JP6799924B2 - 細胞観察装置および細胞観察方法 - Google Patents
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Description
図1は、本発明の一実施形態に係る細胞観察装置1の概略図である。本実施形態の細胞観察装置1は、容器支持部21上に載置された培養容器9内に保持された細胞の画像を取得する装置である。図1に示すように、本実施形態の培養容器9は、ガラスや樹脂等で形成されたシャーレである。培養容器9は、内部に培養液91を収容するとともに、観察対象である細胞92を培養液91中に保持する。
次に、細胞観察装置1における細胞観察処理について、図3を参照しつつ説明する。図3は、本実施形態の細胞観察処理の流れを示すフローチャートである。
(フォーカス評価値D4)=(分散値D2)/(エッジ指標値D3)^2
で示される。
以上、本発明の一実施形態について説明したが、本発明は、上記の実施形態に限定されるものではない。
(フォーカス評価値D4)=(分散値D2)/(エッジ指標値D3)
で示される。
9,9A 培養容器
10 制御部
30 撮像装置
40 照明装置
50 移動機構
71 ブラケット撮像制御部
72 分散値算出部
73 エッジ指標値算出部
74 フォーカス評価値算出部
75 合焦点位置推測部
76 観察用焦点位置決定部
77 観察用画像撮像制御部
92,92A 細胞
D1 ブラケット画像
D2 分散値
D3 エッジ指標値
D4 フォーカス評価値
D5 推測合焦点位置
D6 観察用焦点位置
Claims (13)
- 二次元培養された細胞を観察する細胞観察装置であって、
前記細胞が収容された容器を、焦点位置を変更して撮像可能な撮像装置と、
前記容器に照射光を照射する照明装置と、
前記撮像装置を制御する制御部と、
を有し、
前記制御部は、
前記撮像装置に前記焦点位置を変えながら複数のブラケット画像を撮像させるブラケット撮像制御部と、
前記ブラケット画像のそれぞれについて、画素値の分散値を算出する分散値算出部と、
前記ブラケット画像のそれぞれに対して、エッジの強さを表すエッジ指標値を算出するエッジ指標値算出部と、
前記ブラケット画像のそれぞれに対して、前記分散値を前記エッジ指標値の1乗ないし4乗のいずれかで除して、前記合焦点位置において極小値を有するフォーカス評価値を算出するフォーカス評価値算出部と、
前記ブラケット画像のそれぞれに対する前記フォーカス評価値に基づいて、前記フォーカス評価値が極小値を有する前記焦点位置を算出し、前記合焦点位置を推測する合焦点位置推測部と、
を含む、細胞観察装置。
- 請求項1に記載の細胞観察装置であって、
前記フォーカス評価値算出部は、
フォーカス評価値=分散値/(エッジ指標値)^2
として前記フォーカス評価値を算出する、細胞観察装置。 - 請求項1または請求項2に記載の細胞観察装置であって、
前記エッジ指標値算出部は、前記ブラケット画像のそれぞれに対して、ハイパスフィルタ画像を生成し、前記ハイパスフィルタ画像に基づいて、エッジ成分が強いほど大きい値を有する前記エッジ指標値を算出する、細胞観察装置。 - 請求項3に記載の細胞観察装置であって、
前記エッジ指標値算出部は、前記ハイパスフィルタ画像の分散値を前記エッジ指標値とする、細胞観察装置。 - 請求項1ないし請求項4のいずれかに記載の細胞観察装置であって、
前記制御部は、
前記合焦点位置推測部が推測した前記合焦点位置から所定の距離ずれた位置を焦点位置として、前記撮像装置に前記細胞の観察用画像を撮像させる観察用画像撮像制御部
をさらに有する、細胞観察装置。
- 二次元培養された細胞を観察する細胞観察方法であって、
a)焦点位置を変えながら複数のブラケット画像を撮像するブラケット撮像工程と、
b)前記ブラケット画像のそれぞれについて、画素値の分散値を算出する工程と、
c)前記ブラケット画像のそれぞれに対して、エッジの強さを表すエッジ指標値を算出する工程と、
d)前記ブラケット画像のそれぞれに対して、前記分散値を前記エッジ指標値の1乗ないし4乗のいずれかで除して、前記合焦点位置において極小値を有するフォーカス評価値を算出する工程と、
e)前記ブラケット画像における前記焦点位置と前記フォーカス評価値の関係に基づいて、前記フォーカス評価値が極小値を有する前記焦点位置を算出し、前記合焦点位置を推測する工程と、
を有する、細胞観察方法。
- 請求項6に記載の細胞観察方法であって、
前記工程d)において、前記複数の画像のそれぞれの前記フォーカス評価値は、
フォーカス評価値=分散値/(エッジ指標値)^2
として算出される、細胞観察方法。 - 請求項6または請求項7に記載の細胞観察方法であって、
前記工程c)は、
c1)前記ブラケット画像のそれぞれに対して、ハイパスフィルタ画像を生成する工程と、
c2)前記ハイパスフィルタ画像に基づいて、エッジ成分が大きいほど大きい値を有する前記エッジ指標値を算出する工程と、
を含む、細胞観察方法。 - 請求項8に記載の細胞観察方法であって、
前記エッジ指標値は、前記ハイパスフィルタ画像の画素値の分散値である、細胞観察方法。 - 請求項8または請求項9に記載の細胞観察方法であって、
前記工程c1)は、
c11)前記複数の画像のそれぞれに対して、ガウスフィルタ処理を施して、ローパスフィルタ画像を取得する工程と、
c12)前記複数の画像のそれぞれに対して、元画像と前記ローパスフィルタ画像との各画素値との比較により、前記ハイパスフィルタ画像を生成する工程と、
を含む、細胞観察方法。 - 請求項8または請求項9に記載の細胞観察方法であって、
前記工程c1)は、
c13)前記複数の画像のそれぞれに対して、フーリエ変換を行う工程と、
c14)フーリエ変換後の前記複数の画像の低周波成分を除去する工程と、
c15)前記低周波成分を除去したフーリエ変換後の前記複数の画像のそれぞれに対して、逆フーリエ変換を行う工程と、
を含む、細胞観察方法。 - 請求項6ないし請求項11のいずれかに記載の細胞観察方法であって、
前記工程e)において、
複数の前記フォーカス評価値のうち、前記極小値付近の3つの前記フォーカス評価値に対してパラボラフィッティングを行うことにより、前記フォーカス評価値が極小値を有する前記焦点位置を算出する、細胞観察方法。 - 請求項6ないし請求項12のいずれかに記載の細胞観察方法であって、
f)前記工程e)において推測した前記合焦点位置から所定の距離ずれた位置を焦点位置として、前記細胞の撮像を行う、細胞観察方法。
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