyronitrile) in 10 mL of ethanol, the obtained mixed solution was introduced into a reaction vessel. Next, after blowing argon gas for 10 minutes, the mixture was sealed and reacted at 60 ° C. for 20 hours.
The obtained solution was gradually added dropwise to 400 mL of a hexane: acetone: ethanol mixed solvent (volume ratio 6: 3: 1) with stirring, and after the completion of the addition, the mixture was stirred for 1 hour and then allowed to stand to form a precipitate. It was settled. The supernatant was removed, the remaining precipitate was redissolved in 200 mL of ethanol, and concentrated with an evaporator to obtain an ethanol solution containing the desired polymer. A part of the obtained polymer solution was transferred to a sample bottle, vacuum dried for 48 hours, and then weighed to calculate the concentration of this polymer solution. Based on this value, 0.3 wt% for coating was used. An ethanol solution was prepared.
（合成例２）
（ＨＥＡＡ／ＡＥＧ／シランカップリング剤／ＭＰＣポリマーの合成）
０．５７６ｇ（５ｍｍｏｌ）のＮ−（２−ヒドロキシエチル）アクリルアミド（ＨＥＡＡ、東京化成工業製）、０．２３５ｇ（０．５ｍｍｏｌ）のｐ−ニトロフェニルオキシカルボニル−４，５−ポリエチレングリコールメタクリレート（ＡＥＧ、株式会社ナード研究所製）、０．１１４ｇ（０．５ｍｍｏｌ）の３−（メタクリロキシ）プロピルジメチルメトキシシラン（Ｇｅｌｅｓｔ社製）、１．１８ｇ（４ｍｍｏｌ）の２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）、および０．０３３ｇ（０．２ｍｍｏｌ）の２，２'−アゾビス（イソブチロニトリル）をエタノール１０ｍＬに溶解させた後、得られた混合溶液を反応容器内に導入した。次に、１０分間アルゴンガスを吹き込んだ後密閉し、６０℃で２０時間反応させた。
得られた溶液を、撹拌しながら、ヘキサン：アセトン：エタノール混合溶媒（体積比６：３：１）４００ｍＬ中に徐々に滴下し、滴下終了後１時間撹拌した後、静置して析出物を沈降させた。上清を除去し、残った析出物をエタノール２００ｍＬに再溶解し、エバポレーターで濃縮して、目的のポリマーを含むエタノール溶液を得た。得られたポリマー溶液の一部をサンプル瓶に移し、４８時間真空乾燥させた後の重量を測定して、このポリマー溶液の濃度を算出し、この値を基に、塗布用の０．３ｗｔ％エタノール溶液を作製した。
(Synthesis Example 2)
(Synthesis of HEAA / AEG / Silane Coupling Agent / MPC Polymer)
0.576 g (5 mmol) of N- (2-hydroxyethyl) acrylamide (HEAA, manufactured by Tokyo Chemical Industry), 0.235 g (0.5 mmol) of p-nitrophenyloxycarbonyl-4,5-polyethylene glycol methacrylate (AEG) , Nard Laboratory Co., Ltd., 0.114 g (0.5 mmol) of 3- (methacryloxy) propyldimethylmethoxysilane (manufactured by Gelest), 1.18 g (4 mmol) of 2-methacryloyloxyethyl phosphorylcholine (MPC), After dissolving 0.033 g (0.2 mmol) of 2,2'-azobis (isobutyronitrile) in 10 mL of ethanol, the obtained mixed solution was introduced into a reaction vessel. Next, after blowing argon gas for 10 minutes, the mixture was sealed and reacted at 60 ° C. for 20 hours.
The obtained solution was gradually added dropwise to 400 mL of a hexane: acetone: ethanol mixed solvent (volume ratio 6: 3: 1) with stirring, and after the completion of the addition, the mixture was stirred for 1 hour and then allowed to stand to form a precipitate. It was settled. The supernatant was removed, the remaining precipitate was redissolved in 200 mL of ethanol, and concentrated with an evaporator to obtain an ethanol solution containing the desired polymer. A part of the obtained polymer solution was transferred to a sample bottle, vacuum dried for 48 hours, and then weighed to calculate the concentration of this polymer solution. Based on this value, 0.3 wt% for coating was used. An ethanol solution was prepared.
（合成例３）
（ＨＥＡＡ／ＡＥＧ／シランカップリング剤／ＰＥＧポリマーの合成）
０．５７６ｇ（５ｍｍｏｌ）のＮ−（２−ヒドロキシエチル）アクリルアミド（ＨＥＡＡ、東京化成工業製）、０．２３５ｇ（０．５ｍｍｏｌ）のｐ−ニトロフェニルオキシカルボニル−４，５−ポリエチレングリコールメタクリレート（ＡＥＧ、株式会社ナード研究所製）、０．１１４ｇ（０．５ｍｍｏｌ）の３−（メタクリロキシ）プロピルジメチルメトキシシラン（Ｇｅｌｅｓｔ社製）、１．８７ｇ（４ｍｍｏｌ）のポリエチレングリコールメチルエーテルメタクリレート（分子量４７５、アルドリッチ社製）、および０．０３３ｇ（０．２ｍｍｏｌ）の２，２'−アゾビス（イソブチロニトリル）をエタノール１０ｍＬに溶解させた後、得られた混合溶液を反応容器内に導入した。次に、１０分間アルゴンガスを吹き込んだ後密閉し、６０℃で２０時間反応させた。
得られた溶液を、撹拌しながら、ヘキサン：アセトン：エタノール混合溶媒（体積比６：３：１）４００ｍＬ中に徐々に滴下し、滴下終了後１時間撹拌した後、静置して析出物を沈降させた。上清を除去し、残った析出物をエタノール２００ｍＬに再溶解し、エバポレーターで濃縮して、目的のポリマーを含むエタノール溶液を得た。得られたポリマー溶液の一部をサンプル瓶に移し、４８時間真空乾燥させた後の重量を測定して、このポリマー溶液の濃度を算出し、この値を基に、塗布用の０．３ｗｔ％エタノール溶液を作製した。
(Synthesis Example 3)
(Synthesis of HEAA / AEG / Silane Coupling Agent / PEG Polymer)
0.576 g (5 mmol) of N- (2-hydroxyethyl) acrylamide (HEAA, manufactured by Tokyo Chemical Industry), 0.235 g (0.5 mmol) of p-nitrophenyloxycarbonyl-4,5-polyethylene glycol methacrylate (AEG) , Nard Laboratory Co., Ltd., 0.114 g (0.5 mmol) of 3- (methacryloxy) propyldimethylmethoxysilane (manufactured by Gelest), 1.87 g (4 mmol) of polyethylene glycol methyl ether methacrylate (molecular weight 475, aldrich) , And 0.033 g (0.2 mmol) of 2,2'-azobis (isobutyronitrile) was dissolved in 10 mL of ethanol, and then the obtained mixed solution was introduced into a reaction vessel. Next, after blowing argon gas for 10 minutes, the mixture was sealed and reacted at 60 ° C. for 20 hours.
The obtained solution was gradually added dropwise to 400 mL of a hexane: acetone: ethanol mixed solvent (volume ratio 6: 3: 1) with stirring, and after the completion of the addition, the mixture was stirred for 1 hour and then allowed to stand to form a precipitate. It was settled. The supernatant was removed, the remaining precipitate was redissolved in 200 mL of ethanol, and concentrated with an evaporator to obtain an ethanol solution containing the desired polymer. A part of the obtained polymer solution was transferred to a sample bottle, vacuum dried for 48 hours, and then weighed to calculate the concentration of this polymer solution. Based on this value, 0.3 wt% for coating was used. An ethanol solution was prepared.
（合成例４）
（ＨＥＡＡ／アミノオキシ／シランカップリング剤ポリマーの合成）
０．８６４ｇ（７．５ｍｍｏｌ）のＮ−（２−ヒドロキシエチル）アクリルアミド（ＨＥＡＡ、東京化成工業製）、０．８６４ｇ（２ｍｍｏｌ）のＮ−［２−［２−［２−（ｔ−ブトキシカルボニルアミノオキシアセチルアミノ）エトキシ］エトキシ］エチル］−メタクリルアミド（アミノオキシ、株式会社ナード研究所製）、０．１１４ｇ（０．５ｍｍｏｌ）の３−（メタクリロキシ）プロピルジメチルメトキシシラン（Ｇｅｌｅｓｔ社製）、および０．０３３ｇ（０．２ｍｍｏｌ）の２，２'−アゾビス（イソブチロニトリル）をエタノール７ｍＬに溶解させた後、得られた混合溶液を反応容器内に導入した。次に、１０分間アルゴンガスを吹き込んだ後密閉し、６０℃で２０時間反応させた。
得られた溶液を、撹拌しながら、ヘキサン：アセトン：エタノール混合溶媒（体積比６：３：１）４００ｍＬ中に徐々に滴下し、滴下終了後１時間撹拌した後、静置して析出物を沈降させた。上清を除去し、残った析出物をエタノール２００ｍＬに再溶解し、エバポレーターで濃縮して、目的のポリマーを含むエタノール溶液を得た。得られたポリマー溶液の一部をサンプル瓶に移し、４８時間真空乾燥させた後の重量を測定して、このポリマー溶液の濃度を算出し、この値を基に、塗布用の０．３ｗｔ％エタノール溶液を作製した。
(Synthesis Example 4)
(Synthesis of HEAA / Aminooxy / Silane Coupling Polymer)
0.864 g (7.5 mmol) of N- (2-hydroxyethyl) acrylamide (HEAA, manufactured by Tokyo Chemical Industry), 0.864 g (2 mmol) of N- [2- [2- [2- (t-butoxycarbonyl)) Aminooxyacetylamino) ethoxy] ethoxy] ethyl] -methacrylamide (Aminooxy, manufactured by Nard Laboratory Co., Ltd.), 0.114 g (0.5 mmol) of 3- (methacryloxy) propyldimethylmethoxysilane (manufactured by Gelest), And 0.033 g (0.2 mmol) of 2,2'-azobis (isobutyronitrile) was dissolved in 7 mL of ethanol, and then the obtained mixed solution was introduced into a reaction vessel. Next, after blowing argon gas for 10 minutes, the mixture was sealed and reacted at 60 ° C. for 20 hours.
The obtained solution was gradually added dropwise to 400 mL of a hexane: acetone: ethanol mixed solvent (volume ratio 6: 3: 1) with stirring, and after the completion of the addition, the mixture was stirred for 1 hour and then allowed to stand to form a precipitate. It was settled. The supernatant was removed, the remaining precipitate was redissolved in 200 mL of ethanol, and concentrated with an evaporator to obtain an ethanol solution containing the desired polymer. A part of the obtained polymer solution was transferred to a sample bottle, vacuum dried for 48 hours, and then weighed to calculate the concentration of this polymer solution. Based on this value, 0.3 wt% for coating was used. An ethanol solution was prepared.
（合成例５）
（ＨＥＡＡ／ＡＥＧ／ＢＭＡポリマーの合成）
０．５７６ｇ（５ｍｍｏｌ）のＮ−（２−ヒドロキシエチル）アクリルアミド（ＨＥＡＡ、東京化成工業製）、０．２３５ｇ（０．５ｍｍｏｌ）のｐ−ニトロフェニルオキシカルボニル−４，５−ポリエチレングリコールメタクリレート（ＡＥＧ、株式会社ナード研究所製）、０．６４ｇ（４．５ｍｍｏｌ）のメタクリル酸ｎ−ブチル（ＢＭＡ、関東化学株式会社製）、０．０３３ｇ（０．２ｍｍｏｌ）の２，２'−アゾビス（イソブチロニトリル）をエタノール７ｍＬに溶解させた後、得られた混合溶液を反応容器内に導入した。次に、１０分間アルゴンガスを吹き込んだ後密閉し、６０℃で２０時間反応させた。
得られた溶液を、撹拌しながら、ヘキサン：アセトン：エタノール混合溶媒（体積比６：３：１）４００ｍＬ中に徐々に滴下し、滴下終了後１時間撹拌した後、静置して析出物を沈降させた。上清を除去し、残った析出物をエタノール２００ｍＬに再溶解し、エバポレーターで濃縮して、目的のポリマーを含むエタノール溶液を得た。得られたポリマー溶液の一部をサンプル瓶に移し、４８時間真空乾燥させた後の重量を測定して、このポリマー溶液の濃度を算出し、この値を基に、塗布用の０．３ｗｔ％エタノール溶液を作製した。
(Synthesis Example 5)
(Synthesis of HEAA / AEG / BMA polymer)
0.576 g (5 mmol) of N- (2-hydroxyethyl) acrylamide (HEAA, manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.), 0.235 g (0.5 mmol) of p-nitrophenyloxycarbonyl-4,5-polyethylene glycol methacrylate (AEG) , Nard Laboratory Co., Ltd., 0.64 g (4.5 mmol) of n-butyl methacrylate (BMA, manufactured by Kanto Chemical Co., Inc.), 0.033 g (0.2 mmol) of 2,2'-azobis (iso) Butylnitrile) was dissolved in 7 mL of ethanol, and then the obtained mixed solution was introduced into a reaction vessel. Next, after blowing argon gas for 10 minutes, the mixture was sealed and reacted at 60 ° C. for 20 hours.
The obtained solution was gradually added dropwise to 400 mL of a hexane: acetone: ethanol mixed solvent (volume ratio 6: 3: 1) with stirring, and after the completion of the addition, the mixture was stirred for 1 hour and then allowed to stand to form a precipitate. It was settled. The supernatant was removed, the remaining precipitate was redissolved in 200 mL of ethanol, and concentrated with an evaporator to obtain an ethanol solution containing the desired polymer. A part of the obtained polymer solution was transferred to a sample bottle, vacuum dried for 48 hours, and then weighed to calculate the concentration of this polymer solution. Based on this value, 0.3 wt% for coating was used. An ethanol solution was prepared.
（合成例６）
（ＨＥＡＡ／ＡＥＧポリマーの合成１）
１．１ｇ（９．５ｍｍｏｌ）のＮ−（２−ヒドロキシエチル）アクリルアミド（ＨＥＡＡ、東京化成工業製）、０．２３５ｇ（０．５ｍｍｏｌ）のｐ−ニトロフェニルオキシカルボニル−４，５−ポリエチレングリコールメタクリレート（ＡＥＧ、株式会社ナード研究所製）、０．０３３ｇ（０．２ｍｍｏｌ）の２，２'−アゾビス（イソブチロニトリル）をエタノール７ｍＬに溶解させた後、得られた混合溶液を反応容器内に導入した。次に、１０分間アルゴンガスを吹き込んだ後密閉し、６０℃で２０時間反応させた。
得られた溶液を、撹拌しながら、ヘキサン：アセトン：エタノール混合溶媒（体積比６：３：１）４００ｍＬ中に徐々に滴下し、滴下終了後１時間撹拌した後、静置して析出物を沈降させた。上清を除去し、残った析出物をエタノール２００ｍＬに再溶解し、エバポレーターで濃縮して、目的のポリマーを含むエタノール溶液を得た。得られたポリマー溶液の一部をサンプル瓶に移し、４８時間真空乾燥させた後の重量を測定して、このポリマー溶液の濃度を算出し、この値を基に、塗布用の０．３ｗｔ％エタノール溶液を作製した。
(Synthesis Example 6)
(Synthesis of HEAA / AEG polymer 1)
1.1 g (9.5 mmol) of N- (2-hydroxyethyl) acrylamide (HEAA, manufactured by Tokyo Chemical Industry), 0.235 g (0.5 mmol) of p-nitrophenyloxycarbonyl-4,5-polyethylene glycol methacrylate (AEG, manufactured by Nard Laboratory Co., Ltd.), 0.033 g (0.2 mmol) of 2,2'-azobis (isobutyronitrile) was dissolved in 7 mL of ethanol, and then the obtained mixed solution was placed in a reaction vessel. Introduced in. Next, after blowing argon gas for 10 minutes, the mixture was sealed and reacted at 60 ° C. for 20 hours.
The obtained solution was gradually added dropwise to 400 mL of a hexane: acetone: ethanol mixed solvent (volume ratio 6: 3: 1) with stirring, and after the completion of the addition, the mixture was stirred for 1 hour and then allowed to stand to form a precipitate. It was settled. The supernatant was removed, the remaining precipitate was redissolved in 200 mL of ethanol, and concentrated with an evaporator to obtain an ethanol solution containing the desired polymer. A part of the obtained polymer solution was transferred to a sample bottle, vacuum dried for 48 hours, and then weighed to calculate the concentration of this polymer solution. Based on this value, 0.3 wt% for coating was used. An ethanol solution was prepared.
（合成例７）
（ＨＥＡＡ／ＡＥＧポリマーの合成２）
１．１４ｇ（９．９ｍｍｏｌ）のＮ−（２−ヒドロキシエチル）アクリルアミド（ＨＥＡＡ、東京化成工業製）、０．０４５ｇ（０．１ｍｍｏｌ）のｐ−ニトロフェニルオキシカルボニル−４，５−ポリエチレングリコールメタクリレート（ＡＥＧ、株式会社ナード研究所製）、０．０３３ｇ（０．２ｍｍｏｌ）の２，２'−アゾビス（イソブチロニトリル）をエタノール７ｍＬに溶解させた後、得られた混合溶液を反応容器内に導入した。次に、１０分間アルゴンガスを吹き込んだ後密閉し、６０℃で２０時間反応させた。
得られた溶液を、撹拌しながら、ヘキサン：アセトン：エタノール混合溶媒（体積比６：３：１）４００ｍＬ中に徐々に滴下し、滴下終了後１時間撹拌した後、静置して析出物を沈降させた。上清を除去し、残った析出物をエタノール２００ｍＬに再溶解し、エバポレーターで濃縮して、目的のポリマーを含むエタノール溶液を得た。得られたポリマー溶液の一部をサンプル瓶に移し、４８時間真空乾燥させた後の重量を測定して、このポリマー溶液の濃度を算出し、この値を基に、塗布用の０．３ｗｔ％エタノール溶液を作製した。
(Synthesis Example 7)
(Synthesis of HEAA / AEG polymer 2)
1.14 g (9.9 mmol) of N- (2-hydroxyethyl) acrylamide (HEAA, manufactured by Tokyo Chemical Industry), 0.045 g (0.1 mmol) of p-nitrophenyloxycarbonyl-4,5-polyethylene glycol methacrylate (AEG, manufactured by Nard Laboratory Co., Ltd.), 0.033 g (0.2 mmol) of 2,2'-azobis (isobutyronitrile) was dissolved in 7 mL of ethanol, and then the obtained mixed solution was placed in a reaction vessel. Introduced in. Next, after blowing argon gas for 10 minutes, the mixture was sealed and reacted at 60 ° C. for 20 hours.
The obtained solution was gradually added dropwise to 400 mL of a hexane: acetone: ethanol mixed solvent (volume ratio 6: 3: 1) with stirring, and after the completion of the addition, the mixture was stirred for 1 hour and then allowed to stand to form a precipitate. It was settled. The supernatant was removed, the remaining precipitate was redissolved in 200 mL of ethanol, and concentrated with an evaporator to obtain an ethanol solution containing the desired polymer. A part of the obtained polymer solution was transferred to a sample bottle, vacuum dried for 48 hours, and then weighed to calculate the concentration of this polymer solution. Based on this value, 0.3 wt% for coating was used. An ethanol solution was prepared.
（合成例８）
（ＨＥＡＡ／ＡＥＧポリマーの合成３）
１．１３ｇ（９．８ｍｍｏｌ）のＮ−（２−ヒドロキシエチル）アクリルアミド（ＨＥＡＡ、東京化成工業製）、０．０９０ｇ（０．２ｍｍｏｌ）のｐ−ニトロフェニルオキシカルボニル−４，５−ポリエチレングリコールメタクリレート（ＡＥＧ、株式会社ナード研究所製）、および０．０３３ｇ（０．２ｍｍｏｌ）の２，２'−アゾビス（イソブチロニトリル）をエタノール７ｍＬに溶解させた後、得られた混合溶液を反応容器内に導入した。次に、１０分間アルゴンガスを吹き込んだ後密閉し、６０℃で２０時間反応させた。
得られた溶液を、撹拌しながら、ヘキサン：アセトン：エタノール混合溶媒（体積比６：３：１）４００ｍＬ中に徐々に滴下し、滴下終了後１時間撹拌した後、静置して析出物を沈降させた。上清を除去し、残った析出物をエタノール２００ｍＬに再溶解し、エバポレーターで濃縮して、目的のポリマーを含むエタノール溶液を得た。得られたポリマー溶液の一部をサンプル瓶に移し、４８時間真空乾燥させた後の重量を測定して、このポリマー溶液の濃度を算出し、この値を基に、塗布用の０．３ｗｔ％エタノール溶液を作製した。
(Synthesis Example 8)
(Synthesis of HEAA / AEG polymer 3)
1.13 g (9.8 mmol) of N- (2-hydroxyethyl) acrylamide (HEAA, manufactured by Tokyo Chemical Industry), 0.090 g (0.2 mmol) of p-nitrophenyloxycarbonyl-4,5-polyethylene glycol methacrylate (AEG, manufactured by Nard Laboratory Co., Ltd.) and 0.033 g (0.2 mmol) of 2,2'-azobis (isobutyronitrile) were dissolved in 7 mL of ethanol, and then the obtained mixed solution was placed in a reaction vessel. Introduced in. Next, after blowing argon gas for 10 minutes, the mixture was sealed and reacted at 60 ° C. for 20 hours.
The obtained solution was gradually added dropwise to 400 mL of a hexane: acetone: ethanol mixed solvent (volume ratio 6: 3: 1) with stirring, and after the completion of the addition, the mixture was stirred for 1 hour and then allowed to stand to form a precipitate. It was settled. The supernatant was removed, the remaining precipitate was redissolved in 200 mL of ethanol, and concentrated with an evaporator to obtain an ethanol solution containing the desired polymer. A part of the obtained polymer solution was transferred to a sample bottle, vacuum dried for 48 hours, and then weighed to calculate the concentration of this polymer solution. Based on this value, 0.3 wt% for coating was used. An ethanol solution was prepared.
（接触角の測定）
以下の方法を用いて、上記ポリマーからなるポリマー層の純水に対する接触角を測定した。
プラズマ処理済みの環状ポリオレフィン製のプラスチック基板を、上記の０．３重量％コーティング組成物に浸して１分間静置した。その後、この基板をコーティング組成物より取り出した。次いで、この基板の表面を乾燥させ、１００℃、真空中で一晩静置することにより、表面がポリマーでコーティングされたプラスチック基板を得た。これを実施例のプラスチック基板として用いた。
比較例１として、プラズマ処理した、環状ポリオレフィン製のプラスチック基板を用いた。
(Measurement of contact angle)
The contact angle of the polymer layer made of the above polymer with respect to pure water was measured using the following method.
The plasma-treated cyclic polyolefin plastic substrate was immersed in the above 0.3% by weight coating composition and allowed to stand for 1 minute. Then, this substrate was taken out from the coating composition. Then, the surface of this substrate was dried and allowed to stand in vacuum at 100 ° C. overnight to obtain a plastic substrate having a surface coated with a polymer. This was used as the plastic substrate of the example.
As Comparative Example 1, a plasma-treated cyclic polyolefin plastic substrate was used.
次に協和界面化学社製のＣＡ−Ｖ型接触角計を用いて、準備したプラスチック基板の、純水に対する接触角を測定した。接触角の値は、超純水２．０μＬを、測定対象の表面に滴下した後８５秒の時点で測定した。結果を以下の表１に、「接触角−１」として示す。 Next, the contact angle of the prepared plastic substrate with respect to pure water was measured using a CA-V type contact angle meter manufactured by Kyowa Surface Chemistry. The value of the contact angle was measured 85 seconds after dropping 2.0 μL of ultrapure water onto the surface of the measurement target. The results are shown in Table 1 below as "contact angle -1".
（生理活性物質の固定化能の測定、および生体分子の捕捉能の測定）
以下の方法を用いて、上記ポリマーからなるポリマー層への生理活性物質固定化能、および得られた生理活性物質固定化担体の生体分子に対する捕捉能を測定した。
（生理活性物質固定化能の測定）
実施例１、２、３、５、６、７、および８において、プラズマ処理済みの環状ポリオレフィン製のプラスチック基板を、それぞれ、上述の合成例１、２、３、５、６、７、８で得られた０．３重量％コーティング組成物に浸して１分間静置した後、この基板をコーティング組成物より取り出した。次いで、この基板の表面を乾燥させ、１００℃、真空中で一晩静置する事で、表面がポリマーでコーティングされたプラスチック基板を得た。これを実施例のプラスチック基板として用いた。
比較例１として、プラズマ処理した、環状ポリオレフィン製のプラスチック基板を用いた。
(Measurement of immobilization ability of physiologically active substances and measurement of ability to capture biomolecules)
Using the following method, the ability to immobilize the physiologically active substance on the polymer layer made of the above polymer and the ability to capture the obtained bioactive substance immobilizing carrier on the biomolecule were measured.
(Measurement of bioactive substance immobilization ability)
In Examples 1, 2, 3, 5, 6, 7, and 8, plasma-treated cyclic polyolefin plastic substrates were used in Synthesis Examples 1, 2, 3, 5, 6, 7, and 8, respectively, described above. After immersing in the obtained 0.3% by weight coating composition and allowing to stand for 1 minute, this substrate was taken out from the coating composition. Then, the surface of this substrate was dried and allowed to stand overnight in vacuum at 100 ° C. to obtain a plastic substrate whose surface was coated with a polymer. This was used as the plastic substrate of the example.
As Comparative Example 1, a plasma-treated cyclic polyolefin plastic substrate was used.
次に、上述のようにして得られたポリマーがコーティングされたプラスチック基板を、生理活性物質の固定化について評価した。合成例１、２、３、５、６、７、８で得られたポリマーを塗布したプラスチック基板上に、リン酸緩衝液で１ｍＭに調製したビオチンヒドラジド溶液を１μＬ滴下し、３７℃で１時間静置し、乾燥させた。基板を純水で洗浄後に、０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０含有リン酸緩衝液で２ｇ／ｍＬに調製したＣｙ３標識ストレプトアビジン溶液の中に基板を浸し、室温で１時間反応させた。基板を純水で洗浄して乾燥させた後、マイクロアレイ用スキャナ（ＧｅｎｅＰｉｘ ４０００Ｂ、株式会社インターメディカル製）を用いて、シグナルとしてビオチンヒドラジド溶液を滴下した部分と、バックグラウンドとして滴下していない部分の、ぞれぞれのＣｙ３の蛍光強度を測定した。測定結果を以下の表２に「蛍光強度−１」として示す。 Next, the polymer-coated plastic substrate obtained as described above was evaluated for immobilization of a physiologically active substance. 1 μL of a biotin hydrazide solution prepared at 1 mM with a phosphate buffer was added dropwise to a plastic substrate coated with the polymer obtained in Synthesis Examples 1, 2, 3, 5, 6, 7, and 8, and at 37 ° C. for 1 hour. It was allowed to stand and dried. After washing the substrate with pure water, the substrate was immersed in a Cy3-labeled streptavidin solution prepared at 2 g / mL with a phosphate buffer solution containing 0.1% Tween 20 and reacted at room temperature for 1 hour. After washing the substrate with pure water and drying it, a microarray scanner (GenePix 4000B, manufactured by Intermedical Co., Ltd.) was used to drop a biotin hydrazide solution as a signal and a non-dropped portion as a background. , The fluorescence intensity of each Cy3 was measured. The measurement results are shown in Table 2 below as "fluorescence intensity -1".
実施例４において、合成例４で得られたポリマーがコーティングされたプラスチック基板、および比較例のプラスチック基板を、以下の方法で生理活性物質の固定化について評価した。
まず、ポリマー合成例４で得られたポリマーを塗布したプラスチック基板を２ｍｏｌ／Ｌ 塩酸に浸し、室温で３時間反応させた。基板を塩酸から取り出した後、純水で洗浄し、乾燥させた。塩酸と反応させた基板と、比較例として用いた基板とに、ｐＨ５．０の３００ｍＭ 酢酸ナトリウム溶液で１ｍＭに調製したルイスＸ糖鎖の溶液 １μＬを滴下し、８０℃で１時間反応させた。基板を純水で洗浄後に、２価の金属イオンを含有したトリス緩衝液で１μｇ／ｍＬに調製したＢｉｏｔｉｎ標識ＡＡＬレクチン溶液に基板を浸し、室温で１時間反応させた。基板を純水で洗浄後、２価の金属イオンを含有したトリス緩衝液で２μｇ／ｍＬに調製したＣｙ３標識ストレプトアビジン溶液の中に基板を浸し、室温で１時間反応させた。基板を純水で洗浄して乾燥させた後、マイクロアレイ用スキャナ（ＧｅｎｅＰｉｘ ４０００Ｂ）を用いて、シグナルとしてルイスＸ糖鎖溶液を滴下した部分と、バックグラウンドとして滴下していない部分の、ぞれぞれのＣｙ３の蛍光強度を測定した。結果を以下の表２に、「蛍光強度−１」として合わせて示す。
In Example 4, the polymer-coated plastic substrate obtained in Synthesis Example 4 and the plastic substrate of Comparative Example were evaluated for immobilization of a physiologically active substance by the following method.
First, the plastic substrate coated with the polymer obtained in Polymer Synthesis Example 4 was immersed in 2 mol / L hydrochloric acid and reacted at room temperature for 3 hours. After removing the substrate from hydrochloric acid, it was washed with pure water and dried. To the substrate reacted with hydrochloric acid and the substrate used as a comparative example, 1 μL of a solution of Lewis X sugar chain prepared to 1 mM with a 300 mM sodium acetate solution having a pH of 5.0 was added dropwise, and the mixture was reacted at 80 ° C. for 1 hour. After washing the substrate with pure water, the substrate was immersed in a Biotin-labeled AAL lectin solution prepared at 1 μg / mL with a Tris buffer solution containing divalent metal ions, and reacted at room temperature for 1 hour. After washing the substrate with pure water, the substrate was immersed in a Cy3-labeled streptavidin solution prepared at 2 μg / mL with a tris buffer containing divalent metal ions, and reacted at room temperature for 1 hour. After washing the substrate with pure water and drying it, a microarray scanner (GenePix 4000B) was used to drop the Lewis X sugar chain solution as a signal and the non-dropped portion as a background, respectively. The fluorescence intensity of these Cy3s was measured. The results are also shown in Table 2 below as "fluorescence intensity -1".
（生体分子捕捉能の測定）
実施例１−８において、以下の方法を用いて、生理活性物質を固定化したポリマーからなるポリマー層の、生体分子に対する吸着量を測定した。
プラズマ処理済みのポリスチレン製９６ウェルプレートの各ウェルに、上記の０．３重量％コーティング組成物を１００μＬ分注し、３０分静置した。溶液を排出した後、ウェルの表面を乾燥させ、６０℃、真空中で一晩静置する事で、表面がポリマーでコーティングされた９６ウェルプレートを得た。また、ポリスチレン製９６ウェルプレートをプラズマ処理したものを、比較例１として用いた。
(Measurement of biomolecule capture ability)
In Examples 1-8, the amount of adsorption of the polymer layer made of the polymer on which the physiologically active substance was immobilized to the biomolecule was measured by using the following method.
100 μL of the above 0.3 wt% coating composition was dispensed into each well of a plasma-treated polystyrene 96-well plate and allowed to stand for 30 minutes. After draining the solution, the surface of the well was dried and allowed to stand in vacuum at 60 ° C. overnight to obtain a 96-well plate whose surface was coated with a polymer. Further, a polystyrene 96-well plate subjected to plasma treatment was used as Comparative Example 1.
次に、作製した９６ウェルプレートへの、ペルオキシダーゼ標識アビジンの吸着量を測定した。まず、合成例１−８で得られたポリマーを塗布した９６ウェルプレートの各ウェルに０．１Ｍ エタノールアミン水溶液を１００μＬ分注し、室温で１時間反応させた。溶液を排出した後、純水でウェルを洗浄した。その後、０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０含有リン酸緩衝液で２．５μｇ／ｍＬに調製したペルオキシダーゼ標識アビジン溶液を、ポリマー合成例４で得られたポリマーを塗布したプレートを含む、全てのプレートの各ウェルに１００μＬ分注し、室温で１時間反応させた。別のウェルには、０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０含有リン酸緩衝液のみを陰性検体として各ウェルに１００μＬ分注し、室温で１時間反応させた。溶液を排出後、０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０含有リン酸緩衝液で各ウェルを洗浄し、市販のＴＭＢ発色キットを用いて１５分発色反応を行い、反応停止後、プレートリーダーで４５０ｎｍの吸光度を測定した。結果を以下の表３に、「吸光度−１」として示す。 Next, the amount of peroxidase-labeled avidin adsorbed on the prepared 96-well plate was measured. First, 100 μL of a 0.1 M ethanolamine aqueous solution was dispensed into each well of a 96-well plate coated with the polymer obtained in Synthesis Example 1-8, and the mixture was reacted at room temperature for 1 hour. After draining the solution, the wells were washed with pure water. Then, a peroxidase-labeled avidin solution prepared at 2.5 μg / mL with a phosphate buffer containing 0.1% Tween 20 was applied to each well of all plates, including the polymer-coated plate obtained in Polymer Synthesis Example 4. 100 μL was dispensed and reacted at room temperature for 1 hour. In another well, only 0.1% Tween 20-containing phosphate buffer was dispensed into each well as a negative sample in an amount of 100 μL, and the mixture was reacted at room temperature for 1 hour. After draining the solution, each well was washed with a phosphate buffer solution containing 0.1% Tween20, a color reaction was carried out for 15 minutes using a commercially available TMB color development kit, and after the reaction was stopped, the absorbance at 450 nm was measured with a plate reader. .. The results are shown in Table 3 below as "absorbance-1".
（測定結果）
ポリマー合成例１〜８で調製したポリマーのコーティング膜を有するプラスチック表面は全て、生理活性物質の固定化能と、特異的な生体分子の捕捉能、および非特異的な生体分子の吸着を抑制する性能を示した。一方で、比較例であるプラズマ処理のみを実施したプラスチック基板では生理活性物質を特異的に固定化できず、また生体分子の非特異的な吸着も抑制できていない事が示されており、ポリマーのコーティング膜による効果が示された。 All plastic surfaces having a polymer coating film prepared in Polymer Synthesis Examples 1 to 8 suppress the immobilization ability of bioactive substances, the ability to capture specific biomolecules, and the adsorption of non-specific biomolecules. Showed performance. On the other hand, it has been shown that the plastic substrate subjected to only the plasma treatment, which is a comparative example, cannot specifically immobilize the physiologically active substance and also cannot suppress the non-specific adsorption of biomolecules. The effect of the coating film was shown.
純水の接触角の測定結果から、合成例１〜８で調製したポリマーのコーティング膜を有するプラスチック表面の接触角は全て１０°〜８０°の範囲に入っている事が確認され、構成成分の変更により接触角が調整できる事が示された。また、実施例６〜８に示されるように、構造単位Ａの含有率を上げる事で有意に接触角が低下しており、４０°以下の接触角を達成できる事が示された。 From the measurement results of the contact angle of pure water, it was confirmed that the contact angles of the plastic surfaces having the polymer coating film prepared in Synthesis Examples 1 to 8 were all in the range of 10 ° to 80 °, and the constituent components. It was shown that the contact angle can be adjusted by the change. Further, as shown in Examples 6 to 8, it was shown that the contact angle was significantly reduced by increasing the content of the structural unit A, and the contact angle of 40 ° or less could be achieved.
Claims (14)
式（３）で表される構造単位Ｂ、および
式（４）で表される構造体Ｃ、式（５）で表される構造体Ｄ、式（６）または式（７）で表される構造単位Ｅ、および式（８）で表される構造単位Ｆから選択される少なくとも１つ、を含む、共重合体：
Structural unit B represented by the formula (3), structure C represented by the formula (4), structure D represented by the formula (5), represented by the formula (6) or the formula (7). A copolymer comprising a structural unit E and at least one selected from the structural unit F represented by the formula (8):
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