JP6632746B2 - 癌を治療するための１−テトラヒドロピラニルカルボニル−２，３−ジヒドロ−１ｈ−インドール化合物 - Google Patents

Description

本発明は、トリプトファンのキヌレニンへの変換を阻害する新規な２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール化合物に関し、そのうちのある種のものはインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ１）に結合することが確認されている。本発明はまた、これらの化合物を含む薬学的組成物、および生理障害の治療、より具体的には、メラノーマ、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、結腸直腸癌、腎細胞癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、卵管癌、原発性腹膜癌、子宮頸癌、胃癌、肝臓癌、膵臓癌、甲状腺癌、神経膠腫、非ホジキンリンパ腫、およびホジキンリンパ腫などの癌の治療のためのこれらの化合物の使用方法に関する。

トリプトファンは、タンパク質生合成、細胞増殖、セロトニン（５−ヒドロキシトリプタミン）、メラトニン、およびコエンザイムニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）などの神経活性代謝物の生成に必要となる必須アミノ酸である。トリプトファンは、トリプトファン異化作用の第１段階および律速段階を触媒するヘム依存性酵素であるインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ１）によってＮ−ホルミル−キヌレニンへと異化され、これは次いで脱ホルミル化されてキヌレニンを生成する。感染中に、ＩＤＯ１の発現がインターフェロンガンマによって誘発されてトリプトファンを局所的に枯渇させることで、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ、およびウイルスなどのトリプトファン依存性細胞内病原体の増殖が阻害される。さらに、ＩＤＯ１は、細胞における酸化損傷の予防、いくつかの神経病理、免疫系の調節、および癌に関与する。ＩＤＯ１活性は病原体に対する免疫応答の重要な要素であるが、長期に渡る活性は細胞外トリプトファンの枯渇とともに、キヌレニンの付随的な生成をもたらし、それらの両者とも免疫抑制性である。癌におけるＩＤＯ１発現は、文書で十分に立証されており、ＩＤＯ１遺伝子発現の内因性活性化および／または免疫細胞活性化の結果であるＩＦＮ−γからＩＤＯ１までの軸の活性化の両方によって起こる。さらに、樹状細胞、単球、およびマクロファージなどの自然免疫細胞は、炎症部位および腫瘍微小環境に動員され、ＩＤＯ１を発現した場合には免疫抑制性である。ＩＤＯ１依存性のトリプトファン枯渇およびキヌレニンの生成は一緒になって、Ｔ細胞活性化の抑制およびなＮＫ細胞機能の増大に関連している。さらに、トリプトファンの枯渇およびキヌレニンの生成は、免疫細胞の活性化を弱めるように機能する、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）および骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の形成に重要である。これらのＩＤＯ１依存性免疫抑制機構は、腫瘍が免疫系を回避することを可能にする構成要素である。

ＩＤＯ１阻害による潜在的なキヌレニン生成阻害剤は、文献に既に知られている。例えば、ＷＯ２０１０／００５９５８、ＷＯ２０１２／１４２２３７およびＷＯ２０１４／１５０６４６、ならびにＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２０１６），５９（１），４１９−４３０を参照のこと。ある種の２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール化合物は当該技術分野において知られている。例えば、ＣＡＳ登録番号１３５９４２０−１９−１、１３５８９１２−５７−８、１３５８６４８−６８−６、１３５７８１５−０５−４、１３５９０３５−８９−４、および１３５９００２−７７−９を参照のこと。

新たな癌治療が必要とされている。特に、メラノーマ、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、結腸直腸癌、腎細胞癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、卵管癌、原発性腹膜癌、子宮頸癌、胃癌、肝臓癌、膵臓癌、甲状腺癌、神経膠腫、非ホジキンリンパ腫、およびホジキンリンパ腫に対する新たな癌治療が必要とされている。癌治療に有用な代替のキヌレニン生成阻害剤を提供する必要性が依然として存在する。好ましくは、このような化合物は、患者に許容可能な認容性を有しながら腫瘍細胞増殖の最大限の阻害に必要な最適な投薬を可能にする特性を有する。好ましくは、このような化合物はまた、経口的に生体利用可能である。好ましくは、このような化合物はまた、血液脳関門を通過し、したがって脳曝露を有する能力も有する。好ましくは、このような化合物は、代替の作用機序を有することにより、既存のキヌレニン阻害剤に対する抵抗性を潜在的に克服する能力も有する。

本発明は、キヌレニン生成阻害剤である、ある種の新規な２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール化合物を提供する。当業者は、キヌレニン生成阻害剤が、異なる種類の癌、特に、メラノーマ、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、結腸直腸癌、腎細胞癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、卵管癌、原発性腹膜癌、子宮頸癌、胃癌、肝臓癌、膵臓癌、甲状腺癌、神経膠腫、非ホジキンリンパ腫、およびホジキンリンパ腫の治療のために、単一剤としてまたは他の抗癌剤と組み合わせて臨床的有用性を有し得ることを理解するであろう。

本発明はまた、下記式の化合物を提供する：

式中、
Ｒ１ａは、水素、メチル、エテニル、シアノ、フルオロ、クロロ、フルオロメチル、またはジフルオロメチルであり、
Ｒ１ｂは、水素、フルオロ、またはクロロであり、
Ｒ１ｃは、水素、ヒドロキシ、フルオロ、ベンジルオキシ、またはヒドロキシエチルアミノであり、
Ｒ２は、水素またはメチルであり、
Ｒ２ａは、水素またはメチルであり、
Ｒ３ａは、テトラヒドロピラニルである。

本発明は、下記式の化合物を提供する。

本発明はまた、下記式の化合物も提供する。

本発明はまた、下記式の化合物も提供する。

本発明はまた、４−フルオロ−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エチル｝ベンズアミドである化合物を提供する。好ましくは、本化合物は、結晶型の４−フルオロ−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エチル｝ベンズアミドである。該化合物は、１２．５１°、１５．６５°、１６．３７°、１７．５６°、２１．４８°、および２５．２３°（２θ±０．２°）からなる群から選択される１つ以上のピークと組み合わせて１７．３８°に少なくとも１つのピークを含むＸ線粉末回折パターン（Ｃｕ放射線、λ−１．５４０６０Å）によって特徴付けられる、結晶性４−フルオロ−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エチル｝ベンズアミドであることが好ましい。

本発明はまた、本発明のある種の化合物の製造方法に有用である、下記式の中間体またはその塩も提供する。

本発明はまた、本発明のある種の化合物の製造方法に有用である、下記式の中間体またはその塩も提供する。

本発明はまた、本発明のある種の化合物の製造方法に有用である、下記式の中間体またはその塩も提供する。

本発明はまた、本発明のある種の化合物の製造方法に有用である、下記式の中間体も提供する。

本発明はまた、本発明のある種の化合物の製造方法に有用である、下記式の中間体も提供する。

本発明はまた、本発明のある種の化合物の製造方法に有用である、下記式の中間体も提供する。

本発明はまた、本発明の化合物を薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤とともに含む、薬学的組成物も提供する。好ましくは、本化合物は、４−フルオロ−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エチル｝ベンズアミドである。

本発明は、メラノーマ、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、結腸直腸癌、腎細胞癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、卵管癌、原発性腹膜癌、子宮頸癌、胃癌、肝臓癌、膵臓癌、甲状腺癌、神経膠腫、非ホジキンリンパ腫、およびホジキンリンパ腫からなる群から選択される癌を有する患者を治療する方法であって、有効量の本発明の化合物を該患者に投与することを含む、方法を提供する。好ましくは、癌は、メラノーマである。好ましくは、癌は、結腸直腸癌である。好ましくは、癌は、腎細胞癌である。好ましくは、癌は、乳癌である。好ましくは、癌は、肺癌、特に非小細胞肺癌である。好ましくは、癌は、卵巣癌である。好ましくは、癌は、神経膠腫である。好ましくは、本化合物は、４−フルオロ−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エチル｝ベンズアミドである。

本発明はまた、治療に使用するための本発明の化合物も提供する。さらに、本発明は、メラノーマ、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、結腸直腸癌、腎細胞癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、卵管癌、原発性腹膜癌、子宮頸癌、胃癌、肝臓癌、膵臓癌、甲状腺癌、神経膠腫、非ホジキンリンパ腫、およびホジキンリンパ腫からなる群から選択される癌の治療に使用するための本発明の化合物を提供する。好ましくは、癌は、メラノーマである。好ましくは、癌は、結腸直腸癌である。好ましくは、癌は腎細胞癌であり、好ましくは、癌は乳癌である。好ましくは、癌は、肺癌、特に非小細胞肺癌である。好ましくは、癌は、卵巣癌である。好ましくは、癌は、神経膠腫である。好ましくは、本化合物は、４−フルオロ−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エチル｝ベンズアミドである。好ましくは、本化合物は、４−フルオロ−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エチル｝ベンズアミドである。

本発明はまた、非小細胞肺癌および結腸癌からなる群から選択される癌の治療において、同時に、別々に、または連続的に使用するための本発明の化合物およびＬＹ３３０００５４を含む組み合わせを提供する。好ましくは、癌は、非小細胞肺癌である。好ましくは、癌は、結腸癌である。好ましくは、本化合物は、４−フルオロ−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エチル｝ベンズアミドである。好ましくは、本化合物は、４−フルオロ−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エチル｝ベンズアミドであり、癌は、非小細胞肺癌である。好ましくは、本化合物は、４−フルオロ−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エチル｝ベンズアミドであり、癌は、結腸癌である。

下記段落は、式Ｉの好ましい類について記載する：
ａ）Ｒ１ａは、水素、メチル、シアノ、フルオロ、またはクロロであり、
ｂ）Ｒ１ｂは、水素、フルオロ、またはクロロであり、
ｃ）Ｒ１ｃは、水素またはヒドロキシであり、
ｄ）Ｒ２は、水素またはメチルであり、
ｅ）Ｒ２ａは、水素またはメチルであり、
ｆ）Ｒ３ａは、テトラヒドロピラニルであり、
ｇ）Ｒ１ａはフルオロであり、Ｒ１ｂは水素であり、Ｒ１ｃは水素であり、Ｒ２は水素であり、Ｒ２ａは水素であり、Ｒ３はテトラヒドロピラニルである。

ある種の本発明の化合物は結晶性である。結晶学分野では、任意の所与の結晶形に関して、結晶形態および晶癖などの要因から生じる好ましい配向に起因して、回折ピークの相対強度が変化し得ることは周知である。好ましい配向の効果が存在する場合、ピーク強度は変化するが、多形体の特徴的なピーク位置は変化しない。例えば、Ｔｈｅ Ｕ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ ３８−Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ ３５ Ｃｈａｐｔｅｒ ＜９４１＞ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ ａｎｄ ｐａｒｔｉａｌｌｙ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ ｓｏｌｉｄｓ ｂｙ Ｘ−ｒａｙ ｐｏｗｄｅｒ ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ（ＸＲＰＤ）Ｏｆｆｉｃｉａｌ Ｍａｙ １，２０１５を参照のこと。さらに、結晶学分野では、任意の所与の結晶形に関して、ピークの角度位置が若干変化し得ることもまた周知である。例えば、ピーク位置は、試料が分析される温度もしくは湿度の変動、試料の位置ずれ、または内部標準の有無に起因してシフトし得る。本発明の場合、２θの±０．２のピーク位置の変動は、示された結晶形の明確な同定を妨げることなくこれらの潜在的な変動として考慮される。結晶形の確認は、特徴的なピーク（°２θの単位で）、典型的にはより顕著なピークの任意の固有の組み合わせに基づいて行われ得る。周囲温度および相対湿度で収集された結晶形の回析パターンは、８．８５および２６．７７度の２シータのＮＩＳＴ６７５基準ピークに基づいて調整した。

本明細書中で使用する場合、「治療する」、「治療すること」、または「治療」は、存在する症状または障害の進行または重症度を抑制、減速、停止、または反転させることを指す。

本明細書中で使用する場合、「患者」という用語は、特定の疾患、障害、または状態に罹患している哺乳動物、特にヒトなどの温血動物を指す。

当業者は、本発明の化合物およびある種の中間体が互変異性型で存在し得ることを理解するであろう。本願において本発明の化合物の特定の互変異性体の１つについて任意の参照が示されるとき、互変異性型およびそれらの全ての混合物の両方を包含すると理解される。

本明細書に開示されるいくつかの本発明の中間体または化合物は、１つ以上のキラルまたステレオジェン中心を有し得る。すべての個々の立体異性体、エナンチオマー、およびジアステレオマー、ならびにこれらの前述の本発明の化合物または中間体の全てのエナンチオマーおよびジアステレオマーの混合物は、ラセミ体を含むことが意図される。少なくとも１つのキラル中心を含む本明細書に開示される本発明の化合物または中間体は、単一のエナンチオマーまたはジアステレオマーとして存在することが好ましい。単一のエナンチオマーもしくはジアステレオマーは、（調製および実施例で示すように）キラル試薬で開始するか、または立体選択的もしくは立体特異的合成技術により調製し得る。あるいは、単一のエナンチオマーまたはジアステレオマーは、（調製および実施例で示すように）標準的なキラルクロマトグラフィーまたは結晶化技術により、混合物から単離し得る。当業者は、いくつかの状況において、エナンチオマーまたはジアステレオマーの溶出順が、異なるクロマトグラフィカラムおよび移動相によって異なり得ることを理解するだろう。

化合物名における「異性体１」の表示は、一対の鏡像異性体の混合物がキラルクロマトグラフィーによって分離される場合、本発明の対応する中間体または化合物が２つの溶出エナンチオマーの最初であることを表す。化合物名における「異性体２」の表示は、一対の鏡像異性体の混合物がキラルクロマトグラフィーによって分離される場合、本発明の対応する中間体または化合物が２つの溶出エナンチオマーの２番目であることを表す。

化合物名における「異性体Ａ」の表示は、本発明の対応する中間体または化合物が、未知の絶対配置のキラル合成から得られる単一の異性体であることを意味する。

本明細書中で使用する場合、「ＬＹ３３０００５４」は、軽鎖（ＬＣ）および重鎖（ＨＣ）を含むヒトＰＤ−Ｌ１（配列番号１）に結合する抗体であり、ここで、それぞれ、軽鎖は軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、重鎖は重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ＬＣＶＲは軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列はＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮ（配列番号５）であり、ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列はＹＧＮＳＮＲＰＳ（配列番号６）であり、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列はＱＳＹＤＳＳＬＳＧＳＶ（配列番号７）であり、ＨＣＶＲは重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含み、ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列はＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳ（配列番号２）であり、ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列はＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号３）であり、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列はＡＲＳＰＤＹＳＰＹＹＹＹＧＭＤＶ（配列番号４）である。

ＬＹ３３０００５４のいくつかの実施形態では、ＬＹ３３０００５４は、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合し、軽鎖（ＬＣ）および重鎖（ＨＣ）を含み、ここで、軽鎖は軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、重鎖は重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ＬＣＶＲのアミノ酸配列は配列番号９であり、ＨＣＶＲのアミノ酸配列は配列番号８である。ＬＹ３３０００５４のいくつかの実施形態では、ＬＹ３３０００５４は、ヒトＰＤ−Ｌ１に結合し、軽鎖（ＬＣ）および重鎖（ＨＣ）を含み、ここで、ＬＣのアミノ酸配列は配列番号１０であり、ＨＣはアミノ配列番号１１で示されるアミノ酸配列を有する。ＬＹ３３０００５４の一実施形態において、ＬＹ３３０００５４は、２つの軽鎖および２つの重鎖を含み、ここで、各軽鎖は配列番号１１に示されるアミノ酸配列を有し、各重鎖は配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有する。

本明細書中で使用する場合、「軽鎖可変領域」または「ＬＣＶＲ」という用語は、ＣＤＲおよびＦＲのアミノ酸配列を含む抗体分子の軽鎖の一部を意味する。

本明細書中で使用する場合、「重鎖可変領域」「ＨＣＶＲ」という用語は、ＣＤＲおよびＦＲのアミノ酸配列を含む抗体分子の重鎖の一部を意味する。

本明細書中で使用する場合、「相補性決定領域」および「ＣＤＲ」という用語は、抗体またはその抗原結合フラグメントのＬＣポリペプチドおよびＨＣポリペプチドの可変領域内に見出される非連続な抗原結合部位を意味する。これらの特定の領域は、Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９０：３８２−９３（１９７１）、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９−６６１６（１９７７）、Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１−３２４２（１９９１）、Ｃｈｏｔｈｉａ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）、ＭａｃＣａｌｌｕｍ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２６２：７３２−７４５（１９９６）、およびＮｏｒｔｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４０６，２２８−２５６（２０１１）を含む他者によって記述されており、ここで、定義には、互いに比較した場合のアミノ酸残基の重複またはサブセットが含まれる。

ＣＤＲは、フレーム領域（「ＦＲ」）と呼ばれる、より保存された領域とともに点散している。各ＬＣＶＲおよびＨＣＶＲは、以下のＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順で、アミノ末端からカルボキシ末端に配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成される。軽鎖の３つのＣＤＲは、「ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３」と称し、重鎖の３つのＣＤＲは、「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３」と称する。ＣＤＲは、抗原と特異的な相互作用を形成する残基の大部分を含む。ＬＣＶＲおよびＨＣＶＲ領域内のＣＤＲアミノ酸残基の番号付けおよび配置決めは、既知の慣例（例えば、Ｋａｂａｔ（１９９１）、Ｃｈｏｔｈｉａ（１９８７）、および／またはＮｏｒｔｈ（２０１１））に従う。本発明の異なる実施形態において、ＬＹ３３０００５４のＦＲは、ヒト生殖系列配列と同一であってもよく、または天然もしくは人工的に修飾されていてもよい。

本明細書中で使用する場合、「Ｋ_Ｄ」という用語は、特定の抗体−抗原または抗体断片−抗原相互作用の平衡解離定数を意味する。

本明細書中で使用する場合、「結合する」という用語は、ヒトＰＤ−Ｌ１に対する抗体の親和性を意味し、別段の明示がない限り、本質的に本明細書に記載されるように３７℃で表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）バイオセンサを使用することを含む、当該技術分野で既知の一般的な方法によって決定される、約１ｘ１０^−６Ｍ未満、好ましくは約１ｘ１０^−９Ｍ未満のＫ_Ｄを意味することを意図する。

本明細書中で使用する場合、以下の用語は示した意味を有する：「ＡＣＮ」はアセトニトリルを指し、「ＡＰＣＩ」は大気圧化学イオン化を指し、「ＢＴＩ」は［ビス（トリフルオロアセトキシ）ヨード］ベンゼンを指し、「ＣＤＩ」はカルボニルジイミダゾールを指し、「ＤＣＭ」はジクロロメタンを指し、「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを指し、「ＤＭＦ」はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを指し、「ＤＰＢＳ」はダルベッコリン酸緩衝生理食塩水を指し、「ＥＳ」はエレクトロスプレーイオン化を指し、「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを指し、「ＥｔＯＨ」はエタノールを指し、「ＦＢＳ」はウシ胎仔血清を指し、「ＨＰＬＣ」は高速液体クロマトグラフィーを指し、「ｉＰｒＯＨ」はイソプロパノールを指し、「ＬＣ／ＭＳ−ＭＳ」は液体クロマトグラフィータンデム質量分析を指し、「Ｌ−キヌレニン−ｄ４」は（２Ｓ）−２−アミノ−４−（２−アミノ−３，４，５，６−テトラジュウテリオ−フェニル）−４−オキソ−ブタン酸を指し、「ＭＥＳ」は２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸を指し、「ＭＳ」は質量分析を指し、「ＭｅＯＨ」はメタノールを指し、「ＰＢＳ」はリン酸緩衝生理食塩水を指し、「ＴＦＡ」はトリフルオロ酢酸を指し、「ＴＥＡ」はトリエチルアミンを指し、「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを指し、「ＳＦＣ」は超臨界流体クロマトグラフィーを指し、「ＵＶＷ」は紫外線波長を指す。

本発明の化合物は、当該技術分野において周知であり理解される方法による以下のスキーム、調製、および実施例に従って調製することができる。これらの調製および実施例の工程に対する好適な反応条件は、当該技術分野において周知であり、溶媒および共試薬の適当な置換は、当該技術分野の技術の範囲内である。同様に、合成中間体は、必要または所望に応じて、様々な周知技術により単離および／または精製し得ること、並びにしばしば、様々な中間体は、その後の合成工程において直接に、ほとんどまたは全く精製せずに使用可能であることが、当業者により理解されるだろう。さらに、当業者は、いくつかの状況において、部分が導入される順番は重要ではないことを理解するであろう。本発明の化合物を製造するのに必要な工程の特定の順番は、熟練の化学者によく理解されているように、合成される特定の化合物、出発化合物、および置換部分の相対的な不利益に依存する。全ての置換基は、別段の明示がない限り、先に定義した通りであり、全ての試薬は、当該技術分野において周知であり理解されている。

本発明の化合物は、以下のスキームに示されるようにして合成することができ、ここで、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃ、Ｒ２、Ｒ２ａ、およびＲ３ａは、先に定義した通りである。

スキーム１は、式Ｉの化合物の一般的な合成を示し、Ｒ２はＨである。工程１において、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール（化合物１）を、酸塩化物などの適当な活性化カルボン酸と、ＴＥＡなどの好適な塩基の存在下、ＤＣＭまたはジクロロエタン（ＤＣＥ）などの適当な溶媒中、０℃〜還流などの適当な温度で反応させる。当業者は、工程１の反応を達成するために、多くの活性化カルボン酸およびカルボン酸を原位置で活性化する多くの方法があることを理解するであろう。次いで、工程１の得られたケトン（化合物２）を、ヒドロキシルアミンで、ＥｔＯＨなどの極性プロトン性溶媒中、室温〜還流などの適当な温度で処理し、ＥおよびＺ異性体の混合物としてオキシム（化合物３）を得る。工程３は、オキシム（化合物３）のアミン（化合物４）への還元を示す。当業者は、この変換に作用する多くの方法が利用可能であることを理解するであろう。例えば、オキシム（化合物３）を、ＲＡＮＥＹ（登録商標）ニッケルなどの適当な触媒と、ＭｅＯＨまたはＥｔＯＨなどの適当な溶媒中、ＰＡＲＲ（登録商標）シェーカーなどの適当な反応器中で接触させる。次いで、混合物を、１００〜５００ｋＰａなどの水素圧に、室温〜５０℃などの適当な温度で、１〜２４時間などの適当な時間晒す。スキーム１の工程４は、式Ｉの化合物を得るために、ＴＥＡなどの適当な塩基の存在下およびＤＣＭまたはＤＣＥなどの適当な溶媒中、０℃〜還流などの適当な温度で、アミン（化合物４）と酸塩化物などの適当な活性化カルボン酸とをアミドカップリングすることを示している。当業者は、工程４の反応を達成するために、多くの活性化カルボン酸およびカルボン酸を原位置で活性化する多くの方法があることを理解するであろう。当業者は、スキーム１の工程３および工程４によってキラル中心を有する生成物が得られることをさらに理解するであろう。個々のエナンチオマーは、本発明の化合物の合成における任意の好都合な時点で、選択的結晶化技術またはキラルクロマトグラフィーなどの方法により、当業者によって分離または分割し得る（例えば、Ｊ．Ｊａｃｑｕｅｓ，ｅｔ ａｌ．，“ｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ，ａｎｄ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ”，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９８１、およびＥ．Ｌ．Ｅｌｉｅｌ ａｎｄ Ｓ．Ｈ．Ｗｉｌｅｎ，“Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ”，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，１９９４を参照のこと）。

スキーム２は、式Ｉの化合物の代替の一般的合成を示し、Ｒ２はＨである。工程１において、ケトン（化合物２）を、適当なキラルなスルフィンアミドと、チタン（ＩＶ）エトキシドなどの適当なルイス酸の存在下、ＴＨＦなどの適当な溶媒中、室温〜還流などの適当な温度で、１〜２４時間などの適当な時間反応させて、キラルなエチリデンスルフィンアミド（化合物５）を得る。当業者は、スルフィンアミドのエナンチオマー（化合物５）のいずれかを生成するための試薬が利用可能であることを理解するであろう。工程２において、エチリジンスルフィンアミド（化合物５）からエチルスルフィンアミド（化合物６）を生成するためのキラル還元を示し、明瞭化のためにアスタリスクを使用してキラル中心を示す。例えば、ジクロロ（ｐ−シメン）ルテニウム（ＩＩ）二量体などの適当なルテニウム試薬を、２−アミノ−２−メチル−１−プロパノールなどの適当なアミノエタノールと、ｉＰｒＯＨなどの適当な溶媒中、４Åモレキュラーシーブなどの水スカベンジャーの存在下、室温〜還流などの適当な温度で、５分〜約１時間などの適当な時間混合することにより、適当な触媒を予め形成する。予め形成された触媒反応物を、室温〜５０℃などの適当な温度に冷却し、エチリデンスルフィンアミド（化合物５）およびカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドなどの適当な塩基で処理する。反応は、室温〜５０℃などの適当な温度で、１〜２４時間などの適当な時間維持される。当業者は、同じ変換に作用する多くの触媒法および化学量論的方法があり、これらの方法は、使用される基質および試薬の性質に応じて、単一ジアステレオマーの生成を含むそれ以下のジアステレオマーの濃縮をもたらし得ることを理解するであろう。エチルスルフィンアミド（化合物６）の酸加水分解は、塩酸（ＨＣｌ）などの適当な酸で、ジオキサン、ｉＰｒＯＨ、ＥｔＯＡｃ、またはＭｅＯＨなどの適当な溶媒中、０℃〜室温などの温度で、１〜８時間などの適当な時間処理することによって行うことができ、アミン（化合物４）を得る。当業者は、単離のための多くの方法が知られており、これらはアミン（化合物４）の塩または遊離塩基のいずれかの単離をもたらし得ることを理解するであろう。工程４は、式Ｉの化合物を得るための、スキーム１の工程４と同様のアミン（化合物４）と適当な活性化カルボン酸とのアミドカップリングを示している。

スキーム３は、式Ｉの化合物の代替の一般的合成を示し、Ｒ２はＨである。工程１は、ワインレブアミド（化合物８）を得るための、カルボン酸（化合物７）とＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩とのアミドカップリングを示している。当業者は、この変換に作用する多くの方法があることを理解するであろう。例えば、カルボン酸（化合物７）を、１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム−３−オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）などの適当なカップリング試薬で、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンなどの適当な塩基の存在下、ＤＭＦなどの適当な溶媒中、５〜１０分間などの適当な時間処理する。次いで、混合物をＮ，Ｏ−ジメチルヒドキシルアミン塩酸塩で処理し、該混合物を室温〜１００℃などの適当な温度で３〜１８時間などの適当な時間撹拌する。次に、得られたワインレブアミド（化合物８）を、工程２において、適当なグリニャール、アルキルリチウム、またはアルキル亜鉛試薬で処理して、ケトン（化合物９）を得る。当業者は、この変換に作用する多数の方法が利用可能であることを理解するであろう。例えば、０℃〜−７８℃などの適当な温度でのＴＨＦなどの適当な溶媒中のワインレブアミド（化合物８）を、臭化エチルマグネシウムなどの適当なアルキル金属試薬で処理する。添加後、反応を１〜１８時間などの適当な時間継続し、ケトン（化合物９）を得る。スキーム３の工程３、４、および５は、明瞭化のために示している。これらの方法は、それぞれスキーム１の工程２、３、および４に示されているものと同様である。当業者は、化合物１１がキラル中心を含み、化合物１１に対してキラル精製を行うことができ、またはラセミ混合物を繰り越すことができ、任意のその後の工程後に分離を行うことができることを理解するであろう。工程６は、アミン（化合物１３）を得るための、カルバメート（化合物１２）のｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基の脱保護を示す。当業者は、この変換を酸性、塩基性、または熱条件下で実施できることを理解するであろう。例えば、カルバメート（化合物１２）を、ＨＣｌなどの適当な酸と、ジオキサンもしくはＤＣＭまたはそれらの混合物などの適当な溶媒中、０℃〜還流などの適当な温度で、１〜１８時間などの適当な時間接触させ、アミン（化合物１３）を得る。当業者は、アミンを塩または遊離塩基として単離する方法があることを理解するであろう。工程７は、式Ｉの化合物を得るための、アミン（化合物１３）と活性化カルボン酸とのアミドカップリングを示している。条件は、スキーム１の工程１に示したものと同様である。

スキーム４は、式Ｉの化合物の代替の一般的合成を示す。工程１は、カルバメート（化合物１４）を得るための、ベンジルカルバメート保護基でのアミン（化合物１１）の保護を示す。当業者は、化合物１４上のｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基に対して直交性の保護基である多くのアミン保護基が利用可能であることを理解するであろう。例示的な手順では、ＤＣＭなどの適当な溶媒中およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンなどの好適な塩基の存在下、アミン（化合物１１）を、ベンジルオキシクロロホルメートと、０℃〜室温の適当な温度で、１〜１８時間などの適当な時間接触させる。スキーム３の工程６で記載した方法と同様の方法を用いて、化合物１４のｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基を選択的に脱保護して、アミン（化合物１５）を得る。次いで、得られたアミン（化合物１５）を、スキーム１の工程１と同様の方法によって、活性化カルボン酸とのアミドカップリング反応に供し、アミド（化合物１６）を得る。工程４は、アミン（化合物４）を得るための、化合物１６のベンジルオキシカルバメート保護基の脱保護を示す。当業者は、この変換に作用する様々な方法が利用可能であることを理解するであろう。例えば、化合物１６を、ＥｔＯＨなどの適当な溶媒中、１００〜５００ｋＰａなどの適当な水素圧下、１〜８時間などの適当な時間、水酸化パラジウムなどの適当な触媒との接触水素化に供し、アミン（化合物４）を得る。最後に、アミン（化合物４）の式Ｉの化合物への変換は、スキーム１の工程４に記載の通りである。

スキーム５は、式Ｉの化合物の代替の一般的合成を示す。工程１は、アミド（化合物１８）を得るための、アミン（化合物１７）と活性化カルボン酸とのアミドカップリングを示す。条件は、スキーム１の工程１に示したものと同様である。工程２は、臭化物（化合物１８）とエステルエノラートとの触媒クロスカップリングによるアルファアリールエステル（化合物１９）の形成を示す。当業者は、この変換に作用し得る広範囲の条件を理解するであろう。例えば、トルエンなどの適当な溶媒中のジシクロヘキシルアミンなどの適当なジアルキルアミンの溶液を、ｎ−ブチルリチウムなどの適当なリチウム塩基で、０℃〜−７８℃などの適当な温度で、１０分〜１時間などの適当な時間処理する。この溶液を、トルエンなどの適当な溶媒中、２−メチルプロパン酸メチルなどの適当なエステルの溶液で処理し、得られた混合物を、１０分〜１時間などの適当な時間、０℃〜−４０℃などの適当な温度で撹拌する。次いで、得られた混合物を、ジ−μ−ブロモビス（トリ−ｔ−ブチルホスフィン）ジパラジウム（Ｉ）などの適当なパラジウム触媒で処理し、該混合物を、０℃〜室温などの適当な温度で、１〜１８時間などの適当な時間撹拌し、アルファアリールエステル（化合物１９）を得る。エステル（化合物１９）は、当技術分野で周知の方法によって加水分解し、酸（化合物２０）にすることができる。例えば、エステル（化合物１９）を、カリウムトリメチルシラノレートなどの適当な塩基と、室温などの適当な温度で、１〜７日間などの適当な時間、ＴＨＦなどの適当な溶媒中、接触させる。工程４は、カルボキサミド（化合物２１）を得るための、カルボン酸（化合物２０）とアンモニアとのアミドカップリングを示す。当業者は、カルボン酸を活性化するおよびアンモニア源を導入するために利用可能な多くの方法を理解するであろう。例えば、カルボン酸（化合物２０）を、１，１’−カルボニルジイミダゾールと、ＤＣＭもしくはＤＭＦまたはそれらの混合物などの適当な溶媒中、０℃〜還流などの適当な温度で、３０分〜８時間などの適当な時間接触させる。水酸化アンモニウムを混合物に加え、反応を１〜１８時間などの追加の時間続ける。工程２１は、カルボキサミド（化合物２１）のアミン（化合物４）へのホフマン転位を示す。当業者は、この変換に作用し得る非常に様々な試薬および条件を理解するであろう。例えば、ＡＣＮおよび水の混合物などの適当な溶媒中のカルボキサミド（化合物２１）の溶液を、［ビス（トリフルオロアセトキシ）ヨード］ベンゼンで、室温〜還流などの適当な温度で、１〜１８時間などの適当な時間処理する。最後に、アミン（化合物４）の式Ｉの化合物への変換は、スキーム１の工程４に記載されている。

調製１
１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エタノンの合成
ＴＥＡ（５１．９ｍＬ、３７２．２ｍｍｏｌ）およびテトラヒドロピラン−４−カルボニルクロリド（２２．１ｇ、１４８．９ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（４９６ｍＬ）中の１−インドリン−５−イルエタノン（２０．０ｇ、１２４．１ｍｍｏｌ）の混合物に加える。得られた混合物を室温で２時間撹拌する。反応混合物をＤＣＭ（５００ｍＬ）で希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄する。有機層を単離し、水層をＤＣＭ（５００ｍＬ）で２回抽出する。合わせた有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を濃縮して、表題化合物を淡黄色固体として定量的に得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２７４．０（Ｍ＋Ｈ）。

代替の単離手順：
生成物をヘプタンで処理し、濃縮する。処理および濃縮を再度繰り返す。ヘプタンで処理し、０〜５℃に冷却する。濾過により生成物を回収し、ヘプタンですすぎ、乾燥して、表題化合物を得る。

調製２
［５−（Ｎ−ヒドロキシエタンイミドイル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メタノンの合成
ヒドロキシルアミン（水中５０質量％、２２．８ｍＬ、３７２ｍｍｏｌ）を、ＥｔＯＨ（１２４０ｍＬ）中の１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エタノン（調製１）（３３．９ｇ、１２４．０ｍｍｏｌ）の混合物に加える。得られた混合物を室温で３日間撹拌する。反応混合物を濃縮して、表題化合物をＥ／Ｚ異性体の混合物として定量的に得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８９．０（Ｍ＋Ｈ）。

調製３
ラセミ体［５−（１−アミノエチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メタノンの合成
ＲＡＮＥＹ（登録商標）ニッケル（ＥｔＯＨ中のスラリー、６０ｇ）を２２５０ｍＬのＰＡＲＲ（登録商標）シェーカーボトルに加え、窒素でパージする。ＭｅＯＨ（７００ｍＬ）中の２Ｍアンモニア、次いで、ＭｅＯＨ（７００ｍＬ）中の２Ｍアンモニア中の［５−（Ｎ−ヒドロキシエタンイミドイル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メタノン（調製２）（３５．８ｇ、１２４．０ｍｍｏｌ）の溶液を加える。必要に応じて、潜在的に発熱性の混合物を室温に冷却し、密閉し、窒素で、次いで水素でパージする。水素下（６０ｐｓｉまたは４１４ｋＰａ）、４時間、室温で撹拌する。固体を濾過除去し、濾液を濃縮する。ＥｔＯＡｃ中の７〜２６％（ＭｅＯＨ中７Ｍアンモニア）を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題化合物（２６．５ｇ、７８％）をオフホワイトの固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２７５．０（Ｍ＋Ｈ）。

調製４ＡおよびＢ
［５−（１−アミノエチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メタノン、異性体１、および［５−（１−アミノエチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メタノン、異性体２の分離
キラルＳＦＣにより、ラセミ体［５−（１−アミノエチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メタノン（調製３）を精製して、第１の溶出エナンチオマー（異性体１）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２７５．０（Ｍ＋Ｈ）。精製条件：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＤ−Ｈ、５０×１５０ｃｍカラム；移動相：ＣＯ_２中の４０％ＥｔＯＨ（０．５％Ｎ，Ｎ−ジメチルエチルアミンを含む）；カラム温度：４０℃；流速：３００ｇ／分；ＵＶＷ：２６０ｎｍ。キラル分析用ＳＦＣ（＞９９％ｅｅ、Ｒ_ｔ：１．３５分；カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＤ−Ｈ、４．６×１５０ｍｍ；移動相：ＣＯ_２；中の４０％ＥｔＯＨ（０．５％Ｎ，Ｎ−ジメチルエチルアミンを含む）；流速：５ｍＬ／分；ＵＶＷ：２６０ｎｍ）により、またはキラル分析用ＨＰＬＣ（９７．４％ｅｅ、Ｒ_ｔ：６．４８分；カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＤ−Ｈ、４．６ｍｍ×１５０ｍｍ；移動相：１００％ＥｔＯＨ（０．２％イソプロピルアミンを含む）；流速：１ｍＬ／分；ＵＶＷ：２２５ｎｍ）により、異性体１のエナンチオマー濃縮を確認する。

上記精製により、第２の溶出エナンチオマー（異性体２）も得られる。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２７５．１（Ｍ＋Ｈ）。キラル分析用ＳＦＣ（９７．２％ｅｅ、Ｒ_ｔ：１．８５分；カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＤ−Ｈ、４．６×１５０ｍｍ；移動相：ＣＯ_２中の４０％ＥｔＯＨ（０．５％Ｎ，Ｎ−ジメチルエチルアミンを含む）；流速：５ｍＬ／分；ＵＶＷ：２６０ｎｍ）により、またはキラル分析用ＨＰＬＣ（９７．６％ｅｅ、Ｒ_ｔ：５．３１分；カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＤ−Ｈ、４．６ｍｍ×１５０ｍｍ；移動相：１００％ＥｔＯＨ（０．２％イソプロピルアミンを含む）；流速：１ｍＬ／分；ＵＶＷ：２２５ｎｍ）により、異性体２のエナンチオマー濃縮を確認する。

調製５
（Ｒ）−２−メチル−Ｎ−｛１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エチリデン｝プロパン−２−スルフィンアミドの合成
チタン（ＩＶ）エトキシドを、ＴＨＦ（４３．９ｍＬ）中の１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エタノン（調製１）（３．０ｇ、１１．０ｍｍｏｌ）および（Ｒ）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（１．６ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）の混合物に加える。得られた混合物を２４時間還流する。反応混合物を室温に冷却する。混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）および飽和塩化ナトリウム水溶液（４０ｍＬ）で希釈し、１５分間激しく撹拌する。有機層を単離し、水層をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で２回抽出する。合わせた有機層を飽和水性塩化ナトリウムで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を濃縮する。ＤＣＭ中の１０〜１００％ＡＣＮを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題化合物（３．７ｇ、８７％）を淡黄色固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３７７．０（Ｍ＋Ｈ）。

代替の単離手順：
反応物を室温に冷却する代わりに、反応混合物を１０℃に冷却し、次いで濾過する。固体をトルエンですすぎ、乾燥して、表題化合物を得る。

調製６
（Ｒ）−２−メチル−Ｎ−｛１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エチル｝プロパン−２−スルフィンアミド、異性体Ａの合成
ｉＰｒＯＨ（２ｍＬ）中のジクロロ（ｐ−シメン）ルテニウム（ＩＩ）二量体（０．０２１ｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）、２−アミノ−２−メチル−１−プロパノール（０．００６ｇ、０．０６６ｍｍｏｌ）、およびモレキュラーシーブ（４Å、０．５ｇ）の混合物を加熱還流し、次いで５０℃に冷却する。ｉＰｒＯＨ（８．８ｍＬ）中の（Ｒ）−２−メチル−Ｎ−｛１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エチリデン｝プロパン−２−スルフィンアミド（調製５）（０．５ｇ、１．３３ｍｍｏｌ）の溶液、およびｉＰｒＯＨ（１．６ｍＬ）中のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．０１９ｇ、０．１７ｍｍｏｌ）の溶液を加える。得られた混合物を５５℃で２時間加熱する。次いで、ｉＰｒＯＨ（２ｍＬ）中のジクロロ（ｐ−シメン）ルテニウム（ＩＩ）二量体（０．０２１ｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）、２−アミノ−２−メチル−１−プロパノール（０．０６ｇ、０．６６ｍｍｏｌ）、およびモレキュラーシーブ（４Å、０．５ｇ）の追加の混合物を加熱還流し、５０℃に冷却し、上記反応混合物に加える。ｉＰｒＯＨ（１．６ｍＬ）中のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．０１９ｇ、０．１７ｍｍｏｌ）の溶液を、上記反応混合物に加える。混合物を５５℃で２０分加熱する。反応物を室温に冷却し、一晩撹拌する。反応物をＤＣＭ（２０ｍＬ）で希釈し、珪藻土パッドで濾過する。パッドをＤＣＭ中の５％ＭｅＯＨで洗浄し、濾液を濃縮して、表題化合物を定量的に得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３７９．０（Ｍ＋Ｈ）。

代替の単離手順：
反応物を室温に冷却する代わりに、反応混合物を２８〜３２℃に冷却し、次いで珪藻土で濾過する。濾過固体をジクロロメタンですすぎ、濃縮し、表題化合物を得る。

調製７Ａおよび７Ｂ
［５−（１−アミノエチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メタノン、異性体１の合成
塩酸（１，４−ジオキサン中４Ｍ、１．６６ｍＬ、６．６４ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ（６．６ｍＬ）中の（Ｒ）−２−メチル−Ｎ−｛１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エチル｝プロパン−２−スルフィンアミド、異性体Ａ（調製６）（５０３ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ）の混合物に加える。得られた混合物を室温で１時間撹拌する。残渣を逆相クロマトグラフィー（Ｒｅｄｉｓｅｐ Ｒｆ Ｇｏｌｄ高速Ｃ１８逆相カラム、１０ｍＭ重炭酸アンモニウム水溶液中の０〜１００％ＡＣＮ）によって濃縮し、精製する。濃縮して表題化合物を得る（２６５ｍｇ、７３％）。キラル分析用ＨＰＬＣ（９８．８％ｅｅ、Ｒ_ｔ：６．４０分；カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＤ−Ｈ、４．６ｍｍ×１５０ｍｍ；移動相：１００％ＥｔＯＨ（０．２％イソプロピルアミンを含む）；流速：１ｍＬ／分；ＵＶＷ：２２５ｎｍ）により、エナンチオマー濃縮を確認する。調製４Ａの異性体１であることが確認された。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２７５．０（Ｍ＋Ｈ）。

［５−（１−アミノエチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メタノン塩酸塩、異性体１の合成
塩酸（ｉＰｒＯＨ中５．５Ｍ、４００ｍＬ、２．２０ｍｏｌ）を、ＥｔＯＡｃ（１．２Ｌ）中の（Ｒ）−２−メチル−Ｎ−｛１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エチル｝プロパン−２−スルフィンアミド、異性体Ａ（１６２．３ｇ、３６４ｍｍｏｌ）の５℃のスラリーに、オーバーヘッド機器での撹拌を行いながら、滴下して加える。１００ｍＬの酸溶液を加えた後、冷却浴を取り除く。添加を続け、得られた混合物を室温で３時間撹拌する。３℃に冷却し、濾過する。洗浄液が透明になるまで、濾過ケーキを１〜１．５ＬのＥｔＯＡｃですすぐ。回収した固体を家庭用真空オーブン中６０℃で乾燥して、表題化合物をオフホワイトの固体（９６．４ｇ、８２．５％）として得る。キラル分析用ＨＰＬＣ（９８％ｅｅ、Ｒ_ｔ：６．４５分；カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＤ−Ｈ、４．６ｍｍ×１５０ｍｍ；移動相：１００％ＥｔＯＨ（０．２％イソプロピルアミンを含む）；流速：１ｍＬ／分；ＵＶＷ：２２５ｎｍ）により、エナンチオマーの濃縮を確認する。調製４Ａの異性体１であることが確認された。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２７５．０（Ｍ＋Ｈ）。調製４Ａの異性体１であることが確認された。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２７５．１（Ｍ＋Ｈ）。

調製１と本質的に同様にして以下の化合物を調製する。

調製１０
ｔｅｒｔ−ブチル５−アセチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−カルボキシレートの合成
トルエン（１２ｍＬ）中の１−インドリン−５−イルエタノン（１．００ｇ、６．０２ｍｍｏｌ）の１００℃の溶液を、トルエン（１２ｍＬ）中の二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１．９７ｇ、９．０３ｍｍｏｌ）の溶液で、２０分間にわたって滴下して処理する。混合物の加熱を３０分間続ける。反応混合物を濃縮する。ヘキサン中の１５〜３５％（１：１ ＥｔＯＡｃ：ＤＣＭ）を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題化合物（１．５２ｇ、９７％）を白色固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２６２．０（Ｍ＋Ｈ）。

調製１１
ｔｅｒｔ−ブチル５−［メトキシ（メチル）カルバモイル］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−カルボキシレートの合成
ＤＭＦ（２００ｍＬ）中の１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−カルボン酸（１４．０ｇ、５３．２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２８．０ｍＬ、１６１ｍｍｏｌ）の溶液を、１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム−３−オキシドヘキサフルオロホスフェート（２３．３ｇ、６１．１ｍｍｏｌ）で処理する。得られた混合物を室温で５分間撹拌する。Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（７．２６ｇ、７４．４ｍｍｏｌ）を加える。得られた混合物を室温で一晩撹拌する。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄する。有機層を単離し、水層をＥｔＯＡｃで２回抽出する。合わせた有機層を水で２回洗浄し、飽和塩化ナトリウム水溶液を加えて相分離を促進する。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を濃縮する。ヘキサン中の１０〜３２％アセトンを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題化合物を透明な無色の濃密な油状物として定量的収率で得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３０７．０（Ｍ＋Ｈ）。

調製１２
ｔｅｒｔ−ブチル５−プロパノイル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−カルボキシレートの合成
ＴＨＦ（３１１ｍＬ、無水）中のｔｅｒｔ−ブチル５−［メトキシ（メチル）カルバモイル］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−カルボキシレート（調製１１）（１４．３ｇ、４６．７ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却する。臭化エチルマグネシウム（ジエチルエーテル中３Ｍ、３９．０ｍＬ、１１７ｍｍｏｌ）を２５分間にわたり滴下して加える。０℃で１．５時間撹拌した後、反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液で注意深く急冷する。ＥｔＯＡｃで３回抽出する。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を濃縮する。ヘキサン中の１５〜３０％（１：１ ＥｔＯＡｃ：ＤＣＭ）を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題化合物（１１．７ｇ、９１％）を白色固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２７６．０（Ｍ＋１）。

調製１４では７０℃での加熱により反応速度を増加させることを除いて、調製２と本質的に同様にして以下の化合物を調製する。

調製３と本質的に同様にして以下の化合物を調製する。

調製１７ＡおよびＢ
（キラル分離のための）ｔｅｒｔ−ブチル５−［１−アミノプロピル］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−カルボキシレート、異性体１、およびｔｅｒｔ−ブチル５−［１−アミノプロピル］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−カルボキシレート、異性体２の分離
キラルクロマトグラフィーにより、ラセミ体ｔｅｒｔ−ブチル５−［１−アミノプロピル］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−カルボキシレート（調製１６）を精製して、最初の溶出エナンチオマー（異性体１）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２６０．０（Ｍ−ＮＨ２）^＋。精製条件：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＤ、８×３３．５ｃｍカラム；移動相：１００％ＭｅＯＨ（０．２％Ｎ，Ｎ−ジメチルエチルアミンを含む）；流速：４００ｍＬ／分；ＵＶＷ：２４０ｎｍ。キラル分析用ＨＰＬＣ（＞９９％ｅｅ、Ｒ_ｔ：９．２分；カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＤ−Ｈ、４．６×１５０ｍｍ；移動相：１００％ＭｅＯＨ（０．２％Ｎ，Ｎ−ジメチルエチルアミンを含む）；流速：０．６ｍＬ／分；ＵＶＷ：２８０ｎｍ）により、異性体１のエナンチオマー濃縮を確認する。

上記精製により、第２の溶出エナンチオマー（異性体２）も得られる。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２６０．０（Ｍ−ＮＨ２）^＋。キラル分析ＨＰＬＣ（９９％ｅｅ、Ｒ_ｔ；１４．７分；カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＤ−Ｈ、４．６×１５０ｍｍ；移動相：１００％のＭｅＯＨ（０．２％Ｎ，Ｎ−ジメチルエチルアミンを含む）；流速：０．６ｍＬ／分；ＵＶＷ：２８０ｎｍ）により、異性体２のエナンチオマー濃縮を確認する。

調製１８
ラセミ体ｔｅｒｔ−ブチル５−｛１−［（４−フルオロベンゾイル）アミノ］エチル｝−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−カルボキシレートの合成
ＤＣＭ（５７ｍＬ）中のラセミ体ｔｅｒｔ−ブチル５−［１−アミノエチル］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−カルボキシレート（調製１５）（３．００ｇ、１１．４ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４．０ｍＬ、５７．２ｍｍｏｌ）で処理する。４−フルオロベンゾイルクロリド（１．５２ｍＬ、１２．６ｍｍｏｌ）を加え、一晩撹拌する。反応混合物を水で急冷し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液を加える。層を分離し、ＤＣＭで２回抽出する。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を濃縮する。ヘキサン中の５０〜７５％（ＤＣＭ中の１０％アセトン）を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、淡黄色固体として表題化合物（４．２９ｇ、９８％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４０７．０（Ｍ＋Ｎａ）^＋、３８３．０（Ｍ−Ｈ）⁻。

調製１８と本質的に同様にして以下の化合物を調製する。

調製２０
ｔｅｒｔ−ブチル５−［１−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝プロピル］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−カルボキシレート、異性体Ａの合成
ＤＣＭ（４７．０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル５−［１−アミノプロピル］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−カルボキシレート、異性体２（調製１７Ｂ）（３．２５ｇ、１１．８ｍｍｏｌ）の溶液を、室温で、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４．５３ｍＬ、２５．９ｍｍｏｌ）で処理する。クロロギ酸ベンジル（２．１２ｍＬ、１４．１ｍｍｏｌ）を加え、一晩撹拌する。反応混合物を追加のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２．０６ｍＬ、１１．８ｍｍｏｌ）およびクロロギ酸ベンジル（０．７０７ｍＬ、４．７０ｍｍｏｌ）で処理する。３０分間撹拌する。反応混合物を水で急冷し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液を加える。層を分離し、水層をＤＣＭで２回抽出する。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を濃縮する。ヘキサン中の５〜３５％アセトンの勾配で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、表題化合物（４．４７ｇ、９３％）を白色フォームとして得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４３３．２（Ｍ＋Ｎａ）^＋、４０９．０（Ｍ−Ｈ）⁻。

調製２１
ラセミ体Ｎ−［１−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル）エチル］−４−フルオロベンズアミドの合成
１，４−ジオキサン（２７．９ｍＬ、１１２ｍｍｏｌ）中の４Ｍ塩酸を、ＤＣＭ（１１２ｍＬ）中のラセミ体ｔｅｒｔ−ブチル５−｛１−［（４−フルオロベンゾイル）アミノ］エチル｝−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−カルボキシレート（調製１８）（４．２９ｇ、１１．２ｍｍｏｌ）の混合物に加える。得られた混合物を４０℃で６時間加熱する。２ＮのＮａＯＨ水溶液で中和する。４：１のＣＨＣｌ_３：ＩＰＡを加え、粘着性の固体を溶解し、層を分離する。塩水で有機層を洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を濃縮する。ヘキサン中３０〜６０％（ＤＣＭ中２５％アセトン）の勾配で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、わずかにオフホワイトのフォームとして表題化合物（２．４８ｇ、７８％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８５．０（Ｍ＋Ｈ）。

調製２１と本質的に同様にして以下の化合物を調製する。

調製２４ＡおよびＢ
（キラル分離のための）Ｎ−［１−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル）エチル］−４−フルオロベンズアミド、異性体１、およびＮ−［１−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル）エチル］−４−フルオロベンズアミド、異性体２の分離
キラルＳＦＣにより、ラセミ体Ｎ−［１−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル）エチル］−４−フルオロベンズアミド（調製２１）を精製して、最初の溶出エナンチオマー（異性体１）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８５．０（Ｍ＋Ｈ）。精製条件：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＳ−Ｈ、５×１５ｃｍカラム；移動相：ＣＯ_２中の１５％ｉＰｒＯＨ；カラム温度：４０℃；流速：３００ｇ／分；ＵＶＷ：２５０ｎｍ。キラル分析用ＳＦＣ（＞９９％ｅｅ、Ｒ_ｔ：１．４７分；カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＳ−Ｈ、４．６×１５０ｍｍ；移動相：ＣＯ_２中の２５％ｉＰｒＯＨ；流速：５ｍＬ／分；ＵＶＷ：３００ｎｍ）により、異性体１のエナンチオマー濃縮を確認する。

上記精製により、第２の溶出エナンチオマー（異性体２）も得られる。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８５．０（Ｍ＋Ｈ）。キラル分析用ＳＦＣ（９８．５％ｅｅ、Ｒ_ｔ：２．０８分；カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＳ−Ｈ、４．６×１５０ｍｍ；移動相：ＣＯ_２中の２５％ｉＰｒＯＨ；流速：５ｍＬ／分；ＵＶＷ３００ｎｍ）により、異性体２のエナンチオマー濃縮を確認する。

調製２５
｛５−［１−アミノプロピル］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル｝（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メタノン、異性体Ａの合成
ＥｔＯＨ（３５ｍＬ）中のベンジル｛１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］プロピル｝カルバメート、異性体Ａ（調製９）（２．１２ｇ、５．０２ｍｍｏｌ）の溶液を、ＰＡＲＲ（登録商標）シェーカーボトル中で、ＥｔＯＨ（３５ｍＬ）中の２０％水酸化パラジウム炭素（２．１２ｇ）の窒素パージした懸濁液に加える。シールし、窒素でパージし、次いで水素でパージする。４１４ｋＰａ（６０ｐｓｉ）の水素雰囲気下、室温で３．６時間振盪する。反応混合物を珪藻土で濾過し、濾液を濃縮して、表題化合物（１．３６ｇ、９４％）を灰白色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８９．２（Ｍ＋Ｈ）、２７２．０（Ｍ−ＮＨ２）^＋。

調製２６
２−メチル−２−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］プロパン酸メチルの合成
ｎ−ブチルリチウム（３．６ｍＬ、８．９ｍｍｏｌ、ヘキサン中２．２Ｍ）を、窒素下、トルエン（２５ｍＬ）中のジシクロヘキシルアミン（１．９ｍＬ、９．６ｍｍｏｌ）の０℃の撹拌溶液に加え、２０分間撹拌する。トルエン（５ｍＬ）中のイソ酪酸メチル（０．８３ｇ、８．２ｍｍｏｌ）の溶液を、先に調製した混合物に滴下して加え、０℃で３０分間撹拌する。［５−ブロモ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メタノン（調製８）（２．３ｇ、７．４ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を窒素で脱気する。ジ−μ−ブロモビス（トリ−ｔ−ブチルホスフィン）ジパラジウム（Ｉ）（５０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を窒素下で室温に温める。２時間後、ジ−μ−ブロモビス（トリ−ｔ−ブチルホスフィン）ジパラジウム（Ｉ）（５０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）の第２の部分を加え、室温で窒素下で一晩撹拌する。ＥｔＯＡｃおよび１Ｎ ＨＣｌ水溶液で希釈し、１０分間撹拌する。固体を濾過し、ＥｔＯＡｃですすぐ。濾液層を分離し、有機層を飽和重炭酸ナトリウム水溶液および塩水で洗浄する。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液を濃縮する。ヘキサン中の２０〜６０％ＥｔＯＡｃを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、白色固体として表題化合物（２．３ｇ、収率９４％、純度８９％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３３２．２（Ｍ＋Ｈ）。

調製２７
２−メチル−２−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］プロパン酸の合成
２−メチル−２−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］プロパン酸メチル（調製２６）（２．２ｇ、６．６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（６６ｍＬ）に溶解し、カリウムトリメチルシラノレート（１．１ｇ、８．６ｍｍｏｌ）を加える。室温で４日間撹拌する。固体を濾過し、ＴＨＦで洗浄する。固体を水に溶解し、５ＮのＨＣｌ水溶液で酸性化する。冷蔵庫中で３０分間冷却する。濾過して、表題化合物（１．２０ｇ、５７％）を白色固体として回収する。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３１８．０（Ｍ＋Ｈ）。

調製２８
２−メチル−２−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］プロパンアミドの合成
１，１’−カルボニルジイミダゾール（１２６ｍｇ、０．７６３ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（６．４ｍＬ）中の２−メチル−２−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］プロパン酸（調製２７）（２０２ｍｇ、０．６３６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加え、窒素下、室温で４５分間撹拌した。水酸化アンモニウム（１ｍＬ、９．５５ｍｍｏｌ、水中２５％ｗ／ｖ）を加え、室温で窒素下で９０分間撹拌する。溶解性を促進するためにＤＭＦ（３ｍＬ）を加え、室温で２時間撹拌を続ける。濃縮し、ＤＣＭ中の０〜１０％ＥｔＯＨを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題化合物（１８０ｍｇ、８９％）を白色固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３１７．０（Ｍ＋Ｈ）。

調製２９
［５−（１−アミノ−１−メチルエチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］（テトラヒドロピラン−４−イル）メタノンの合成
［ビス（トリフルオロアセトキシ）ヨード］ベンゼン（１１５ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を、ＡＣＮ（０．２５ｍＬ）および水（０．２５ｍＬ）中の２−メチル−２−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］プロパンアミド（調製２８）（８１ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）の撹拌混合物に加え、室温で窒素下で一晩撹拌する。濃縮して、表題化合物（１４０ｍｇ、９４％、５０％純物質）を淡ピンク色の固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８９．２（Ｍ＋Ｈ）、２７２．０（Ｍ−ＮＨ２）^＋。

調製３０
メチル４−フルオロ−２−［（２−ヒドロキシエチル）アミノ］ベンゾエートの合成
メチル−２−アミノ−４−フルオロベンゾエート（２．８１ｇ、１５．９ｍｍｏｌ）および２−ヨードエタノール（０．８７９ｍＬ、１１．２ｍｍｏｌ）の混合物を９０℃で６時間加熱し、次いで室温に冷却する。ニートの（ｎｅａｔ）混合物をＥｔＯＡｃに溶解し、１ＮのＮａＯＨ水溶液で３回洗浄し、続いて塩水で洗浄する。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濾液を濃縮し、２．９４ｇの淡褐色油状物を得る。２−ヨードエタノール（１．２６ｍＬ、１５．９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１００℃で一晩加熱する。追加の２−ヨードエタノール（０．３１４ｍＬ、３．９９ｍｍｏｌ）を加え、１００℃で２時間加熱を続ける。室温まで冷却する。ニートの（ｎｅａｔ）混合物をＥｔＯＡｃに溶解し、１ＮのＮａＯＨ水溶液で３回洗浄し、続いて塩水で洗浄する。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濾液を濃縮し、２．５０ｇの褐色固体を得る。ヘキサン中の２０〜４０％ＥｔＯＡｃを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題化合物（１．１２ｇ、３３％）を白色固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２１４．０（Ｍ＋Ｈ）。

調製３１
４−フルオロ−２−［（２−ヒドロキシエチル）アミノ］安息香酸の合成
水酸化ナトリウム（０．４９ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ、水中５Ｍ）を、１，４−ジオキサン（２．４ｍＬ）中の４−フルオロ−２−［（２−ヒドロキシエチル）アミノ］安息香酸メチル（調製３０）（１０４ｍｇ、０．４８８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加える。３０分間室温で蓋をして撹拌し、次いで７０℃で２時間加熱する。濃縮し、１ＮのＨＣｌ水溶液で約ｐＨ１〜２に酸性化し、ＤＣＭで２回抽出する。合わせた有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濾液を濃縮して、表題化合物（８９ｍｇ、９２％）を黄褐色固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２００．０（Ｍ＋Ｈ）。

参照調製１
１−（２，４−ジフルオロフェニル）−３−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イルメチル）尿素の合成
ＤＣＭ（１００ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル５−（アミノメチル）インドリン−１−カルボキシレート（４．１ｇ、１７ｍｍｏｌ）および２，４−ジフルオロ−１−イソシアナトベンゼン（３ｍＬ、２４ｍｍｏｌ）の混合物を１時間撹拌する。ＭｅＯＨおよび水で反応物を急冷し、濃縮する。残渣をＤＣＭ（３０ｍＬ）に溶解し、ＴＦＡ（１５ｍＬ）を加え、室温で２時間放置する。濃縮し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液を加える。ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（１／５、ｖ／ｖ）で混合物を抽出する。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濾液を濃縮する。ＥｔＯＨから再結晶して２つの収穫物を得る。収穫物を合わせて表題化合物（３．５ｇ、６８％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３０４．０（Ｍ＋Ｈ）。

参照調製２
１−（２，４−ジフルオロフェニル）−３−｛［１−（３，４，５−トリブロモベンゾイル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］メチル｝尿素の合成
ＤＭＦ（２ｍＬ）中の１−（２，４−ジフルオロフェニル）−３−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イルメチル）尿素（参照調製１）（７０ｍｇ，０．２３ｍｍｏｌ）、３，４，５−トリブロモ安息香酸（１７０ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、および１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスフェート（１３４ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）の溶液を脱気する（Ｎ_２）。ＴＥＡ（０．０８ｍＬ、０．６ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌する。逆相精製（カラム：Ｒｅｄｉｓｅｐ Ｒｆ Ｇｏｌｄ高速Ｃ１８逆相カラム；溶出液：Ａ：５％ＭｅＯＨ（ｐＨ１０）を含む水中の１０ｍＭ重炭酸アンモニウム、Ｂ：ＡＣＮ；勾配：５分間４０％Ｂ、次いで１５分間にわたり４０〜９５％Ｂ；流速６０ｍＬ／分、ＵＶＷ２１９／２５４ｎＭ）により反応混合物を直接精製し、生成物を凍結乾燥により単離し、表題化合物（１４９ｍｇ、５４％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ、^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）：６４４．０／６４６．０（Ｍ＋Ｈ）。

実施例１
ラセミ体４−フルオロ−Ｎ−｛１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エチル｝ベンズアミド

ラセミ体［５−（１−アミノエチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メタノン（調製３）（４２０ｍｇ、１．５３ｍｍｏｌ）および４ーフルオロ安息香酸（２５７ｍｇ、１．８４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１５ｍＬ）中で合わせる。撹拌溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５３４μＬ、３．０６ｍｍｏｌ）および１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム−３−オキシドヘキサフルオロホスフェート（８９０ｍｇ、２．３０ｍｍｏｌ）を加える。得られた混合物を室温で１６時間撹拌する。溶媒を蒸発させ、逆相カラムクロマトグラフィー（Ｒｅｄｉｓｅｐ Ｒｆ Ｇｏｌｄ高速Ｃ１８逆相カラム、１０ｍＭ重炭酸アンモニウム水溶液中２５〜１００％ＡＣＮ）により精製し、表題化合物（３７２ｍｇ、６１％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３９７．２（Ｍ＋Ｈ）。^１Ｈ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ）δ８．７３（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．９８（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．９３−７．８９（ｍ、２Ｈ）、７．２８−７．２３（ｍ、２Ｈ）、７．２２（ｓ、１Ｈ）、７．１２（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、５．０７（ｑｕｉｎ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、４．１４（ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）、３．８５（ｍ、２Ｈ）、３．３６（ｍ、２Ｈ）、３．０９（ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）、２．８０（ｍ、１Ｈ）、１．５７−１．６６（ｍ、４Ｈ）、１．４１（ｄ、Ｊ＝７Ｈｚ、３Ｈ）。

実施例１Ａ
４−フルオロ−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エチル｝ベンズアミド
合成法１：

キラルＳＦＣにより、ラセミ体４−フルオロ−Ｎ−｛１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エチル｝ベンズアミド（実施例１）を精製し、最初の溶出エナンチオマーを表題化合物として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３９７．０（Ｍ＋Ｈ）。精製条件：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＤ−Ｈ、２１×１５０ｍｍ；移動相：ＣＯ_２中の４０％ＭｅＯＨ；カラム温度：４０℃；流速：７０ｇ／分；ＵＶＷ：２２５ｎｍ。キラル分析用ＳＦＣ（＞９９％ｅｅ、Ｒ_ｔ：１．７２分；カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＤ−Ｈ、４．６×１５０ｍｍ；移動相：ＣＯ_２中の４０％ＭｅＯＨ；流速：５ｍＬ／分；ＵＶＷ：２２５ｎｍ）により、異性体１のエナンチオマー濃縮を確認する。^１Ｈ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ）δ８．７３（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．９８（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．９３−７．８９（ｍ、２Ｈ）、７．２８−７．２３（ｍ、２Ｈ）、７．２２（ｓ、１Ｈ）、７．１２（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、５．０７（ｑｕｉｎ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、４．１４（ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）、３．８５（ｍ、２Ｈ）、３．３６（ｍ、２Ｈ）、３．０９（ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）、２．８０（ｍ、１Ｈ）、１．５７−１．６６（ｍ、４Ｈ）、１．４１（ｄ、Ｊ＝７Ｈｚ、３Ｈ）。

合成法２：
ＴＥＡ（９．８ｍＬ、７０．３ｍｍｏｌ）、次いで４−フルオロベンゾイルクロリド（５．８５ｇ、３６．９ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１７６ｍＬ）中の［５−（１−アミノエチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メタノン、異性体１（調製４Ａ）（９．６５ｇ、３５．２ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で加える。得られた混合物を室温に温め、一晩撹拌する。反応混合物をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で希釈し、シリカゲルパッドで濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄する。濾液を濃縮し、ＤＣＭ中の２５〜３０％ＡＣＮの勾配を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題化合物（９．４ｇ、６７．１％）をオフホワイトの固体として得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３９７．２（Ｍ＋Ｈ）。キラル分析ＳＦＣ（＞９９％ｅｅ、Ｒ_ｔ：１．７４分；カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＤ−Ｈ、４．６×１５０ｍｍ；移動相：ＣＯ_２中の４０％ＭｅＯＨ；流速：５ｍＬ／分；ＵＶＷ：２２５ｎｍ）により、エナンチオマー濃縮を確認する。^１Ｈ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ）δ８．７３（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．９８（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．９３−７．８９（ｍ、２Ｈ）、７．２８−７．２３（ｍ、２Ｈ）、７．２２（ｓ、１Ｈ）、７．１２（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、５．０７（ｑｕｉｎ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、４．１４（ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）、３．８５（ｍ、２Ｈ）、３．３６（ｍ、２Ｈ）、３．０９（ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）、２．８０（ｍ、１Ｈ）、１．５７−１．６６（ｍ、４Ｈ）、１．４１（ｄ、Ｊ＝７Ｈｚ、３Ｈ）。

合成法３：
ＴＥＡ（６５ｍＬ、４６８ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（７００ｍＬ）中の［５−（１−アミノエチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）メタノン塩酸塩、異性体１（調製７Ｂ）（７０ｇ、２２５ｍｍｏｌ）の混合物に０〜５℃で加える。４−フルオロベンゾイルクロリド（３７．８５ｇ、２３９ｍｍｏｌ）を滴下して加える。混合物を室温に温め、２時間撹拌する。温度を３０℃未満に保つ速度で水を滴加して加え、混合物を２０〜３０℃で１時間撹拌する。層を分離し、有機層を１８％Ｈ_２ＳＯ_４水溶液で洗浄する。層を分離し、有機層を７％ＮａＨＣＯ_３水溶液で洗浄する。層を分離し、有機層を水で洗浄する。層を分離し、次いで、有機溶液を炭素フィルターに通す。溶液をＳＩ−チオール（７ｇ）で処理し、混合物を４０℃に加熱する。得られた混合物を１２時間撹拌する。混合物を室温に冷却し、混合物を珪藻土で濾過する。有機層を２００ｍＬ（約３体積）に濃縮する。アセトン（１４０ｍＬ、２体積）を加え、得られた混合物を２００ｍＬ（約３体積）に濃縮する。追加のアセトン（２８０ｍＬ、４体積）および水（２８０ｍＬ、４体積）で処理する。反応が透明な溶液になるまで、６５℃で２時間加熱する。３時間にわたってゆっくりと３０℃に冷却する。３０℃で１時間撹拌する。水（１４０ｍＬ、２体積）を滴下して加え、３０℃で１時間撹拌を続ける。約２時間にわたってゆっくりと３〜８℃に冷却する。この温度で６時間撹拌する。固体を濾過し、水（１４０ｍＬ、２体積）ですすぐ。固体を５５℃で４〜６時間乾燥する。所望の生成物を白色固体として得る（５５ｇ、６１．６％）。

実施例１ＡのＸ線粉末回折収集手順
結晶性固体のＸＲＤパターンは、ＣｕＫａ源（λ＝１．５４０６０Å）およびＶａｎｔｅｃ検出器を備えたＢｒｕｋｅｒ Ｄ４ Ｅｎｄｅａｖｏｒ Ｘ線粉末回折計で３５ｋＶおよび５０ｍＡで操作して得られる。試料は、２θにおける０．００８７°の工程サイズおよび０．５秒／工程の走査速度で、０．６ｍｍの発散スリット、５．２８ｍｍの固定散乱防止スリット、および９．５ｍｍ検出スリットを用いて、２θにおける４〜４０°で走査される。乾燥粉末を石英試料ホルダに充填し、ガラススライドを使用して滑らかな表面を得る。周囲温度および相対湿度で結晶形回折パターンを収集する。

１Ａの方法３のＸ線粉末回折収集手順
実施例１Ａ（合成法３）の調製試料は、ＣｕＫａ放射線を用いたＸＲＤパターンにより、以下の表１に記載される回折ピーク（２θ値）を有すると特徴付けられる。具体的には、パターンは、０．２度の回折角の許容範囲（２θ±０．２°）で、１２．５１°、１５．６５°、１６．３７°、１７．５６°、２１．４８°、および２５．２３°からなる群から選択される１つ以上のピークと組み合わせて１７．３８°にピークを含む。

実施例１Ａの絶対配置の決定
１０ｍｇの４−フルオロ−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エチル｝ベンズアミドを、１：１ＥｔＯＨ／ヘプタン（１．７５ｍＬ）に懸濁し、オービタルシェーカーで３日間スラリーにすることにより、４−フルオロ−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エチル｝ベンズアミドの単結晶を調製する。Ｘ線結晶解析のため、約０．０２０ｍｍ×０．０８０ｍｍ×０．３００ｍｍの寸法を有する、４−フルオロ−Ｎ−｛（１Ｒ）−１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エチル｝ベンズアミドの無色の刃状の試料を用いる。ＩμＣｕＫα放射線源（λ＝１．５４１７８Å）および光子１００ＳＬエリア検出器を備えたＢｒｕｋｅｒ Ｄ８ Ｖｅｎｔｕｒｅに基づく３軸ゴニオメータ回折計を用いて、Ｘ線強度データを測定する。合計８８４０のフレームを収集する。狭フレーム（ｎａｒｒｏｗ−ｆｒａｍｅ）アルゴリズムを用いたＢｒｕｋｅｒ ＳＡＩＮＴソフトウェアパッケージで、フレームを積算する。単斜晶系単位格子を用いたデータの積算は、最大θ角６８．２８°（０．８３Å分解能）までの合計７２４２の反射をもたらしたが、そのうち３０５９は独立し（平均多重度２．３６７、完全性＝９５．９％、Ｒｉｎｔ＝５．８３％、Ｒｓｉｇ＝６．５８％）、２８９３（９４．５７％）は２σ（Ｆ^２）より大きい。ａ＝５．５８３１（１３）Å、ｂ＝５．１０８２（９）Å、ｃ＝３５．０１３（６）Å、β＝９０．５７８（１７）°、体積＝９９８．５（３）Å^３の最終格子定数は、１０．０９°＜２θ＜１３６．８°を伴う、２０σ（Ｉ）を上回る６２８０反射のＸＹＺ−重心の精密化に基づく。マルチスキャン法（ＳＡＤＡＢＳ）を使用して吸収効果のデータを修正する。最大みかけ透過率に対する最小みかけ透過率の比は０．７８４である。計算された最小および最大透過係数（結晶サイズに基づく）は、０．８０２０および０．９８５０である。Ｂｒｕｋｅｒ ＳＨＥＬＸＴＬソフトウェアパッケージを使用して、空間群Ｐ２_１を使用し、Ｃ_２３Ｈ_２５ＦＮ_２Ｏ_３の化学式単位についてはＺ＝２を用いて構造を解析し、精密化する。２６４変数でのＦ２についての最終的な異方性完全行列（ｆｕｌｌ−ｍａｔｒｉｘ）最小二乗法による精密化は、観測データではＲ１＝９．１７％に収束し、すべてのデータではｗＲ２＝２３．４８％に収束する。適合度は１．１４１である。最終の差電子密度合成における最大ピークは０．５０６ｅ−／Å^３であり、最大孔が−０．３５８ｅ−／Å^３であり、ＲＭＳ偏差が０．０８８ｅ−／Å^３である。最終モデルに基づき、計算密度は１．３１９ｇ／ｃｍ^３およびＦ（０００）、４２０ｅ−である。絶対構造パラメータは、０．１２（１６）に精密化され、キラル中心の立体化学を検証する。絶対構造は、立体中心においてＲ−立体配置であると決定される。

実施例１Ｂ
４−フルオロ−Ｎ−｛（１Ｓ）−１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エチル｝ベンズアミド、異性体２

キラルクロマトグラフィーにより、ラセミ体４−フルオロ−Ｎ−｛１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エチル｝ベンズアミド（実施例１）を精製し、第２の溶出エナンチオマーを表題化合物として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３９７．０（Ｍ＋Ｈ）。精製条件：カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＤ−Ｈ、２１×１５０ｍｍ；移動相：ＣＯ_２中の４０％ＭｅＯＨ；カラム温度：４０℃；流速：７０ｇ／分；ＵＶＷ：２２５ｎｍ。キラル分析ＳＦＣ（９８．３％ｅｅ、Ｒ_ｔ：２．３７分；カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＤ−Ｈ、４．６×１５０ｍｍ；移動相：ＣＯ_２中４０％ＭｅＯＨ；流速：５ｍＬ／分；ＵＶＷ：２２５ｎｍ）により、異性体２のエナンチオマー濃縮を確認する。^１Ｈ ＮＭＲ（ｄ_６−ＤＭＳＯ）δ８．７３（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．９８（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、７．９３−７．８９（ｍ、２Ｈ）、７．２８−７．２３（ｍ、２Ｈ）、７．２２（ｓ、１Ｈ）、７．１２（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、５．０７（ｑｕｉｎ、Ｊ＝８Ｈｚ、１Ｈ）、４．１４（ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）、３．８５（ｍ、２Ｈ）、３．３６（ｍ、２Ｈ）、３．０９（ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）、２．８０（ｍ、１Ｈ）、１．５７−１．６６（ｍ、４Ｈ）、１．４１（ｄ、Ｊ＝７Ｈｚ、３Ｈ）。

調製３の出発物質を用いて、実施例１と本質的に同様にして実施例２を調製する。

実施例２Ａおよび２Ｂ
４−クロロ−Ｎ−｛１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エチル｝ベンズアミド、異性体１、および４−クロロ−Ｎ−｛１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エチル｝ベンズアミド、異性体２

キラルＳＦＣにより、ラセミ体４−クロロ−Ｎ−｛１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エチル｝ベンズアミド（実施例２）を精製し、最初の溶出エナンチオマー（異性体１）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１３．０（Ｍ＋Ｈ）。精製条件：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＤ−Ｈ、２１×１５０ｍｍ；移動相：ＣＯ_２中４０％ｉＰｒＯＨ；流速：７０ｇ／分；ＵＶＷ：２６０ｎｍ。キラル分析用ＳＦＣ（＞９９％ｅｅ、Ｒ_ｔ＝１．９７分；カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＤ−Ｈ、４．６×１５０ｍｍ；移動相：ＣＯ_２の４０％ｉＰｒＯＨ；カラム温度：４０℃；流速：５ｍＬ／分；ＵＶＷ：２２５ｎｍ）により、異性体１のエナンチオマー濃縮を確認する。

上記精製により、第２の溶出エナンチオマー（異性体２）も得られる。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１３．０（Ｍ＋Ｈ）。キラル分析用ＳＦＣ（＞９９％ｅｅ、Ｒ_ｔ：３．０４分；カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＤ−Ｈ、４．６×１５０ｍｍ；移動相：ＣＯ_２中の４０％ｉＰｒＯＨ；流速：５ｍＬ／分；ＵＶＷ：２２５ｎｍ）により、異性体２のエナンチオマー濃縮を確認する。

調製３の出発物質を用いて、実施例１と本質的に同様にして実施例３〜実施例９を調製する。

実施例９ＡおよびＢ
２，４−ジフルオロ−Ｎ−｛１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エチル｝ベンズアミド、異性体１、および２，４−ジフルオロ−Ｎ−｛１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エチル｝ベンズアミド、異性体２

キラルＳＦＣにより、ラセミ体２，４−ジフルオロ−Ｎ−｛１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エチル｝ベンズアミド（実施例９）を精製し、最初の溶出エナンチオマー（異性体１）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１５．０（Ｍ＋Ｈ）。精製条件：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＤ−Ｈ、２１×１５０ｍｍ；移動相：ＣＯ_２中の４０％ＭｅＯＨ；カラム温度：４０℃；流速：７０ｇ／分；ＵＶＷ：２２５ｎｍ。キラル分析（９８．６％ｅｅ、Ｒ_ｔ：１．７２分；カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＤ−Ｈ、４．６×１５０ｍｍ；移動相：ＣＯ_２中の４０％ＭｅＯＨ；流速：５ｍＬ／分；ＵＶＷ：２２５ｎｍ）により、異性体１のエナンチオマー濃縮を確認する。

上記の精製によって、第２の溶出物（異性体２）も得られる。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１５．２（Ｍ＋Ｈ）。キラル分析ＳＦＣ（９８．５％ｅｅ、Ｒ_ｔ：２．６０分；カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＤ−Ｈ、４．６×１５０ｍｍ；移動相：ＣＯ_２中４０％ＭｅＯＨ；流速：５ｍＬ／分；ＵＶＷ：２２５ｎｍ）により、異性体２のエナンチオマー濃縮を確認する。

調製７の出発物質を用いて、実施例１と本質的に同様にして実施例１０〜実施例１３を調製する。

実施例１Ａの合成法２と本質的に同様にして実施例１４および１５を調製する。

実施例１６
ジアステレオマー４−フルオロ−Ｎ−［１−｛１−［テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イルカルボニル］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル｝エチル］ベンズアミド（２つのジアステレオマーの混合物）

ＤＣＭ（５．２８ｍＬ）中のＮ−［１−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル）エチル］−４−フルオロベンズアミド、異性体１（調製２４Ａ）（１５０ｍｇ，０．５２８ｍｍｏｌ）、ラセミ体テトラヒドロピラン−３−カルボン酸（１００ｍｇ．０．７３９ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．２７７ｍＬ、１．５８ｍｍｏｌ）の混合物を、１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム−３−オキシドヘキサフルオロホスフェート（３０４ｍｇ，０．７９１ｍｍｏｌ）で処理する。室温で４５分間撹拌する。反応混合物をＤＣＭで希釈する。水および飽和重炭酸ナトリウム水溶液を加える。層を分離し、水層をＤＣＭで２回抽出する。合わせた有機層を疎水性フリット（ＩＳＯＬＵＴＥ（登録商標）相分離器カートリッジ）に通し、濾液を濃縮する。ヘキサン中２０〜５５％アセトンの勾配で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、表題化合物（１８４ｍｇ、８８％）を白色固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３９７．２（Ｍ＋Ｈ）。

実施例１６ＡおよびＢ
４−フルオロ−Ｎ−［１−｛１−［テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イルカルボニル］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル｝エチル］ベンズアミド、異性体１、および４−フルオロ−Ｎ−［１−｛１−［テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イルカルボニル］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル｝エチル］ベンズアミド、異性体２

キラルクロマトグラフィーにより、ジアステレオマーの４−フルオロ−Ｎ−［１−｛１−［テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イルカルボニル］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル｝エチル］ベンズアミド（実施例１６）を精製し、最初の溶出ジアステレオマー（異性体１）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３９７．２（Ｍ＋Ｈ）。精製条件：ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ（登録商標）ＯＪ−Ｈ、３０×２５０ｍｍ；移動相：１００％ＭｅＯＨ；流速：３０ｍＬ／分；ＵＶＷ：２２５ｎｍ。キラル分析用ＨＰＬＣ（＞９９％ｄｅ、Ｒ_ｔ：３．４２分；カラム：ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ（登録商標）ＯＪ−Ｈ、４．６×１５０ｍｍ；移動相：１００％ＭｅＯＨ（０．２％イソプロピルアミンを含む）；流速：１ｍＬ／分；ＵＶＷ：２２５ｎｍ）により、異性体１のエナンチオマー濃縮を確認する。

上記の精製によって、第２の溶出物（異性体２）も得られる。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：３９７．２（Ｍ＋Ｈ）。キラル分析ＨＰＬＣ（９７．８％ｄｅ、Ｒ_ｔ：４．６６分；カラムＣＨＩＲＡＬＣＥＬ（登録商標）ＯＪ−Ｈ、４．６×１５０ｍｍ、移動相：１００％ＭｅＯＨ（０．２％イソプロピルアミンを含む）；流速：１ｍｌ／分；ＵＶＷ：２２５ｎｍ）により、異性体２のエナンチオマー濃縮を確認する。

実施例１７
４−フルオロ−２−ヒドロキシ−Ｎ−｛１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エチル｝ベンズアミド、異性体Ａ

１０％Ｐｄ／Ｃ（１０ｍｇ）を、エタノール（２ｍＬ）中の２−（ベンジルオキシ）−４−フルオロ−Ｎ−｛１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］エチル｝ベンズアミド、異性体Ａ（実施例１２）（９６．０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）の窒素をフラッシュした溶液に加え、１ａｔｍ（１０１ｋＰａ）の水素で室温で１時間水素化する。珪藻土で濾過し、濾液を濃縮して、所望の化合物（６６ｍｇ、８４％）を白色固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１３．０（Ｍ＋Ｈ）。

実施例１８
ラセミ体４−フルオロ−Ｎ−｛１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］プロピル｝ベンズアミド

ＤＣＭ（６．５ｍＬ）中のラセミ体Ｎ−［１−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル）プロピル］−４−フルオロベンズアミド（調製２２）（２００ｍｇ、０．６５０ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．２２８ｍＬ、１．３０ｍｍｏｌ）で処理する。テトラヒドロピラン−４−カルボニルクロリド（１１０ｍｇ、０．７１５ｍｍｏｌ）を加え、３０分間撹拌する。反応混合物をＤＣＭで希釈する。水および飽和重炭酸ナトリウム水溶液を加える。層を分離し、水層をＤＣＭで２回抽出する。合わせた有機層を疎水性フリット（ＩＳＯＬＵＴＥ（登録商標）相分離器カートリッジ）に通し、濾液を濃縮する。ヘキサン中の２０〜６０％アセトンの勾配で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、表題化合物を淡桃色のフォーム（２４４ｍｇ、９１％）として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１１．２（Ｍ＋Ｈ）。

実施例１８ＡおよびＢ
４−フルオロ−Ｎ−｛１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］プロピル｝ベンズアミド、異性体１、および４−フルオロ−Ｎ−｛１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］プロピル｝ベンズアミド、異性体２

キラルＳＦＣにより、ラセミ体４−フルオロ−Ｎ−｛１−［１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］プロピル｝ベンズアミド（実施例１８）を精製し、最初の溶出エナンチオマー（異性体１）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１１．２（Ｍ＋Ｈ）。精製条件：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＳ−Ｈ、２１×１５０ｍｍカラム；移動相：ＣＯ_２中２５％ＭｅＯＨ；カラム温度：４０℃；流速：８０ｇ／分；ＵＶＷ：２６０ｎｍ。キラル分析ＳＦＣ（＞９９％ｅｅ、Ｒ_ｔ：０．９２分；カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＳ−Ｈ、４．６×１５０ｍｍ；移動相：ＣＯ_２中２５％ＭｅＯＨ；流速：５ｍＬ／分；ＵＶＷ：２２５ｎｍ）により、異性体１のエナンチオマー濃縮を確認する。

上記精製により、第２の溶出エナンチオマー（異性体２）も得られる。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１１．２（Ｍ＋Ｈ）。キラル分析ＳＦＣ（＞９９％ｅｅ、Ｒ_ｔ：１．５３分；カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＳ−Ｈ、４．６×１５０ｍｍ；移動相：ＣＯ_２中２５％ＭｅＯＨ；流速：５ｍＬ／分；ＵＶＷ：２２５ｎｍ）により、異性体２のエナンチオマー濃縮を確認する。

参照例１
１−（２，４−ジフルオロフェニル）−３−｛［１−（３，４，５−トリトリチオベンゾイル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］メチル｝尿素

トリチウム化フラスコ中において、１−（２，４−ジフルオロフェニル）−３−｛［１−（３，４，５−トリブロモベンゾイル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］メチル｝尿素（３ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ）、パラジウム（炭素上１０％、３ｍｇ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１０μＬ、０．０６ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１ｍＬ）中、３Ｃｉのトリチウム下で３時間撹拌する。反応物を濾過し、濾液をＥｔＯＨで共蒸発させて、不安定なトリチウムを取り除く。残渣をＥｔＯＨに溶解し、逆相カラムクロマトグラフィー（カラム：ＧＥＭＩＮＩ（登録商標）Ｃ１８ ２５０×１０ｍｍ；移動相：Ａ：水／ＴＦＡ（１０００：１）、Ｂ：ＡＣＮ／ＴＦＡ（１０００：１）；勾配：６０分にわたって２０〜７０％Ｂ；流速３ｍＬ／分）により、表題化合物を得て、これをＥｔＯＨに溶解した。ＭＳ：４１４．１９（Ｍ＋Ｈ）および７４Ｃｉ／ｍｍｏｌ。

参照例２
１−（２，４−ジフルオロフェニル）−３−｛［１−（フェニルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］メチル｝尿素

１−（２，４−ジフルオロフェニル）−３−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イルメチル）尿素（３００ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶解し、塩化ベンゾイル（０．１３ｍＬ、１．１ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（０．２７ｍＬ、１．９ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を室温で２時間撹拌する。逆相精製（カラム：Ｒｅｄｉｓｅｐ Ｒｆ Ｇｏｌｄ高速Ｃ１８逆相カラム；移動相：水中０．１％ギ酸、Ｂ：ＡＣＮ、勾配：３０分間にわたり０〜８０％Ｂ；流速：６０ｍＬ／分、ＵＶＷ：２１９／２５４ｎｍ）により残渣を濃縮および精製し、凍結乾燥により生成物を単離し、表題化合物（４０３ｍｇ、７９％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：４０８．２（Ｍ＋Ｈ）。

免疫系は、腫瘍形成を抑制する重要なチェックポイントである。したがって、癌は、免疫系を回避、抑制、またはその他では破壊するための多くの機構を発達させてきた。トリプトファンは癌細胞の増殖にとって絶対不可欠であるが、その分解は、癌細胞自体（内因性）、または微小環境中の細胞もしくは腫瘍排出リンパ節（ＴＤＬＮ）（外因性）のいずれかによるインドールアミン２，３ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ１）の発現を介して、広範囲の癌において選択される。腫瘍微小環境におけるＩＤＯ１の選択的活性化は、急速な細胞増殖に反しながら、免疫監視機構、癌形成の重要なチェックポイント、および治療に対する抵抗性を避ける有効な戦略を腫瘍に提供する。ＩＤＯ１の免疫抑制活性は、トリプトファンの局所的枯渇およびキヌレニンの付随的生成の直接的な結果であり、その両者とも免疫抑制性である。

ＩＤＯ１活性の免疫抑制的役割は、細胞抑制［Ｔ細胞（Ｆｒｕｍｅｎｔｏ，ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９６（４）：４５９−４６８、Ｔｅｒｎｅｓｓ，ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９６（４）：４４７−４５７）、およびＮＫ細胞（Ｄｅｌｌａ Ｃｈｉｅｓａ，ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｂｌｏｏｄ １０８（１３）：４１１８−４１２５）］、細胞成長［制御性 Ｔ細胞（Ｓｈａｒｍａ，ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １１７（９）：２５７０−２５８２、Ｃｈｅｎ，ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８１（８）：５３９６−５４０４、Ｂａｂａｎ，ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８３（４）：２４７５−２４８３）］、および抑制性抗原提示細胞［抑制性樹状細胞およびマクロファージ（Ｍｕｎｎ，ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １１４（２）：２８０−２９０、Ｍｕｎｎ，ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２２（５）：６３３−６４２、Ｓｈａｒｍａ，ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １１７（９）：２５７０−２５８２）］、ならびに動員および 拡大［骨髄球由来サプレッサー細胞（Ｙｕ，ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９３（５）：２５７４−２５８６、Ｈｏｌｍｇａａｒｄ，ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ １３（２）：４１２−４２４）］を含む、複数の細胞型に影響を与える。ＩＤＯ１活性は、腫瘍、腫瘍微小環境、およびＴＤＬＮにおけるトリプトファンの枯渇およびキヌレニンの付随的な増加により、これらの効果を示す。

腫瘍微小環境またはＴＤＬＮにおけるＩＤＯ１発現によるトリプトファンの局所的枯渇およびキヌレニン生成の両方が、Ｔｒｅｇ（Ｓｈａｒｍａ，ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １１７（９）：２５７０−２５８２）、ＭＤＳＣ（Ｈｏｌｍｇａａｒｄ，ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ １３（２）：４１２−４２４）、および制御性樹状細胞（Ｓｈａｒｍａ，ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １１７（９）：２５７０−２５８２）の発生および活性化を支持し、それらすべてが腫瘍増殖を支持する免疫抑制的役割を果たす。トリプトファンの枯渇は、非荷電ｔＲＮＡの蓄積に応答して刺激されるストレス応答キナーゼＧＣＮ２の活性化を介してＴｒｅｇの発生を支持する。ＧＣＮ２を欠失するＴ細胞は、ＩＤＯ１媒介による増殖の阻害またはアレルギー表現型の誘導に対して感受性ではない（Ｍｕｎｎ，ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２２（５）：６３３−６４２）。トリプトファン枯渇に加えて、ＩＤＯ１活性は、重要な免疫抑制分子である、高濃度の下流代謝物キヌレニンをもたらす。トリプトファン枯渇と同様に、キヌレニンによるアリール炭化水素受容体（ＡＨＲ）の活性化は、制御性Ｔ細胞の生成に必要不可欠であり（Ｍｅｚｒｉｃｈら（２０１０）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８５（６）：３１９０−３１９８）、高いキヌレイン生成およびＡＨＲ発現は、ヒト脳腫瘍での予後不良に関連する（Ｏｐｉｔｚ，ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ ４７８（７３６８）：１９７−２０３）。キヌレインは、Ｔ細胞およびＮＫ細胞の増殖を阻害し（Ｂｏｙｌａｎｄ，ｅｔ ａｌ．（１９５６）Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ ６４（３）：５７８−５８２）、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、およびＩＬ−２１などのサイトカインの先天性免疫介在性の生成を調節する転写因子であるＡＨＲ受容体のアゴニストであり（Ｍｅｚｒｉｃｈ，ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８５（６）：３１９０−３１９８；Ｏｐｉｔｚ，ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ ４７８（７３６８）：１９７−２０３）、腫瘍の進行および治療に対する抵抗性を促進すると考えられるいくつかの癌において過剰発現される（Ｊｕｌｌｉａｒｄ，ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ５：４５８）。実際に、癌におけるＩＤＯ１の内因性発現は、ＩＤＯ１の発現を履行し、かつＴ細胞増殖を阻害するＡＨＲ−ＩＬ−６−ＳＴＡＴ３シグナル伝達ループのキヌレニン媒介活性化によって、一部、調節される。このＩＤＯ１シグナル伝達軸の発現は、肺癌患者における無再発生存期間の減少と関連している（Ｌｉｔｚｅｎｂｕｒｇｅｒ，ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ ５（４）：１０３８−１０５１）。ＩＤＯ１媒介性のＩＬ−６生成もまた、腫瘍形成前ＭＤＳＣの発生を支持する上で重要な役割を果たし、ＩＤＯ１の破壊により、ＫＲＡＳ誘発性肺癌モデルにおいてＩＬ−６生成が低下し、ＭＤＳＣ抑制活性が低下し、腫瘍増殖が遅延し、生存性が増加した（Ｓｍｉｔｈ，ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ ２（８）：７２２−７３５）。トリプトファンのＩＤＯ１依存性枯渇およびＡＨＲのキヌレニン依存性活性化の間の関連性は、トリプトファン異化が癌進行を抑制する重要なチェックポイントである免疫回避と密接に関連する理由を説明する要所を提供する。

腫瘍微小環境におけるＩＤＯ１発現の調節は複雑である。ＩＤＯ１は、発見された最初のＩＦＮ−γ調節遺伝子であった（Ｙｏｓｈｉｄａ，ｅｔ ａｌ．（１９８１）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ７８（１）：１２９−１３２）。実際に、すべての癌組織学にわたりＩＦＮ−γおよびＩＤＯ１発現の間には強い関連性がある（ｈｔｔｐ：／／ｃａｎｃｅｒｇｅｎｏｍｅ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）。さらに、ＩＤＯ１発現は、Ｉ型インターフェロン、ＴＬＲリガンド、ＴＮＦ、ＩＬ−１、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ２００、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、およびＴＧＦ−βによってアップレギュレートされ、それらはすべて、免疫系、ならびに癌の発生、進行、および治療に対する反応において重要な役割を果たす。ＩＤＯ１発現、トリプトファン枯渇、および／またはキヌレニンの増加によって測定される高いＩＤＯ１活性は、予後不良、生存率の低下、および多種多様な腫瘍型の転移能の増加に関係している。したがって、乳癌、結腸直腸癌、頭頸部癌、肺癌、および前立腺癌において、トリプトファンの減少に付随してキヌレニンの血清レベルが増加することが証明されている（Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｂｌｏｏｄ １１５（１７）：３５２０−３５３０）。さらに、ＩＤＯ１は、広範な疾患（Ｈｕａｎｇ，ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ８６（１１）：１６９１−１６９６），メラノーマ（Ｗｅｉｎｌｉｃｈ，ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ ２１４（１）：８−１４），急性骨髄性白血病（Ｃｈａｍｕｌｅａｕ，ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ ９３（１２）：１８９４−１８９８；Ｃｏｒｍ，ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｌｅｕｋ Ｒｅｓ ３３（３）：４９０−４９４），乳癌および子宮頸癌（Ｉｎａｂａ，ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｇｙｎｅｃｏｌ Ｏｎｃｏｌ １１７（３）：４２３−４２８；Ｙｕ，ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｃｌｉｎ Ｄｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１１：４６９１３５；Ｙｕ，ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９０（７）：３７８３−３７９７；Ｃｈｅｎ，ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １６（４）：４１０）： Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００７ Ｄｅｃ １；１３（２３）：６９９３−７００２；Ｔｒｏｔｔ，ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ，７（４１），６６５４０−６６５５７，大腸がん、腎細胞癌、皮膚黒色腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、子宮内膜癌、胃癌、神経膠腫、肝細胞癌、ホジキンリンパ腫、喉頭扁平上皮癌、肺癌、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、食道癌および口腔扁平上皮癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓管癌、Ｔ細胞白血病、および甲状腺癌を含む、いくつかの癌における標準的な化学療法に対する良好でない結果および／または抵抗性に関連して、癌患者において慢性的に活性化される（Ｓｃｈｒｏｃｋｓｎａｄｅｌ，ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｃｌｉｎ Ｃｈｉｍ Ａｃｔａ ３６４（１−２）：８２−９０）。ＩＦＮ−γは、活性化ＮＫおよびＴ細胞から分泌される重要なエフェクターサイトカインである。Ｔ細胞活性を全身的（ＣＴＬＡ−４）または局所的（ＰＤ−Ｌ１／Ｌ２）のいずれかで抑制することに関与する負の調節回路は、Ｔ細胞媒介腫瘍増殖の阻害を増強する抗癌剤としての使用が現在認可されている。ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、またはＰＤ−Ｌ１などのチェックポイントの遺伝子のノックアウトは、免疫抑制性ＩＦＮ−γ至−ＩＤＯ１軸に関与し得る、ＩＦＮ−γ生成の著しい増強をもたらす（Ｌａｔｃｈｍａｎ，ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １０１（２９）：１０６９１−１０６９６；Ｐａｎｄｉｙａｎ，ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７８（４）：２１３２−２１４０）。Ｐａｎｄｉｙａｎら（２００７）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７８（４）：２１３２−２１４０）。マウスメラノーマモデルにおける１−メチルトリプトファンによる内因性ＩＤＯ１発現の阻害は、ＣＴＬＡ−４阻害抗体であるイピリムマブの効力を有意に改善した（Ｈｏｌｍｇａａｒｄ，ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ ２１０（７）：１３８９−１４０２）。イピリムマブのこの増強された効力は、ＣＤ８エフェクター細胞の増加およびＴｒｅｇの減少と関連していた。これらの所見は、ＰＤ１、ＰＤ−Ｌ１、およびＧＩＴＲを標的とする他の抗体にまで拡大され、ＩＤＯ１の阻害はそれらの抗癌活性を増強した。機構的に、ＩＤＯ１は、ＭＤＳＣのその後の動員を伴うＴｒｅｇの誘導により、これらのチェックポイント阻害剤の効力を妨げ、腫瘍における免疫抑制性環境を作り出すことが示された（Ｈｏｌｍｇａａｒｄ，ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ １３（２）：４１２−４２４）。ＩＦＮ−γ自体、ＣｐＧ−ＯＤＮ、抗４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、抗ＯＸ４０、抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−Ｌ２、抗ＣＴＬＡ ４などの先天性免疫活性剤などの癌治療のための免疫療法アプローチはすべて、臨床での長期の効力を抑制するＩＤＯ１発現の活性化の可能性がある。したがって、ＩＤＯ１阻害剤をこれらの薬剤と組み合わせると有意な治療可能性があり得る。具体的には、ＩＤＯ１阻害剤と、抗ＰＤ１抗体（ピジリズマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ）、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ）、抗ＣＴＬＡ−４抗体（イピリムマブ）、抗ＯＸ４０抗体（ＭＥＤＩ６４６９、ＫＨＫ４０８３）、および抗４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）抗体（ＰＦ−０５０８２５６６）との組み合わせは、広範囲の腫瘍型において有意な治療可能性を有する。

総合すれば、これらのデータは、ＩＤＯ１阻害剤などのトリプトファン枯渇およびキヌレニンの付随的生成の阻害剤が、治療未経験および治療抵抗性の癌患者の両方において、単剤としてまたは様々な癌の種類との組み合わせで有用であり得ることを示唆する。この有用性は、エパカドスタット（ＩＮＣＢ０２４３６０）およびＮＬＧ９１９などの既知のＩＤＯ１阻害剤によって実証されている。エパカドスタットはＩＤＯ１に結合し、インビトロおよびインビボの両方でトリプトファンの異化およびその後のキヌレニンの生成を阻害することが知られている。さらに、エパカドスタットは、前臨床マウスモデルであるＣＴ２６およびＰＡＮ０２における単剤の効力（Ｔ細胞の存在に依存する効果）を実証している。（Ｙｕｅ，ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ５２（２３）：７３６４−７３６７；Ｋｏｂｌｉｓｈ，ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ ９（２）：４８９−４９８；Ｌｉｕ，ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｂｌｏｏｄ １１５（１７）：３５２０−３５３０；Ｊｏｃｈｅｍｓ，ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ，Ａｄｖａｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）。エパカドスタットの前臨床有効性は、ヒト臨床試験の結果に映し出されている（ＮＣＴ０１１９５３１１）。

以下のアッセイの結果は、本明細書に例示される化合物がＩＤＯ１阻害剤などのキヌレニン生成阻害剤として有用であり、癌の治療に有用であり得るという証拠を示す。さらに、以下のアッセイの結果は、ある種の例示化合物がＩＤＯ１に結合し、全ての例示化合物がインビトロおよびインビボの両方で癌細胞のトリプトファンからキヌレニンへの変換を阻害することを実証する。

ＩＤＯ１の結合アッセイ
このアッセイの目的は、ある種の例示化合物がインビトロでＩＤＯ１に結合することを実証することである。具体的には、このアッセイは、トリチウム化スパイ分子１−（２，４−ジフルオロフェニル）−３−［［１−（３，４，５−トリトリチオベンゾイル）インドリン−５−イル］メチル］尿素と競合する試験化合物の能力を評価し、結合親和性ＩＣ_５０の計算を可能にする。

１−（２，４−ジフルオロフェニル）−３−［［１−（３，４，５−トリトリチオベンゾイル）インドリン−５−イル］メチル］尿素のＩＤＯ１への競合的結合
ＤＰＢＳに希釈した３００ｎＭ Ｈｉｓ_６−ＩＤＯ１（Ｐｒｏｔｅｒｏｓ，ＳｗｉｓｓＰｒｏｔＩＤ Ｐ１４９０２，カタログ番号 ＰＲ−０２７８，バッチ１９／５９，２５ｍＭ ＭＥＳ中９８ｍｇ／ｍＬ ｐＨ６．５，１５０ｍＭ ＫＣｌ，純度＞９５％）をニッケル被覆プレート（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｓ５５６３）の各ウェルにロードし、４℃で一晩インキュベートする。ＢＩＯＴＥＫ（登録商標）マイクロプレートウォッシャーでプレートを３００μＬ ＤＰＢＳで４回洗浄することにより、未結合のタンパク質を除去する。１ウェルあたり１００μＬのブロッキングバッファー（０．０５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０／ＤＰＢＳ）を加え、室温で１時間インキュベートし、非特異的結合を低減させる。プレートをブロックしながら、ＤＰＢＳに希釈することにより５０ｎＭ １−（２，４−ジフルオロフェニル）−３−［［１−（３，４，５−トリトリチオベンゾイル）インドリン−５−イル］メチル］尿素（Ｂｉｏｃａｉｒ、カタログ番号ＴＲＱ４１４５５）を調製し、ＤＭＳＯ中で２．５倍の未標識ストック溶液を段階希釈して、１１点の希釈曲線を作成する。５μＬの段階希釈した非標識化合物を５０ｎＭ １−（２，４−ジフルオロフェニル）−３−［［１−（３，４，５−トリトリチオベンゾイル）インドリン−５−イル］メチル］尿素９５μＬに加え、混合物をプレート中のウェルに加え、穏やかに振とうしながら室温で４時間インキュベートする。トリチウム化スパイ分子（１−（２，４−ジフルオロフェニル）−３−［［１−（３，４，５−トリトリチオベンゾイル）インドリン−５−イル］メチル］尿素の最大変位を測定するために、過剰量の非標識１−（２，４−ジフルオロフェニル）−３−｛［１−（フェニルカルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル］メチル｝尿素（ＣｈｅｍＤｉｖ、カタログ番号Ｇ７１４−０２４２）１００μＭ〜５０ｎＭ １−（２，４−ジフルオロフェニル）−３−［［１−（３，４，５−トリトリチオベンゾイル）インドリン−５−イル］メチル］尿素を加え、プレート中の非特異的結合参照ウェルに加える。４時間のインキュベーション後、ＭｕｌｔｉＭｅｋ９６を使用してウェルを吸引し、ＢＩＯＴＥＫ（登録商標）マイクロプレートウォッシャーを用いて、プレートを３００μＬの氷冷ＤＰＢＳで１回すばやく洗浄する。ＰＢＳ ｐＨ７．５中の１００ｍＭイミダゾール１００μＬを各ウェルに加え、室温で１０分間インキュベートして、ニッケル被覆プレートからのＩＤＯ１リガンド複合体を置換する。ＭｕｌｔｉＭｅｋ９６を用いて、１ウェルあたり２００μＬのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ−２０（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、カタログ番号６０１３６２１）を含む９６ウェルの白色透明底プレート（Ｃｏｓｔａｒ、カタログ番号３６３２）に置換されたＩＤＯ１リガンド複合体を移す。１−（２，４−ジフルオロフェニル）−３−［［１−（３，４，５−トリトリチオベンゾイル）インドリン−５−イル］メチル］尿素配位子の全結合および非特異的結合（ＮＳＢ）を、Ｔｒｉｌｕｘ Ｍｉｃｒｏｂｅｔａカウンターを用いて定量化する。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍでの非線形回帰分析を用いて、全結合およびＮＳＢ値を用いて非結合化合物のＩＣ_５０を計算する。このアッセイの結果は、ある種の例示化合物がＩＤＯ１に結合することを示す。例えば、実施例１Ａおよび１Ｂは、１．５μＭ未満のＩＣ_５０値を示す。具体的には、実施例１ＡのＩＣ_５０は０．０３３μＭ±０．００２８（ｎ＝２）である。

キヌレニン生成アッセイ（ＳＫＯＶ３）
このアッセイの目的は、ＩＤＯ１発現癌細胞におけるキヌレニン、Ｎ−ホルミル−キヌレニンの生成およびトリプトファンの枯渇の阻害を評価し、化合物がこれらの細胞に対して明らかに毒性であるかを評価することである。例示的な化合物を、ＩＤＯ１を本来的に発現する卵巣癌細胞株であるＳＫＯＶ３（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＨＴＢ−７７）でのＩＤＯ１活性の阻害について試験する。ＩＤＯ１発現に起因して、ＳＫＯＶ３細胞は、キヌレニンの付随的な生成を伴いながらトリプトファンを分解し、化合物をキヌレニン、Ｎ−ホルミル−キヌレニンの生成およびトリプトファンの枯渇を阻害する能力について試験する。任意選択により、化合物の明白な毒性は、細胞生存率をモニターすることによって評価することができる。

内部標準の合成
Ｎ−ホルミルＬ−キヌレニン−ｄ４の合成
（２Ｓ）−２−アミノ−４−オキソ−４−（２，３，４，５−テトラジュウテリオ−６−ホルムアミド−フェニル）ブタン酸

ギ酸（０．０５２ｍＬ、１．３２ｍｍｏｌ）中の無水酢酸（０．０２６ｍＬ、０．２６４ｍｍｏｌ）の予め形成された混合物を、ギ酸（０．１３２ｍＬ）中のＬ−キヌレニン−ｄ４（５６ｍｇ、０．２６４ｍｍｏｌ）の混合物に加える。得られた混合物を、窒素下、室温で２時間撹拌する。反応混合物をＡＣＮで希釈し、窒素気流下で濃縮する。残渣を逆相ＨＰＬＣ（カラム：ＰＨＥＮＯＭＥＮＥＸ（登録商標）ＬＵＮＡ（登録商標）５μｍＣ１８（２）１００Å ＡＸＩＡ、３０×７５ｍｍ；溶出剤：Ａ：０．１％ギ酸／水、Ｂ：０．１％ギ酸／ＡＣＮ；勾配：０％Ｂで２分間、次いで勾配を５分にわたって２２％Ｂへ；流速：８５ｍＬ／分、ＵＶＷ ２３１／２１４ｎｍ）により精製し、凍結乾燥後に表題化合物２９ｍｇを綿毛状の白色固体として得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｚ）：２４１．０（Ｍ＋Ｈ）。

細胞処理および細胞生存率
１ウェル当たり２０，０００細胞でＩＤＯ１発現卵巣癌細胞株であるＳＫＯＶ３細胞を、９６ウェル組織培養プレート（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）中の非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１１１４０−０５０）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１１３６０−０７０）、および１０％ウシ胎児血清を補充した１００μＬのＭｃＣｏｙｓ ５Ａ培地（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１６６００−０８２）（完全培地）にプレーティングする。次に、５％ＣＯ_２を含む３７℃のインキュベーターで１６時間、細胞をインキュベートする。ＤＭＳＯ中の１０ｍＭストック試験化合物から化合物の段階希釈液を調製する。ストック溶液をＤＭＳＯで３倍に段階希釈し、９５μＬの完全培地を含む中間投与プレートに５μＬの化合物を移し、１μＭ〜０．５ｐＭまたは１０μＭ〜０．５ｎＭのいずれかの範囲の最終化合物濃度で、１０点の希釈曲線を作成する。細胞が入ったプレートから培地をデカントし、ペーパータオル上にブロットする。ウェルあたり９０μＬの完全培地でプレートを２回洗浄し、最後の洗浄液を９０μＬの完全培地と交換する。洗浄後、１０μＬの段階希釈した化合物を中間投与プレートからプレートの各ウェルに加え、５％ＣＯ_２を含む３７℃インキュベーターで１８時間インキュベートする。アッセイでの最終ＤＭＳＯ濃度は０．５％である。１８時間のインキュベーションの終了時に、９６ウェルのｖ底プレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に各ウェルから５０μＬの培地を移し、プレートをシールし、キヌレニン、Ｎ−ホルミル−キヌレニンおよびトリプトファンの質量分析に基づくその後の測定のために−８０℃で保存する。任意選択により、元のプレートをさらに２４時間インキュベーターに戻し、等しい体積のＣＥＬＬＴＩＴＥＲ−ＧＬＯ（登録商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ）を加えることにより細胞の生存率を測定し、ＰＥＲＫＩＮ ＥＬＭＥＲ（登録商標）ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダーで発光を測定する。

トリプトファン、Ｎ−ホルミル−キヌレニン、およびキヌレニンの質量分析（ＭＳ）測定
ＳＫＯＶ３細胞に基づくアッセイから採取した試料を氷上で解凍し、プレートを３２２０ｘｇで４℃で１分間遠心分離することにより細胞破片を取り除く。２．５μｇ／ｍＬのＬ−トリプトファン−２’，４’，５’，６’，７’−ｄ５（ＣＤＮ同位体、カタログ番号Ｄ−１５２２）、Ｌ−キヌレニン硫酸塩−環−ｄ４，３，３−ｄ２（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｉｓｏｔｏｐｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、カタログ番号ＤＬＭ−７８４２−０．０１）および内部で調製したＮ−ホルミルＬ−キヌレニン−ｄ４からなる１２．５μＬの内部標準を加える。すべてのプレートをＥａｓｙ Ｐｅｅｌシール（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）でヒートシーリングし、１〜２分間ボルテックスして混合し、４℃で３２２０ｘｇで１分間遠心分離する。それぞれを水に溶解することによりキヌレニンおよびＮ−ホルミルキヌレニンの定量化のための標準較正溶液を生成し、１ｍｇ／ｍＬの最終濃度を得る。各１ｍｇ／ｍＬのストックから２０．８μＬのキヌレニンおよび２３．６μＬのＮ−ホルミルキヌレニンを分取し、ＭｃＣｏｙｓ ５Ａ培地を用いて１ｍＬに希釈し、各標準について１００μＭの最終濃度を得る。完全培地中で較正溶液を２倍に段階希釈し、最終濃度が５μＭ〜０．３１３μＭ（キヌレニン）および２μＭ〜０．１２５μＭ（Ｎ−ホルミルキヌレニン）の５点標準曲線を得る。ＳＨＩＭＡＤＺＵ（登録商標）Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ ３０Ａ ＨＰＬＣシステムとＡＢ ＳＣＩＥＸ（登録商標）５５００トリプル四重極質量分析計からなるＬＣ／ＭＳ−ＭＳシステムに、１μＬの培地試料（未知）または標準較正溶液を注入する。３５℃に維持したＸＢｒｉｄｇｅ（商標）Ｃ１８カラム（２．１×５０ｍｍ、３．５μｍ（Ｗａｔｅｒｓ、カタログ番号１８６００３０２１））で、移動相流速０．７ｍＬ／分で分析物を分離する。移動相Ａは０．１％ギ酸水溶液であり、移動相ＢはＭｅＯＨである。勾配プロフィールは、０分、０．５％Ｂ；０．８分、９８％Ｂ；１．１０分、９８％Ｂ；１．１１分、０．５％Ｂ；１．７分であり、その後に停止した。ＡＰＣＩ陽性多重反応モニタリングモードで質量分析計を操作する。標準曲線試料のデータを使用し、ＭｕｌｔｉＱｕａｎ（商標）ソフトウェアを使用して、各分析物について線形適合検量線を作成する。生成された標準曲線を使用して、未知物について分析物濃度を計算する。

１００％阻害として５００μＭの参照標準処理を含む、および０％阻害としてＤＭＳＯを除いて化合物を含まない培地からのキヌレニンの質量分析測定を用いて、化合物ＩＣ_５０値を計算する。Ｎ−ホルミル−キヌレニンおよびトリプトファンの測定を用いて、トリプトファンレベルの付随的な低下を伴うキヌレニンおよびＮ−ホルミル−キヌレニン生成の間の直接的関係を示すことによって生成されたデータの妥当性を評価する。このアッセイの結果は、すべての例示化合物が、０．９μＭ未満のキヌレニンおよびＮ−ホルミル−キヌレニンの両方を阻害することに対するＩＣ_５０値において、および細胞生存率について試験したもの（実施例１〜９）のＩＣ_５０値において、ＩＤＯ１発現癌細胞でキヌレニンおよびＮ−ホルミル−キヌレニンの生成を阻害し、該化合物の全てが少なくとも１μＭまで細胞に対して明らかな毒性を示さずにそのようになったことを実証する。例えば、キヌレニンおよびＮ−ホルミル−キヌレニンを阻害するための実施例１ＡのＩＣ_５０は、それぞれ０．００７μＭ±０．００２（ｎ＝６）および０．００７μＭ±０．００２（ｎ＝６）である。さらに、実施例１Ａは、１０μＭまで細胞増殖を阻害しない。

インビボ標的阻害アッセイ
このアッセイの目的は、インビボでの癌細胞におけるキヌレニン生成およびトリプトファン枯渇の阻害を評価することである。卵巣癌細胞株であるＳＫＯＶ３Ｘ（インディアナ大学研究技術センター）は、本来的にＩＤＯ１を発現し、無胸腺ヌード−Ｆｏｘｎ１^ｎｕマウス（Ｈａｒｌａｎ）の腹腔内に容易に腫瘍を形成する。ＩＤＯ１発現の結果として、ＳＫＯＶ３Ｘ腫瘍は、トリプトファンを局所的に枯渇させ、腫瘍微小環境において高レベルのキヌレニンを付随的に生成する。このアッセイの目的は、腫瘍のキヌレニンレベルの明らかな減少によって明示されるＩＤＯ１を阻害する試験化合物の能力を測定することである。

ライブフェイズ（Ｌｉｖｅ ｐｈａｓｅ）
非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１１１４０−０５０）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１１３６０−０７０）、および１０％ＦＢＳを補充したＭｃＣｏｙｓ ５Ａ培地（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１６６００−０８２）でＳＫＯＶ３Ｘを培養し、５％ＣＯ_２中、３７℃でインキュベートする。細胞をトリプシン処理し、培養物から単離し、細胞をハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）に再懸濁する。２×１０^６個のＳＫＯＶ３Ｘ細胞を、各無胸腺ヌード−Ｆｏｘｎ１の^ｎｕマウス（Ｈａｒｌａｎ）の腹腔内に移植する。移植後約３週間して、触診して腫瘍形成を確かめ、担癌マウスをビヒクル対照および化合物処置群に無作為化する。１％ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）および０．０２５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０および０．０５％消泡剤を含有するビヒクル中に処方された化合物または単独でビヒクルを、強制経口投与により投与する。担癌動物に単回投与することによって時間経過阻害プロファイルを生成し、投与後２，４，８，１２、および２４時間で血漿、肝臓、および腫瘍試料を回収する。ＥＤＴＡ含有血液採取チューブ（Ｇｒｅｉｎｅｒ ｂｉｏ−ｏｎｅ、カタログ番号４５０４７４）に血液を採取し、２３６５ｘｇで遠心分離し、血漿を単離し、−８０℃で凍結する。肝臓および腫瘍の断片を分離し、重さを記録し、瞬間凍結し、−８０℃で保存する。

標準曲線の生成、組織処理、および標的阻害
透析により、Ｌ−キヌレニンおよびＬ−トリプトファンが枯渇した血漿および組織ホモジネートであるストリッピングした（ｓｔｒｉｐｐｅｄ）マトリックスを最初に作製することにより、Ｌ−キヌレニンおよびＬ−トリプトファンの較正標準を調製する。次いで、既知量のＬ−キヌレニンおよびＬ−トリプトファンでストリッピングしたマトリックスを強化する。１０ｍＬのＥＤＴＡ処理マウス血漿（Ｂｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ ＩＶＴ、カタログ番号ＭＳＥＰＬＥＤＴＡ３）をＳＰＥＣＴＯＲＡ／ＰＯＲ（登録商標）ＦＬＯＡＴ−Ａ−ＬＹＺＥＲ（登録商標）Ｇ２（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｌａｂｓ、カタログ番号Ｇ２３５０６３）に加え、この透析装置を１０００ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水および透析液中に一晩置くことにより、ストリッピングしたマウス血漿を生成する。その後、この装置を１０００ｍＬの新鮮なリン酸緩衝化生理食塩水に移し、透析を繰り返す。ストリッピングしたマウス血漿を清潔な容器に移し、将来の使用のために−２０℃で保存する。対照マウス肝臓１ｇあたり３ｍＬのＭｅＯＨ／水（１：１、ｖ／ｖ）を加えることにより対照の肝ホモジネートを調製し、超音波プローブでホモジナイズする。腫瘍組織をホモジナイズするために組織粉砕機を使用することを除いて、同じ様式で腫瘍ホモジネートを調製する。１０ｍＬの対照組織ホモジネート、肝臓、および腫瘍を別々のＳＰＥＣＴＲＡ／ＰＯＲ（登録商標）ＦＬＯＡＴ−Ａ−ＬＹＺＥＲ（登録商標）Ｇ２装置に加え、１０００ｍＬのＭｅＯＨ／水（１：１、ｖ／ｖ）で一晩透析し、次いで、それぞれを新鮮な１０００ｍＬのＭｅＯＨ／水（１：１、ｖ／ｖ）に移し、透析を繰り返す。ストリッピングした組織ホモジネートを別々の容器に移し、将来の使用のために−２０℃で保存する。

ＡＣＮ／水（１：１、ｖ／ｖ）に溶解したＬ−キヌレニン−硫酸塩（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｋ３７５０）、およびＮ−メチル−２−ピロリドン（４：１、ｖ／ｖ）に溶解したＬ−トリプトファン（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）の標準ストック溶液を調製し、最終遊離塩基濃度１ｍｇ／ｍＬを得る。５０μＬの各ストック溶液を分取し、ＭｅＯＨ／水（１：１、ｖ／ｖ）で希釈して、合わせた５０μｇ／ｍＬの作業溶液を得る。５０，０００ｎｇ／ｍＬ溶液の段階希釈によるＭｅＯＨ／水（１：１、ｖ／ｖ）中の６つの追加の較正作業溶液を調製し、２５ｎｇ／ｍＬ〜５０μｇ／ｍＬの最終濃度での７点検量線を得る。

被験者から得た肝臓試料を溶媒３ｍＬに対して組織１グラムの割合でＭｅＯＨ／水（１：１、ｖ／ｖ）と混合し、超音波プローブでホモジナイズする。組織粉砕機を使用して、同じ割合のＭｅＯＨ／水（１：１、ｖ／ｖ）で腫瘍試料をホモジナイズする。被験者から血漿試料を解凍し、均一に混合する。

２５μＬの各試料を９６ウェルプレートの別々のウェルに移すことにより、較正作業溶液（Ｌ−キヌレニンおよびＬ−トリプトファンの７点希釈シリーズ）の抽出を行い、２５μＬの適当なストリップされた対照マトリックス（血漿、肝臓、または腫瘍のホモジネート）を試験試料の原発組織に応じてこれらのウェルに加える。２５μＬのＭｅＯＨ／水（１：１、ｖ／ｖ）を別々のウェルに加え、続いて２５μＬの各試験試料を加える。次に、２５０ｎｇ／ｍＬのＬ−トリプトファン−２’，４’，５’，６’，７’−ｄ５（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号６１５８６２）およびＬ−キヌレニン硫酸塩−環−ｄ４，３，３−ｄ２（ケンブリッジ・アイソトープ・ラボラトリーズ、カタログ番号ＤＬＭ−７８４２−０．００５）を含む１８０μＬのＡＣＮ／ＭｅＯＨ（１：１、ｖ／ｖ）をすべてのウェルに加え、混合し、試料中のタンパク質を沈殿させる。９６ウェルプレートを遠心分離し、沈殿したタンパク質物質をペレット化し、次いで各上清の一部を水／ＴＦＡ（１００：２、ｖ／ｖ）で少なくとも１０倍に希釈する。１０μＬの各抽出試料および較正標準を、ＳＨＩＭＡＤＺＵ（登録商標）ＬＣ−１０ＡＤｖｐ ＨＰＬＣポンプを備えるＳＨＩＭＡＤＺＵ（登録商標）ＳＣＬ−１０Ａコントローラー、ＣＴＣ−ＰＡＬオートサンプラー、ＡＢ ＳＣＩＥＸ（登録商標）４０００トリプル四重極質量分析器からなるＬＣ／ＭＳ−ＭＳシステムに注入する。周囲条件で維持され、１．５ｍＬ／分の移動相流速によるＡｄｖａｎｔａｇｅ（商標）Ｅｃｈｅｌｏｎ（商標）Ｃ１８カラム（２．１×２０ｍｍ、４μｍ（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｓａｌｅｓ ａｎｄ Ｓｅｒｖｉｃｅ、カタログ番号Ｓｐｒｉｔｅ ＡＥ１８２２）で分析物を分離する。移動相Ａは水／ＴＦＡ／１Ｍ重炭酸アンモニウム（１０００：４：１、ｖ／ｖ／ｖ）であり、移動相ＢはＡＣＮ／ＴＦＡ／１Ｍ重炭酸アンモニウム（１０００：４：１、ｖ／ｖ／ｖ）である。勾配プロファイルは、０分、０．３％Ｂ；０．０３〜０．２分、７％Ｂ；０．３〜０．４分、３６％Ｂ；０．４１分、９８％Ｂ、次いで０．７分で停止して元の状態に戻す。ＴＵＲＢＯＩＯＮＳＰＲＡＹ（登録商標）陽性多重反応モニタリングモードで質量分析計を操作する。較正標準曲線試料のデータを使用し、Ａｎａｌｙｓｔ（商標）ソフトウェアを使用して各分析物について２次適合検量線を作成する。作成した標準曲線を使用して、研究試料の分析物濃度を計算する。

ビヒクルで処置された非担癌動物からのキヌレニンの肝臓濃度を、キヌレニンの最大阻害または最低レベルとして使用する。ビヒクル処置した担癌マウスからのキヌレニンのＳＫＯＶ３Ｘ腫瘍濃度を、キヌレニンの最小阻害または最高レベルとして使用する。ビヒクル処置した腫瘍における最小ＩＤＯ１阻害と比較した、化合物処置群の阻害パーセントを計算する。このアッセイの結果は、実施例１Ａが、インビボでＩＤＯ１発現癌細胞におけるキヌレニンおよびＮ−ホルミル−キヌレニンの生成を阻害することを実証する。具体的には、７５ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、および５ｍｇ／ｋｇで投与された実施例１Ａは、投薬１２時間後にそれぞれ７９％、５９％、および３７％の阻害をもたらした。

確立したＬ５５ヒト化マウスモデルにおける結腸癌用およびＬＹ３３０００５４を組み合わせたマウス同系Ｃｏｌｏｎ２６モデルにおける実施例１Ａの抗腫瘍効果
マウス同系Ｃｏｌｏｎ２６モデル：
１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１ｎＭピルビン酸ナトリウム、および１０％ウシ胎仔血清を補充したＲＰＭＩ １６４０培地中で、マウスＢＡＬＢ／ｃ由来Ｃｏｌｏｎ２６結腸癌細胞株を増殖させる。サブコンフルエント細胞をトリプシンを用いて獲得し、血清を欠く完全増殖培地で２回すすぐ。免疫能のあるＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｅｎｖｉｇｏ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）の後部脇腹にＨＢＳＳに再懸濁した１×１０^６個の細胞を注射することにより、皮下腫瘍を開始する。腫瘍移植後６日目に、動物を体重に基づいて無作為化し、示されるように１群当たりの動物の数を用いて各処置群に入れる。

Ｌ５５ヒト化腫瘍モデル、ｈＰＢＭＣ負荷（ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）、および処置：
１０％ウシ胎仔血清を補充したＲＰＭＩ １６４０培地中でヒトＮＳＣＬＣ細胞株Ｌ５５を増殖させる。サブコンフルエント細胞をトリプシンを用いて獲得し、血清を欠く増殖培地で２回すすぐ。Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞を欠き、サイトカインシグナル伝達が欠失しているＮＯＤ ｓｃｉｄガンマ鎖ノックアウトマウス（ＮＳＧ）マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、メイン州バーハーバー）としてより一般的に知られているＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄＩｌ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｗｊ１}／ＳｚＪマウスの後部脇腹に、ＨＢＳＳおよびＭＡＴＲＩＧＥＬ（登録商標）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ニュージャージー州フランクリンレイクス）の１：１混合物中の５ｘ１０^６を注射することにより、皮下腫瘍の増殖を開始する。平均腫瘍体積が約２００〜３００ｍｍ^３に達したら、腫瘍サイズおよび体重で動物を無作為化し、示されるように各処置群に入れる。無作為化後、レシピエントの尾静脈にＰＢＳ単独（ＰＢＭＣなし）または１×１０^７のヒトＰＢＭＣを含むＰＢＳで担癌マウスに負荷させる。

データ収集、化合物処方、およびビヒクル対照（両方のモデル）
スタディディレクターを使用して腫瘍の大きさと体重を収集する。式：Ｖ＝０．５３６×Ｌ×Ｗ^２（ここで、Ｌ＝より大きい測定された直径、Ｗ＝より小さい垂直の直径である）を用いて腫瘍体積（Ｖ）を推定する。腫瘍体積データを対数スケールに変換して、時間および処置群の分散を均等にする。ＳＡＳソフトウェア（バージョン９．２）のＭＩＸＥＤ手順を用い、時間および処置による反復のある分散の二元配置分散分析（ｔｗｏ−ｗａｙ ｒｅｐｅａｔｅｄ ｍｅａｓｕｒｅｓ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｖａｒｉａｎｃｅ）を用いて、対数体積データを分析する。反復測定の相関モデルはＳｐａｔｉａｌ Ｐｏｗｅｒである。各時点で対照群に対して処置群を比較する。各処置群についても別々にＭＩＸＥＤ手順を使用して、各時点での調整された平均および標準誤差を計算する。両方の分析は、各動物内の自己相関、および大きな腫瘍を有する動物が早期に研究から除外されたときに生じたデータの消失を説明する。実施例１Ａを投与した最終日に最も近くに取得した腫瘍体積測定を用い、式％ΔＴ／Ｃ＝１００×ΔＴ／ΔＣ（ここで、Ｔ＝化合物処置群の平均腫瘍体積、ΔＴ＝化合物処置群の平均腫瘍体積−ベースライン日の平均腫瘍体積、Ｃ＝対照（ビヒクル）群の平均腫瘍体積、およびΔＣ＝対照群の平均腫瘍体積−ベースライン日の平均腫瘍体積）を用いて、腫瘍体積の相対的変化（％ΔＴ／Ｃ）を計算する。ΔＴ＜０の場合、腫瘍後退値が、％Ｔ／Ｃの代わりに％後退＝１００×ΔＴ／Ｔ_最初により計算され、Ｔ_最初＝ベースライン日の平均腫瘍容積となるようにする。

研究の過程で１週間に２回、３次元カリパス測定により腫瘍容積を測定することにより、実施例１ＡおよびＬＹ３３０００５４の抗腫瘍効力を単独でまたは組み合わせて評価する。認容性の一般的な指標として、研究の過程で毎週２回体重を測定する。

実施例１ＡおよびＬＹ３３０００５４の処方：１週間単位で１％ＨＥＣ／０．２５％Ｔｗｅｅｎ ８０／０．０５％消泡剤中に実施例１Ａを処方し、４℃で保存する。ＬＹ３３０００５４をリン酸緩衝生理食塩水に溶解し、４℃で保存する

対照群：単剤効力の研究のため、実施例１Ａ単独のビヒクルを投与する。組み合わせの研究のため、それぞれ、各化合物について同じスケジュールに従って実施例１ＡおよびＬＹ３３０００５４に用いられる両方のビヒクルを投与する。組み合わせの効力の研究における単剤処置群では、非投与化合物のスケジュールに従って、所望の化合物および投与されない化合物のビヒクルで動物を処置する。

Ｃｏｌｏｎ２６同系モデル、処置、および結果：
単剤処置実施例１Ａ
Ｃｏｌｏｎ２６腫瘍を有するＢＡＬＢ／ｃマウス（ｎ＝１０）を、１日２回、２１日間、１０、５０、および１００ｍｇ／ｋｇの用量で強制経口投与により、実施例１Ａで処置する。腫瘍移植の６日後に実施例１Ａの投与を開始し、処置期間中、腫瘍増殖および体重を１週間に２回監視する。

結果：１０、５０、および１００ｍｇ／ｋｇの実施例１Ａでの処置は、５０日目および１００ｍｇ／ｋｇ投与量のみを用いた腫瘍増殖に対して用量反応効果をもたらし、２０日目に統計学的に（ｐ＜０．００１）関連する増殖阻害を示した。２０日目に観察された腫瘍体積の変化（％Ｔ／Ｃ）は、それぞれ、１０、５０、および１００ｍｇ／ｋｇ投与量について１７．５％、３１．２％、および６２．６％であった。ビヒクル処置マウスと比較して、処置経過にわたって体重変化に関して実施例１Ａで試験したいずれの投与量でも、有意な認容性の問題はなかった。体重減少を、各群について腫瘍移植後のベースライン６日目に記録された平均体重からの変化率として測定した。２０日目に、ビヒクル処理したマウスの平均体重は、１０、５０、および１００ｍｇ／ｋｇ投与群のベースラインと比較して５．５％の減少を示し、それぞれ２．５％、８％、および２．５％の減少を示した。投与量に関して、体重減少の投与量依存傾向があったが、それらはビヒクル処置マウスと統計的に異ならなかった。

Ｌ５５ヒト化腫瘍モデル、処理、および結果：
Ｌ５５腫瘍増殖に対するｈＰＢＭＣ効果
Ｌ５５ ＮＣＬＣヒト癌細胞株は、ｈＰＢＭＣの注射に関連するアロ−応答に対して本来的に耐性である。これらの研究の目的は、適応免疫系を欠くマウス（ＮＳＧマウス）において、ヒトＴ細胞がヒトＬ５５腫瘍を標的化し、その増殖を制限することを可能にする化合物のアロ反応を増強する化合物の能力を評価することである。Ｌ５５腫瘍の腫瘍増殖阻害に対するｈＰＢＭＣの寄与を評価するために、ｈＰＢＭＣを欠くｈＰＢＳまたは１×１０^７のｈＰＢＭＣを含むＰＢＳで、約２５０ｍｍ^３に達した確立されたＬ５５腫瘍を有するＮＳＧマウス（ｎ＝１０）を模擬注射する。処置期間中、腫瘍体積および体重を週２回測定する。

結果：研究期間にわたり、ｈＰＢＭＣを受けなかった動物と比較した場合に、Ｌ５５腫瘍増殖の統計学的に有意な阻害はなかった。４１日目においてベースラインより０．１％低く、ベースラインと比較した場合に有意な体重減少がないことによって証明されるように、研究経過にわたり、ヒトＰＢＭＣの注射では有意な認容性の問題は観察されなかった。

単剤処置実施例１Ａ
ｈＰＢＭＣによって仲介されるＬ５５腫瘍成長阻害を増強する実施例１Ａの能力を評価するために、約２５０ｍｍ^３に達した確立されたＬ５５腫瘍を有するＮＳＧマウス（ｎ＝１０）をｈＰＢＭＣを欠くＰＢＳで模擬注射し、別のグループ（ｎ＝１０）を１×１０^７のｈＰＢＭＣを含むＰＢＳで模擬注射する。両方の群を、７５ｍｇ／ｋｇの実施例１Ａで強制経口投与により１日２回、２１日間処置する。処置期間中、腫瘍体積および体重を週２回測定する。

結果：ｈＰＢＭＣが存在しない場合、実施例１Ａを用いたＬ５５腫瘍の処置は、ＰＢＭＣなしのビヒクル単独と比較して、処置過程にわたって有意な腫瘍成長阻害をもたらさなかった。ｈＰＢＭＣ存在下における実施例１ＡでのＬ５５担癌動物の処置は、ｈＰＢＭＣを欠くビヒクル対照群と比較した場合、腫瘍増殖阻害をもたらした。腫瘍増殖の統計学的に関連した抑制は、４１日目に４７．６％の％Ｔ／Ｃであった後の時点で最も明らかであった（Ｐ＜０．００１）。ベースライン測定値と比較した場合に体重減少について統計学的に有意な減少がないことによって証明されるように、研究過程にわたり、ｈＰＢＭＣ、実施例１Ａ、または組み合わせでは有意な認容性の問題がないことは明らかであった。

単剤療法ＬＹ３３０００５４
ｈＰＢＭＣによって仲介されるＬ５５腫瘍成長阻害を増強するＬＹ３３０００５４の能力を評価するために、約２５０ｍｍ^３に達した確立されたＬ５５腫瘍を有するＮＳＧマウス（ｎ＝１０／群）の２群をｈＰＢＭＣを含むＰＢＳで注射する。１群を１０ｍｇ／ｋｇ ＩｇＧ−エフェクターヌル（ＩｇＧ−ＥＮ）対照抗体で、他方を１０ｍｇ／ｋｇ ＬＹ３３０００５４で、１週間に１回４週間、腹腔内注射により処置する。処置期間中、腫瘍体積および体重を週２回測定する。

結果：１０ｍｇ／ｋｇのＩｇＧ−ＥＮとともにｈＰＢＭＣで注射したＬ５５担癌マウスの処置は、ｈＰＢＭＣを含むまたは含まないビヒクル単独と比較した場合、腫瘍の増殖または進行を変化させなかった。１０ｍｇ／ｋｇのＬＹ３３０００６４とともにｈＰＢＭＣで注射したＬ５５担癌動物の処置は、ｈＰＢＭＣを含むまたは含まないビヒクル処置対照と比較した場合、統計的に有意な腫瘍増殖阻害をもたらした。ＰＢＭＣを欠くビヒクル単独（３７日目）と比較した場合に投与期間の終わりに観察された腫瘍容積の変化（％Ｔ／Ｃ）は、７５．７％であった。ベースライン測定値と比較して体重減少について統計学的に有意な減少がないことによって証明されるように、ｈＰＢＭＣの有無に関わらず、ＬＹ３３０００５４では研究経過にわたって有意な認容性の問題がないことは明らかであった。

実施例１ＡおよびＬＹ３３０００５４の組み合わせ
約２５０ｍｍ^３に達したＬ５５担癌ＮＳＧマウス（ｎ＝１０）をｈＰＢＭＣで注射し、７５ｍｇ／ｋｇの実施例１Ａで１日２回強制経口投与により２１日間、および１０ｍｇ／ｋｇのＬＹ３３０００５４で週に１回４週間、腹腔内注射により処置する。処置期間中、腫瘍体積および体重を週２回測定する。

結果：７５ｍｇ／ｋｇの実施例１Ａおよび１０ｍｇ／ｋｇのＬＹ３３０００５４の組み合わせの処置は、いずれかの単剤処置群単独と比較した場合、抗腫瘍効力の改善をもたらした。腫瘍体積は、ＰＢＭＣを欠くかあるいはｈＰＢＭＣで注射したいずれかのビヒクル単独の群よりも有意に低かった（すべての測定でＰ＜０．００１）。３０、３４、３７、および４１日目の腫瘍体積は、それぞれ、９．６％Ｔ／Ｃ、１９．８％Ｔ／Ｃ、１３．３％Ｔ／Ｃ、および２７．３％Ｔ／Ｃであった。組み合わせ群と比較した単剤処置群間の抗腫瘍効力の差は、統計的に有意であった（ｐ＜０．００１）。組み合わせが相加的であるか相乗的であるかを評価するために、データを本質的に以下のように分析する：

統計分析（両方のモデル）：
腫瘍体積データを対数スケールに変換して、時間および処置群の分散を均等にする。ＳＡＳソフトウェア（バージョン９．３）のＭＩＸＥＤ手順を用い、時間および処置による反復のある二元配置分散分析を用いて、対数体積データを分析する。反復測定の相関モデルはＳｐａｔｉａｌ Ｐｏｗｅｒである。各時点で処置群を対照群と比較する。各処置群について別々にＭＩＸＥＤ手順を使用して、各時点での調整された平均および標準誤差を計算する。両方の分析は、各動物内の自己相関、および大きな腫瘍を有する動物が早期に研究から除外されたときに生じたデータの消失を説明する。時間に対する各処置群の調整された平均および標準誤差をプロットする。

併用分析法（ＩＶＥＦ研究のためのブリスインディペンデンス（Ｂｌｉｓｓ Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ））：
反復測定分析の結果とともに、コントラストステートメント（ｃｏｎｔｒａｓｔ ｓｔａｔｅｍｅｎｔ）を用いて各時点での相互作用効果を試験し、ビヒクルおよび組み合わせ群の平均を２つの単剤群の平均と比較する。これは、相加性を試験するためのブリスインディペンデンス法と等しい。組み合わせについて予想される相加反応（ＥＡＲ）は、腫瘍体積スケールで、ＥＡＲ容積＝Ｖ１＊Ｖ２／Ｖ０として計算され、ここで、Ｖ０、Ｖ１、およびＶ２は、それぞれビヒクル対照、処置１単独、および処置２単独についての推定の平均腫瘍体積である。相互作用試験が有意である場合、観察された組み合わせの平均体積がＥＡＲ体積よりも小さいかまたは大きいことに依存して、組み合わせ効果が相加的より大きいまたは相加的より小さいと統計的に言明される。さもなくば、統計的結論は相加的である。

この分析方法を使用して、腫瘍成長阻害は、腫瘍増殖阻害がそれぞれＰ＜０．００８およびｐ＜０．００１であり相乗的であった３４日目および３７日目まで、相加的以下であった。ベースライン測定値と比較した場合、体重減少について統計学的に有意な減少がないことによって証明されるように、研究過程にわたり、実施例１ＡおよびＬＹ３３０００５４の組み合わせでは有意な忍容性の問題がないことは明らかであった。

本発明の化合物は、好ましくは様々な経路によって投与される薬学的組成物として製剤化される。より好ましくは、そのような組成物は経口または静脈内投与用である。そのような薬学的組成物およびその調製方法は、当該技術分野において周知である。例えば、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ：ＴＨＥ ＳＣＩＥＮＣＥ ＡＮＤ ＰＲＡＣＴＩＣＥ ＯＦ ＰＨＡＲＭＡＣＹ（Ｄ．Ｔｒｏｙ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，２１ｓｔ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００５）を参照のこと。

本明細書で使用される場合、「有効量」との用語は、患者への単回または複数回投与による投与の際に診断または治療下にある患者に所望の効果を提供する、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩の量または投与量を指す。

有効量は、当業者のような担当診断医により、既知技法の使用により、および同様の状況下で得られた結果を観察することによって容易に決定され得る。患者のための有効量を決定する際には、患者の種類、そのサイズ、年齢、および全身の健康状態、関与する特定の疾患または障害、疾患または障害の関与または重症度の程度、個々の患者の応答、投与される特定の化合物、投与の様式、投与される製剤の生物学的利用能特性、選択される投与レジメン、付随する薬物の使用、ならびにその他の関連する状況を含むが、これらに限定されない、多数の要因が担当診断医によって考慮される。

本発明の化合物は、概して、幅広い用量範囲にわたって有効である。例えば、１日当たりの用量は、通常、１日あたり約０．０５〜１０００ｍｇの範囲内に入る。好ましくは、そのような投与量は、１日当たり０．１〜５００ｍｇの範囲内にある。より好ましくは、そのような投与量は、１日当たり１〜２００ｍｇの範囲内に入る。いくつかの例では、上記範囲の下限を下回る用量レベルが適切であってもよく、他の場合にはより大きな投与量を有害な副作用を引き起こすことなく使用してもよく、したがって、上記投与量範囲は決して本発明の範囲を限定するものではない。実際に投与される化合物の量は、治療される状態、選択される投与経路、投与される実際の化合物、個々の患者の年齢、体重、および応答、ならびに患者の症状の重症度を含む、関連する状況に照らして、医師によって決定されることが理解されるであろう。

配列表
アミノ酸およびヌクレオチド配列

配列番号１（ヒトＰＤ−Ｌ１）
ＭＲＩＦＡＶＦＩＦＭＴＹＷＨＬＬＮＡＦＴＶＴＶＰＫＤＬＹＶＶＥＹＧＳＮＭＴＩＥＣＫＦＰＶＥＫＱＬＤＬＡＡＬＩＶＹＷＥＭＥＤＫＮＩＩＱＦＶＨＧＥＥＤＬＫＶＱＨＳＳＹＲＱＲＡＲＬＬＫＤＱＬＳＬＧＮＡＡＬＱＩＴＤＶＫＬＱＤＡＧＶＹＲＣＭＩＳＹＧＧＡＤＹＫＲＩＴＶＫＶＮＡＰＹＮＫＩＮＱＲＩＬＶＶＤＰＶＴＳＥＨＥＬＴＣＱＡＥＧＹＰＫＡＥＶＩＷＴＳＳＤＨＱＶＬＳＧＫＴＴＴＴＮＳＫＲＥＥＫＬＦＮＶＴＳＴＬＲＩＮＴＴＴＮＥＩＦＹＣＴＦＲＲＬＤＰＥＥＮＨＴＡＥＬＶＩＰＥＬＰＬＡＨＰＰＮＥＲＴＨＬＶＩＬＧＡＩＬＬＣＬＧＶＡＬＴＦＩＦＲＬＲＫＧＲＭＭＤＶＫＫＣＧＩＱＤＴＮＳＫＫＱＳＤＴＨＬＥＥＴ

配列番号２（ＬＹ３３０００５４のＨＣＤＲ１）
ＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳ

配列番号３（ＬＹ３３０００５４のＨＣＤＲ２）
ＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ

配列番号４（ＬＹ３３０００５４のＨＣＤＲ３）
ＡＲＳＰＤＹＳＰＹＹＹＹＧＭＤＶ

配列番号５（ＬＹ３３０００５４のＬＣＤＲ１）
ＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮ

配列番号６（ＬＹ３３０００５４のＬＣＤＲ２）
ＹＧＮＳＮＲＰＳ

配列番号７（ＬＹ３３０００５４のＬＣＤＲ３）
ＱＳＹＤＳＳＬＳＧＳＶ

配列番号８（ＬＹ３３０００５４のＨＣＶＲ）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＰＤＹＳＰＹＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ

配列番号９（ＬＹ３３０００５４のＬＣＶＲ）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＧＮＳＮＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＳＬＳＧＳＶＦＧＧＧＩＫＬＴＶＬＧ

配列番号１０（ＬＹ３３０００５４のＨＣ）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＰＤＹＳＰＹＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

配列番号１１（ＬＹ３３０００５４のＬＣ）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＳＮＴＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＧＮＳＮＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＹＤＳＳＬＳＧＳＶＦＧＧＧＩＫＬＴＶＬＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＡＥＣＳ

配列番号１２（ＬＹ３３０００５４のＨＣのＤＮＡ）
ＣＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＧＧＧＣＣＧＡＧＧＴＣＡＡＡＡＡＧＣＣＡＧＧＧＴＣＡＴＣＴＧＴＣＡＡＡＧＴＧＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＣＡＴＣＣＧＧＧＧＧＣＡＣＡＴＴＴＴＣＣＡＧＣＴＡＣＧＣＴＡＴＣＴＣＣＴＧＧＧＴＧＡＧＡＣＡＧＧＣＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＧＧＴＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＣＧＧＡＡＴＣＡＴＴＣＣＣＡＴＣＴＴＣＧＧＧＡＣＣＧＣＣＡＡＣＴＡＣＧＣＴＣＡＧＡＡＧＴＴＴＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＴＣＡＣＴＡＴＴＡＣＣＧＣＣＧＡＣＡＡＡＡＧＣＡＣＡＴＣＴＡＣＴＧＣＴＴＡＴＡＴＧＧＡＧＣＴＧＴＣＴＡＧＴＣＴＧＡＧＧＴＣＴＧＡＡＧＡＴＡＣＣＧＣＡＧＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＣＣＧＧＡＧＴＣＣＣＧＡＣＴＡＴＡＧＣＣＣＴＴＡＣＴＡＴＴＡＣＴＡＴＧＧＣＡＴＧＧＡＴＧＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＡＣＡＧＴＧＡＣＡＧＴＣＴＣＡＴＣＣＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＧＣＣＧＡＧＧＧＧＧＣＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＴＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＡＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＴＣＣＴＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＡＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＴＣＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＣＡＡＡ

配列番号１３（ＬＹ３３０００５４のＬＣのＤＮＡ）
ＣＡＧＴＣＣＧＴＣＣＴＧＡＣＡＣＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＣＡＣＣＣＣＴＧＧＧＣＡＧＣＧＡＧＴＧＡＣＡＡＴＣＴＣＴＴＧＴＴＣＴＧＧＧＡＧＴＴＣＣＴＣＡＡＡＴＡＴＴＧＧＴＡＧＴＡＡＣＡＣＣＧＴＧＡＡＴＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＣＴＧＣＣＣＧＧＣＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＧＡＡＡＣＴＣＡＡＡＴＡＧＧＣＣＡＴＣＣＧＧＡＧＴＣＣＣＣＧＡＣＣＧＧＴＴＣＴＣＴＧＧＴＡＧＴＡＡＡＴＣＡＧＧＣＡＣＴＴＣＣＧＣＣＡＧＣＣＴＧＧＣＴＡＴＴＡＧＣＧＧＧＣＴＧＣＡＧＴＣＴＧＡＧＧＡＣＧＡＡＧＣＣＧＡＴＴＡＣＴＡＴＴＧＣＣＡＧＴＣＴＴＡＣＧＡＴＴＣＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＧＧＡＡＧＴＧＴＧＴＴＴＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＴＣＡＡＧＣＴＧＡＣＣＧＴＣＣＴＧＧＧＣＣＡＧＣＣＴＡＡＧＧＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＧＴＣＡＣＴＣＴＧＴＴＣＣＣＧＣＣＣＴＣＣＴＣＴＧＡＧＧＡＧＣＴＴＣＡＡＧＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＣＴＧＧＴＧＴＧＴＣＴＣＡＴＡＡＧＴＧＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＧＧＧＡＧＣＣＧＴＧＡＣＡＧＴＧＧＣＣＴＧＧＡＡＧＧＣＡＧＡＴＡＧＣＡＧＣＣＣＣＧＴＣＡＡＧＧＣＧＧＧＡＧＴＧＧＡＧＡＣＣＡＣＣＡＣＡＣＣＣＴＣＣＡＡＡＣＡＡＡＧＣＡＡＣＡＡＣＡＡＧＴＡＣＧＣＧＧＣＣＡＧＣＡＧＣＴＡＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＡＣＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＴＧＧＡＡＧＴＣＣＣＡＣＡＧＡＡＧＣＴＡＣＡＧＣＴＧＣＣＡＧＧＴＣＡＣＧＣＡＴＧＡＡＧＧＧＡＧＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＧＡＣＡＧＴＧＧＣＣＣＣＴＧＣＡＧＡＡＴＧＣＴＣＴ

Claims (12)

1. 下記式
   

   

   ［式中、
   Ｒ１ａは、水素、メチル、エテニル、シアノ、フルオロ、クロロ、フルオロメチル、またはジフルオロメチルであり、
   Ｒ１ｂは、水素、フルオロ、またはクロロであり、
   Ｒ１ｃは、水素、ヒドロキシ、フルオロ、ベンジルオキシ、またはヒドロキシエチルアミノであり、
   Ｒ２は、水素またはメチルであり、
   Ｒ２ａは、水素またはメチルであり、
   Ｒ３ａは、テトラヒドロピラニルである］
   の化合物。
2. 

   である、請求項１に記載の化合物。
3. 

   である、請求項１または２に記載の化合物。
4. 

   である、請求項１または２に記載の化合物。
5. 請求項３に記載の化合物の結晶。
6. １２．５１°、１５．６５°、１６．３７°、１７．５６°、２１．４８°、および２５．２３°（２θ±０．２°）からなる群から選択される１つ以上のピークと組み合わせて１７．３８°に少なくとも１つのピークを含むＸ線粉末回折パターン（Ｃｕ放射線、λ−１．５４０６０Å）によって特徴付けられる、請求項５に記載の結晶。
7. 治療に使用するための、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物または請求項５もしくは６に記載の結晶を含む、薬学的組成物。
8. １つ以上の薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤とともに、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物または請求項５もしくは６に記載の結晶を含む、薬学的組成物。
9. 癌の治療に使用するための、請求項７または８に記載の薬学的組成物。
10. 前記癌が、メラノーマ、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、結腸直腸癌、腎細胞癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、卵管癌、原発性腹膜癌、子宮頸癌、胃癌、肝臓癌、膵臓癌、甲状腺癌、神経膠腫、非ホジキンリンパ腫、およびホジキンリンパ腫からなる群から選択される、請求項９に記載の薬学的組成物。
11. 癌の治療のための薬剤の製造における、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物または請求項５もしくは６に記載の結晶の使用。
12. 前記癌が、メラノーマ、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、結腸直腸癌、腎細胞癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、卵管癌、原発性腹膜癌、子宮頸癌、胃癌、肝臓癌、膵臓癌、甲状腺癌、神経膠腫、非ホジキンリンパ腫、およびホジキンリンパ腫からなる群から選択される、請求項１１に記載の使用。