JP6491880B2 - 異物表面との接触による血液凝固系の活性化の熱安定性阻害剤 - Google Patents
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Description
血液凝固阻害活性を有する少なくとも1種のカルシウムキレート物質を含み、血液凝固系の接触活性化を阻害する熱安定性ペプチドをさらに含む試料採取用デバイスであって、前記ペプチドが、最大で約40アミノ酸の連続配列内に、少なくとも2個又は少なくとも4個のシステインと、配列番号1のアミノ酸位置5に対応する位置におけるアミノ酸Arg又はArgのアナログと、好ましくは少なくとも連続アミノ酸配列Ile−Leu−Metとを含む、デバイス、及び
血液凝固活性を、好ましくは時間の関数としてのトロンビン活性の発達を判定するための試薬
を含むキットオブパーツ(kit of parts)を提供する。
個体から血液試料を採取するステップであり、前記ペプチドを血液試料と接触させるステップと、
前記試料における血液凝固活性を、好ましくはトロンビン活性を、より好ましくはトロンビン活性を測定するための蛍光アッセイを用いてトロンビン活性を測定するステップと、好ましくは、
診断に血液凝固活性値を使用するステップと
を含む、ペプチドをさらに提供する。
試料採取用デバイスを提供するステップであり、前記デバイスが、血液凝固阻害活性を有する少なくとも1種のカルシウムキレート物質を含み、血液凝固系の接触活性化を阻害する熱安定性ペプチドをさらに含み、前記ペプチドが、最大で約40アミノ酸の連続配列内に、少なくとも2個又は少なくとも4個のシステインと、配列番号1のアミノ酸位置5に対応する位置におけるアミノ酸Arg又はArgのアナログと、好ましくは少なくとも連続アミノ酸配列Ile−Leu−Metとを含む、ステップ、
デバイスに試料を採取するステップ、及び
試料、血液凝固阻害活性を有するカルシウム結合物質及びペプチドを混合するステップ
を含む、方法を提供する。
(位置5のXは、R若しくはRのアナログであり、
位置1のXは、R若しくはRのアナログであり、
位置2のXは、V若しくはVのアナログであり、
位置9のXは、E若しくはK、好ましくはKであり、
位置21のXは、I若しくはV、好ましくはVであり、及び/又は
位置4のXは、P若しくはPのアナログであり、並びに好ましくは
前記配列番号9が、配列番号1と少なくとも70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%又は100%配列同一性を有する)を含む、又は、からなる、又は、である。
(配列番号10〜25の各々において、
位置9のXは、E又はK、好ましくはKであり、位置21のXは、I又はV、好ましくはVであり、
及び好ましくは配列番号10〜25の各々は、配列番号1と少なくとも70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%又は100%配列同一性を有する)を含み得、又は、からなり得る。この段落では、配列番号10〜25において特定されたR、V又はPは、配列番号9においてと同じ意味を有し、RはR又はRのアナログであり得、VはV又はVのアナログであり得、PはP又はPのアナログであり得ると理解されるべきである。
配列番号1に示された配列を有するペプチド、
配列番号2に示された配列を有するペプチド、
配列番号3に示された配列を有するペプチド、
配列番号4に示された配列を有するペプチド、及び
配列番号1、配列番号2、配列番号3、又は配列番号4に示されたペプチドと少なくとも70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%又は100%配列同一性を有するペプチド
からなる群から選択されるペプチドを好ましくは含む。
配列番号1に示された配列を有するペプチド、
配列番号2に示された配列を有するペプチド、
配列番号3に示された配列を有するペプチド、
配列番号4に示された配列を有するペプチド、及び
配列番号1、配列番号2、配列番号3、又は配列番号4に示されたペプチドと少なくとも70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%又は100%配列同一性を有するペプチド
からなる群から選択されるペプチドである。
(位置5のXは、R若しくはRのアナログであり、
位置1のXは、R若しくはRのアナログであり、
位置2のXは、V若しくはVのアナログであり、
位置9のXは、E若しくはK、好ましくはKであり、
位置21のXは、I若しくはV、好ましくはVであり、及び/又は
位置4のXは、P又はVのアナログであり、並びに好ましくは
前記配列番号9が、配列番号1と少なくとも70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%又は100%配列同一性を有する)を含む又はそれらからなる又はそれらである前記配列番号9をコードする。
(配列番号10〜25の各々において、
位置9のXは、E又はK、好ましくはKであり、及び位置21のXは、I又はV、好ましくはVであり、
並びに好ましくは、配列番号10〜25の各々は、配列番号1と少なくとも70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%又は100%配列同一性を有する)を含む又はそれらからなるコンセンサスアミノ酸配列をコードすることが好ましい。この段落では、配列番号10〜25において特定されたR、V又はPは、配列番号9においてと同じ意味を有し、RはR又はRのアナログであり得、VはV又はVのアナログであり得、PはP又はPのアナログであり得ると理解されるべきである。
配列番号1に示された配列を有するペプチド、
配列番号2に示された配列を有するペプチド、
配列番号3に示された配列を有するペプチド、
配列番号4に示された配列を有するペプチド、及び
配列番号1、配列番号2、配列番号3、又は配列番号4に示されたペプチドと少なくとも70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%又は100%配列同一性を有するペプチド
からなる群から選択されるペプチドを含む熱安定性ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。より好ましくは、ペプチドは、配列番号1又は配列番号2に示された配列を有するペプチドを含む。さらにより好ましくは、ペプチドは、配列番号1に示された配列を有するペプチドを含む。
配列番号1に示された配列を有するペプチド、
配列番号2に示された配列を有するペプチド、
配列番号3に示された配列を有するペプチド、
配列番号4に示された配列を有するペプチド、及び
配列番号1、配列番号2、配列番号3、又は配列番号4に示されたペプチドと少なくとも70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%又は100%配列同一性を有するペプチド
からなる群から選択されるペプチドである熱安定性ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。より好ましくは、ペプチドは、配列番号1又は配列番号2に示された配列を有するペプチドである。さらにより好ましくは、ペプチドは、配列番号1に示された配列を有するペプチドである。
配列番号7において、位置5のXはK又はR、好ましくはRであり、位置9のXはE又はK、好ましくはKであり、位置21のXはI又はV、好ましくはVである。
配列番号9において、位置5のXは、R又はRのアナログであり、位置9のXは、E又はK、好ましくはKであり、位置21のXは、I又はV、好ましくはVである。
[実施例]
本発明者らは、トリプシンカラムでの親和性クロマトグラフィー及び当技術分野に公知のさらなる精製手順により、多数の種子からトリプシン阻害剤(セルピン)、特にセイヨウカボチャ(Cucurbita Maxima)種子由来のセルピン、すなわちスカッシュ型トリプシン阻害剤(STI,squash trypsin inhibitor)を単離した(実施例2を参照のこと)。
トロンビン生成は、(WO2003/093831)により実施した。インフォームドコンセントを得た後、健康な成人ボランティアから、静脈血を0.106mol/lクエン酸三ナトリウムを含有する管に採取した(1:9、v:v)。室温で15分間、2500×gで二重の遠心分離後、乏血小板血漿(PPP)を血漿上清の上半分の容積から採取し、急速冷凍し、−80℃で保管した。PPP中の血小板及び白血球の非存在は、ADVIA 120カウンター(Bayer Diagnostics社、NY、USA)によりチェックした。
組換えヒト組織因子Innovin(登録商標)は、Dade Behring社(マールブルグ、ドイツ)から入手し、PRP中0.5pM及びPPP試料中1又は5pMの最終濃度で使用した。4μMの最終濃度で使用されるリン脂質ベシクルは、Avanti Polar Lipids社(アラバスター、アラバマ州、USA)から入手し、20mol%ホスファチジルセリン(PS)、20mol%ホスファチジルエタノールアミン(PE)及び60mol%ホスファチジルコリン(PC)からなり、押出し法により調製した(9、10)。カオリンライト(Kaolin light)(含水ケイ酸アルミニウム)は、Baker Harrison ltd.社(イルフォード、UK)から入手した。HEPES緩衝食塩水は、20mM Hepes(Sigma Aldrich社、l'Ile d'Abeau Chesnes、フランス)、140mM NaCl及び5mg/mL ウシ血清アルブミン(BSA)(Euromedex社、ゾウフェルヴァイヤースハイム、フランス)、pH7.35を含有した。この緩衝液を使用まで−20℃で保管した。蛍光発生基質及びCaCl2の新鮮な混合物は、各実験前に調製した。蛍光発生基質、Z−Gly−Gly−Arg−AMCは、Bachem社(ブーベンドルフ、スイス)から入手した。蛍光発生基質2.5mM及びCaCl2 0.1Mの混合物を、Hepes 20mM及び60mg/mL BSA、pH7.35を含有する緩衝液を用いて調製した。600nMヒトトロンビンの活性を有する校正器は、Thrombinoscope BV社(マーストリヒト、オランダ)から入手した。透明の丸底Greinerマイクロタイタープレート(Greiner社 ref 65204、ポアティエ、フランス)を使用した。
トロンビン生成は、(WO2003/093831)の方法論による校正された自動トロンボグラフィー(CAT,Calibrated Automated Thrombography)及び390/460nmフィルターセットを備えた96ウェルプレート蛍光光度計(Fluoroscan Ascent Reader、Thermolab systems OY社、ヘルシンキ、フィンランド)を用いて測定した。簡単に述べると、80μLの血漿を、丸底96ウェルマイクロタイタープレートのウェルに分注する。組織因子及びリン脂質を含有する20μLの混合物をPPP試料に添加する。或いは、接触活性化を得るために、クエン酸血漿を、1mg/mlのカオリンライトと少なくとも10分間プレインキュベートする。開始試薬(1ウェル当たり20μL)は、蛍光発生基質及びCaCl2を含有する。専用ソフトウェアプログラム、Thrombinoscope(登録商標)(Thrombinoscope bv社、マーストリヒト、オランダ)は、校正器(Thrombinoscope bv社、マーストリヒト、オランダ)に対するトロンビン活性の計算を可能にし、時間と共にトロンビン活性を示した。CATから導かれ得る最も重要なパラメータは、遅延時間、CAT曲線下の面積に対応する内因性トロンビン産生能、トロンビンのピーク高さ及びピークまでの時間である。
STIは、3つのステップ手順:
1:0.1Mトリス緩衝液、pH8.0による粉砕種子の抽出、及び
2:トリプシンセファロースカラムでの親和性クロマトグラフィー
3:逆相(RP)HPLC−C18カラム、水(0.1%トリフルオロ酢酸)中、直線勾配0〜60%アセトニトリル
でセイヨウカボチャ種子から精製する。
材料
S2302 Chromogenic社製、ロット#N0398718 SEQ0860、有効期限2012年07月。水を2010年10月7日に添加→3.7mM。2010年8月3日に316nmのODを測定した(0.236+0.235)/2×200=47.1。計算濃度は故に47.1/12.9=3.7mMである。FXIIaによるS2302加水分解速度は、Km=180μM及びkcat=25s−1であった。
h−FXIIa「Enzyme Research Laboratories」社製。製品コードFXIIa 1212A、ロット#FXIIa2520PL。0.5mgを含むボトルを370μl純水で再構成した。タンパク質濃度:1.35mg/ml、すなわち約8μM。緩衝液4mM NaAc、150mM NaCl(pH5.3)。調製物を20μl量に分け、−80℃で冷凍した。
Hepes735 140mM NaCl、20mM Hepes、0.02% NaN3(pH7.35)。
BSA5 Hepes735+5mg/ml BSA。
CTI 2004年12月17日に調製、0.141mg/ml、すなわち0.141/12028=11.7*10−6M(11.7μM)。一部を解凍し、3つの部分に分けた。部分1は−80℃で冷凍し、部分2は室温で維持し、部分3は95℃で30分インキュベートし、次いで室温で維持した。
貯蔵FXIIaはBSA5で700×希釈した。阻害剤は示されているようにBSA5で希釈した。ウェルは、70μl希釈FXIIa(最終5nM)、70μl阻害剤及び20μl S2302(最終475又は462.5μM)を含有した。反応は、S2302と共に加熱板で5分加熱した後に始まった。フィルター405nm及び490nm(参照)。見出されたmΔA/分に2.14を乗じて1cm経路に対する数値を得た。
V=(E+(sqrt(E^2+2*E*(Ki−I)+I^2+2*I*Ki+Ki^2)−E−I−Ki)/2)*kcat*S/(Km+S)
(式中、E=[FXIIa]、Kiは解離定数であり、I=[阻害剤(Inhibitor)]、kcat及びKmはミカエリス定数であり、S=[S2302])。図3は、これらの適合並びにPTI及びCTIに対して得られた定数を示している。表4は、このように見出された定数をまとめている。
一般的:1.TICA1を固相ペプチド合成により合成し、レジン(固相)から切断し及び同時に脱保護し、HPLCにより精製し、凍結乾燥させた。2.精製TICA1を溶解し、酸化的フォールディングをしてジスルフィド結合された3次元活性構造を得た。最終生成物をHPLCにより精製し、凍結乾燥させた。
1.合成:TICA1ポリペプチド鎖を、以前に記載された(10)Boc−/Bzl−ペプチド合成のためのインサイチュ中和/活性化手順を用いて、ただし、カップリング試薬として2−(1H−ベンゾトリアゾール−1−イル)−1,1,3,3−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート(HBTU,2-(1H-benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate)の代わりにHCTUを用いて、0.2mmolスケールで手動固相ペプチド合成により合成した。グリシルPAMレジン(0.76meq/g)を固体担体として使用した。TICA1ペプチドを脱保護し、及び4v% p−クレゾールをスカベンジャーとして用いて、0℃で1時間、無水HFにより処理してレジンから切断した。切断後、TICA1ポリペプチド鎖を氷冷ジエチルエーテルで沈殿させ、6M Gn.HCl、0.1M酢酸ナトリウム緩衝液(pH4)を含有する水性緩衝液に溶解し、セミ分取HPLCにより精製した。所望の生成物を含有する画分をESI−MSにより同定し、プールし、凍結乾燥した。
以下の表は、加熱前及び加熱後の、低分子量色素産生ペプチドS2302、すなわちH−D−Pro−Phe−Arg−p.ニトロアニリンに対する、幾つかのこれらの生成物の阻害活性、並びにカオリンとのプレインキュベーションにより最適に接触活性化される血漿の凝固時間を、4倍延長させる濃度を示している。
貯蔵FXIIaはBSA5で700×希釈した。阻害剤は示されているようにBSA5で希釈した。ウェルは、70μl希釈FXIIa(最終5nM)、70μl阻害剤及び20μl S2302(最終475又は462.5μM)を含有した。反応は、S2302と共に加熱板で5分加熱した後に始まった。フィルター405nm及び490nm(参照)。見出されたΔmA/分に2.14を乗じて1cm経路に対する数値を得た。
V=(E+(sqrt(E^2+2*E*(Ki−I)+I^2+2*I*Ki+Ki^2)−E−I−Ki)/2)*kcat*S/(Km+S)
(式中、E=[FXIIa]、Kiは解離定数であり、I=[阻害剤]、kcat及びKmはミカエリス定数であり、S=[S2302])。
Iの濃度を計算するために、方程式I=x・(x−E−Ki)/(x−E)を使用した。この方程式においてIは計算された阻害剤濃度であり、x=FXIIa(遊離FXIIa)の残留活性、Eは合計FXIIa濃度(=9.33nM)であり、Kiは解離又は阻害剤定数である。
3個のジスルフィド結合を有するTICA1の化学合成は、実施例4に記載されている。
ジスルフィド結合がより少ないTICA1を合成するには、合成及び酸化的タンパク質フォールディングが異なる。
詳細には:
1.合成:2個のジスルフィド結合を有するTICA1は、システイン残基を除いて実施例4の通りに手動固相ペプチド合成により合成した。ジスルフィド結合に関与する2個のシステイン残基を、アラニンにより置換した。ジスルフィド結合に関与する2個の他のシステイン残基は、アセトアミドメチル(Acm)基で保護されたシステインにより置換した。ジスルフィド結合に関与する第3システイン残基は、変更しなかった。ペプチドを脱保護し、実施例4に記載されているように切断した。HF切断後、2個のシステインは保護せず、他の2個はアセトアミドメチル(Acm)基で保護されたままにした。TICA1ポリペプチド鎖を氷冷ジエチルエーテルで沈殿させ、50%アセトニトリル及び0.1% TFAを含有する水性緩衝液に溶解し、HPLCにより分析し、凍結乾燥した。
詳細には:
1.合成:2個のジスルフィド結合を有するTICA1は、システイン残基を除いて実施例4の通りに手動固相ペプチド合成により合成した。2個のジスルフィド結合に関与する4個のシステイン残基を、アラニンにより置換した。ペプチドを脱保護し、実施例4に記載されているように切断した。切断後、TICA1ポリペプチド鎖を氷冷ジエチルエーテルで沈殿させ、6M Gn.HCl、0.1M酢酸ナトリウム緩衝液(pH4)を含有する水性緩衝液に溶解し、セミ分取HPLCにより精製した。所望の生成物を含有する画分をESI−MSにより同定し、プールし、凍結乾燥した。
詳細には:
1.合成:TICA1は、実施例4の通りに手動固相ペプチド合成により合成した。ペプチドを脱保護し、実施例4に記載されているように切断した。切断後、還元TICA1ポリペプチド鎖を氷冷ジエチルエーテルで沈殿させ、6M Gn.HCl、0.1M酢酸ナトリウム緩衝液(pH4)を含有する水性緩衝液に溶解し、セミ分取HPLCにより精製した。所望の生成物を含有する画分をESI−MSにより同定し、プールし、凍結乾燥した。
TICA1の活性に対するアミノ酸ごとの寄与を判定した。単一アミノ酸ごとに、システインを除いてアラニンにより置換した。TICA1におけるシステインの影響は、実施例7で既に記載した。全てのTICA1アナログを、実施例4に記載されているように合成し、フォールディングした。図6も参照のこと。
12名のドナーにおいて血液を、採血管(drawing tube)にTICA1を添加した及び添加しない、7つの異なる採血管により抜き取った(合計14管;78ml)。これらの管からPPPを調製した後、MP試薬及びpplow試薬を用いてCAT測定を行った。ドナー1名を1つのプレートで測定した(pplow複製;MP複製;校正器(4倍))。合計容積は、合計88ウェル/ドナーにおいて320μl試料/測定である。
(全ての採血管から、TICA有りの1本の管及びTICAなしの1本の管が採血に使用される)
1本のedta管を用いて採血を開始する。
1A:BDバキュテナー(ガラス)9NC;0.5ml 0.105Mクエン酸、合計容積5ml。
1C:1本の真空管に添加する:100μl、1.5mg/ml TICA
合計管:2本→TICA有りの1本の管及びTICAなしの1本の管。
2A:Sarstedt管;S−monovette、9NC;0.5ml 0.106Mクエン酸、合計容積5ml。
2C:1本の真空管に添加する:100μl、1.5mg/ml TICA
合計管:2本→TICA有りの1本の管及びTICAなしの1本の管。
3A:Terumo Venosafe 4ml。9NC;0.4ml 0.109Mクエン酸、合計容積4ml。
ppg内部コーティング/シリコンストッパーコーティング
3C:1本の真空管に添加する:80μl、1.5mg/ml TICA。
合計管:2本→TICA有りの1本の管及びTICAなしの1本の管。
4A:BDバキュテナー(プラスチック)9NC;0.3ml 0.109Mクエン酸、合計容積3ml。
4C:1本の真空管に添加する:60μl、1.5mg/ml TICA。
合計管: 2本→TICA有りの1本の管及びTICAなしの1本の管。
5A:Haemtech SCAT 113−4.5/5 AA0809 3.2%クエン酸(CTIなしの対照管)、合計容積5ml。
5C:1本の真空管に添加する:100μl、1.5mg/ml TICA。
合計管:2本→TICA有りの1本の管及びTICAなしの1本の管。
6A:Greiner真空管9ml+1ml(9NC、3.2%クエン酸)
6C:1本の真空管に添加する:200μl、1.5mg/ml TICA。
合計管:2本→TICA有りの1本の管及びTICAなしの1本の管。
TICAを添加したあらゆる管における採血後の最終TICA濃度は、30μg/全血mlである。
PPPを調製後の血漿中最終TICA濃度は、60μg/mlである(ヘマトクリット50%と仮定して)。
9mg TICAを6ml滅菌注射用水に溶解する。この溶液は、採血管へのTICAの注入に使用する。採血管にTICA溶液を注入した後、この管は8時間以内に使用しなければならない。
管に添加したTICAなし及び管に添加したTICAの測定:
MP試薬及びpplow試薬によるCAT測定が行われるであろう。ドナー1名を1つのプレートで測定する。PPLow複製;MP複製;校正器(4倍)。
合計容量は、合計88ウェル/ドナーにおいて320μl試料/測定である。NP2012も4倍での測定に含める。
遅延時間、内因性トロンビン産生能、及びピーク高さを記録した。トロンビン生成の現状について、ピーク高さが結果を解釈するのに好ましいパラメータである。
TICAを添加した血漿:血漿中濃度:60μg/ml
貯蔵TICA:1.5mg/ml→1500μg/ml
20μl TICA(貯蔵:1500μg/ml)を480μl血漿に添加する。
1. 米国特許第6,403,381号
2. 国際公開第2010/016762号パンフレット
3. 国際公開第2003/093831号パンフレット
4. 国際公開第2006/117246号パンフレット
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7. “Laboratory techniques in thrombosis” Edited by J.Jespersen, R.M.Bertina and F.Haverkate, ISBN 0-7923-5317-X (1999);
8. “Haemostasis and thrombosis: Basic principles and clinical practice”Eds: Colman, Hirsh, Marder, Clowes, George Lippincott Williams and Wilkins. (2010).
Claims (8)
- 異物表面との接触による血液凝固系の活性化のみを阻害するための熱安定性医薬組成物であって、
血液凝固阻害活性を有する少なくとも1種のカルシウムキレート物質を含み、前記血液凝固系の接触活性化を阻害する最大で42アミノ酸の熱安定性ペプチドをさらに含む前記熱安定性医薬組成物であって、前記ペプチドがコンセンサスアミノ酸配列:XILMXCKKDSDCLAECX(配列番号6)(位置1のXはK又はR若しくはRのアナログであり、位置5のXはE又はKであり、位置17のXはI又はVである)を含み、Argのアナログは、モノメチルアルギニン、対称性及び非対称性ジメチルアルギニン、カナリン、δ−グアニジノα−アミノ酪酸、ホモアルギニン、カナバニン、及びシトルリンからなる群から選択され、かつ、前記ペプチドが、
−配列番号1に示された配列を有するペプチド、
−配列番号2に示された配列を有するペプチド、
−配列番号3に示された配列を有するペプチド、
−配列番号4に示された配列を有するペプチド、及び
−配列番号1、配列番号2、配列番号3、又は配列番号4に示された配列と少なくとも90%配列同一性を有するペプチド
からなる群から選択されるペプチドであり、
前記カルシウムキレート物質が、クエン酸又はクエン酸塩から選択され、約55mM〜260mMの濃度で存在する、前記熱安定性医薬組成物。 - 請求項1に記載の熱安定性医薬組成物、又は異物表面との接触による血液凝固系の活性化のみを阻害するための熱安定性医薬組成物Aを含む採血用の管又は採血用のバッグを含む試料採取用デバイスであって、前記熱安定性医薬組成物Aが、血液凝固阻害活性を有する少なくとも1種のカルシウムキレート物質を含み、前記血液凝固系の接触活性化を阻害する最大で42アミノ酸の熱安定性ペプチドをさらに含み、前記ペプチドがコンセンサスアミノ酸配列:XILMXCKKDSDCLAECX(配列番号6)(位置1のXはK又はR若しくはRのアナログであり、位置5のXはE又はKであり、位置17のXはI又はVである)を含み、Argのアナログは、モノメチルアルギニン、対称性及び非対称性ジメチルアルギニン、カナリン、δ−グアニジノα−アミノ酪酸、ホモアルギニン、カナバニン、及びシトルリンからなる群から選択され、かつ前記ペプチドが、
−配列番号1に示された配列を有するペプチド、
−配列番号2に示された配列を有するペプチド、
−配列番号3に示された配列を有するペプチド、
−配列番号4に示された配列を有するペプチド、及び
−配列番号1、配列番号2、配列番号3、又は配列番号4に示された配列と少なくとも90%配列同一性を有するペプチド
からなる群から選択されるペプチドである、前記デバイス。 - 請求項2に記載のデバイスと、
血液凝固活性を判定するための試薬と
を含む部品のキット。 - 異物表面との接触による血液凝固系の活性化のみをエクスビボで阻害するための、前記血液凝固系の接触活性化を阻害する最大で42アミノ酸の熱安定性ペプチドのエクスビボの使用であって、前記ペプチドがコンセンサスアミノ酸配列:XILMXCKKDSDCLAECX(配列番号6)(位置1のXはK又はR若しくはRのアナログであり、位置5のXはE又はKであり、位置17のXはI又はVである)を含み、Argのアナログは、モノメチルアルギニン、対称性及び非対称性ジメチルアルギニン、カナリン、δ−グアニジノα−アミノ酪酸、ホモアルギニン、カナバニン、及びシトルリンからなる群から選択され、かつ前記ペプチドが、
−配列番号1に示された配列を有するペプチド、
−配列番号2に示された配列を有するペプチド、
−配列番号3に示された配列を有するペプチド、
−配列番号4に示された配列を有するペプチド、及び
−配列番号1、配列番号2、配列番号3、又は配列番号4に示された配列と少なくとも90%配列同一性を有するペプチド
からなる群から選択されるペプチドである、前記エクスビボの使用。 - 血液凝固系の接触活性化を阻害する熱安定性ペプチドが、コンセンサスアミノ酸配列:RVCPXILMXCKKDSDCLAECXCLEHGYCG(配列番号7)(位置5のXはK又はR若しくはRのアナログであり、位置9のXはE又はKであり、位置21のXはI又はVである)を含み、Argのアナログは、モノメチルアルギニン、対称性及び非対称性ジメチルアルギニン、カナリン、δ−グアニジノα−アミノ酪酸、ホモアルギニン、カナバニン、及びシトルリンからなる群から選択される、請求項1に記載の熱安定性医薬組成物。
- 血液凝固系の接触活性化を阻害する熱安定性ペプチドが、コンセンサスアミノ酸配列:RVCPXILMXCKKDSDCLAECXCLEHGYCG(配列番号7)(位置5のXはK又はR若しくはRのアナログであり、位置9のXはE又はKであり、位置21のXはI又はVである)を含み、Argのアナログは、モノメチルアルギニン、対称性及び非対称性ジメチルアルギニン、カナリン、δ−グアニジノα−アミノ酪酸、ホモアルギニン、カナバニン、及びシトルリンからなる群から選択される、請求項2に記載のデバイス。
- 血液凝固系の接触活性化を阻害する熱安定性ペプチドが、コンセンサスアミノ酸配列:RVCPXILMXCKKDSDCLAECXCLEHGYCG(配列番号7)(位置5のXはK又はR若しくはRのアナログであり、位置9のXはE又はKであり、位置21のXはI又はVである)を含み、Argのアナログは、モノメチルアルギニン、対称性及び非対称性ジメチルアルギニン、カナリン、δ−グアニジノα−アミノ酪酸、ホモアルギニン、カナバニン、及びシトルリンからなる群から選択される、請求項3に記載のキット。
- 血液凝固系の接触活性化を阻害する熱安定性ペプチドが、コンセンサスアミノ酸配列:RVCPXILMXCKKDSDCLAECXCLEHGYCG(配列番号7)(位置5のXはK又はR若しくはRのアナログであり、位置9のXはE又はKであり、位置21のXはI又はVである)を含み、Argのアナログは、モノメチルアルギニン、対称性及び非対称性ジメチルアルギニン、カナリン、δ−グアニジノα−アミノ酪酸、ホモアルギニン、カナバニン、及びシトルリンからなる群から選択される、請求項4に記載のエクスビボの使用。
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