JP6811526B2 - メロン植物のうどんこ病抵抗性マーカー、うどんこ病抵抗性メロン植物、およびそれを用いたうどんこ病抵抗性メロン植物の製造方法 - Google Patents
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Description
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、下記条件(1)および(2)の少なくとも一方の条件を満たすことを特徴とする。
条件(1)
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、下記プライマーセット1で増幅される増幅断片の長さで特定され、
前記増幅断片の長さが、133塩基長以上である。
プライマーセット1
配列番号1の塩基配列からなるフォワードプライマー1
配列番号2の塩基配列からなるリバースプライマー1
条件(2)
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、配列番号3の塩基配列における45、48、49、51、108、120、139、214、および327番目の塩基の多型で特定される。
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、下記条件(1)および(2)の少なくとも一方の条件を満たすことを特徴とする。
条件(1)
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、下記プライマーセット1で増幅される増幅断片の長さで特定され、
前記増幅断片の長さが、133塩基長以上である。
プライマーセット1
配列番号1の塩基配列からなるフォワードプライマー1
配列番号2の塩基配列からなるリバースプライマー1
条件(2)
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、配列番号3の塩基配列における45、48、49、51、108、120、139、214、および327番目の塩基の多型で特定される。
(a)前記本発明のうどんこ病抵抗性メロン植物と、他のメロン植物とを交雑する工程
(b)前記(a)工程より得られたメロン植物またはその後代系統から、うどんこ病抵抗性メロン植物を選抜する工程
本発明のメロン植物のうどんこ病抵抗性マーカー(以下、「抵抗性マーカー」ともいう。)は、前述のように、第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座(以下、「抵抗性遺伝子座」ともいう。)をホモ接合型で含み、前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、下記条件(1)および(2)の少なくとも一方の条件を満たすことを特徴とする。
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、下記プライマーセット1で増幅される増幅断片の長さで特定され、
前記増幅断片の長さが、133塩基長以上である。
プライマーセット1
配列番号1の塩基配列からなるフォワードプライマー1
配列番号2の塩基配列からなるリバースプライマー1
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、配列番号3の塩基配列における45、48、49、51、108、120、139、214、および327番目の塩基の多型で特定される。
参考文献1:Jason M Argyris et.al., “Use of targeted SNP selection for an improved anchoring of the melon (Cucumis melo L.) scaffold genome assembly”, BMC Genomics, 2015 vol.16:4
前記(i)および前記(ii)の組合せ
前記(i)および前記(iii)の組合せ
前記(i)、前記(ii)、および前記(iii)の組合せ
前記抵抗性遺伝子座は、前記(i)に示すように、プライマーセットで増幅される増幅断片の長さおよびSNPの組合せの少なくとも一方に基づく条件を満たし、具体的には、前記条件(1)および(2)の少なくとも一方の条件を満たす。以下、各条件における各SNPは、本発明者らが新たに同定したSNPであり、当該技術分野における当業者であれば、後述するこれらのSNPを含む塩基配列に基づき、前記SNPの座乗位置を特定できる。
フォワードプライマー1 5’-AATCTCAACAAGTGAGCTTTTATTGT-3’ (配列番号1)
リバースプライマー1 5’-CATGATTATCTTCAATTTTCTTTTTGTC-3’ (配列番号2)
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、配列番号4の塩基配列における50、141、および266番目の塩基の多型で特定される。
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、配列番号5の塩基配列における99、174、184、199、および200番目の塩基の多型で特定される。
5’-GTTCGGATCGGAAAATTCAATCAAAGGAATAAGCGCTACAAAACAATAAACACACACATACATCCAAAAATTACAAATCTCCTATCATCATCAAGAAA[C]AGAAAAACCAAACCGAAAACGAAATAAACGCCAAATAATTTCAGAAAATCGATGCGACGGAATAAGAAATGCAT[G]TATCTGGTA[T]GATCGAAAGAGAAA[A][T]ATACGAGATCCGGTGGTTTGCCAGAGCTGCATCTCGCCGTCTTCATAATCGCCTTCGGGACGAACGGCGATGAGAACAAGGTAATCGCCCTTGCGGACAACGTTGTCGATGGCCCATTTGAGGGCTTTAATGCTGCAGGCAGAGAAATCCACCGCGACGCCGACTCTCCGTTGACCGTCCATGCTTTTTGTGGGTTGGGATTTTCAGTGCGTTTGAGCTTTGTGGAAGGAAGGAAGAATGGAATGAATGTCGGAAAGCTTGG-3’
条件(1)および(3)
条件(1)および(4)
条件(2)および(3)
条件(2)および(4)
条件(1)、(2)、および(3)
条件(1)、(2)、および(4)
条件(1)、(2)、(3)および(4)
前記抵抗性遺伝子座は、前記(ii)に示すように、例えば、プライマーセットにより増幅される増幅断片の塩基配列およびSNPの組合せを含む塩基配列の少なくとも一方に基づく条件を満たしてもよく、具体的には、下記条件(5)および(6)の少なくとも一方の条件を満たしてもよい。下記条件(5)において、下記(a2)および(a3)は、それぞれ、前記抵抗性遺伝子座において、前記うどんこ病抵抗性に関して下記(a1)と同等の機能を有するポリヌクレオチドである。下記条件(6)において、下記(b2)および(b3)は、それぞれ、前記抵抗性遺伝子座において、前記うどんこ病抵抗性に関して下記(b1)と同等の機能を有するポリヌクレオチドである。
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、下記(a)のポリヌクレオチドで特定される。
(a) 下記(a1)、(a2)、または(a3)のポリヌクレオチド
(a1)配列番号6の塩基配列からなるポリヌクレオチド
(a2)前記(a1)において、1もしくは数個の塩基が欠失、置換、挿入および/または付加された塩基配列からなるポリヌクレオチド
(a3)前記(a1)の塩基配列に対して、80%以上の同一性を有する塩基配列からなるポリヌクレオチド
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、下記(b)のポリヌクレオチドで特定される。
(b) 下記(b1)、(b2)、または(b3)のポリヌクレオチド
(b1)配列番号3の塩基配列からなるポリヌクレオチド
(b2)前記(b1)の45番目の塩基(A)、48番目の塩基(A)、49番目の塩基(T)、51番目の塩基(T)、108番目の塩基(T)、120番目の塩基(A)、139番目の塩基(A)、214番目の塩基(T)、および327番目の塩基(C)が保存され、前記塩基以外の塩基配列において、1もしくは数個の塩基が欠失、置換、挿入および/または付加された塩基配列からなるポリヌクレオチド
(b3)前記(b1)の45番目の塩基(A)、48番目の塩基(A)、49番目の塩基(T)、51番目の塩基(T)、108番目の塩基(T)、120番目の塩基(A)、139番目の塩基(A)、214番目の塩基(T)、および327番目の塩基(C)が保存され、前記塩基以外の塩基配列に対して、80%以上の同一性を有する塩基配列からなるポリヌクレオチド
配列番号6
5’-AATCTCAACAAGTGAGCTTTTATTGTAAAAAATACAACACAAGTAAGAGTGTGTGTATTTATAATTGAAAGAAGAAGAAGAAGAAGAAGAAGAAGAAGAAAACAAGACAAAAAGAAAATTGAAGATAATCATG-3’
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、下記(c)のポリヌクレオチドで特定される。
(c) 下記(c1)、(c2)、または(c3)のポリヌクレオチド
(c1)配列番号4の塩基配列からなるポリヌクレオチド
(c2)前記(c1)の50番目の塩基(C)、141番目の塩基(A)、および266番目の塩基(T)が保存され、前記塩基以外の塩基配列において、1もしくは数個の塩基が欠失、置換、挿入および/または付加された塩基配列からなるポリヌクレオチド
(c3)前記(c1)の50番目の塩基(C)、141番目の塩基(A)、および266番目の塩基(T)が保存され、前記塩基以外の塩基配列に対して、80%以上の同一性を有する塩基配列からなるポリヌクレオチド
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、下記(d)のポリヌクレオチドで特定される。
(d) 下記(d1)、(d2)、または(d3)のポリヌクレオチド
(d1)配列番号5の塩基配列からなるポリヌクレオチド
(d2)前記(d1)の99番目の塩基(C)、174番目の塩基(G)、184番目の塩基(T)、199番目の塩基(A)、および200番目の塩基(T)が保存され、前記塩基以外の塩基配列において、1もしくは数個の塩基が欠失、置換、挿入および/または付加された塩基配列からなるポリヌクレオチド
(d3)前記(d1)の99番目の塩基(C)、174番目の塩基(G)、184番目の塩基(T)、199番目の塩基(A)、および200番目の塩基(T)が保存され、前記塩基以外の塩基配列に対して、80%以上の同一性を有する塩基配列からなるポリヌクレオチド
条件(5)および(7)
条件(5)および(8)
条件(6)および(7)
条件(6)および(8)
条件(5)、(6)、および(7)
条件(5)、(6)、および(8)
条件(5)、(6)、(7)および(8)
前記抵抗性遺伝子座は、前記(iii)に示すように、例えば、プライマーセットで増幅される増幅断片の塩基配列およびSNPの組合せを含む塩基配列の少なくとも一方を含む領域の塩基配列に基づく条件を満たしてもよく、具体的には、下記条件(9)を満たしてもよい。前記領域は、例えば、前記増幅断片の塩基配列および前記SNPの組合せを含む塩基配列の少なくとも一方の塩基配列の全体を含む条件でもよいし、一部を含む条件でもよい。
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、前記染色体における下記(A)、(B)および(C)のSNPからなる群から選択された2つのSNPの部位間の塩基配列により特定される。
(A) 配列番号3の塩基配列における45、48、49、51、108、120、139、214、および327番目のSNPからなる群から選択された1つのSNP
(B) 配列番号4の塩基配列における50、132、141、266、および457番目のSNPからなる群から選択された1つのSNP
(C) 配列番号5の塩基配列における99、174、184、199、および200番目のSNPからなる群から選択された1つのSNP
(A)のSNPと(B)のSNPとの組合せ
(A)のSNPと(C)のSNPとの組合せ
(B)のSNPと(C)のSNPとの組合せ
前記組合せのうち、うどんこ病抵抗性との相関性がより高いことから、好ましくは、例えば、以下の組合せである。
(B)のSNPと(C)のSNPとの組合せ
条件(a)
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、前記染色体における、(A)のSNPおよび(B)のSNPの部位間の領域の塩基配列を含み、且つ、
条件(1)および(2)の少なくとも一方の条件を満たす。
条件(b)
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、前記染色体における、(B)のSNPおよび(C)のSNPの部位間の領域の塩基配列を含み、且つ、
条件(1)および(2)の少なくとも一方の条件を満たす。
条件(c)
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、前記染色体における、(B)のSNPおよび(C)のSNPの部位間の領域の塩基配列を含み、且つ、
条件(1)および(2)の少なくとも一方の条件と条件(3)および(4)の少なくとも一方の条件とを満たす。
条件(1)および(3)
条件(1)および(4)
条件(2)および(3)
条件(2)および(4)
条件(1)、(2)、および(3)
条件(1)、(2)、および(4)
条件(1)、(2)、(3)および(4)
参考文献2:LongZhou Liu et.al., “A Sequence-amplified Characterized Region Marker for a Single, Dominant Gene in Melon PI 134198 that Confers Resistance to a Unique Race of Podosphaera xanthii in China”, HORTSCIENCE, 2010, vol.45, No.9, pp.1407-1410
本発明のうどんこ病抵抗性メロン植物は、前述のように、第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座をホモ接合型で含み、
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、下記条件(1)および(2)の少なくとも一方の条件を満たすことを特徴とする。
条件(1)
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、下記プライマーセット1で増幅される増幅断片の長さで特定され、
前記増幅断片の長さが、133塩基長以上である。
プライマーセット1
配列番号1の塩基配列からなるフォワードプライマー1
配列番号2の塩基配列からなるリバースプライマー1
条件(2)
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、配列番号3の塩基配列における45、48、49、51、108、120、139、214、および327番目の塩基の多型で特定される。
寄託の種類:国際寄託
寄託機関名:独立行政法人製品評価技術基盤機構 特許生物寄託センター
あて名:日本国 〒292−0818 千葉県木更津市かずさ鎌足2−5−8 120号室
受託番号:FERM BP−22291
識別のための表示:Takii8
受領日:2015年8月14日
つぎに、本発明のうどんこ病抵抗性メロン植物の製造方法(以下、「製造方法」ともいう。)について説明する。なお、以下の方法は、例示であって、本発明は、これらの方法に制限されない。本発明において、製造方法は、例えば、育成方法ということもできる。また、本発明において、前記うどんこ病抵抗性遺伝子座は、前記本発明の抵抗性マーカーと言い換えることができる。
(a)前記本発明のうどんこ病抵抗性メロン植物と、他のメロン植物とを交雑する工程
(b)前記(a)工程より得られたメロン植物またはその後代系統から、うどんこ病抵抗性メロン植物を選抜する工程
(x)被検メロン植物から、前記本発明のうどんこ病抵抗性メロン植物を選抜する工程
(x1)前記被検メロン植物の染色体上における、ホモ接合型のうどんこ病抵抗性遺伝子座の有無を検出する検出工程
(x2)前記ホモ接合型のうどんこ病抵抗性遺伝子座の存在により、前記被検メロン植物を、うどんこ病抵抗性メロン植物として選抜する選抜工程
前記(i)および前記(ii)の組合せ
前記(i)および前記(iii)の組合せ
前記(i)、前記(ii)、および前記(iii)の組合せ
前記抵抗性遺伝子座において、前記選抜に用いる(i)増幅断片の長さおよびSNPの組合せに基づく条件は、特に制限されず、例えば、前記本発明の抵抗性マーカーにおける「(i)増幅断片の長さおよびSNPの組合せに基づく条件」の説明を援用できる。
前記(x)工程における選抜は、例えば、前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座をホモ接合型で含むうどんこ病抵抗性メロン植物の選抜であり、前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、前記条件(5)および(6)の少なくとも一方の条件を満たしてもよい。前記抵抗性遺伝子座において、前記選抜に用いる(ii)塩基配列に基づく条件は、特に制限されず、例えば、前記本発明の抵抗性マーカーにおける「(ii)塩基配列に基づく条件」の説明を援用できる。
前記(x)工程における選抜は、例えば、前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座をホモ接合型で含むうどんこ病抵抗性メロン植物の選抜であり、前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、前記条件(9)を満たしてもよい。前記抵抗性遺伝子座において、前記選抜に用いる(iii)領域の塩基配列に基づく条件は、特に制限されず、例えば、前記本発明の抵抗性マーカーにおける「(iii)領域の塩基配列に基づく条件」の説明を援用できる。
(b1)前記(a)工程より得られたメロン植物またはその後代系統について、染色体上における、ホモ接合型のうどんこ病抵抗性遺伝子座の有無を検出する検出工程
(b2)前記うどんこ病抵抗性遺伝子座の存在により、前記(a)工程により得られたメロン植物またはその後代系統を、うどんこ病抵抗性メロン植物として選抜する選抜工程
本発明のうどんこ病抵抗性メロン植物のスクリーニング方法(以下、「スクリーニング方法」ともいう。)は、交雑によりうどんこ病抵抗性メロン植物を生産するための親として、被検メロン植物から、メロン植物のうどんこ病抵抗性マーカーとして第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座をホモ接合型で含むうどんこ病抵抗性メロン植物を選抜する工程を含み、
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、下記条件(1)および(2)の少なくとも一方の条件を満たすことを特徴とする。
条件(1)
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、下記プライマーセット1で増幅される増幅断片の長さで特定され、
前記増幅断片の長さが、133塩基長以上である。
プライマーセット1
配列番号1の塩基配列からなるフォワードプライマー
配列番号2の塩基配列からなるリバースプライマー
条件(2)
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、配列番号3の塩基配列における45、48、49、51、108、120、139、214、および327番目の塩基の多型で特定される。
新規なうどんこ病抵抗性メロン植物について、うどんこ病抵抗性遺伝子座の遺伝様式の解析、前記うどんこ病抵抗性遺伝子座の特定、および前記うどんこ病抵抗性遺伝子座とうどんこ病抵抗性との相関を確認することで、前記うどんこ病抵抗性遺伝子座が、メロン植物のうどんこ病抵抗性マーカーとなること、前記抵抗性遺伝子座を含むメロン植物が、うどんこ病抵抗性メロン植物であること、ならびに前記メロン植物のうどんこ病抵抗性マーカーを使用し、うどんこ病抵抗性メロン植物をスクリーニングできることを確認した。
うどんこ病抵抗性を示す新規メロン植物を開発するために、タキイ種苗株式会社農場で継代育種により採取された大量のメロン系統の種子について、育種を行い、うどんこ病抵抗性の試験を行った。その結果、うどんこ病抵抗性を示す、新規のうどんこ病抵抗性メロン系統(Cucumis melo)を製造(以下、「生産」ともいう。)した。この新規うどんこ病抵抗性メロン植物は、受託番号FERM BP−22291で寄託した。以下、このうどんこ病抵抗性メロン植物を寄託系統という。
前記寄託系統のメロン植物(受託番号FERM BP−22291)と、うどんこ病罹病性メロン植物「春系3号(農業生物資源ジ−ンバンクからアクセッション番号JP32097の植物として入手可能、Cucumis melo)」(以下、「罹病性メロン植物」ともいう。)とを交雑することによって、61個体のF2分離集団(以下、「61系統」ともいう。)を生産した。さらに、前記61系統を使用し、以下に示すように、うどんこ病菌の接種試験を行った。なお、前記寄託系統は、第6染色体上の前記SNP145、前記SNP148、前記SNP149、前記SNP151、前記SNP1108、前記SNP1120、前記SNP1139、前記SNP1214、および前記SNP1327、前記SNP250、前記SNP2132、前記SNP2141、前記SNP2266、および前記SNP2457、ならびに前記SNP399、前記SNP3174、前記SNP3184、前記SNP3199、および前記SNP3200を抵抗性のホモ接合型で含む。すなわち、前記寄託系統は、前記条件(1)〜(8)および(9)を満たすメロン植物である。また、前記寄託系統は、2本の第6染色体が前記配列番号3の塩基配列における204〜212および213番目の塩基配列を含み、且つ、前記プライマーセットで増幅される増幅断片の長さが、133塩基である。他方、前記罹病性メロン植物は、第6染色体上の前記SNP145、前記SNP148、前記SNP149、前記SNP151、前記SNP1108、前記SNP1120、前記SNP1139、前記SNP1214、および前記SNP1327、前記SNP250、前記SNP2132、前記SNP2141、前記SNP2266、および前記SNP2457、ならびに前記SNP399、前記SNP3174、前記SNP3184、前記SNP3199、および前記SNP3200を罹病性のホモ接合型で含む。また、前記罹病性メロン植物は、2本の第6染色体が前記配列番号3の塩基配列における204〜212および213番目の塩基配列を含まず、且つ、前記プライマーセットで増幅される増幅断片の長さが、132塩基である。すなわち、前記罹病性メロン植物は、前記条件(1)〜(8)および(9)を満たさないメロン植物である。
参考文献3:Fernando J. Yuste-Lisbona et.al., “Codominant PCR-based markers and candidate genes for powdery mildew resistance in melon (Cucumis melo L.)”, Theor. Appl. Genet., 2011, vol.122, pp.747-758
発病指数0:胞子形成が認められない(高い抵抗性)
発病指数1:わずかな胞子形成が認められる(抵抗性)
発病指数2:限定的な胞子形成が見られる
発病指数3:広範囲に多量の胞子形成が見られる
つぎに、前記61系統から、常法により、それぞれの系統のDNAを抽出した。さらに、前記DNAについて、DNAアッセイに供した。そして、前記(2)の発病指数および前記DNAアッセイの結果に基づき、解析ソフトウェア(QTL cartographer、NC STATE University製)を用い、QTL解析を行った。その結果、第6染色体において、前記発病指数と相関性の高い領域が、1箇所特定された。前記相関性の高い領域は、前記プライマーセット1で増幅される増幅断片および第1SNPセットを含む領域であった。これらの結果から、新規なうどんこ病抵抗性遺伝子座は、第6染色体上の1因子の劣性遺伝子を含むことが分かった。また、前記相関性の高い領域の塩基配列の解析から、うどんこ病抵抗性メロン植物は、2本の第6染色体から前記プライマーセット1で増幅される増幅断片の長さが133塩基であり、前記2本の第6染色体上において、前記SNP145、前記SNP148、前記SNP149、前記SNP151、前記SNP1108、前記SNP1120、前記SNP1139、前記SNP1214、および前記SNP1327が、それぞれ、A、A、T、T、T、A、A、TおよびCであり、前記2本の第6染色体が、それぞれ、前記配列番号3の塩基配列における204〜212および213番目の塩基配列を含むことがわかった。
前記61系統のDNAについて、前記プライマーセット1を用いPCRを行い、増幅された増幅断片の長さを測定した。また、前記61系統のDNAについて、下記プライマーセット2を用いPCRを行い、増幅された増幅断片において、前記第1SNPセットに対応する多型の塩基を特定した。なお、前記プライマーセット1を用いた増幅は、94℃で3分間インキュベート後、94℃30秒、57℃30秒、および72℃60秒を1サイクルとし、35サイクル行い、前記35サイクル後、72℃で3分間インキュベートすることにより実施した。また、前記プライマーセット2を用いた増幅は、94℃で3分間インキュベート後、94℃30秒、56℃30秒、および72℃60秒を1サイクルとし、35サイクル行い、前記35サイクル後、72℃で3分間インキュベートすることにより実施した。そして、前記増幅断片の長さおよび前記第1SNPセットに対応する多型の塩基により、前記61系統を抵抗性のホモ接合型(A)、ヘテロ接合型(H)、および罹病性のホモ接合型(B)に分類した。これらの結果を下記表2に示す。なお、下記表2において、Aは、2本の第6染色体から増幅される前記増幅断片の長さが共に133塩基以上であり、且つ前記第1SNPセットを抵抗性のホモ接合型で有する個体を示す。また、Hは、1本の第6染色体から増幅される増幅断片の長さが133塩基以上であり、他方の第6染色体から増幅される増幅断片の長さが133塩基未満であり、且つ、前記第1SNPセットをヘテロ接合型で有する個体を示す。さらに、Bは、2本の第6染色体から増幅される前記増幅断片の長さが共に133塩基未満であり、且つ前記第1SNPセットを罹病性のホモ接合型で有する個体を示す。
フォワードプライマー2 5’-GGAAAAATGCAGGGGAAG-3’ (配列番号8)
リバースプライマー2 5’-CTGCCAAAAGCGACTTAACC-3’ (配列番号9)
前記61系統から、前記抵抗性のホモ接合型の個体10系統を選抜した。つぎに、前記10系統をそれぞれ自殖させることにより、F3選抜系統を生産した。さらに、10系統のF3選抜系統(F3−1〜F3−10)について、それぞれ10個体使用し、前記(2)と同様にして、うどんこ病菌の接種試験を行った。そして、F3選抜系統の各系統について発病指数を求め、下記式より、それぞれ対応するF3選抜系統の発病指数とした。
前記式において、「0、1、2、3」は、それぞれ発病指数を示し、「n0、n1、n2、n3」は、それぞれ、発病指数0、発病指数1、発病指数2、発病指数3の個体数を示す。
前記(2)と同様にして、F2分離集団を作製した。そして、前記F2分離集団について、前記(4)と同様にして、前記増幅断片の長さおよび前記第1SNPセットに対応する多型の塩基を特定した。さらに、前記F2分離集団のDNAについて、下記プライマーセット3および4を用い、PCRを行い、増幅された増幅断片において、前記第2SNPセットおよび前記第3SNPセットに対応する多型の塩基を特定した。なお、前記プライマーセット3を用いた増幅は、94℃で3分間インキュベート後、94℃30秒、51℃30秒、および72℃60秒を1サイクルとし、35サイクル行い、前記35サイクル後、72℃で3分間インキュベートすることにより実施した。また、前記プライマーセット4を用いた増幅は、94℃で3分間インキュベート後、94℃30秒、58℃30秒、および72℃60秒を1サイクルとし、35サイクル行い、前記35サイクル後、72℃で3分間インキュベートすることにより実施した。
フォワードプライマー3 5’-AGGAAACGAAGAATAGACG-3’ (配列番号10)
リバースプライマー3 5’-TGAGAACCGGAAAGAGAAGC-3’ (配列番号11)
プライマーセット4
フォワードプライマー4 5’-GTTCGGATCGGAAAATTCAA-3’ (配列番号12)
リバースプライマー4 5’-CCAAGCTTTCCGACATTCAT-3’ (配列番号13)
Claims (10)
- 受託番号FERM BP−22291で特定されるメロン植物またはその後代系統である、うどんこ病抵抗性メロン植物。
- 前記うどんこ病抵抗性メロン植物が、植物体またはその部分である、請求項1記載のうどんこ病抵抗性メロン植物。
- 前記うどんこ病抵抗性メロン植物が、種子である、請求項1または2記載のうどんこ病抵抗性メロン植物。
- 下記(a)および(b)工程を含むことを特徴とする、うどんこ病抵抗性メロン植物の製造方法:
(a)請求項1から3のいずれか一項に記載のうどんこ病抵抗性メロン植物と、他のメロン植物とを交雑する工程;
(b)前記(a)工程より得られたメロン植物またはその後代系統から、うどんこ病抵抗性メロン植物を選抜する工程。 - 交雑によりうどんこ病抵抗性メロン植物を生産するための親として、被検メロン植物から、メロン植物のうどんこ病抵抗性マーカーとして第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座をホモ接合型で含むうどんこ病抵抗性メロン植物を選抜する工程を含み、
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、下記条件(1)および(2)を満たすことを特徴とする、うどんこ病抵抗性メロン植物のスクリーニング方法:
条件(1)
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、下記プライマーセット1で増幅される増幅断片の長さで特定され、
前記増幅断片の長さが、133塩基長であり、
前記増幅断片において、下記フォワードプライマー1を含む増幅断片の塩基配列が、配列番号6の塩基配列からなる:
プライマーセット1
配列番号1の塩基配列からなるフォワードプライマー
配列番号2の塩基配列からなるリバースプライマー;
条件(2)
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、配列番号3の塩基配列における45、48、49、51、108、120、139、214、および327番目の塩基の多型で特定され、
前記45、48、49、51、108、120、139、214、および327番目の塩基の多型は、それぞれ、A、A、T、T、T、A、A、T、およびCである。 - 交雑によりうどんこ病抵抗性メロン植物を生産するための親として、被検メロン植物から、メロン植物のうどんこ病抵抗性マーカーとして第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座をホモ接合型で含むうどんこ病抵抗性メロン植物を選抜する工程を含み、
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、下記条件(1)および(2’)を満たすことを特徴とする、うどんこ病抵抗性メロン植物のスクリーニング方法:
条件(1)
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、下記プライマーセット1で増幅される増幅断片の長さで特定され、
前記増幅断片の長さが、133塩基長であり、
前記増幅断片において、下記フォワードプライマー1を含む増幅断片の塩基配列が、配列番号6の塩基配列からなる:
プライマーセット1
配列番号1の塩基配列からなるフォワードプライマー
配列番号2の塩基配列からなるリバースプライマー;
条件(2’)
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、配列番号3の塩基配列における45、48、49、51、108、120、139、214、および327番目の塩基の多型で特定され、かつ配列番号3の塩基配列における204〜212および213番目の塩基配列からなるポリヌクレオチドを有し、
前記45、48、49、51、108、120、139、214、および327番目の塩基の多型は、それぞれ、A、A、T、T、T、A、A、T、およびCである。 - 前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、下記条件(3)および(4)の少なくとも一方の条件を満たす、請求項5または6記載のうどんこ病抵抗性メロン植物のスクリーニング方法:
条件(3)
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、配列番号4の塩基配列における50、141、および266番目の塩基の多型で特定される;
条件(4)
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、配列番号5の塩基配列における99、174、184、199、および200番目の塩基の多型で特定される。 - 前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、下記条件(5)および(6)の少なくとも一方の条件を満たす、請求項5から7のいずれか一項に記載のうどんこ病抵抗性メロン植物のスクリーニング方法:
条件(5)
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、下記(a)のポリヌクレオチドで特定される:
(a) 下記(a1)のポリヌクレオチド
(a1)配列番号6の塩基配列からなるポリヌクレオチド;
条件(6)
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、下記(b)のポリヌクレオチドで特定される:
(b) 下記(b1)のポリヌクレオチド
(b1)配列番号3の塩基配列からなるポリヌクレオチド。 - 前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、下記条件(7)および(8)の少なくとも一方の条件を満たす、請求項5から8のいずれか一項に記載のうどんこ病抵抗性メロン植物のスクリーニング方法:
条件(7)
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、下記(c)のポリヌクレオチドで特定される:
(c) 下記(c1)のポリヌクレオチド
(c1)配列番号4の塩基配列からなるポリヌクレオチド;
条件(8)
前記第6染色体上のうどんこ病抵抗性遺伝子座が、下記(d)のポリヌクレオチドで特定される:
(d) 下記(d1)のポリヌクレオチド
(d1)配列番号5の塩基配列からなるポリヌクレオチド。 - 下記(x)、(a)および(b)工程を含み、
下記(x)工程は、請求項5から9のいずれか一項に記載のうどんこ病抵抗性メロン植物のスクリーニング方法により実施される、うどんこ病抵抗性メロン植物の製造方法:
(x)被検メロン植物から、うどんこ病抵抗性メロン植物を選抜する工程;
(a)前記(x)工程より得られたうどんこ病抵抗性メロン植物と、他のメロン植物とを交雑する工程;
(b)前記(a)工程より得られたメロン植物またはその後代系統から、うどんこ病抵抗性メロン植物を選抜する工程。
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